MICOLOGIA MEDICA MANUAL Ultima Versiã N

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DEL ESTADO DE MÉXICO
FACULTAD DE QUÍMICA
MANUAL DE LABORATORIO DE MICOLOGÍA MÉDICA
QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO
Autores
M. en A. S. S. Bertha Jáuregui Rodríguez

M. en E. Q. Macario Morales Rodríguez
M. en S. P. Sergio H. Pavón Romero
M. en C. Ma. de las Mercedes Rojas Pedral
2011
Nombre del alumno: ______________________________________________
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INDICE
Página
Reglamento del Laboratorio de Micología Médica. 2

Presentación 3
Objetivo 4
Introducción 5
Práctica No. 1 Generalidades de los Hongos Patógenos 6
Práctica No. 2 Metabolismo de Hongos 16
Práctica No. 3 Micotoxinas 19
Introducción a los Hongo patógenos y toma de muestras 22
Práctica No. 4 Pitiriasis versicolor 26
Práctica No. 5 Dermatofitosis 30
Práctica No. 6 Esporotricosis 36
Práctica No. 7 Micetomas 40
Práctica No. 8, Histoplasmosis 45
Práctica No. 9 Coccidioidomicosis 50
Práctica No. 10 Nocardiasis 54
Práctica No. 11 Candidiasis 58
Práctica No. 12 Criptococosis 63
Práctica No. 13 Aspergilosis 67
Apéndice A. Medios de Cultivo 71
Apéndice B. Aclarantes y Colorantes 76
Referencia bibliográfica 78
Imágenes pictográficas:
Descripción de la práctica
Análisis y discusión de resultados
Conclusiones y sugerencias
Cuestionario
Actividad de síntesis
Referencias bibliográficas
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Reglamento de laboratorio
1. Para el acceso al laboratorio el alumno deberá tener puesta la bata blanca y limpia
2. Se les permitirá entrar al laboratorio a los alumnos que cuenten con el material y equipo
solicitado en cada práctica.
3. La tolerancia para ingresar al laboratorio será diez minutos después de la hora señalada.
4. Los objetos personales deben ser guardados en los cajones de las mesas de trabajo
5. Antes de iniciar la práctica deberán limpiar la mesa de trabajo con solución de benzal al 5 % y
al término de la practica realizar la misma operación.
6. No esta permitido: comer, beber y en general se recomienda tener cuidado personal en el
manejo del material biológico.
7. Es importante mantener orden, respeto dentro del laboratorio.
8. El material contaminado debe ser tratado de acuerdo a las normas establecidas en el manual
de higiene y seguridad de la Facultad de Química.
9. Todo el material como: algodones, papeles, sellos, etc. deberá ser depositado en los botes
destinados para este uso. Mantener escrupulosamente limpio todas las áreas de trabajo.
10. Cualquier contingencia que se presente durante la práctica se deberá avisar al profesor
inmediatamente.
11. El material biológico (cultivo de microorganismos y material contaminado) debe esterilizarse y
ser depositado en el lugar indicado.
12. Después de su uso los colorantes deben ser evaporados y los residuos depositados en
contenedores específicos.
13. Es importante mantener los microscopios limpios (limpiar las lentes con papel seda), e
informar al profesor si observa alguna descompostura o desajuste al iniciar, durante o al
finalizar la práctica.
14. Al concluir las actividades en el laboratorio es importante lavarse las manos con abundante
agua y jabón.
15. Todo material que se rompa o extravié, el grupo deberá de recuperar dicho material.
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PRESENTACION
En la formación del Químico Farmacéutico Biólogo se requiere del dominio de diversos aspectos
teóricos y prácticos, a través de los cuales este profesional de la salud podrá desempeñar sus
competencias en forma eficiente y oportuna. Una de sus principales competencias profesionales
se relaciona con la realización de estudios en el área de la microbiología que permitan apoyar
diagnósticos certeros de la etiología de los diversos cuadros clínicos en especial con las
infecciones causadas por hongos tanto en el hombre como en animales. Por lo anterior y
considerando que el QFB lleva acabo estudios de laboratorio para aislar e identificar diversos
agentes etiológicos de las enfermedades fungicas, que se presentan en el hombre, se ha
realizado el presente manual, con el principal propósito de servir de complemento al curso teórico
de Micología Médica que se imparte en el octavo semestre del Programa Educativo de Químico
Farmacéutico Biólogo. Este manual, contiene información que permite conocer el metabolismo de
los hongos, orienta a la identificación general de éstos, así como de los principales agentes
causales de envenenamiento y enfermedades.
Se incluye además un apartado de preparación de medios de cultivo y reactivos necesarios para

efectuar un buen diagnóstico de laboratorio.
El manual esta integrado por 13 prácticas que reflejan las alteraciones que presentan los hongos
en el hombre principalmente, así como los métodos de diagnostico clínico para la detección de los
agentes causales, se incluye además dos apéndices que refieren la composición de los medios de
cultivo así como de los reactivos y soluciones, más empleados. Con esta serie de prácticas se
espera que el alumno desarrolle habilidades manuales para un mejor entendimiento y manejo del
material clínico para diagnosticar una micosis.
3
OBJETIVO
El empleo de este manual, proporcionará al alumno los conocimientos y habilidades básicas para
realizar una buena toma y procesamiento de muestras clínicas, así como destreza para aislar e
identificar agentes causales de diversas infecciones micóticas, estableciendo un diagnóstico
oportuno y eficiente de estas patologías.
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INTRODUCCION
Las micosis, más frecuentes hoy día, constituyen un problema en la práctica diaria, tanto para su
diagnóstico como para su tratamiento y profilaxis, principalmente con la presencia de hongos
oportunistas, filamentos y levaduriformes, vistos con mayor frecuencia en grupos de alto riesgo,
como pacientes con trastornos de su aparato inmunocompetente, con transplantes de órganos o
con SIDA, por lo que el conocimiento de metodologías rápidas y adecuadas para este fin se hace
importante, ante tal situación, el presente manual pretende preparar al alumno en el diagnóstico
microbiológico, aislamiento e identificación de los agentes causales de las micosis más frecuentes
en nuestro medio.
El manual contiene apartados de: lineamientos del trabajo en el laboratorio, morfología de los
hongos anemófilos, métodos de diagnóstico clínico para las micosis que éstas han sido
clasificadas en función de su localización anatomoclínica, tanto en pacientes inmunocompetentes
como en pacientes inmunodeprimidos.
Esta edición fue actualizada con figuras de morfología micro y macroscópicas de algunos hongos
patógenos, incluyéndo además signos y manifestaciones clínicas que se presentan en los
pacientes afectados por este tipo de infecciones.
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PRACTICA No. 1
GENERALIDADES DE LOS HONGOS
Objetivo:
Diferenciar las estructuras en fase saprofitica más coumunes de los hongos más encontrados en
la naturaleza.
Duración de la práctica: 4.0 hrs.
Introducción:
Los organismos incluidos bajo la categoría general de hongos (mohos y levaduras) han sido
situados por Wittaker como un reino aparte, lo cual ha facilitado su caracterización.
Los hongos como un reino aparte constituyen un complejo y fascinante grupo de organismos tan
grande que se calculan más de 1 000 000 de especies; viven en ambientes más variados y sólo
alrededor del 1% son patógenos para mamíferos, vegetales (fitopatógenos), insectos
(entomógenos) y para otros hongos (micoparásitos).
Los hongos mejor conocidos por todos, son los macroscópicos, denominados también setas o
champiñones, con tamaño, forma y color de lo más variado; además tenemos a los microscópicos
(mohos), que son los más abundantes en la naturaleza.
Tienen como característica común, la ausencia de clorofila, por tanto no pueden realizar la
fotosíntesis y deben nutrirse a partir de materias orgánicas ya elaboradas por lo cual son
considerados como organismos heterótrofos.
Dentro de las características y aspectos funcionales más relevante de este grupo de organismos,
podemos mencionar que tienen una gran importancia en la conservación del equilibrio ecológico
de la naturaleza (p.ej. en los bosques, las micorrizas) pues desintegran o reciclan casi todos los
restos de la materia orgánica (uno de los primeros eslabones de las cadenas tróficas); también
intervienen en la producción del humus del suelo, como consecuencia directa de lo anterior,
indispensable para su fertilidad y para la biosfera en general, es la biodesintegración.
Por otro lado, tienen un gran interés para el hombre, ya sea como alimentos de consumo directo, o
bien como herramientas para obtener otro tipo de productos a nivel industrial como vinos, cerveza,
licores, quesos, etc. Así mismo son indispensables para la producción de compuestos de interés
industrial como: antibióticos, ácidos orgánicos, alcaloides, gomas, etc. Incluso algunos hongos se
encuentran incluidos en programas de control biológico por su papel degradador.
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No obstante lo anterior, también participan de manera indeseable en el biodeterioro ambiental y
como patógenos para el hombre, animales y plantas de interés económico.
Otro aspecto importante que se debe considerar es el papel cultural que han tenido en los pueblos
precolombinos, ya que por la capacidad de algunas especies de producir sustancias alucinógenas,
han sido utilizados a lo largo de la historia del hombre y continúa en nuestros días su uso y
consumo.
Estos organismos abundan en el suelo, agua y vegetación, como hojas o troncos, donde viven por
mucho tiempo. Poseen características muy especiales además de ser heterótrofos, son
generalmente inmóviles aunque algunas especies presentan células con flagelos. Sus paredes
celulares son muy semejantes en espesor, composición química y estructura a las de las plantas.
Presentan núcleos (Eucariotes), son portadores de esporas y se reproducen sexual y
asexualmente. Las estructuras somáticas son unicelulares y filamentosas, éstas últimas contienen
principalmente en su pared, celulosa y quitina.
Los hongos crecen como células únicas (levaduras) o bien como colonias filamentosas
multicelulares (mohos). Estos organismos están constituidos por estructuras filamentosas de forma
tubular, llamadas hifas que se considera la unidad estructural del hongo.
Al conjunto de hifas se les denomina talo o micelio; de acuerdo con su función el talo o micelio se
divide en:
(a) Micelio vegetativo: La parte del micelio que se encuentra dentro del sustrato se conoce como
micelio vegetativo y es el encargado de efectuar las funciones de nutrición.
(b) Micelio reproductor o aéreo: Se encuentra por encima del sustrato y se encarga de la
formación de esporas, efectuando por lo tanto la función reproductora.
Dependiendo de la continuidad de sus células que se observan al microscopio; el micelio puede

ser: Continuo o cenicítico y septado.
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Los hongos se reproducen asexual y sexualmente a través de esporas y las estructuras que las
producen se llaman por lo tanto órganos esporógenos. Por su origen las esporas se clasifican en:
1. Esporas Sexuales:
a. Oosporas: Se forman de la unión de dos gametangios (Presentes en Oomycetes).

a. Zigospora: Unión de dos hifas sin diferenciación morfológica. (Rhizopus o Mucor).
b. Ascosporas: Nacen en un ascocarpo que tiene forma de saco (endógenas) Microsporum spp
o Saccharomyces spp.
c. Basidiosporas: Son exógenas, se forman en el basidio (Cryptococcus neoformans en su fase
sexual Filobasidiella.)
2. Esporas Asexuales:
a. Talosporas: derivadas directamente del micelio, se pueden dividir en:
a.1 Artrospora: Se forman por la fragmentación del micelio, tienen forma rectangular y doble pared.
(Geotrichum)
a.2 Blastosporas: Se forman por gemación. (Candida)
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a.3 Dictiosporas: Esporas multicelulares, con septos irregulares. (Alternaria).
a.4 Clamidosporas: Se forman por ensanchamiento de la hifa, pueden ser terminales, laterales e
intercalares Candida y mayoría de los hongos en estadíos jóvenes.
b. Conidias: Esporas producidas por diferenciación del micelio en estructuras especializadas,

llamadas conidióforos. (Penicillium, Aspergillius)
c. Esporangiosporas: Esporas endógenas, producidas en estructuras especializadas llaman

esporangios. (Mucor, Rhizopus).
Los hongos obtienen su alimento y se nutren por absorción como parásitos infectando organismos
vivos, como saprobios atacando sustancias orgánicas muertas, o en simbiosis. La mayoría de los
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hongos conocidos, son capaces de vivir sobre materia orgánica muerta como lo demuestra el
hecho de poder cultivarlos artificialmente sobre medios sintéticos.
Estos microorganismos desempeñan un papel muy importante, especialmente son los agentes
responsables de gran parte de la descomposición de las sustancias orgánicas y como tales, nos
afectan de modo directo, por la destrucción de los alimentos, tejidos y otros artículos de consumo
manufacturados con materiales sujetos al ataque de estos organismos.
Causan la mayor parte de las enfermedades de las plantas y también muchas enfermedades en el
hombre y animales.
Los hongos pueden ser identificados con base a su morfología microscópica y macroscópica; así
como por su fisiología, a continuación se señalan los aspectos más importantes a considerar:
Características que deben ser observadas en los cultivos de hongos (colonias gigantes)
I.- Hongos Filamentosos
1. Observaciones Macroscópicas
a) Medio de cultivo utilizado.

b) Tiempo de cultivo y temperatura de incubación.
c) Topografía de la colonia.
 Circulares, elevadas o surcadas.

