Zarzaparrilla
Zarzaparrilla
Zarzaparrilla
DE MÉXICO
T E S I S
DIRECTOR DE TESIS
M. EN C. LUIS SÁNCHEZ SÁNCHEZ
ASESOR DE TESIS
Q. CARLOS SALVADOR VÁLADEZ SÁNCHEZ
A mis compañeros del Laboratorio Elena, Hugo, Saraí, Iván, Viri y Mauricio, por
compartirme sus conocimientos, hacerme descubrir un mundo nuevo y su apoyo en
el laboratorio.
A mis padres Antonina y Luis, por ser mí sustento fuerza e inspiración, porque siempre
han creído en mí y me han alentado a luchar para alcanzar mis metas. Gracias por sus
consejos que han hecho de mí una gran persona, porque a su lado soy invencible.
A mi hermano Héctor que ha estado conmigo desde el inicio de mi vida para cuidarme
apoyarme y me enseñó a ser fuerte independiente, tolerante y compasiva. Recuerdo que
desde pequeños me dabas ánimos para ser grande y llegar aquí. Te amo.
A mi tía Alicia y mis queridos primos Nahúm, Bere y Ana, por ayudarme, apoyarme y
siempre confiar en mí, porque sin su ayuda y sus ánimos yo no podría seguir luchando.
A mama Caro porque me enseño que en esta vida hay que luchar y esforzarse para lograr
nuestras metas, porque ella me di el don de ayudar a los demás.
Yaz, Liz, Magui, Yayis, Karla, Chendo, Chino, Mazto, Alan, Ricardo, Peter y Omar,
que se convirtieron en mis amigos y mi familia, siendo parte fundamental de mi vida a lo
largo de estos años y porque me mostraron que la escuela no es la vida sino que la vida es
una escuela y hay que aprender a vivir mientras aprendes a estudiar. ¡Gracias pandilla!
A Yaz por ser una gran amiga, cuidarme y confiar siempre en mí, y a sus papis por darme
tanto cariño y estar conmigo todos estos años.
A Chendo por cuidarme, enseñarme a ser mejor, perdonar mis errores y ayudarme a ser
mejor persona.
A Nadia quien fue una amiga que me quiso y a la que yo quise mucho y a doña Paty por
animarme a seguir estudiando y creer que yo podría lograr todo esto.
“Hay una fuerza motriz más poderosa que el vapor, la electricidad y la energía atómica:
La voluntad.”
Albert Einstein.
Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
CONTENIDO
Pág.
1. ABREVIATURAS i
2. RESUMEN 1
3. INTRODUCCIÓN 2
4. MARCO TEÓRICO 4
4.1.2.3 Terpenos. 7
4.2. Fitoquímica 8
4.4.6.3 La semilla 16
4.5 La célula 19
4.8.1 Necrosis 23
4.8.2 Apoptosis 24
Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
4.9 Cáncer 26
4.9.1.2.1 Cirugía 30
4.9.1.2.2 Radioterapia 30
4.9.1.2.3 Quimioterapia 30
6. HIPÓTESIS 33
7. OBJETIVOS 34
8. MÉTODO 36
9. RESULTADOS 43
11. CONCLUSIONES 57
12. PERSPECTIVAS 58
13. REFERENCIAS 59
14. GLOSARIO 65
Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
íNDICE DE FIGURAS
Contenido Pág.
