UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS INFORME DE

Facultad de Ciencias básicas e ingenierías LABORATORIO

Departamento de Biología y Química BIOQUÍMICA

SOLUCIONES BUFFER Y CAPACIDAD AMORTIGUADORA

Alexander Camelo 1; Jenny Garzon 1

1,1 Biología, Facultad de ciencias básicas e ingeniería, Universidad de los Llanos, Villavicencio,
Colombia

RESUMEN
Las soluciones buffer están relacionadas con los sistemas que resisten cambios en el pH cuando se adi-
cionan cantidades de ácido o base fuerte a una solución, por esta razón se prepararon dos soluciones
buffer a diferente pH y se evaluó la capacidad amortiguadora a la solución que cumplía con el pH deter-
minado para el sistema. Se prepararon dos soluciones a una misma concentración, una de KH2PO4 y la
otra de K2HPO4, esto para elaborar el buffer, en diferentes tubos de ensayo se agregaron diferentes
volúmenes de las dos soluciones, donde la suma de estos dos fuera 10 ml, posteriormente se procedió a
medir el pH correspondiente a cada una de las mezclas, esta medición se realizó con dos métodos, el
primero con el pHmetro y el segundo con el indicador azul de bromotimol, finalmente se midió la capa-
cidad amortiguadora, titulando la mezcla dividida en dos, una mitad con NaOH y la otra mitad con HCl,
al realizar este último procedimiento nos damos cuenta que las soluciones buffer al tener las adiciones
de ácido o base, el pH no tiene cambios tan extremos a comparación con un blanco, por lo tanto estos
sistemas son tan vitales para la existencia de los organismos vivos, ya que un cambio brusco de pH en
cualquier organismo podría causar la muerte, debido a que las células perderían su funcionamiento nor-
mal con la alteración pH.

Palabras clave: soluciones amortiguadoras, capacidad amortiguadora, buffer, pH, concentración