 Planas, no surcadas, bordes lisos u ondulados.
 Elevadas, convexas, centro saliente.
 Crateriformes, con centro recortado.
 Surcos radiales.
 Cerebriforme, plana y/o elevada.
d) Pigmento
 Inverso
 Reverso
e) Pigmento difundido al medio.

f) Gotículas escasas y/o abundantes, transparentes, opacas, brillantes y coloreadas.
g) Textura
 Granulosa (como arena fina)

 Pulverulento (como talco o harina)
 Aterciopelado
 Cotonoso (aspecto de algodón)
 Glabrosa (membranosa)
 Cremosa (levaduras)
h) Tamaño de la colonia.
 Crecimiento limitado
 Invasor
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2. Observaciones Microscópicas.
a) Micelio
 Diámetro.
 Pigmento presente (ocre a marrón, amarillo, verde, etc.)
 Pigmento ausente (hialino)
 Septado o no
b) Esporas (tipo; ver la clasificación de Esporas según Saccardo)

c) Conidioforo
 Simple
 Ramificado
d) Conidios
 Microconidios (forma y tamaño)

 Macroconidios (forma y tamaño)
e) Clamidosporas
 Aisladas
 Terminales
 En cadenas
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f) Ascos y Ascosporas
 Forma
 Tamaño
 Tonalidad
 Número de ascosporas por asco
 Septo presentes o no
 Arreglo
g) Otras características importantes para la identificación de género y especie (se deben

checar en la literatura)
II.- Hongos Levaduriformes
1. Las levaduras son identificadas a través de sus características de cultivo, morfológicas,

bioquímicas y reproducción sexual.
2. Características morfológicas y de reproducción son utilizadas para separar los géneros.
3. Características bioquímicas distinguen especies.
4. Criterios
a) Morfología microscópica
1. Reproducción vegetativa
 Fisión.
 Brotamiento bipolar
 Brotamiento multipolar
2. Células vegetativas
 Forma
 Tamaño
 Micelio y pseudomicelio
 Clamidosporas
 Artrosporas
 Balistosporas
 Blastosporas
b) Cultivo
1.- Característica de la colonia
 Textura
 Tamaño
 Color
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Parte Experimental:
Material
 Tubos con cepas de hongos filamentosos y levaduriformes.

 Cubreobjetos
 Portaobjetos
 Asa micológica
 Puente de tinción
 Azul algodón lactofenol
 Barniz transparente
 Bulbos de hule
 Pipetas Pasteur
 Cajas petri para microcultivos
 Triángulos de vidrio
 Agar dextrosa de Sabouraud (SDA) o papa dextrosa agar (PDA)
 Glicerol al 10% y formol al 10%
 Alcohol
 Mechero bunsen
 Cinta scotch
 Microscopio
Procedimiento
Para la identificación de los hongos filamentosos se realizan los siguientes pasos:
1. Examen macroscópico de la colonia en el tubo.

2. Examen microscópico.
3. Preparación en fresco: a partir de los cultivos originales, tomar un pequeño trozo de
aproximadamente 1 mm de diámetro, colocar el fragmento sobre un portaobjetos, separarlo
con ayuda de una aguja de disección o de un alfiler y montarlo con el colorante, azul algodón
lactofenol. Observar al microscopio a seco débil (10 X) y a seco fuerte (40 X)
4. Preparación directa: empleo de la técnica de la cinta scotch. A partir de las colonias gigantes
colocar un fragmento de la cinta scotch y presionar ligeramente sobre la colonia,
posteriormente depositar la cinta sobre un portaobjetos con una gota del colorante azul
algodón y cubrir con portaobjetos. Realizar las observaciones a seco débil y seco fuerte.
a) Microcultivo
Técnica de Ridell o Cultivo de block: Cortar con una hoja de bisturí estéril en una placa de agar
dextrosa sabouraud o papa dextrosa agar, bloques de 0.5 cm de superficie por 5 mm 2 de grosor,
colocar estos cuadros en un portaobjetos previamente esterilizado en una caja de petri y sobre un
tubo de vidrio doblado en V, enseguida inocular con una pequeña muestra de la colonia aislada, en
el centro de cada uno de los lados del cuadro de SDA o PDA y poner un cubreobjetos,
presionando ligeramente. Agregar 10 ml de glicerol al 10% estéril, incubar a 28oC y hacer
observaciones cada 24 horas. (Ver diagrama 1)
13
Una vez que los microcultivos han esporulado, se retiran de la incubadora, se les elimina con una
pipeta el glicerol y se sustituye con 10 ml de formal al 10% dejándose por espacio de 2 a 3 horas,
transcurrido este tiempo, se saca el microcultivo separando portaobjetos para hacer una
observación en fresco utilizando azul algodón lactofenol o bien una colocación fija.
El glicerol retirado, se coloca en un matráz y se esteriliza para poder reusar.
Observaciones
Caracteristicas macroscópicas y microscópicas de hongos filamentosos y levaduriformes más

comunes. (Anotar Observaciones)
Evaluación de la Práctica:
Examen escrito
Reporte de la práctica
Habilidades durante el desarrollo de la práctica
Análisis y Discusión
Cuestionario
1. ¿Cuál es la estructura básica de un hongo filamentoso?
2. ¿Por su función el micelio puede ser?
3. ¿Por qué se realiza una preparación en fresco?
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4. ¿Qué es un microcultivo?
5. Mencione tres diferentes tipos de esporas de hongos filamentosos.
El alumno elaborará un resumen de la importancia de los hongos para el hombre y como se

realiza su identificación
1. Alexopoulos, C. J. And C.W. Mime. 1979. Introductory Mycology. 3rd. Edit. John Wiley & Sons
New York.
2. Barnett, H.L. and Hunter, B.B. 1972. Ilustrated Genera of Imperfect Fungi. 3ª. Edit.
Minneapolis, Burgess
3. Herrera, T.J. y Ulloa, M; 1990. El Reino de los Hongos (Micología básica y aplicada). Edit.
F.C.E. México, 1ª. Edic.
4. Lacaz, C. Da S.; Minami, P.S. e Purchio, A. 1970. O Grande Mundo dos Fungos. Säo Paulo,
Poligono & Editora da Univ. Sao Paulo.
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PRACTICA No. 2
METABOLISMO DE HONGOS
(Producción de Enzimas: Proteasas y Amilasas)
Objetivo:
Inducir en el laboratorio la producción de enzimas (proteasas y amilasas) en cepas de hongos del

genero Aspergillus.
Duración de la práctica: 1.0 hrs
Introducción:
Los hongos han formado parte de la vida del hombre desde los tiempos más remotos.
El uso más antiguo al servicio del hombre, es sin duda su empleo como alimentos, además es
importante resaltar el aprovechamiento de ciertas especies para la producción a nivel industrial de
sustancias como: Enzimas, ácidos orgánicos, hormonas, pigmentos, vitaminas, etc. ácidos
orgánicos en particular el cítrico. Existe en forma natural en los cítricos, piña, pera, etc., en la
actualidad se obtiene con el empleo de cepas de hongos del genero Aspergillus,
La proteasas y amilasas son dos de las enzimas importantes producidas por hongos, para el
desdoblamiento de fuentes de carbono, de cadena larga. Por el empleo de estos organismos es
más accesible la obtención de estos productos.
Amilasas.- Actúan sobre almidones o sus productos de degradación; pueden poseer actividad
dexnitrificante o licuente, o acción glucogénica. Se usan en la fabricación de adhesivos y en la
eliminación de fibras textiles (algodón, yute y similares) y del almidón de la crema de manzana
durante la fabricación de pectina y en las industrias farmacéuticas y alimentaria. Las amilasas son
producidas por Mucor racemosus, M. rouxii, Rhizopus oryzae, Aspergilus flavus, A. niger y A.
oryzae principalmente.
Mucor racemosus Actividad de la enzima α – amilasa
Proteasas.- Comprenden proteinasas y peptidosas que se utilizan en el desengomado de

artículos de seda, en el pelado y curtido o preparación de cuerpos, en la fabricación de cola
liquida, como aditivo de detergentes, como agente en la maduración de quesos y en la industria
panadera. Estas enzimas son sintetizadas por Thamnidium elegans, Mortierella renispora y A.
flavus, principalmente.
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Mortierella sp. Maduración de quesos
Parte experimental:
Material:
 Cepas de hongos del genero Aspergillus.
o A. flavus.
o A. niger.
o A. fumigatus.
o A. oryzae.
 Caja petri con medio de Czapeck almidón.

 Caja petri con medio de agar caseina.
 Asa micología.
 Cubre objetos.
 Porta objetos.
 Azul algodón Lactofenol.
 Mechero.
 Gradilla para tubos.
 Esponja y benzal.
 Jabón y toalla.
Procedimiento
1. Sembrar en el centro de cada caja petri, una asada del cultivo de hongos (1 especie diferente
en las dos cajas, cada integrante del equipo) y rotularlas.
2. Incubar a 25°C durante siete días, realizando observaciones de las cajas cada 24 horas y
haciendo las anotaciones respectivas.
3. Realizar las lecturas finales a los siete días.
Observaciones:
17
Examen escrito
Cuestionario
1. ¿Qué fenómeno observa en las cajas de Czapeck almidón?
2. ¿Mencione dos agentes productores de proteasas?
3. ¿Porque son importantes las proteasas?
4. ¿Qué propondría para inducir producción de amilasas de éstos hongos (además del
procedimiento empleado en esta práctica)?
El alumno elaborará un resumen de la importancia de los hongos en la producción de metabolitos

identificando los mas importantes para el hombre.
New York
Minneapolis, Burgess
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PRACTICA No. 3
MICOTOXINAS
Objetivo:
Identificar la presencia de aflatoxinas en medios de cultivo con sustratos adecuados.
Introducción:
Las aflatoxinas son un grupo de compuestos denominados de manera general micotoxinas, de

éstas las aflatoxinas son producidas por ciertas cepas de Aspergillus flavus y A. parasiticus. Estos
hongos son ubicuos y es muy grande el potencial de contaminación de productos alimenticios y
piensos, por estas especies. La presencia y magnitud de la contaminación aflatoxínica varían en
función de factores geográficos y estacionales, y también de las condiciones en que se cultiva,
cosecha y almacena un producto agrícola. Los cultivos en zonas tropicales y subtropicales son
más propensos a la contaminación que los de regiones templadas, pues las condiciones óptimas
para la formación de toxinas imperan en las zonas de humedad y temperatura elevadas. Los
hongos toxígenos pueden infectar los cultivos en crecimiento, como consecuencia de los daños
causados por insectos u otros agentes, y generar toxinas antes de la cosecha o durante la
cosecha y el almacenamiento.
Por su impacto en la economía del hombre, se han empleado diversos procedimientos para su
identificación a través de estos se han elucidado las estructuras químicas de las aflatoxinas y se
dispone ahora de técnicas analíticas para identificarlas y determinar su concentración en productos
alimenticios y tejidos orgánicos. Las concentraciones que se pueden encontrar son del orden de
g/kg o inferiores.
En alimentos de origen vegetal, incluídos maíz, maní (cacahuate) y nueces, así como también en
muchos otros productos alimenticios y forrajes para los animales, se han detectado cuatro
aflatoxinas (B1, G1, B2 y G2), que suelen presentarse simultáneamente.
Diversos sustratos Estructura molecular de micotoxinas
Parte Experimental
19
Material
 Cepas de Aspergillus flavus.

 Cepas de Aspergillus fumigatus.
 Cepas de Aspergillus niger.
 Cajas petri con agar cacahuate.
 Cajas petri con agar maíz.
 Lámpara de luz UV de onda corta.
Procedimiento
1. Sembrar una asada de cepa en las cajas con los medios de cultivo (una misma cepa en las
dos cajas).
2. Dejar las cajas en incubación a 28°C durante cinco días, realizando observaciones cada 24
horas y haciendo anotaciones.
3. Colocar la lámpara de luz UV sobre los cultivos y observar los colores.
Observaciones:
Examen escrito
20
Cuestionario
1. ¿Qué son las toxinas de hongos?
2. ¿Qué características y función tienen las toxinas?
3. ¿Qué géneros producen las micotoxinas?
4. ¿Qué características morfológicas tiene el género Aspergillus?
5. ¿Porque se emplea la luz UV?
El alumno elaborará un resumen de la importancia de los hongos productores de micotoxinas,

señalando qué géneros los producen y cual es el efecto que causan en el hombre, y como se
identifican.
New York
3. Deacon, W.J. 1980. Introdución a la Micología Moderna. Noriega Edit. México.
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Introducción a los hongos patógenos
Los hongos que causan alguna patología al hombre o a los animales se les denominan hongos
patógenos y pertenecen a varias clases del reino Fungi, como se muestra en el Cuadro No. 1.
Cuadro No. 1: Taxonomía de los principales hongos de importancia médica
SUBDIVISIÓN CLASE ORDEN GÉNERO Y ESPECIE

