Analisis Bioquimicos
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LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO
El LCR es un líquido producido en los ventrículos, que son los espacios que hay dentro del SNC. En los
ventrículos hay una estructura especializada que son los Plexos Coroideos donde se produce el LCR. Se
produce y se reabsorbe continuamente a una velocidad de 500 mL / día. Su volumen permanece constante en
situaciones fisiológicas.
♦ Actuar como soporte mecánico del cerebro para que éste flote.
♦ Eliminación de productos de desecho del metabolismo cerebral.
♦ Transportar sustancias biológicamente activas que se comportan como mensajeros químicos.
Localización: el cerebro y la médula espinal se encuentran recubiertos por unas membranas denominadas
meninges que son la Piamadre (íntimamente unida al cerebro), la Aracnoides (localizada inmediatamente por
fuera de la anterior) y la Duramadre (La más externa). Entre la Piamadre y la Aracnoides hay un espacio
llamado espacio subaracnoideo que se comunica con los ventrículos.
Composición:
• Glucosa
• Proteínas: el LCR es un ultrafiltrado del plasma y, por lo tanto, predominan las proteínas de bajo peso
molecular (Ej. Prealbúmina, transferrina y albúmina).
• Agua
• Ácido láctico
A. Obtención de la muestra: se obtiene por punción lumbar en el espacio intervertebral entre las vértebras L3
y L4 o más abajo para no dañar la médula.
B. Aspecto macroscópico: en condiciones normales es claro, transparente, con una viscosidad y aspecto
similar al agua. En condiciones patológicas puede presentar un aspecto turbio. La turbidez puede ser debida a
la presencia de leucocitos, eritrocitos, microorganismos... Se clasifica la turbidez mediante cruces dentro de
una escala de 0 a 4:
0 ! líquido transparente
++ ! turbidez claramente presente, aunque todavía se pueden leer las letras a través del tubo.
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En otras situaciones puede darse un signo que es la Santocromia. Es un término empleado para describir el
color del sobrenadante del LCR después de haber sido centrifugado. Aparece cuando el LCR está mezclado
con sangre.
Recuento celular: para realizar el recuento de células del LCR es necesario procesarlo inmediatamente
porque los leucocitos y los eritrocitos empiezan a lisarse en una hora. Si no se puede procesar la muestra
inmediatamente, se refrigerará. No se pueden emplear contadores electrónicos de células porque pueden dar
recuentos falsamente elevados.
• Recuento de leucocitos: se emplea una cámara de Fuchs Rosenthal que contiene 16 cuadrados
grandes, cada uno de ellos subdividido en 16 cuadrados pequeños. La superficie total de la cámara es
de 16 mm2 , su altura es de 0,2 mm y la capacidad total o el volumen es de 3,2 mm3. Para hacer el
recuento se cuentan las células contenidas en toda la cámara y, para referirlas a 1 mm3 se efectúa el
cálculo siguiente: CÉL. por mm3 = Núm. Cél. / 3,2
• Recuento de hematíes: se emplea la cámara de Fuchs Rosenthal y solo se cuentan cuando sea
necesario hacer una corrección de leucocitos o de proteínas. Cuando se ha producido una punción
traumática que altere la producción de las mismas.
• Resultados en general:
Recuento diferencial: se realiza para ver de qué tipo son las células que tiene un LCR con recuento
patológico.
El método de elección es la citocentrifugación que es una centrifugación especial que muy pocos laboratorios
tienen. La manera más usual de concentrar el LCR es por centrifugación convencional. Se centrífuga de 8 a 10
minutos a 1000 − 1500 r.p.m. A continuación se obtiene el sedimento y se preparan extensiones, teniendo
precaución de no romper las células. Las extensiones se dejan secar, se fijan y se tiñen con los colorantes
habituales. El recuento diferencial se realiza examinando 100 células y se anotan los tantos por ciento de cada
una.
Resultados: en condiciones normales, solo aparecen linfocitos y células mesoteliales. Cuando hay
polimorfonucleares, si es un número alto siempre es patológico. Si es un número bajo hay que hacer una
revisión de los resultados para descartar una punción traumática.