Figura 3. Terpenos 7
1. ABREVIATURAS
i
Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
2. RESUMEN
1
Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
3. INTRODUCCIÓN
En el caso específico de nuestro país, 70% de los casos se asocia con los tipos de
VPH 16 y 18, siendo éstos los más agresivos. El resto de los casos son provocados
por los tipos 31, 33 y 45. Solo el 1 % de los casos son negativos a este virus.2-4
Al respecto, Las plantas tienen una larga historia de uso en el tratamiento del
cáncer, y juegan un papel muy importante en el descubrimiento y desarrollo de
2
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México es un país con una gran biodiversidad botánica y una amplia tradición en el
uso de la medicina herbolaria. De acuerdo con diferentes fuentes bibliográficas se
concluye que en México se han empleado 238 especies de plantas para tratar
enfermedades consistentes con la sintomatología de cáncer. 7 Entre éstas, existen
reportes que establecen que en los estados de Guerrero, Morelos y Oaxaca se
utiliza una infusión de corteza de Mangifera indica L, para tratar esta enfermedad,
sin embargo, se carece de reportes o estudios científicos al respecto, por lo que es
necesario realizar estudios que permitan evaluar la actividad antitumoral de esta
corteza. Por ello, en el presente trabajo se evaluó la actividad antiproliferativa y
citotóxica de este extracto en cultivos de la línea de cáncer cervicouterino HeLa y
en cultivos de células linfocíticas humanas provenientes de sangre periférica de
donadores sanos.
3
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4. MARCO TEÓRICO
4
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Figura 1. Representación de algunos compuestos fenólicos producidos por las plantas. Imagen tomada de
http://www.google.com.mx/imgres?q=vainillina,+ac+salicilico+y+flavonoides&um
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4.1.2.3 Terpenos
Los terpenos son productos orgánicos naturales constituidos por la unión de dos o
más unidades de isopreno, acopladas por dos dobles enlaces formando un grupo
de compuestos con características propias, como se muestra en la figura 3. Son
típicos constituyentes de los aceites esenciales que determinan la variedad de los
efectos terapéuticos que se presentan; también se encuentran presentes en
algunas especies animales, desempeñando un papel fisiológico importante
(vitamina A, hormonas, etc.).10,15,16,17
Geraniol
7
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4.2. Fitoquímica
La fitoquímica es una rama de la química orgánica que comprende el aislamiento,
separación, identificación y determinación de metabolitos secundarios. 16,17
La fitoquímica trata el tema de la biosíntesis de los metabolitos en las plantas, por
ejemplo: alcaloides, taninos, ceras, aceites, terpenos, entre otros. Esta rama se
desarrolla cada vez más, por tener un alto potencial como fuente de nuevos
medicamentos.13,16
8
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Inglés: Mango
Francés: Manguier
9
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Figura 4. Mapa de la República Mexicana. Las zonas sombreadas son los estados de la República Mexicana
donde se cultiva mango y contribuyen al volumen de exportación nacional de este fruto. Imagen
tomada de http://www.siap.gob.mx/opt/123/77/76.html
11
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c b
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A finales del siglo XIX, el Instituto Médico Nacional comunica que el árbol del mango
es antiescorbútico, antiodontálgico, antiparasitario y astringente, que sirve para
incontinencia urinaria, como depurativo, para dermatosis, diaforético y para
enfermedades exantemáticas.21,23,24
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Esta actividad la presenta el extracto acuoso de las hojas en estudios tanto in vivo
como in vitro; el extracto etanólico de la corteza de mango se considera de acción
débil; pero el extracto acuoso, etanólico y metanólico de la semilla presenta una
fuerte actividad contra bacterias Gram positivas en estudios in vitro y actividad
antimicótica contra Candida albicans.24,32-36
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El estudio más reciente se realizó con el aceite de las hojas de Mangifera indica var.
Coquino, se evaluó su efecto antiproliferativo y citotóxico en líneas celulares
tumorales humanas de mama MCF-7, leucemia K562, ovario NCI.ADR y OVCAR03,
15
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pulmón NCI.460, melanoma UACC.62, riñón 786-0, próstata PCO.3 y colon HT-29.
Obteniendo una fuerte actividad contra NCI-ADR/RES, OVCAR-3 (ovario), NCI-
H460 (pulmón), 786-0 (riñón) y UACC-62 (melanoma) y una actividad moderada
contra HT-29 (colon), PC-3 (próstata) y MCF-7 (mama).43
4.4.6.3 La semilla
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Figura 6. Estructuras de algunos compuestos encontrados en las diferentes partes del árbol de mango.
