COMPONENTES DEL MEDIO DE herramienta internacional importante en la

CULTIVO Y PREPARACIÓN selección, cruzamiento, control de

enfermedades y producción en masa de
Noriega P. Danys D1. Bellozo P. Duván
cultivos de cosecha e involucra diferentes
A1. Jaraba Jesús 1. Martínez B. Jose F1
plantas en agricultura, horticultura,
Beltrán Herrera Javier.2 forestales y frutales.
1 La ciencia del cultivo de tejidos vegetales
Estudiantes de VII semestre de Biología,
2 debe su origen a la investigación sobre
Bsc Msc Msc Phd
hormonas que controlan el crecimiento y
Universidad de Sucre desarrollo vegetal. Este conocimiento se
Facultad de Educación y Ciencias combinó con las técnicas básicas de
microbiología por las cuales los
Línea de profundización Biotecnología microorganismos se hacen crecer en
RESUMEN medios estériles para la producción de
microorganismos e identificación. Desde
Los medios de cultivo para la estas dos fuentes provino la tecnología por
propagación in vitro constituyen un la cual las plantas u órganos de plantas se
elemento fundamental para el cultivo in pueden multiplicar en gran número, o su
vitro de células, tejidos y órganos para crecimiento individual controlado,
lograr el desarrollo de los mismos in vitro.
haciendo crecer pequeños trozos de tejido
Los medios de cultivo tienen una serie de
vegetal sobre una receta precisa de
componentes generales y específicos cuya
nutrientes en un recipiente estéril.
presencia y concentración estará en
dependencia del objetivo que se persiga en El cultivo de tejidos ha sido considerado
su utilización. Los medios de cultivo están durante mucho tiempo como una mezcla
constituidos por sustancias minerales, de ciencia y arte. Fue considerada
vitaminas, aminoácidos, nutrientes, inicialmente como una técnica
azúcares, reguladores del crecimiento y particularmente difícil de aprender. Sin
otros elementos. Teniendo en cuenta lo embargo, estas dificultades de los
anterior, la práctica realizada consistió en
comienzos están hoy en día prácticamente
la preparación de un medio basal (MB) y
superadas gracias a factores como la
un medio Murashige-skoog (MS),
disponibilidad de antibióticos, los medios
tomando las soluciones madres o stocks ya
preparadas. de composición definida, las instalaciones
asépticas (salas de cultivo limpias, cabinas
PALABRAS CLAVES : Vitaminas, de flujo laminar, incubadoras estériles),
nutrientes, medios de cultivo, dispositivos de cultivo (botellas con
componentes, elementos. tapones filtrantes, placas de Petri
ventiladas).
INTRUDUCCIÓN
Los avances técnicos y la aparición de un
El cultivo de tejido vegetal fue buen número de compañías comerciales de
desarrollado a partir de la investigación de suministro de medios, sueros, equipo y
botánicos y fisiólogos vegetales desde líneas celulares han hecho del cultivo
1950. Actualmente se ha convertido en una celular una tecnología con buena
 (1)
reproducibilidad.
El cultivo de tejidos, como técnica,
consiste esencialmente en aislar una
porción de la planta (explante) y
proporcionarle artificialmente las
condiciones físicas y químicas apropiadas
para que las células expresen su potencial
intrínseco o inducido. Es necesario además
adoptar procedimientos de asepsia para
mantener los cultivos libres de
contaminación microbiana. (2)
EL objetivo de esta práctica fue conocer la
forma de preparación y función de los
medios de Murasshine y Skoog para el
cultivo de tejidos vegetales.
METODOLOGIA
La práctica se realizó en grupos, para esto Tabla 1. Preparación del medio con
fueron divididos 3 grupos de trabajo de 3 relación a las concentraciones.
y 4 estudiantes cada uno, al cual se le
asigno preparar diferentes medios
nutritivos a partir de soluciones madres
realizadas la práctica anterior, luego de
esto se aplicó un procedimiento general
para todos los grupos el cual consistió en:
1. Pesar las cantidades de reactivos
empleando concentraciones
diferentes de acuerdo con la tabla:

Imagen 1. Preparación de los

componentes del medio
Por otro lado, se separaron tres grupos,
compuesto por 3 recipientes para cada una
de las concentraciones , 3 para cada
concentración para zanahoria , 3 para
tallos y 3 para hojas.
