Este documento presenta una guía de prácticas para un curso de micología en una universidad peruana. Incluye la preparación de varios medios de cultivo, colorantes y reactivos utilizados en el laboratorio de micología para el aislamiento e identificación de hongos. También presenta las prácticas que los estudiantes realizarán durante el curso, como la preparación de reactivos, observación de colonias y estructuras fúngicas, aislamiento de hongos, identificación de levaduras y dermatofitos, y
0 calificaciones0% encontró este documento útil (0 votos)
865 vistas34 páginas
Este documento presenta una guía de prácticas para un curso de micología en una universidad peruana. Incluye la preparación de varios medios de cultivo, colorantes y reactivos utilizados en el laboratorio de micología para el aislamiento e identificación de hongos. También presenta las prácticas que los estudiantes realizarán durante el curso, como la preparación de reactivos, observación de colonias y estructuras fúngicas, aislamiento de hongos, identificación de levaduras y dermatofitos, y
Este documento presenta una guía de prácticas para un curso de micología en una universidad peruana. Incluye la preparación de varios medios de cultivo, colorantes y reactivos utilizados en el laboratorio de micología para el aislamiento e identificación de hongos. También presenta las prácticas que los estudiantes realizarán durante el curso, como la preparación de reactivos, observación de colonias y estructuras fúngicas, aislamiento de hongos, identificación de levaduras y dermatofitos, y
Este documento presenta una guía de prácticas para un curso de micología en una universidad peruana. Incluye la preparación de varios medios de cultivo, colorantes y reactivos utilizados en el laboratorio de micología para el aislamiento e identificación de hongos. También presenta las prácticas que los estudiantes realizarán durante el curso, como la preparación de reactivos, observación de colonias y estructuras fúngicas, aislamiento de hongos, identificación de levaduras y dermatofitos, y
Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
Descargar como pdf o txt
Está en la página 1de 34
GUIA DE PRACTICAS 2013
ESCUELA PROFESIONAL DE LABORATORIO Y ANATOMIA PATOLOGICA
FACULTAD DE TECNOLOGIA MEDICA UNUVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL MICOLOGIA Autores: Lic. Roberto E. Rojas Len Lic. Alberto Daz Tello INTRODUCCI ON Aunque algunas veces ignorados, los hongos son importantes por las diversas patologas que producen en el humano, las micosis, estas enfermedades de acuerdo a su severidad van desde presentaciones meramente cosmticas hasta aquellas en las que nos ponen en riesgo de muerte. En las ltimas dcadas, la casi totalidad del diagnstico micolgico que se desarrollaba en la mayora de los laboratorios de Micologa, estaban relacionados con las micosis superficiales y cutneas, el cambio drstico de ese hecho se debi, en particular, al avance tecnolgico de la medicina y el aumento de la sobrevida de los pacientes con enfermedades complejas e inmunodeficiencias, creando una gran y altamente poblacin susceptible. Pacientes en riesgo incluyen pacientes con cncer (con y sin neutropenia), transplantes de rganos, SIDA, ciruga abdominal, alimentacin parenteral, infantes prematuros, quimioterapia, entre otros. Hasta la dcada de los 80 las especies fngicas relacionas a micosis en humanos eran de aproximadamente 150 especies, hasta el ao 2000 se incrementa sustancialmente llegando casi a 400 especies, siendo una pequea fraccin de las aproximadamente 100,000 especies de hongos descritas, lo cual hace suponer que cualquier hongo es un potencial oportunista. Por todo ello el alumno de pregrado debe adquirir conocimientos y destrezas para el correcto aislamiento e identificacin de hongos de importancia mdica.