Imagen creada por Karina Castro.
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4.5 La célula
La teoría celular, propuesta en 1839 por Matthias Jakob Schleiden y Theodor
Schwann, postula que todos los organismos están compuestos por células, y que
todas las células derivan de otras células precedentes. La célula es la unidad más
pequeña que conforma a los seres vivos. Las células se distinguen por su tamaño
(Los diámetros de la mayoría de las células oscilan entre 1 y 100 µm), forma y sus
actividades, pero todas presentan una membrana plasmática, una región de
información genética y citoplasma.46-48
La membrana plasmática define a la célula como una entidad individual. Esta
delgada membrana separa las actividades metabólicas y los eventos del exterior
pero sin aislar el interior. 46-48
En los organismos pluricelulares las células guardan una estrecha relación entre
sí, organizándose en una estructura jerarquizada y colaborando para mantener un
estado de homeostasis en donde las condiciones de un ambiente relativamente
constante son sostenidas para sobrevivir. Sin embargo, cada uno de los diferentes
linajes de células que conforman al organismo tiene un micro ambiente particular en
el cual se reúnen las condiciones necesarias para el establecimiento de una
densidad celular requerida para conservar la estructura de un tejido o de un órgano.
46-48
19
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Los controles internos en la célula son ejecutados por proteínas que no permiten
que se presenten alteraciones en las células. El ciclo celular (figura 7) comprende
dos periodos bien definidos:
1. La interfase (etapas G1 – S y G2), es el período comprendido entre divisiones
Figura 7. Ciclo celular, se observa la obtención de dos células hijas con la misma información genética.
Imagen tomada de http://www.google.com.mx/imgres?um=1&hl=es&biw=1024&b
21
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1.1 La etapa G1, del inglés Growth o Gap1, es la primera fase del ciclo celular, en
la que existe crecimiento celular con síntesis de proteínas y de ARN. Es el
período que trascurre entre el fin de una mitosis y el inicio de la síntesis de ADN.
