UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN

CRISTOBAL DE HUAMANGA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
INFECCIÓN E INMUNIDAD

MÉTODO MICROBIOLÓGICO Y AISLAMIENTO DE

SECRECIONES FARÍNGEAS

Alumno: Culqui Gómez Elvis Brady

Docente: Mg. Nilda Apayco Espinoza

Serie: 300

Grupo: Martes 3:00 - 5:00 pm

AYACUCHO-PERÚ

2017
CONOCIMIENTOS PREVIOS

1 PRINCIPIOS DE LA TÉCNICA:
Muchas especies bacterianas son tan parecidas
TÉCNICAS DE morfológicamente que es imposible diferenciarlas sólo con el uso
CULTIVO del microscopio. En este caso, para identificar cada tipo de
bacteria, se estudian sus características bioquímicas
sembrándolas en medios de cultivo especiales. Así, algunos
medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la
mayoría de las especies bacterianas, pero no la del tipo que se
desea averiguar si está presente. Otras veces, el medio de cultivo
contiene determinados azúcares especiales que sólo pueden
utilizar algunas bacterias. (1)
Los principios de la técnica se basan en la condiciones y factores
favorables para la multiplicación de los microorganismos entre
ello se encuentran (1) (2)

 Disponibilidad de nutrientes.

 Consistencia adecuada del medio.

 Presencia o ausencia de oxígeno y otros gases.

 Condiciones adecuadas de

 Luz ambiental.

 pH adecuado.

 Temperatura.

 Esterilidad.

UTILIDAD PRINCIPAL:
La utilidad principal de las técnicas de cultivo es empleado
como un método fundamental para aislar, diferenciar y
observar el crecimiento y multiplicación de las bacterias y
otros microorganismos.(1) (3)

En biología, bacteriología y específicamente en microbiología,

un cultivo es un método para la multiplicación
de microorganismos, tales como lo son bacterias en el que se
prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado.
Un cultivo es empleado como un método fundamental para
el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan
enfermedades en medicina humana y veterinaria.(2)

TIPOS:

SEGÚN EL MÉTODO EN QUE SE SIEMBRA:

Cultivo por estrías. Este método de siembra se realiza sobre la

superficie de los medios de cultivo sólidos distribuidos en placas
de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en forma de cuña.
(2)

Cultivo por punción. Como es obvio, el instrumento de siembra a

emplear será la aguja de platino y el medio de cultivo sólido,
 generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la
observancia de las precauciones de asepsia, son similares que
cuando se utiliza el asa. La particularidad que tiene este método,
es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar
perpendicularmente el medio de cultivo. (2) (3)

Cultivo volumétrica. Este método de siembra consiste en sembrar

una muestra liquida cuyo volumen no puede ser predeterminado,
en medio de cultivo sólidos o líquidos. Por ejemplo: En las
muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no
puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta
carece de escala de graduación, sin embargo, la orina empleadas
en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede
determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen
que será sembrado.(2)

Cultivo masiva. Cuando se desea realizar una siembra masiva se

puede utilizar la espátula de Driglaski. En este caso la gota de
muestra liquida se esparce con la espátula por toda la superficie
del medio de cultivo sólido imprimiendo un movimiento en
espiral. La siembra masiva también se puede realizar con un
hisopo grueso embebido de un cultivo líquido, procediendo a su
deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar.(3)

SEGÚN EL MEDIO DE CULTIVO :

En función de su consistencia

Sólidos: al medio de cultivo sólido se le añade un agente

gelificante o solidificante. Se preparan en erlenmeyer, se dejan
enfriar y luego se pueden pasar o bien a una placa o bien a un
tubo. (2) (3)

LOS GELIFICANTES MÁS HABITUALES SON:

Agar Agar: es un alga que se caracteriza por ser inerte frente a los
microorganismos y porque es líquido a la temperatura de
ebullición y solidifica entre los 45-50ºC. (2) (3)

Gelatina.

Líquidos o caldos: contiene los nutrientes y, en lugar de añadir el

agar, tienen el agua que se utiliza para diluir el medio de cultivo.
Se preparan en tubo.

