Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela profesional de Medicina Humana

Reacción en Cadena de la Polimerasa

Estudiante : Martinez Angeles Josseph Deyvi

Asignatura : Biología Celular y Molecular

Docente : Alarcón Benavides Edwin Ricardo

Año Académico : 2020-I

Ciclo :I

Sección :B

Lambayeque,27 de abril del 2020

 Introducción

La presente investigación se refiere al tema Reacción en Cadena de la

Polimerasa, la cual es uno de los métodos tecnológicos más
innovadores para el estudio de los ácidos nucleicos.

La finalidad de este trabajo se orienta en dar a conocer sobre la

reacción en cadena de la polimerasa, como se da esta reacción, el
proceso que se hace en los laboratorios para incentivar a que se la
misma, la variante que es utilizada en los test para comprobar la
existencia del virus en el organismo de pacientes sospechosos de la
enfermedad Covid-19 y el porqué se utiliza esta variante.

Se intenta cumplir con la finalidad del trabajo contestando las

siguientes preguntas que se ha planteado:

-¿Que son los coronavirus?

-¿Dónde se originó esta pandemia?

-¿De que forma se puede adquirir la infección?

-¿Por qué es importante conocer esta herramienta?

-¿Qué es la PCR y Como se realiza?

-¿Cuál es la variante de la PCR utilizada para detectar pacientes con

Covid-19?

-¿Cómo funciona la RT-PCR en tiempo real con los coronavirus?

Para realizar la siguiente investigación empezó a revisar tanto

bibliografía, artículos de revistas electrónicas para encontrar
información sobre esta reacción.
¿Qué son los coronavirus?

Es una familia de virus que sueles causar enfermedades respiratorias

desde un resfriado común hasta el síndrome respiratorio agudo grave
(SARS) o el Síndrome respiratorio de oriente medio (MERS), se les
llama así por su inusual capa externa que posee una forma que
asemeja a una corona.

Esta familia de virus ocasionan enfermedades zoonóticas

(transmitidas de animales hacia los humanos), pues se sabe que el
SRAS-CoV se transmitió de la civeta al humano, al igual que se
producido el MERS-CoV al ser transmitida del dromedario al humano,
tal como ocurrió con el nuevo virus (Covid-19 o SARS-Cov-2)
causante de esta pandemia que se transmitió del murciélago al
humano; muy aparte se sabe que hay muchos mas virus
pertenecientes a esta familia que habitan animales y aun no han sido
transmitidos al humano.1

¿Dónde se originó esta pandemia?

El brote que ha causado este nuevo coronavirus fue detectado por

primera vez el 31 de diciembre de 2019 en Wuhan, provincia de
Hubei, China; luego fue confirmado el 7 de enero del 2020.

Se confirmo que este nuevo virus se había adquirido en un mercado

de mariscos en Wuhan (Hunan Seafood Wholesale Market)
Posteriormente se detectaron casos en Tailandia, Corea del Sur,
Japón, Taiwán, Estados Unidos, Australia, Vietnam; donde nunca se
había visto este antecedente, con esto fue confirmada la transmisión
persona-persona.
Inicialmente los casos eran detectados en personas que frecuentaban
mucho este mercado (comerciantes y compradores), en este mercado
se vendía con normalidad ranas, tigres, serpientes y muchísimos mas
animales que son potenciales reservorios de este agente patógeno. 2

¿De que forma se puede adquirir la infección?

La vía de transmisión más común es por contacto y por gotas

respiratorias (aerosoles), en distancias cortas(1,5m) y también se
puede adquirir de manera indirecta la cual es a través de fómites
contaminados por dichos aerosoles. No se debe pasar por alto el
hecho de que también pueda ser adquirida por vía aérea. La mayoría
de contagios se dan a partir de pacientes sintomáticos, aunque
también hay diversos casos de contagio ocasionados por pacientes
asintomáticos e incluso a partir de personas en periodo de incubación
de esta enfermedad.2

¿Por qué es importante conocer esta herramienta?

