ESPECTROSCOPÍA REGIÓN VISIBLE

DETERMINACIÓN DEL pKa DEL AZUL DEL BROMOTIMOL

LABORATORIO QUÍMICA ANALÍTICA

NRC: 41551

MARTES 7am-10am

ESTUDIANTES

DIANA CAROLINA CAMARGO CASTRO

ID: 000221735

MARIO LONGANO SÁNCHEZ

ID: 000277239

DOCENTE

BEATRIZ ELENA GÓMEZ HOYOS

UNIVERSIDAD PONTIFICIA BOLIVARIANA

FACULTAD INGENIERÍA QUÍMICA

MEDELLÍN

4-04-17

1
 OBJETIVOS

 Determinar el pKa de un indicador (Azul de Bromotimol) utilizando la

espectrofotometría región visible.
 Elaborar los espectros de absorción del indicador a pH bajo, y alto y determinar la
longitud de onda adecuada para las lecturas de absorbancia de las diferentes
soluciones.
 Calcular el pKa del Azul de Bromotimol utilizando métodos equivalentes de
análisis: método algebraico y método y gráfico.

MARCO TEÓRICO

Si bien sabemos para medir la absorbancia se utiliza espectroscopia visible. La

espectroscopia o espectrofotometría es un método instrumental de la Química Analítica
utilizada para la medición de la cantidad de energía absorbida por una sustancia, en función
de la longitud de onda de la radiación que incide sobre ésta o para mediciones de absorción
que se hacen a una longitud de onda determinada. Para determinar la longitud de onda
característica del analito debe construirse un espectro de absorción, el cual corresponde a
una gráfica de Absorbancia vs. Longitud de onda. En el espectrofotómetro, se indica el rango
de longitudes de onda correspondientes al espectro visible y éste realiza un barrido midiendo
absorbancia en cada una de las longitudes de onda. Para construir el espectro de absorción
se puede usar cualquier solución estándar del analito. Cuando se tengan entonces los
espectros de absorción de cada uno de los analitos, éstos son superpuestos para verificar si
hay interferencia espectral entre ellos. Para ello, se sobreponen los gráficos y se verifica si a
la longitud de onda característica de cada uno, el otro está absorbiendo radiación. Esto
también puede verificarse por medio de las mediciones de absorbancia posteriores; si se
determina la absorbancia de las soluciones de pH extremo en ambas longitudes de onda y
en las dos absorbe, entonces se puede afirmar que hay interferencia entre los dos.

Hay sustancias que se caracterizan por presentar dos colores en sus formas ácido- base
conjugada las cuales permiten determinar si una solución es de naturaleza ácida o básica y
que igualmente permiten determinar, por ejemplo, el punto final de una valoración (titulación)
ácido-base. Estas sustancias reciben el nombre de indicadores. Diversas sustancias de
origen orgánico que tienen la propiedad de cambiar su color, se conocen desde la
Antigüedad.
2
Los colores que puede presentar un indicador varían entre su forma ácida (Hln) y la forma
básica (ln-); tal es el caso de los colores amarillo y azul que presenta el indicador conocido
como Azul de Bromotimol, la cual es un compuesto químico derivado del trifenilmetano. Se
utiliza para detectar el pH. A pesar de su nombre, el azul de bromotimol puede adoptar
diferentes colores. Puede ser de color amarillo o fucsia (sobre una solución ácida) y verde o
azul (en una solución básica). El azul de bromotimol se utiliza para determinar el pH, pero
también para analizar sus modificaciones. El cambio de color se debe a un cambio
estructural inducido por la protonación o desprotonación de la especie. Los indicadores
ácido- base tienen un intervalo de viraje de unas dos unidades de pH, en la que cambian la
disolución en la que se encuentran de un color a otro, o bien, de una disolución incolora, a
una coloreada.

La determinación Espectrofotométrica de pKa Mediante medidas espectrofotométricas se

determinan las concentraciones de la forma asociada y de la disociada de una sustancia
sobre la base de que -1- ambas formas obedecen la ley de Lambert-Beer y -2- que las
concentraciones de las mismas son determinables, ya sea porque absorben a diferentes
longitudes de onda o bien porque se cumple la condición de aditividad. La determinación se
realiza a un pH tal que ambas formas se encuentren en concentraciones apreciables, esto
es, a un pH próximo al pKa de la sustancia o, lo que es lo mismo, grado de disociación
cercano al 50%.