Absidia sp.
Zygomycotina Zygomycetes Mucorales Mucor sp.
Rhizopus sp.
Basidiobolus sp.
Entomophthota sp.
Ascomycetes Entomophthorales
Saccharomyces sp.
Hansenula sp.
Candida sp.
Cryptococcus sp.
Torulopsis glabrata.
Trichosporum sp.
Pityrosporon sp.
Aspergillus sp.
Blastomyces dermatitidis
Ascomycotina Coccidioides immitis
Epidermophyton floccosum
Hyphomycetes Blastomycetales Fusarium sp.
Geotrichum sp.
Histoplasma capsulatum
Microsporum sp.
Paracoccidioides brasiliensis
Paecilomyces sp.
Penicillium sp.
Sporothrix schenckii
Trichophyton sp.
Madurella sp.
Para entender mejor la patología de los hongos causantes de infecciones en humanos, así como
para explicar mejor su sintomatología es necesario tener un tipo de clasificación de las micosis,
para fines de nuestro estudio utilizaremos la recomendada por la OMS que las clasifican en:
Micosis Superficiales, Micosis Subcutanea, Micosis Sistémicas y Micosis por oportunistas.
El primer grupo son producidas por hongos que se desarrollan sólo en estructuras superficiales de
la piel y anexos queratinizados pelo y uñas, ejemplo Pitiriasis versicolor, Tiña negra, y las
dematofitosis o Tiñas.
El segundo grupo, son causadas por hongos que penetran la piel a través de una herida o un
traumatismo, ejemplo: Micetomas y Esporotricosis.
En las micosis del tercer grupo se encuentran, Coccidioidomicosis, Histoplasmosis y Nocardiasis.
Las micosis causadas por hongos oportunistas comprenden, Criptococosis, Candidosis,

Aspergillosis, Zigomicosis, Geotricosis, etc.
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Completando este grupo de micosis, actualmente otros generos de hongos se están volviendo
patógenos sobre todo en pacientes con defensas inmunológicas bajas, dentro de las que se puede
citar a los hifomicetos, como Penicillium y Mucor.
Los procedimientos de laboratorio en Micología Médica, tienen como objeto la demostración y

aislamiento de los hongos patógenos que se encuentra en los tejidos y fluidos del cuerpo. Por lo
que el diagnóstico de laboratorio, sólo puede tener éxito cuando se cuenta con muestras
adecuadamente colectadas y correctamente manipuladas, así como la siembra (inmediata en
algunos casos) en medios adecuados.
Para el diagnóstico se requiere básicamente de dos tipos de estudio: el exámen directo de la

muestra y el cultivo, con la completa identificación del agente. El exámen directo no sustituye al
cultivo, pero nos brinda información preliminar y orientadora de la patología.
Actualmente las técnicas moleculares introducidas al estudio de estos hongos, han aportado
grandes avances en su identificación, cuando por sus características morfológicas o de cultivo no
es posible lograrlo.
Los tipos de muestra, procedimientos, sitios de toma y criterios de rechazo así como los medios de
cultivo recomendados se señalan en los cuadros No. 2, No. 3 y No.4. Es importante que el
personal del laboratorio realice la toma de muestras de manera directa para conocer los signos
que presenta el paciente, pero cuando se envía el material es necesario se que observe lo
señalado en el cuadro No. 3.
Cuadro No. 2: Muestras para el aislamiento de hongos patógenos.
Tipo de muestras Indicaciones

 Expectoración espontánea; obtener tres muestras matutinas
sucesivas.
 Esputo inducido; habitualmente se requieren los servicios de un
fisoterapéuta.
Vías aéreas bajas
 Aspiración gástrica: aspirar aproximandamente 10 ml de jugo gástrico
de una sonda nasogastica

Nota: Las muestras de la mañana temprano son óptimas
 Broncoscopía son: procedimientos habitualmente efectuados por un
Aspiración médico, pero hay que asegurar que se cuente con el tubo para
transtraqueal muestras y el envase apropiado para el transporte.
 Biopsia pleural
 Colocar 10 ml de sangre venosa en una botella bifásica para
Sangre
hemocultivo.
 Aspirar 5-10 ml de una mezcla de médula ósea-sangre y colocar en un
Médula Osea frasco estéril que contiene aproximadamente 0.5 ml de heparina
sódica estéril 1:1.000.
 Obtener líquido para cultivo como sea posible, habitualmente se
LCR
remite el tercer tubo en la secuencia de recolección.
 Obtener material de drenaje con un hisopo; éste procedimiento
habitualmente es óptimo para recuperar bacterias; puede requerirse
Ojo
raspado corneal, aspiración líquido intraocular o biopsia para
recuperar hongos
Pelo  Seleccionar pelos fluorescentes usando una lámpara de Wood o
23
aquellos en un área infectada y extirpar con pinzas estériles; es
necesario extirpar a las vainas del pelo.
 Descontaminar la superficie de la uña con alcohol al 50%-70%, raspar
Uñas a la porción externa y obtener raspados de las áreas infectadas más
profundas.
 Pueden cultivarse exudados; sin embargo, a menudo son negativos
Nariz, senos
para hongos; usar material necrótico u obtener biopsia para una
paranasales
recuperación óptima de hongos.
 En caso de sospecha de infección por dermatofitos, descontaminar la
piel conalcohol al 50%-70% antes de obtener escamas cutáneas
superficiales con elfilo del bisturí o el borde de un portaobjetos, hacer
Piel, mucosas frotis directos de exudados purulentos de lesiones subcutáneas o
mucosas. Si el líquido está en un nódulo, aspirar con aguja y jeringa
estériles. El pus o líquido drenante o tejido de biopsias deberán
colectarse en frascos estériles o en cajas petri.
 Usando una técnica aséptica, obtener dos biopsias de la lesión si es
Biopsia de tejidos posible; una que incluya la pared o tejido normal adyacente, la otra del
centro de la lesión.
 Obtener tres muestras consecutivas de la mañana temprano por
Orina
medio de latécnica de la parte media del chorro
Cuadro No. 3. Criterios de rechazo de muestras para el cultivo micológico
Criterio de rechazo Acción

No identificación en el envase o
discrepancia, entre la información sobre el
Devolver a quién lo envía para aclaración.
paciente en la hoja de pedido y la etiqueta
del envase.
Si se sospecha una infección respiratoria
baja, la presencia de gran cantidad de
células escamosas en la muestra de esputo
indica contaminación con secreciones
Esputo para cultivo bacteriano con 25 células orales; éste no es necesariamente un criterio
epiteliales por campo en un frotis con tinción para rechazo ya que pueden recuperarse los
Gram. hongos patógenos en caso de
contaminación, particularmente si se usan
medios selectivos para hongos; cada caso
debe juzgarse individualmente.
Pedir una nueva muestra si la condición

clínica lo justifica, si está indicada una nueva
Hisopo seco o material insuficiente muestra y no puede obtenerse por técnicas
no invasivas, puede ser necesario obtener
muestras por biopsia
Notificar al médico que las muestras de 24
horas son inaceptables y pedir la remisión
Muestras de orina o esputo de 24 horas para
de 3 muestras de orina de la mañana o 3
micobacterias y/u hongos
muestras consecutivas de esputo de la
mañana.
Material adecuado remitido en un envase Pedir el reenvio de muestras en el envase
24
inapropiado; es decir con evidencias de apropiado
filtración, falta de esterilidad, etc.
Cuadro No. 4. Medios de cultivo para hongos: Indicaciones de uso
Medio de cultivo Indicaciones para su uso

Agar infusión de cerebro - corazón  Recuperación primaria de hongos saprofitos y patógenos.
Agar infusión de cerebro con  Recuperación primaria de hongos patógenos excluyendo
antibióticos dermatofitos.
 Recuperación de hongos de sangre.
Botellas bifásicas con infusión de
 Recuperación primaria de dermatofitos, aconsejado como
cerebro – corazón para hemocultivos
medio general solamente.
 Recuperación primaria de hongos patógenos excluyendo
Agar inhibidor de mohos
dermatofitos.
Agar Mycosel o Micobiotic  Recuperación primaria de dermatofitos.
 Recuperación primaria de dermatofitos
Agar dextrosa al 2 % de sabouraud  Recuperación primaria de hongos saprofitos y patógenos
(no aconsejado).
 Recuperación primaria de hongos patógenos excluyendo
Agar SABIHI
dermatofitos.
Medios diferenciales
 Detección de ascosporas en levaduras ascosporogenas
Agar ascosporas como las especies de Sacharomyces.
 Identificación de especies de Nocardia y Streptomyces.
Agar harina de maíz con Tween 80 y  Identificación de Candida albicans para la producción de
azúl tripan clamidosporas.
Agar de conversión con semillas de  Identificación de Candidas por morfología microscópica.
algodón
Agar Czapeck  Conversión del hongo dimórfico Blastomyces dermatitides.
 Recuperación e identificación diferencial de especies de
Agar ácido cafeico
Aspergillus, identificación de Criptococcus neoformans.
 Detección de reducción de nitrato para confirmar especies
Medio de reducción de nitrato
de Criptococcus.
 Demostración de producción de pigmento por
Agar - Dextrosa - Papa Trychophyton rubrum.
 Preparación de microcultivos.
Medio de arroz  Identificación de Microsporum audouinii.
Agares con Tricophyton 1 - 7  Identificación de miembros del género Trichophyton.
Agar tirosina  Identificación de especies de Nocardia y Streptomyces.
 Detección de especies de Criptococcus.
Agar urea  Diferenciación de Trichophyton mentagrophytes de
Trichophyton rubrum.
Agar Xantina  Identificación de especies de Nocardia y Streptomyces.
 Identificación de levaduras por determinación de
Caldo para fermentación de levaduras fermentaciones.
Agar base nitrogenada levaduras Identificación de levaduras por determinación de asimilación
25
PRACTICA No. 4
PITIRIASIS VERSICOLOR
(Tinea versicolor)
Objetico:
Identificar las estructuras en fase parasitaria y vegetativa del agente causal de pitiriasis versicolor:
Malassezia globosa.
Introducción:
Es una micosis superficial de la piel del hombre, caracterizada por manchas irregulares,
hiperpigmentadas, hipopigmentadas o eritematosas, que aparecen ocasionalmente en los brazos,
tronco, pecho y espalda, cara y axilas del hospedero principalmente joven. Usualmente es
asintomática; algunos casos ocurren después de largas dosis de corticoides.
Piel hiperpigmentada Biopsia de piel tenida por PAS
El agente etiológico es Malassezia globosa, anteriormente se le conocía como M .furfur que es una
levadura lipofílica, la frecuencia de esta enfermedad es del 50% en áreas tropicales.
Para el diagnóstico de laboratorio, se realiza, un examen directo y el cultivo (en su caso):
Las muestras que se obtiene son, las escamas epidérmicas que pueden ser raspadas con bisturí o
con portaobjetos estériles y colectadas entre dos portaobjetos estériles hasta su observación.
También puede emplearse cinta diurex, para la obtención de las escamas.
Para localizar con mayor facilidad las áreas de la piel que presentan la infección se utiliza la luz de
la lampara de Wood. Bajo esta luz las escamas presentan fluorescencia amarilla.
Tiña versicolor Observación de la infección con lámpara de wood

26
Para el examen directo se realiza una observación al microscopio de preparaciones de escamas
con KOH al 10% y previo calentamiento buscando hifas curvadas y formas levaduriformes
agrupadas en forma de racimo de uvas de unas 3 a 8m de diámetro.
Si la imagen observada es clara y contundente no es necesario cultivar este hongo para establecer
un diagnóstico micológico, ya que éste puede basarse en la observación directa de las estructuras
en estado parasitario al microscopio. Sin embargo, puede ser aislado en medio de Sabouraud agar
o agar de malta que contenga estreptomicina, penicilina y cicloheximida y con una gran
concentración de aceite de oliva.
Identificación del agente. Se realiza con las observaciones macroscópicas y microscópicas de las
colonias obtenidas en su caso o por la morfología al estado parasitario.
Colonia de M.globosa Estado parasitario Preparaciòn en fresco
Parte Experimental:
Material:
 Escamas parasitadas con Malassezia

 Preparación fija con tinción de Gram de Malassezia
 Preparaciones fijas de escamas parasitadas (método de cinta diurex)
 Muestras clínicas sospechosas con Malassezia
 KOH al 10%
 Portaobjetos
 Microscopio
 Tubos con medio de Sabouraud agar más aceite de oliva
Procedimiento
1. Realizar una preparación en fresco de escamas de Pitiriasis versicolor, colocando unas gotas
de KOH al 10%, adicionando escamas, realizar un calentamiento breve sobre el mechero y
buscar estructuras levaduriformes y fragmentos miceliales curvados.
2. Observará preparaciones con cinta diurex y tinción de Gram.
3. Sembrar escamas sospechosas con Pitiriasis versicolor en tubos con el medio de cultivo e
incubar a 35o C, por 2 semanas.
4. Realizar observaciones de crecimiento e identificación de colonias obtenidas, al cabo de siete
días y como máximo 2 semanas.
27
Observaciones:
Examen escrito
Cuestionario
1. ¿Cuál es la fase vegetativa de Malassezia globosa?
2. ¿Qué características presenta este hongo?
3. ¿Cómo se obtiene el cultivo de este hongo?
4. ¿Cómo se realiza un diagnóstico rápido de esta enfermedad?
5. ¿Por qué se emplea la cinta diurex
El alumno elaborará un resumen del diagnóstico de esta micosis y discutirá su importancia en

