EJERCICIOS:

1. La PCR cuantitativa en tiempo real (reacción en cadena de la polimerasa) fue descrita por primera vez en
1993 por Russell Higuchi y sus colaboradores. Conectaron una cámara de video para monitorear la PCR
durante todos los ciclos para detectar fluorescencia en moléculas de ADN recién sintetizadas unidas al
bromuro de etidio. Debido a que es una técnica altamente sensible, la PCR en tiempo real ha sido una
herramienta aplicada en varias áreas biomédicas, destacándose en la investigación básica y en el diagnóstico
clínico y de laboratorio. Con respecto a esta técnica, podemos decir que:
a) A. No expresa señales positivas falsas de la amplificación de un gen en el caso de contaminación de la
muestra.
b) B. Permite la detección de productos de reacción solo al final de todos los ciclos de termociclado.
c) C. No es capaz de detectar productos no específicos como los dímeros de imprimación.
d) D. Cuanto menor sea la concentración de cebadores, mejor será la capacidad de amplificación.
e) E. No depende de factores como el cuidado en el pipeteo, la calidad e integridad de las muestras, el
diseño de los cebadores y las condiciones del termociclado.

2. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de biología molecular que permite la replicación
del ADN rápidamente. Esta técnica surgió en la década de 1980 y permitió avances científicos en todas las
áreas de investigación genómica. La doble hélice se estabiliza mediante enlaces de hidrógeno, dos entre las
bases adenina (A) y timina (T) y tres entre las bases guanina (G) y citosina (C). Inicialmente, para que el ADN
se replique, la doble hélice debe estar totalmente desnaturalizada (desenrollada) aumentando la
temperatura, cuando los enlaces de hidrógeno entre las diferentes bases de nitrógeno se rompen.
¿Cuál de los segmentos de ADN será el primero en desnaturalizarse por completo durante el aumento de la
reacción de PCR?
a)

b)

c)
d)
e)
 3. La técnica de PCR (reacción en cadena de la polimerasa), la más utilizado para la amplificación (clonación) de
ADN in vitro, revolucionó el acceso a la información genética. Con respecto a esto Marque la opción correcta.
a. En PCR, los cebadores se hibridan con moléculas ADN bicatenario.
b. Con PCR, la enzima Taq polimerasa puede mantener su actividad incluso a las altas temperaturas
necesarias para
b) desnaturalizar la molécula de ADN.
c) PCR también se puede aplicar en el análisis de proteínas.
d) Con PCR, la clonación molecular requiere de 48 a 72 horas para ser realizado
e) La PCR electrónica debe ir acompañada de un método de purificación para separar el fragmento
amplificado del resto del genoma

4. En cuanto al análisis e identificación de material genético utilizando técnicas de biología molecular, marque la
opción correcta.
a) Se utiliza preferiblemente una electroforesis de campo pulsado para separar fragmentos cortos de ADN,
como PCR.
b) Cuando una solución acuosa de ADN se calienta a 100 ºC o expuesta a un pH mayor o igual a 13, la doble
hélice de La molécula se disocia rápidamente en dos hebras simples.
c) Los cromosomas completos no pueden ser individualizados por utilizando técnicas de biología
molecular.
d) Para el análisis del perfil genético, por ejemplo, en biología forense, se utiliza tecnología de ADN
recombinante.
e) La hibridación de sondas de ADN con ARN celular permite determinar si un gen ha mutado o no, pero no
le permite detectar si ocurrió un cambio durante o después transacción.

5. Al analizar la evolución de las estrategias para determinar la identidad genética, que se han convertido en un
procedimiento sensible e informativo, se pueden observar tres fases: una inicial, después de la descripción de un
marcador centrado en el polimorfismo genético en 1980, que dio lugar a las impresiones ADN digital, con la
aplicación de técnicas de polimorfismo de longitud de fragmento de restricción (RFLP); una segunda fase de
incorporación de nuevas técnicas, a fines de la década de 1980 del siglo XX, que permitió un aumento significativo
en la sensibilidad de los métodos y la consiguiente identificación de individuos con muestras tomadas de
fragmentos de uñas, chicles, etc. y un tercer paso más reciente, cuyo énfasis estaba en la estandarización
metodológica y estadística y la generación de bases de datos.
Teniendo en cuenta los métodos más sensibles mencionados en el texto, incluido el de la reacción en cadena de
la polimerasa (reacción en cadena de la polimerasa (PCR)), marque la opción correcta.

