INFORME DE

PRÁCTICAS
2020

29 NOVEMBER

Universidad Católica de Santa María

Ingeniería Biotecnológica

1
 UNIVERSIDAD
CATÓLICA DE
SANTA MARÍA
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS,
BIOQUÍMICAS Y BIOTECNOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

ANÁLISIS QUÍMICO II
INFORME DE PRÁCTICAS
Grupo

DOCENTE

Salinas Sánchez, Armando

ESTUDIANTE
Díaz Torres, Fabiola

VI SEMESTRE

Arequipa, 2020

2
 PRÁCTICA N° 01
“ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE”
SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA ANALÍTICA

OBJETIVOS
 Operar adecuadamente el espectrofotómetro computarizado Shimadzu 160 - A.
 Preparar soluciones stock, madre y patrones de manganeso.
 Obtener espectros o curva de absorción.
 Seleccionar la longitud de onda de trabajo, máxima o analítica.

GENERALIDADES
En el análisis espectrofotométrico, las mediciones de absorbancia se realizan ordinariamente
a una longitud de onda que corresponda a un máximo del espectro de absorción. En cada
tipo de sustancias los átomos, iones o moléculas absorben con cierta preferencia radiación
de determinadas longitudes de onda de una determinada gama de frecuencias; esto hace que
los átomos, iones o moléculas puedan identificarse mediante la longitud de onda a que se da
lugar la absorción.

Para encontrar la curva de absorción se irradia a la solución coloreada radiación

electromagnética entre 450-600 nm, con energía radiante de una gama de longitudes de onda
de tal manera que a cada longitud de onda se mide su valor de absorbancia o de % de
transmitancia; esta energía absorbida se traduce en un espectro de absorción que es
obtenido en función de los valores de absorbancia o de % de transmitancia frente a las
longitudes de onda.

3
ARREGLO EXPERIMENTAL

Sistema de
Fuente de luz
lectura

Monocromador Amplificador

Muestra Detector

APARATOS
 Espectrofotómetro Shimadzu 160-A
 Cubeta: 1 cm de trayecto óptico
 Región de trabajo: espectro visible (450 – 600 nm)
 Blanco: agua destilada

MATERIALES
 Fiolas de 100 y 250 mL
 Buretas de 25 mL
 Vasos de precipitación de 250 mL

REACTIVOS
 Solución stock de permanganato de potasio 0.1 N
 Solución de permanganato de potasio con concentración de 100 mg/L (ppm) de
manganeso
 Soluciones estándares o patrones manganeso

4
INTERPRETACIÓN DE DATOS
1. Valoración de la solución de KMnO4 con oxalato de sodio (Método de porción
pesada).
Peso de oxalato: 0.1004 g
Gasto del KMnO4: 14.5 mL
Meq Na2C2O4: 0.067 g/mol

a. Cálculo de la normalidad exacta

0.1004 g Na 2C 2O 4 x 1meq KMnO 4

=0.1033 N
14.5 mL KMnO4 x 0.067 g Na2 C 2 O 4

b. Expresión de la concentración en ppm referida al manganeso

0.1033 meq KMnO 4

∗0.0316 g KMnO 4
mL
∗54.94 g Mn
1 meq KMnO 4
∗1000 mg
158.03 g KMnO 4
∗1000mL
1g
=1134.8 mg Mn
1L

2. Preparación de soluciones.

a. Preparación de la solución madre de 100 ppm de Mn para un volumen de 250

mL, cálculo del volumen de la solución stock.

V 1 x 1134.8 mL=250 mL x 100 ppm

V 1=22.03 mL

Medir mediante una bureta 22.03 mL de la solución stock. Luego se deposita en

una fiola por 250 mL para diluir a la línea de aforo, y homogeneizar.

b. Preparación de las soluciones patrones.

Volumen a medir
Concentración Volumen a medir
N° Patrón de la solución de
ppm Mn mL
100 ppm Mn mL
1 2 2 100
2 4 4 100
3 6 6 100
4 8 8 100
5 10 10 100
5
 6 12 12 100

c. Tabla de medición de las absorbancias a diferentes longitudes de onda

Longitud de onda Absorbancia

450 0.072
460 0.112
470 0.18
480 0.264
490 0.325
500 0.518
510 0.711
520 0.732
530 0.614
540 0.739
550 0.596
560 0.47
570 0.452
580 0.23
590 0.106
600 0.084

Tabla 1. Absorbancia del analito en función de la longitud de onda de la

radiación.

El máximo de absorbancia que se obtiene del espectro de absorción es lo que nos

indica la longitud de onda que proporciona la mayor longitud posible y por ende
es la se va a utilizar en el análisis espectrofotométrico de la muestra a estudiar.

6
 Curva de absorción
0.8 0.74
0.71 0.73
0.7
0.61 0.6
0.6
0.52
0.5 0.47 0.45
Absorbancia

0.4
0.33
0.3 0.26
0.23
0.18
0.2
0.11 0.11
0.08
0.10.07

0
450 470 490 510 530 550 570 590

Longitudes de onda

Los picos de absorción de la muestra del analito, usando KMnO4 fue absorbido a
diferentes longitudes de onda entre 450 nm y los 600 nm, obteniendo el mayor
pico de absorción a los 540 nm con una absorbancia de 0.739.

DISCUSIÓN DE DATOS
Se determinó de esta manera la longitud de onda de trabajo la cual fue de 540 nm. La
longitud de onda de trabajo corresponde, generalmente, a la longitud de onda en la cual la
absorbancia del analito (sustancia a analizar) es máxima.