D. Estudios Bioquímicos:
d.2 Determinación de PROTEÍNAS: Se puede determinar un aumento de proteínas en los siguientes casos:
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• Obstrucción de la circulación del LCR
• Enfermedades desmielinizantes (Ej. Esclerosis en placas o esclerosis múltiple)
Los valores de referencia varían según la edad. En el caso de un adulto se encuentran entre los 10 − 45 mg /
dL.
d.2.1 Métodos para la determinación de PROTEINAS TOTALES en LCR: Los métodos empleados
deben cumplir 3 requisitos, que son:
d.2.3 Cuantificación de INMUNOGLOBULINAS: tiene interés, sobre todo para cuantificar las IgG, ya que
éstas aumentan en la esclerosis múltiple. Se realiza por Inmunodifusión, Inmunodifusión Radial,
Inmunonefelometría, Inmunoturbidimetría, etc.
d.2.4 Relaciones IgG / Albúmina: se hace para determinar si el aumento de IgG tiene su origen en el SNC o
si procede del plasma. Para ello se emplea el Índice IgG / Albúmina que tiene un valor normal en el adulto de
17% ± 8. Si la barrera hematoencefálica se daña, se incrementa tanto la IgG como la Albúmina en el LCR, en
este caso el índice no varía sustancialmente. En la esclerosis múltiple existe síntesis intratecal de IgG, por lo
tanto, el Índice se elevará considerablemente.
d.3 Determinación de ÁCIDO LÁCTICO: puede variar en el LCR de forma independiente a los valores
plasmáticos. Se piensa que es por la existencia de un metabolismo anaeróbico en el SNC. El ácido láctico
aumenta en cualquier alteración asociada con disminución del flujo cerebral (Ej. En una lesión cerebral
traumática). También contribuye el ácido láctico al diagnóstico diferencial de las meningitis bacterianas y
víricas, ya que se ha comprobado que el 90% de las meningitis bacterianas cursan con un aumento del ácido
láctico y que sólo el 10% de las víricas cursan con aumento del ácido láctico.
LÍQUIDOS EXTRAVASCULARES
Los líquidos extravasculares son aquellos que se localizan fuera de los vasos sanguíneos. Los dividimos en
dos grandes grupos, que son:
LÍQUIDOS SEROSOS: Incluyen Líquido Pleural, Pericárdico y Peritoneal. Como su propio nombre indica,
derivan del suero.
Anatomofisiología:
Cada cavidad del organismo está recubierta por una membrana, que a su vez se divide en dos: Membrana
Parietal (unida a la pared de la cavidad) y Membrana Visceral (unida a los órganos de dicha cavidad). Estas
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dos membranas son continuas, quedando un espacio entre ellas que corresponde a la Cavidad Orgánica. El
líquido que se encuentra entre las membranas y que proporciona lubricación recibe el nombre de Líquido
Seroso.
Los líquidos serosos son ultrafiltrados del plasma, provenientes de los vasos de las serosas. Su formación está
influida por la presión osmótica (retiene líquido gracias a las proteínas), por la presión hidrostática (saca
líquido de los capilares) y la permeabilidad capilar.
Son ultrafiltrados del plasma. En condiciones normales están en muy poca cantidad y no tienen interés clínico.
En condiciones patológicas se distinguen dos tipos de líquidos serosos: Derrames Exudados y Derrames
Trasudados.
Los Derrames son aumentos de líquidos serosos de origen patológico. Las causas de que se produzcan
derrames son las siguientes:
• Enfermedades inflamatorias
• Infecciones
• Tumores
• Obstrucción linfática
• Ruptura de los conductos linfáticos
El Trasudado es un derrame no inflamatorio provocado por factores mecánicos que alterarían la presión
hidrostática o factores que alteran la presión osmótica.
El Exudado es un derrame inflamatorio originado por un aumento de la permeabilidad capilar que ocurre en
enfermedades que afectan directamente a las cavidades orgánicas (Ej. Tuberculosis, infecciones bacterianas,
tumores,...)
TRASUDADO EXUDADO
ASPECTO CLARO TURBIO
FIBRINÓGENO NO COAGULA COAGULA
PROTEÍNAS < 20 g / L > 20 g / L
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GLUCOSA + ó − igual que en el plasma Menor que en el plasma
Para la toma de muestras se realiza una punción quirúrgica en la cavidad indicada, que se llama:
Aspecto macroscópico:
Examen microscópico: se hace un recuento celular en cámara de Neubauer, casi siempre sin diluir el líquido.
Se cuentan las células contenidas en los cuatro cuadrados grandes de las esquinas y se calcula: Células por
mm3 = N x 2,5
Estudio Bioquímico:
• Glucosa: la cantidad de glucosa en los líquidos serosos es igual que la del plasma pero tarda más
horas en llegar a estos líquidos, por eso se prefiere mantener al paciente en ayunas para hacer la
extracción. La glucosa está disminuida en los líquidos inflamatorios.
• pH: es útil la medida del pH en los derrames pleurales porque se clasifican en potencialmente
benignos cuando el pH es superior a 7,3 y en derrames complicados cuando el pH es inferior a 7,2.
