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NOMBRE DE LA Nombre del

FACULTAD O UNIDAD Programa
ACADÉMICA Académico

MEDICINA MEDICINA

Asignatura/espacio académico Unidad/módulo/tema Profesor(es)

MODULO DE
BIOCIENCIAS- ETAPAS DEL CICLO CELULAR Y INFORMACION MONICA DIAZ
MICROSCOPÍA OPTICA GENETICA LOPEZ

Semestre ubicación de la Fecha creación Fecha actualización

asignatura en el plan de ENERO DE 2015 ENERO DE 2018
estudios
PRIMERO

ETAPAS DEL CICLO CELULAR Y MICROSCOPIA OPTICA

COMPETENCIAS

Indicadores de Logro en el Indicadores de Logro en el Indicadores de Logro en

Ámbito Conceptual Ámbito Procedimental el Ámbito Actitudinal

Realiza correctamente la
simulación de observación. Determina los cuidados
Reconoce las distintas partes
que deben tenerse en
principales de un microscopio
Ejecuta la correcta limpieza de cuenta en la manipulación
óptico, sus nombres y
las superficies de un del microscopio.
funciones.
microscopio óptico.
Reconoce las partes y
Comprende e integra los
Manipula el material propiedades del
conceptos teóricos y prácticos
apropiadamente en el microscopio.
de microscopia óptica con
laboratorio.
muestras microscópicas de
Exhibe un comportamiento
forma contextualizada.
Aplica adecuadamente los de compromiso en la
cuidados y técnicas de manejo realización de las
Integra conceptos teóricos de
efectivo del microscopio. actividades que involucran
ciclo celular con su
la aplicación de llos
visualización en laminas
Describe e identifica las conceptos de ciclo celular
microscópicas.
características de cada una de y microscopia
las fases del ciclo celular
observadas a través del
microscopio óptico
   2

PREREQUISITOS

NA

MARCO TEORICO

MICROSCOPIA OPTICA
Los diversos elementos que existen en la naturaleza, presentan tamaños, formas y
composiciones distintas, la mayoría de ellas pueden verse, algunas a simple vista, y otras
mediante instrumentos. Ver Figura 1.

Figura 1. Tamaño relativo de las células y sus componentes. Tomado de Paul D Trombley. © The Michigan Nanotechnology
Institute for Medicine and Biological Sciences (MNIMBS)® 2010.

El microscopio óptico es un instrumento de precisión que permite ampliar la imagen de los

objetos que no son visibles para el ojo humano. En el microscopio, la luz atraviesa de
abajo a arriba el objeto a estudiar. Para ver con el microscopio un objeto, éste debe ser lo
más fino posible. Si no lo atraviesa la luz se verá sólo un grumo deforme y opaco.
Tiene un límite resolución de cerca de 200 nm (0.2 µm), es decir la distancia mínima a la
que se pueden ver dos objetos separados. Este microscopio utiliza luz visible. Las células
observadas bajo el microscopio óptico pueden estar vivas o fijadas y teñidas. Las
muestras son depositadas en una lámina de vidrio denominada PORTAOBJETO, de unos
5 cm de largo por 2 cm de ancho. En el lugar del portaobjetos donde se puso la muestra
puede, además, ponerse una laminilla muy fina de vidrio llamada CUBREOBJETO.
Los oculares proporcionan diez aumentos de la imagen, y viene expresado x10 en la
carcasa del ocular. También los hay x20.
Los objetivos (generalmente cuatro), suelen tener aumentos de x4, x10, x40 y x100. La
ampliación de la imagen resultante al multiplicar los aumentos que proporciona el ocular y
el objetivo serán de 40, 100, 400 y 1000 aumentos.
Ejemplo: Ampliación de 40 aumentos:
Objetivo x4: aumenta 4 veces la imagen
Ocular x10: aumenta 10 veces la imagen ya aumentada 4 veces por el objetivo.
Resultado: 4 aumentos x10 aumentos = 40 aumentos
   3

Lo objetivos x4, x10 y x40, se denominan objetivos secos, porque entre la lente y la
preparación a observar, la luz atraviesa el aire proporcionando una imagen nítida. El
objetivo x100, se denomina objetivo de inmersión, porque para proveer imágenes nítidas,
la lente debe estar inmersa en un líquido (aceite de cedro o similar), con un índice de
refracción igual al vidrio, lo que permite evitar la dispersión de los rayos luminosos.
Siempre que utilicemos el objetivo x100 debemos colocar una gota de aceite de inmersión
sobre la preparación a observar.