a) La amplificación de series de repeticiones con 4 o más nucleótidos facilita la detección por electroforesis
en gel.
b) El uso correcto de la PCR requiere cuidado para evitar la desnaturalización del ADN en la etapa en que
las cadenas se separan.
c) La PCR permite la amplificación mediante la adición de aminoácidos a las nuevas tiras de polímeros
sintetizados.
d) Una de las limitaciones de la PCR es la imposibilidad de amplificar diferentes secuencias
simultáneamente.
6. Los avances en las tecnologías de ADN han tenido un gran impacto en el campo de la ciencia forense. El análisis
de ADN ha sido una herramienta poderosa para la identificación humana y para investigaciones criminales, en
gran parte debido al desarrollo de pruebas con buena sensibilidad y un alto poder de discriminación. Estos
incluyen la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) capaz de detectar rápidamente marcadores
moleculares.

a) Con respecto a la PCR y su uso en la identificación forense, verifique la alternativa correcta.

b) R. Aunque la PCR es una técnica utilizada para la amplificación selectiva de una secuencia de ADN objetivo
del ADN extraído previamente, no permite la inserción de cebadores en el ADN de plantilla
desnaturalizado.
c) B. El proceso que involucra la síntesis de nuevas cadenas de ADN, lo que resulta en un fragmento de ADN
con secuencia idéntica al ADN a analizar, ocurre a través de la acción de la ADN ligasa.
d) C. Una de las desventajas de la PCR es la incapacidad de obtener resultados, especialmente en los casos
en que el ADN objetivo se degrada o incrusta en un medio que dificulta el aislamiento de ese ADN.
e) D. La gran ventaja de la PCR sobre otras técnicas utilizadas para genotipar marcadores genéticos es que
los resultados de la tipificación nunca se ven afectados, especialmente si los niveles de ADN contaminante
son comparables a los del ADN objetivo.
f) E. PCR permite la tipificación de ADN en muestras de prueba que no pudieron analizarse utilizando otras
técnicas, como, por ejemplo, Southern, ya que requiere una gran cantidad de ADN total.

7. Actualmente, las técnicas de biología molecular se usan ampliamente en el diagnóstico de enfermedades

infecciosas o neoplásicas. Con respecto a las técnicas de biología molecular, considere las siguientes
afirmaciones y marque la alternativa correcta. I. El producto final de la reacción en cadena de la polimerasa
(PCR), después de completar todos los ciclos, se llama "amplicón". II La PCR multiplex es una reacción en la
que varias regiones diferentes de ADN se amplifican al mismo tiempo y en el mismo tubo. III. La técnica de
PCR en tiempo real (qPCR) se usa solo en situaciones donde la información genética a amplificar es una
molécula de ARN. IV. El paso de desnaturalización por PCR consiste en exponer la reacción a temperaturas
cercanas a 72 ºC para que puedan aparecer las hebras de la plantilla de ADN.

a) Solo las declaraciones II y IV son correctas.

b) Solo las declaraciones I y III son correctas.
c) Todas las declaraciones son correctas.
d) Solo las afirmaciones I, II y IV son correctas.
e) Solo las declaraciones I y II son correctas