En una solución acuosa un indicador ácido presenta un equilibrio entre su forma ácida, HIn, y
su forma básica, In-:
−¿¿

Hln=H +¿+ ln ¿

Si usamos concentraciones en lugar de actividades, la expresión para la constante de

equilibrio para la reacción es

Ka=¿ ¿

Y su forma logarítmica es

[Hln ]
pKa= pH +log ¿¿ ¿ (1)

3
La forma ácida del indicador tiene un color, tal como el amarillo, con su correspondiente λ max
a una longitud de onda, y la forma básica tiene otro color, tal como el azul, con su
correspondiente λmax a una longitud de onda diferente. Si la longitud de la trayectoria de la
celda se mantiene constante y todas las soluciones contienen la misma molaridad total del
indicador, el cociente ácido-base a la λmax de ya sea la forma ácida o básica viene dado por:

[ Hln] (2)
¿¿¿

En esta ecuación A es la absorbancia de cada solución a cierto pH, comprendido dentro del
rango de pH en el cual el indicador cambia de color, medida a cualquiera de las dos λmax
anteriormente encontradas. Por tanto, al reemplazar la ecuación 2 en la 1 se obtiene:

A− A sln fuertemente básica

pKa= pH +log (3)
A sln fuertemente ácida− A

Es decir:

A− A sln fuertemente básica

pKa− pH=log (4)
A sln fuertemente ácida− A

El pKa de un indicador (Azul de Bromotimol) se puede determinar por dos métodos

equivalentes, un método algebraico o un método gráfico. En el método algebraico, conjuntos
de pH y valores de absorbencias se sustituyen en la ecn. 3 y se calcula el pKa para cada
conjunto. El pKa reportado es el promedio de los pKa’s calculados. El método gráfico, se
grafica por medio de la ecn. 4.

(Guías teórico-prácticas de laboratorio UPB)

PROCEDIMIENTO Y DATOS EXPERIMENTALES

Lavar adecuadamente la vidriería a utilizar, rotularlas para tener un buen orden y por ende se
procede a seguir detenidamente los siguientes pasos.

1. ESPECTROS DE ABSORCIÓN DE LAS DOS FORMAS COLOREADAS DEL

INDICADOR

Se preparan las siguientes soluciones en matraces de 50 ml y se aforan adecuadamente con

agua destilada:

4
 SOLUCIÓN INDICADOR HCL 12M NaOH 4M
Fuertemente ÁCIDA 1 ml 8 gotas ----
Fuertemente
1 ml ---- 24 gotas
BÁSICA
Tabla 1. Preparación de las soluciones fuertemente Ácida y fuertemente Básica

Determinar el espectro de absorción de las soluciones anteriores, es decir, se realiza la línea

base o línea cero para el espectrofotómetro ultra-violeta visible. Esta calibración se hace
ubicando la celda de vidrio que contiene agua destilada, en la posición “B”. Posterior a esto,
se selecciona cada una de las soluciones y se programa el equipo para que haga un
“barrido” de longitudes de onda entre 380 y 780nm. Partiendo de las gráficas de los
espectros de absorción para las soluciones: fuertemente ácida (HCl 12M) y fuertemente
básica (NaOH 4M), se elige la longitud de onda donde se obtiene el mayor valor de
absorbancia. Obteniendo los siguientes datos

SOLUCIÓN LONGITUD DE ONDA λ(nm) ABSORBANCIA (A)

Fuertemente ÁCIDA 433 2,16
Fuertemente 0,937
617
BÁSICA
Tabla 2. Longitudes de onda para la fuertemente ácida y fuertemente básica

Imagen 1. Punto isosbésticos de las soluciones fuertemente ácida y fuertemente básica

5
 2. PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES BUFFERS DEL INDICADOR

Se preparan las siguientes soluciones y se aforan con agua destilada en matraces de 50 ml

SOLUCIÓ
INDICADOR KH2PO4 0,5M NaOH 0,4M
N
1 1 ml 5 ml 1,0 ml
2 1 ml 5 ml 1,5 ml
3 1 ml 5 ml 2,0 ml
4 1 ml 5 ml 2,8 ml
5 1 ml 5 ml 3,6 ml
6 1 ml 5 ml 4,3 ml
7 1 ml 5 ml 4,9 ml
8 1 ml 5 ml 5,3 ml
Tabla 3. Preparación de soluciones tipo Buffer

Posteriormente, con ayuda de un pH-metro, se determinó el pH de las 10 soluciones

anteriores. Luego se midió la absorbancia de cada una de las soluciones a las dos longitudes
de onda correspondientes para el indicador, es decir, λ=433 nm y para λ=617 nm.