• Proteínas: los derrames serosos se clasifican según su contenido proteico en trasudados cuando las
proteínas son menores a 20 g / L y Exudados cuando son mayores de 20 g / L.
LÍQUIDO SINOVIAL
Es un líquido situado en la cavidad articular que tiene como función la de lubricar la articulación,
determinando un mínimo de fricción entre los huesos. Es un ultrafiltrado del plasma al que se le ha añadido
una glucoproteína (ácido hialurónico). En condiciones normales, la celularidad del líquido sinovial es muy
baja. No suele tener hematíes y la cifra de leucocitos varía entre 13 y 200 células por microlitro de líquido
sinovial.
La toma de muestras se realiza por artrocentesis (punción de la articulación). Para el estudio de cristales se
utiliza un tubo con heparina sódica como anticoagulante.
Aspecto macroscópico: es un líquido claro, transparente, viscoso de escaso volumen. Si el líquido aparece
turbio indica proceso inflamatorio. Si tiene aspecto lechoso puede ser una artritis tuberculosa o una artritis
reumatoidea crónica.
Examen microscópico: se hace un recuento celular con una cámara de Neubauer sin realizar dilución previa
en condiciones normales. Según la cifra de leucocitos encontrada se clasifican los líquidos en 4 grupos:
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• Líquido Sinovial normal: leucocitos < 200 cél. / L
• Líquido Sinovial mecánico o no inflamatorio: leucocitos 200−2000 cél. / L
• Líquido Sinovial inflamatorio leve: leucocitos 2000−30000 cél. / L
• Líquido Sinovial inflamatorio grave o séptico: leucocitos 50000−100000 cél. / L
Estudio bioquímico:
Investigación de cristales: se utiliza el microscopio de luz polarizada para investigar la presencia de cristales
en el líquido sinovial, que tiene lugar en las artritis cristalinas (Ej. Artritis gotosa, artritis reumatoide,
pacientes con hemodiálisis, etc).
2. TÉCNICAS ANALÍTICAS
Se administran 50 g de Lactosa disueltos en 400 mL de agua en el caso del adulto. A los niños se les
administra 2 g de lactosa por kilogramo de peso. Se recoge una muestra de sangre basal y, posteriormente, se
recogen muestras de sangre en diferentes tiempos, determinándose la glucemia. Se determina la glucemia, en
lugar de la lactosa porque la Lactosa se hidroliza en Glucosa y Galactosa mediante la enzima Lactasa.
• Principio del método: se administra una sobrecarga oral de D−Xilosa y se determina la Xilosa en
sangre 1 hora después (si se trata de personas mayores 2 horas después). También se puede
determinar la concentración de Xilosa en orina recogida durante las 5 horas siguientes a la sobrecarga
oral, pero es más utilizada la determinación en sangre.
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• Preparación del enfermo:
♦ El paciente debe estar en ayunas al menos 8 horas
♦ No debe haber ingerido fármacos que alteren la determinación
♦ Se administran 25 g de D−Xilosa en el adulto. En caso de niños menores de 8 años se
administran 5 g de D−Xilosa
♦ Se debe ingerir totalmente en menos de 10 minutos
◊ Métodos analíticos: se utilizan métodos espectrofotométricos que tienen como
problema fundamental la interferencia con la glucosa. El mejor es el de la
o−Toluidina.
◊ Interpretación de los resultados:
⋅ Valores normales en sangre de D−Xilosa: 20 −25 mg / 100 mg de D−Xilosa
administrados.
• Si tiene valores inferiores a 20 mg / 100 mg significa que es
patológico.
• Si tiene valores superiores a 25 mg es normal
• Si los valores están entre 20−25 mg se repetirá la prueba.
⋅ Valores normales en orina de D−Xilosa: al menos el 25% de la dosis.
Se utilizan reactivos cromógenos (color) como la o−Toluidina o el Guayaco. Estos reaccionan con el peróxido
de hidrógeno y la reacción es catalizada por el grupo hemo.
Puede haber falsos positivos cuando en heces hay sustancias con actividad peroxidasa (Ej. Hemoglobina de la
carne, bacterias intestinales, algunos vegetales como el rábano,...)
Pueden darse falsos negativos producidos por la presencia de la vitamina C que enmascara la reacción.
Esta prueba se utiliza para el diagnóstico de anemia ferropénica sin causa aparente y neoplasias digestivas.
MARCADORES TUMORALES
CÁNCER . GENERALIDADES
El cáncer (neoplasia o tumor) se define por cuatro características que presentan las células cancerosas, que
son:
• Clonalidad: el cáncer se origina de una sola célula que prolifera y da lugar a un clon de células malignas.