PARTES DEL MICROSCOPIO

El microscopio está conformado por tres sistemas:

SISTEMA MECÁNICO, conformado por:

1. Base o Pie: es pesado y presta gran estabilidad al microscopio.
2. Brazo o columna: es una prolongación superior del pie y está unida al brazo por
una charnela articulada. Es una especie de mango por dónde se sostiene y
transporta el microscopio; su forma es variable, aunque generalmente es curva, y
sirve para sostener la platina, el tubo y los mecanismos del movimiento.
3. Platina (con perforación central y pinzas o carro): es una plancha horizontal que
sirve para sostener las preparaciones. En algunos modelos lleva unas pinzas de
metal para sujetar el portaobjeto. La platina puede ser fija o móvil. Las platinas
móviles pueden efectuar los movimientos en dos direcciones perpendiculares
entre sí, o pueden realizar movimientos giratorios que viabilizan la localización de
los objetos. Estos movimientos se efectúan mediante tornillos situados en los
bordes de la platina.
4. Tornillos macrométrico y micrométrico: Son los Mecanismos del Movimiento que
permiten desplazar el tubo para efectuar el enfoque. Consisten en dos tornillos
colocados a los lados del brazo, uno es de mayor tamaño y ejecuta los
movimientos rápido del tubo; se le conoce con el nombre de TORNILLO
MACROMÉTRICO; el otro se nombra TORNILLO MICROMETRICO y efectúa
movimientos lentos, lo que permite afinar el enfoque. En algunos modelos el tubo
es fijo y lo que hacen estos tornillos es desplazar la platina.
5. Engranajes y Cremallera.
6. Portaobjetivos con mecanismo de revólver: es un dispositivo metálico, situado en
la parte inferior del tubo. Lleva dos, tres, cuatro o cinco objetivos, y mediante un
movimiento giratorio permite cambiar rápidamente de objetivo sin necesidad de
desenroscarlo.
7. Tubo del microscopio: Consiste en un cilindro de metal en cuyo extremo superior
se sitúa el ocular, el cual penetra por simple deslizamiento y es fácil cambiarlo por
otro. En el extremo inferior se encuentra situado el el sistema de revolver
portaobjetivos. La longitud del tubo es generalmente de 160 a 170 mm.

SISTEMA ÓPTICO, conformado por:

1. Condensador: consta de una lente convergente que recibe la luz de la fuente
luminosa y la concentra en el plano de la muestra; esto permite que incidan en ella
una mayor cantidad de rayos luminosos y que se genere una adecuada
iluminación sobre la misma.
2. Objetivo: constan de un sistema de tres lentes denominadas lente, frontal, lente
media y lente superior. La lente frontal es la más cercana al objeto que se observa:
es la menor y de foco más corto. La lente media es de foco más largo que la
anterior y la lente superior es la interna, la cual queda más próxima al ocular. Otros
objetivos, de mayor potencia y perfección, constan de 4 o mas lentes. Existen
   4

distintas clases de objetivos. Por la naturaleza del medio que separa la lente
frontal del objetivo de la preparación, este puede clasificarse en objetivo seco o de
inmersión.
3. Objetivos Secos: son aquellos en los cuales la cara superior de la preparación y la
lente frontal del objetivo, están separadas por el aire cuyo índice de refracción (n)
es igual a 1.
4. Objetivo de inmersión: son los que necesitan un líquido transparente interpuesto
entre la lente frontal y la superficie superior de la preparación. Este liquido debe
tener un índice de refracción más elevado que el del aire, acercándose lo más
posible al del vidrio, que es de 1,52, ya que las lentes, los portaobjetivos y
cubreobjetos son de vidrio generalmente (objetivos acromáticos). Así, el medio por
el cual se propaga la luz es homogéneo.
El líquido más usado es el aceite de cedro ,cuyo índice de refracción es de 1.515.
otros líquidos empleados pueden ser el agua (n = 1.33), la glicerina (n = 1.46), o
una mezcla de aceite de ricino y esencia de anís, que tiene una refracción de
1.510. Este objetivo ofrece la ventaja de anular la desviación o refracción brusca
que sufren los rayos luminosos al pasar del vidrio (portaobjeto y cubreobjeto) a
aire, y del aire a la lente frontal del objetivo, tal como acontece cuando usamos el
objetivo seco.
5. Prismas: La porción media de los microscopios modernos contiene prismas en su
interior y su función es proyectar la imagen formada por el objetivo sobre el plano
ocular.
6. Ocular: está formado por un sistema de lentes colocadas en un tubo dentro del
tubo principal del microscopio. La lente situada cerca del ojo del observador se
nombra lente ocular. La más interna se llama lente del campo o lente colectora.
Entre ambas lentes existe una especie de diafragma, sobre el cual puede
colocarse el micrómetro ocular usando realizar mediciones longitudinales de los
objetos microscópicos.