Para seleccionar el λ máx., se hace un espectro de absorción o curva espectral, y que

consiste en una gráfica de la absorbancia de una solución de la sustancia absorbente de
concentración adecuada, medida a distintas longitudes de onda y en ella se determina el λ
máx.

CUESTIONARIO
1. Defínase brevemente:
a) La radiación:
 Monocromática: Es aquella radiación que se emite mediante una onda
cuya frecuencia corresponde a un color de luz específicamente.
 Policromática: Posee una frecuencia la cual es la resultante de la
superposición de varias ondas de radiación monocromática.
b) Espectro de adsorción:
Muestra la fracción de la radiación electromagnética incidente que un material
absorbe dentro de un rango de frecuencias.
7
 c) ¿Por qué es importante monocromatizar la radiación policromática?
Es importante porque cuando monocromatiza una luz policromática se
selecciona no solamente una longitud de onda de trabajo que mejora la
eficiencia de los análisis y un color de luz, permite tener datos mucho más
exactos y precisos para absorber una mayor radiación.

2. Describir la diferencia entre un espectrofotómetro y un fotómetro.

El fotómetro trabaja únicamente con el espectro de luz visible y selecciona una
longitud de onda determinada mediante filtros fijos. Por otro lado, el
espectrofotómetro puede trabajar no solo con la luz visible, sino también con regiones
ultravioleta e infrarroja, además de tener un monocromador que selecciona la longitud
de onda deseada.

3. En la longitud de onda de trabajo obtenida en la parte experimental a 525 nm,

calcular la cantidad de energía que le corresponde a esa radiación. Compararla
con una longitud de onda de 200 nm que corresponde a la región UV.

LONGITUD DE ONDA A 525 nm

c 2.998 x 108 m/s 14

Frecuencia: v= λ = −10
=5.7105 x 10 Hz
5250 x 10 m

Energía de fotón: E=37.8383 x 10−20 J

c
λ
c
λ
LONGITUD DE ONDA A 200 nm

c 2.998 x 108 m/s 15

Frecuencia: v= = =1.499 x 10 Hz
λ 2000 x 10−10 m

Energía de fotón: E=99.3252 x 10−20 J

8
 4. ¿Qué tipo de información proporciona el espectro de adsorción?
Muestra la fracción de la radiación electromagnética incidente que un material puede
absorber dentro un rango de frecuencias.

5. ¿Por qué se determina la longitud de onda analítica o de trabajo? Señale algunas

razones.
 Determina la absorbancia máxima del analito.
 Se realiza un espectro de absorción, la cual consiste en una gráfica de la
absorbancia de la solución la sustancia absorbente de concentración adecuada.
 Se hace en la zona de longitudes de onda donde se espera que la sustancia
problema lo absorba.

6. Indicar qué formas conoce para representar una curva de adsorción.

Mediante un gráfico que sale de la concentración respecto a la absorbancia con el uso
de Excel o cualquier programa, junto con una fórmula matemática se determina la
concentración de dicha muestra.

7. ¿Qué es un espectro de adsorción atómica y qué es un espectro de adsorción

molecular?
 Adsorción atómica: Determinación de metales en distintos tipos de muestras
tales como partículas de aire, sedimentos, plantas, suelos, fertilizantes, lodos de
depuradoras, sangre, suero, orina, etc. Por tanto, sus aplicaciones sirven para la
agricultura, industria y sanidad.
 Adsorción molecular: Estudio analítico cualitativo y cuantitativo de
moléculas orgánicas e inorgánicas -en estado sólido, líquido o gaseoso– en la
franja del ultravioleta, visible e infrarrojo. Permite procedimientos habituales
en los campos de la biología, química, farmacia, geología, gemología, física,
humanidades y bellas artes.

BIBLIOGRAFÍA
1. Diferencia entre radiación policromática y radiación monocromática. Brainly.lat.
(2018). Retrieved 17 November 2020, from
https://brainly.lat/tarea/10468180#:~:text=La%20radiaci%C3%B3n%20monocrom
%C3%A1tica%2C%20como%20su,varias%20ondas%20de%20radiaci%C3%B3n
%20monocrom%C3%A1tica.
2. COLORÍMETRO Y ESPECTROFOTÓMETRO. Equipos y laboratorio de Colombia.
Retrieved 17 November 2020, from
https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/colorImetro-y-
espectrofotOmetro#:~:text=La%20diferencia%20fundamental%20entre%20un,onda
9
 %20determinada%20mediante%20filtros%20fijos.&text=Adem%C3%A1s%20posee
%20un%20monocromador%20para%20seleccionar%20la%20longitud%20de
%20onda%20deseada.
3. Servicio de Apoyo Técnico a la Docencia y a la Investigación » Espectroscopía
molecular y de absorción atómica. Satdi.umh.es. (2020). Retrieved 17 November
2020, from https://satdi.umh.es/presentacion/objetivos/unidad-servicio-
tecnico/espectroscopia-molecular-y-de-absorcion-atomica/.
4. SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA ANALÍTICA. StuDocu. (2017).
Retrieved from https://www.studocu.com/pe/document/universidad-catolica-de-santa-
maria/bioquimica/ensayos/espectrofotometria-del-visible/7667001/view.