Semisólidos: contienen agar (<5-10%). Se utilizan cuando

queremos observar movilidad bacteriana. Se hace en tubo y se
utiliza la siembra en picadura con asa recta. (2) (3)

¿QUÉ TIPO DE CULTIVOS SE UTILIZA PARA AISLAR ENTEROBACTERIAS PATÓGENAS PARA EL

HOMBRE Y EN QUÉ TIPO DE MUESTRAS? INDIQUE SUS CARACTERÍSTICAS SUSTENTANDO SU
RESPUESTA MEDIANTE REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Agar EMB (eosina, azul de metileno, “eosin-methylen blue”, Agar de Levine)
Es un medio diferencial y selectivo para aislar y detectar enterobacterias en muestras mixtas.
Los colorantes de anilina (eosina y azul de metileno) inhiben el desarrollo de bacterias Gram
positivas y a las Gram negativas exigentes. El medio incluye lactosa, lo que permite la
diferenciación de los fermentadores de lactosa de los no fermentadores. Los fermentadores
uertes de lactosa, sobre todo Escherichia coli, producen colonias de color negro verdoso con
brillo metálico. Los productores más débiles de ácidos, forman colonias de color violeta. Los no
ermentadores de lactosa forman colonias transparentes. (4) (5)

Agar MacConkey
Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperación de enterobacterias y bacilos
Gram negativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el
desarrollo de bacterias Gram positivas y de algunas Gram negativas exigentes. La lactosa es la
única fuente de carbono. El indicador es el rojo neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa
ormas colonias de diferentes tonos de rojo. Los fermentadores fuertes de lactosa pueden
provocar la precipitación de las sales biliares por la gran cantidad de ácidos formados, lo que se
observa fácilmente en el medio por la aparición de zonas opacas alrededor de las colonias. Las
bacterias que no fermentan la lactosa forman colonias incoloras o transparentes. (4) (5)

Agar HE (agar entérico de Hektoen)

Este medio es un ejemplo de agar selectivo y diferencial que no necesita ser esterilizado en
autoclave porque son muy pocos los microorganismos que pueden crecer en él. Las
concentraciones de sales biliares y de los colorantes azul de bromotimol y fucsina ácida son lo
suficientemente altas como para inhibir el desarrollo de la mayoría de la microbiota fecal
normal. Está indicado para el aislamiento de Salmonella y Shigella. (4) (5)

Agar XLD (xilosa, lisina, desoxicolato) Como el agar de Hektoen, este medio es diferencial y
selectivo para Salmonella y Shigella. No necesita ser esterilizado en autoclave. Las sales biliares
nhiben a muchas enterobacterias y microorganismos Gram positivos. El indicador rojo fenol
permite la diferenciación de los no fermentadores de lactosa (Salmonella y Shigella) como
colonias incoloras (rosa pálido). El citrato de hierro y amonio permite la visualización de
microorganismos productores de sulfhídrico como colonias con centros negros. (4) (5)

Agar SS (Salmonella-Shigella)
Lleva sales biliares, citrato sódico y férrico, tiosulfato y el colorante verde brillante. El
carácter diferencial se basa en la fermentación de la lactosa. Incorpora rojo neutro. Las
colonias lactosa positivas son de color rojo, mientras que las lactosa negativas son
ransparentes (Shigella). Las colonias de Salmonella son transparentes con el centro negro.

Agar sulfito de bismuto

Medio para el aislamiento de Salmonella typhi. El sulfato ferroso actúa como indicador en la
producción de sulfhídrico. El sulfito de bismuto y el verde brillante inhibenconsiderablemente
el crecimiento de bacterias contaminantes. S. typhi produce colonias
con centro negro y bordes claros que a las 48 horas adquieren halo negro grisáceo y brillo
metálico. (4) (5)

 Generalmente se toma muestras fecales para llevar a cultivo por enterobacteria

(Shigella, Salmonella, Yersinia, Campylobacter, Escherichia coli (E. coli); ; las
muestras sanguíneas para cultivocomo en salmonelosis también son de relevante
importancia (6)
¿QUÉ TIPO DE CULTIVOS SE UTILIZA PARA AISLAR ESTAFILOCOCOS AUREUS Y
ESTREPTOCOCOS BETA HEMOLÍTICOS Y EN QUÉ TIPO DE MUESTRAS? INDIQUE SUS
CARACTERÍSTICAS SUSTENTANDO SU RESPUESTA MEDIANTE REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
 PARA PARA AISLAR ESTAFILOCOCOS AUREUS
Agar salino manitol (SM, MS “mannitol saline”, Medio de Chapman)
Es un medio selectivo para estafilococos debido a la alta concentración de cloruro sódico (75
g/L). La mayoría de los microorganismos no crecen a esta concentración de sal, mientras que
os estafilococos, entre los que se encuentran los del género Staphylococcus, sí lo hacen.
ncorpora manitol como fuente de carbono y rojo fenol como indicador, lo que permite
aprovechar la correlación que existe entre la patogenia y la capacidad fermentadora del
manitol de los estafilococos para establecer un diagnóstico presuntivo y sirve, por lo tanto,
como indicativo de la presencia de Staphylococcus aureus. Los estafilococos patógenos
ermentan el manitol y producen colonias amarillas. Los estafilococos no patógenos no lo
ermentan y producen colonias de color rosa. (4) (5)

