Colestat

C enzimático AA
Método enzimático para la determinación de colesterol
en suero o plasma

SIGNIFICACION CLINICA PRECAUCIONES

La determinación de colesterol en forma aislada tiene utilidad Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".
diagnóstica limitada. Sin embargo, su concentración varía Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
de manera más o menos predecible en un gran número de de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos.
condiciones clínicas. Se ha visto que el colesterol es uno Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
de los factores contribuyentes a la formación de ateromas acuerdo a la normativa local vigente.
dado que las complicaciones arterioscleróticas prevalecen
en individuos hiper­colesterolémicos. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
Diversos estudios epidemiológicos han permitido observar ALMACENAMIENTO
además, que el riesgo de contraer enfermedad cardíaca Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC)
coronaria (ECC) para los individuos varones de más de 40 hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
años con colesterolemia menor o igual a 2,10 g/l es 3 veces Reactivo de Trabajo: en refrigerador (2-10oC) es estable 60
menor que entre individuos con más de 2,30 g/l y 6 veces días a partir del momento de su preparación.
menor que entre individuos con más de 2,60 g/l.
INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
FUNDAMENTOS DEL METODO REACTIVOS
La secuencia reaccional es la siguiente: Lecturas del Blanco superiores a 0,160 D.O. son indicio de
CHE deterioro de los reactivos. En tal caso desechar.
ésteres del colesterol colesterol + ácidos grasos
CHOD MUESTRA
colesterol + O2 colesten-3-ona + H2O2 Suero o plasma
POD a) Recolección: se debe obtener de la manera usual.
H2O2 + 4-AF + aceptor quinonimina roja b)  Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea
plasma, se recomienda únicamente el uso de heparina como
REACTIVOS PROVISTOS anticoagulante para su obtención.
S. Standard: solución de colesterol 2 g/l. Ver LIMITACIONES c) Sustancias interferentes conocidas:
DEL PROCEDIMIENTO. - Excepto la heparina, los anticoagulantes comunes interfie-
A Reactivo A: viales con colesterol esterasa (CHE), colesterol ren en la determinación.
oxidasa (CHOD), peroxidasa (POD) y 4-aminofenazona (4-AF). - Los sueros con hemólisis visible o intensa producen valores
B. Reactivo B: solución de buffer Good pH 6,8, conteniendo falsamente aumentados por lo que no deben ser usados.
fenol y colato de sodio. - No se observan interferencias por bilirrubina hasta 80 mg/l,
Concentraciones finales ácido ascórbico hasta 75 mg/l, ácido úrico hasta 200 mg/l,
CHE........................................................................ ≥100 U/l ni hemólisis ligera.
CHOD.................................................................... ≥ 100 U/l Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
POD..................................................................... ≥ 1000 U/l drogas en el presente método.
4-AF..................................................................... 0,2 mmol/l d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el coles-
Good........................................................ 50 mmol/l; pH 6,8 terol en suero es estable por lo menos 1 semana en refrigerador
Fenol.................................................................... 15 mmol/l y 2 meses en congelador, sin agregado de conservantes.
Colato de sodio................................................... 0,2 mmol/l
MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
REACTIVOS NO PROVISTOS - Espectrofotómetro.
Calibrador A plus de Wiener lab. - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
- Tubos o cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.
INSTRUCCIONES PARA SU USO - Baño de agua a 37oC.
Reactivo de Trabajo: reconstituir el contenido de un vial de - Reloj o timer.
Reactivo A con una parte de Reactivo B. Transferir al frasco
de Reactivo B, enjuagando varias veces el vial con el mismo. CONDICIONES DE REACCION
Mezclar hasta disolución completa. Homogeneizar y fechar. - Longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro o en foto­

