Validación de Técnicas Analíticas

MANUAL DEL USUARIO
VALIDACIÓN DE TÉCNICAS ANALÍTICAS

Galeno, Manual del usuario
INTRODUCCIÓN
Se recomienda leer el manual general de GALENO antes de leer este

documento.
El módulo de Validación de Técnicas Analíticas de GALENO permite

capturar los datos iniciales de los ensayos experimentales de dicha
validación, y a partir de ellos efectuar todas las pruebas estadísticas
correspondientes. Este módulo se ajusta las normas nacionales e
internacionales para validación de sistemas computarizados.
A través del presente manual, usted va a encontrar la manera de operar e

interactuar con el módulo de Validación de Técnicas Analíticas de GALENO
Inicialmente se explicará la parametrización del sistema, donde se indicará

cuales son los datos básicos que deben ingresarse. A continuación, se
abordará la validación de técnicas analíticas, con todo lo que ella implica:
procesos, informes y gráficos.
1
PARAMETRIZACIÓN DE LAS ESPECIFICACIONES
Para empezar a trabajar con el módulo de Validación de Técnicas

Analíticas, usted debe iniciar una sesión de trabajo (tal como se muestra en
el manual del usuario de especificaciones generales), luego de ingresar a la
aplicación, en el menú principal seleccione “Módulos” y a continuación
“Validación de técnicas analíticas”.
Figura 1
De igual manera puede pulsar en la barra de herramientas el siguiente

botón:
Figura 2
2
Luego de efectuar la anterior tarea es posible definir un estudio y sus

diferentes especificaciones, para esto pulsamos en el formulario el botón
“nuevo” e iniciamos el ingreso, empleando los botones adjuntos a cada una
de las especificaciones. Por lo anterior a continuación se explica el uso de
cada una de ellas, es importante aclarar que luego de que definimos un
conjunto de especificaciones por estudio podremos reutilizarlas las veces
que sea necesario:
PRESENTACION
Figura 3
Aquí se deben ingresar las diferentes formas en que se pueden presentar

los productos; algunas de estas pueden ser: tabletas, cápsulas,
emulsiones, polvos, dispositivos intrauterinos, dispositivos vaginales, etc.
En este formulario se consideran campos obligatorios el código y la

descripción, siendo el primero generado de manera automática por
GALENO.
COMPONENTES
3
Figura 4
En este formulario se deben ingresar todos los componentes (principios

activos, excipientes, etc.) que sean susceptibles de estudio. Se consideran
campos obligatorios el código y la descripción. El código es generado
automáticamente por GALENO. Al presente módulo de especificación se
accede a través del módulo de productos que más adelante se explica.
EMPAQUES
Figura 5
Aquí se ingresan todos los elementos que sirven como recipientes de

almacenamiento de los productos que son objeto de estudio. Algunos de
4
los registros a ingresar pueden ser: sobres, sachets, blisters, goteros,

tubos, botellas, cajas plegadizas, ampollas, frascos viales, etc.

GALENO.
VÍAS DE SUMINISTRO
Figura 6
Aquí se ingresan los datos relacionados con la forma como el producto va a

ser aplicado a los pacientes.
Ejemplos para vías de suministro pueden ser: oral, intravenosa, ocular,

tópica, vaginal, intradérmica, rectal, etc.
NOTA: el código 1 indica la no aplicación para productos definidos en el
sistema que no sean aptos para consumo humano.
GALENO. Al presente módulo de especificación se accede a través del
módulo de productos que más adelante se explica.
MOTIVOS DE ESTUDIO
5
Figura 7
Dentro de este formulario podrá ingresar los posibles motivos por los cuales
se realizan los estudios en el sistema, por ejemplo: para la obtención de un
nuevo registro, renovación, cambio de formulación, cambio en proceso de
fabricación, etc.
GALENO.
UNIDADES DE MEDIDA
Figura 8
Aquí se definen todas las unidades de medida que se utilizarán más

adelante para realizar los cálculos de los diferentes parámetros de
validación manejados por GALENO.
Observe que la caja de texto “Descripción” tiene una presentación diferente

a las demás, esto debido a que aquí se incluyen exponentes (superíndices).
6
Cuando grabe una descripción que no tiene superíndices, GALENO le

agrega por defecto el exponente 1 (recuerde que cualquier variable elevada
a la potencia 1 es igual a sí misma).

GALENO.
PRODUCTOS
Figura 9
En este formulario se crea y modifica toda la información inherente a los

productos con que se trabaja.
Aquí podemos observar elementos como la caja de presentación de datos y

la tabla vinculada tipo 1, cuya interpretación y manejo se explican en el
manual del usuario de especificaciones generales.
Al ejecutar nuevo o modificar la caja de presentación de datos desaparece,

y usted se encuentra con el formulario convencional de captura de datos.
7
Figura 10
Recuerde que donde aparecen los botones con el texto “...” se hace el
llamado a una lista para escoger un código y escribirlo en la caja de texto
correspondiente (ver en manual del usuario de especificaciones generales:
“Botón Mostrar Listas”.
Aquí se observa la referencia a códigos de otras tablas. Observe en la

figura 10, que se escribe el código “1” en vía de administración.
En la tabla vinculada tipo 1 “Componentes del producto” se agregan todos

los componentes que tenga el producto.
En este formulario es obligatorio el ingreso del código, la descripción y la vía

de suministro.
“Es importante aclarar que los datos ingresados en los distintos formularios
de especificaciones, podrán ser útiles incluso para módulos diferentes a
validación de técnicas analíticas. Recuerde que al ser GALENO un sistema
de base de datos relacional la información se comparte permitiendo por
ejemplo, utilizar para un estudio nuevo, el código de un empaque ingresado
para un estudio anterior con solo escribir o seleccionar su identificador de la
lista, de la misma manera si efectúa una modificación sobre alguno de estos
parámetros, toda la información que se relacione de una u otra manera con
él, será actualizada de forma automática”.
8
Luego de ingresar todas las posibles especificaciones a utilizar,