salud pública.
28
1. Ajello, L.; Georg, L.K.; Kaplan, E. & Kaufman, L. 1966. Laboratory Manual for Medical
Mycology. Atlanta.
2. Arenas, R. 1993. Micología Médica. 1ª. Edic. Edit. Interamericana. Mc Graw Hill.
3. Beneke, E.S. and Rogers, A. L. 1971. Medical Mycology Manual 3ª. Edit. Minneapolis Burgess
Publishing Company.
4. G. Prats, V.; Ausina, B.; Mirelis, P.; Coll, N.; Rabella, C.; Muñoz, F.; Sánchez, R. P. Y N.
Margall. 1993. Microbiología Médica. Cuaderno de prácticas y demostraciones. 1ª. Edición.
Edit. Doyma, S.A.
5. Rippon, J. 1988. Medical Mycology. The pathogenic fungi and the pathogenic actinomycetes.
Philadelphia, E.B. Saunders Company.
6. Vanbreuseghem, R. 1966. Guide Practique de Mycologie Medicale et Veterinaire. París,
Masson.
29
PRACTICA No. 5
DERMATOFITOSIS
(Tiñas)
Objetivo:
Identificar las estructuras en fase parasitaria y en fase vegetativa de los principales dermatofitos
causantes de tiñas en nuestro medio.
Introducción:
Las dermatofitosis son infecciones producidas en los tejidos queratinizados del huésped
incluyendo uñas, pelo y estratos córneos de la piel. Los tipos clínicos de dermatofitos son
conocidos como tiñas. El nombre de estas es designado por su localización “topográfica”
(Anatómica) por ejemplo: tiña capitis (cabeza) y tiña pedis (pies).
La dermatofitosis o tiñas son de las micosis más frecuentes dentro del grupo de las micosis
superficiales y sumamente contagiosas.
Tiña de la cabeza Tiña del cuerpo
Los hongos que producen dermatofitosis son conocidos como dermatofitos, los cuales están
incluidos en tres géneros: Microsporum, Trinchophyton y Epidermophyton, con varias especies los
dos primeros géneros y el tercero con una solo especie: E. floccosum.
Los dermatofitos por su hábitat pueden ser aislados del suelo, de animales o del hombre, esto se
realiza con fines epidemiológicos para ubicar su distribución en el ambiente y reservorios.
Para el diagnóstico de laboratorio se emplea, muestras de piel, uñas y pelo de áreas con tiña,
buscando la fase parasitaria de los agentes que son hifas hialinas, ramificadas y septadas. Una
parte del material puede ser sembrado para observar la colonia.
Para la adecuada recolección de las muestras se debe observar las lesiones presentes y proceder
de la siguiente manera: Para obtener escamas de piel, primero el área infectada debe ser lavada
con alcohol al 70% para remover contaminantes. Los fragmentos deben ser obtenidos del borde
activo del área de la lesión y colocarse entre dos portaobjetos estériles para su posterior examen
en el laboratorio.
Muestras de fragmentos de uñas, se obtienen de la porción interna de la uña y pueden ser

raspados con bisturí estéril.
30
Para las muestras de cabello, se debe tomar la porción basal de este con mucho cuidado y con
pinzas. La lámpara de Wood es empleada para la localización de pelos infectados cuando la tiña
es causada por ciertas especies de Microsporum. Los cabellos infectados usualmente tienen
fluorescencia de color amarillo-verdoso.
En el cabello la colonizaciòn por el género Microsporum es del tipo ectothrix. El género

Epidermophyton no invade cabello. El género Trichophyton puede invadir el cabello tipo endotrix y
ectothrix.
Conidias de Epidermophyton Conidias de Trichophytòn
Para el diagnóstico de laboratorio se realiza el exámen directo y el cultivo. El examen directo de

cabello, escamas de uñas o piel, puede dar el primer indicio de infección micótica, pero los cultivos
mostrarán el agente etiológico, por lo que el primer paso debe ser la búsqueda de la fase
parasitaria que puede ser observada con KOH al 10 ó 20%.
Por otro lado, trozos de pelos, escamas de uñas y piel pueden ser sembradas en tubos o cajas
petri con agar glucosa Sabouraud con antibiótico (Mycosel o Micobiotic agar) y se debe observar el
crecimiento de las colonias por un período mínimo de tres semanas antes de ser considerado
como negativo. El medio de cultivo Dermatophyte test (DTM) es usado para identificación inicial
presuntiva de dermatofitos, el tiempo de crecimiento, cambios de color en la superficie y el reverso
de la colonia son observados para la identificación del agente causal. Los dermatofitos crecen a
temperatura ambiente y aun pH entre 6.8 y 7.0.
Para una completa identificación de los agentes causales es necesario contar con las colonias ya
que la morfología microscópica (esporas y estructuras vegetativas), es de vital importancia para la
identificación de los diferentes dermatofitos.
El género Microsporum presenta macroconidias fusiformes equinuladas, la microconidia puede ser

redonda, oval o en forma de pera, el género Epidermophyton produce macroconidias
multicelulares y las microconidias están ausentes. El género Trichophyton desarrolla conidias
elongadas o piriformes, el ordenamiento de las microconidias a lo largo de la hifa ayuda a la
identificación de algunas especies y presenta también macroconidias elongadas o fusiformes.
Ciertas especies de Trichophyton no producen macroconidias que permitan su identificación

microscópica, por lo que se utiliza entonces una serie de pruebas bioquímicas tales como:
asimilación de vitaminas y aminoácidos, producción de ureasa, etc., que permiten una correcta
identificación del agente causal, además de la prueba de perforación de pelos “in vitro”.
31
Hifas en espiral y macorconidias Macroconidia en forma de lápiz
Esta prueba es utilizada para la diferenciación entre T. mentagrophytes que perfora el pelo
radialmente y el T. rubrum que no es capaz de perforarlo.
Parte experimental:
Material:
 Tubos con medio de Sabouraud dextrosa agar.

 Tubos con medio de agar Micobiotic.
 Tubos con medio Corn meal agar.
 Cajas de petri con medio de PDA
 Matraz con glicerol al 10%.
 Matraz con formol al 10%.
 KOH al 20%.
 Alcohol etílico- agua destilada estéril (50% - 50%).
 Azul algodón lactofenol.
 Extracto de levadura al 10%.
 Cajas petri para microcultivo.
 Portaobjetos y cubreobjetos.
 Pipetas Pasteur.
 Cajas petri estériles.
 Mechero.
 Microscopio.
 Muestras clínicas sospechosas de tiña (escamas de piel, de uñas y pelos).
 Pelos estériles
 Tierra de diferentes lugares
 Cuadros de alfombra estériles
Cepas:
M. canis M. gypseum
T. rubrum T. mentagrophytes
T. tonsurans E. floccosum
Procedimiento
1.- Observación y Siembra de material clínico:

32
Realizar una preparación de las escamas de piel, de uñas y pelos colocando una pequeña parte
en un portaobjetos y adicionarle unas gotas de KOH al 20%, calentar levemente en el mechero y
observar al microscópio.
Examinar escamas epidérmicas o pelos con KOH al 20% o líquido de Berlesse y pelos con
microsporia y con tricoficia.
Sembrar muestras clínicas de escamas, pelo y uñas en medio de Sabouraud y Micobiotic,

colocando un poco del material clínico, incubar a 28°C por tres semanas. En caso de cultivo
positivo realizar una preparación en fresco con azul algodón lactofenol y un microcultivo.
2.- Aislamiento de Dermatofitos del suelo
Para esto se emplea el método de Vanbreusenghem, el cual permite determinar la frecuencia de

dermatofitos de una región o para el aislamiento de dermatofitos de fuentes naturales; se utilizan
“anzuelos” ricos en queratina, como: pelos humanos, de animales, plumas de aves, alas de
insectos, etc.
El “anzuelo “debe ser esterilizado envueltos en papel y en autoclave (15 a 20 minutos a 115°C). La
tierra a utilizar en la prueba, debe ser colectada de preferencia en frascos estériles, anotando el
lugar y la fecha.
Colocar la tierra en una caja petri* estéril, llenando hasta la mitad y humedecerla con agua estéril,
distribuir los pelos sobre la superficie de la tierra, cerrar la placa. Dejar a temperatura ambiente,
observando periódicamente.
En caso de crecimiento, retirar los pelos con crecimiento fúngico, y examinarlos entre portaobjetos
y cubreobjetos con una gota de azul algodón lactofenol, si se sospecha de dermatofito aislar los
hongos queratinofílicos utilizando tubos de Agar Sabouraud e identificarlos por los métodos
tradicionales.
NOTA:* Las cajas petri deben ser mantenidas por un período superior a 30 días con objeto de
detectarse el posible dermatofito.
3.-Prueba de perforación de pelos “in vitro”.
Colocar pequeños fragmentos de cabello esterilizados en una caja de petri, adicionar 25 ml de

agua destilada estéril y 2 ó 3 gotas de extracto de levadura al 10%, retirar pequeñas porciones del
cultivo a ser identificado y colocar en la placa sobre los pelos. Incubar a 25°C a temperatura
ambiente por cuatro semanas, periódicamente retirar pequeños fragmentos de pelo y examinar al
microscopio con azul algodón lactofenol, las pruebas son negativas cuando las perforaciones no
son observadas después de 28 días de crecimiento.
4.- Aislamiento de dermatofitos de un portador sano através de la técnica de Mariat
Emplear un trozo de alfombra de 5 X 5 cm estéril y frotar la parte de la piel afectada. Colocar la

alfombra en caja petri con medio Mycobiotic, e iIncubar a 28°C. Retirar la alfombra después de 24
hrs. de incubación y continuar la incubación de la caja hasta por tres semanas mínimo, antes de
descartarla como negativa. En caso de crecimiento y para la identificación del hongo, se realizan
las pruebas de observación directa y siembra en placas, conjuntamente con la realización de su
microcultivo.
33
Observaciones:
Examen escrito
Cuestionario
1. ¿Qué forma estructural presentan estos tres géneros de hongos en fase parasitaria?
2. ¿Cuál es la diferencia microscópica entre el género Microsporum y Trichophyton?
3. ¿Para que se emplea el método del “anzuelo “?
4. ¿Qué ventajas tiene la técnica de Mariat?
5. Por su habitat, ¿cómo se clasifican los dermatofitos?
El alumno elaborará un resumen de la importancia de los dermatofitos y las ventajas de los

métodos de diagnóstico.
34
Referencias
bibliográficas
Mycology. Atlanta.
Edit. Doyma, S.A.
3. Rebell, G. & D. Taplin. 1978. Dermatophytes. Their recognition and identification. University of
Miami Press. Florida.
Masson.
35
PRACTICA No. 6
ESPOROTRICOSIS
Objetivo:
Conocer e identificar las estructuras en fase parasitaria y vegetativa de Sporothrix shenckii.
Introducción:
La esporotricosis es una infección crónica que se caracteriza por lesiones nodulares,

principalmente úlceras en los ganglios linfáticos en piel o tejido subcutáneo y ocasionalmente en
órganos internos. La forma diseminada de esta infección puede involucrar al esqueleto y áreas
viscerales, además de que puede ocurrir una esporotricosis pulmonar primaria. Las lesiones
localizadas generalmente se encuentran en manos, brazos y piernas. En México son más
frecuentes las formas de esporotricosis subcutánea y profunda.
Ulcera con descamación de regiones

Nodulo de los ordeñadores Lesiones en piel
periféricas
El agente etiológico Sporothrix schenckii, es un hongo dimórfico de amplia distribución en la

naturaleza, ha sido aislado del suelo, madera vegetales y agua de mar. Puede penetrar el
organismo huésped a través de heridas o lesiones en la piel provocadas por astillas o espinas.
En animales se han reportado infecciones en caballos, mulas, burros, ganado vacuno, perros,
gallinas, ratas, ratones y camellos.
Para realizar el diagnóstico de laboratorio se emplea muestras clínicas provenientes de lesiones

cutáneas por lo general son de tipo gomoso y exudan un pus espeso, necesario para realizar el
diagnóstico micológico, cultivándolo en medio de Sabouraud.
Para realizar el exámen directo de la muestra, el pus u otro material (costras), podrán colocarse en
un portaobjetos para teñirse con el fin de observar las levaduras en forma de “cigarro”, el empleo
de la tinción de PAS puede ser de gran valor ya que proporciona un contraste bien definido de los
microorganismos en la muestra.
Para obtener el cultivo del hongo el pus de las lesiones abiertas o de los nódulos cerrados y
costras, deberán sembrarse por estría en Agar Glucosa Sabouraud con cicloheximida y
cloranfenicol, agar BHI y agar sangre con antibióticos e incubarse a 37°C. Las colonias, se forman
36
entre 3 y 5 días de incubación y en muchos casos desarrollarán posteriormente un pigmento negro
castaño. Las colonias que se desarrollan a temperatura ambiente al principio son blancas
parecidas a la piel en su textura rugosa. Se vuelven tersas y lisas conforme envejece la colonia,
las cepas varían de color, desde crema hasta negro.
El microorganismo puede ser convertido de la fase vegetativa a la fase parasitaria o tisular por
crecimiento en medios ricos en proteínas y vitaminas a 37°C. El agar BHI con o sin sangre es un
medio excelente para la conversión de levaduras o fase tisular después de uno o de varios
repiques.
La observación microscópica de las colonias que se desarrollan a temperatura ambiente muestra

ramificaciones finas, hifas septadas (2 nm de diámetro) con conidias esféricas y piriformes
formando una margarita sobre el final de un pequeño esterigma en la punta del conidóforo a los
lados de una hifa. Las conidias tienen un tamaño de 2 a 4 por 2 a 6 nm.
Colonia de S. schenckii Micelio y conidias de S. schecnkii
La observación microscópica de una colonia que crece a 37°C mostrará células gemantes
redondas, ovales y fusiformes denominadas comúnmente “cuerpos en forma de cigarro”, y también
los llamados “cuerpos asteroides” éstos son similares a los observados en preparaciones teñidas
de animales infectados en el laboratorio.
Células gemantes Cuerpo asteroide
Para esta micosis también se recurre como método de diagnóstico el empleo de pruebas
serológicas: Se emplea la prueba de esporotricina en piel para la detección del contacto anterior
con el hongo. La preparación del estándar de esportricina preparada se inyecta intradérmicamente
con una dilución de 1:1000. Una reacción (+) se presenta con 5 mm de induración después de 24
hrs. El valor de esta prueba es de tipo diagnóstico.
37
Parte Experimental:
Material:
 Tubos de BHI inclinado.