10
 PRÁCTICA N° 02
“ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE”
DEMOSTRACIÓN DE LAS LEYES FOTOMÉTRICAS Y
ERROR RELATIVO DE LA CONCENTRACIÓN

OBJETIVOS
 Preparar soluciones de permanganato de potasio
 Medición de los patrones a la longitud de onda de trabajo
 Construir la curva de calibración
 Verificar la conformidad de la ley de Beer
 Determinar las concentraciones límites de los patrones

GENERALIDADES
Las medidas de la absorbancia se realizan comúnmente utilizando un blanco, que debe ser
idéntico a la muestra en todo, excepto en que no debe contener el constituyente que se ha de
determinar. El blanco deberá contener los reactivos, aditivos, disolvente, etc., en la misma
naturaleza y concentración que las utilizadas en cada muestra desconocida en la que se
desarrolle color.

De esta manera, las lecturas de las muestras están corregidas automáticamente para
cualquier absorción pequeña por acción de los reactivos y del disolvente. Con los datos
absorbancia para las diferentes concentraciones de las series patrón se construye una curva
de calibrado. La cantidad de luz absorbida por cada patrón se encuentra bien definida y se
debe ajustar a ciertas leyes físicas denominadas leyes fotométricas.

La obtención de la curva de calibrado y la demostración de la ley de Beer se determinan

experimentalmente, preparando una serie de soluciones patrones y midiendo la
absorbancia de cada solución a la longitud de onda analítica, máxima o de trabajo. Con los
datos de absorbancia frente a las concentraciones de los patrones se gráfica en un sistema
cartesiano y la representación debe ser una línea recta de pendiente positiva si cumple con la
ley Beer.

11
ARREGLO EXPERIMENTAL

APARATOS
 Espectrofotómetro Shimadzu 160-A
 Cubeta: 1 cm de trayecto óptico
 Región de trabajo: espectro visible
 Longitud de onda de trabajo: 525 nm

MATERIALES
 Fiolas de 100 y 250 mL
 Buretas por 25 mL

REACTIVOS
 Solución stock 0.1 N de permanganato de potasio
 Solución madre de permanganato de potasio de 100 ppm de manganeso
 Soluciones patrones de manganeso

INTERPRETACIÓN DE DATOS
1. Cálculo del volumen de la solución stock requerido para preparar una solución
madre de 100 ppm en manganeso para un volumen de 250 mL.

V 1 x 1130.55 ppm Mn=250 mL x 100 ppm

V 1=22.11 mL

Medir por bureta 22.1 mL de la solución stock y depositar en fiola x 250 mL.
Posteriormente, se diluye con agua destilada y enrasar para luego homogeneizar la
solución.

12
2. Cálculos para preparar 100 mL de las soluciones patrones o estándares ppm Mn
a partir de la solución madre.
V 1 x 100 ppm=100 mL x 0.5 ppmV 1=0.5 mL
V 2 x 100 ppm=100 mL x 1.0 ppmV 1=1.0 mL
V 3=2 mL
V 4=4 ml

Volumen a medir
Concentración Volumen a medir
N° Patrón de la solución de
ppm Mn mL
100 ppm Mn mL
1 0.5 0.5 100
2 1. 1. 100
3 2 2 100
4 4 4 100
5 6 6 100
6 8 8 100
7 10 10 100
8 12 12 100
9 16 16 100
10 20 20 100
11 30 30 100
12 40 40 100

Se mide el volumen calculado y se deposita la solución en fiola por 100 mL, se

diluye, se enrasa con agua destilada y se homogeneiza las soluciones.

3. Cálculo de error de la absorbancia o la concentración.

a. Error relativo para 1% T

0.434 (0.01)
x 100 % = 21.7
0.01 log0.01

13
b. Error relativo para 5% T
0.434(0.01)
x 100 % = 6.6716
0.05 log 0.01

c. Error relativo para 10% T

0.434(0.01)
x 100 % = 4.34
0.1 log 0.01

d. Error relativo para 15% T

0.434(0.01)
x 100 % = 3.5117
0.15 log 0.01

e. Error relativo para 20% T

0.434(0.01)
x 100 % = 3.1046
0.2 log 0.01

f. Error relativo para 30% T

0.434(0.01)
x 100 % = 2.7667
0.3 log 0.01

g. Error relativo para 40% T

0.434(0.01)
x 100 % = 2.7265
0.4 log 0.01

h. Error relativo para 50% T

0.434(0.01)
x 100 % = 2.8834
0.5 log 0.01

i. Error relativo para 60% T

0.434(0.01)
x 100 % = 3.2605
0.6 log 0.01

j. Error relativo para 70% T

0.434(0.01)
x 100 % = 4.0025
0.7 log 0.01

k. Error relativo para 80% T

0.434(0.01)
x 100 % = 5.5980
0.8 log 0.01

l. Error relativo para 90% T

0.434(0.01)
x 100 % = 10.5387
0.9 log 0.01
14
 m. Error relativo para 95% T
0.434(0.01)
x 100 % = 20.5079
0.95 log 0.01

TABLA DE RESULTADOS DE ERROR

RELATIVO CON VALORES DE ABS
Error
Grado de
% Transmitanci relativo de la
incertidumbr ABS %T
T a concentració
e
n 0.434 Factor
1 0.01 0.01 21.7000 2.0000 1.0000
5 0.05 0.01 6.6716 1.3010 5.0000 Soluciones
concentradas
10 0.1 0.01 4.3400 1.0000 10.0000
15 0.15 0.01 3.5117 0.8239 15.0000
20 0.2 0.01 3.1046 0.6990 20.0000
30 0.3 0.01 2.7667 0.5229 30.0000 Soluciones
40 0.4 0.01 2.7265 0.3979 40.0000 diluidas
50 0.5 0.01 2.8834 0.3010 50.0000
60 0.6 0.01 3.2605 0.2218 60.0000
70 0.7 0.01 4.0025 0.1549 70.0000
Soluciones
80 0.8 0.01 5.5980 0.0969 80.0000
muy diluidas
90 0.9 0.01 10.5387 0.0458 90.0000
95 0.95 0.01 20.5079 0.0223 95.0000