seleccionamos a medida que vamos recorriendo la forma la que
corresponda al estudio en ingreso.
Figura 11
Como se observa en la anterior imagen, el formulario posee estructuras

adicionales ya ilustradas en el manual del usuario de especificaciones
generales, por lo que su manejo le debe resultar familiar.
A continuación se explica el funcionamiento de las cajas de texto agrupadas

que aparecen dentro de este formulario. Estas cajas de texto definen el
cuerpo de las matrices que se van a usar para realizar la evaluación de los
diferentes parámetros.
9
Figura 12
Es importante tener en cuenta que para cada parámetro a evaluar el

software sugiere valores en cada matriz de acuerdo a lo indicado en la
literatura, además nos da la posibilidad de trabajar con unos valores
mínimos.
A continuación indicamos los valores mínimos que el sistema acepta.
Precisión del método:

Concentraciones: 1
Replicas: 3
Analistas: 2
Periodos: 2
10
Precisión del sistema:

Concentraciones: 3
Replicas: 6
Linealidad del sistema y del método:

Concentraciones: 3
Replicas: 3
Exactitud:
Concentraciones: 2
Replicas: 3
Límites de detección y cuantificación:

Concentraciones: 3
Réplicas: 3
Para la mayoría de subgrupos se dan las opciones de “Número de

concentraciones”, allí se debe ingresar la cantidad de concentraciones que
se manejarán dentro del diseño experimental que usted quiera manejar en
cada parámetro.
En los campos correspondientes a réplicas, se ingresa el número de

resultados que se va a obtener de cada concentración.
En “Precisión del Método” se ingresa el número de analistas que toman los

datos. Así mismo el número de periodos indica la cantidad de veces que se
tomarán muestras del estudio por analista, concentración y réplicas
definidas.
Luego de grabar la información del estudio se habilita en la parte inferior del

formulario la tabla vinculada “Unidades de medida”:
11
Figura 13
Aquí se definen las unidades de medida para los diferentes parámetros.

Sólo basta con seleccionar el parámetro, a continuación pulsar el botón
modificar y por último seleccionar de la lista la unidad requerida.
Luego de establecer el sistema de unidades de medida por parámetro

procedemos a ingresar las concentraciones y su conjunto de resultados,
para ello encontramos en la parte inferior derecha de este formulario dos
botones, que permiten capturar y procesar datos.
12
Figura 14
Al pulsar el botón “Ingreso de datos”, aparece un cuadro de diálogo

denominado “Selector de parámetros” que permite elegir el parámetro para
el cual se van a capturar los datos.
13
Figura 15
Aquí se debe escoger el parámetro y luego pulsar el botón “Generar

Proceso” cuyo uso se explica en el manual del usuario de especificaciones
generales. A continuación explicamos el uso de cada una de las opciones
ofrecidas por medio de un ejemplo, que se encuentra en el ANEXO de este
manual.
Figura 16
Escogiendo cualquiera de las dos primeras opciones (Linealidad o

Precisión), aparece un nuevo cuadro.
14
Figura 17
En él seleccione el tipo de parámetro “Linealidad de método/sistema” o

”Precisión del método/sistema” al cual se le van a ingresar los datos, en
linealidad del sistema la técnica de análisis toma como analito la substancia
pura; en la linealidad del método la técnica de análisis toma como analito la
formulación final completa, es decir substancia pura junto con los demás
componentes de la formulación.
Eligiendo cualquiera de estas opciones, pulse el botón “Generar Proceso”.

Si se elige la primera opción “Linealidad del sistema” aparece un nuevo
cuadro de diálogo.
Figura 18
15
Aquí pulse el botón estándar “Nuevo”, para capturar el valor de las

concentraciones.
Figura 19
En esta parte debe ingresar el valor para cada una de las concentraciones
definidas anteriormente, y pulsar la tecla “Enter (Intro)” o el botón estándar
“Grabar”. Para el ejemplo en pantalla, debe ingresar el valor de cinco (5)
concentraciones. Cuando termine la captura de información de
concentraciones, se pulsa el botón estándar “Regresar”.
Al salir, aparecerá el formulario precedente, en el cual se pueden observar

los valores ingresados para las concentraciones, con las replicas por
concentración que se definieron, para el ejemplo aparecen por triplicado las
concentraciones para cada uno de los cinco valores capturados.
16
Figura 20
Ahora debe ingresar el resultado correspondiente para cada una de las

concentraciones. Solo basta con ingresar el valor correspondiente en la
caja de texto “Resultado” y pulsar la tecla “Enter (Intro)”; recuerde que el
valor se ingresa para el registro seleccionado en la lista. Para modificar
alguno de los valores ingresados, seleccione el registro, a continuación
escriba el valor en la caja de texto “Resultado”, luego pulse el botón
“Modificar”. De igual manera para borrar los registros pulse el botón
estándar “eliminar”.
Si por el contrario elige la opción “Linealidad del Método” (fig. 17), usted se
encuentra con el siguiente cuadro.
17
Figura 21
Como se observa en la figura 21 para el caso de linealidad del método, el

software da la posibilidad de ingresar los datos de manera manual en el
caso usted quiera hacer un diseño experimental.
Si elige “Automática” el sistema genera los datos extrayendo la información

de la matriz de precisión del método, en caso de que no haya ingresado los
datos de dicha matriz se encontrará con el siguiente mensaje:
Figura 22
Al pulsar el botón “Aceptar”, usted volverá a la pantalla inicial del selector de

parámetros (Figura 15). Si ya se han creado o generado los datos, aparece
el siguiente mensaje.
18
Figura 23
Al pulsar el botón “Aceptar”, usted se encontrará con un formulario similar al
de la figura 20, donde se muestran los datos generados y capturados,
dispuestos para realizar las modificaciones y/o eliminaciones pertinentes.
Si al ejecutar la opción “manual”, no ha ingresado los datos, aparece un

formulario en el cual se deben ingresar los valores de las concentraciones y
sus repeticiones.
Figura 24
19
En caso de que en el cuadro de diálogo de la (fig. 15) se elige la opción

