Taller-Síntesis

Juan Esteban Neira Díaz
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Biotecnología
El desarrollo de técnicas de propagación in vitro ha contribuido significativamente en la
producción, conservación, saneamiento y establecimiento de algunas especies agrícolas
y forestales. Estas técnicas son imprescindibles para el mejoramiento genético, lo cuál
les da un gran valio. Para esto se necesita un desarrollar un protocolo de transformación
genética, por lo cual se debe establecer primero un sistema de regeneración in vitro que
permita la obtención eficiente de brotes regenerados y su posterior enraizamiento.
Melina, una especie que ha causado un gran interés económico por su aprovechamiento,
pero la especie no cuenta con protocolos de regeneración y transformación genética que
permita el mejoramiento biotecnológico, Por lo tanto, en esta investigación se propuso
optimizar protocolos para la regeneración in vitro vía organogénesis y el aislamiento de
protoplastos de Gmelina arborea como base para la obtención de protocolos de
transformación genética, tanto como herramienta de mejoramiento como de validación
funcional de genes.
El objetivo general es Establecer un protocolo de regeneración in vitro vía
organogénesis y obtención de protoplastos de Gmelina arborea.
Los objetivos específicos son:
-Determinar la combinación y concentración óptimas de reguladores de crecimiento
para la organogénesis in vitro de melina.
- Determinar el tipo de explante con mayor potencial morfogenético entre epicótilo,
hipocótilo, nudo cotiledonar, cotiledones, hojas.
- Establecer un protocolo de aislamiento de protoplastos a partir de explantes foliares de
plántulas de melina micropropagadas.
Se tomó se utilizaron plántulas de melina propagadas in vitro, tomando como explantes

segmentos de hipocótilo, epicótilo, cotiledones, nudo cotiledonar y hojas
respectivamente con el fin de determinar la fuente de explante con mayor potencial
morfogenético para el proceso de regeneración in vitro
Todos los explantes o segmentos que se utilizaron en el desarrollo del trabajo se
obtuvieron de plantas germinadas in vitro por 13-14 días; para la selección de los
explantes se tuvo en cuenta asegurarse del estado físico de la plántula (sanidad y
desarrollo de las plantas).
Para obtener las plántulas de donde se tomaría las muestras se compraron semillas de un
proveedor nacional y se le hizo el proceso de desinfección y propagación. Después de
obtener los explantes de estas plántulas se sembraron en Medios M&S 30 gr/L de
glucosa, 8 gr/L de agar, 0,2% de PPMTM (v/v) y pH de 5,7.
Las variables que se evaluaron fueron: días en que tardó en generar raíz, promedio de
longitud de las raíces, promedio número de raíces y frecuencia de enraizamiento. Se
utilizaron diferentes diseños factoriales .
Para la inducción de brotes múltiples se evaluaron 5 tipos de explantes: hojas,
cotiledones, epicótilos, hipocótilos, y nudos cotiledonares: estos se sometieron a
diferentes tratamientos compuestos por la combinación de diferentes concentraciones de
la citoquinina BAP y de la auxina AIA. Además estos explantes se sembraron el el
mismo medio de cultivo, sin fitorreguladores.
Los explantes provenientes de hojas, epicólitos, hipocótilos y cotiledones no produjo

brotes en ninguno de los tratamientos evaluados. Los únicos explantes que desarrollaron
a la vez callo y brotes fueron los nudos cotiledonares (Tabla 16). Adicionalmente, los
nudos cotiledonares fueron los primeros en los que se observó tanto callogénesis (día 8)
como brotación (día 5).
Los tratamiento con mayor generación de brotes fueron BAP 2,2 uM – IAA 0,7 uM y BAP 4,4
uM con 4,25 brotes por explante. la frecuencia de regeneración fue de un 100% en casi todos
los tratamientos a excepción de los tratamientos BAP 2,2 uM y BAP 3,3 uM – IAA 0,7 uM con
un 50% de regeneración, y del tratamiento control (0% de regeneración). Esto evidencia el alto
potencial morfogenético de este explante y su idoneidad en regeneración in vitro, lo cuál ha
sido ampliamente reportado en diferentes especies.
De acuerdo a los tratamientos que presentaron enraizamiento de los segmentos nodales, el

efecto fue entre los 8 y 10 primeros díasEl mejor tratamiento fue AIB 14,7 uM con una
frecuencia de enraizamiento del 56 %, un número promedio de raíces de 3,4 y una longitud
promedio de 1,4 cm al día 2.
El explante con mayor potencial morfogénico fue el nudo cotilodenar, siendo el único explante
en generar brotes múltiples por medio de organogénesis directa e indirecta.
Los tratamientos BAP 2,2 uM y AIA 0,7 uM y BAP 4,4 uM en medio MS con glucosa al 3%
fueron óptimos para la regeneración in vitro de melina.
El tratamiento de auxinas óptimo para enraizamiento in vitro de brotes de melina fue AIB a
14,7 uM en concordancia con reportes previos, complementando la eficiencia del protocolo de
regeneración in vitro logrado en el estudio.

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Se tomó se utilizaron plántulas de melina propagadas in vitro, tomando como explantes

Los explantes provenientes de hojas, epicólitos, hipocótilos y cotiledones no produjo

De acuerdo a los tratamientos que presentaron enraizamiento de los segmentos nodales, el

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