INTRODUCCIÓN debidos a la adición de ácidos o bases fuertes y de re-

sistir los cambios de pH por efecto de diluciones
Las disoluciones amortiguadoras son frecuentes en la
(Skoog et al, 2001). Una disolución amortiguadora está
naturaleza, como es el caso del sistema
formada por un ácido débil y su base conjugada o bien
H2CO3/NaHCO3 que predomina en el plasma y fluido
por un base débil y su acido conjugado; de manera tal
intersticial (Vega & Konigsberg, 2001). Asimismo, los
que en la misma disolución coexisten un componente
amortiguadores tienen diversas aplicaciones, como en
que reacciona con los ácidos (la base) y otro que reac-
los medios empleados en los cultivos bacterianos que
ciona con las bases (el ácido). En los organismos vivos
requieren de cierto valor de pH para que las bacterias
se están produciendo continuamente ácidos orgánicos
crezcan (Umland & Bellama, 1999) Una disolución
que son productos finales de reacciones metabólicas,
amortiguadora, llamada también disolución regula-
catabolismo de proteínas y otras moléculas biológica-
dora, buffer o tampón (Harris, 2001), es aquella que
mente activas. Mantener el pH en los fluidos intra y ex-
tiene la capacidad de regular los cambios bruscos de pH
tracelulares es fundamental puesto que ello influye en
la actividad biológica de las proteínas, enzimas, hormo- anotó el pH de la solución de NaOH 0.1 N y de la solu-
nas, la distribución de iones a través de membranas, ción HCl 0.1 N, (fig. 1) posteriormente se tomó la so-
etc… La manera en que podemos regular el pH dentro lución buffer preparada en el tubo #5 y se dividió en
de los límites compatibles con la vida son: 1) los tam- partes iguales en dos tubos de ensayo, después se rotu-
pones fisiológicos y 2) la eliminación de ácidos y bases laron los tubos con las siglas 5A y 5B.
por compensación respiratoria y renal. Se tomó dos tubos de ensayo más y se preparó un
Los tampones fisiológicos son la primera línea de de- blanco (blanco A y blanco B) que solo contenía agua
fensa frente a los cambios de pH de los líquidos corpo- destilada, luego se midió el pH y después se anotó. Pos-
rales, entre los que destacan: el tampón fosfato, el tam- teriormente se adicionó dos gotas del indicador azul de
pón bicarbonato y el tampón hemoglobina. bromotimol y se tituló el tubo 5A con NaOH 0.1 N des-
Muchas reacciones químicas que se llevan a cabo en pués se adicionó 0.7 mL de la base hasta completar un
los sistemas vivos son extremadamente sensibles al pH, volumen de base de 7 mL, y se midió el pH después de
numerosas enzimas que catalizan las reacciones bioló- cada adición de la base.
gicas químicas importantes solo son eficaces en un in- Se realizó el mismo procedimiento en simultáneo con
tervalo muy estrecho de pH. (Cáceres, 2012) el blanco A. Luego se tituló el tubo 5B con HCl 0.1 N
después se realizó adiciones de 0.7 mL del ácido hasta
completar un volumen de ácido de 7 mL, y se midió el
SECCIÓN EXPERIMENTAL
pH después de cada adición de la base. Finalmente se
Preparación de una solución de fosfato monobásico realizó el mismo procedimiento en simultáneo con el
de potasio KH2PO4 0.15 M: Se preparó 25 mL de so- blanco B.
lución de fosfato monobásico de potasio KH2PO4 al
0.15 M. para esta se procedió a pesar 0.51 gramos de
KH2PO4, y se adicionaron a un vaso de precipitado con
10 mL de agua destilada, agitando hasta que el fosfato
se disolviera, se adicionaron en un balón aforado de 25 pHmetro Electrodo
mL, llevando el volumen hasta el aforo con agua desti- Soporte
lada.
Preparación de una solución de fosfato dibásico de 1. Resultados y análisis
potasio K2HPO4 0.15 M: Se prepara 100 mL de solu- Sustancia
ción de fosfato dibásico de potasio K2HPO4, al 0.15M,
este se preparó pesando 2.61 gramos de K2HPO4 , luego
se adicionaron a un vaso de precipitado que contenga Pinza de apoyo

aproximadamente de 20 mL de agua destilada, agitando

hasta que el fosfato se disolviera, enseguida se adicio- Figura 1. Montaje experimental para medir pH
naron en un balón aforad de 100 mL, y se llevó el vo- Reactivos.
lumen hasta el aforo con agua destilada
Preparación de una solución amortiguadora o buf-
fer: Se rotularon 7 tubos de ensayo de 1-7, se depositó
con una pipeta en cada tubo soluciones en las propor-
ciones ilustradas en la tabla 1. Posteriormente de las
mezclas se midió el pH en cada tubo con un pH metro,
lavando en cada uso el electrodo.
Determinación de pH con ayuda de un indicador: Se
añadió dos gotas de indicador azul de bromotimol mez-
clando y se anotaron los colores desarrollados
Medida de la capacidad amortiguadora de una so-
lución buffer: Se midió con el pH metro y luego se
RESULTADOS Y ANÁLISIS pH vs NaOH
pH (5A) pH(BA)
Resultados. 14
12
Tabla 1. Cantidades establecidas para preparar solución 10
buffer y el pH obtenido a partir de las 2 soluciones. 8