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 co­lo­rímetro con filtro verde (490-530 nm). - Los reductores disminuyen la respuesta de color mientras
- Temperatura de reacción: 37oC que los oxidantes colorean el Reactivo aumentando los
- Tiempo de reacción: 5 minutos Blancos.
- Volumen de muestra: 10 ul - Los detergentes, metales pesados y cianuros son inhibi-
- Volumen de Reactivo de Trabajo: 1 ml dores enzimáticos.
- Volumen final de reacción: 1,01 ml - No emplear el Standard en analizador automático debido
Los volúmenes de Muestra y Reactivo pueden variarse a la distinta tensión superficial con respecto al suero, dada
proporcionalmente (Ej.: 20 ul de Muestra + 2 ml de Reactivo por el disolvente empleado en su preparación.
de Trabajo o 50 ul + 5 ml).
PERFORMANCE
a) Reproducibilidad: procesando replicados de las mismas
PROCEDIMIENTO muestras en 10 días diferentes, se obtuvo:
En tres tubos o cubetas espec­trofo­tométricas marcadas
Nivel D.S. C.V.
B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar:
1,24 g/l ± 0,043 g/l 3,49 %
B S D 3,31 g/l ± 0,115 g/l 3,48 %
Standard - 10 ul - b) Recuperación: agregando cantidades conocidas de co-
Muestra - - 10 ul lesterol a distintos sueros, se obtuvo una recuperación entre
98 y 101%, para todo nivel de colesterol entre 1,90 y 4,79 g/l.
Reactivo de Trabajo 1 ml 1 ml 1 ml c) Límite de detección: depende del fotómetro empleado.
Incubar 5 minutos en baño de agua a 37oC o 20 minutos a Para una lectura de 0,001 D.O., el cambio mínimo de con-
temperatura ambiente (25oC). Leer en espectrofotómetro a centración detectable será aproximadamente de 0,0063 g/l.
505 nm o en fotocolorímetro con filtro verde (490-530 nm), d) Linealidad: la reacción es lineal hasta 5 g/l. Para valores
llevando el aparato a cero con el Blanco. superiores, diluir 1/2 con el Blanco y repetir la lectura multi-
plicando el resultado final por 2.

ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS

El color de reacción final es estable 30 minutos, por lo que la Para las instrucciones de programación debe consultarse el
absorbancia debe ser leída dentro de este lapso. Manual del Usuario del Analizador en uso. Para la calibra-
ción debe emplearse Calibrador A plus de Wiener lab., de
CALCULO DE LOS RESULTADOS acuerdo a los requerimientos del analizador.

2,00 g/l PRESENTACION

colesterol (g/l) = D x f donde f = - 1 x 100 ml (Cód. 1220110).
S - 4 x 100 ml (Cód. 1220001).
Empleando los reactivos Colestat enzimático AA junto con
CONVERSION DE UNIDADES
HDL Colesterol Reactivo Precipitante, HDL Colesterol FT
colesterol (g/l) = colesterol (mg/dl) x 0,01
y LDL Colesterol Reactivo Precipitante (provistos separa-
colesterol (mmol/l) = colesterol (g/l) x 2,59
damente por Wiener lab.) es posible determinar el colesterol
colesterol (g/l) = colesterol (mmol/l) x 0,39
ligado a las lipoproteínas de alta densidad (HDL colesterol) y
a las lipoproteínas de baja densidad (LDL colesterol).
METODO DE CONTROL DE CALIDAD
Procesar 2 niveles de un material de control de calidad
BIBLIOGRAFIA
(Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas
- Abell, L.L. et al. - J. Biol. Chem. 195:357 (1952).
de colesterol, con cada determinación.
- Allain, C.C. et al.. - Clin. Chem. 20:470 (1974).
- American Health Foundation - Position statement on diet
VALORES DE REFERENCIA
and coronary heart disease - pág. 255 (1972).
El panel de expertos del National Cholesterol Education
- I.F.C.C. - Clin. Chim. Acta 87/3:459 F (1978).
Pro-gram (NCEP) provee los siguientes valores de co-
- Trinder, P. - Ann. Clin. Biochem. 6/24 (1969).
lesterol:
- Coniglio R.I. - Acta Bioq. Clin. Latinoam. XXIII/2:201 (1989).
Deseable: < 2,00 g/l - Expert Panel of National Cholesterol Education Program -
Moderadamente alto: 2,00 - 2,39 g/l JAMA 285/19:2486 (2001).
Elevado: ≥ 2,40 g/l - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
No obstante, se recomienda que cada laboratorio establezca AACC Press, 4th ed., 2001.
sus propios intervalos o valores de referencia.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.

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Símbolos
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.

C
Este producto cumple con los requerimientos
previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
M Elaborado por:

P
Xn

Representante autorizado en la Comunidad

Europea Nocivo

V Uso diagnóstico "in vitro"

Corrosivo / Caústico

X Contenido suficiente para <n> ensayos

Xi

Irritante

H Fecha de caducidad

i Consultar instrucciones de uso

l Límite de temperatura (conservar a)

 No congelar
Calibr. Calibrador

b Control

F Riesgo biológico

Volumen después de la reconstitución

b Control Positivo

Cont. Contenido c Control Negativo

g Número de lote h Número de catálogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina

Wiener lab.
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Cert. Nº: 2086/97 2000 Rosario - Argentina
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