Tiene una duración de entre 6 y 12 h, y durante este tiempo la célula duplica su
tamaño y masa debido a la continua síntesis de todos sus componentes.48,52
1.2 La etapa S (del inglés Synthesis) representa "Síntesis". Es la segunda fase del
ciclo, en la que se produce la replicación o síntesis del ADN, como resultado
cada cromosoma se duplica y queda formado por dos cromátidas idénticas. Con
la duplicación del ADN, el núcleo contiene el doble de proteínas nucleares y de
ADN que al principio. Tiene una duración de unos 6-8 h.48-50
1.3 La etapa G2 del inglés Growth o Gap2, es el tiempo que transcurre entre la fase
S y el inicio de la mitosis (la célula se prepara para la mitosis). Tiene una
duración entre 3 y 4 h. Termina cuando la cromatina empieza a condensarse al
inicio de la mitosis.48,51,52
2. La división celular (etapa M). Esta tiene lugar por meiosis o mitosis.
Como todo proceso orgánico, el ciclo celular está sujeto a regulación. Ésta es
realizada en sitios específicos llamados puntos de control, que pueden frenar o
disparar diversos procesos que le permitan a la célula proseguir con su ciclo normal
de replicación del material genético, crecimiento y división. La función de la
22
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4.8.1 Necrosis
El origen de las alteraciones necróticas es un desequilibrio osmótico. La
permeabilidad de la membrana plasmática se ve alterada y se facilita un flujo de
iones anormal al interior de la célula, principalmente Ca2+, acompañado de entrada
de agua. Esta descompensación provoca un aumento en el tamaño de la célula y la
dilatación de algunos organelos como la mitocondria y el retículo endoplásmico.51
23
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Figura 8. Necrosis celular, cambios morfológicos que sufre la célula durante una muerte necrótica. Imagen
tomada de https://www.google.com.mx/search?gs_rn=16&gs_
4.8.2 Apoptosis
El desencadenamiento de la apoptosis puede ser consecuencia de la alteración de
la membrana mitocondrial, en cuyo caso estaremos en la vía intrínseca u originarse
por la unión de determinados ligandos con sus respectivos receptores en la
superficie celular, vía extrínseca. A continuación se explica cada vía.51,52
Vía intrínseca
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Vía extrínseca
B
A
Figura 9. Representación de las vías de la apoptosis. A vía intrínseca; B vía extrínseca. Imagen tomada de
http://www.google.com.mx/imgres?um=1&hl=es&biw=1024&bih=543&tbm=isch&tbnid=
25
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4.9 Cáncer
Cáncer es un término que se usa para enfermedades en las que células anormales
genéticamente, se dividen sin control y pueden invadir otros tejidos. Las células
cancerosas pueden diseminarse a otras partes del cuerpo por el sistema sanguíneo
y por el sistema linfático (metástasis).54-56
El cáncer se concibe como un proceso de múltiples fases, en las que sucede una
serie de alteraciones genéticas en el interior de la célula, que descontrolan el
crecimiento, la diferenciación y la muerte celular, conduciendo a la malignización
celular.53 El material genético (ADN) de una célula puede dañarse o alterarse, lo
cual produce mutaciones (cambios) que afectan el crecimiento y la división normal
de las células. Cuando esto sucede, las células no mueren cuando deberían morir
y células nuevas se forman cuando el cuerpo no las necesita. Las células que
sobran forman una masa de tejido conocido como tumor (figura 10). Algunos
cánceres no forman tumores, por ejemplo, la leucemia, que es un cáncer de la
médula ósea y de la sangre.54
Hay más de 100 diferentes tipos de cáncer. La mayoría de los cánceres toman el
nombre del órgano o de las células en donde empiezan; por ejemplo, el cáncer que
empieza en el colon se llama cáncer de colon, el que comienza en el pulmón se
conoce como cáncer de pulmón, y así sucesivamente.55-57
El cáncer a nivel mundial ocupa el primer lugar entre las causa de mortalidad para
todos los grupos de edad adulta de ambos géneros; en 2012 fue responsable de
8.2 millones de defunciones a nivel mundial.1,2,3.57
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Figura 10. Arriba, división normal de una célula y eliminación de célula dañada (apoptosis). Abajo Pérdida
del control de crecimiento normal de las células, generación de un tumor. Imagen tomada de
http://www.cancer.gov/espanol/cancer/que-es
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Figura 11. Vista normal del epitelio del cérvix y neoplasias intraepiteliales cervicales (NIC) de grado 1, 2 y 3.
Imagen tomada de http://citotecnologiaucpic.blogspot.mx/
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Otros factores de riesgo que propician el contagio de CaCu son el inicio temprano
de las relaciones sexuales, tener múltiples parejas sexuales, el tabaquismo que se
asocia con un aumento del riesgo de padecer carcinoma epidermoide, presentar
infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), tener historial de
enfermedades de transmisión sexual (Chlamydia trachomatis, virus herpes simple
[VHS] tipo 2, virus de Epstein-Barr), el uso prolongado de anticonceptivos orales, la
multiparidad (tener más de tres partos), tener historia previa de displasia vulvar o
vaginal, antecedentes familiares y otros factores como el uso de dietilestilbestrol (es
un estrógeno sintético utilizado durante años para disminuir el riesgo de aborto en
mujeres embarazadas y para tratar problemas de próstata) aumenta la incidencia
de carcinoma de células claras de cérvix y de vagina.4,6,58,62
29
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4.9.1.2.1 Cirugía
Los procesos quirúrgicos varían según lo avanzada que esté la enfermedad. Puede
implicar una criocirugía o cirugía láser si la lesión es mínima, una conización si tiene
una lesión moderada; una histerectomía para retirar el útero en caso de una lesión
grave. En ocasiones también son extirpados los ganglios linfáticos pélvicos. El
proceso de recuperación varía según el tipo de cirugía que se requiera y se pueden
presentar sangrados e infecciones en las heridas. En algunos casos se requiere
ayuda psicológica para reincorporarse a su vida. En casos de metástasis esta
terapia es ineficiente. 4,62,63
4.9.1.2.2 Radioterapia
La radioterapia usa rayos X de alta energía para destruir las células cancerosas.
