Laboratorio de Análisis Instrumental Practica.N°1.

Análisis por espectrofotometría visible

1. Fundamento del método

En análisis de rutina se efectúan multitud de medidas a longitud de onda fija con fotómetros
simples que emplean filtros de interferencia intercambiables o monocromadores simples. La
medida de la absorbancia exige una comparación a la misma longitud de onda de la señal de la
fuente, antes y después de atravesar la disolución de la muestra.
Trabajamos con el espectrofotómetro Genesys 20 .Para ello se colocan consecutivamente en el
trayecto óptico una referencia que corresponde al disolvente solo o a una disolución que
contiene los reactivos del ensayo (pero sin el compuesto a analizar, es el blanco analítico), y
posteriormente la disolución preparada a partir de la muestra de concentración conocida
(patrones).
Experimentalmente se comienza por el establecimiento de una curva de calibrado A=f(C), a
partir de disoluciones de concentraciones conocidas del analito, sometidas al mismo tratamiento
que la muestra. Esta curva, frecuentemente ajustada a una línea recta para disoluciones diluidas,
permite deducir la concentración de la disolución problema o desconocida; en este caso
deduciremos la concentración de manganeso (Mn) que hay en el acero.
Estos instrumentos pueden disponer de una compensación electrónica de diferencia de
intensidad de la fuente conocida con el nombre de divisor de haz. Una parte de la luz se desvía
antes.

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2. Procedimiento experimental

EQUIPOS Y MATERIALES
 01 Balanza analítica
 01 Espectrofotómetro visible
Genesys 20
 06 Celdas de vidrio
 05 Fiolas de 100 mL
 01 Fiola de 250mL
 01 Fiola de 25mL
 01 Pipeta volumétrica de 10mL
 01 Pipeta volumétrica de 5mL
 01 Pipeta volumétrica de 2mL
 01 Pipeta volumétrica de 1ml
 06 Lun de reloj
 01 Espátula
 06 Vasos de 250mL
 01 Probeta de 10mL
 01 Bagueta
 05 Pizeta Figura 1.Espectrofotometro Genesys 20
 01 Gradilla plastificada para celdas
 05 Propipetas
 01 Pinza para vasos

REACTIVOS

 𝐶𝑜𝐶𝑙2 . 6𝐻2 𝑂 ∶ 2,2000𝑔 𝑒𝑛 100 𝑚𝐿 𝑒𝑛 𝐻𝐶𝑙 1%

 Ácido clorhídrico conc. P.a
 Mezcla de ácidos: Mezclar en partes iguales ácido nítrico(reactivo controlado), ácido
fosfórico y agua(40ml de cada uno )
 Sal de Mohr
 Peryodato de potasio (𝐾𝐼𝑂4 ) Q.P
 𝑀𝑛𝑆𝑂4 . 𝐻2 𝑂 Q.P

Figura 2.Reactivo con el analito en interés.

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A) Calibración del espectrofotómetro con 𝑪𝒐𝑪𝒍𝟐en HCl al 1%

Trazar el grafico con las lecturas de absorbancia y sus respectivas longitudes de onda.
Determinar 𝜆𝑚𝑎𝑥 del 𝐶𝑜𝐶𝑙2 .6𝐻2 𝑂

Colocar la solución de CoCl2 preparado en HCl al 1%

en una celda y la solución de HCl al 1% en la celda
de referencia como BLANCO. Secar las celdas con
papel tisú.

HCl CoCl2

Primero insertar el
blanco (HCl) realizar las
lecturas de A de la
solución de 𝐶𝑜𝐶𝑙2 en el
rango de 𝜆 entre 450-700
nm cada 10 nm de
intervalo

B) Determinación del 𝝀 máx. del 𝑲𝑴𝒏𝑶𝟒

Trazar la gráfica de A en función de la longitud de onda. Determinar 𝜆𝑚𝑎𝑥 del 𝐾𝑀𝑛𝑂4

y mantener equipo con esta 𝜆𝑚𝑎𝑥 .

Obtener la curva de
absorción máxima con el
patrón 2, usando el blanco
para ajustar a 0 A. Efectuar
en el rango 480-550nm
variando cada 10 nm.

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C) Determinación cuantitativa de manganeso en acero

1. Preparar solución madre o solución patrón de manganeso

Pesar 0.1540 g de
MnSO4.H2O y enrasar a
una fiola de 250mL.

2. Preparación de patrones y blanco reactivo

Patrón Patrón Patrón Blanco

1 2 3 Reactivo

+ 0.2 g Sal de Mohr

+ 20 ml de mezcla de ácidos
+ 𝜑 (calentamiento)

+ Solución
madre

2 ml 5 ml 10 ml

Retirar de la plancha los

cuatro vasos

+ 0.1 g 𝑲𝑰𝑶𝟒

+ Calentamiento (3´)

Enrasar a fiolas de
100 ml

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Figura 3.Patrones preparados.