SISTEMA DE ILUMINACIÓN, conformado por:

1. Fuente luminosa
2. Reostato: Regula la intensidad de corriente, de forma que se controla la cantidad
de energía que fluye hacia la misma.
3. Filtros: Son cristales de colores (azul, amarillo, rojo, etc.) que se interponen al rayo
luminoso y absorben determinadas radiaciones para darnos una luz que viabiliza
la observación microscópica, por cuanto la imagen goza de mayor brillantez. Los
filtros pueden ponerse bajo el condensador o delante de la lámpara.
4. Diafragma: Es un aparato situado debajo de la platina. En los microscopios existen
frecuentemente dos o más diafragmas. Los microscopios actuales llevan un
diafragma iris similar al de las cámaras fotográficas. Con el pueden ser eliminados
los rayos luminosos marginales.

PROPIEDADES DEL MICROSCOPIO.

1. Poder de aumento: Es la capacidad del microscopio que expresa la razón entre el

tamaño de la imagen que produce el microscopio y el tamaño del objeto
observado. Como el microscopio tiene dos sistemas ópticos, cada uno de ellos es
capaz de agrandar la imagen, el aumento total es igual al producto de los
aumentos dados por el ocular y el objetivo respectivamente.
2. Poder de resolución: Es la capacidad del instrumento de dar imágenes bien
definidas de puntos situados muy próximos entre sí.
   5

3. Límite de resolución: Es la distancia mínima que puede existir entre dos puntos
para que puedan ser definidos como tales.
4. Poder de definición: Consiste en la capacidad de dar imágenes claras de
contornos precisos. Reside en la corrección de las aberraciones propias de las
lentes.
5. Poder de penetración: Así como el poder de resolución permite averiguar detalles
colocados a la misma altura, el poder de penetración permite averiguar hasta que
límite, detalles de estructuras situadas en diferentes planos, realmente están a
niveles distintos con un mismo enfoque.

DEFECTOS FRECUENTES EN EL MANEJO DEL MICROSCOPIO.

1. Los defectos relacionados con la iluminación pueden deberse a que el objetivo o el

condensador no se encuentren bien ubicados, inconvenientes por filtros
inadecuados o diafragma muy cerrado

2. La visualización de imágenes extrañas se pueden deber a polvo u otros elementos

extraños en los oculares, el objetivo, el cubreobjetos o portaobjetos. Las burbujas
de aire pueden también interferir en una visualización y este se reconoce por tener
forma de círculo con bordes negros.

MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

1. Conectar directamente a la toma de corriente, y encender la lámpara

2. Subir el condensador hasta el tope.
3. Colocar el objetivo de menor aumento, lupa (4x)/seco débil (10x) en el eje óptico
moviendo el revolver.
4. Utilizando el tornillo macrométrico y observando lateralmente, acerca lo más
posible la platina al objetivo teniendo cuidado que no lleguen a tocarse.
5. Observa a través del ocular y trata de que todo el campo se vea iluminado, esto se
logra abriendo y cerrando el diafragma y/o bajando o subiendo el propio
condensador. El condensador proporciona mayor luz cuando esta lo más arriba
posible.
6. Colocación de la preparación. Una vez iluminado el campo y utilizando el tornillo
macrométrico, separa la platina del objetivo lo suficiente para poder colocar el
portaobjetos que contiene la muestra a observar, sobre la platina sujetándolo con
las pinzas, teniendo cuidado de que el cubre objetos este hacia arriba, la muestra
deberá quedar en el centro del orificio de la platina.
7. Enfoque a seco débil: Utilizando el tornillo macrométrico y viendo lateralmente,
acerca el objetivo de seco débil (10x) a la platina, hasta el tope o 3mm de
separación. Observando por el ocular, aleja lentamente el objetivo con el tornillo
macrométrico hasta observar la imagen del objeto. Afina el enfoque con el tornillo
micrométrico hasta lograr una imagen nítida. Puedes mejorar la iluminación
moviendo el condensador y el diafragma.
8. Enfoque a seco fuerte: Una vez afinada la imagen a seco débil, centra en el campo
del microscopio la estructura que desea observar a seco fuerte y viendo
lateralmente gira el revólver (sin mover el tornillo macrométrico) hasta colocar en
el eje óptico el objetivo de seco fuerte (40x). Observa a través del ocular y afina el
enfoque con el tornillo micrométrico exclusivamente.
9. Enfoque a inmersión: Agrega una gota de aceite de inmersión sobre la
preparación, con cuidado cambia el objetivo de inmersión (100x), enfocar la
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preparación con el tornillo macrométrico. Como este objetivo es más, largo