Luego con base en la tabla, los 120 ml
fueron repartidos en los recipientes de 20
ml cada uno.

Figura 3. Medios con distintas

concentraciones de hormona 2,4 D con tres
Imagen 2. Embasamiento de los medios
repeticiones para el género Dioscórea (
en los recipientes
hoja y tallos ) y de la familia Apiaceae
Posteriormente se envolvieron en papel (zanahoria).
aluminio, fueron marcados y llevados a la
ANÁLISIS DE RESULTADOS
autoclave para su esterilización.
Los medios de cultivo están constituidos
RESULTADOS
por componentes inorgánicos, los cuales
A continuación se muestran los resultados son suministrados en cantidades
obtenido en la práctica realizada, la relativamente grandes (macronutrientes) y
imagen 3 muestra los medios preparados otros añadidos en menor cantidad
según la metodología descrita (micronutrientes).
anteriormente Dentro de los macronutrientes, se
encuentran iones
de nitrógeno (N), potasio (K), calcio (Ca),
fósforo (P), magnesio (Mg) y azufre (S).
El nitrógeno se adiciona al medio de
cultivo en forma de nitrato o iones amonio,
o la combinación de ambos iones, el
sulfato de magnesio (Mg SO4 7H2O)
satisface tanto el requerimiento de carbohidratos, vitaminas, aminoácidos,
magnesio como el de azufre, el fósforo extractos naturales y reguladores del
puede adicionarse en cualquiera de las crecimiento vegetal.
formas NaH2PO4.H2O ó KH2PO4, el
En cuanto a los carbohidratos tenemos que
potasio es un catión que se agrega en
son indispensables en la nutrición que es
forma de KCl, KNO3, ó KH2PO4, el
desarrollada en las condiciones in vitro a
calcio se adiciona con Ca Cl2.2H2O,
partir en los diferentes órganos y tejidos
Ca(NO3)2.4H2O o la forma anhidra de
son ampliamente heterótrofos con respecto
cualquier sal y el cloro se presenta en
al carbono debido a la ausencia o
forma de KCl ó CaCl2.
insuficiencia de asimilación clorofílica,
Los micronutrientes, que son añadidos a por lo cual resulta indispensable añadir
los medios de cultivo son hierro azúcares a los medios de cultivo como
(Fe), níquel (Ni), cloro (Cl), manganeso fuente de energía y reguladores osmóticos.
(Mn), cinc (Zn), boro (B), cobre (Cu), y La sacarosa es el azúcar empleado
molíbdeno (Mo). Estos elementos junto universalmente. Le siguen en importancia
con el carbono (el C), oxígeno (O) e glucosa, maltosa, rafinosa, fructosa y
hidrógeno (H) constituyen los 17 galactosa entre otros.
elementos esenciales. Estos
Por otro lado las vitaminas Son necesarias
micronutrientes aunque son requeridos en
para llevar a cabo una serie de reacciones
menor cantidad son necesarios para una
catalíticas en el metabolismo y son
adecuada actividad metabólica de las
requeridas en pequeñas cantidades. Para
células vegetales.
este caso las vitaminas empleadas fueron :
Luego el Fe es añadido en forma de
Piridoxina (Vitamina B6): Esta es añadida
quelato cuyas moléculas son capaces de
como hidrocloruro de Piridoxina
retener un ión de un metal con varias
(Piridoxina-HCl). Participa como
uniones químicas formando un anillo
coenzima en el metabolismo de los
complejo (un quelato) como el EDTA
aminoácidos, entre ellos el triptófano,
(ácido etilendinitrotetraacético), que
precursor de AIA y ácido nicotínico,
utilizado en bajas concentraciones
además de favorecer la formación de
estimula el crecimiento al hacer disponible
raíces.
en bajas cantidades este elemento.