“Precisión del sistema” aparece el siguiente formulario:
Figura 25
Este formulario la interfaz y navegación se da igual al formulario de la figura

20. Por tanto para conocer acerca de su manejo remítase a la explicación
de dicha figura.
Si por el contrario en el formulario de la figura 15 se elige la opción

“Precisión del método”, aparece un formulario como el siguiente:
20
Figura 26
Aquí se puede observar, que aparecen los datos capturados en el formulario

inicial de validación de técnicas analíticas, como el número de analistas y
número de periodos.
Recuerde que el contenido de estas cajas de texto indica el número de

analistas que toman los datos y la cantidad de veces que se tomarán
muestras del estudio por analista, concentración y réplicas definidas.
En este formulario se debe ingresar el valor de cada una de las

concentraciones. Para hacer esto, pulso el botón estándar “Nuevo” y a
continuación puede observar que aparece el siguiente formulario.
21
Figura 27
Aquí se debe ingresar el valor de cada concentración en la caja de texto

activa, y a continuación pulsar el botón estándar “Grabar” o la tecla “Enter”.
Esta operación se debe hacer el número de veces que se haya ingresado

en concentraciones. Para el ejemplo en pantalla, se debe ingresar el valor
de tres concentraciones.
Al culminar la captura de valores de concentraciones se debe pulsar el
botón estándar “Regresar”, con lo cual aparece el formulario precedente
pero ahora con los datos cargados.
Para el ejemplo que se observa en la figura 28, se generan cincuenta y

cuatro registros de la siguiente manera:
3 concentraciones x 3 repeticiones x 2 analistas x 3 periodos
Para cada concentración se generan dieciocho registros (en este caso).
22
Figura 28
El paso a seguir es ingresar el resultado para cada uno de los registros

generados. Para hacerlo ingrese el valor en la caja de texto resultado y
luego presione la tecla entrar. El valor se ingresa para el registro
seleccionado de la lista. Cuando se termine la captura de datos de
resultados, se pulsa el botón estándar “Regresar”.
Si del formulario de la figura 15 se elige la opción “Exactitud”, aparece un

cuadro de diálogo con el siguiente contenido.
23
Figura 29
Recuerde que con el parámetro exactitud se puede obtener la diferencia

entre el valor teórico y el valor práctico.
Ejecutando la opción “Manual” aparece el siguiente formulario.
Figura 30
24
Aquí se pueden distinguir dos opciones, distribuidas en los cuadros de lista.

Las dos listas tienen un manejo similar, en la parte superior se puede
observar que la lista corresponde a “Test G de Cochran y T de Student” y en
la parte inferior se puede observar la lista del “Porcentaje de recuperación”.
Al igual que en los formularios similares, si no existen datos en las listas, en

ambos casos se debe pulsar el botón estándar “Nuevo”, y agregar el valor
para cada una de las concentraciones.
Cuando se termine la captura de valores de concentraciones, se pulsa el
botón estándar “Regresar”, y en la pantalla precedente aparecen los datos
cargados.
En la figura 31 se puede observar el ejemplo de lo dicho anteriormente. En

la parte superior aparecen tres registros por cada concentración y en la
parte inferior aparece un registro para cada concentración.
Figura 31
Ahora lo que resta es ingresar el resultado para cada concentración en la

parte superior. En la parte inferior debe ingresar el valor promedio de los
resultados para cada concentración.
25
Para realizar el ingreso de datos de exactitud de manera automática, en la

opción precisión del método se deben haber ingresado antes los valores de
resultado para cada una de las concentraciones, repeticiones, analistas y
periodos; de lo contrario no será posible automatizar la exactitud.
Cuando se realiza el proceso de manera automática, en un formulario como

el de la figura 31 aparecen las concentraciones con sus respectivos
resultados, al igual que la media para cada concentración en la lista de la
parte inferior de este objeto.
Del formulario de la figura 15 también se puede seleccionar y ejecutar la

opción “Límites de Detección y Cuantificación”, con lo cual se comprueba de
manera experimental las menores cantidades de concentración que un
equipo puede detectar.
Figura 32
En esta parte también nos encontramos con un formulario como el que se

puede observar en la figura 30. Aquí al igual que en los formularios
similares hay que pulsar el botón estándar “Nuevo” y agregar el valor para
cada una de las concentraciones definidas. De igual manera cuando
termine de capturar los valores en mención y nuevamente se encuentre
sobre este formulario, agregar el valor del resultado para cada una de las
concentraciones y repeticiones implicadas.
26
Por último en la parte de ingreso de datos (del formulario de la figura 15) se

puede seleccionar la opción “Selectividad”, con lo cual aparece un cuadro
de diálogo como el mostrado en la figura 33.
Figura 33
En esta parte hay que indicar para cada uno de los ítems especificados si la
“Selectividad contra placebo” o “Selectividad contra productos de
degradación” cumplen con la descripción indicada.
Para indicar que es afirmativo haga clic sobre el cuadro que aparece a la
derecha de la descripción, cuando es negativo simplemente el contenido del
cuadro de verificación es nulo.
En este punto termina la parte de ingreso de datos, a continuación se

explica la generación de reportes para los datos capturados.
27
Figura 34
Para procesar datos e informes de resultados pulse el botón indicado en la

figura 34. Antes de ejecutar esta opción se debió ingresar los datos para el
parámetro sobre el que se desee realizar operaciones o generar informes.
Al pulsar este botón, aparece un cuadro de diálogo igual al de la figura 15,

del cual se selecciona la opción sobre la cual se desea trabajar. Al igual
que en la opción de captura de datos, a continuación se explica la filosofía y
uso de cada opción ofrecida.
Al ejecutar la opción “Linealidad” aparece un cuadro de diálogo como el

mostrado a continuación.
28
Figura 35
Aquí se deben escoger el método, tipo, y forma de reporte o proceso que se

desea generar.
En cada uno de los tres cuadros que se muestran en este cuadro de diálogo
se debe escoger una de las opciones ofrecidas.
En las opciones del método se pueden observar “Espectofotométrico”,