Su importancia radica en el amplio campo de aplicaciones de este

método como por ejemplo en los test de paternidad, en la detección
de enfermedades hereditarias, en la comparación de expresión
génica, en la clonación de genes; pero su aplicación más importante
en la situación actual vendría a ser el uso de la RT-PCR en tiempo
real en los test que se realizan para la enfermedad Covid-19
(producida por el virus SARS-CoV-2) pues esta es capaz de detectar
el genoma del virus.
¿Qué es la PCR y Como se realiza?

Es una reacción enzimática que replica millones de veces una

secuencia determinada de ADN durante varios ciclos repetidos en los
que la secuencia blanco es copiada de manera exacta. Para ello, la
reacción aprovecha la actividad de la enzima ADN polimerasa que
tiene la función de sintetizar ADN de manera natural en las células.
En la reacción si se usa como sustrato ADN genómico entonces se
está hablando de una PCR convencional, pero si se usa ADNc
proveniente de ARNm entonces hablamos de una RT-PCR. Este
cambio se experimenta a través una reacción conocida como
transcripción inversa y es regulada por la enzima transcriptasa
reversa, la cual es capaz de convertir ARNm a ADNc; este método
surgió gracias a la observación a los retrovirus los cuales son capaces
de cambiar su genoma ARN a ADN. Los compuestos indispensables
para que se de esta reacción son el sustrato (ADN o ADNc), una ADN
polimerasa termoestable, los cebadores o primers, los nucleótidos
trifosfatados presentes en el ADN (adenina, timina, citosina y
guanina), el catión magnesio (Mg+), una solución amortiguadora o
buffer y H2O. Estos constituyentes actúan entre ellos en 3 fases que
conforman la PCR: Desnaturalización, Hibridación y Extensión. Los
instrumentos en los que se realiza todo este proceso se llaman
termocicladores, los cuales están desarrollados para definir un
sistema homogéneo en el cual las condiciones de temperatura y
lapsos necesarios no se alteren en todos los ciclos que comprende
este método. Al finalizar esta reacción, para corroborar si se amplifico
la secuencia blanco de interés, los productos de la PCR son analizados
en geles de agarosa para confirmar si la reacción fue exitosa. 3,4
La variante de la PCR que se utiliza comprobar si un paciente padece
de Covid-19 es La RT-PCR. Esta variante es un método nuclear que
detecta el material genético especifico de los patógenos, como los
virus. Inicialmente el método empleaba marcadores de isotopos
radioactivos para detectar materiales genéticos específicos, pero tras,
la realización de mejoras, el marcado isotópico se ha remplazado por
marcadores especiales que mayormente son colorantes fluorescentes.
A diferencia de la RT-PCR convencional, que solo arroja los resultados
al final, esta técnica permite a los científicos analizar los resultados
de manera casi instantánea mientras el proceso sigue realizándose.
La RT-PCR en tiempo real es una técnica que posee alta sensibilidad y
precisión que ofrece un diagnostico confiable en un lapso de 3 horas,
aunque en la mayoría de laboratorios suele tomarles entre seis y
ocho horas de promedio. A diferencia de otros métodos disponibles
de aislamientos de virus, la RT-PCR en tiempo real es muy rápida y
posee menos margen de error o contaminación ya que este proceso
puede realizarse in vitro.3

¿Cómo funciona la RT-PCR en tiempo real con los

coronavirus?

En primera instancia se extrae una muestra de los epitelios en donde

se fija el virus, luego se aplican múltiples soluciones químicas para
suprimir sustancias no deseadas como proteínas, grasas, y se rescata
solo el ARN de la muestra. Este extracto de ARN consiste en una
combinación del material genético de la persona y, de estar presente,
del ARN coronavirus.