• Autonomía: significa que crecen de forma autónoma, sin estar reguladas por el organismo.
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• Anaplasia: las células son indiferenciadas.
• Metástasis: es la capacidad de crecer y diseminarse a otras partes del cuerpo.
Etiología
Hay unos factores que influyen en la aparición del cáncer, que son:
• Factores genéticos: en algunos cánceres hay una predisposición genética muy importante.
• Radiaciones: ultravioletas, etc.
• Tabaco: se sabe que la incidencia de cáncer de pulmón es 10 veces superior en los fumadores que en
los no fumadores.
• Exposición profesional: derivados del benzol, alquitranes,...
• Dieta
• Contaminación ambiental
• Fármacos: estrógenos conjugados
• Virus: Epstein−Baar, que produce la MNI, puede dar lugar al Carcinoma de Burkitt.
Consecuencias clínicas
Los marcadores tumorales son compuestos sintetizados por la célula tumoral cuya identificación se lleva a
cabo habitualmente en la sangre. En el caso de que los marcadores tumorales sean negativos en tejido,
significa que el tumor es de células no diferenciadas incapaces de sintetizar estas sustancias y, por lo tanto, de
una gran agresividad. Si son positivos significa que las células son más diferenciadas y, por lo tanto, menos
agresivas.
La determinación basal de los marcadores tumorales en sangre nos informa, sobre todo, de la posible
diseminación del tumor, aunque la principal utilidad es la cuantificación periódica de los mismos para
comprobar la evolución del paciente.
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Para considerar un compuesto químico marcador tumoral debe cumplir los siguientes requisitos:
El propio individuo ha de ser su propio testigo con respecto a los marcadores tumorales inespecíficos ya que
los pacientes tienen sus propios valores normales.
En los marcadores específicos hay unos valores de referencia mínimos. Habitualmente se hace la
determinación basal y, posteriormente, se determina el número y frecuencia de determinaciones dependiendo
de la historia clínica. La sensibilidad de los marcadores utilizados aumenta si se asocian varios marcadores.
Los marcadores tumorales se determinan mediante técnicas inmunoquímicas (RIA, ELISA)
ASPECTOS PRÁCTICOS
Ag CA 125: se usa para el estudio de los carcinomas de ovario pero no es organoespecífico. Actualmente se
completan sus indicaciones con la utilización del llamado CORE de HCG
Ag Cálcicoembrionario CEA: se utiliza sobre todo para el cáncer de hígado y para el cáncer colorectal.
−fetoproteína: en adultos aparece en aquellos tumores que tienen células de origen fetal, por lo tanto
aparecen en los tumores de células germinales, que se pueden localizar en todo el recorrido que estas células
hacen durante el período fetal hasta alcanzar su ubicación en los genitales (Ej. Seminoma o carcinoma
embrionario).
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evolución de las molas (tumor placenta) tras su evacuación.
Ag prostático específico PSA: es un marcador específico de próstata, por lo tanto sirve para el diagnóstico,
pronóstico, determinación del estadio y para el seguimiento del cáncer de próstata. Además tiene utilidad
como prueba de screening o cribado para grupos de riesgo. En condiciones normales no se detecta en mujeres
y en hombres su valor es inferior a 3 ng / mL, pero aumenta en prostatitis aguda o en adenoma de próstata.
Cáncer de mama: es muy frecuente y va en aumento. Se emplean como marcadores tumorales el CA 153
como apoyo al diagnóstico y como control del tratamiento, el CEA y el MCA. Además se utilizarán los
receptores de estrógenos u progesterona.
TDM (Therapeutic Drug Monitoring): la respuesta farmacológica es distinta en unos pacientes o en otros
dependiendo de muchos factores, como por ejemplo cumplimiento de la prescripción, dosis y vía de
administración, tasa de metabolización, eliminación del fármaco, etc.
Principios Básicos
• Dosis única: administramos una sola dosis del fármaco. Si la administración es oral los niveles
sanguíneos van ascendiendo hasta que se distribuye por los tejidos, disminuyendo otra vez su
concentración.
• Intervalo terapéutico: es aquel nivel de concentración sanguínea del fármaco que proporciona los
resultados óptimos de tratamiento. Es específico de cada fármaco.
• Dosis múltiples: son dosis de fármaco a intervalos regulares de tiempo.
• Pico: es el momento en el que el medicamento alcanza su máxima concentración.
• Vida media: es el tiempo requerido para que la concentración del fármaco disminuya el 50%.
• Valle: es el momento en el que el fármaco alcanza la mínima concentración.
Aplicaciones
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MÉTODOS GENERALES DE ENSAYO
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