3. Preparación de la muestra problema

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3. Datos experimentales

i) Calibración del espectrofotómetro

A 𝝀(NM)
0.389 450
0.517 460
0.611 470
0.693 480
0.755 490
0.838 500
0.895 510
0.865 520
0.755 530
0.588 540
0.423 550
0.273 560
0.174 570
0.116 580
0.091 590
0.076 600
0.072 610
0.064 620
0.063 630
0.058 640
0.055 650
0.042 660
0.041 670
0.039 680
0.031 690
0.026 700

ii) Determinación del 𝝀𝒎𝒂𝒙 del KMnO4

A 𝝀(NM)
0.030 450
0.015 460
0.031 470
0.037 480
0.054 490
0.076 500
0.094 510
0.110 520
0.117 530
0.111 540
0.110 550

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iii) Determinación de las absorbancias de los patrones y la muestra

a 𝝀𝒎𝒂𝒙 = 𝟓𝟑𝟎𝒏𝒎

A [𝑴𝒏] PPM
PATRÓN 1 0.026 4.008
PATRÓN 2 0.117 10.02
PATRÓN 2 0.293 20.04
MUESTRA 0.122

4. Cálculos

𝑊𝑀𝑛𝑆𝑂4. 𝐻2 𝑂 = 0.1540 𝑔
𝑔
𝑃𝑀𝑀𝑛𝑆𝑂4. 𝐻2 𝑂 = 169
𝑚𝑜𝑙
𝑃𝑀𝑀𝑛 = 55 𝑔/𝑚𝑜𝑙

i) Primero calculamos la concentración en ppm de la solución madre:

55 𝑔 𝑀𝑛
0.1540 𝑔 𝑀𝑛𝑆𝑂4. 𝐻2 𝑂 𝑥 = 0.0501 𝑔 𝑀𝑛
169 𝑔 𝑀𝑛𝑆𝑂4. 𝐻2 𝑂
𝑊𝑀𝑛 (𝑚𝑔) 50.1 𝑚𝑔
[𝑀𝑛] = = = 200.4 𝑝𝑝𝑚
𝑉𝑠𝑜𝑙 (𝐿) 0.25 𝐿

ii) Calculamos las concentraciones de cada patrón:

Patrón 1
200.4 𝑚𝑔 𝑀𝑛
2 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙. 𝑀𝑛𝑆𝑂4. 𝐻2 𝑂 𝑥 = 0.4008 𝑚𝑔 𝑀𝑛
1000 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙. 𝑀𝑛𝑆𝑂4. 𝐻2 𝑂
𝑊𝑀𝑛 𝑃1 (𝑚𝑔) 0.4008 𝑔 𝑀𝑛
[𝑀𝑛]𝑃1 = = = 4.008 𝑝𝑝𝑚
𝑉𝑠𝑜𝑙 𝑃1 (𝐿) 0.1𝐿
[𝑀𝑛]𝑃1 = 4.008 𝑝𝑝𝑚
Patrón 2
200.4 𝑚𝑔 𝑀𝑛
5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙. 𝑀𝑛𝑆𝑂4. 𝐻2 𝑂 𝑥 = 1.002 𝑚𝑔 𝑀𝑛
1000 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙. 𝑀𝑛𝑆𝑂4. 𝐻2 𝑂
𝑊𝑀𝑛 𝑃2 (𝑚𝑔) 1.002 𝑔 𝑀𝑛
[𝑀𝑛]𝑃2 = = = 10.02 𝑝𝑝𝑚
𝑉𝑠𝑜𝑙 𝑃2 (𝐿) 0.1𝐿
[𝑀𝑛]𝑃2 = 10.02 𝑝𝑝𝑚
Patrón 3
200.4 𝑚𝑔 𝑀𝑛
10 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙. 𝑀𝑛𝑆𝑂4. 𝐻2 𝑂 𝑥 = 2.004 𝑚𝑔 𝑀𝑛
1000 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙. 𝑀𝑛𝑆𝑂4. 𝐻2 𝑂
𝑊𝑀𝑛 𝑃3 (𝑚𝑔) 2.004 𝑔 𝑀𝑛
[𝑀𝑛]𝑃3 = = = 10.02 𝑝𝑝𝑚
𝑉𝑠𝑜𝑙 𝑃3 (𝐿) 0.1𝐿
[𝑀𝑛]𝑃3 = 20.04 𝑝𝑝𝑚

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5. Resultados

Grafico1. 𝜆 vs. A
1

0.9

0.8

0.7
ABSORBANCIA

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 100 200 300 400 500 600 700 800

LONGITUD DE ONDA

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6. Conclusiones

 Los análisis cuantitativos se realizan evaluando absorbancias de soluciones estándares

de diferentes concentraciones a una longitud de onda constante (máxima) en donde este
compuesto absorbe una cantidad mayor de energía el cual puede ser medida por
espectrofotómetro y posteriormente conocer la concentración de alguna muestra
problema.

 La espectrofotometría de UV-Visible nos permite identificar sustancias químicas

(análisis cualitativo) y determinar su concentración (análisis cuantitativo).

 La ley de Beer aplica solo para concentraciones del analito diluidas, pues a mayores
concentraciones las distancias entre las moléculas disminuyen y empiezan a afectarse
electrostáticamente con lo que empieza a afectar su capacidad de absorción.

 Mediante la espectrofotometría en la región visible es posible determinar la

concentración del Mn para lo cual hay que oxidar al analito hasta la valencia 7 donde el
ion al estado de permanganato toma el color purpura, estado en el cual se aplica la
absorción.

 El ion permanganato presenta una mayor absorbancia de a energía radiante en espectro

correspondiente 530 nm, el cual se toma como la longitud de onda óptima para la
determinación de Mn.

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Contenido

1. Fundamento del método ........................................................................................................ 1

2. Procedimiento experimental ................................................................................................. 2
3. Datos experimentales ............................................................................................................ 6
4. Cálculos................................................................................................................................. 7
5. Resultados ............................................................................................................................. 8
6. Conclusiones ......................................................................................................................... 9

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