Después se continua con la transcripción inversa del ARN para

expresarlo en ADN mediante una enzima única , continuando con el
procedimientos los científicos agregan fragmentos extra de ADN que
complementen especificas partes del ADN vírico transcrito. Esos
fragmentos se adhieren a partes específicas del ADN vírico en el caso
que el virus este presente en la muestra. Diversos fragmentos que se
añaden sintetizan nuevas cadenas de ADN durante la amplificación y
otros para producir ADN y agregar marcadores a las diversas
cadenas, que después se usan para detectar el virus.

Después esa mezcla de materiales se introduce en el termociclador y

se somete a ciclos de calor-frio para provocar diversas reacciones que
dan origen a nuevas copias de partes especificas de ADN vírico. En
cada uno de ellos se duplican las cantidades: de dos copias van a
cuatro después a ocho y así sucesivamente. Un sistema de RT-PCR
normalmente consta de 35 ciclos y se crean 35 millones de copias
nuevas de las partes de ADN vírico.3,4,5

Entre tanto se vaya sintetizando las nuevas muestras de ADN vírico ,

los marcadores se encajan a las cadenas y emiten fotoluminiscencia,
si esta supera un nivel determinado se confirma la presencia del
virus.5

¿En que instituciones se realiza el PCR aquí en el

Perú?

Fuera de Lima se encuentran pocos laboratorios capacitados para

realizar estas pruebas moleculares o serológicas

En el Cusco se encuentra solamente un laboratorio, este funciona

dentro de las instalaciones del centro de salud de Accamana, ubicado
en el distrito de San Jerónimo, a este llegan diversas muestras
provenientes de dicha región y de regiones vecinas.

Sim embargo en Arequipa, localizada en la zona sur, presenta dos

laboratorios que se encuentran en espera de la certificación de la INS
para poder realizar las pruebas correspondientes. Estos laboratorios
se encuentran: en el Hospital de la Universidad Nacional de San
Agustín (UNSA) y Hospital Regional Honorio Delgado Espinoza.

Por estas razones muchas de las regiones del sur siguen enviando sus
muestras a laboratorios ubicados en la ciudad de Lima.

En La Libertad se encuentra el centro de análisis el cuan esta en

funcionamiento desde el 17 de marzo en la Sede del Laboratorio
Referencial Regional, ubicado en el centro histórico.

En Trujillo encontramos un laboratorio capacitado para realizar estas

pruebas en el cual se cuestiona el porqué los análisis suelen durar 8
horas.

En Cajamarca encontramos el Laboratorio de Jaén que se encuentra a

disposición de analizar muestras provenientes de toda la región, este
laboratorio se habilito el 27 de marzo.

En Piura encontramos un laboratorio que puede realizar las pruebas

correspondientes pero que posee recursos escasos por lo que se ha
reducido el numero de pruebas.

En Lambayeque encontramos un laboratorio en el cual trabajan 13

personas y el procesamiento de las pruebas se realiza en 2 fases: una
automatizada y otra manual.

En Tumbes encontramos el Laboratorio Regional de Tumbes en el

cual trabajan cuatro tecnólogos médicos.

En la región de Loreto encontramos en Iquitos un laboratorio

capacitado para realizar las pruebas moleculares que
lamentablemente por la falta de interés en este laboratorio fue
utilizado con poca intensidad, este laboratorio se encuentra en el
Centro de Investigación de Enfermedades Tropicales Máxime
Kuczynski de Iquitos.

En la Región de San Martin encontramos el Laboratorio Referencial

Regional de Salud Publica, ubicado en el distrito de Morales, que se
habilito el 21 de marzo para realizar estas pruebas para confirmar
casos de COVID-19 en esta región.

El principal problema de todos los laboratorios descentralizados viene

a ser la falta de insumos para la realización de estas pruebas. 6

¿Qué enfermedades se pueden diagnosticar con el

PCR?

Puede detectar patologías infecciosas causadas por diversas bacterias

como.