8. El método Sanger se basa en una reacción de secuenciación que utiliza terminadores de cadena marcados
con fluorescencia (didesoxinucleótidos, ddNTP), además de nucleótidos naturales (dNTP). Originalmente, el
producto de reacción se sometió a una electroforesis en gel de poliacrilamida que permitió la lectura de la
secuencia de ADN inicial. Actualmente, la electroforesis se realiza en capilares dentro de secuenciadores
automáticos.
Sobre el método, marque la opción correcta.
a) La reacción de secuenciación de Sanger se realiza con dos cebadores por reacción y una mezcla de
nucleótidos dNTP y ddNTP, donde los ddNTP se encuentran en mayores cantidades que los dNTP, y la lectura
 de la secuencia se realiza de abajo hacia arriba gel de poliacrilamida (dirección 5'-3 'de la tira naciente),
después de la electroforesis.
b) La reacción de secuenciación de Sanger se realiza con un solo cebador por reacción y una mezcla de
nucleótidos (dNTP) y didesoxinucleótidos (ddNTP), donde los dNTP se encuentran en mayores cantidades
que los ddNTP y se realiza la lectura de la secuencia. de abajo hacia arriba en el gel de poliacrilamida
(dirección 5'-3 'de la tira naciente), después de la electroforesis.
c) La reacción de secuenciación de Sanger se realiza con solo un cebador por reacción y una mezcla de
nucleótidos (dNTP) y didesoxinucleótidos (ddNTP), donde los ddNTP se encuentran en mayores cantidades
que los dNTP y se realiza la lectura de la secuencia. de abajo hacia arriba en el gel de poliacrilamida (5'-3
'dirección de la tira naciente) después de la electroforesis.
d) La reacción de secuenciación de Sanger se realiza con dos cebadores por reacción y una mezcla de
nucleótidos (dNTP) y didesoxinucleótidos (ddNTP), donde los ddNTP se encuentran en mayores cantidades
que los dNTP y la lectura de la secuencia se lleva a cabo. de arriba a abajo en el gel de poliacrilamida (5'-3
'dirección de la tira naciente), después de la electroforesis.
e) La reacción de secuenciación de Sanger se realiza con un solo cebador por reacción y una mezcla de
nucleótidos (dNTP) y didesoxinucleótidos (ddNTP), donde los ddNTP se encuentran en mayores cantidades
que los dNTP y se realiza la lectura de la secuencia. de arriba a abajo en el gel de poliacrilamida (5'-3
'dirección de la tira naciente), después de la electroforesis.

9. La técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se usa ampliamente en biología molecular.

Actualmente, se utilizan varias técnicas de PCR modificadas para fines específicos. De acuerdo con lo anterior,
marque la alternativa correcta.
a) La PCR de dos pasos o la PCR anidada consiste en usar dos pares de cebadores en la misma reacción
para aumentar la sensibilidad a la reacción
b) La PCR inversa se usa para amplificar fragmentos de ADN lineales a través de la PCR, en la que solo se
conoce la secuencia de un fragmento interno de esta secuencia.
c) Fusión PCR consiste en la fusión de secuencias de ADN conocidas a través de PCR, en las que algunos
cebadores deben tener una homología de base entre sí.
d) La PCR tradicional consiste en dos cebadores con direcciones opuestas que suenan en la misma cadena
simple de ADN, promoviendo la amplificación del fragmento ubicado entre ellos.
e) En la PCR multiplex, se usan pares de diferentes cebadores para amplificar diferentes objetivos, en
diferentes muestras

10. Las técnicas de secuenciación de nueva generación (NGS) se basan en la amplificación clonal antes de la
propia reacción de secuenciación. Sin embargo, cada dispositivo utiliza una técnica de amplificación clonal
diferente. En estas técnicas, marque la opción correcta.
a) Una de las técnicas utilizadas es la PCR puenteada, en la que las cadenas de ADN se dispersan aleatoriamente
en una placa, y se realiza la PCR a través del emparejamiento de bases con hebras de ADN presentes en esta
placa; Esta técnica se utiliza en la metodología del secuenciador 454.
b) Una de las técnicas utilizadas es la PCR puenteada, en la que las cadenas de ADN se dispersan aleatoriamente
en una placa y la PCR se realiza mediante emparejamiento de bases con cadenas de ADN presentes en esta
placa; Esta técnica se utiliza en la metodología del secuenciador Ion Torrent.
c) Emulsión PCR es una técnica utilizada en la metodología del secuenciador Ion Torrent y consiste en una
emulsión de agua en una fase aceitosa, formando gotas de aceite que contienen los reactivos de la PCR, una
cadena de ADN para secuenciar y una "perla" "Para anclar.
d) Emulsión PCR es una técnica utilizada en la metodología del secuenciador Illumina y consiste en una
emulsión de agua en una fase aceitosa, formando gotas de agua que contienen los reactivos de la PCR, una
cadena de ADN que se secuenciará y un "cordón" para su anclaje
e) La PCR en emulsión es una técnica utilizada en la metodología del secuenciador 454 y consiste en una
emulsión de agua, en una fase oleosa, que forma gotas de agua que contienen los reactivos de PCR, una
cadena de ADN que se secuenciará y un "cordón" "Para anclar.