quedará inmerso o sumergido en el aceite. Observa a través del ocular y afina la
imagen moviendo exclusivamente el tornillo macrométrico. Como la lente de
inmersión tiene menor diámetro, se tiene que aumentar la iluminación del campo
de observación, abriendo el diafragma y si el microscopio cuenta con el tornillo del
condensador, podrá subir el diafragma para acercarlo a la platina. Cuando se está
enfocando una preparación con el objetivo de inmersión nunca se debe mover el
tornillo macrométrico.
10. Los oculares más utilizados son los de: 8X, 10X, 12.5X y 15X. Lupa: 2.5X a
5X Seco débil: 10X Seco fuerte: 40X a 60XInmersión: 100X

CUIDADOS DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

1. Transportar el microscopio en forma vertical tomándolo del brazo con una mano y
de la base o soporte con la otra.
2. Limpiar el soporte mecánico del microscopio con una tela que no deje pelusa y los
lentes con papel seda. Si las lentes se encuentran demasiado sucias pueden
limpiarse con un hisopo de algodón impregnado con agua.
3. Jamás limpiar las lentes con solventes orgánicos (alcohol, éter, acetona, etc.).
4. Cuando se utiliza aceite de inmersión, para quitar el exceso de éste la lente debe
limpiarse con papel seda impregnando de una solución limpiadora de lentes (éter-
acetona-alcohol) no usar la solución en exceso.
5. Las partes del soporte se limpian con franela y agua destilada.
6. Las preparaciones a observar deberán estar limpias de aceite o grasa de las
manos.
7. Al finalizar las observaciones, los microscopios deben de quedar con el objetivo de
menor aumento en el eje óptico (Lupa 4X).
8. En el caso de alguna falla mecánica u óptica reportarse con el profesor.

INTERPRETACIÓN DE LA IMAGEN OBSERVADA

Al usar el microscopio, no solamente es importante enfocar bien la imagen, sino también

interpretar lo que se observa. La profundidad de foco (la porción del objeto perfectamente
enfocada) es muy pequeña, especialmente con los objetivos de mayor aumento, y por tal
razón la imagen observada es plana. Para apreciar la estructura tridimensional de los
objetos se puede enfocar hacia arriba y hacia abajo a través del ejemplar (si éste es
grueso).

DIVISION CELULAR
La división celular es un aspecto biológico que está presente y caracteriza a los seres
vivos, desde cianobacterias (fisión binaria) hasta animales y vegetales en donde se
denomina mitosis. La división celular por mitosis es un proceso por medio del cual las
células animales (somáticas) y vegetales se dividen de tal forma que el material genético
se reparte equitativamente entre las células hijas, dando como resultado el origen de dos
células genéticamente idénticas.
En animales este evento se presenta en células somáticas, que son aquellas células que
participan en el crecimiento de tejidos y órganos de un ser vivo, mientras que en
organismos adultos la división celular interviene en el reemplazo de las células pérdidas
por desgaste, deterioro o por muerte celular programada (apoptosis), con el fin de
mantener el estado de equilibrio del organismo, de tal suerte que si la división celular se
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detiene o se incrementa el individuo moriría o presentaría organomegalia (agrandamiento