INDICE DE PRACTICAS Prctica Tema 1 Preparacin de reactivos, colorantes y medios de cultivos. 2 Observacin de colonias fngicas y preparaciones microscpicas 3 Observacin de estructuras fngicas y hongos ambientales 4 Susceptibilidad antifngica por disco difusin (M44-A22004) 5 Aislamiento de hongos de fuentes naturales. 6 Examen de cultivos (fragmentacin del talo, cinta adhesiva, microcultivos). 7 Examen e identificacin de cultivos de dermatofitos 8 Procesamiento de microcultivos 9 Identificacin de levaduras (tubo germinativo, morfologa y fisiologa). 10 Examen e identificacin de cultivos de hongos demateaceos, Sporothrix schenckii. 11 Examen y procesamiento de muestras clnicas 12 Seminarios: CALIDAD EN EL LABORATORIO DE MICOLOGIA 13 Presentacin de Resultados del procesamiento de muestras clnicas. 14 Examen de preparaciones microcpicas de H. capsulatum y P. brasiliensis 15 Examen de preparaciones de hongos productores de micosis oportunistas
I. PRACTICA No. 1 Preparacin de reactivos, colorantes y medios de cultivos Marco terico a. Medios de cultivo Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes, preparados en el laboratorio, que suministran los compuestos necesarios para el desarrollo de los microorganismos. Actualmente no existe un medio de cultivo que satisfaga el aislamiento de todos los hongos de importancia mdica, por ello en el laboratorio de micologa existe una amplia variedad de medios de cultivo, cuyos usos estn condicionados al hongo a investigar. Tambin son importantes la temperatura y el tiempo incubacin, as como tambin los contenedores de los medios de cultivo (placas o tubos). Generalmente se recomienda como temperatura de incubacin de 28-30 C, as como tambin a temperatura ambiente. Para el reparto de los medios de cultivo en micologa, eventualmente pueden usarse placas petri, por cuanto ofrecen mayor superficie en donde pueda diseminarse el material a cultivar, pudiendo evitarse la deshidratacin dispensando aproximadamente 40 ml. de medio de cultivo por placa; el uso de tubos tapa rosca de gran calibre son lo ms recomendable, usualmente no presenta el problema de deshidratacin, no debiendo dejarse la tapa totalmente cerrada, sino ligeramente abierta, para permitir una adecuada aireacin, porque el desarrollo ser anormal o inhibido, retardando as la identificacin de los hongos. La incorporacin de agentes antibacterianos como cloranfenicol (16 ug/ml), gentamicina (5-100 ug/ml), penicilina (20 ug/ml), estreptomicina (40 ug/ml), norfloxacina (5 ug/ml), y ciprofloxacina (5ug/ml), incrementan considerablemente la posibilidad de obtener cultivos libres de presencia bacteriana como contaminante. Tambin se puede usar la cicloheximida (actidione, 0.5 ug/ml), para inhibir el desarrollo de hongos saprfitos de rpido crecimiento, pero este es adems capaz de inhibir el desarrollo de algunas levaduras como C. neoformans, especies de Candida, especies de Trichosporon, especies de Aspergillus, P. boydii, entre otros; por esta razn el uso de cicloheximida debe ser cuidadosamente empleada en los medios usados. Para incrementar la recuperacin de algunos hongos dimrficos se emplea Agar Infusin de Cerebro-Corazn con 10- 20% de sangre de carnero. Tambin se emplea compuestos especficos o indicadores para poner de manifiesto caracteres bioqumicos esenciales distintivos de gneros y especies.
b. Reactivos y colorantes Para el estudio de los hongos es necesario del uso de reactivos y colorantes. Si se trata de una muestra clnica (pus, esputo, raspados de piel, fragmentos de pelo, etc.) es necesario el empleo de aclarantes que permitan resaltar las estructuras fngicas al disolver el moco o queratina de la muestra. Teir es un proceso de colorear artificialmente los microorganismos con colorantes o reactivos con el objeto de facilitar su observacin y estudio al microscopio. Los colorantes son compuestos orgnicos conformados por anillos bencnicos que tienen un grupo auxocromo (intensifican el color y mejoran la afinidad del colorante) y uno cromforo (imparte color). Los colorantes deben conservarse en frascos de color mbar. Se recomienda preparar en cantidades para un consumo no mayor de un mes. Cada vez que las soluciones colorantes sean trasvasadas a los pequeos cuentagotas que se emplean para la tincin, deben filtrarse. Los frascos cuentagotas y sus tapas deben ser lavados con todo cuidado cada vez que se renueve su contenido.