Estos rayos X se pueden administrar externamente en un procedimiento que es muy
parecido a la radiografía diagnóstica. Para el cáncer de cuello uterino, este tipo de
radioterapia se administra a menudo con bajas dosis de un medicamento de
quimioterapia llamado cisplatino.2,6,62,63
Entre los efectos secundarios que presenta este tratamiento son problemas
estomacales, nauseas, vómitos, cansancio, irritación de la vejiga, menopausia
prematura, irritación de la zona expuesta a radiación y relaciones sexuales
dolorosas, su acción incide principalmente en células en división. 4,62,63
4.9.1.2.3 Quimioterapia
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6. HIPÓTESIS
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7. OBJETIVOS
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8. MÉTODO
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lavar las células con PBS frío, a continuación se agregaron 3 µL de DAPI dejando
reposar por 5 min en oscuridad, después se lavó nuevamente con PBS frío y colocó
sobre un portaobjetos limpio con 2 µL de medio de montaje, se selló con barniz de
uñas trasparente. Por último se observó en microscopio de contraste de fases y
epifluorescencia.
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En una caja de 24 pozos se sembraron 50 000 células HeLa con 500 µL de RPMI
al 5% de SNT, por 24 h. Los tratamientos se hicieron por triplicado. Posteriormente
se retiró el medio de cultivo y se realizaron los siguientes tratamientos: dos controles
a los que únicamente se les hizo cambio de medio de cultivo, un control para
H2O-EtOH con la concentración empleada para preparar la IC50 correspondiente y
el tratamiento con extracto a la concentración IC50 correspondiente a esta línea
celular. A las 23 h de tratamiento, a uno de los cultivo control se le hizo un nuevo
cambio de medio de cultivo por medio fresco al 1% de tritón X-100 y se dejó que el
ensayo completara las 24 h de tratamiento.
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se aumenta gradualmente la velocidad (300 rpm cada 2 min) hasta llegar a 1500
rpm después de lo cual se dejó centrifugando por 25 min más. Con ayuda de la
pipeta de 1000 µL se retiró el plasma y se colectó el anillo de linfocitos,
posteriormente el paquete celular obtenido de cada tubo fue transferido a tubos
limpios y se resuspendió con 10 mL de PBS (por tubo), se centrifugó a 1500 rpm
durante 5 min, se retiró el sobrenadante y se resuspendió en 1 mL de RPMI - 1640
sin suero. El total de células quedó contenido en un solo tubo con un volumen total
de 4 mL. Se centrifugó la suspensión celular a 1500 rpm durante 5 min, se retiró el
sobrenadante y se resuspendió nuevamente el botón celular en 5 mL de RPMI -
1640 al 20 % de SFB. Se tomó una alícuota de 20 µL, y se determinó el número
celular con ayuda de la cámara de Neubauer.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
con PHA, control positivo al cual en este momento no se agrega tritón X-100, control
para el vehículo al cual se le agrega la cantidad de H2O-EtOH empleada en la
preparación de la concentración IC50 para células tumorales de CaCu HeLa, el
extracto en la concentración IC50 para células tumorales HeLa. Las células
contenidas en cada tubo cónico fueron sembradas en una placa de cultivo de 96
pozos a una concentración de 200,000 células/pozo en un volumen de 200 µL de
RPMI-1640 al 20% de SFB y son incubadas en condiciones de cultivo por 72 h.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
9. RESULTADOS
Determinación de la IC50
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120
100
% de proliferación celular
80
60
y = -1.3344x + 174.05
40 R2 = 0.9234
20
0
0 50 100 150 200 250
µg/mL
Figura 12. Efecto antiproliferativo del extracto acuoso-etanólico de la corteza de árbol de Mangifera indica L.
sobre células de cáncer cervicouterino HeLa, 7500 células fueron sembradas en placas de 96 pozos
y estimuladas por 24 h a concentraciones de 0 a 200 µg/mL del extracto. El porcentaje de
proliferación se cuantifica con la técnica de incorporación de cristal violeta y la IC 50 fue calculada
con ayuda de la ecuación de la recta.