Absorbancia
pH λ=433nm λ=617nm
Fuertemente ácida 2.08 0.937 0.001
12.0
Fuertemente básica 0.163 2.16
6
Blanco --- 0.045 0.044
Estándar 1 6.83 0.903 0.248
Estándar 2 7.04 0.857 0.367
Estándar 3 7.19 0.85 0.517
Estándar 4 7.4 0.758 0.72
Estándar 5 7.63 0.654 0.999
Estándar 6 7.83 0.545 1.262
Estándar 7 8.1 0.439 1.592
Estándar 8 8.3 0.38 1.823
Tabla 4. Datos obtenidos de absorbancia y pH para cada una de las soluciones estándares.

CALCULOS Y RESULTADOS

Al momento de lectura de estándares (Tabla 4), ya se encuentra restada la lectura de

absorbancia en blanco. Por lo tanto, a partir de los datos anteriores se debe estimar el pKa
por dos métodos, por el método algebraico y por método gráfico.

 Método algebraico
6
 De la ecn. 3

Al aplicar la función para todos los intervalos tenemos los siguientes pKa a ambas longitudes
de onda

λ=433nm λ=617nm
pKa pKa
8.1677528 7.71879093
7.9782694
7.7300992
8
8.0874374
7.69298786
8
7.9216639
7.7016336
3
7.8692950
7.69570168
6
7.8187773 7.68256125
7.8436797
7.65267816
4
7.8906045
7.56708153
4
Tabla 5. Estimación del pKa a las longitudes de onda 433 y 617nm

A partir de los anteriores resultados se calcula el promedio entre todos los valores de cada
longitud de onda para estimar el pKa calculado.

λ=433nm λ=617nm
pKa pKa
Promedi 7.9156753
7.67467761
o 6
Tabla 6. pKa reportado por el método algebraico

 Método gráfico.

Para el método gráfico se acude a una regresión lineal, en la cual se graficará una función
logarítmica contra pH de la solución estándar. Para que este método sea eficaz es necesario
que los datos estén comprendidos en un coeficiente de regresión muy alto para que se
pueda estimar un valor más exacto.

La ecuación a acudir es la siguiente

7
 ( A−
log ⁡
Aslnfuerte /básica
Aslnfuerte/ácida− A )
= pKa− pH

Esta ecuación puede ser implementada para hallar el pKa ya que es adaptada a la ecuación
de la recta de la siguiente manera

y=mx+b

de modo que

y= pH mx=−log ⁡ ( A− Aslnfuerte/ básica

Aslnfuerte/ácida− A )

b= pKa

Se debe graficar en Excel la siguiente función o acudir a un método numérico para

determinar el pKa, o hablando en términos matemáticos, del intercepto

Para λ=433nm
pH Función log
Estándar
6.83 1.3377528
1
Estándar
7.04 0.93826948
2
Estándar
7.19 0.89743748
3
Estándar
7.4 0.52166393
4
Estándar
7.63 0.23929506
5
Estándar
7.83 -0.0112227
6
Estándar
8.1 -0.25632026
7
Estándar
8.3 -0.40939546
8
Tabla 7. Cálculos de la función logarítmica según la solución estándar para la longitud de
onda de 433nm.

8
 Método Gráfico para λ=433nm
1.5

Función Logaritmica
1 f(x) = − 1.19 x + 9.4
R² = 0.99
0.5

0
6.6 6.8 7 7.2 7.4 7.6 7.8 8 8.2 8.4
-0.5
pH

Gráfico 1: Función logarítmica vs pH para longitud de onda de 433nm.

Para λ=617nm
pH Función log
Estándar
6.83 0.88879093
1
Estándar
7.04 0.6900992
2
Estándar
7.19 0.50298786
3
Estándar
7.4 0.3016336
4
Estándar
7.63 0.06570168
5
Estándar
7.83 -0.14743875
6
Estándar
8.1 -0.44732184
7
Estándar
8.3 -0.73291847
8
Tabla 8. Cálculos de la función logarítmica según la solución estándar para la longitud de
onda de 617nm.