El medio de cultivo más utilizado es la Myo-inositol: No es propiamente una
formulación de las sales Murashige y vitamina, sino un azúcar-alcohol. Tiene un
Skoog (1962) el cual fue desarrollado efecto sobre la proliferación de tejidos y
inicialmente para el crecimiento de callos sobre la activación de la organogénesis.
de tabaco y en la actualidad se emplea
como medio de cultivo basal para un grupo También acompañando este medio de
importantes de plantas de interés para la cultivo se encuentra los agentes
gelificantes como el agar, este se ha
alimentación y con fines ornamentales. (3)
convertido en el material de soporte más
Dentro de los componentes orgánicos del ampliamente usado, pues provee el medio
medio de cultivo se encuentran de un excelente gel húmedo que sirve
como soporte al explante. También es
utilizado el gelrite o fitagel.
El agua es de vital importancia, la calidad
del agua empleada para realizar los medios
de cultivo debe ser destilada. Siempre que
se realicen trabajos con cultivo de tejidos
y células in vitro el agua a usar debe tener
la mayor calidad posible (desionizada),
debiendo estar entre 0.5 a 2 mS/ cms.
Por último también son indispensables
para los medios de cultivo reguladores del
crecimiento vegetal como auxinas,
citokininas, giberelinas ácido abscísico y 2. White (1963)
Es uno de los medios, si no el mas, diluido
etileno. Además de estas sustancias
de que se dispone, y por lo tanto de uso
naturales de la planta existen otros
complementario al MS. Se elaboró para
productos que pueden utilizarse como
cultivo de raíces de tomate.
reguladores del crecimiento para el
cultivo in vitro. (4)
CONCLUSIÓN
De acuerdo con lo realizado en la presente
práctica se concluye que es de gran
importancia preparar adecuadamente los
medios de cultivo, añadir la cantidad de
solución exacta y disolverla correctamente
para obtener los resultados esperados.
PREGUNTAS
1. ¿Qué otros tipos de medios de
cultivo de tejidos vegetales
diferentes al MS se conocen y
como están constituidos?
La mayoría de los medios que se utilizan
tienen el nombre dado por quien los
formuló; otros surgen de modificaciones
sobre los medios genéricos, que son los 3. B5 (Gamborg, 1970-1976)
más conocidos. Entre los primeros Gamborg trabajó activamente en la
podemos citar: elaboración de medios, a los que dio
diferentes números. EL B5 fue formulado
1. Knudson (1946) para cultivo de callo de soja.
El primer medio conocido es el adecuado
para orquídeas. Bastante pobre en sales.
 característica principal y distintiva de los
medios hasta entonces formulados es la
gran diversidad de nutrientes que contiene,
muchos de ellos no esenciales para el
desarrollo de las plantas, pero que si han
resultado limitantes en el cultivo de sus
protoplastos. (5)
2. ¿Hay medios específicos para
algunas especies vegetales?
Nombre 5 especies y diga ¿cómo
o porque son diferentes?
La producción de plantas y de metabolitos
puede realizarse mediante cultivos de
tejidos vegetales diferenciados o
indiferenciados.
4. WPM (Lloyd y McCown 1980)
Cultivos diferenciados: Los métodos de
Se elaboró para el cultivo de tallos de
regeneración de plantas por cultivo in vitro
plantas leñosas y arbustivas, tipos de
incluyen la embriogénesis somática y la
plantas para las que está especialmente
organogénesis.
adaptado.