pH
6
Tu Volu- Volu- pH espe- pH pH, indi- 4
bo men de men de rado obte- cador 2
K2HPO4 KH2PO4 nido azul de
0
(mL) (mL) bromo ti-
mol 0 2 4 6 8
Volumen ( mL) NaOH 0.1N
1 9.7 0.3 8.2 7,9 azul
Fig. 2 pH vs volumen de NaOH en solución buffer (5B) y
2 9.2 0.8 7.8 7.8 azul blanco (BA)
3 8.7 1.3 7.6 7,6 azul
4 8.0 2,0 7.4 7,5 azul Tabla 3. Titulación con HCl (0,1 N)
*5 6.1 3.9 7.0 7.0 verde Volumen pH (5B) pH(BB)
6 5.0 5.0 6.8 6,9 verde 0,7 6,9 2,3
7 3.8 1.2 6.6 6.6 verde
1,4 6,5 1,9
2,1 6,0 1,6
 Datos de pH obtenidos de manera directa 2,8 3,3 1,4
con el pHmetro 3,5 2,5 1,3
 Porcentaje de error en el pH obtenido 4,2 2,2 1,3
4,9 1,9 1,2
𝑎𝑝𝑟𝑜𝑥𝑖𝑚𝑎𝑑𝑜−𝑒𝑥𝑎𝑐𝑡𝑜 5,6 1,8 1,2
 %𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = 𝑥100
𝑒𝑥𝑎𝑐𝑡𝑜 6,3 1,7 1,1
Ecuación 1 7 1,5 1,0
Tubo 1  Datos obtenidos de pH obtenidos de manera
8.2 − 7.9 directa con el pHmetro
%error = 𝑥100 = 3.6
8.2
Tabla 2. Titulación con NaOH (0,1 N) pH vs HCl
Volumen pH (5A) pH(BA)
(mL) pH (5B) pH(Bb)
8
0,7 7,51 12,19 7
6
1,4 7,60 12,46
5
2,1 7,70 12,58
pH