 Tubos con Sabouraud dextrosa agar inclinado.
 Cajas petri con Sabourdaud dextrosa agar.
 Cajas petri para microcultivo.
 Matraz con glicerol al 10%.
 Matraz con formol al 10%.
 Matraz con agua destilada estéril.
 Cepa de S. schenckii.
 Microcultivo de S. schenckii.
 Corte histológico de esporotricosis.
 Microscopio.
 Mechero.
Procedimiento
Observar la morfología macroscópica y microscópica de S. schenckii, del tubo proporcionado por

el profesor.
Sembrar una asada del cultivo de S. schenckii en BHI e incubar a 37°C durante 8 días para
observar la morfología macro y microscópica.
Realizar microcultivo del hongo por el método de Ridelll, para observar la forma filamentosa
después de 8 días de incubación a 28°C.
Realizar observaciones de preparaciones fijas de esporotricosis y de cortes histológicos de

esporotricosis experimental.
Observaciones:
Examen escrito
38
Cuestionario
1. ¿Cómo se observa S. schenckii al estado vegetativo?
2. ¿En qué consiste la esporotricina?
3. ¿Qué es el dimorfismo?
4. ¿Porque no se emplea la preparación directa en el caso de sospecha de esporotricosis?
5. ¿Qué influencia tiene la tinción de PAS sobre el hongo?
El alumno elaborará un resumen sobre la importancia de la esporotricosis en nuestro pais.
Mycology. Atlanta.
Publishing Company.
Edit. Doyma, S.A.
Masson.
39
PRACTICA No. 7
MICETOMAS
Objetivo:
Conocer e Identificar las estructuras en fase parasitaria y en fase saprofítica de los agentes
causantes de micetomas.
Introducción:
Es una infección subcutánea cronica granulomatosa causada por hongos y bacterias que ataca
pies y ocasionalmente manos, torso y otras áreas del cuerpo.Esta enfermedad se caracteriza por
tumoración, deformación y presencia de fistulas que drenan pus con granos, que pueden ser de
color blanco, amarillo tenue, rojo y negro.
En el hombre, la enfermedad es más común en regiones tropicales y subtropicales. En animales

los casos reportados incluyen perros, gatos, ganado vacuno y caballos.
Fistula drenando Nódulos abiertos Tumoraciòn unilateral
Muchos de los microorganismos causantes de micetomas se han aislado en el suelo y en algunos

casos de plantas.
De los hongos mas frecuentes como agentes causales tenemos a: Madurella mycetomatis, M.
grisea, Scedosporium apiospermum , Pyrenochaeta romeroi.
Morfología microscópica de M. mycetomatis
Como agentes de origen bacteriano tenemos a los actinomycetes o bacterias filamentosas, como:
Nocardia brasiliensies, Actinomadura madurae, A pelletieri, Streptomyces somaliensis, Nocardia
asteroides, N. caviae y Actinomyces israelii.
40
Nocardia brasilensis
Para el diagnóstico de laboratorio se emplean muestras de pus y granos que se toman de fistulas
drenantes. Pueden utilizarse compresas de gasas estériles para colectar los gránulos.
El exámen directo de pus, líquido drenado y material de biopsia deberán hacerse para observar la
presencia de pequeños granos ovales e irregulares de 0.5 a 2 mm de diámetro y en color amarillo,
rojo o negro, colocando los gránulos en agua o solución de KOH al 10% y examinando al
microscopio.
Los gránulos producidos por los hongos, frecuentemente contienen hifas de 2 a 4 mm de diámetro
con muchas protuberancias o clamidosporas. La diferencia entre los gránulos desarrollados por los
actinomicetos y los hongos es fundamentalmente el diámetro de las hifas, además de la presencia
de clavas en los primeros. Estos hallazgos son importantes y deberán reportarse inmediatamente
para apoyar el tratamiento específico.
Granulo actinomicótiico Actinomyces
En el caso de micetoma maduromicósico, se presentan diversos colores, por ejemplo: agentes que
producen granos negros: M. mycetomatis, M. grisea, P. romeroi. Agente etiológicos productor de
granos amarillos y blancos: Scedosporium apiospermum.
Los cultivos se desarrollan fácilmente en agar glucosa sabouraud a temperatura ambiente. La

adición de antibióticos al medio es conveniente si los gránulos presentan hifas septadas si los
gránulos presentan filamentos pequeños típicos de un actinomiceto, se recomienda sembrar en
agar glucosa sabouraud sin antibiótico o en agar BHI.
El material aspirado puede colocarse directamente en el medio, en tanto que los granulos de
fistulas drenantes deberán lavarse en solución salina esteril para reducir la contaminación y
colocarlos en un medio de cultivo con antibióticos. Los cultivos deberán incubarse a temperatura
ambiente y a 37°C. Las características morfológicas y fisiológicas son de utilidad para identificar a
los agentes etiológicos.
41
Nocardia Granulos con nocardia
Estudios Patológicos: A pesar de que los gránulos pueden observarse fácilmente teñidos con
hematoxilina y eosina, deberán teñirse también por Gram para ayudarse a la diferenciación entre
masas bacterianas y gránulos. Las tinciones ayudan a diferenciar el micelio de Nocardia de
gránulos. Las hifas y clamidosporas en los gránulos de los hongos pueden observarse muy bien si
los pigmentos no son oscurecidos por la tinción del Acido de Schiff.
Muchos animales de laboratorio son susceptibles a los hongos que causan micetoma, pero los
hamsters (con inyección intraperitoneal) y ratones ( con inyección plantar) han desarrollado los
gránulos después de haber sido inyectados con la suspensión de conidias de los agentes.
Parte Experimental
Material:
 Cepas tipo y microcultivo: N. brasiliensies, Madurella grisea, N. asteroides, P. romeroi, N.

caviae, A. madurae, A. pelletieri
 Cortes histológicos de micetoma actinomicótico y eumicótico.

 Alcohol.
 KOH al 20%.
 Pipetas de 1 ml.
 Gradillas.
 Mechero.
 Microscopio.
Procedimiento
Observar preparaciones de cortes histológicos obtenidos de casos de micetoma actinomicótico

humano, buscando “granos”.
Observar y anotar las características macroscópicas (morfología colonial) microscópica

(microcultivos teñidos por la técnica de Zielh-Neelsen) de los agentes etiológicos causantes de
micetoma actinomicótico.
Observar preparaciones de cortes histológicos de micetoma maduromicósico.

42
Observar y anotar las características macroscópicas (morfología colonia) y microscópicas
(microcultivo) de los agentes etiológicos de micetoma eumicótico.
Observaciones:
Examen escrito
Cuestionario
1. ¿Qué diferencia existe entre un grano maduromicótico y un actionomicósico?
2. ¿Cómo se presenta un grano por Nocardia?
3. ¿Cómo se observa el material clínico proveniente de pus?
4. ¿Cómo diferenciarían a los agentes causales?
5. ¿Qué importancia tiene la observación directa de la muestra clínica?
El alumno elaborará un resumen de la importancia de esta patología para el hombre y que otros
medios de diagnóstico alterno existen.
43
Referencias
bibliográficas
Publishing Company.
Edit. Doyma, S.A.
Masson.
44
PRACTICA No. 8
HISTOPLASMOSIS
Objetivo:
Conocer e identificar las estructuras de H. capsulatum en su forma parasitaria y vegetativa.
Introducción:
La histoplasmosis es una enfermedad sistémica, granulomatosa, aguda o crónica que afecta al

sistema retículo entotelial y se adquiere por inhalación. En el 95% de los casos se presenta de
manera subclínica ó benigna y en una proporción baja es pulmonar progresiva o cutánea crónica.
Los pacientes con enfermedad diseminada presentan hepatoesplenomegalia, linfadenopatías,
fiebres, anemias y pérdida de peso y en algunos casos puede ser fatal.
La enfermedad es causada por el hongo dimórfico Histoplasma capsulatum. Este organismo puede
ser aislado de suelo, especialmente de gallineros, guano y áreas usadas para palomas y guano de
murciélago. En animales el hongo ha sido encontrado en perros, gatos, ratas, caballos y gallinas.
Inicio del padecimiento Histoplasmosis generalizada
Para el diagnóstico de laboratorio se emplean muestras de sangre, médula espinal, esputo, orina,
biopsia y de lesiones mucosas o cutáneas. Una vez recolectada la muestra se debe procesar, en
caso contrario, el material debe ser refrigerado hasta realizar el cultivo.
Para el examen directo del material clínico se utiliza la técnica de Giemsa, PAS o tinción de Wrigth,
ya que el H. capsulatum es una levadura, que se encuentra intracelularmente dentro de los
histiocitos. La fase parasitaria se presenta como: pequeñas células de levaduras con brotes, de 2
a 5 mm que muestran estrechas inserciones en la célula madre.
En cortes teñidos por PAS de material histopatológico, las levaduras parecen estar rodeadas por
una cápsula, este hecho explica el nombre de la especie, aunque no se ha demostrado una
cápsula verdadera, sino más bien un “artefacto” de la tinción.
45
Corte histológico teñido con la técnica de PAS
Para cultivar la muestra, se emplea medio de Sabouraud glucosa agar y a 28°C, el crecimiento es
lento la colonia es algodonosa, de color blanco que se extiende periféricamente y se torna de color
café con la edad se considera a H. capsulatum como un organismo de crecimiento lento requiere
de 2 a 4 semanas para que aparezcan las colonias, éstas son blancas, plegadas, húmedas y
algunas veces inicialmente levaduriformes, particularmente en medios de cultivo con sangre.
En la conversión a la fase levaduriforme se puede obtener incubando un cultivo puro sobre gelosa
sangre o BHI a 37°c.
Cultivo de Histoplasma Características al microscopio Ilustración
Al microscopio la colonia presenta delicadas hifas tabicadas de 1 a 2 mm de diámetro con

agregados como cuerdas, se observan pequeñas microconidias (aleuriosporas) redondas o
piriformes en cortas ramas laterales a lo largo de las hifas. Más comúnmente, se ven grandes
macroconidias esféricas de 8 a 14 mm de diámetro inicialmente con una pared externa lisa.
Pruebas serológicas, también pueden ser empleadas como confirmación del diagnóstico,
realizándose de la siguiente manera: Inyectar en la piel del antebrazo 0.1 ml antígeno (Ag) por vía
intradérmica. Se hacen lecturas después de 24, 48 y 72 horas de aplicada la inyección. En una
reacción (+) se presenta una zona de induración de + ó – 5mm de diámetro usualmente rodeado
de zona eritomatosa.
46
Intradermorreacción
Parte Experimental:
Material:
 Cultivo de H. capsulatum
 Microcultivos de H. capsulatum.
 Cortes histológicos o improntas de la fase levaduriforme de H. capsulatum.
 Mechero
 Microscopio
 Portaobjetos y cubreobjetos.
Procedimiento
Observar y describir la colonia gigante de H. capsulatum.
Observar y realizar dibujos de los microcultivos de H. capsulatum.
Observar cortes histológicos o improntas de fase levaduriforme del hongo.
Observaciones:
47
Examen escrito
Cuestionario
1. ¿De donde se puede aislar H. capsulatum?
2. ¿Qué diferencia hay entre la fase parasitaria y la vegetativa?
3. ¿Qué es una microaleurospora?
4. ¿Cómo se debe cultivar al agente causal?
5. Mencione dos características propias del H. capsulatum.
El alumno elaborará un resumen de la importancia de la histoplasmosis y su impacto en salud

pública.
48
Referencias
bibliográficas
Mycology. Atlanta.
3. Looder, J. 1970. The Yeasts. A. Taxonomic Study. Amsterdan, North-Holland Publishing
Company,
Masson.
6. Warnock, D.W. and M.D. Richardson, 1982. Fungal Infection in the Compromised Patient.
John Wiley and Sons. New York.
49
PRACTICA No. 9
COCCIDIOIDOMICOSIS
Objetivo:
Conocer e identificar al C. immitis en fase parasitaria y saprofítica.
Introducción:
La coccidioidomicosis en una micosis pulmonar primaria y a veces sistémica causada por el hongo
difásico Coccidioides immitis, que se adquiere por inhalación, afecta a los pulmones y pueden ser
asintomática, benigna, grave o letal. El microorganismo actúa como patógeno primario en
individuos sanos y como oportunista en pacientes inmunocomprometidos.
Coccidioidomicosis pulmonar Coccidioidomicosis cutanea
Las formas diseminadas, pueden afectar meninges, huesos, articulaciones, piel y tejido
subcutáneo. El hongo ha sido aislado de suelo y aire en áreas endémicas en varias ocasiones.
En animales han sido reportados casos en: perros, caballos, primates, ovejas, cerdos y conejos.
La forma parasitaria típica de C. immitis es una esférula cuyo tamaño varía de 10 a 60 mm o más
de diámetro. Cuando son jóvenes las esférulas, aparecen como cáscaras vacías, cuando son
maduras, están llenas de endosporas de 2 a 4 mm de diámetro. Estas esférulas se encuentran
libres en los abscesos purulentos o en las lesiones caseosas.
Esferula de Coccidioide immitis
Las características microscópicas del cultivo del hongo son típicas cadenas de artroporas
alternadas en forma de barril, algunas pueden ser elongadas y rectangulares, y entre células y
células aparece una célula que se denomina “disyuntora”.
50
Coccidioides immitis forma vegetativa
Para el diagnóstico de laboratorio se emplean muestras de expectoración, contenido gástrico,

fluido espinal, pus de abscesos subcutáneos o exudados de lesiones cutáneas que pueden ser
colectadas en frascos estériles para su examen de laboratorio. El diagnóstico de laboratorio se
realiza con el examen en fresco de las muestras y la nusqueda de la esferula.
Con respecto al cultivo, se recomienda ( en medio de agar micobiotic) solo si se cuentan con las
condiciones adecuadas ya que las artrosporas son altamente infectivas y las siembras deben
hacerse en una campana de flujo lamina. El crecimiento promedio de las colonias varía de 3 a 21
días.
En esta micosis se emplea la histopatología, ya que cortes de biopsias teñidos con hematoxilina y
eosina pueden ser preparados en busca de la típica esférula con endosporas, también puede
emplearse la técnica del ácido peryódico de Schiff y la de Gomori, siendo éstas las más
recomendadas para la observación de los hongos en tejidos infectados.
Se emplea también una prueba de hipersensibilidad tardía, es la prueba más importante para
estudios epidemiológicos, pero su valor dagnóstico es limitado, (una reacción (+), u indica
infección pasada o presente por C. immitis.) se usa la coccidioidina, que es un filtrado obtenido de
cultivos líquidos de la fase micelial de C. immitis.
Parte Experimental:
Material:
Preparaciones fijas de la fase micelial de C immitis