Determinación de soluciones con el error absoluto

%T DC/C
1 21.70
5 6.67
10 4.34
15 3.51
20 3.10
30 2.77
40 2.73
50 2.88
60 3.26
70 4.00
80 5.60
90 10.54

15
 95 20.51

Error relativo de la concentración

25.00
21.70
20.51
20.00

15.00
Absorbancia

10.54
10.00
6.67
5.60
4.34 4.00
5.00 3.51 3.10 2.88 3.26
2.77 2.73

0.00
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

% TRansmitancia

Los patrones por utilizar deben tener una transmitancia entre 20 y 70%, mientras que
el porcentaje de transmitancia de la muestra sería en entre 30 y 60% para que esté
dentro de los valores establecidos. El error relativo que se obtiene es mínimo.

Selección de soluciones patrones

N° Concentración
ABS %T
Patrón ppm Mn
1 0.5 0.023 94.84
2 1 0.042 90.78
3 2.9 0.067 81.85
4 4 0.16 69.18
5 6 0.245 56.88
6 8 0.339 45.80
7 10 0.419 38.11 Soluciones
8 12 0.5 31.62 elegidas
9 14 0.578 26.42
10 16 0.669 21.42
11 18 0.745 17.99
12 20 0.843 14.35
13 30 1.256 5.54
16
 Los patrones de color más oscuro con una concentración de 6, 8, 10, 12, 14 y 16 ppm
son los valores que tienen una transmitancia entre 20 y 60%. Por lo que utilizamos
sus absorbancias respectivas y se realiza la curva de calibración para analizar mejor
los datos.

Concentración
N° Patrón ABS
ppm Mn
5 6 0.245
6 8 0.339
7 10 0.419
8 12 0.5
9 14 0.578
10 16 0.669

La ecuación de ajuste nos demuestra los valores correspondientes de cada patrón,

indica la concordancia con el método de la ley Beer que estamos utilizando. Podemos
calcular también la concentración de un analito que se constituye en una curva de
trabajo. Con la curva de absorbancia obtenemos la recta con la curva, y se nos
podemos guiar con respecto al eje X y Y para encontrar una respectiva concentración
de la muestra.

CURVA DE TITULACIÓN
0.8

0.7 0.67
f(x) = 0.08 x + 0.17 0.58
0.6
R² = 1
0.5
ABORBANCIA

0.5
0.42
0.4
0.34
0.3
0.25
0.2

0.1

0
6 8 10 12 14 16

CONCENTRACIÓN ppm

DISCUSIÓN DE DATOS
El trabajo práctico descrito previamente hizo referencia a la segunda etapa de diseño,
teniendo como objetivos construir curvas de calibración, verificar la conformidad del
17
método con la Ley Beer, y seleccionar las concentraciones límites de los patrones para ser
empleados en un método de análisis espectroscópico. La obtención de la curva de
calibración nos permitió demostrar que los datos de absorbancia frente a las concentraciones
de los patrones sí cumplen con la Ley de Beer. La ley explica que hay una relación
exponencial entre la transmisión de luz a través de una sustancia y la concentración de la
sustancia, así como también entre la transmisión y la longitud del cuerpo que la luz
atraviesa. Si conocemos l l (longitud atravesada por la luz en el medio) y α (coeficiente de
absorción), la concentración de la sustancia puede ser deducida a partir de la cantidad de luz
transmitida

CUESTIONARIO
1. ¿Qué son y cuáles son las leyes fotométricas?
 Ley de Beer: Expresa la relación entre transmitancia y concentración de
material absorbente, es decir, que la transmitancia disminuye en progresión
geométrica cuando la concentración aumenta en progresión aritmética.
 Ley de Lambert-Bouguer: Se trata de un medio o método matemático, el cual
es utilizado para expresar de qué modo la materia absorbe la luz.
 Ley de Lambert-Beer: Resulta de la combinación de la Ley de Lambert
con la de Beer y suele llamarse simplemente ley de Beer. Esta ley establece
que: “La cantidad de luz o energía ultravioleta o infrarroja absorbida o
transmitida por una solución es una función exponencial de la concentración de
sustancia absorbente presente y de la longitud de la trayectoria hacia la
muestra”.

2. ¿Cómo obtiene y para qué se utiliza una curva de calibración o de trabajo?

Se obtiene preparando una serie de soluciones patrones y sirve para medir la
absorbancia de cada solución a la longitud de onda analítica, máxima o de trabajo.

3. ¿Cómo comprueba experimentalmente la Ley de Beer?

Se comprueba con los datos de las absorbancias frente a la concentración de los
patrones, puestos en una gráfica y la línea recta de una pendiente positiva.

4. Señalar las razones por las cuáles se dan las limitaciones de la Ley de Beer.
 Los niveles de energía en los que se mueven los electrones son distintos.
 El diagrama de energía y la capacidad de absorción de radiación varían, por lo
que la concentración lo afecta.
 Gracias a las desviaciones químicas, la asociación y disociación de la reacción
depende de la dilución, los cambios en los equilibrios que se producen.
 La línea recta tiende a ser más recta dependiendo de los coeficientes de
absorción molar de las especies.
18
  Existen desviaciones instrumentales con radiaciones policromáticas, la
longitud de onda única selecciona que el monocromador deja escapar la
longitud de onda que se selecciona.