Confirmación de IC50
Con la intención de confirmar la IC50 obtenida para las células HeLa, cultivos de
células HeLa fueron tratadas con 95 µg/mL de extracto y el número celular fue
evaluado mediante la técnica de cristal violeta (Fig.13).
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
120
100
% de proliferación celular
80
*
60
40
20
0
Ctrl H2O-EtOH
H2O-EtOH Mangifera
Mango 95µg/mL
Figura 13. Efecto del extracto acuoso-etanólico de la corteza de Mangifera indica L. sobre el potencial
proliferativo de las células tumorales de CaCu HeLa. Ctrl: células cultivadas con RPMI al 5 % de
SNT. H2O0–EtOH: células cultivadas con RPMI al 5% de SNT y 1% de una mezcla de agua-etanol
60:40. Mango 95 µg/mL: células cultivadas con RPMI al 5% de SNT, 1% de una mezcla de agua-etanol
60:40 y 95 µg/mL de extracto de mango. * indica que existe diferencia significativa con p<0.05 vs
H2O-EtOH ANDEVA, seguido de una prueba de Tukey n=6.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
Figura 14. Micrografías ópticas con iluminación de contraste de fases. Células HeLa tratadas por 24 h con una
concentración de 95 µg/mL del extracto acuoso-etanólico de corteza de Mangifera indica L. En el
control y en el vehículo se observan células con forma poliédrica, citoplasma extendido y núcleo
de forma regular. Algunas células están en división (flechas). Las células tratadas con camptotecina
muestran cambios morfológicos como compactación citoplasmática y nuclear, indicando cuerpos
apoptóticos (cabezas de flecha). Las células tratadas con el extracto de mango presentan una fuerte
compactación celular (cabezas de flecha.
Las células control y las tratadas con el vehículo, muestran la clásica morfología
poliédrica para las células HeLa. Estas células poseen un citoplasma extendido y
mantienen un estrecho contacto entre ellas. El núcleo posee una morfología regular
con uno o varios nucléolos grandes con respecto al tamaño nuclear indicando que
los nucléolos son funcionales. Cuando las células son tratadas con el inductor de
apoptosis camptotecina, algunas células se ven afectadas y su morfología cambia,
46
Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
Las células control y las tratadas con el vehículo, presentan un núcleo con cromatina
laxa y compacta distribuida en el núcleo. Las regiones con intensa tinción
corresponden a cromatina compacta. En ambos casos los núcleos presentan
tamaños similares. Esta tinción también permite observar el arreglo de la cromatina
en forma de cromosomas en aquellas células que están en diferentes fases del
proceso de división (flechas figura 15). Los núcleos de las células tratadas con la
camptotecina presentan cambios que evidencian una compactación de la
cromatina, la cual se puede apreciar por la disminución del tamaño nuclear.
También se pueden observar algunos cuerpos apoptóticos que indican la
fragmentación de la cromatina (cabeza de flecha figura 15). El tratamiento con el
extracto de mango provoca una reducción nuclear y una fuerte compactación de la
cromatina, que está evidenciada por el incremento de la intensidad de la
fluorescencia. Tras este tratamiento, la cromatina se fragmenta dando origen a los
cuerpos apoptóticos (cabezas de flecha figura 15).
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
Figura 15. Micrografía de fluorescencia. Células HeLa teñidas con DAPI. Los núcleos de las células control y
del vehículo poseen cromatina distribuida en el nucleoplasma. Algunas presentan figuras mitóticas
(flechas). Las células tratadas con camptotecina y con el extracto inducen la condensación y/o
fragmentación de la cromatina (cabezas de flecha).