Competencias Explica la preparacin de medios de cultivo, colorantes y reactivos utilizados en el laboratorio de micologa. Materiales y equipos a. Peptona b. Glucosa c. Agar d. Agar micobiotic o micosel e. Papa f. Granos de arroz blanco no enriquecido g. Harina de maz
h. Tween 80 i. Agua destilada j. Material de vidrio (tubos tapa rosca, probeta, matraz, beaker, otros) k. Papel filtro l. Fenol m. Azul de metileno n. Acido lctico o. Glicerina p. Azul de algodn o sol. acuosa 1% q. Hidrxido de potasio r. Mechero de bunsen s. Rejilla de asbesto t. Trpode Procedimiento a. Medios de cultivo i. AGAR SABOURAUD CON CLORANFENICOL Y CICLOHEXIMIDA (MICOBIOTIC, MICOSEL) Para recuperacin de hongos patgenos a partir de muestras muy contaminadas con hongos saprfitos y bacterias, como dermatofitos y hongos dimrficos. Su utilizacin requiere de algunas consideraciones por cuanto en capaz de inhibir hongos de importancia mdica (Candida no albicans, especies de Aspergillus, Zygomycetes, Cryptococcus neoformans, especies de Trichosporon, P. boydii entre otros). Agar micobiotic o micosel 36 g Agua destilada 1000 ml Adicionar el agar al agua, mezclar y hervir hasta disolver el medio completamente. Ajustar el pH a 6.5 0.2 y dispensar alcuotas de 20 ml. en tubos tapa rosca limpios. Esterilizar en autoclave por 15 min. a 121 C. e inclinar los tubos hasta que el agar se solidifique.
ii. AGAR PAPA DEXTROSA Medio que estimula la formacin de conidias, pigmento (rojo en T. rubrum, rosa salmn en M. audouinii y amarillo en M. canis). Tambin utilizado en la realizacin de microcultivos o cepario. Papa 200 g Glucosa 10 g Agar 15 g Agua destilada 1000 ml Lavar, pelar y cortar la papa en dados pequeos, adicionar el agua y autoclavar por 10 min. a 121 C para hacer la infusin de papa. Filtrar la infusin a travs de gasa. Adicionar el agar y la glucosa, hervir hasta disolver. Llevar el volumen total a 1000 ml con agua destilada si fuera necesario. Dispensar en tubos tapa rosca limpios. Esterilizar en autoclave por 15 min. a 121 C. e inclinar los tubos hasta que el agar se solidifique.
iii. AGAR SABOURAUD DEXTROSA (Modificado por Emmons) Medio estndar para el aislamiento, esporulacin y conservacin de muchos hongos. Peptona 10 g Glucosa 20 g Agar 15 g Agua destilada 1000 ml Mezclar los componentes y hervir hasta disolucin completa. Dispensar en tubos tapa rosca. Esterilizar en autoclave por 15 min. a 121 C. e inclinar los tubos hasta que el agar se solidifique.
iv. AGAR HARINA DE MAIZ TWEEN 80 (Agar morfologa)
Para la identificacin morfolgica de levaduras. Harina de maz 40 g Agar 20 g Tween 80 10 ml Agua destilada 1000 ml Mezclar el harina de maz con el agua y calentar por 1 h a 65 C., filtrar a travs de gasa y luego con papel de filtro Whatman n 2. Agregar el agar, hervir hasta disolver. Completar a 1000 ml con agua destilada si fuese necesario, adicionar el tween 80 y mezclar. Esterilizar en autoclave por 15 min. a 121 C. Dispensar aspticamente en placas petri estriles.
v. SOLUCION ANTIBIOTICA Usado como inhibidor bacteriano de medios de cultivo. Cloranfenicol (cpsula) 500 mg Etanol 95% 10 ml Disolver el contenido de la cpsula en el alcohol y utilizar 1 ml por litro de medio de cultivo a preparar.