5. ¿A qué se denominan y cuáles son los errores personales?

Son las limitaciones de cada persona, podrían ser errores de medición, problemas
visuales, errores sistemáticos durante los procesos de medida y afecta a todos los
valores.

6. ¿Qué criterios se maneja para seleccionar las soluciones patrones para ser
utilizadas en un método espectrofotométrico?
 La longitud de onda óptima es marcada y apta para el estudio de la curva.
 La sustancia debe estar coloreada.
 Las soluciones deben tener la especie de solución sin color propio y deben
tener la capacidad de absorber radiación.

7. Dar razones por qué en espectroscopía se utilizan soluciones diluidas.

Porque las soluciones muy concentradas podrían provocar curvas elevadas, por ende,
se procura tener concentraciones diluidas.

BIBLIOGRAFÍA
1. LEY DEBOUGUER-LAMBERT-BEER. Uv.mx. Retrieved 17 November 2020, from
https://www.uv.mx/personal/aherrera/files/2014/05/L.-Ley-de-Bouguer-Lambert-
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https://www.studocu.com/pe/document/universidad-catolica-de-santa-
maria/bioquimica/ensayos/espectrofotometria-del-visible/7667001/view.

19
 PRÁCTICA N° 03
“ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE”
ANÁLISIS DE MANGANESO

OBJETIVOS
 Construir la curva de calibración o de trabajo
 Tratamiento adecuado de la muestra de alimento y formación de la especie coloreada
 Determinar el contenido de manganeso en muestras de alimentos y de fármacos

GENERALIDADES
Pueden determinarse por espectrofotometría y colorimetría en forma de permanganato
pequeñas cantidades de manganeso en minerales, aguas, alimentos, aceros y fármacos.
Entre los diversos reactivos capaces de oxidar los estados inferiores de oxidación del
manganeso a permanganato, tenemos el peryodato de potasio cuya reacción se desarrolla de
la siguiente manera:

2 Mn+2 + 5 IO4- + 3 H2O  2 MnO4- + 5 IO3- + 6 H+

analito peryodato ión permanganato

Muchas enzimas contienen manganeso o son activados por este elemento. El manganeso
está presente en los alimentos de origen vegetal, como té, harina integral, gérmenes de
cereales y nueces. La deficiencia de manganeso ocasiona trastornos del crecimiento,
modificaciones de esqueleto y alteración del metabolismo de hidratos de carbono y grasas.
A grandes dosis, el manganeso es tóxico y produce trastornos en el tracto gastr ointestinal y
neumonía. No se conocen intoxicaciones debidas a una ingesta normal procedente de
alimentos.

Los componentes que acompañan al manganeso comunican cierta coloración a la solución,

el ion férrico de color amarillo se elimina con ácido fosfórico por formación del complejo
hierro-fosfórico incoloro, el color debido a pequeñas cantidades de cromo, vanadio, níquel,
y cobalto se compensan con el blanco tal como se ha señalado.

20
Los cloruros reducen el permanganato formado y, por lo tanto, si hubo necesidad de utilizar
HCl, deben ser eliminados previamente en forma de vapores de HCl llevando a fumación
con H2SO4.
La muestra es sometida a calcinación seca entre 500 - 550 °C , hasta obtener un residuo de
cenizas, la que es disuelta por ácido y tratada con peryodato de potasio en caliente ; el
manganeso es oxidado por este reactivo hasta permanganato de color violeta. En esta
condición de color desarrollado por reacción y diluido a un volumen conocido se realiza la
medición espectrofotométrica a una longitud de onda de 525 nm.

ARREGLO EXPERIMENTAL

APARATOS
 Espectrofotómetro Shimadzu 160-A
 Cubeta de cuarzo: 1 cm de trayecto óptico
 Región de trabajo: espectro visible
 Longitud de onda: 525 nm
 Blanco: agua

MATERIALES
 Fiolas de 100 mL
 Pipeta graduada de 10 mL
 Equipo de filtración
 Vaso de precipitación
 Pisetas

21
REACTIVOS
 Solución de ácido nítrico 1:3
 Peryodato de potasio en reactivo RA
 Ácido fosfórico al 85%
 Solución de permanganato de potasio de 100 ppm en manganeso
 Soluciones patrones o estándares

INTERPRETACIÓN DE DATOS
Longitud de onda de trabajo: 525 nm
Peso de muestra: 5 g
Volumen final: 50 mL
Blanco: agua destilada

1. Cálculo de error de la absorbancia o la concentración.

Concentración Absortividad
ABS
ppm Mn Media
6 0.245 0.0408
8 0.339 0.0424
10 0.419 0.0419
12 0.5 0.0417
14 0.578 0.0413
16 0.669 0.0418
PROMEDIO 0.0416

0.245
a 1=
a) ( 1cm)(
6 mg = 0.0408
)
L
0.339
a 2=
b) (1cm)(
6 mg = 0.0424
)
L
0.419
a 3=
c) (1 cm)(
6 mg = 0.0419
)
L
0.5
a 4=
d) (1 cm)(
6 mg = 0.0417
)
L

22
 0.578
a 5=
e) (1 cm)(
6 mg = 0.0413
)
L
0.669
a 6=
f) (1 cm)(
6 mg = 0.0418
)
L

Curva de calibración
0.8
0.7 0.67
0.6 f(x) = 0.04 x − 0 0.58
0.5 R² = 1 0.5
0.4 0.42
ABS

0.34
0.3
0.25
0.2
0.1
0
4 6 8 10 12 14 16 18
Concentración ppm mn

En esta curva se puede demostrar los valores de absorbancia con una tendencia a ser una
línea recta. En cuanto al R2 que es el coeficiente de determinación tiene un valor de 0.9992,
cercano a 1, podemos ver también los respectivos valores de absorbancia con respecto a las
concentraciones, dejando la ecuación de ajuste para la ley de Beer, la cual nos permite
calcular gráficamente la concentración de un analito.