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
necrótico (citotóxico), cultivos de células HeLa fueron estimulados con 95 µg/mL del
extracto por 24 h y la pérdida de la integridad de la membrana celular fue evaluada
mediante la incorporación celular de IP cuantificada por citometría de flujo y a través
de la cuantificación de la actividad de la enzima lactato deshidrogenasa (LDH)
presente en los sobrenadantes provenientes de los cultivos celulares (Figura 16 y
17).
Control negativo Control positivo
Figura 16. Determinación de muerte por necrosis inducida por Mangifera indica L. Incorporación celular de
ioduro de propidio en células de CaCu HeLa (área roja del histograma). Control negativo, células
sin tratamiento, incubadas con RPMI al 5% de SNT por 24 h. Control positivo, células tratadas con
EtOH al 70% en frío por 15 min. H2O-EtOH (60:40), vehículo utilizado para disolver el extracto.
Extracto de Mangifera indica 95 µg/mL. Las imágenes representan uno de tres ensayos
independientes.
49
Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
140
120
% de actividad de LDH
100
80
60
40
*
20
0
Triton
Tritón Negativo H2O-EtOH
H2O–EtOH
Mango 95µg/mL
Mangifera 95 µg/mL
Figura 17. Determinación de muerte por necrosis inducida por Manguifera indica L. Se evaluó la actividad de
la enzima LDH en sobrenadantes provenientes de cultivos de la línea celular HeLa (7500 células por
pozo en placas de cultivo de 96 pozos), estimuladas con la IC50 respectiva por 24 h. La liberación
máxima de LDH (100%) se determinó con la aplicación de tritón X-100 por 1 h a un tratamiento
control. La gráfica representa uno de tres ensayos independientes. * indica que no existe diferencia
significativa con p<0.05 vs H2O-EtOH ANDEVA, seguido de una prueba de Tukey n=3.
50
Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
Figura 18. Efecto del extracto acuoso-etanólico de la corteza de Mangifera indica L. sobre el potencial
proliferativo de células no tumorales (linfocitos). Cultivos de linfocitos fueron marcados con
carboxifluoresceína (CSFE) con y sin 25 µL de fitohemaglutinina (PHA). La cuantificación fue
realizada por citometría de flujo. Linfocitos no activados (sin PHA). Linfocitos activados (con PHA).
H2O-EtOH, vehículo utilizado para disolver el extracto en proporción 60:40. Extracto de Mangifera
indica (95 µg/mL) concentración de extracto correspondiente a la IC50 de la línea celular HeLa. La
figura representa uno de tres ensayos independientes.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
120
% de actividad de LDH
100
80
60
40
*
20
0
Triton
Tritón Negativo HH2O-EtOH Mango 95 µg/mL
2O–EtOH Mangifera
(95µg/mL)
Figura 19. Efecto del extracto acuoso-etanólico de Mangifera indica L. para inducir necrosis en células
normales. Actividad de LDH en cultivos de linfocitos humanos. 200,000 células fueron sembradas en
200 µL de RPMI al 20% de SFB por pozo en placas de cultivo de 96 pozos, estimulados con 95 µg/mL
del extracto durante 72 h. La gráfica representa uno de tres ensayos independientes, n=3. * indica
que no existe diferencia significativa con p>0.05 vs H2O-EtOH ANDEVA seguida de una prueba de
Tukey.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
En los últimos años se han realizado numerosos estudios acerca de los beneficios
del mango no solo como alimento sino también como una fuente de moléculas con
actividad terapéutica. Algunos estudios realizados con otras partes del árbol del
mango, señalan que los diferentes extractos como el de acetona: metanol: agua de
la pulpa del fruto,40 el acuoso de la corteza del árbol,41 el cetónico, metanólico y
acuoso de la cascara del fruto, 42 el metanólico y acuoso de la pulpa del fruto y el
aceite esencial de las hojas43 poseen un efecto antitumoral in vitro contra células de
cáncer de mama, pulmón hígado, riñón, próstata, colon, ovario, leucemia y
cervicouterino, concluyendo que el extracto de las hojas, de la pulpa del fruto, de la
cascara del fruto y de la corteza del árbol de mango presenta actividad