9
 Método Gráfico para λ=617nm
1
0.8 f(x) = − 1.09 x + 8.34

Funcion logaritmica
0.6 R² = 1
0.4
0.2
0
-0.26.6 6.8 7 7.2 7.4 7.6 7.8 8 8.2 8.4
-0.4
-0.6
-0.8
-1
pH

Gráfico 2: Función logarítmica vs pH para longitud de onda de 617nm.

Tenemos como resultado para el método gráfico.

Método Gráfico
λ(nm) 433 617
pKa 9.4028 8.3185
r2 0.9866 0.9978
Tabla 9. pKa estimado por método gráfico

Como resumen, los siguientes pKa según el método.

Método pKa
λ(nm) 433 617
Algebrai 7.915675 7.674677
co 36 61
Gráfico 9.4028 8.3185
Tabla 10. Tabla resumen, pKa de Azul de Bromotimol reportado según el método.

ANALISIS Y RESULTADOS

Según la teoría, se puede calcular también de manera teórica el pKa de las soluciones
preparadas y posteriormente analizadas. Los dos métodos gráfico y algebraico presentan
fallas ya que ninguno de los valores es el mismo al del azul de bromotimol (7.1) [ CITATION
Uni04 \l 9226 ]. Los errores relativos según el método se reportan en la siguiente gráfica en
donde se reportan los valores encontrados por método gráfico al realizar sus líneas de
tendencia lineales y el promedio de los valores de pKa estimados por el método algebraico.

10
 Método % Error
λ(nm) 433 617
Algebrai 11.48838 8.094050
co 54 87
32.43380 17.16197
Gráfico
28 18
Tabla 11. Porcentaje de error de cálculo de pKa según el método utilizado

Los cálculos de longitud de onda menor (433nm) son los más alejados del valor teórico.
Dicha observación es predecible ya que los análisis a la menor longitud de onda analizan
regiones del espectro bajas, las cuales son más energéticas y con mayor exposición a leer
interferencias, por lo tanto, los valores de absorbancia pueden estar incluyendo la radiación
de partículas interferentes. Existieron además unos factores que dificultaban el cálculo del
pKa ya que cuando existía un máximo de absorbancia para cualquiera de las dos longitudes
de onda, existían valores bajos para la absorbancia de la otra longitud de onda, lo cual
dificulta considerablemente los cálculos de propiedades. Esto implica que al calcular la
absorbancia de una longitud de onda cualquiera se presentará un valor preciso para la
sustancia que se encuentra en su máximo, pero no lo será para otra la cual se encuentra en
un punto en donde se calcula una absorbancia baja.

Es probable que el método gráfico no haya sido el más efectivo ya que no existe un
coeficiente de correlación alto (mayor o igual a 0.999) ya que los datos no estaban lo
suficientemente correlacionados. De igual manera el de mayor longitud de onda tuvo menor
índice de error por la anterior explicación, en donde es probable que lea menos interferencias
por poseer una mayor longitud de onda. Desde el punto de vista matemático, el de mayor
longitud de onda obtuvo valores menos dispersos y por eso su coeficiente de correlación
lineal fue el mayor de los dos (0.9978), además este fue el valor de pKa, para el método
gráfico, estimado más cercano al valor reportado en la literatura. Si se eliminan puntos se
puede mejorar el coeficiente de correlación lineal y estimar un pKa más preciso. A pesar de
que el método gráfico y el método algebraico son equivalentes, hay que tener en cuenta que
la recolección de datos y la preparación de especies en el laboratorio pueden generar
incertidumbres y discrepancias que alejen los datos experimentales de los teóricos.

Los errores no son solamente matemáticos, ya que es posible que otros factores hayan
afectado los resultados de la prueba. Entre los posibles están: la calibración del pHmetro, el
posible defecto en el uso del material volumétrico al momento de preparar las soluciones
11
estándar, fuertemente ácidas y básicas, la limpieza del mismo material, aforar
inadecuadamente por un posible error de paralaje o por aforar más de lo necesario o no
aforar lo necesario. El uso inadecuado del material volumétrico sería un factor crítico para
realizar la práctica, ya que se le estaría midiendo la absorbancia a una sustancia de una
concentración distinta a la requerida. De igual manera un pHmetro mal calibrado podría
arrojar valores de pH no exactos que no permitan desarrollar eficientemente los cálculos para
los métodos algebraico y gráfico.