• Embriogénesis somática Los
Es un medio considerado como de baja
embriones que no resultan de la
concentración en sales NH4+ (5 mM),
fusión de gametos se definen como
NO3- (9.7 mM) y Cl- (1.3 mM), y es
embriones somáticos, asexuales o
utilizado para el cultivo de plantas leñosas
adventicios. Son estructuras
(Lloyd y McCown, 1981) que presentan
bipolares con un eje radical-apical,
toxicidad en altas concentraciones de
no poseen conexión vascular con el
sales. Parada y Villegas (2009) afirman
tejido materno y son capaces de
que el CaCl2 es considerado tóxico para
crecer y formar plantas normales
especies leñosas, motivo por el cual
• Organogénesis: La organogénesis
reformularon el medio WPM como
consiste en la formación de un
WPMm, el cual carece de cloruro de
primordio unipolar a partir de una
calcio.
yema y el desarrollo de ese
5. KM8p (Kao y Michayluk primordio en brotes vegetativos
1982) que luego enraízan vía la
formación y proliferación de
Kao y Michayluk abordaron la dificultad meristemas radicales. Los brotes
de lograr la viabilidad los protoplastos pueden formarse directamente del
cultivados in vitro, hasta entonces muy explanto (organogénesis directa) o
limitada, desde el punto de vista de la indirectamente a partir de callos.
optimización del medio, y formularon
varios; el más exitoso fue el KM8p. Su Cultivos indiferenciados: Los cultivos
vegetales indiferenciados se obtienen a
partir de órganos o tejidos organizados como color, friabilidad, dureza, tamaño,
cultivados en un medio nutritivo apropiado grado de diferenciación.
(sólido o líquido) que desdiferencian ante
También, hay reportes que demuestran que
la presencia de auxinas exógenas.
cualquier cultivo in vitro puede alcanzar
Las principales especies vegetales sujetas producciones tan altas o más de un
a esta son: Solanum tuberosum, Daucus determinado compuesto respecto a las que
carota, Cannabis sativa, Dioscorea y presenta una planta desarrollada en
Manihot esculenta. (6) condiciones silvestres, sin importar de qué
parte de la planta se haya establecido el
3. ¿Cuáles son algunas fuentes de cultivo (Petiard y Bariaud 1985). Así, las
contaminantes orgánicos e condiciones fisicoquímicas y nutricionales
inorgánicos que se pueden actúan sobre los cultivos para orientar la
presentar en los medios de expresión genética de las células a
cultivo? diversos grados de diferenciación que
Orgánicos: bacterias, levaduras, hongos, proporciona a los cultivos características
virus y microplasmas. propias y únicas, aun cuando éstos
provengan de una misma planta y todavía
Inorgánicos: Los metales son necesarios más, de un mismo explante. (8)
para la vida y se utilizan como
micronutrientes para los seres las plantas.
Sin embargo, cuando la concentración de
5. ¿Cuál cree usted que son las
estos micronutrientes en el medio posibles ventajas o desventajas
ambiente empieza a alcanzar unos límites de usar medios sólidos, líquidos o
superiores a los necesarios para la vida ambos en el proceso de
empiezan a ser tóxicos y, por lo tanto, micropropagación de tejidos
empiezan a ser considerados como vegetales?
contaminantes. (7) El crecimiento de los explantes y la tasa de
formación de brotes durante
micropropagación puede ser influenciada
4. ¿Cuáles podrían ser las por la naturaleza física del medio de
evidencias de que los cultivos de cultivo. Comúnmente es conveniente
tejidos y/o el medio puedan solidificar el medio de cultivo con agar u
experimentar cambios otro gelificante, para así asegurar que el
bioquímicos con el tiempo? material vegetal se mantenga sobre la
Hay estudios donde se observa que callos superficie del medio, de tal manera de
establecidos a partir de diferentes órganos proveer suficiente aireación a los
pero de una misma planta varían en explantes. Por otra parte, en medios
apariencia y presentan características sólidos los explantes pueden ser vistos
únicas (Petiard y Bariaud 1985, Holden et fácilmente para ser manipulados y los
al 1988). Pero más aún, callos procedentes brotes y raíces crecen de forma ordenada
de un mismo explante también difieren en en un medio estacionario.
su morfología y características intrínsecas
Ventajas: Medios Líquidos sobre medio estas la Arrabidaea chica, es un arbusto
sólido. trepador que puede llegar a los tres metros
de alto, originario de los bosques
a) Reducido costo del medio.