N° Muestra mg Mn/%
1 11.29
2 11.06
3 11.78
4 11.29
5 11.53
6 11.1

23
 Gráfica de resultados
12
11.78
11.8

11.6 11.53

11.4
mg% Mn

11.29 11.29
11.2 11.1
11.06
11

10.8

10.6
1 2 3 4 5 6
Número de grupo

Se procedió a sacar el porcentaje en miligramo de manganeso dependiendo de cada grupo,

teniendo como mayor concentración el grupo 3 con 11.78 mg% y como menor
concentración al grupo 2 con 11.06 mg%.

Tabla de error absoluto

N° Muestra /x/ /A/ E Error

1 11.29 11.5 -0.21 Defecto
2 11.06 11.5 -0.44 Defecto
3 11.78 11.5 0.27 Exceso
4 11.29 11.5 -0.21 Defecto
5 11.53 11.5 0.03 Exceso
6 11.1 11.5 -0.4 Defecto

Tabla de error relativo

N° Muestra % Error relativo

1 1.83
2 3.91
3 2.43
4 1.83
5 0.26

24
 6 3.48

El mayor porcentaje de error relativo lo obtuvo el grupo 2 con un valor de 3.91%, mientras
que los demás valores fueron menores.

Media aritmética o promedio (M)

68.05
M= =11.34
6

Mediana

N° Muestra /X/
1 11.06
2 11.10
3 11.29
4 11.29
5 11.53
6 11.78

11.29+11.29
Me= =11.29
62
Rango o intervalo

R=11.78−11.06=0.72

Desviación absoluta

N° Muestra /x/ /M/ DA

1 11.06 11.34 0.28
2 11.10 11.34 0.24
3 11.29 11.34 0.05
4 11.29 11.34 0.05

25
 5 11.53 11.34 0.19
6 11.78 11.34 0.44

El dato número 6 es el que presenta mayor desviación absoluta, con un valor de 0.44, con lo
que podemos deducir que es un valor dudoso que puede ser rechazado debido a que es el
más lejano de todos.

DISCUSIÓN DE DATOS
En el experimento se usó la técnica de espectrofotometría. La técnica se basa en la absorción
de luz por parte de un cromóforo (especie química capaz de absorber luz). La determinación
cuantitativa del manganeso se basa en la ley de Beer-Lambert la cual establece que la
absorbencia es proporcional a la concentración del cromóforo. Se construyó una curva de
calibración con soluciones de concentración conocida del ion de permanganato y se
determinará los parámetros de la pendiente e intercepto por el método de cuadrados
mínimos para determinar la concentración del desconocido.

Las concentraciones que deseamos detectar son demasiado bajas, por lo que debemos
recurrir a técnicas especiales que requieren complementar el equipo con ciertos accesorios,
los cuales mejoran notablemente la sensibilidad del equipo.

CUESTIONARIO
1. ¿Qué métodos de trabajo conoce para determinar concentraciones de analitos en
espectrofotometría?
 Rayos X, ionizaciones de las moléculas
 Infrarrojo: deformación de enlaces químicos
 UV visible: transiciones electrónicas entre los orbitales atómicos y moleculares
 Radiofrecuencias: transiciones de espín electrónico o nuclear en los átomos de
la molécula

2. ¿Por qué en espectroscopía visible la solución debe presentar color natural o

formado con colorante cromóforo y cuáles son los factores para tomar en
consideración?
Porque la porción de la radiación UV y luz visible que se absorbe implica que una
porción de radiación electromagnética no se absorbe por la muestra y se transmite a
través de ella y se puede captar por la vista.

3. ¿Qué papel desempeña el reactivo peryodato de potasio y el ácido fosfórico?

Formule las reacciones químicas.

26
 Al calentarse, especialmente con óxido de manganeso (IV) como catalizador, se
descompone para formar yodato de potasio, KIO3, liberando oxígeno gaseoso.

El ácido fosfórico (a veces llamado ácido ortofosfórico) es un compuesto químico

ácido (más precisamente un compuesto ternario que pertenece a la categoría de los
oxácidos) de fórmula H3PO4.

4. ¿Cómo emplea la curva de calibración para determinar la concentración de un

analito?
Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se mide en
función de la concentración de un analito. Dicha calibración incluye la selección de
un modelo para estimar los parámetros que permitan determinar la linealidad de esa
curva. En el procedimiento se compara una propiedad del analito con la de los
estándares de concentración conocida de la muestra.

5. Un peso de 15 mg de muestra de un compuesto con peso molecular de 384.63 se

disuelve en un matraz volumétrico de 5 mL. Una alícuota de 1 mL se coloca en
un matraz de 10 mL y se diluye hasta la marca de enrase.
a. Halle la concentración de la muestra en el matraz de 5 mL.
7,80 x 10-3 M
b. Determine la concentración en el matraz de 10 mL.
7,80 x 10-4 M
c. La muestra de 10 mL se coloca en una celda de 0.5 cm y se obtiene una
absorbancia de 0.634 a 495 nm. Determinar la absortividad molar a dicha
longitud de onda.
1625,64 M-1.cm-1

BIBLIOGRAFÍA
1. SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA ANALÍTICA. StuDocu. (2017).
Retrieved 17 November 2020, from
https://www.studocu.com/pe/document/universidad-catolica-de-santa-
maria/bioquimica/ensayos/espectrofotometria-del-visible/7667001/view.