de órganos) o tumoraciones y procesos de cáncer.
En las células vegetales la mitosis se produce sobre todo en los meristemos, que son los
tejidos que permiten el crecimiento de la planta y que se encuentran, entre otros lugares,
en los extremos de los tallos y de las raíces cuya función es la adquisición de nutrientes.
Previo a los procesos de división celular la gran mayoría de las estirpes celulares doblan
su masa y duplican todos sus organelos citoplasmáticos. De este modo, durante el ciclo
celular, un conjunto complejo de procesos citoplasmáticos y nucleares deben coordinarse
para que el proceso de división sea exitoso.
Una aproximación práctica del proceso de mitosis se puede observar en células del
meristemo de una cebolla a través de una coloración básica, la cual evidencia el material
genético de la célula (ácido nucléico) poniendo de manifiesto el arreglo de los
cromosomas durante las diversas fases que conforman el proceso de mitosis. Este
abordaje experimental tiene como objeto reforzar lo visto en clase sobre este aspecto
biológico, en el cual el estudiante se ve inmerso como ser vivo.
La información genética de las plantas, animales y otros organismos eucariotas reside en
las moléculas de ADN, y están empaquetadas dentro de los cromosomas. Por ejemplo,
cada célula humana posee 46 cromosomas, mientras que cada célula de una cebolla
cabezona (Allium cepae) posee 8 pares de cromosomas,2n=16.
Todas las células deben replicar su ADN al dividirse. Durante la replicación del ADN, las
dos hebras de la doble hélice de ADN se separan, y para cada cadena original se produce
una nueva cadena complementaria, produciendo dos moléculas de ADN idénticas. La
replicación del ADN produce un par idéntico de moléculas de ADN (llamadas cromátidas
hermanas) unida a una región llamada centrómero.
La mayor parte del tiempo de un célula se encuentra en interfase. A pesar de que pueda
parecer que durante la interfase la célula es relajada, esto realmente no es el caso porque
la célula se va a través de la G1, S y G2 fases en preparación para la división. En la fase
G1, la célula está aumentando el número de la misma de proteínas y orgánulos y
creciendo en tamaño. En S, la replicación del ADN y los cromosomas se produce el doble
para formar cromátidas hermanas. La fase G2 también realiza la síntesis de proteínas. El
material genético se presenta en esta etapa como filamentos de cromatina.
La replicación del ADN en eucariotas es seguido por el proceso llamado MITOSIS que
asegura que cada célula hija recibe una copia de cada uno de los cromosomas
replicados. Durante el proceso de la mitosis, los cromosomas pasan a través de varias
etapas conocidas como la profase, metafase, anafase y telofase. La división real del
citoplasma se llama citocinesis y se produce durante la telofase. Durante cada una de las
etapas anteriores, se producen eventos particulares que contribuyen a la distribución
ordenada de los cromosomas replicados antes de la citocinesis.

ETAPAS DE LA MITOSIS

1. PROFASE. En la profase, fibras de cromatina se vuelven más fuertemente enrolladas y

plegadas, formando cromosomas discretos. Los nucleolos desaparecen y los
cromosomas aparecen como dos CROMÁTIDAS HERMANAS idénticas unidas por el
centrómero. Los husos mitóticos comienzan a formarse y sin envoltura nuclear, estos
husillos pueden alcanzar los cromosomas. Los husos se unen a los CINETOCOROS y se
mueven los cromosomas al centro de la célula.
Durante la profase, los cromosomas se encuentran super-enrrollados y las fibras del huso
mitótico se empiezan a formar entre los centrosomas situados en el polo de las células. La
membrana nuclear o envoltura nuclear también se desintegra o desensambla en este
momento, los cromosomas en el citoplasma se liberan al espacio circundante.
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2. PROMETAFASE. Durante prometafase, algunas de las fibras se unen al centrómero de

cada par de cromátidas hermanas y comienzan a moverse hacia el centro de la célula.
La envoltura nuclear se fracciona en una serie de cisternas que ya no se distinguen del
RE, de manera que se vuelve invisible con el microscopio óptico.
También los nucleolos desaparecen, se dispersan en el citoplasma en forma de
ribosomas.

3. METAFASE. En la metafase los cromosomas han llegado a descansar a lo largo del

plano central de la célula. El COMT se encuentra en los extremos opuestos de la célula y
los husos mitóticos se han formado completamente entre ellos. Todos los cromosomas se
unen arriba en el centro de la célula en un lugar llamado la placa de metafase.
Los cromosomas muestran el máximo acortamiento y condensación, y son desplazados
por los microtúbulos hasta que todos los centrómeros quedan en el plano ecuatorial.