4
2,8 7,80 12,70 3
2
3,5 8,30 12,78 1
4,2 8,80 12,83 0
0 2 4 6 8
4,9 10,40 12,90
Volumen (mL) HCl 0.1N
5,6 10,80 12,91
6,3 11,20 12,95
7,0 11,42 12,95 Fig. 3 pH vs volumen de HCl en solución buffer (5B) y
blanco (Bb)
 Datos obtenidos de manera directa con el pHmetro
Análisis pasar tal vez porque la solución no se midió con exac-
titud, porque se haya contaminado con otra solución
Las soluciones amortiguadoras o buffer (ácido+sal), etc. Tomando como referencia los pH experimentales
son una mezcla en concentraciones elevadas de un de la tabla 1, la solución del tubo 5 fue la elegida para
ácido y su base conjugada, su acción principal es de ab- medir la capacidad amortiguadora, ya que el pH expe-
sorber los iones de hidrógeno o iones de hidroxilo. Por rimental fue de 7.0 siendo así una solución neutra.
lo que tienen la capacidad de mantener estable el pH de (Garzon, 1986)
una disolución cuando se le añade un ácido o base Al evaluar la capacidad amortiguadora de la solución
fuerte. Se oponen al cambio de pH, es decir, mantiene buffer con NaOH (base fuerte) y HCl (acido) datos que
la acidez o basicidad de un sistema dentro de un inter- se observan en la tabla 2 (NaOH) y 3 (HCl) y más grá-
valo de pH. (Túnez, Galván & Fernández, 2014) ficamente en la figura 2 y 3. Se puede ver en la fig. 2
La ecuación HERDERSON-HASSELBACH deduce como la solución buffer (5A) a comparación del blanco
que el pH de las soluciones amortiguadoras depende de (BA) mantiene el pH de una forma que este no se altera
dos factores: el valor de pKa y las proporciones de sal de manera rápida hasta 4,2 mL de NaOH adicionados
a ácidos o bases, donde, se consideran iguales las can- punto en el que el pH varia más, pero aun así se man-
tidades de sal y ácido o bases mezcladas en el intervalo tiene por debajo del pH de la solución BA.
de pH de 4 y 10, donde las concentraciones de H+ y OH-
son muy bajas y se puedan ignorar. (Túnez et,. al) En la fig. 3 La solución buffer (5B) mantiene el mismo
comportamiento de la solución 5A, con la diferencia
que esta controla que el pH no se acidifique de manera
rápida, el BB cambia su pH de forma rápida en la pri-
mera gota agregada de HCl hasta 2.3, mientras la solu-
Ecuación 2 ción buffer no permite que este cambio tan brusco su-
pH = grado de acidez o basicidad de una solución ceda bajando de 7.0 a 6,9 como se observa en la tabla
3. La solución buffer va perdiendo su capacidad amor-
pKa = valor del potencial de la constante de acidez del
tiguadora a medida que aumenta la cantidad de HCl
ácido débil
agregada y va tomando valores similares a la BB de
S = concentración de la sal manera más lenta.
A= concentración del ácido Cuando las soluciones buffer empiezan a perder capa-
cidad de amortiguamiento empieza a tener cambios sig-
“El tampón fosfato es inorgánico y se encuentra en
nificativos, lo que ocasiona mal funcionamiento en un
los líquidos intracelulares y mantiene el pH en torno al
organismo vivo, que podría provocar inmediatamente
6,9 debido al equilibrio existente entre un ácido débil;
su muerte, esto se debe a que la solución amortigua-
el dihidrógeno fosfato (DHP) y su base: el monohidró-
dora, no resiste cambios excesivos de pH (Túnez et,.
geno fosfato (MHP). Ambos compuestos mantienen un
al), permitiendo que la actividad biológica de enzimas,
equilibrio entre sí, pudiendo el DHP liberar un protón
proteínas, hormonas, bombas de iones entre otras sea
y transformarse en MHP, y el MHP puede unirse aun
optima(Galvez,NF), en el ser humanos los valores ex-
protón para originar una molécula de DHP,
tremos compatibles con la vida y con el mantenimiento
H2PO4- ⇄ HPO4-2 + H+” (Túnez et,. al)
de funciones vitales oscilan entre 6,8 y 7,8 de pH;
Es decir, a pH fisiológico, las especies del fosfato con
siendo el estrecho margen de 7,35 a 7,45 el de norma-
capacidad de tamponar son H2PO4- y HPO4-2 ya que
lidad Túnez et,. al). Estas soluciones cumplen sus fun-
su valor de pK es de 6,9.
ciones de manera eficiente.
En la tabla 1 se puede observar el pH esperado y el
obtenido de cada solución buffer al ser preparada; CONCLUSIONES
claramente se observa que el tubo 1, tubo 4 y tubo 6  Las soluciones amortiguadoras o tampón, son sis-
presentaron un porcentaje de error ya que no dio el pH temas acuosos que tienden a resistir cambios en
esperado. La solución del tubo 1 tuvo un porcentaje de
error de 3,6% siendo así el error más alto, esto pudo
 su pH, cuando se añaden pequeñas cantidades
de ácido o base.
 Las soluciones buffer tienen límite de amortigua-
ción y es cuando permiten que el pH cambie de
manera brusca y pierda su estabilidad.
 Las soluciones buffer permiten que un cuerpo
cumpla con sus actividades biológicas correcta-
mente.

REFERENCIAS.
Cáceres, B. (2012). Sistemas de Amortiguadores Bio-
lógicos. [online] Amortiguadoresbiologi
cos.blogspot.com.co. Available at: http://amortiguado-
resbiologicos.blogspot.com.co/ [Accessed 8 Sep.
2017].
Galvez A. (NF). Los principales amortiguadores en el
organismo humano y su importancia en su función re-
guladora
Skoog D A., West DM., Holler F. J, Crouch S R. 2008.
Fundamentos de Química Analítica. 8ª edición.
Thomson Learning, México.
Túnez, I., Galván, A. & Fernández, E. (2014). pH y
amortiguadores: Tampones fisiológicos. Tomado de:
http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioqui-
mica-biol-mol/pdfs/06%20pH%20AMORTIGUADO-
RES.pdf
Umland J.B., Bellama J.M. Química General. 2000. 3a
edición. International Thomson Editores, S.A. de C.V.
Vega A.E, Konisberg F.M. 2001. La teoría y la práctica
en el laboratorio de química general para Ciencias Bio-
lógicas y de la Salud. 1ª ed. Universidad Autónoma
Metropolitana. México