 PARA ESTREPTOCOCOS BETA HEMOLÍTICOS

Agar sangre con disco de bacitracina Se utiliza para la identificación de estreptococos beta-
hemolíticos del grupo A de Lancefield ya que estos son sensibles a la bacitracina a la
concentración que se encuentra en los discos (0,04 U). El antibiótico no inhibe el desarrollo de
otros estreptococos beta-hemolíticos. Sobre la placa de agar sangre se coloca un disco con
bacitracina y tras la incubación se observa la presencia de halo de inhibición (estreptococos
beta-hemolíticos presuntamente del grupo A) o la ausencia del mismo (estreptococos beta-
hemolíticos que presuntamente no pertenecen al grupo.

Para el cultivo se usa muestras del exudado faringoamigdalar. La muestra debe obtenerse tan
pronto como sea posible tras la aparición de los síntomas y antes de instaurar la terapia
antibiótica. La muestra se debe obtener con hisopos de Dacron o alginato cálcico; con la ayuda
de un depresor se inmoviliza la lengua, y se realiza la toma del área amigdalar y faringe
posterior, así como de cualquier zona inflamada o ulcerada. (7)

¿EN QUÉ CASOS SE SOLICITARA UN ANTIBIOGRAMA A UN LABORATORIO? SUSTENTE SU

RESPUESTA MEDIANTE REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
 El antibiograma se puede solicitar al mismo tiempo que el cultivo, ya sea de sangre,
orina, líquido biológico o de una herida. Sin embargo, el antibiograma se realiza
normalmente cuando los resultados del cultivo son positivos para uno o varios
microorganismos. También puede solicitarse un antibiograma si la infección no
responde al tratamiento, para averiguar si el patógeno ha desarrollado resistencias y
para conocer qué agente antimicrobiano resultará más eficaz para combatir la
infección. (6) (7)

 El antibiograma es una prueba que se pide cotidianamente al laboratorio, a fin de

seleccionar el antibiótico más eficaz en el tratamiento de una infección determinada (7)
 PREGUNTAS DE REFLEXIÓN

MANIFIESTE USTED PORQUE ES IMPORTANTE CONOCER EL FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS

MICROBIOLÓGICOS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO
Es importante fuera del conocimiento que nos brinda para poder desarrollarlo, poder
entender los medios de vida, habitad y resistencias que generan cada tipo de bacteria, así
ver de una manera global los factores que podrían intervenir en la enfermedad de una
persona que está siendo afectada por una organismo patógeno (bacteria), y lograr dar un
correcto tratamiento.

La naturaleza inespecífica de los signos y síntomas clínicos que acompañan distintas

enfermedades por bacterias genera que el clínico en base a los fundamentos de los
métodos microbiológicos de cultivo y aislamiento y su sospecha diagnostica logren una
asertiva petición de que es lo que se quiere encontrar en una muestra.

BIBLIOGRAFÍA:

1. Zárate MS, Dadamio J, Alí S, Giordanelli A, Smayevsky J, Torres M. "Desarrollo y evaluación de una
muestra para control de calidad en Microbiología". Acta Bioquímica Clínica Latinoam. 2015
Mar;41(1):57–61.

2. Castro J., MÉTODOS DE DETERMINACIÓN Y SU INTERPRETACIÓN. Rev Médica Hondureña. 2014;69:118–

120. 14(2). Available at:
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bibvirtualdata/tesis/salud/Tananta_V_I/Bibliografia.pdf [Accessed 20 May
2017].

3. Solan Murray, P.: Manual of Clinical Microbiology. A.S.M Press, American Society for Clinical
Microbiology, Washington DC, 1999. Available at:
http://repositorio.binasss.sa.cr/xmlui/bitstream/handle/20.500.11764/284/3567.pdf?
sequence=1[Accessed 13 May 2017].