4. ANAFASE. Durante la anafase, los centrómeros se dividen y las cromátidas hermanas

comienzan a migrar hacia los polos opuestos de la célula.
Esta separación ocurre porque las proteínas del cinetocoro, que se encuentran cerca del
centrómero se trasladan a los COMT con la ayuda de ATP.
Se separan las cromátidas.
Cada juego de cromosomas migra hacia un polo de la célula.
El huso mitótico es la estructura que lleva a cabo la distribución de los cromosomas en
los dos núcleos.
El movimiento se realiza gracias a la actividad de los microtúbulos cromosómicos, que se
van acortando en el extremo unido al cinetocoro.
Los microtúbulos polares se deslizan en sentido contrario, distanciando los dos grupos de
cromosomas hijos.

TELOFASE. Durante la telofase, los cromosomas en cada extremo de la célula,

comienzan a agruparse, lo que facilita la formación de una nueva membrana o envoltura
nuclear.
Dos nuevos nucleolos se reensamblan y las fibras de cromatina de cada cromosoma se
desenrollan en su interior. Por último, los husos mitóticos desaparecen y la mitosis está
terminado. Una manera de identificar que la telofase ha comenzado es mediante la
búsqueda de la formación de la placa celular, la nueva formación de la pared celular entre
las dos células.
Comienza cuando los cromosomas hijos llegan a los polos de la célula.
Los cromosomas hijos se alargan, pierden condensación, la envoltura nuclear se forma
nuevamente a partir del RE rugoso y se forma el nucleolo a partir de la región
organizadora del nucleolo de los cromosomas SAT. (aquellos cromosomas donde se
encuentra la NOR(región organizadora nucleolar).).
Los cromosomas hijos inician la reconstrucción del núcleo en los polos de la célula.
El aparato mitótico desaparece y se desarrolla nueva membrana nuclear, alrededor de
cada colección de cromosomas.

La CITOCINESIS no es una parte de la mitosis, sin embargo, es necesario para la

replicación de la célula y ocurre normalmente durante la finalización de la telofase. En las
células animales, el citoplasma desarrolla una división a manera de surco que se
encuentra a lo largo de la célula. En el surco hay una serie de microfilamentos
compuestos de actina miosina II, proteínas que ayudan a que se contraiga, conformando
un ANILLO CONTRACTIL. El surco sigue contrayéndose y se profundiza el surco hasta
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que finalmente la célula madre se divide en dos. Sin embargo, el proceso es diferente en
células vegetales, debido a que contienen una pared celular. En primer lugar, se forman
una serie de vesículas que contienen material de la pared celular, las cuales se acumulan
en el medio de la célula madre. Entonces, las vesículas se fusionan, formando una nueva
pared celular, conocida como PLACA CELULAR o FRAGMOPLASTO. La placa celular
crece hacia el exterior con la adición de más vesículas hasta que se fusiona con la
membrana plasmática, donde la célula madre se divide en dos células hijas.

MATERIALES:

• Bulbos de cebolla • Acido Clorhidrico HCl al 50%

cabezona(Allium cepae) con • Agua destilada
meristemos (creciendo por 7 • Pinza de madera
dias en agua) • Portaobjeto
• Bisturi. Hoja de bisturí o Tijeras • Cubreobjeto
de tejido. • Papel de filtro o Servilleta de
• Vidrio de reloj papel
• Orceina A y B o acetoorceina • Lapiz con borrador
• Acido Acetico

PROCEDIMIENTO:

Montaje de bulbos de cebolla germinados.

Para poder observar células mitóticas es indispensable tener una fuente de material en
división. El ápice de las raíces es un tejido (meristemo) que se está dividiendo
activamente in vivo, por lo que es un material ideal para observar cambios celulares
durante la mitosis. En este caso, se trabajará con las raíces de cebolla, las cuales se
obtienen al germinar los bulbos de dicha planta entre 4-8 días antes de la práctica.

Para ello, se colocan los bulbos en un recipiente con agua, tal como se indica en la figura
2, de manera que sólo el disco radicular quede en contacto con el líquido.

Figura 2. Ubicación del disco radicular en contacto con agua para estimular la germinación.
   10

Fijación del tejido.

Los tejidos que van hacer tratados con colorantes para su observación deben ser
fijados previamente, ya que los procesos de maceración y coloración pueden distorsionar
las estructuras celulares a observar por no haber sido fijadas. Para el caso de la mitosis,
se requiere la observación de la cromatina no condesada y condensada (cromosomas) en
sus diferentes fases, en este sentido, los cromosomas fijados deben en lo posible
mantener las mismas características de los tejidos vivos. (Ver figura 3). se selecciona tres
raíces cuya longitud sea de 2 a 3 cm, con una tijera o pinza se cortan y sumergen en el
fijador (ácido acético) por 5 minutos.