“Cromatográfico” entre otros, los cuales nos indican el valor de la
absorbancia, y el método que se usó para determinar los valores.
En el segundo recuadro, se muestran opciones como:
 Portada: imprime en pantalla la portada del informe a generar.
 Datos iniciales del sistema: imprime en pantalla los datos capturados de

concentraciones, resultados y del estudio de linealidad del sistema.
29
 Datos iniciales del método: imprime en pantalla los datos capturados

para las concentraciones, resultados y del estudio de linealidad del
método.
 Linealidad del sistema: visualiza en pantalla los diagnósticos respecto a

la linealidad del sistema parametrizada.
 Linealidad del método: visualiza en pantalla los diagnósticos respecto a

la linealidad del método parametrizada.
 Gráfico para selectividad: Opción habilitada luego de procesar la

información de linealidad del método y del sistema como resultante de
un proceso comparativo.
En el tercer recuadro se pueden observar las opciones “Texto” y “Gráfico”.

Tal como lo indican sus nombres, estas opciones permiten mostrar el
informe deseado a manera de texto o gráfico, según se especifique para las
opciones linealidad del sistema y linealidad del metodo.
Al especificar las tres opciones de informe iniciales (portada, datos iniciales

del sistema y datos iniciales del método) el resultado en pantalla es el
mismo para cualquier método. No ocurre lo mismo al ejecutar las opciones
“Linealidad del sistema” y “Linealidad del método”, pues al imprimir el
informe en forma “Texto” aparece la descripción textual acerca de la opción
escogida y al imprimirlo en forma “Gráfico” aparece una ventana que
permite ver gráficamente el informe deseado.
Si genera el informe a manera de texto, aparece un formulario como el

mostrado a continuación:
30
Figura 36
Si por contrario se genera en modo gráfico, aparece un formulario como el

siguiente.
31
Figura 37
Ubicamos dos botones imprimir la gráfica y salir de la forma

respectivamente.
Nota: Si se desea emplear la gráfica desde sistemas convencionales para

ajuste de la misma, es posible hacerlo al insertar o abrir el archivo de
imagen “Gra_val1.jpg” ubicado en la ruta donde se instalo galeno, por
ejemplo “C:\Archivos de programa\Galeno\Gra_val1.jpg”, dicho archivo es
un reflejo de la última gráfica generada en el sistema.
Si al regresar en la forma selector de parámetros (figura 15) se escoge la

opción “Precisión”, aparece el siguiente cuadro de diálogo.
32
Figura 38
Al igual que en el formulario de la figura 37, aquí se muestran las opciones

para método en el cuadro superior.
Tal como se explicó anteriormente las dos primeras opciones permiten

visualizar la información referente a datos iniciales del método o del sistema,
de acuerdo a la opción seleccionada.
Cuando seleccione la opción “Repetibilidad”, se visualiza un informe que

muestra los datos de concentración, analista, periodo, coeficiente de
variación y descripción del resultado para cada uno de estos ítems.
Al seleccionar la opción “Reproducibilidad”, se visualiza un informe que

permite observar los datos de concentraciones, su coeficiente de variación y
la descripción textual del resultado.
La opción “Precisión del sistema” genera un informe, en el que se pueden

apreciar el valor de las concentraciones, su coeficiente de varianza, y la
descripción textual de su calificación.
Al seleccionar la opción “Exactitud” del selector de parámetros (Figura 15),

aparece un nuevo cuadro de diálogo, el cual dispone de un nuevo conjunto
de opciones.
33
Figura 39
En el recuadro superior podrá apreciar las opciones para producto

terminado y para materia prima.
En el recuadro inferior se escoge el tipo de datos a generar. Con la primera

opción genera los datos del porcentaje de recuperación para el estudio
actual.
Con la opción “Datos iniciales” se genera un reporte que contiene datos

acerca del estudio, los valores para cada una de las concentraciones y
repeticiones y el resultado para cada uno de estos valores.
Con la opción “Resultados Finales” genera el informe que contiene los

resultados para cada concentración respecto al Test de Cochran y Prueba T
Student.
Del cuadro de diálogo del selector de parámetros también se pueden

generar informes para “Límites de detección y cuantificación”. Al ejecutar
esta opción aparece un formulario como el siguiente:
34
Figura 40
Como puede observar en el cuadro superior aparecen cajas de texto para

ingresar los valores correspondientes a la ecuación de la recta. En el
cuadro inferior puede ejecutar la opción “Datos iniciales” para generar un
informe con los datos tomados como base de realización del proceso.
La segunda opción “Resultados finales”, permite generar la operación sobre

los límites de detección y cuantificación; pero antes se deben ingresar los
valores numéricos correspondientes en las cajas de texto dispuestas para
ello.
Con esta opción se pueden obtener datos como la ecuación de la recta a

bajas concentraciones, en el rango normal de trabajo, y de desviaciones
estándar. Asimismo se pueden apreciar los resultados de los límites de
detección y de cuantificación.
Por último del selector de parámetros se puede elegir la opción