b. Reactivos y colorantes i. COLORANTE DE KANE Empleado en la demostracin de estructuras fngicas en raspados de piel, especialmente en lesiones provenientes de la pitiriasis versicolor. Glicerina 10.0 ml Tween 80 10.0 ml Fenol 2.5 g Azul de metileno 1.0 g Agua destilada 480.0 ml
Disolver la glicerina, el Tween 80 y el fenol en el agua destilada calentando ligeramente, luego aadir el azul de metileno hasta disolver. Conservar en frasco color caramelo.
ii. LACTOFENOL DE AMMAN Este aclarante se emplea preferentemente para la observacin microscpica de los cultivos y de algunas muestras en las que se quiere mantener la estructura de sus elementos. Fenol 20 g Acido lctico 20 ml Glicerina 40 ml Agua destilada 20 ml Primero se mezcla el cido lctico y la glicerina con el agua destilada, y seguidamente se aaden los cristales de fenol, previamente fundido a 60 C en bao mara, bajo agitacin hasta la disolucin de los mismos.
iii. AZUL DE LACTOFENOL Es usado como colorante y lquido de montaje. El cido lctico acta como agente aclarante y ayuda en la preservacin de estructuras fngicas, el fenol acta como agente fungicida, la glicerina previene la deshidratacin y el azul de algodn da el color a las estructuras. Fenol 20 g Acido lctico 20 ml Glicerina 40 ml Agua destilada 20 ml Azul de algodn (o sol. acuosa 1%, 2 ml) 0.05 g Fundir el fenol previamente a 60 C. en bao mara y mezclar con el cido lctico, glicerina y el agua, luego agregar el azul de algodn (azul de Poirrier y azul de anilina son anlogos al azul de algodn).
iv. HIDROXIDO DE POTASIO 20%
Usado en la deteccin de estructuras fngicas en muestras clnicas por examen microscpico. Su concentracin vara entre el 10 y 40%. Hidrxido de potasio 20 g Glicerina 10 ml Agua destilada 70 ml Los cristales de KOH se aaden lentamente en agitacin hasta su completa disolucin.
Resultados El alumno obtendr el material para sus futuras prcticas Cuestionario Cul es el objetivo de usar un antibacteriano en los medio de cultivo en micologa? Cuales son las funciones de los componentes del azul de lactofenol? Fuentes de informacin Kern E, Martha y Blevins S., K. 1997. Medical Mycology: a self-instructional text. 2da. Edicin. F.A. Davis Company. Philadelphia. De Hoog GS, Guarro J, Gen J, Figueras MJ. 2000. Atlas of clinical fungi. 2nd Ed. Utrecht & Reus, Centraalbureau loor Schimmelcultures / Universitat Rovira i Virgili. Koneman, E y Roberts, G. 1987. Micologa. Practica de laboratorio. Traducido por Editorial Mdica Panamericana s.a. ed. editorial mdica panamericana s.a. Bs. As. ed. Tercera. Emmons CW, Binford CH, Utz JP, Kwon-Chung KJ. 1977. Medical Mycology. Philadelphia, Lea & Febiger.
