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    Reporte 2 SCC

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    Kimberly Torres
    Este documento describe dos métodos para verificar la precisión y exactitud de una micropipeta. El método fotométrico involucra diluciones seriadas de una solución de dicromato de potasio y mediciones de absorbancia. El método gravimétrico implica pesadas repetidas del volumen pipeteado. Ambos métodos muestran que la micropipeta mide un volumen de 22.24 μL, con un error del 11.2%, indicando la necesidad de recalibrarla.

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    Este documento describe dos métodos para verificar la precisión y exactitud de una micropipeta. El método fotométrico involucra diluciones seriadas de una solución de dicromato de potasio y mediciones de absorbancia. El método gravimétrico implica pesadas repetidas del volumen pipeteado. Ambos métodos muestran que la micropipeta mide un volumen de 22.24 μL, con un error del 11.2%, indicando la necesidad de recalibrarla.

    Descripción original:

    Verificación y evaluación del uso y funcionamiento de instrumentos de medición volumétrica

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    Este documento describe dos métodos para verificar la precisión y exactitud de una micropipeta. El método fotométrico involucra diluciones seriadas de una solución de dicromato de potasio y mediciones de absorbancia. El método gravimétrico implica pesadas repetidas del volumen pipeteado. Ambos métodos muestran que la micropipeta mide un volumen de 22.24 μL, con un error del 11.2%, indicando la necesidad de recalibrarla.

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    Este documento describe dos métodos para verificar la precisión y exactitud de una micropipeta. El método fotométrico involucra diluciones seriadas de una solución de dicromato de potasio y mediciones de absorbancia. El método gravimétrico implica pesadas repetidas del volumen pipeteado. Ambos métodos muestran que la micropipeta mide un volumen de 22.24 μL, con un error del 11.2%, indicando la necesidad de recalibrarla.

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    INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

    Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

    Sistemas de Control de Calidad

    Práctica 2. Verificación y evaluación del uso y


    funcionamiento de instrumentos de medición
    volumétrica

    Profesores:
    M. en C. Aura Patricia Hernández Olicón
    QBP Cinthya Salimah Martínez Reyes
    QBP Alejandro Landín Caudillo

    Grupo: 5QV1 Sección: 3


    Introducción
    Las micropipetas son dispositivos que se utilizan para medir o dispensar pequeños
    volúmenes de líquido de un recipiente a otro con gran exactitud. Sin embargo, su uso no
    está exento de errores, que pueden ser ocasionados debido a que las micropipetas se
    encuentran descalibradas o por falta de habilidad del operario.
    El error aleatorio, también conocido como imprecisión, es una medida de la variación de
    valores medidos individualmente. La imprecisión es muy pequeña cuando existe solo una
    mínima variación entre las medidas repetidas. Para conseguir una imprecisión
    despreciable, es necesario no solo que los equipos utilizados sean precisos, sino que
    también haya un procedimiento adecuado, limpieza y experiencia práctica. El error
    sistemático también conocido como inexactitud, es una medida de la desviación entre el
    valor medido y el valor nominal. Una menor inexactitud se aprecia cuando la desviación
    entre el valor medido y el valor nominal es pequeña. La exactitud de un sistema de
    dispensación se puede comprobar mediante un método gravimétrico (método de
    referencia) o un método fotométrico (método de rutina).

    Objetivos
    - Identificar los errores al utilizar la micropipeta.
    - Comparar el método de rutina con el método de referencia.
    -

    Fundamento
    El método gravimétrico consiste en determinar la masa del líquido que puede contener o
    entregar a una medida volumétrica o aforo o punto de referencia específico de un
    recipiente volumétrico. Se utiliza como medio de transferencia el agua (ρ=1) y se requiere
    una balanza que tenga una buena repetibilidad.
    El método fotométrico se basa en la utilización de soluciones que presenten una relación
    lineal entre la absorbancia y la concentración (ley de Beer-Lambert-Bouguer). Se pueden
    utilizar distintas soluciones como la de dicromato de potasio al 8% en agua destilada.
    Además, se requiere utilizar un estándar relativo para calcular el volumen que mide
    realmente la micropipeta.
    Métodos

    INICIO INICIO

    Método gravimétrico
    Método fotométrico

    Utilizar micropipeta a verificar y seleccionar


    valor nominal (VNP) que desee analizar.
    Dicromato de potasio para espectrofotómetros
    que pueden leer entre 492 y 510 nm.
    Limpiar punta con agua destilada pipeteando
    el volumen ajustado al menos 3 o 4 veces.