“Selectividad”, con la cual se ejecuta el reporte inherente a ésta.
Básicamente aquí se indica si la técnica de análisis diferencia o no entre el
principio activo y auxiliares de información, otros productos activos o
productos de degradación.
35
ANEXOS
36
37
CALIFICACION DE OPERACION Y DESEMPEÑO
Debe ingresar al sistema según las especificaciones dadas el siguiente

estudio verificando el resultado en cada uno de los parámetros.
Validación de la técnica de análisis de BETAMETASONA SOLUCIÓN

utilizando cromatografía líquida de alta eficiencia.
1.LINEALIDAD DEL SISTEMA
La linealidad evalúa la relación que existe entre la concentración del analito

y la respuesta del equipo en que se hace la cuantificación de dicho analito.
Esta relación debe ser de proporcionalidad directa.
Matemática y estadísticamente, GALENO utiliza las siguientes opciones

para evaluar la linealidad de una técnica de análisis.
1. Ecuación de la recta de regresión

2. Coeficiente de correlación
3. Test de hipótesis para el pendiente
4. Test de hipótesis para la intercepto
5. Test de hipótesis para el coeficiente de correlación
6. Análisis de varianza para la regresión lineal.
7. Cálculo de los límites de confianza
Adicionalmente se obtiene una gráfica de la recta de regresión ajustada con

los límites de confianza
38
En nuestro ejemplo tenemos los siguientes datos para linealidad del sistema
CONCENTRACION ug/ml Respuesta del equipo *

10 335074
10 325560
10 330351
15 501564
15 501152
15 495022
20 661732
20 661718
20 661133
25 822429
25 838941
25 831681
30 985436
30 989968
30 997921
Tabla 1
|*Area bajo la curva cromatográfica
Las concentraciones como variable independiente se asignan al eje X y las

respuestas como variable dependiente se asignan al eje y.
1. ECUACIÓN DE LA RECTA DE REGRESIÓN:
Intercepto
a = y - mx
a = Intercepto - a = 1.313,066667
39
Pendiente
b  ( n  xy  ( x  y )) /( n( x  x )  ( x( x ))
b = Pendiente - b = 33.066,620000
Ecuación de la recta:
Y = 33.066,620000 X+ 1.313,066667
2. COEFICIENTE DE CORRELACIÓN:
r  ( n xy   x  y ) /( ( n x  x   x  x)(n  y  y   y  y ) )
r = 0,999784
Para las pruebas restantes el sistema calcula los siguientes datos:
Σy = Sumatoria de las respuestas instrumentales
y2 = Sumatoria del cuadrado de las respuestas instrumentales.
x = Sumatoria de los valores de concentración para cada respuesta

instrumental.
x2 = Sumatoria del producto de los valores de concentración para cada

respuesta instrumental.
xy = Sumatoria del producto de los valores de concentración para cada

respuesta instrumental por la respuesta instrumental.
N = Número total de respuestas.
3.TEST DE HIPÓTESIS PARA LA PENDIENTE
Este test nos permite verificar que el valor de la pendiente no es cero, es

decir que a medida que aumentan las concentraciones, la respuesta del
equipo también aumenta.
40
Preliminarmente deben trabajarse las siguientes ecuaciones:
a. Cálculo de la varianza de la desviación alrededor de la regresión o error

de regresión S2 xy.
S 2 xy  
y 2  a  y  b  xy
n2
b. Cálculo de desviación estándar de la pendiente Sb.
Sb =
c. Cálculo de los límites de confianza para la pendiente b´.
b´ = b  t x Sb
t : valor de la tabla t de student para una probabilidad (área bilateral) de
error de:
p = 0.05 y n - 2 grados de libertad. t = 2.160369
HIPÓTESIS: H0)  = 0 H1)   0
ts = Valor t calculado, t observado o t experimental

ts = 173,385676
Valor de la tabla t de student para una probabilidad (área bilateral) de error

de p = 0.05 y n-2 grados de libertad. tt = 2.160369
ts > tt No se aprueba la hipótesis nula o sea que la pendiente es

significativamente diferente de cero.
4. TEST DE HIPOTESIS PARA EL INTERCEPTO
41
Este test nos permite verificar que el intercepto no sea significativamente

diferente de cero
Determinar los límites de confianza para el intercepto.
Cálculo de la desviación estándar del intercepto Sa.
Cálculo de los límites de confianza para el intercepto a´.
a´ = a  t x Sa
t : valor de la tabla t de student para una probabilidad (área bilateral) de

error de
p = 0.05 y n-2 grados de libertad.
a+ = 0.0720
a- = 0.007
Efectuar el test de hipótesis para el intercepto (Demostrar estadísticamente

que el valor del intercepto (a) no es significativamente diferente de cero.
HIPÓTESIS: H0)  = 0 H1)   0
ts = Valor t calculado, t observado o t experimental.

ts = 0,324567

de p = 0.05 y n-2 grados de libertad. tt = 2.160369
42
ts > tt = Se aprueba la hipótesis nula, es decir que en este caso el valor de a

no es significativamente diferente de cero.
5. TEST DE HIPOTESIS PARA EL COEFICIENTE DE CORRELACION
Este test nos permite evaluar estadísticamente si hay o no correlación entre

la concentración de la muestra y la respuesta del instrumento analítico.
HIPÓTESIS: H0) no hay correlación entre x e y.

H1) hay correlación entre x e y.
rx n  2
tr 
1 r 2
tr = Valor t calculado, t observado o t experimental.
tr = 173,385676

de
p = 0.05 y n-2 grados de libertad. tt = 2.160369
tr >> tt Por lo tanto, se rechaza la hipótesis nula o sea que la correlación

entre la concentración del analito y la respuesta del equipo.
6. ANÁLISIS DE VARIANZA PARA LA REGRESIÓN LINEAL.
Este análisis es uno de los mas robustos desde el punto de vista estadístico
para evaluar la linealidad, determinando si la falta de ajuste de los datos
originales a una recta es representativa y si la regresión es estadísticamente
represesentativa.
Determinar las siguientes variables:
Sxx   x 2

  x 2
n
  xy   
x. y
S xy
n
43
Suma de cuadrados de la regresión (scr).
SCr 
 Sxy 
2
S xx
Suma de cuadrados del error puro (scep).