Posteriormente se sumergen las raíces fijadas en agua destilada durante 5 minutos para
retirar el exceso de fijado.

Figura 3. Para fijar el tejido meristemático de los ápices radicales del bulbo de la cebolla se selecciona tres
raíces cuya longitud sea de 2 a 3 cm, con una tijera o pinza se cortan.

Maceración.

Una vez fijado el tejido debe ser ablandado y separadas sus células. Para ello, es
necesario romper la pared celular que mantiene unidas las células; si esta se destruye las
uniones desaparecen quedando las células aisladas. El HCl al 50% produce ese efecto, y
a esta concentración permite el grado adecuado de ablandamiento e hidrólisis del tejido.

En una cápsula de Petri, se coloca una gota de HCl al 50%, y con ayuda de una pinza, se
sumerge en ella una raicilla por un período de 10 minutos. Transcurrido los minutos, se
lavan las raíces con agua destilada dos o tres veces, para dejarlas en agua reposar.

Coloración.

Para observar las fases de la mitosis, es necesario observar los cromosomas en sus
diversos desplazamientos. El colorante aceto-orceína es una substancia que se ocupa
para teñir los cromosomas y verlos en sus distintas fases en división. Con esta técnica de
tinción se ven los cromosomas impregnados por la orceína en color morado y el resto de
las estructuras celulares de otro color. Primero se debe limpiar tres porta objetos y cubre
objetos con etOH 70% para desengrasarlos. Se secciona el ápice de una raicilla, ya
macerada. Se coloca sobre una gota pequeña de colorante aceto-orceína, en un porta
objetos, dejando teñir por 5 minutos.

Si la preparación tiende a secarse se le añade otra gota pequeña del colorante. Ver
Figura 4.
   11

Figura 4. Raices teñidas con orceina.

Squash.

El squash es una técnica de aplastamiento y dispersión del tejido. Con este último
procedimiento se da por hecha la preparación una lámina microscópica permanente o
semipermante. La técnica consiste en cubrir la preparación con un cubre objetos. Se deja
caer sobre la muestra tapada el borrador de un lápiz o el mango de una pinza de
disección, de modo que la preparación se extienda debajo del cubre objetos (Ver Figura
5).

Figura 5.Se debe sostener el cubre objeto por el borde, para evitar el desplazamiento de lámina al momento
de dejar caer el lápiz o el aguja de disección.

Se coloca la lámina dentro de una toalla doblada de papel absorbente. Se elimina el

exceso de colorante, tocando con cuidado el área alrededor del cubre objetos y se
procede a realizar el squash, presionando suavemente con el pulgar, por encima del
papel, el cubre objetos, evitando el desplazamiento y ruptura del mismo. Ver figura 6.

Figura 6. Ubicación de lamina cubreobjetos por técnica de squash.

Se visualizan los procesos de mitosis en el microscopio, como se muestra en la figura 7.

Figura 7
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PREGUNTAS DE ANÁLISIS DE ESTE LABORATORIO.

DE RESPUESTA A LOS SIGUIENTES INTERROGANTES ARGUMENTANDO CON SUS
PROPIAS PALABRAS, UTILICE LOS CONCEPTOS TRABAJADOS EN LA GUÍA,
ILUSTRE Y DESCRIBA SEGÚN CORRESPONDA:

1. En el siguiente dibujo del microscopio, señale sus partes

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2. El término "mitosis" viene de la palabra griega que significa "hilo". Explique por qué
esta palabra puede ser útil en la descripción de este proceso de división nuclear.
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3. Explique cómo el proceso de la mitosis ayuda a un organismo a crecer en tamaño.
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4. ¿Por qué se utilizan las raíces de Allium cepae para la visualización de la mitosis?
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5. Que significa el nombre científico o clasificación taxonómica de un ser vivo?

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6. Con que tinciones se realiza la visualización de los cromosomas de Allium cepae?

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7. ¿Por qué debe dejarse crecer los meristemos de cebolla y analizarlos en fresco?
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8. Explica cómo mitosis conduce a dos células hijas, cada uno de los cuales es
diploide y genéticamente idéntica a la célula original.
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9. ¿Qué función y cuáles son los componentes del citoesqueleto involucrados en el

proceso de mitosis?
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10. ¿Qué actividades están sucediendo en la célula durante la interfase?