    En 5 tubos de 10 x 75 mm realizar diluciones


    de 1:20 utilizando solución de dicromato de Aspirar volumen seleccionado, manteniendo
    potasio al 8% con la micropipeta a verificar. la pipeta vertical de acuerdo con lo descrito
    en la sección de manejo de micropipetas.

    Tarar la balanza con un recipiente y expulsar el


    Mezclar por inversión cubriendo volumen seleccionado sobre el contenedor.
    los tubos con papel parafilm.

    Leer el peso en mg y repetir operación


    Ajustar espectrofotómetro a cero con agua al menos 5 veces.
    destilada a λ 500 nm y determinar
    absorbencia de cada tubo, así como para el
    estándar relativo. Anotar sus resultados. Utilizar una balanza con
    legibilidad de 0.001 mg.

    Calcular CV y %E con las Obtener el promedio de sus datos y calcule el


    absorbancias obtenidas. CV, el %E y el volumen.

    FIN FIN
    Resultados
    Bitácora de resultados Fecha: 12/09/2018
    Verificación, evaluación del uso y funcionamiento de instrumentos de medición
    volumétrica.
    Datos de la micropipeta
    Instrumento: Micropipeta (mide volúmenes pequeños) Tipo de ajuste:
    Marca: Volumen de la micropipeta: 20-200 µL
    Unidades: microlitros (µL) Número de serie:
    Número de micropipeta (codificación propia del usuario): 10 SCC
    Límites de error:
    Tabla 1. Errores máximos permitidos (ISO 8655-2)

    Condiciones físicas de la micropipeta: en buen estado.


    Cálculo y tratamiento de los datos
    - Datos obtenidos a partir del método fotométrico
    Verificación de la precisión
    Reactivo utilizado: Dicromato de potasio Longitud de onda seleccionada: 500 nm
    Solución con la que se hizo las diluciones: Agua destilada
    Espectrofotómetro utilizado:
    Ajuste del espectrofotómetro con: Agua destilada
    Método de pipeteo:
    Datos obtenidos
    Número de tubo Absorbancia
    1 0.303
    2 0.243
    3 0.252
    4 0.290
    5 0.319
    Forma y cálculo de la media y del coeficiente de variación:
    𝜎
    𝐶𝑉 = ∗ 100%
    𝜇
    Donde:
    σ = Desviación estándar
    μ = Media aritmética de la población
    0.0293
    𝐶𝑉 = ∗ 100%
    0.2814

    Absorbancia promedio: 0.2814 Media obtenida: 0.2814


    Desviación estándar: 0.0293 Coeficiente de variación: 10.14 %
    ¿Qué representa el coeficiente de variación? La precisión de un método analítico.
    ¿Hay imprecisión? Sí.

    Verificación de la exactitud
    Reactivo con el que se realizó el estándar relativo: Dicromato de potasio
    Material de vidrio para el estándar relativo: matraz aforado de 500 mL
    Volumen preparado: 500 mL Longitud de onda seleccionada: 500nm
    Absorbancia del estándar relativo: 0.253
    Volumen nominal de la micropipeta (VNP) (µL): 20
    Fórmula para calcular el volumen de la micropipeta
    𝐴 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑥 𝑉𝑁𝑃
    𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑞𝑢𝑒 𝑚𝑖𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑖𝑐𝑟𝑜𝑝𝑖𝑝𝑒𝑡𝑎 𝑒𝑛 µL =
    𝐴 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 𝑟𝑒𝑙𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜
    Donde:
    A promedio = valor obtenido durante la verificación de la precisión.
    VNP = valor nominal de la micropipeta.
    A del estándar relativo = absorbencia de dicho estándar.

    0.2814 𝑥 20 µL
    𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑞𝑢𝑒 𝑚𝑖𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑖𝑐𝑟𝑜𝑝𝑖𝑝𝑒𝑡𝑎 𝑒𝑛 µL =
    0.253

    Volumen que mide la micropipeta (µL): 22.24 µL


    Verificación de la exactitud
    Fórmula y cálculos para calcular el % error:
    𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑜𝑏𝑠𝑒𝑟𝑣𝑎𝑑𝑜 − 𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑎𝑙
    % 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = 𝑥 100
    𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑎𝑙

    Donde:
    Valor observado = volumen de la micropipeta, determinado con la primera fórmula.
    Valor esperado = valor nominal de la micropipeta.
    22.24 − 20
    % 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = 𝑥 100
    20
    % Error calculado: 11.2 %
    Volumen de la Volumen Volumen que mide % de error
    micropipeta (µL) seleccionado (VNP) la micropipeta (µL)
    (µL)
    20-200 20 22.24 11.2

    Observaciones y puntos críticos identificados en el procedimiento


     Profundidad de inmersión errónea de la punta.
     Ángulo de pipeteo incorrecto
    Acciones correctivas
     Sumergir la punta en función de su tamaño: de 1 a 2 mm en las pipetas de
    microvolumen y hasta 3 o 6 mm en las pipetas de gran volumen.
     El ángulo de inmersión de la punta de la pipeta en la muestra debería ser lo más
    vertical posible y no debería desviarse más de 20 grados del ángulo vertical.