Determinar los siguientes valores:
yj= Sumatoria de las respuestas para cada concentración.

mi = Número de réplicas para cada concentración.
Suma de cuadrados del error puro.
scep = y2 -  (yj)2 /mi
Scep   y 
 y    y 
2 j1
2
j2
2
....    y j 5 
2
m i
a. Suma de cuadrados entre concentraciones (scec).
    y
2 2
yj
Scec  
mi n
Suma de cuadrados para el desvío de linealidad scl.
Scl = scec - scr
44
Tabla de anova
Determinar el número de concentraciones k.

Fuente Grados de Suma de Cuadrado medio Fs Ft
De libertad cuadrados (CM)
Variación (gl) (Sc)
Fv
Regresión 1 1 Scr 820.051.018. Scr/gl 820.051.018. CMR/CMEP 28.354,538985 4,96
Linealidad k-2 3 Scl 65.402.251,4 Scl/gl 21.800.750,4 CML/CMEP 0,753795 3,71
Error n-k 10 Scep 289.213.314, Scep/gl 28.921.331, ----- ------
Puro
Tabla 2
CMR: Cuadrado medio de la regresión.
CML: Cuadrado medio de la linealidad.
CMEP: Cuadrado medio del error puro

fs = Valor f calculado, f observado o f experimental.
Anova para la regresión
Valor de la tabla F de Snedecor, para 1 grado de libertad para el numerador

y.
(n – k = 5) 5 grados de libertad para el denominador, con una probabilidad

de error de p = 0.05. ft = 4,960000.
fs > ft Por lo tanto, la regresión es estadísticamente representativa.
1) Anova para la linealidad.
45
Valor de la tabla F de Snedecor, para (k-2 = 3) 3 grados de libertad para el

numerador y (n-k = 10) 10 grados de libertad para el denominador con una
probabilidad de error de p = 0.05. ft = 3,71
fs < ft Por lo tanto, la falta de ajuste no es representativa.
7. DETERMINAR LOS LÍMITES DE CONFIANZA PARA LA RECTA DE

REGRESIÓN.
a. Determinar el valor de respuesta encontrada por ajuste por mínimos

cuadrados yi, para cada valor de xi.
b. Determinar la raíz cuadrada de la varianza de la desviación alrededor de

la regresión o error de regresión Sxy.
sxy = s 2 xy
c. Determinar el valor de la tabla t de student para una probabilidad de error

de
p = 0.05 y (n-1 = 9) 9 grados de libertad. t = 2.262.

d. Determinar los límites de confianza
y  yi  t  Sxy 
1

 xi  x  2
n Sxx
Resultados
X Y Y+ Y-
10,000000 331.979,266667 336.988,905206 326.969,628127

15,000000 497.312,366667 500.854,716080 493.770,017253
20,000000 662.645,466667 665.537,782876 659.753,150457
25,000000 827.978,566667 831.520,916080 824.436,217253
30,000000 993.311,666667 998.321,305206 988.302,028127
x: Concentración del analito
46
Y: Respuesta del equipo ajustada según la recta de regresión por el método

de mínimos cuadrados
Y+: Intervalo superior de confianza
Y-:Intervalo inferior de confianza
Figura 40
2. LINEALIDAD DEL METODO
Para la linealidad del método se siguen exactamente las mismas

ecuaciones sólo que en este caso el analito no es la sustancia pura sino que
dicha sustancia esta dentro de la formulación final, en el software es posible
completar los datos de esta matriz automáticamente, tomando parte de los
datos suministrados en el parámetro de precisión.
47
3. PRECISION
La precisión de una técnica de análisis mide que tan dispersos están los
datos obtenidos alrededor de un valor medio o central por medio de una
evaluación de la concordancia entre ensayos individuales cuando el método
se aplica repetidas veces a muestras separadas. Esto con el fin de evaluar
la variabilidad de las respuestas obtenidas.
Datos iniciales:
CARGA PLACEBO ANALISTA ENSAYO PERIODO 1 PERIODO 2 PERIODO 3

A 1 51.59 52.27 49.86
F/LACIÓN 2 49.16 49.41 47.37
50% 3 47.27 53.35 48
B 1 50.51 49.07 51.48
2 52.02 50.69 53.62
3 51.11 50.67 50.25
A 1 98.82 102.92 97.96
F/LACIÓN 2 97.81 101.71 98.28
100% 3 97.88 101.42 101.57
B 1 100.44 104.52 102.28

2 102.43 103.74 102.89
3 100.99 103.42 101.09
A 1 108.25 109.98 106.6
F/LACIÓN 2 108.65 110.81 107.97
110% 3 107.43 111.78 107.11
B 1 112.59 113.31 111.57
2 110.79 116.84 110.63
3 110.41 113 107.83
Tabla 3
Si vamos de lo particular a lo general debemos evaluar en el siguiente

orden:
Precisión del sistema

Repetibilidad
Reproducibilidad
En todos los casos en que se mide precisión se utiliza el coeficiente de

varianza (cv), para evaluar este parámetro, la fórmula utilizada es:
 1
cv   100
x
48
Donde X barra es el promedio y sigma-1 es la desviacion estandar .
a. Precisión del sistema.
En este caso se cuantifica una misma muestra mínimo por sextuplicado,

cada cuantificación se va leyendo en el instrumento de análisis consecutiva
e inmediatamente una valoración después de la otra. Estas medidas debe
hacerlas un solo analista.
Continuando con el ejemplo de la betametasona tenemos los siguientes

datos para precisión del sistema trabajando 6 replicas con 3
concentraciones diferentes:
Concentración Resultado %
50.000000 53.130000
50.000000 50.600000
50.000000 53.980000
50.000000 51.420000
50.000000 51.500000
50.000000 51.290000
100.000000 101.160000
100.000000 99.310000
100.000000 101.280000
100.000000 100.440000
100.000000 100.960000
100.000000 101.450000
110.000000 104.270000
110.000000 104.020000
110.000000 104.160000
110.000000 104.040000
110.000000 104.560000
110.0 104.140000
Resultados
49
Concentración Coeficiente de varianza