4. López LE., Hernández M., Colín CA., Ortega S., Cerón G., Franco R. LAS TÉCNICAS BÁSICAS EN EL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. [citado 13 de mayo de 2017]; Obtenido en:
http://www.Medigraphic.Compdfsinvdisir-2014ir141b.Pdf

5. MINSA. MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE LOS PARÁSITOS

INTESTINALES EN EL HOMBRE. (2003). 1st ed. Lima: Instituto Nacional de Salud. Available at:
http://bvs.minsa.gob.pe/local/ins/165_nt37.pdf

6. Mandela C., Zambo B. MICROBIOLOGÍA: TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS. Med Lab. 2010;16(07-08):311–

354. [online] Scielo.org.pe. 5(2) Available at: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?
pid=S172646342005000100012&script=sci_arttext [Accessed 13 May 2017].
 7. MINSA. MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE LOS ORGANISMOS
PATÓGENOS EN EL HOMBRE. (2010). 1st ed. Lima: Instituto Nacional de Salud. Available at:
http://bvs.minsa.gob.pe/local/ins/_nt37.pdf

PROTOCOLO DEL MÉTODO MICROBIOLÓGICO DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE SECRECIONES

FARÍNGEAS
1. MATERIALES: (OBTENCIÓN DE SECRECIONES FARÍNGEAS)
 Hisopos de algodón estéril en tubos de ensayo, para recolectar muestras.
 Baja lengua estéril.
 Mascarilla protectora.
 Tubo estéril.

2. PROCEDIMIENTO:
1. El paciente debe permanecer sentado en la posición más cómoda y con una buena iluminación.

2. Indicar al paciente que abra la boca, que diga “ahh..” sin sacar la lengua.

3. Mientras el paciente dice “ahh..” bajar las 2/3 partes anteriores

de la lengua con el bajalenguas empleando la mano izquierda.

4. Se debe
observar
las
 amígdalas, en el fondo de la faringe limitada por los pilares y la
úvula.
<
5. Introducir el hisopo, ubicar el lugar inflamado de la garganta, frotar el hisopo con firmeza y hacerla girar, evitar tocar
la lengua, que se encuentra cubierta de microorganismos.
6. Introducir el hisopo en el tubo estéril.
1. MATERIALES USADOS PARA EL CULTIVO
- Hisopo /Medio de transporte Stuart
- Materiales para realizar una tinción Gram
- Tira oxidasa
- Peróxido de Hidrógeno(catalasa)
- Microscopio
- Autoclave
- Campana de anaerobiosis
- Guantes
- Bata
- Papel de filtro
2. PROCEDIMIENTO

1.Tener la
muestra en 2.Diluir el
un medio de agar.
transporte.

3.Esperar que 4. Obtener la

el agar tengo muestra de
una sangre para el
temperatura cultivo.
adecuada

7.
6.Preparar
Verter la sangre
las placas
en el
Petri
agary el mechero 8. Verter el agar-sangre en las placas
5.Agar,muestra faríngea y de sangre
de bunsen de Petri
 9.Dejar que solidifique

10.Sembrar por el
método de estrías

11. Incubar una placa en

medios aerobios(estufa).

11. Incubar una placa en

medios anaerobios en una
campana de anaerobiosis
Realizar la evaluación
macroscópica de formación de
colonias con luz natural.

Se muestra gran cantidad de

colonias pqueñas , color
blanquecino y algunas
transparentes y de forma
elipsoidal, la coloración
marrón alrededor de las
colonias evidencia el efecto
hemolítico.

Realizar la evaluación
macroscópica de formación de
colonias con luz uv.

Se observa el halo de
hemólisis (amarillo verdoso) lo
que corresponde a la beta
hemólisis, se observa la
uniformidad de las colonias lo
que corresponde a la
presencia de un solo tipo de
especie predominante.
 Realizar la coloración Gram
en cada una de las placas
para diferenciar entre gram
positivos y gram negativos

Placa 1: Se observa la presencia de Placa 2: Se observa la presencia de

cocos( estafilococos y estreptococos en cocos(cocos y estreptococos en menor
mayor cantidad) con una coloración violeta cantidad )con una coloración violeta por su
por su carácter gram positivo. Así también carácter gram positivo. Así también salta a la
salta a la vista la presencia de algunas vista la presencia de una gran cantidad de
bacterias gram negativas color rosa. bacterias gram negativas (coloración rosa).
 Se realizará ahora la
prueba de la
catalasa en ambas
placas usando
peróxido de
hidrógeno y
portaobjetos para
cada muestra.

Placa 1: Muestra presenta Catalasa negativa,

se piensa en la ausencia de estafilococos y
presencia de estreptococos.
Esparcir la muestra sobre el
portaobjetos con peróxido de
hidrógeno, una reacción
positiva indicará la presencia
de estafilococos y la ausencia
de la reacción indicará la
presencia de estreptococos.

Placa 2: Muestra presenta Catalasa negativa,

se piensa en la ausencia de estafilococos y
presencia de estreptococos.