27
 PRÁCTICA N° 04
“ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE”
ANÁLISIS DE HIERRO

OBJETIVOS
 Preparar las soluciones stock, madre y patrones
 Construir una curva de absorción y de calibrado
 Seleccionar la longitud de onda de trabajo y verificar la ley Beer
 Analizar el contenido de hierro en un alimento
 Evaluar estadísticamente los resultados obtenidos

GENERALIDADES
Gran cantidad de iones inorgánicos que presentan color en solución acuosa absorben
suficiente energía radiante en la región visible, lo que permite su determinación
espectrofotométrica directa, incluso en muy bajas concentraciones. Pero no todos los iones
metálicos presentan color propio, y otros tienen poco color.

Los colores de muchos cationes se pueden intensificar por formación de compuestos

complejos al hacerlo reaccionar con determinados reactivos denominados cromóforos.
Muchos reactivos que producen color han sido empleados para la determinación de hierro,
en algunos se efectúa la determinación directa de hierro (III), mientras en otros se aprovecha
la formación de complejos muy coloreados entre hierro (II) y diversos ligandos orgánicos.

Entre los diversos reactivos más importantes para la determinación espectrofotométrica del
hierro figuran el reactivo 1, 10 fenantrolina y sus análogos como el 4, 7 difenil 1, 10
fenantrolina (batofenantrolina).

Las lentejas son legumbres originarias de sía, poseen alto valor energético, es un alimento
rico en proteínas, son fuentes de hidratos de carbono, tiene poca cantidad de grasas, son
ricas en fibra, lo que ayuda a combatir el estreñimiento, son fuentes de hierro evitando la
aparición de anemias, son ricas en potasio para el buen funcionamiento del sistema nervioso
y reduce el nivel de azúcar en la sangre, lo que ayuda entre quienes padecen de diabetes.

28
Cada 100 gramos de lentejas contienen:

Proteínas 23.8 g

Hidratos de carbono 54.00 g

Fibra 11.7 g
Zinc 3.1 mg
Potasio 737 mg
Fósforo 240 mg
Hierro 9 mg

El método de la fenantrolina consiste en reducir el hierro al estado ferroso con el reactivo

orgánico cloruro de hidroxilamina en un medio ácido ajustado a más o menos 3.5, con
solución buffer, en estas condiciones se agrega el reactivo complejante 1, 10 fenantrolina;
formándose un compuesto complejo de fierro fenantrolina de color rojo naranja, y que es
medido luego espectrofotométricamente a una longitud de onda de 510 nm. La formación
cuantitativa del complejo se observa en el margen de pH comprendido entre 3 y 9 pero se
recomienda un pH próximo a 4 para evitar la precipitación de diversas sales de hierro.

ARREGLO EXPERIMENTAL

APARATOS
 Espectrofotómetro: Shimadzu 160-A
29
  Cubeta: 1 cm de trayecto óptico
 Región de trabajo: espectro visible
 Longitud de onda: 510 nm
 Blanco: solución de reactivos y disolvente menos hierro

REACTIVOS
 Solución de hidroxiamina: Disolver 10 g de reactivo en 100 mL de agua destilada.
 Solución buffer: Disolver 250 g de acetato de amonio en 150 mL de agua destilada,
añadir 700 mL de ácido acético glacial.
 Solución de fenantrolina: Disolver 0.25 g de 1, 10 fenantrolina monohidratada en 100
mL de agua destilada, agitando y calentando a 80°C. Se evita el calentamiento si se
añade 2 gotas de ácido clorhídrico en el agua destilada.
 Solución stock de hierro: La solución se prepara a partir del sulfato ferroso
amoniacal [FeSO4 (NH4)2SO4.6H2O]. Para ello se disuelve 0.7020 gramos del
reactivo, calidad analítica, en 50 ml de agua destilada y 1 ml de ácido sulfúrico
concentrado, pasar a una fiola en un litro, diluir exactamente hasta el enrase y
homogenice.

INTERPRETACIÓN DE DATOS

Longitud de
Absorbancia
onda
450 0.078
460 0.09
470 0.126
480 0.144
490 0.18
500 0.204
510 0.216
520 0.205
530 0.19
540 0.17
550 0.14
560 0.11
570 0.09
580 0.08
590 0.065
600 0.062

30
 Espectro de absorción
0.25
0.22
0.2 0.21
0.19
0.2 0.18
0.17
0.14 0.14
0.15
absorbancia

f(x) =0.13
− 0 x + 0.33
R² = 0.11 0.11
0.09 0.09
0.1 0.08 0.08
0.070.06

0.05

0
400 450 500 550 600 650

Longitud de onda

Como se puede observar en la gráfica del espectro de absorción, el mayor pico se genera a
una longitud de onda de 510, con 0.216 nm, es en donde se produce una mayor absorbancia
de la muestra.

N° Muestra Concentración mg/mL Fe ABS

1 0.001 0.215
2 0.002 0.354
3 0.003 0.507
4 0.004 0.678

Por otro lado, obtenemos la tabla de medición de las soluciones patrones, con los datos de la
concentración y la absorbancia obtenida para realizar la curva de calibración respectiva.