    Datos obtenidos por el método gravimétrico


    - Datos de la balanza
    Instrumento: Balanza analítica Tipo de ajuste:
    Marca: Número de serie:
    Unidades: miligramos (mg) Decimales:
    Número: Codificación propia del usuario:
    Condiciones físicas de la balanza:

    Calibración del instrumento: Recipiente utilizado:


    Método de pesos utilizado: Peso del recipiente (w1):
    Temperatura de control: Método de pipeteo:
    Datos obtenidos por el método gravimétrico
    No. mg
    1 0.0885
    2 0.0896
    3 0.0852
    4 0.0842
    5 0.0876
    Volumen total: 500 µL Media de los datos obtenida: 0.0886 mg
    Desviación estándar: 2.022x10-3 Coeficiente de variación: 2.28%
    % Error: -11.1% Factor “Z”: 1.0040 mL/g
    Fórmula y cálculos para obtener el volumen real de la micropipeta:
    𝑉 =X∗𝑍
    Donde:
    V = volumen medio
    X = promedio de los pesos
    Z = Factor Z (25°C = 1.0040 mL/g)
    Sustitución de datos:
    𝑉 = 0.0886 g ∗ 1.0040 𝑚𝐿/𝑔
    𝑉 = 0.0889 𝑚𝐿
    Conversión a µL:
    Tomando en cuenta que 1 mL = 1000 µL

    𝑉 = 0.0889 mL ∗ 1000 µL/𝑚𝐿


    𝑉 = 88.9 µL

    Volumen real de la micropipeta (µL): 88.9 µL


    Observaciones y puntos críticos identificados en el procedimiento
     Ángulo de pipeteo incorrecto.
     Profundidad de inmersión.
    Acciones correctivas
     El ángulo de pipeteo debe ser lo más vertical posible.
     Sumergir la punta en función de su tamaño: de 1 a 2 mm en las pipetas de
    microvolumen y hasta 3 o 6 mm en las pipetas de gran volumen.
    Micropipeta Método fotométrico Método gravimétrico
    Vol. de la micropipeta (µL) 20-200 20-200
    Vol. seleccionado (VNP) 20 100
    (µL)
    Vol. que mide la
    22.24 88.9
    micropipeta (µL)
    % de error 11.2 -11.1
    Método primario para la determinación de volumen y verificación de los instrumentos:
    - Método gravimétrico
    Verificación de la micropipeta:
    Observaciones generales:

    Recomendaciones para el uso de la micropipeta:

    Discusión
    Los valores normales de coeficiente de variación y % de error establecidos por la ISO
    8655 (ver Tabla 1) son indicativos de precisión y exactitud respectivamente. Para
    considerar que los resultados obtenidos en la práctica se deben a que la micropipeta está
    descalibrada, estos deben ser iguales o cercanos a los establecidos por la norma. Si son
    demasiado elevados se interpretan como errores cometidos por parte del operario, hecho
    que se ve reflejado en mi caso, el cual se respalda con los puntos críticos encontrados:
    - Profundidad de inmersión errónea de la punta
    La correcta profundidad de inmersión de la punta puede mejorar la exactitud en hasta un
    5%. Si la punta se sumerge demasiado, el volumen de gas de la punta se comprime y
    provoca que se aspire demasiado líquido. En cambio, si se sumerge poco, al aspirar el
    líquido su nivel en el recipiente descenderá lo que provocará que la punta quede fuera
    de este y el volumen sea menor al requerido.
    El % de error obtenido en el método gravimétrico al ser negativo (-11.1%), se dice que es
    un error por defecto, es decir, cuando se ha establecido un determinado volumen de
    muestra (100 µL) pero se registra una cantidad menor a la indicada (88.9 µL).
    - Ángulo de pipeteo incorrecto
    El ángulo de inmersión de la punta de la pipeta en la muestra debería ser lo más vertical
    posible y no debería desviarse más de 20 grados del ángulo vertical. Un ángulo más
    horizontal provoca que se introduzca demasiado líquido en la punta, lo que conlleva
    aspiraciones inexactas. Esto se ve relacionado con el %E obtenido en el método
    fotométrico (11.2%). Al ser un error positivo se habla de un error por exceso. Este hace
    referencia a cuando se establece una determinada cantidad (20 µL), pero se registra una
    mayor a la indicada (22.24 µL).
    Otros aspectos que pudieron haber influido son:
    - Fallo de enjuague previo
    La dosificación del líquido de una pipeta deja un recubrimiento del líquido en la punta, lo
    que provoca que el volumen expulsado sea ligeramente inferior de lo que debería ser.
    Enjuagar previamente una nueva punta un par de veces, como mínimo, con el líquido que
    se va a usar, servirá para acondicionar el interior de la punta.
    - Ritmo irregular en el pipeteo
    Es recomendado tener un ritmo constante en el pipeteo entre muestras. Se debe evitar ir
    deprisa o realizar operaciones rápidas, y mantener el ritmo para cada paso del ciclo de
    pipeteo.
    Con respecto a los métodos gravimétrico y fotométrico, ambos permiten determinar la
    exactitud y precisión del analista. Ningún resultado obtenido está dentro de lo establecido
    por la norma. Además, son evidentes las fallas cometidas en la técnica de pipeteo, por lo
    que podemos afirmar que el analista carece de precisión y exactitud.