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11. Realice un dibujo de una célula en interfase, con todos sus organelos.
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12. ¿Cómo se diferencian en la mitosis las células de plantas y animales?

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13. ¿Cómo la mitosis vegetal acomoda una pared celular rígida inflexible?
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14. ¿Cuál es el papel del centrosoma (el área que rodea los centriolos)?
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¿Esta área es necesaria para la mitosis?

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DE ACUERDO AL ENUNCIADO, SEA BREVE,CONCRETO Y CONCISO

RESPECTO A CADA FASE:
1. Interfase
• Describir el contenido de un núcleo durante la interfase.
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• ¿Está nucléolo y una membrana nuclear presente en la célula?

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• ¿Qué término se utiliza para describir los contenidos nucleares durante la

interfase?
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• ¿Qué eventos importantes se producen en los filamentos de cromatina durante la

interfase?
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• Realice aquí la visualización de microscopio.(EN LABORATORIO)

2. Profase
• ¿Son los cromosomas ahora visible durante la profase?
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• Describir los cambios que han ocurrido en el nucléolo y la membrana nuclear de

interfase a la profase.
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• Explique por qué cromosomas ahora se pueden observar pero no eran

observables durante la interfase.
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• Realice aquí la visualización de microscopio.

3. Metafase
• Describir donde los cromosomas se encuentran ahora en relación a la célula.
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• ¿Puede evidenciar la duplicación del cromosoma (replicación) ahora se observa?

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• ¿Cómo se llaman las fibras que se hacen visibles durante esta fase?
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• ¿Qué término se utiliza para describir la estructura en la que cada fibra se une a
un cromosoma?
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• Realice aquí la visualización de microscopio.

4. Anafase
• Describir lo que está ocurriendo a cada par de cromosomas durante la anafase.
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• Hacia qué área de la célula son los cromosomas se dirigen?

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• ¿Qué estructura es responsable del movimiento de los cromosomas durante esta

fase?
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__________________________________________________________________
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• Realice aquí la visualización de microscopio.

5. Telofase / Citocinesis
• ¿Qué partes celulares comienzan a aparecer durante esta fase?
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• ¿Cuántas células ya han formado a partir de una célula original?

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__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
_______________________________________________________________.

• Realice aquí la visualización de microscopio.

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BIBLIOGRAFIA:
1. Chromosomes in root tips, David B. Fankhauser, Ph.D., University of Cincinnati
Clermont College, Lab protocol, Dec (2008)
2. Mitosis, Meiosis and Genetics, J. L. Stein Carter & D. B. Fankhauser, Genetics, 18
Dec (2010).
3. Alberts, Bruce, Alexander Johnson, Julian Lewis, Martin Raff, Keith Roberts and
Peter Walter. Molecular Biology of the Cell. 5th ed. New York: Garland Science,
Taylor and Francis Group, LLC, 2008.
4. Brooker, Robert. Genetics: Analysis and Principles. New York: McGraw-Hill
Publishing, 2005.
5. Cooper, GM. La Celula. Editorial Marban. Sexta Edicion. 2014.
6. De Robertis, E. Fundamentos de Biología celular y Molecular de De robertis.
2004. 4a ed. Ed. El atenco. Buenos Aires, Argentina. pp. 321-337.
7. Karp, G. 2006. Biología Celular y Molecular: Compuestos y experimentos. 4a ed.
Ed. Mcgraw-Hill Interamericana. pp. 1320-1340.
8. Lodish, Harvey, Arnold Berk, S. Lawrence Zipursky, Paul Matsudaira, David
Baltimore and James Darnell. Molecular Cell Biology. 4th ed. New York: WH
Freeman and Company, 2000.

PAGINAS WEB DE CONSULTA:

• http://www.marietta.edu/~biol/introlab/Onion%20root%20mitosis.pdf
• http://staff.jccc.net/pdecell/celldivision/oniontip.html
• http://www.wisc-online.com/objects/ViewObject.aspx?ID=BIO204
• Universidad Nacional de Formosa (Noviembre 1998). Puntas de Raíz de Cebolla
online, [en línea]. Argentina. Consultado el 8 de abril de 2015. Disponible en:
http://www.biologia.arizona.edu/cell/act/onion/01.html
• Cortés, J. A. (2001). Recursos didácticos para Biología. Mitosis en Raíz de
Cebolla, [en línea]. Consultado el 8 de abril de 2015. Disponible en:
http://www.joseacortes.com/practicas/mitosis.html