50 2.2551
100 0.7191
110 0.1742
Tabla 5
Para la precisión del método el coeficiente de varianza debe ser inferior al

2%
b. Repetibilidad
La repetibilidad evalúa la precisión del método de análisis cuando un solo

analista hace el mismo análisis de diferentes muestras obtenidas de un
mismo lote en un período de tiempo corto. En nuestro ejemplo hemos
tomado la matriz sugerida por el programa de manera que tenemos la
posibilidad de determinar el coeficiente de varianza de cada triplicado que
cada analista ha hecho por cada concentración en cada uno de tres
periodos diferentes de tiempo.
Esto nos da 18 valores de repetibilidad como vemos en los resultados

obtenidos.
Resultados obtenidos:
CARGA PLA. ANALISTA DIA 1 CV % DIA 2 CV% DIA 3 CV%

F/LACIÓN A 4.38917247 3.939710250 2.67432929
A 50% B 1.48454511 1.853861043 3.2932494
F/LACIÓN A 0.57451721 0.779905818 2.01296893
B 100% B 1.01458056 0.544600164 0.89672984
F/LACIÓN A 0.57527747 0.812677286 0.64574538
C 110% B 1.046644334 1.864934699 1.76852927
Tabla 6
Para nuestro ejemplo, los coeficientes de varianza de repetibilidad deben

ser inferiores al 2%. Como se observa en la tabla de resultados obtenidos
algunos de los triplicados efectuados por los analistas no cumplen con este
requerimento.
50
c. Reproducibilidad
La reproducibilidad evalúa la precisión del método de análisis cuando mas

de un analista hace el mismo análisis de diferentes muestras obtenidas de
un mismo lote en diferentes períodos de tiempo.
En nuestro ejemplo hemos tomado la matriz sugerida por el programa de
manera que podemos determinar el coeficiente de varianza de los 18
análisis efectuados por 2 analistas durante 3 días diferentes para cada
concentración. Esto nos da un valor de reproducibilidad por cada
concentración.
Datos iniciales:
Estos datos se encuentran en la matriz de repetibilidad literal 3b.
Resultados obtenidos
CONC % CV %
50 3.6556645
100 2.13268832
110 2.40302855
Tabla 7
En nuestro caso los coeficientes de varianza deben ser inferiores al 4% por

lo que se considera que el método de análisis es reproducible.
4. Exactitud
La exactitud de un método analítico se define como el grado de

concordancia entre la media de los resultados obtenidos en el ensayo y el
valor verdadero o el valor aceptado como correcto para la cantidad medida.
Se conoce también como error sistemático o sesgo.
Para evaluar exactitud tenemos el sistema trabaja las siguientes pruebas:
Porcentajes de recuperación
Test G de Cochran
Prueba t de student para exactitud
NOTA.
51
Para nuestro ejemplo los datos iniciales fueron obtenidos a partir de manera
automática desde la matriz de precisión.
a. Determinación de porcentaje de recuperación para cada concentración.

Resultados obtenidos:
 50.42
Para 50% X  50.42 Recuperación X 100  100.84%
50
Para 100% x = 101.10 Recuperación 101.12 x 100=101.12%
100
Para 110% x = 110.3 Recuperación 110.3 x 100=100.27%
110
Limites: Entre el 97% y 103% (Principio activo en medicamento) 99%-101%
materia prima.
b. Test G de cochran
Es un test de igualdad de varianzas de varios grupos muestrales del

mismo tamaño para determinar si el factor concentración tiene alguna
influencia en los resultados.
S 2 max
Gs  2
S1  S 22  S32
GS = Valor G calculado, G observado ó G experimental.
GS = 0.5941
Valor de la tabla G de Cochran para una probabilidad de error de P =

0.05 con n = número de datos por concentración. n = 3 y K= número de
concentraciones. K = 3 G t = 0.8709.
52
Gs < Gt lo que significa que las varianzas de las 3 concentraciones

utilizadas son equivalentes o que el factor concentración no influye en la
variabilidad de los resultados.
c. Prueba t de student
Para hallar si la exactitud es aceptable se aplica esta prueba.
Recuperación media R= 100.75

Desviación estándar S= 1.37
Coeficiente de variación (%) CV= 1.36
Numero de datos N=9
100  R n
Texp 
cv
Texp = Valor t calculado, t observado o t experimental
texp = 1,65

de p = 0.05 y (n-1= 8) 8 grados de libertad tt= 2.306
Texp<tt no existe diferencia significativa entre la recuperación media y 100

confirmando la buena exactitud del método.
5. DETERMINACION DE LIMITES DE DETECCION Y CUANTIFICACION
El límite de cuantificación, es la menor cantidad de analito que el

instrumento analítico puede medir con exactitud y precisión adecuadas, el
limite de detección es la menor cantidad de analito que el instrumento de
análisis puede leer pero no cuantificar con exactitud y precisión adecuadas
La mejor manera de determinar estos límites es hacerlo de manera

experimental disminuyendo las concentraciones de análito hasta encontrar
el valor de concentración en donde la exactitud y precision ya no es
adecuada.
Sin embargo existen varias formas teóricas y teórico prácticas para
determinar estos límites, el programa una de estas formas como vemos con
nuestro ejemplo:
53
1. Determinación de la curva de calibración en el rango normal de trabajo.
Rango 1 – 15 mcg/ml Ecuación de la recta Y = 260.65X+3.7

Y es la respuesta del equipo, área en este caso.
X es la concentración del analito
2. Determinación de la curva de calibración a bajas concentraciones.

Analizar tres muestras por triplicado.
Concentración mcg/ml Respuesta (área) Area promedio Desv. Est del área
0.3 66 59 63 62.667 3.51
0.6 120 126 130 125.33 5.03
0.9 178 192 185 185 7
Tabla 8
3. Determinación del intercepto con el eje Y a concentración cero.