Escherichia Coli, estas bacterias forman parte de la microbiota del

tracto gastrointestinal pero algunas cepas de esta bacteria pueden
causar infecciones que afectan al tracto gastrointestinal causando
diarreas, síndrome hemolítico-urémico y colitis hemorrágica, la
detección rápida y precisa de estas cepas de E. coli es fundamental
para evitar el riesgo que esta acompañado a tratamientos tardíos y
para prevenir la posible existencia de epidemias comunitarias o
nosocomiales.

Pseudomonas spp, hay muchas cepas de pseudomonas que producen

enfermedades, tenemos a la Pseudomona aeruginosa la cual es una
bacteria muy problemática a nivel hospitalario que presenta elevados
grados de mortalidad, los pacientes que sufrieron quemaduras y los
que reciben ventilación mecánica son los que frecuentemente son
atacados por esta bacteria, aquí resalta la importancia de la PCR que
sirve para detectar los genes que codifican lipoproteínas de la
membrana externa de esta bacteria(pues esta es gran negativa).

Infecciones genitourinarias, tenemos a la uretritis que puede ser

gonocócica y no gonocócica dependiendo de la presencia de
Neisseria. El control de esta enfermedad a través de la técnica del
PCR múltiple desarrollado es importante pues en las mujeres estas
infecciones pueden llegar a causar enfermedades pélvicas
inflamatorias, embarazos ectópicos e incluso, en los peores casos,
infertilidad, ¿por qué es importante la técnica del PCR en estos
casos?, es necesaria para identificar al agente patógeno ,pues como
ya se mencionó esta enfermedad puede ser gonocócica(es causada
por Neisseria) y no gonocócica(la cual puede ser causada por
micoplasmas o ureaplasmas), y asi realizar un tratamiento eficiente
para erradicar al agente patógeno causante de la infección. 7
Referencias.

1.Ferré J. Coronavirus: origen, transmisión, causas, síntomas,

protección. La Vanguardia. 2020[citado el 30 abril 2020]. Disponible
en: https://www.lavanguardia.com/vida/junior-
report/20200326/48103758469/coronavirus-covid-19-escola-pejoan-josep-ferre-que-es-
origen-sintomas-transmision-proteccion.html

2.Trilla A. Un Mundo, Una Salud: la epidemia por el nuevo

coronavirus COVID-19. Medicina Clínica[internet]. 2020[citado el 29
abril 2020];154(5):175-177. Disponible en:
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S002577532030141X

3.Tamay de Dios L, Ibarra C, Velasquillo C. Fundamentos de la

Reacción en Cadena de la polimerasa (PCR) y de la PCR en tiempo
real. Investigación en Discapacidad [Internet].2013[citado 27 abril
2020];2(2):70-78. Disponible en:
http://ddt.inr.gob.mx/indiscap/PDFIndiscap/2013/Num2/ir132d.pdf

4.Organimso internacional de energía atómica[internet]. Viena:

OIEA;2020. Oficina de información al público y comunicación de la
OIEA; [citado 27 abril 2020]. Disponible en:
https://www.iaea.org/es/newscenter/news/pcr-en-tiempo-real-covid-
19

5.Lopez I.Coronavirus: los 3 test que juntos nos ayudaran a controlas

la pandemia del Covid-19.BBC.2020[citado 27 abril 2020].Disponible
en: https://www.bbc.com/mundo/noticias-52214479

6.Red Investigativa Nacional. Once laboratorios fuera de Lima están

preparados para detectar la pandemia. Ojo Publico. 2020[citado el 30
abril 2020]. Disponible en: https://ojo-publico.com/1714/once-laboratorios-
fuera-de-lima-pueden-detectar-covid-19
7.Mendez-Alvarez S,Perez-Roth E. PCR múltiple en microbiología
clínica.Enf. Infeccionas y Microbiol. Clinica. [Internet]. 2004[citado el
30 abril 2020];22(3):183-192. Disponible en: https://www.elsevier.es/es-
revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-28-articulo-la-pcr-multiple-
microbiologia-clinica-13058027.