1.

Título del Curso Fundamental

Expresión de proteínas en sistemas heterólogos: Biología molecular, extracción,
purificación y comparación bioquímica  

2. Tutores responsables
Nombre completo Gerardo Corzo Burguete  
Adscripción Instituto de Biotecnología  
Teléfono 777-369-2902  
Correo electrónico corzo@ibt.unam.mx  
2 a. Estudiantes Coordinadores del Curso o Tópico
Nombre completo Mabel Rodríguez Gonzalez  
Adscripción Instituto de Biotecnología  
Teléfono 777-369-2902  
Correo electrónico mabel@ibt.unam.mx  
Nombre completo Alexis Joavany Rodríguez Solís  
Adscripción Instituto de Biotecnología  
Teléfono 777-369-2902  
Correo electrónico alexisr@ibt.unam.mx  
3. Profesores invitados
Nombre completo Ver sesiones de ponentes en el temario  
Adscripción  
Teléfono  
Correo electrónico  
4. Introducción/justificación del Curso/Objetivos
Introducción
La tecnología del ADN recombinante en la ingeniería genética y la biotecnología ha permitido el desarrollo
de una infinidad de estrategias con la finalidad de tener mejores sistemas de expresión heteróloga, sistemas
más productivos, mejor regulados, cultivos de mayor duración y el uso de cepas modificadas genéticamente
para obtener mayores rendimientos de proteínas estables semejantes a las endógenas. Por otra parte ha
sido una herramienta básica para el estudio de la estructura y función de proteinas incluyendo la generación
de cantidades significativas o marcadas isotópicamente para realizar estudios de estructura molecular.

En este tópico se permitirá a los estudiantes conocer diferentes sistemas de expresión heteróloga utilizados
actualmente en la investigación, específicamente los utilizados en el Instituto de Biotecnología y Centros de
Investigación vecinos. Además la dinámica del curso-tópico les permitirá discutir los problemas actuales y
buscar soluciones a la expresión de proteínas bajo estudio propio de los estudiantes. Finalmente, conocerán
las técnicas bioquímicas necesarias para comparar funciones/actividad de un producto recombinante con el
nativo.

Objetivo
Analizar una gama de ejemplos de expresión heteróloga de proteínas expresadas tanto en sistemas
procariotes como eucariotes, siendo fundamental el estudio de diferentes sistemas de expresión, la
purificación, estabilización y caracterización bioquímica de las proteínas expresadas.

Objetivos específicos

1. Entender diferentes sistemas de expresión heteróloga

2. Comprender las diferencias, ventajas y desventajas entre los sistemas celulares de expresión
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 procariote y eucariote.
3. Caracterización estructural de proteínas recombinantes (métodos analíticos y nuevas estrategias de
caracterización)
4. Analizar las formas de cultivo usadas industrialmente en la producción de proteínas heterólogas,
sus ventajas y desventajas.
5. Analizar diferentes formas de purificación de proteínas recombinantes (cromatografía por
intercambio iónico, fase reversa, afinidad, exclusión molecular)
6. Comparación de proteínas nativas y proteínas recombinantes

5. Características para la impartición del Curso

Indique el lugar en donde se realizará el Curso  
Número de sesiones y duración en horas por sesión 2.5 horas por sesión 16 sesiones  
(mínimo 36 horas)
Disponibilidad de impartirlo por videoconferencia NO  
Número total de alumnos que puede aceptar 20  
Número de alumnos EXTERNOS AL PMyDCB que 5  
puede aceptar
6. Método de evaluación
Por favor incluya en este apartado el % de la contribución relativa de:
Exámenes (número) 50%  
Participación en clase 30%  
Asistencia 0%  
Presentación de un proyecto 20%  
Otros  
7. Temario del Curso o Tópico
1. Introducción
1.1. Breve historia del desarrollo de sistemas de expresión
1.2. Importancia de la expresión de una proteína en particular
1.2.1 Aplicación y/o función de la proteína
1.2.2 Características estructurales (tamaño, estructura, etc.)
2. Sistemas de expresión heteróloga
2.1. Modelos celulares de expresión ventajas y desventajas
2.2. Vectores comerciales usados para hacer investigación y en la industria
3. Sistemas de cultivo para mejorar la expresión heteróloga
3.1. Cultivos en lote vs alimentado vs continuo vs perfusión
4. Extracción de las proteínas recombinantes expresadas
4.1. Recuperación de proteínas insolubles y solubles a partir del sistema de expresión
4.2. Técnicas de plegamiento de proteínas, para investigación y en la industria
4.3. Problemas y soluciones en el plegamiento.
5. Purificación de proteínas.
5.1. Técnicas de purificación de proteínas según su tamaño, carga, hidrofobicidad o afinidad
5.2. Comparación de rendimientos de proteína recombinante vs proteína nativa dependiendo de los
sistemas celulares utilizados
6. Estabilización de proteínas heterólogas purificadas
6.1. Estrategias de modificaciones postraduccionales y adición de componentes para su
estabilización y prolongación de tiempos de vida media.