Curva de calibración
0.8
0.68
0.7
0.6 f(x) = 154.2 x + 0.05
R² = 1 0.51
0.5
absorbancia

0.4 0.35

0.3 0.22
0.2
0.1
0
0 0 0 0 0 0 0 0 0
concentracion Fe

31
Obtenemos la ecuación de ajuste, en donde podemos hallar los datos que necesitemos, como
la absorbancia de la muestra a una concentración específica, de tal forma queda demostrada
la ley de Beer.

Cuadro de absortividades de patrones

Concentración ppm Fe ABS Absortividad Media

0.001 0.215 215.0000
0.002 0.354 177.0000
0.003 0.507 169.0000
0.004 0.678 169.5000
182.6250

Tabla de resultados del análisis de muestra

N° Muestra mg/%Fe
1 9.24
2 9.22
3 9.28
4 9.29
5 9.24
6 9.22

TABLA DE RESULTADOS mg/%Fe

9.3 9.29
9.28
9.28

9.26
9.24 9.24
mg/%Fe

9.24
9.22 9.22
9.22

9.2

9.18
1 2 3 4 5 6

N° muestra

32
Con ayuda de los datos de la concentración por mg/% de Fe, se pudo realizar la tabla de
resultados en donde se ve qué muestra presenta la mayor concentración, la cual sería la
número 4, mientras que la muestra con una menor concentración fue la del grupo 2 y 6.

DISCUSIÓN DE DATOS
En la espectrofotometría de emisión de llama, la muestra en solución es nebulizada e
introducida dentro de la llama, en donde es de solvatada, vaporizada y atomizada, todo esto
en rápida sucesión. Subsecuentemente, los átomos y las moléculas se elevan a estados
excitados por colisiones térmicas con los constituyentes de los componentes de la llama
parcialmente quemados. Durante su regreso a un estado electrónico basal o más bajo, los
átomos y moléculas emiten la radicación característica de los componentes de esa muestra.

La luz emitida pasa por un monocromador que aísla la longitud de onda específica para el
análisis deseado. Un fotodetector mide la potencia radiante de la radiación seleccionada, que
entonces es amplificada y enviada a un dispositivo de lectura: medidor, registrador o sistema
con microcomputadora.

CUESTIONARIO
1. Efectúe la reacción entre el hierro (II) y el reactivo fenantrolina.

2. Para qué sirve el blanco y cómo está constituido en la determinación de hierro

por el método de la fenantrolina.
La base para lo que los químicos llaman análisis colorimétrico es la variación en la
intensidad del color de una solución con cambios en la concentración. El color puede
deberse a una propiedad inherente del constituyente mismo –por ejemplo, MnO4 - es
púrpura- o puede deberse a la formación de un compuesto colorido como
consecuencia de la adición de un reactivo adecuado. Comparando la intensidad del
color de una solución de concentración desconocida con las intensidades de
soluciones de concentraciones conocidas, se puede determinar la concentración de
una solución desconocida. Se analizará para hierro en este experimento permitiendo
al hierro (II) reaccionar con un compuesto orgánico (o-fenantrolina) para formar un
complejo de hierro rojo-naranja.
33
3. Si una muestra contiene hierro (II) y hierro (III), diseñe una técnica mediante un
diagrama de bloques para analizar estos componentes por separado.

4. ¿Qué tipos de interferencia puede presentar en un análisis espectrofotométrico?

 Interferencias espectrales: Aparecen cuando un átomo distinto de aquel que
se va a medir absorbe parte de la radiación incidente sobre la muestra. Pueden
presentarse al utilizar una lámpara multi elemento que posee dos líneas de
emisión muy próximas que correspondan a dos elementos diferentes. La
interferencia puede ser eliminada utilizando una lámpara de un único elemento.
 Interferencias de absorción inespecíficas: Ocurren cuando ciertas partículas
formadas en la llama desvían la trayectoria de la radiación incidente
produciendo una señal aparente de absorción. Se producen también como
resultado de la formación de algunas especies moleculares que puedan
absorber radiación.
 Interferencias de ionización: Tienen lugar al medir un elemento fácilmente
ionizable a la temperatura de la llama utilizada. El grado de la ionización
depende de la concentración y de la presencia en la muestra de otros átomos
fácilmente ionizables que ejerzan un efecto de tampón sobre el medio. La
interferencia puede ser controlada añadiendo a muestras y patrones la sal de un
metal alcalino.

34
  Interferencias físicas: Aparecen cuando existen diferencias en las propiedades
físicas (viscosidad, tensión superficial, etc.) de las disoluciones de muestras y
patrones de calibración. Se reducen las interferencias si se consiguen igualar
las características de las matrices de dichas disoluciones
 Interferencias químicas: Ocurren cuando el elemento a medir se combina con
otras especies presentes en la llama, disminuyendo el número de átomos en
estado elemental. Este tipo de interferencias puede ser controlado utilizando
una llama que produzca una mayor temperatura o bien añadiendo a muestras y
patrones algún otro compuesto que inhiba la reacción entre el metal y sus
interferentes.

5. ¿Qué otros métodos espectroscópicos del visible se conocen para la

determinación de hierro?, señale sus fundamentos brevemente.
 Absorción atómica
 Emisión por plasma de acoplamiento inductivo
 Masas por plasma de acoplamiento inductivo

BIBLIOGRAFÍA
1. SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA ANALÍTICA. StuDocu. (2017).
Retrieved 17 November 2020, from
https://www.studocu.com/pe/document/universidad-catolica-de-santa-
maria/bioquimica/ensayos/espectrofotometria-del-visible/7667001/view.

35