antiproliferativa.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
esta planta (Fozli 33.33% ± 1.37, Khershapat 54.44% ± 2.92, Langra 46.90% ± 1.36,
Dudsagor 49.81% ± 4.69 y Lakhna 55.03% ± 2.21). 42
Todos estos extractos analizados han sido reportados con actividad antiproliferativa,
confirmando que dicha actividad antiproliferativa en células tumorales de esta planta
es un hecho. No obstante esta confirmación, la mayoría de los trabajos reportan
actividad antiproliferativa en células tumorales, careciendo de pruebas en células
no tumorales. Al respecto, los resultados mostrados en este trabajo en células
linfocíticas humanas provenientes de sangre periférica revelan que el extracto
acuoso-etanólico de la corteza del árbol de Mangifera indica L ejerce un bajo efecto
antiproliferativo en estas células, sugiriendo que la acción antiproliferativa presente
en el extracto es selectiva. Estos resultados coinciden con reportes anteriores de
diferentes extractos de este mismo árbol, donde se obtuvo que las células no
tumorales utilizadas fueron afectadas en algunos casos y en otros no, como en el
extracto acuoso de la corteza de Mangifera indica L. que afectó la proliferación
linfocítica de ratones inmunizados de manera in vitro en un 33.4%39 o el caso de los
polifenoles aislados del mango Ataulfo, los cuales no afectaron el potencial
proliferativo de las células no-cancerígenas CCD-18Co de miofibroblastos de
colon.40 Así mismo, se ha registrado en otros trabajos el efecto que tienen diferentes
compuestos aislados de Mangifera indica L. sobre células tumorales y no tumorales.
Se ha reportado que los compuestos fenólicos, como el ácido gálico, la Mangifera y
los carotenoides aislados del fruto de este árbol provocan un efecto antiproliferativo
en la línea celular SW-480 de cáncer de colon, obteniendo que a la dosis más alta,
5 mg GAE/L (mg de equivalentes de ácido gálico), se inhibió el crecimiento de estas
células en aproximadamente un 72%, sin inhibir el crecimiento de células de
miofibroblastos de colon (CCD-18Co) no tumorales.40 Este reporte coincide con lo
observado al estimular células de cáncer de mama MDA-MB231 con mangiferina
(25, 50, 100, 200, 400, 800 µg/mL) aislada de la corteza del árbol, la cual afecta el
potencial proliferativo de estas células teniendo una disminución de la población
celular de 20% a concentraciones de 50 y 400 µg/mL. Al utilizar el extracto acuoso
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
este extracto es un digno candidato para continuar con su estudio, de tal manera
que se puedan en un corto plazo aislar los componentes o moléculas que
constituyen al extracto y probar en cada una de ellas, actividad antiproliferativa,
citotóxica e inductora de apoptosis, con la intención de encontrar el principio activo
de la actividad antitumoral presente en el extracto y proponerla como un agente con
posible aplicación terapéutica contra el cáncer.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
11. CONCLUSIONES
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
12. PERSPECTIVAS
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
13. REFERENCIAS
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
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14. GLOSARIO
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
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Determinación de la actividad antiproliferativa y citotóxica de la corteza del árbol de Mangifera indica L.
o Subcaducifolio: Árboles que pierden sus hojas por efecto del clima y de la
estación del año, o por encontrarse en su periodo de reproducción y
formación de flores, frutos y semillas. Generalmente esto pasa en invierno.
o Tusígeno: Adj. Que provoca tos.
o Virus del papiloma humano (VPH): El virus del papiloma humano (VPH o
HPV del inglés human papilomavirus) es un grupo diverso de virus ADN
perteneciente a la familia de los Papillomaviridae y representa una de las
enfermedades de transmisión sexual más común.
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