tropicales de América. En su composición
b) Menor tiempo de preparación del medio química se han hallado flavonoides, ácido
de cultivo. fenólico, taninos, hierro y antocianinas. Es
por ello, que un medio empleado para
c) Se evitan las impurezas de los agentes cultivar in vitro se basaría en la
solidificantes orgánicos (agar). composición de nutrientes que ofrece el
d) Aumenta la eficiencia del trabajo en método WPMm propuesto por Parada y
cámara del técnico operador. Villegas (2009). (10)
e) Permite un uso más eficiente del espacio
en la sala de cultivo.
f) Disminuye el consumo de energía.
g) Simplifica el manejo a gran escala.
h) Acelera el crecimiento vegetal.
Desventajas:
a) Complejidad y costo de los sistemas
mecánicos necesarios para manejar el
oxígeno y relaciones hídricas. Los medios
líquidos deben ser agitados, rotados o
aireados por otros medios que requieren
aparatos o frascos de cultivo especiales.
b) Hiperhidricidad o pobre calidad de las
plantas que causa pérdidas durante la Medio propuesto. Basado en las
aclimatización. características de la planta y teniendo
como referencia literatura.
c) Pérdidas por contaminación debido al
uso de contenedores de mayor tamaño. BIBLIOGRAFIA

d) Falta de instrumental y protocolos 1. http://www.ucv.ve/fileadmin/user

_upload/facultad_farmacia/catedra
actualizados. (9)
Micro/10_Preparaci%C3%B3n_d
e_medios_de_cultivo.pdf
2. http://exa.unne.edu.ar/biologia/fisi
6. Proponga un medio ideal para ologia.vegetal/CultivoTejidos.pdf
cultivar in vitro una planta de su
3. Krikorian A. D. 1991. Medios de
interés.
cultivo: generalidades y
La familia Bignoniaceae comprende 120
preparación Regeneración de
géneros de amplia distribución en las
plantas en el cultivo de tejidos.
regiones tropicales de todo el mundo, entre
Embriogénesis somática y
 organogénesis. En: Roca, WM y Facultad de ciencia agrarias.
Mroginski LA (eds). Cultivo de Valdivia. Chile. 2006.
Tejidos en la Agricultura: 10. Martínez Villegas Ylvi et al.
Fundamentos y Aplicaciones. Efecto de sales inorgánicas del
CIAT, Cali pp 41-59. medio de cultivo en el crecimiento
4. Litz RE & Jarret RL. 1991. de Pascuita (Euphorbia
Regeneración de plantas en el leucocephala Lotsy). 2015.
cultivo de tejidos. Embriogénesis Revista Fito tecnológica. Volumen
somática y organogénesis. En: 38. México.
Roca, WM y Mroginski LA (eds).
Cultivo de Tejidos en la
Agricultura: Fundamentos y
Aplicaciones. CIAT, Cali pp 143-
172.
5. Gamborg OL, Phillips GC. 1995.
Springer Verlag. Tejido de células
vegetales y cultivo de órganos.
Métodos fundamentales.
6. Protocolos y técnicas. Soluciones
cultivos celulares. Cultek. Tomado
de:
http://www.cultek.com/inf/otros/s
oluciones/soluciones-
cultivos_celulares-protocolos.pdf
7. Folgueras, Maryluz. La
contaminación microbiana en la
micropropagación in vitro de las
raíces y tubérculos tropicales/
Maryluz. Folgueras. -Tesis para
aspirar al título de Master en
Agricultura Sostenible (Mención
Sanidad Vegetal), L. Herrera,
Tutor. Santa Clara, Villa Clara.
Universidad Central “Marta
Abreu” de Las Villas, 2000, -71 h.
8. Cultivo de células y tejidos
vegetales: Fuente de alimento para
el futuro. Revista digital
Universitaria. 2005. Volumen 6
Número 11. ISSN: 1067-6079.
9. Muñoz Manuel. Estudio de
sistemas de cultivo in vitro.
Universidad austral de Chile.