Cortes histológicos de Coccidiodomicosis
Procedimiento
Observar preparaciones fijas de la fase micelial (microcultivos).
Observar y registrar anotaciones de cortes histológicos de coccidioidomicosis.
Observaciones:
51
Examen escrito
Cuestionario
1. ¿Por qué se observa una célula “disyuntora”?
2. ¿Cuál es la partícula antigénica del Coccidioides immitis?
3. ¿Cuál es la fase parasitaria?
4. ¿Qué es la coccidioidina y para que sirve?
5. ¿Cómo se observa la fase micelial?
El alumno elaborará un resumen de la importancia de esta micosis y los diferentes métodos de

diagnóstico.
52
Mycology. Atlanta.
Publishing Company.
Masson.
53
PRACTICA No. 10
NOCARDIASIS
Objetivo:
El alumno será capaz de identificar las estructuras en fase parasitaria y saprofitica de Nocardia
asteroides.
Introducción:
Enfermedad aguda o crónica causada por Actiomicetos aerobios como Nocardia asteroides y N.
caviae, aunque se han reportado también a N. brasiliensis que actúan como oportunistas, en
pacientes inmunocomprometidos
Se adquiere por inhalación y en pulmones origina una infección subclínica o neumónica. Puede
diseminarse al sistema nerviosa central, piel u otros órganos.El agente causal N. asteroides ha
sido aislado de muestras de suelo en varias ocasiones.
Nocardiasis Infección causada por N. brasilensis
Para el diagnóstico de laboratorio se emplean muestras clínicas como: pus, esputo, LCR o
muestras de tejidos estas deben ser colectadas en frascos estériles, así como biopsias y
necropsias. El examen directo de las muestras se realiza con las preparaciones de muestras de
pus, esputo o sedimento de líquido cerebroespinal teñidos con Gram o por la técnica de Kinyoun
modificada para su examen microscópico.
Al microscopio las preparaciones son siempre Gram (+) con presencia de hifas de 1 mm de
diámetro o formas cocoides y bacilares. Los resultados de la tinción con alcohol ácido mostrarán
estructuras parcialmente ácido alcohol resistentes.
Sabouraud, Lowestein Jensen y Tioglicolato Lowenstein Jensen Tioglicolato

54
Secciones de biopsia pueden ser teñidas por Gram, mostrando hifas ramificadas o gránulos. Las
hifas son más claramente observadas con tinción de Gomori.
Tinción Gram Tinción Zihel - Neelsen Preparación en fresco
Las muestras clínicas pueden ser sembradas en agar Sabouraud, y agar Sabouraud extracto de
levadura o medio de Lowestein-Jensen, todos sin antibióticos ya que las especies de Nocardia son
sensibles a los antibióticos. Los cultivos son incubados de 25 a 37°C. Los microorganismos
aislados son identificados basándose en sus características macro y microscópicas y pruebas
fisiológicas como hidrólisis de caseína, actividad amilolítica y reacción a tirosina y xantina; todas
son catalasa (+).
Nocardia en Sabouraud Hidrólisis de caiseína Colonia en gelosa sangre
Parte Experimental:
Material:
 Cepas de: N. asteroides, N. caviae y N. brasiliensis

 Tubos de agar Sabouraud
 Tubos de Zzapeck agar
 Cajas con medio de caseína
 Tubos con medio gelatina
 Microscopio
55
Procedimiento
Observar la morfología colonial de Nocardia

Efectuar observaciones y microcultivos de las cepas de Nocardia.
Con el fin de determinar su actividad proteolítica, inocular el microorganismo en las cajas con
medio de caseína, después de 1 a 2 semanas revisar si ha sido hidrolizada la caseína. N.
asteroides no hidroliza la caseína.
Para comprobar la reacción de licuefacción de la gelatina, se inocula al microorganismo en la
superficie del medio e incubar a 37°C con un control después del crecimiento. Refrigerar hasta que
el control solidifique y checar en el otro tubo la licuefacción.
Efectuar observaciones del tipo de crecimiento que presentan el género Nocardia
Observaciones:
Examen escrito
Cuestionario
1. ¿Qué características clínicas presenta la Nocardiasis?
2. ¿Cuál es la fase parasitaria de Nocardia asteroides?
3. ¿Por qué se le llama organismo parcialmente ácido alcohol resistente?
4. ¿Con que puebas bioquímicas se pueden diferencian las especies de Nocardia?
5. Mencione el fundamento de la prueba de hidrólisis de gelatina.

56
El alumno elaborará un resumen de la importancia de este grupo de microorganismos y como se

identifican a nivel de especie.
Referencias
bibliográficas
Masson.
57
PRACTICA No. 11
CANDIDIASIS
(CANDIDOSIS)
Objetivo:
Identificar las estructuras en fase saprofítica y parasitaria de Candida albicans, así como practicar
los procedimientos de aislamiento e identificación de este género.
Introducción:
El número de infecciones por levaduras en humanos, reportados en la literatura se han
incrementado notablemente en las últimas décadas, principalmente en pacientes
inmunosuprimidos.
La candidiasis o candidosis, es la micosis oportunista más frecuente, causada por la levadura del
genero Candida y varias de sus especies pero la mas frecuente es C. albicans.
Cándica albicans
Algunas especies de las levaduras del género Candida, (como C. krusei, C. glabrata,
C.parapsilosis, C. tropicalis. C. guillermondii, entre las más frecuentes) provocan una infección
cosmopolita aguda o subaguda en la cual el hongo puede producir lesiones en boca, vagina, piel,
uñas, bronquios, pulmones y ocasionalmente septicemia, endocarditis y meningitis.
Algodoncillo Candidosis mucocutánea Candidosis cutánea
La identificación de las levaduras de importancia médica se basa en su morfología, incluyendo

estructuras tales como: cápsula, tubo germinativo, clamidosporas, artrosporas, blastosporas,
pseudohifas, hifas, ascosporas y basidiosporas, etc.
Las pruebas fisiológicas incluyen: Pruebas de asimilación y fermentación de carbohidratos,

producción de ureasa, asimilación de nitratos, reacción del ácido cafeíco, tolerancia de
temperatura y resistencia a la cicloheximida, entre otras.
58
Candida albicans Blastosporas Tubo germinativo
El procedimiento que se sigue en el laboratorio para el diagnóstico de esta micosis se basa en

primer lugar en la adecuada toma de muestra, que puede ser: muestras de piel y uñas, de
mucosas o exudados, esputo, sangre y líquido cefaloraquídeo principalmente.
Se inicia con el examen directo de la muestra, por ejemplo: costras de piel y uñas, son tratadas
con KOH al 10% de la manera usual. También puede usarse la tinción de Gram, para buscar la
fase parasitaria de la levadura.
Al microscopio las especies de Candida aparecen en las muestras clínicas como células gemantes
o fragmentos de pseudohifas. El tamaño de las levaduras es aproximadamente de 2 a 6 mm de
diámetro, de forma oval.
Usualmente se pueden encontrar presentes en tejidos parasitados, hifas (pseudohifas) de 3 a 4

mm de diámetro y blastosporas, se puede demostrar su presencia empleando las técnicas de PAS,
Gomori, Eosina hematoxilina, entre otras.
Clamidosporas
Para la obtención de cultivos, el material infectado puede ser inoculado en una gran variedad de
medios como, agar gelosa sangre, agar chocolate, EMB, agar Mc Conckey, etc. Además, es
deseable para reducir la contaminación de flora saprofita en los cultivos, la adición de penicilina,
estreptomicina y cicloheximida al medio de Sabouraud.
Usualmente los cultivos crecen a 37°C. Las colonias de Candida en medio de Sabouraud agar
aparecen a los 3 ó 4 días de incubación, presentan color crema, pastosas y con olor a levadura.
Una identificación rápida y preventiva del género Candida, se basa en la formación de tubo
germinativo ( prueba en 2 horas) y producción de clamidosporas,
Para una completa identificación de las levaduras patógenas, se emplean también pruebas de
fisiología como fermentación y asimilación de carbohidratos.( Zimograma y Auxanograma
respectivamente
Actualmente existen los sistemas comerciales, para estas pruebas. Los sistemas más comunes
son: API 20C, API-Yeast-Ident y Uni-Yeast Tek System.
59
Parte Experimental:
Material:
 Cepas tipo de C. albicans, C. kruseii, C. guillermondii, C. tropicalis, C. stellatoidea, C.

parapsilosis.
 Preparaciones con tinción de Gram de candidiasis.
 Cortes histológicos de candidiasis.
 Abatelenguas e hisopos estériles.
 Cajas petri con gelosa sangre.
 Cajas petri con Oxgall agar.
 Cajas etri con Corn meal agar.
 Tubos son Sabouraud líquido.
 HCI al IN.
 Cajas petri con Sabourad dextrosa agar.
 Tubos con media base Wickerham/fermentación de carbohidratos.
 Tubos hemólisis con 0.5 ml de suero humano.
 Tubos con media base Wickerham/asimilación de carbohidratos.
 Tubos con solución salina estériles.
 Pipetas Pasteur estériles.
 Mechero.
 Gradilla.
 Microscopio.
Procedimiento
Efectuar siembras a partir de muestras de exudados vaginales y faríngeos en gelosa sangre e

incubar a 28°C y 37°C durante 48 hrs. y hacer frotis de las colonias sospechosas y teñir por la
técnica de Gram. Seleccionar las colonias sospechosas de levaduras y sembrar en tubos
conteniendo medio de Sabouraud líquido, con 2 a 4 gotas de HCI IN Incubar a 28°C durante 24
horas (procedimiento de purificación). Aislar en placa con medio de Sabouraud, incubar a 28°C por
48 hrs., con el objeto de obtener cultivos puros e identificar la morfología colonial macroscópica.
Observar las características coloniales de los cultivos tipo de levadura proporcionados por el
Profesor. Anotar el tipo de crecimiento (formación de velo, crecimiento en la superficie o en el
fondo del medio, en forma de bolitas en todo el medio, etc.), de estas levaduras en medio líquido.
Realizar la prueba de emisión de tubo germinativo empleando las cepas proporcionadas por el
profesor, y una cepa problema. Para la inducción en la producción del tubo se inocula una
suspensión de la levadura (preparada a un Mc Farland 5, concentración equilvalente en cells/ml) a
partir de un cultivo de 24 horas de crecimiento en 0.5 ml de suero humano normal. Los tubos
inoculados se incuban a 35°C durante 2 horas y con agitación. Posterior a la incubación, se coloca
una gota de la suspensión de levaduras en un portaobjetos limpio, se coloca un cubreobjetos y se
60
examina al microscopio con bajo poder (10 X), en busca de tubos germinativos, éstos son
apéndices que tienen la mitad del ancho y 3-4 veces la longitud de las células de levaduras de las
cuales se originan. En esta prueba y en la anterior debe usarse C. tropicalis como control negativo
y C. albicans como control positivo.
Llevar a cabo la prueba de producción de clamidosporas, sembrando las levaduras (problemas y

testigo) en el medio de Corn meal agar adicionado con 0.5 mL de tween 8.0 al 1 % o bien, emplear
el medio de Oxgall agar, haciendo una pequeña estria y colocando un portaobjeto sobre ésta.
Incubar de 24 a 36 horas. Posteriormente observar la presencia de clamidosporas
Realizar la búsqueda de ascosporas, para investigar si la levadura aislada es ascosporada se

siembra por estría en los siguientes medios Gorodkowa, agar acetato de Fowel y medio de
zanahoria y se incuba a 28°C durante 7 a 14 días, después se realiza una tinción de Ziehl-Neelsen
modificada.
Realizar las pruebas fisiológicas (fermentación y asimilación de carbohidratos).
Para el zimograma, se utiliza una serie de tubos conteniendo 4 ml de medio base de Wickerham
con indicador y 1 ml de los azúcares a probar al 6% (dextrosa, maltosa, sacarosa, lactosa,
galactosa, trehalosa) y una campana de Durham como indicador de la producción de gas, se
inocula con dos gotas de la suspensión y se incuban a 28°C, se deben hacer lecturas cada 24 hrs.
La prueba de asimilación, se lleva a cabo como el zimograma, solo que los tubos no contienen
campana ni indicador, los carbohidratos que se emplean son la dextrosa, maltosa, sacarosa,
lactosa, galactosa, melobiosa, celobiosa, inositol, xilosa, rafinosa, trehalosa, dulcitol.
Identificar a las levaduras aisladas en función de los resultados obtenidos en las pruebas
realizadas, comparando con lo reportado en la literatura.
Observaciones:
Examen escrito
61
Cuestionario
1. ¿Qué es la Candidiasis?
2. ¿Cree Ud. importante la determinación de las especies de Candida en una infección?
3. ¿Qué tipo de falsos positivos podemos encontrar en el laboratorio en las pruebas rápidas?
4. ¿Por qué se les llaman pruebas rápidas para C. albicans y cuáles son?
5. ¿Qué importancia tiene el medio de oxgall agar?
El alumno elaborará un resumen del papel que tienen las levaduras patógenas para el hombre y
cuales generos son los más frecuentes.
Publishing Company.
Company,
62
PRACTICA No. 12
CRIPTOCOCOSIS
OBJETIVO:
Identificar y conocer las estructuras de la en fase parasitaria y saprofitica de Cryptococcus

neformans
Introducción:
La criptococcocis, anteriormente también conocida incorrectamente como: Torulopsis o