CONCLUSIONES

Los datos más exactos fueron calculados en la longitud de onda de 617nm, ya que en dicho
punto se presenta un máximo de absorción para la solución fuertemente básica a pesar de
que la lectura de absorbancia para la solución fuertemente ácida fue muy baja. Caso similar
ocurrió en la longitud de onda de 433nm en donde existía el máximo de absorbancia para la
sustancia fuertemente ácida pero un valor bajo para la sustancia fuertemente básica. Es
probable trabajar en otra longitud de onda de un valor más cercano a los teóricos.

Debido a la dispersión de datos en el método gráfico, no se alcanzó un coeficiente de

correlación lineal ideal y por lo tanto este fue el método menos exacto, por lo tanto, el método
gráfico bajo los resultados de la práctica, no producen datos confiables. Se podría aproximar
un valor más cercano al real en el caso de eliminar datos experimentales y así obtener un
pKa más próximo al real

Es muy probable la existencia de errores al momento de usar el material volumétrico y que

se hayan preparado mal las soluciones de trabajo ya que los pKa calculados
experimentalmente fueron distante del valor real.

PREGUNTAS

1. ¿Qué es el punto isosbéstico de un indicador?

En una gráfica de registros, es un punto donde se cortan los espectros de una sustancia en
diferentes condiciones. El Punto isosbéstico corresponde a una longitud de onda
determinada, cumpliéndose que para esa longitud de onda la absorbancia total de la muestra
no cambia, aunque esta experimente una reacción química o cambio físico. Es así que, un
punto isosbéstico es un valor de la longitud de onda para el que la absorbancia se mantiene
12
constante, aunque se modifiquen algunas variables como la temperatura, el pH, etc. Su
nombre significa “igual extinción” en referencia al coeficiente de extinción o absorción molar,
haciendo referencia a la Ley de Beer. La aparición de uno o más puntos Isosbésticos cuando
se registran varios espectros de disoluciones de una misma sustancia bajo distintas
condiciones suele ser la mejor prueba de que en esas disoluciones coexisten dos o más
especies en equilibrio.[CITATION Jos13 \l 9226 ]

2. ¿Qué indica la presencia del punto isobéstico en un indicador?

La presencia de un punto Isosbéstico significa que la concentración analítica total se

distribuye entre dos especies únicamente. Si la absorbancia y la longitud de onda de un
presunto punto Isosbéstico varía, será porque existe una tercera o más especies para la
sustancia (o indicador) y que no se observan en los otros espectros. [ CITATION Dou90 \l 9226 ]

3. ¿Cómo se afecta el valor de la constante de disociación de un indicador, si las

lecturas de absorbancia se hacen a una longitud de onda que tiene menor
capacidad de absorber radiación?

Las correspondientes longitudes de onda al máximo de absorción serán diferentes si las

formas del indicador presentan colores diferentes. Al prepararse ciertas soluciones estándar
del indicador en las cuales varíe el pH, pero se mantenga como constante la concentración
de dicho indicador, se cumplirá la respectiva relación entre las concentraciones de las formas
ácidas y básicas.[CITATION Har \l 9226 ]

4. ¿Un indicador puede tener dos puntos isosbésticos?

Sí, un indicador puede registrar la aparición de más de un punto isosbéstico. Y la presencia

de un punto isosbéstico o más es fundamental, ya que permite detectar 2 o más especies
distintas que están en el equilibrio y presentan un mismo coeficiente de extinción molar a una
misma longitud de onda y a su vez facilita el cálculo de la constante de disociación del
indicador para la determinación de su pKa.[ CITATION Rod12 \l 9226 ][ CITATION Dou90 \l 9226 ]

13
REFERENCIAS

Harris, D. C. (2006). Análisis Químico Cuantitativo (3a ed.). Barcelona, España: Reverté.

Jose Ma. Gaviria (UNED). (Noviembre de 2013). Triple enlace Química. Obtenido de
https://triplenlace.com/2013/11/29/que-es-un-punto-isosbestico-en-espectroscopia-y-
que-revela/

Rodriguez Meza, J. M., & Navarro, N. (Noviembre de 2012). UPIBI IPN. Obtenido de Prezi:
https://prezi.com/rawx3xbpk9ov/vb/?webgl=0

Skoog, D., & West, D. (1990). Química Analítica (Cuarta ed.). México: McGRAW HILL.

Universidad de Antioquia. (2004). Química Analítica 1. Obtenido de Propiedades De Algunos

Indicadores Para Ser Utilizados En Titulaciones Ácido-Base:
http://docencia.udea.edu.co/cen/QuimicaAnaliticaI/herramientas/herramientas1.htm

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