Los participantes discutirán y plantearán dudas a lo largo de las ponencias de los profesores invitados
aproximadamente 1 hora; posteriormente, los estudiantes discutirán uno o dos artículos que serán
expuestos por los coordinadores del curso.

Los estudiantes de doctorado que coordinarán el curso participaran en cada sesión con la discusión de uno
o dos artículos que el profesor invitado proponga. La discusión será en la última hora y media de clase, esto
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 es 1 hora de clase del profesor invitado y 1.5 horas del estudiante coordinador. De esta manera los
estudiantes Mabel Rodríguez y Alexis Rodríguez participarán cada uno como mínimo 12 horas de carga
académica de las 16 sesiones propuestas, equivalentes al 30% para cada coordinador.

1-Clase introductoria (Agosto 10, M.C. Mabel Rodríguez y M.C. Alexis Rodríguez).

Expresión en modelos procariontes

2-Expresión de la enzima esfingomielinasa D de la araña violinista: el primer antígeno recombinante para la

producción de antiveneno en México (Ago. 17, M.C. Blanca Ramos, IBt-UNAM).

3-Expresión de regiones cortas de anticuerpos (Ago. 24, Dra. Lidia Riaño, IBt-UNAM).

4-El uso de las librerías de fagos como herramienta para seleccionar el producto recombinante deseado.
(Ago 31, Dr. Ernesto Ortiz, IBt-UNAM).

5-Expresión de proteínas de B. thuringensis (Sep. 7, Dra. Liliana Pardo, IBt-UNAM).

6-Expresión de neurotoxinas de alacrán (Sep. 14, Dra. Verónica Quintero, IBt-UNAM).

7-Expresión de enzimas en bacterias: Uso de proteínas reporteras del plegamiento (Sep. 21, Dr. Joel
Osuna, IBt-UNAM).

8-Como obtener proteínas multiméricas utilizando las bacterias como sistema de expresión (Sep. 28, Dra.
Gloria Saab, IBt-UNAM).

Expresión en modelos eucariontes

9-Expresión de proteínas recombinantes en levaduras (Oct. 5, Dr. Jordi Folch, UAEM).

10-Obtención de complejos macromoleculares proteicos utilizando el sistema de células de insecto-

baculovirus. (Oct. 12, M.C. Mabel Rodríguez, IBt-UNAM).  

11-Expresión de proteínas en plantas (Oct. 19, Rosana Sánchez, IBt-UNAM).

12-Expresión de proteínas recombinantes en células de mamífero, estrategias para obtener el patrón de

glicosilación deseado (Oct. 26, Dr. Antonio Serrato, INER).

13-Las células CHO como sistema de expresión de proteínas heterólogas (Nov. 9, Dra. Adriana Valdez,
Biomédicas-UNAM).

14-Terapia génica: la expresión de proteínas en el organismo blanco (Nov. 16, Dra Angélica Meneses,
UAEM).

15-Del laboratorio a la industria: producción de proteínas a gran escala en bacterias y células de mamífero
(Nov. 23, Dr. Mauricio Trujillo, Biomédicas-UNAM).

16-Exposición de trabajos finales de los estudiantes (Nov. 30, M.C. Mabel Rodríguez y M.C. Alexis
Rodríguez).  

8. Bibliografía

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 Bernkop-Schnu¨rcha A, Kraulandb AH, Leitnerb VM, Palmbergerc T, 2006. Thiomers: potential excipients for
non-invasive peptide delivery systems. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 58:253–
263.

Demeule B, Gurny R, Arvinte T. 2006. Where disease pathogenesis meets protein formulation: Renal
deposition of immunoglobulin aggregates. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics
62:121–130.

Graumann K, Premstaller A. 2006. Manufacturing of recombinant therapeutic proteins in microbial systems.

Biotechnol J. 1:164-86.

Hartley JL. 2006. Cloning technologies for protein expression and purification. Curr Opin Biotechnol.17:359-
66.

Jana S, Deb JK. 2005. Strategies for efficient production of heterologous proteins in Escherichia coli. Appl
Microbiol Biotechnol. 67:289-98.

Kost TA, Condreay JP, Jarvis DL. 2005. Baculovirus as versatile vectors for protein expression in insect and
mammalian cells. Nat Biotechnol. 23:567-75.

Peti W, Page R. 2007. Strategies to maximize heterologous protein expression in Escherichia coli with
minimal cost. Protein Expr Purif. 51:1-10.

Schmidt FR. 2004. Recombinant expression systems in the pharmaceutical industry. Appl Microbiol
Biotechnol. 65:363-72.

Shiloach JJ, Fass R. 2005. Growing E. coli to high cell density—A historical perspective on method
development. Biotechnology Advances 23, 345–357.

Yin J, Li G, Ren X, Herrler G. 2007. Select what you need: a comparative evaluation of the advantages and
limitations of frequently used expression systems for foreign genes. J Biotechnol. 127: 335-47  

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