    Conclusiones
    - Hay imprecisión e inexactitud del analista.
    - El método gravimétrico es más rápido y mucho más fácil de llevar a cabo
    comparado con el método fotométrico.

    Preguntas extra
    1. ¿Cuáles son las cifras significativas y su redondeo de acuerdo con la NOM-Z-59-
    1986?

    2. Hoja de datos de seguridad del dicromato de potasio


    Fórmula: K2Cr2O7
    El dicromato de potasio es un sólido cristalino naranja-rojizo, soluble en agua. A diferencia
    del dicromato de sodio, no es higroscópico. Sus cristales son triclínicos pinacoidales.
    Reacciona violentamente con ácido sulfúrico y acetona o hidracida. Con hidroxilamina,
    reacciona explosivamente y con etilenglicol a 100 °C, la reacción es exotérmica.
    Riesgos a la salud:
    El principal problema de este producto es su capacidad para corroer e irritar piel, ojos,
    membranas mucosas y tracto respiratorio, así como hígado y riñones, por lo que es
    peligroso inhalado, ingerido o por contacto con la piel.
    Se ha informado de efectos tóxicos de este producto sobre los sistemas circulatorio y
    nervioso central, pulmones, corazón, riñones y tracto gastrointestinal de conejos
    expuestos a concentraciones crónicas.
    En general, los síntomas de intoxicación por exposición a este compuesto son: sensación
    de quemadura, tos, respiraciones cortas, dolor de cabeza, náusea, vómito. Además,
    puede presentarse erosión y decoloración de los dientes, nefritis e inflamación y
    ulceración del tracto gastrointestinal.
    3. Breve resumen de la ISO 8655
    La ISO 8655:2002 fue escrita específicamente para definir los requisitos necesarios para
    producir calibraciones precisas y confiables de pipetas de pistón y otros equipos de
    medición estrechamente relacionados. Detalla los métodos requeridos, las condiciones
    de prueba, el equipo de prueba, los requisitos de informes e incluye los requisitos para
    informar los valores de incertidumbre de medición requeridos.
    Los puntos principales de la ISO 8655:2002 se centran en:
    1.Utilizar la balanza adecuada
    2.Minimizar efecto de la evaporación
    3.Condiciones ambientales

    Bibliografía
    - Guisande-González C., (2006). Tratamiento de datos. Ediciones Díaz de Santos.
    España. pp. 25.
    - León-Huaca C., (s.f.). Condiciones de Funcionamiento Anómalas en los
    Instrumentos Volumétricos Operados con Pistón. Disponible en:
    “http://www.inacal.gob.pe/inacal/files/metrologia/EVENTOS/SIMPOSIOS/2016/Pr
    esentaciones/Condiciones_Funcionamiento_Anomalos_en_Instrumentos_Volumt
    ricos_Operaos_con_Piston_-_Camilo_Len.pdf” (Consulta: 09/2018).
    - n/a., (s.f.). Pipetas, Disponible en:
    “http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/cd29/laboratorio/cap16.pdf” (Consulta:
    09/2018).
    - SEGOB, (1986). Norma Oficial de Metrología NOM-Z-59-1986. Valores Numéricos
    - Guía para el Redondeo e Interpretación de Valores Límites. Disponible en:
    “http://dof.gob.mx/nota_detalle.php?codigo=4796765&fecha=16/06/1986”
    (Consulta: 09/2018).
    http://www.imh.eus/es/comunicacion/dokumentazio-irekia/manuales/proyecto-medicion-
    tridimensional-en-fabricacion-mecanica-con-equipos-portables/tolerancias-
    dimensionales tipos de ajuste

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