Determinar la ecuación de la recta para los siguientes datos:
X conc mcg/ml 0.3 0.6 0.9

Y Area promedio 62.67 125.33 185
Tabla 9
Y= 203.88X+2.00 r = 0.9999
La pendiente de esta recta es muy similar a la pendiente de la recta del

punto 1.
Para X=0, Y=2.00
El intercepto con el eje Y es 2.00 Ybl= 2.00
4. Determinación de la desviación estándar de la respuesta a concentración

cero
Determinar la ecuación de la recta para los siguientes datos:
X Conc mcg/ml 0.3 0.6 0.9

Y DesvEst del área 3.51 5.033 7
Tabla 10
54
Y= 5.81X + 1.69 r = 0.9970
Para X= 0, Y = 1.69
La desviación estándar de la pendiente es 1.69 Sbl = 1.69
5. Cálculo del límite de detección K=3
Ybl  3Sbl 1
LD  X
b n
b= pendiente de la recta a altas concentraciones

LD= (2+3(1.69))/260.65X1/raiz cuadrada de 3
LD= 0.015684 mcg/ml
6. Cálculo del límite de cuantificación K = 10
Ybl  10Sbl 1
LC  X
b n
LC = (2+10(1.69))/200.65 X 1/raiz cuadrada de 3

LC 0.041944 mcg/ml
Los límites encontrados a través de estas ecuaciones siempre se deben

corroborar experimentalmente.
55
“Imprima los resultados obtenidos y adjúntelos al presente documento como

certificado de validación del mismo”.
ELABORADO POR: FECHA
REVISADO POR: FECHA
APROBADO POR: FECHA
56
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
CASTRO MARTA ET AL, “Validación de métodos analíticos” A.E.F.I.

Sección Catalana. Comisión de normas de buena fabricación y control de
calidad. España. 1989
DUARTE A, FERNANDÉZ E, “Diseño, Desarrollo y Validación de la

metodología analítica para el estudio de estabilidad de formas farmaceuticas
a base de fenobarbital”. Universidad Nacional de Colombia. Facultad de
ciencias. Departamento de Farmacia. 1993
MILLER J, “Estadística para Química Analítica” 2 ed, Addisin Wesley

Iberoamericana, Delawere U.S.A. 1993
“U.S. Pharmacopeia XXIV”, U.S: Pharmacopeial convention Inc, Rocville.

U.S.A . p 2149-2152. 2000.
www.ich.org ICH Topic Q 2 B “Validation of analitycal procedures:

Methodology”. 1996
www.fda.gov. “Validation of cromatographic methods” Center for drug

evaluation and research. 1994
57

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Para empezar a trabajar con el módulo de Validación de Técnicas

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Aquí se deben ingresar las diferentes formas en que se pueden presentar

En este formulario se consideran campos obligatorios el código y la

En este formulario se deben ingresar todos los componentes (principios

Aquí se ingresan todos los elementos que sirven como recipientes de

los registros a ingresar pueden ser: sobres, sachets, blisters, goteros,

En este formulario se consideran campos obligatorios el código y la

Aquí se ingresan los datos relacionados con la forma como el producto va a

Ejemplos para vías de suministro pueden ser: oral, intravenosa, ocular,

Aquí se definen todas las unidades de medida que se utilizarán más

Observe que la caja de texto “Descripción” tiene una presentación diferente

Cuando grabe una descripción que no tiene superíndices, GALENO le

En este formulario se consideran campos obligatorios el código y la

En este formulario se crea y modifica toda la información inherente a los

Aquí podemos observar elementos como la caja de presentación de datos y

Al ejecutar nuevo o modificar la caja de presentación de datos desaparece,

Aquí se observa la referencia a códigos de otras tablas. Observe en la

En la tabla vinculada tipo 1 “Componentes del producto” se agregan todos

En este formulario es obligatorio el ingreso del código, la descripción y la vía

Luego de ingresar todas las posibles especificaciones a utilizar,

Como se observa en la anterior imagen, el formulario posee estructuras

A continuación se explica el funcionamiento de las cajas de texto agrupadas

Es importante tener en cuenta que para cada parámetro a evaluar el

A continuación indicamos los valores mínimos que el sistema acepta.

Precisión del método:

Precisión del sistema:

Linealidad del sistema y del método:

Límites de detección y cuantificación:

Para la mayoría de subgrupos se dan las opciones de “Número de

En los campos correspondientes a réplicas, se ingresa el número de

En “Precisión del Método” se ingresa el número de analistas que toman los

Luego de grabar la información del estudio se habilita en la parte inferior del

Aquí se definen las unidades de medida para los diferentes parámetros.

Luego de establecer el sistema de unidades de medida por parámetro

Al pulsar el botón “Ingreso de datos”, aparece un cuadro de diálogo

Aquí se debe escoger el parámetro y luego pulsar el botón “Generar

Escogiendo cualquiera de las dos primeras opciones (Linealidad o

En él seleccione el tipo de parámetro “Linealidad de método/sistema” o

Eligiendo cualquiera de estas opciones, pulse el botón “Generar Proceso”.

Aquí pulse el botón estándar “Nuevo”, para capturar el valor de las

Al salir, aparecerá el formulario precedente, en el cual se pueden observar

Ahora debe ingresar el resultado correspondiente para cada una de las

Como se observa en la figura 21 para el caso de linealidad del método, el

Si elige “Automática” el sistema genera los datos extrayendo la información

Al pulsar el botón “Aceptar”, usted volverá a la pantalla inicial del selector de

Si al ejecutar la opción “manual”, no ha ingresado los datos, aparece un

En caso de que en el cuadro de diálogo de la (fig. 15) se elige la opción

Este formulario la interfaz y navegación se da igual al formulario de la figura

Si por el contrario en el formulario de la figura 15 se elige la opción

Aquí se puede observar, que aparecen los datos capturados en el formulario