Blastomicosis europea, es una infección pulmonar primaria aguda o crónica, puede afectar a
diversos órganos además como piel y otras partes del cuerpo, pero tiene mayor predilección por
cerebro y meninges, de distribución casi mundial que afecta tanto al hombre como a los animales,
causada por la levadura capsulada Cryptococcus neformans principalmente aunque también se ha
encontrado a C. gattii
El organismo puede aislarse en forma saprofítica del suelo, plantas, frutas, leche, guano de
palomos, etc.
Ciclo de infección
La enfermedad también ha sido reportada en animales como: perros, gatos, caballos, ovejas y
monos.
El procedimiento que se sigue en el laboratorio para la identificación del agente inicia con la toma
de muestra que puede ser: Pus de lesiones de piel o abscesos subcutáneos puede ser obtenida
por aspiración. El agente causal puede ser observado en el exámen directo puede reconocerse
más fácilmente usando la técnica con tinta china que ayuda a detectar la cápsula característica de
esta levadura cuando está presente.
En cortes de tejidos se emplea la hematoxilina y eosina para la tinción del material histopatológico.
La técnica más satisfactoria, para demostrar la existencia del microorganismo en tejidos, es la
63
tinción del mucicarmin. Los cortes mostrarán reacción inflamatoria con agregados de levaduras de
diversos tamaños separados ampliamente por material capsular.
El montaje se prepara de la siguiente forma:
Con respecto al cultivo la mayoría de las cepas de C. neoformans crecen bien en medio de
Sabouraud glucosa agar, a temperatura de incubación de 28 a 37°C. En las colonias se
desarrollan lentamente, presentan la característica de ser mucoides y de color crema a café.
Cepas saprofíticas crecen a temperatura de 28°C pero son incapaces de hacerlo a 37°C.
Cultivo de en Agar de Sabouraud Preparación con tinta china Tinción Gram
Para Ia identificación completa de C. neoformans se emplean pruebas bioquímicas como

producción de ureasa, asimilación de nitratos y de azúcares.
Producción de ureasa
Parte experimental:
Material:
 Cepas: C. neoformans, Cryptococcus sp., Candida albicans, Saccharomyces sp.

 Tubos con BHI líquido (13 X 100).
 Tubos con Sabouraud dextrosa inclinados, 16 X 150.
 Tubos con medio urea de Christensen, 13 X 150
 Tubos con suero humano e inoculado con la levadura
 Cajas petri para la prueba de asimilación de nitratos.
 Medio base de Wickerham.
 Fuentes de Nitrógeno (peptonas y sales).
64
 Tinta china o nigrosina.
 Cubreobjetos y portaobjetos.
 Microscopio.
 Mechero.
Procedimiento
Observar y anotar características de la colonia gigante de C. neoformans
Observar la morfología microscópica en fresco (solución salina y tinta china diluida 1 a 3) de C.

neoformans, efectuar un estudio comparativo con las otras levaduras proporcionadas.
Colocar una gota de tinta china o nigrosina en un portaobjetos y adiconar una asada del tubo
problema mezclar totalmente con laa gota, colocar un cubreobjetos (sobre la gota y examinar con
los objetivos de bajo (10x) y alto poder (40x) del microscopio), observar la presencia de levaduras,
exhibiendo algunos brotes con una insersión con cuello angosto, rodeadas por una cápsula
gruesa, esta observación es típica de C. neoformans.
Realizar la prueba de producción de ureasa: se inoculan en tubos con medio de urea de

Cristensen por estría superficial, cada una de las levaduras. Inocubar a 28°C por 48 hrs. La
aparición de un color rojo obscuro en el medio indica la utilización de la urea. De los hongos
levaduriformes solo el género Cryptococcus aprovecha la urea, con la consecuente producción de
la enzima.
Preueba de asimilación de nitratos: se prepara una suspensión (Mc Farland 5) de los organismos
en agua destilada estéril. En una caja de petri estéril colocar 2 ml de medio base de Wickerham sin
fuente de Nitrógeno. Añadir 0.1 ml del inóculo y 10 ml de agar al 2% estéril. Agitar por rotación,
cuando solidifique, dividir la placa en dos partes, en una de ellas colocar 1 ml de nitrato de K
(cristales) y en otro peptona. El KNO3 debe colocarse primero porque la peptona forma un fino
aerosol, que puede contaminar el KNO3. Inocubar la placa a tempertura ambiente y leer si hay
crecimiento a las 48 hrs. 96 hrs., el cual debe ser positivo en el área de KNO3.
Observaciones:
Examen escrito
65
Cuestionario
1. ¿Cuándo se sospecha de criptococosis, como se debe tratar la muestra clínica?
2. ¿Cómo diferenciaría una cepa de Cryptococcus saprófito de un patógeno, en el laboratorio?
3. ¿Para qué se emplea la prueba de la ureasa?
4. ¿Cuál es la morfología de esta levadura en fase parasitaria?
5. ¿Por cuáles tejidos en el hombre tiene afinidad Cryptococcus?
El alumno elaborará un resumen sobre la importancia de esta levadura así como de la historia de
su aparecimiento.
Mycology. Atlanta.
Company,
Masson.
66
PRACTICA No. 13
ASPERGILOSIS
Objetivo:
Identificar la estructura en fase parasitaria de los agentes de Aspergilosis.
Introducción:
Aspergilosis es el nombre aplicado a la micosis cosmopolita causada por especies del género
Aspergillus. Esta enfermedad se puede localizar en piel, aparato respiratorio, canal auditivo
externo o en ojos.
Por otro lado, Aspergillus puede producir contaminación en alimentos, y de esta manera ser
responsable de alergias, asma o de aspergilosis broncopulmonar. En este último caso puede
ocurrir colonización del hongo en cavidades o bien formación del aspergiloma, algunas veces
produce infección sistémica diseminada en individuos debilitados que han tenido terapias
prolongadas con antibióticos o esteroides. Además se tienen reportes de esta enfermedad como
infección secundaria en individuos que han tenido exposiciones prolongadas a cereales y granos
altamente contaminados con esporas del hongo
Aspergillus fumigatus es la especie más comúnmente aislada de casos clínicos, pero A. flavus. A.
terreus y A. niger también pueden ser causantes de esta micosis.
Algunos animales como: caballos, vacas, cerdos, gatos, perros, conejos, monos, pájaros y gallinas
también pueden ser afectados por este grupo de hongos. Las especies de Aspergillus son
comúnmente aisladas del suelo, establos, graneros, restos de granos y vegetación en
descomposición.
Aspergillus spp.
67
Para el diagnóstico del laboratorio de esta micosis se sigue el procedimiento que incluye la toma
de muestras que pueden ser; expectoración, que debe ser recolectada en frascos estériles para
su identificación en el laboratorio, piel y material del conducto auditivo, deben ser recolectadas de
la misma manera que para dermatomicosis. Muestras repetidas deben ser tomadas para eliminar
la posibilidad de contaminación directa en cultivos.
Las biopsias pueden ser trabajadas por secciones y cultivarse. Para el examen directo de las
muestras, éstas pueden ser colocadas como película delgada entre cubre y portaobjetos,
muestras de piel y lesiones granulomatosas pueden también ser tratadas y examinadas con KOH
al 10%, con la finalidad de “aclarar” al agente causal.
Corte histológico con Aspergillus
Al microscopio el hongo en muestras de expectoración, aparece como pequeños fragmentos de

micelio septado de 4 a 6 mm de diámetro: conidióforos pueden estar presentes si existió suficiente
oxígeno y espacio en la cavidad pulmonar que permitió el crecimiento de estas estructuras.
En pulmón el hongo aparece como pequeños fragmentos de micelio septado de 4 a 6 mm de

diámetro; conidióforos pueden estar presentes si existió suficiente oxígeno y espacio en la cavidad
pulmonar que permitió el crecimiento de estas estructuras.
Los hongos pueden ser demostrados en cortes histológicos con la tinción de Gridley, PAS y
ocasionalmente con Hematoxilina y eosina.
El material clínico puede sembrarse en medio de sabouraud con y sin antibióticos e incubarse a y
se incuban a 28 oC. Microscopicamente todas las especies de Aspergillus muestran conidióforos
que terminan en vesículas dilatadas, conidios sostenidos en cadenas (catenulados). Las especies
pueden ser diferenciadas en función a las características microscópicas
Aspergillus spp.
En esta patología las pruebas serológicas como la de fijación de complemento y de inmunodifusión

son esencialmente usadas en casos sospechosos de aspergilosis.
68
Parte experimental:
Material:
 Cepas tipo: A. niger, A. flavus, A. fumigatus.
 Microcultivos de cepas de Aspergillus.

 Preparación con tinción de Papanicolau.
 Microscopio.
Procedimiento
Observación de corte histológico de Aspergilosis

Observar colonias gigantes de A. niger, A. flavus, A. fumigatus
Observar características microscópicas de estas cepas.
Observaciones:
Examen escrito
69
Cuestionario
1. ¿Qué características tiene la Aspergilosis pulmonar?
2. ¿Cuál es la morfología de los agentes en la fase parasitaria?
3. ¿Cuáles son los principales agentes causales de la infección?
4. ¿Qué pruebas de laboratorio se emplean para la completa identificación del género

Aspergillus?
5. ¿En qué se diferencian las especies de Aspergillus?
El alumno elaborará un resumen de la importancia de este grupo de hongos para el hombre
Publishing Company.
Masson.
70
APENDICE A
MEDIOS DE CULTIVO
1. BASE PARA ASIMILACIÓN DE SUBSTANCIAS HIDROCARBONADAS.
* Base nitrogenada de
6.7 g
Wickerham
Glucosa 5 g
Agua destilada 1000 mL
Esterilizar por filtración, guardar a 4°C en frascos estériles con tapón de rosca hasta el momento
de usarse. La dextrosa se substituye por los azúcares a probar: lactosa, sacarosa, maltosa,
galactosa, etc.
 Se puede sustituir esta base por:
a).
(NH4)2SO4 1.5 g
MgSO4 1.5 g
KH2PO4 1.8 g
Envasar 4.5 ml de la base en tubos de 16 X 150 con tapa de rosca, esterilizar a 15 libras durante
15 minutos.
Preparar soluciones al 5% de cada uno de los azúcares a probar, filtrar por millipore y agregar 0.5
ml a los tubos con medio base.
2. BASE PARA FERMENTACIÓN DE SUBSTANCIAS HIDROCARBONADAS.
*Base Wichkerham
Extracto de levadura 4.5 g

Peptona 7.5 g
Ajustar el pH 7.0
Añadir azul de bromotimol disuelto previamente en etanol, hasta obtener un color verde, distribuir
4.0 ml de este medio a tubos de 13 X 100 y esterilizarlos a 15 Ib durante 15 minutos.
Añadir 1.0 ml de los azúcares al 6% esterilizados por filtración.
3. CASEINA AGAR.
A)
Leche tornasolada 5 g
(Litmus milk)
71
Esterilizar a 10 Ib durante 10 minutos
B)
Agar 4 g
Esterilizar a 15 Ib durante 15 minutos
Cuando ambos hayan enfriado a 45°C mezclar y vaciar a cajas de petri estériles.
Este medio se puede preparar con leche descremada que no tiene colorante o leche fresca
descremada por centrifugación.
4. CLAMIDOSPORA AGAR*
(NH4)2 SO4 1 g
KH2PO4 1 g
Biotina 5 g
Azul de tripano 0.1 g
Polisacárido purificado 20 g
Agar 15 g
pH 5.1
Esterilizar a 15 Ibs durante 15 minutos y vaciar a cajas petri estériles.
5. GELATINA DILUIDA (0.4%)
Gelatina 4 g
Ajustar el pH 7.0
Envasar 2 ml en tubos de hemólisis y esterilizar a 10 Ib durante 10 minutos.
6. GORODKOWA AGAR.
Glucosa 2.5 g
Cloruro de Sodio (NaCl) 5 g
Extracto de carne 10 g
Agar 15 g
Disolver por calentamiento, envasar 5-7 ml en tubos de 16 X 150 y esterilizar a 15 Ib durante 15

minutos.
7. MICOBIOTIC AGAR*
Glucosa 10 g
Neopeptona 10 g
Agar 20 g
72
Cloranfenicol 0.05 g
Cicloheximida 0.4 g
Después de que la dextrosa, la petona y el agar se han disuelto, adicionar el cloranfenicol, el cual
ha sido suspendido en 10 ml de alcohol al 95%.
Adicionar 0.4 g de cicloheximida, la cual ha sido disuelta en 10 ml de acetona. Mezclar, distribuir 5-

7 ml en tubos de 16 X 150 ó 13 X 100 y esterilizar a 12 Ib durante 15 minutos.
8. BACTO OXGALL AGAR*
Taurocolato de desoxicolato
20 g
(sales biliares)
Agar 20 g
Agua destilada 1000 m
L
Esterilizar a 15 Ibs por 15 minutos y vaciar a cajas petri estériles.
9. PAPA DEXTROSA AGAR*
Papa sin cáscara,

200 g
cortada en trozos
Glucosa 20 g
Agar 20 g
En los 1000 ml de agua, hervir la papa durante una hora, dejar reposar, separar el sobrenadante y
aforarlo a 1000 ml.
Agregar la glucosa y el agar, disolver estos ingredientes por calentamiento, envasar 5-7 ml en
tubos de 16 X 150 y esterilizar a 15 Ibs por 15 minutos.
10. DERMATOFITOS, TEST (medio D.T.M.)
Este es un medio selectivo que inhibe a las bacterias por los antibióticos que contiene y una gran
cantidad de hongos saprófitos por la presencia de cicloheximida (actidiona) en su composición. Un
indicador de pH (rojo fenol) permite reconocer en pocos días la aparición de una colonia de
dermatófito.
La formula es la siguiente:

Phytone (BBL) 10 g
Glucosa 20 g
Agar agar 20 g
Rojo fenol solución 40 mL
0,8 N HCl 6 mL
Cicloheximida (actidiona) 0.4 g
Gentamicina sulfato 0.1 g
73
Los 0,5 g de cicloheximida se disuelve en 2 ml de acetona, que se añade cuando el medio está
caliente.
11. KURUGN, MEDIO DE (mantiene la fase levaduriforme de los hongos sistémicos).
Fécula de papa 1 g
Mezcla de huevos 150 mL
a) La fécula puesta en agua se calienta directamente con un mechero Bunsen hasta que se
gelifique. Se esteriliza.
b) Se le agrega una mezcla de huevos (100 ml de yemas y 50 ml de huevos enteros) cuidando la
esterilidad.
c) Se reparte estérilmente en tubos y se coagulan inclinados a 90° durante una hora.
12. LEVADURA EXTRACTO AGAR
Extracto de levadura
50 g
(Difco)
Agar 1 g
Mezclar y esterilizar a 15 Ib por 15 minutos
13. LITTMAN HIGADO OXGAL AGAR (para aislamiento)
Peptona 10 g
Glucosa 10 g
Bilis Hidratada (Oxgall –
15 g
Difco)
Cristal violeta 0.01 g
Agar 20 g
14. PAPA GLICERINADA (medio selectivo para los Actinomycetes)
Papa 200 g
Glucosa 20 g
Agar 20 g
Agua 1000 mL
Los 250 g de papa se hierven en 100 ml de agua; se filtra y se agrega la glucosa, el agar, el agua.
Se esteriliza a 15 Ib por 15 minutos.
15. SMITH, MEDIO DE (medio para la obtención de coccidioidina, para coccidioidina e

histoplasmina)
CINH4 7 g
74
1´- Asparagina 7 g
K2HPO4.7H2O 1.31 g
MgSO4.7H2O 1.50 g
Citrato de sodio 0.90 g
Citrato férrico 0.30 g
Glucosa 10 g
Glicerina 25 mL
16. VITAMINAS ASIMILACIÓN, MEDIO DE
Glucosa tratada con

20 g
carbón activado
Hidrolizado de caseína
10 g
(libre de vitaminas
KH2PO4 1.5 g
MgSO4 0.5 g
Solución mineral por gotas
Agar lavado 20 g
17. MEDIO LACTRIMEL DE BORELLI
Tiene pocos nutrientes; estimula la producción de pigmentos y fructificación de muchos hongos,

principalmente dermatófitos, así como de clamidosporas en Candida albicans.
Harina de trigo 14 g
Miel 7 g
Leche de vaca 14 g
Agar 14 g
18. MEDIO DE AGAR BIGGY
Fue descrito por Nickerson y se basa en la propiedad de algunas levaduras para reducir las sales
inorgánicas.
Glucosa 10 g
Extracto de levadura 1 g
Glicina 10 g
Citrato de Bismuto
5 g
amónico
Sulfito de sodio 3 g
Cloranfenicol 5 g
Agar 20 g
Agua destilada 1000 g
75
Con este medio se forma sulfuro de bismuto y las colonias de Candida adoptan una coloración que
varía de marrón a negro. Su preparación se ha simplicado con los medios comerciales, pero no es
altamente fidedigno en la diferenciación de especies.
19. MEDIO DE STAIB
Sirve para identificar C. neoformans, ya que adquiere color café (marrón) oscuro en este medio.
Ácido caféico (Guizotia 50 g

abyssinica)
Glucosa 1 g
Creatinina 1 g
KH2PO4 1 g
Agar 15 g
20. MEDIO DE TRANSPORTE PARA HONGOS (medio de Stuarts)
Tioglicolato de sodio 1 g
Glicerofosfato de sodio 10 g
CaCL2 1 g
KH2PO4 100 mg
Azul de Metileno 0.002 mg
pH 7.3
Mezclar los componentes y esterilizar a 15 Ib por 15 minutos.
*Estos medios se pueden encontrar comercialmente.
APENDICE B
ACLARANTES Y COLORANTES
1. CLORAL LACTOFENOL
Hidrato de cloral 2 partes

Fenol 1 parte
Acido láctico 1 parte
2. KOH 20%
KOH 20 g
3. KOH GLICERINADO
Glicerina 10 mL
KOH 20 g
4. LACTOFENOL DE AMANN
76
Acido fénico 20 g
Acido láctico 20 mL
Glicerina 40 mL
Disolver en los 20 ml de agua el ácido fénico en baño María. Agregar el ácido láctico y la glicerina.
5. LIQUIDO DE BERLESE
Hidrato de cloral 74 g
Goma arábiga pulverizada 8 g
Jarabe de glucosa al 98% 5 g
Acido acético cristalizable 3 mL
6. LUGOL
Yodo metálico 2 g
Yoduro de potasio 4 g
COLORANTES
1. AZUL ALGODÓN LACTOFENOL
Fenol 20 g
Acido láctico 20 mL
Glicerina 40 mL
2. NIGROSINA
Nigrosina (granulada) 10 g
Formalina al 10% 100 mL
Mezclar y mantener la solución en baño María de agua hirviendo durante 20 minutos.
Agregar la formalina que se haya perdido por evaporación y filtrar dos veces a través de papel filtro
doble (Whatman No. 1).
77
Mycology. Atlanta.
New York.
Minneapolis, Burgess, Publishing Company.
Publishing Company.
6. Bessey, E.A. 1950. Morphology and Taxonomy of Fungi. Philadelphia, Blakiston.
7. Campell, C. M. and L.J. Stewart, 1980. Medical Mycology Handbook. John Wiley and Sons,
New York.
8. Conant, N.F. y col 1972. Manual of Clinical Mycology (3ª. Edit.). Philadelphia, Saunders.
9. Deacon, W.J. 1980. Introdución a la Micología Moderna. Noriega Edit. México.
10. Díaz, F.M., Jaúregui R.B. y Rojas P.M. 1990. Manual de Práctica de Micología Médica.
Facultad de Química, UAEM.
11. Difco Laboratorios. 1984. Difco Manual of the dehydrated Culture Media and Reagents for
Microbiology. 10th Ed. Detroit: Difco.
12. Dix, N. J. and Webster, J. W. 1995. Fungal Ecology. Englewood Cliffts, N. J. Prentice–Hall.
13. Emmons, C.W.; Binford, C.H. and Utz, J.P. 1963 Medical Mycology. Philadelphia, Lea &
Febiger.
14. Funder, S. 1968. Practical Mycology. Manual of Identification of Fungi. New York, Hafner.
15. Herrera, T.J. y Ulloa, M; 1990. El Reino de los Hongos (Micología básica y aplicada). Edit.
F.C.E. México, 1ª. Edic.
16. Koneman, R. 1987. Micología. Práctica de Laboratorio. 3ª. Edic. Editorial Médica
Panamericana, México.
Poligono & Editora da Univ. Säo Paulo.
18. Lacaz, C. Da S.; Porto E. e Costa Martínez, J. E. 1991. Micología Médica. Fungos,
Actinomicetes e algas de interés médico. 8ª. Edit. Janeiro. Säo Paulo, Brasil.
19. Langeron, T. And Vanbreuseghem, R. 1952. Précis de mycologie; micologie generale humaine
et animale. Techniques. 2ª. Edit., París, Masson.
Company,
Edit. Doyma, S.A.
22. Rabell, G. & D. Taplin. 1978. Dermatophytes. Their recognition and identification. University of
Miami Press. Florida.
24. Rojas P.M. y Díaz F.M. 1987. Primer Curso de Micología Médica. Facultad de Química,
UAEM.
25. Rojas, P.M. y Jauregui R.B. 1991. Segundo Curso de Micología Médica. Facultad de Química,
UAEM.
78
26. Segretain, G.; Drouhet, e. And Mariat, F. 1959. Diagnostic de Laboratorie en Mycology
Medicale. París. Edit. de la Tourelle.
Masson.
REVISTAS DE DIVULGACIÓN CIENTÍFICA
 Mycologia.
 Mycophathologia et Mycologia applicata.
 Mykosen.
 Review of Applied Mycology
 Clinical Infectious Diseases.
 Mycoses.
 Journal Infection Disease
 Trends in Microbiology
79

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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DEL ESTADO DE MÉXICO

MANUAL DE LABORATORIO DE MICOLOGÍA MÉDICA

QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO

M. en A. S. S. Bertha Jáuregui Rodríguez

Nombre del alumno: ______________________________________________

Reglamento del Laboratorio de Micología Médica. 2

Análisis y discusión de resultados

Se incluye además un apartado de preparación de medios de cultivo y reactivos necesarios para

GENERALIDADES DE LOS HONGOS

Duración de la práctica: 4.0 hrs.

Dependiendo de la continuidad de sus células que se observan al microscopio; el micelio puede

a. Oosporas: Se forman de la unión de dos gametangios (Presentes en Oomycetes).

a. Talosporas: derivadas directamente del micelio, se pueden dividir en:

a.2 Blastosporas: Se forman por gemación. (Candida)

b. Conidias: Esporas producidas por diferenciación del micelio en estructuras especializadas,

c. Esporangiosporas: Esporas endógenas, producidas en estructuras especializadas llaman

I.- Hongos Filamentosos

a) Medio de cultivo utilizado.

 Circulares, elevadas o surcadas.

e) Pigmento difundido al medio.

 Granulosa (como arena fina)

b) Esporas (tipo; ver la clasificación de Esporas según Saccardo)

 Microconidios (forma y tamaño)

g) Otras características importantes para la identificación de género y especie (se deben

II.- Hongos Levaduriformes

1. Las levaduras son identificadas a través de sus características de cultivo, morfológicas,

1.- Característica de la colonia

 Tubos con cepas de hongos filamentosos y levaduriformes.

Para la identificación de los hongos filamentosos se realizan los siguientes pasos:

1. Examen macroscópico de la colonia en el tubo.

El glicerol retirado, se coloca en un matráz y se esteriliza para poder reusar.

Caracteristicas macroscópicas y microscópicas de hongos filamentosos y levaduriformes más

1. ¿Cuál es la estructura básica de un hongo filamentoso?

2. ¿Por su función el micelio puede ser?

3. ¿Por qué se realiza una preparación en fresco?

5. Mencione tres diferentes tipos de esporas de hongos filamentosos.

El alumno elaborará un resumen de la importancia de los hongos para el hombre y como se

Inducir en el laboratorio la producción de enzimas (proteasas y amilasas) en cepas de hongos del

Duración de la práctica: 1.0 hrs

Mucor racemosus Actividad de la enzima α – amilasa

Proteasas.- Comprenden proteinasas y peptidosas que se utilizan en el desengomado de

 Cepas de hongos del genero Aspergillus.

 Caja petri con medio de Czapeck almidón.

3. Realizar las lecturas finales a los siete días.

1. ¿Qué fenómeno observa en las cajas de Czapeck almidón?

2. ¿Mencione dos agentes productores de proteasas?

3. ¿Porque son importantes las proteasas?

El alumno elaborará un resumen de la importancia de los hongos en la producción de metabolitos

Identificar la presencia de aflatoxinas en medios de cultivo con sustratos adecuados.

Duración de la práctica: 1.0 hrs

Las aflatoxinas son un grupo de compuestos denominados de manera general micotoxinas, de

Diversos sustratos Estructura molecular de micotoxinas

 Cepas de Aspergillus flavus.

3. Colocar la lámpara de luz UV sobre los cultivos y observar los colores.

1. ¿Qué son las toxinas de hongos?

2. ¿Qué características y función tienen las toxinas?

3. ¿Qué géneros producen las micotoxinas?

4. ¿Qué características morfológicas tiene el género Aspergillus?