II. PRCTICA No. 2 Observacin de colonias fngicas y preparaciones microscpicas Marco terico En el laboratorio los hongos son observados de dos maneras, bajo el microscopio (microscpicamente) y como una colonia sobre una placa de agar (microscpicamente). a. Morfologa microscpica Microscpicamente la clula fngica es observada ya sea como hifa (mohos) o como levadura. i. Hifas, propia de los mohos 1. Por su tabique a. Septadas, presentan tabiques o paredes transversales, delimitando a cada una de las clulas que conforman las hifas, estas hifas de 3 a 4 um de dimetro son propias de los Ascomycota, Basidiomycota y hongos mitospricos. b. Aseptadas (continuas, cenociticas o en sifn), usualmente no presentan tabiques, propias de los Zygomycota, son anchas en forma de cintas de 6 a 10 um de dimetro. 2. Por su funcin a. Area, se extiende por encima del agar y puede soportar estructuras reproductivas (conidias). b. Vegetativa, est por debajo de la superficie del agar sirviendo para la nutricin del hongo. c. Hifa vegetativa no reproductiva, puede poseer caractersticas no reproductivas muy distintivas, lo cual ayuda en la identificacin de especies. i. Candelabros fvicos ii. Organos nodulares iii. Hifas en raquetas iv. Hifas en espiral 3. Por su pigmentacin a. Hialinos o incoloras, como en los Mucedinceos. b. Hongos negros o pardos como en los Demateceos. ii. Levaduras, clulas redondeadas a ovales, las cuales brotan para formar clulas hijas. b. Morfologa macroscpica Aunque muchos hongos no tengan una morfologa colonial caracterstica suficiente, que permita su identificacin sin otro criterio adicional, algunas son muy distintivas. Ciertos trminos generales son usados para describir las colonias fngicas: i. Textura Describe la altura de las hifas areas. La textura est relacionada y mejor descrita si practicramos un corte transversal de la colonia, como se ilustra en la Figura 1. Colonias algodonosas o lanosas producen un micelio areo muy alto y denso; colonias aterciopeladas tienen un micelio areo bajo el cual semeja a la tela terciopelo; colonias granulares o pulverulentas son planas y friables debido a la densa produccin de conidias. La textura granular es rugosa, semejante al azcar granulado y las pulverulentas al harina, estos dos trminos son indistintamente usados, y las colonias glabrosas o serosas tienen una superficie lisa debido a que ellas no producen micelio areo, usualmente las levaduras corresponderan a esta apariencia macroscpica.
Fig. 1. Esquema de la textura de las colonias fngicas.
ii. Topografa Describe las variadas disposiciones de montculos y aplanamientos vistos sobre las colonias de hongos, Fig. 2. La topografa es a menudo enmascarado por las hifas areas, por lo tanto esta caracterstica es mejor observada sobre el reverso de la colonia; una colonia plana entonces no tiene topografa. Las colonias rugosas tienen surcos profundos irregularmente radiados desde el centro de la colonia; las colonias umbilicadas poseen una elevacin central a manera de botn, estas pueden estar acompaadas por pliegues alrededor del botn y las colonias verrucosas exhiben una superficie arrugada y retorcidas. iii. Color Dado especficamente por la produccin de pigmento de la colonia, pudiendo ser en el frente (haz) y reverso (envs), eventualmente algunas especies de hongos producen un pigmento difusible en el medio de cultivo. iv. Velocidad de crecimiento La velocidad de crecimiento fngico es variable, algunos hongos maduran entre 3-4 das mientras que otros requieren de 3-4 semanas. As tenemos los de crecimiento rpido, las cuales maduran en 5 das o menos, las de crecimiento intermedio (6-10 das) y las de crecimiento lento (11-21 das).
Fig. 2. Esquema de la topografa de las colonias fngicas
Competencias Describe el crecimiento in vitro de los hongos. Materiales y equipos Cultivos en placas de levaduras y mohos. Lminas montadas con microcultivo de hongos.
Procedimiento Realizar el estudio macroscpico y microscpico con objetivos de 10x, 20x y 40x de aumento, localizando y diferenciando las principales estructuras fngicas. Resultados Realice esquemas de sus observaciones microscpicas, que observ y aumento. Realice esquemas de sus observaciones macroscpicas de colonias fngicas. Cuestionario En las preparaciones microscopicas es importante una tcnica asptica para realizarla? Cite diferencias en el talo unicelular y pluricelular Fuentes de informacin Saldarriaga O., Yamille y Pineda G., F. 2001. Manual de micologa aplicada. 1ra. Edicin. Editorial Universidad de Antioquia. Medelln. Kern E, Martha y Blevins S., K. 1997. Medical Mycology: a self-instructional text. 2da. Edicin. F.A. Davis Company. Philadelphia. De Hoog GS, Guarro J, Gen J, Figueras MJ. Atlas of clinical fungi. 2nd Ed. Utrecht & Reus, Centraalbureau loor Schimmelcultures / Universitat Rovira i Virgili, 2000. Koneman, E y Roberts, G (1987) Micologa. Practica de laboratorio. Traducido por Editorial Mdica Panamericana s.a. ed. editorial mdica panamericana s.a. Bs. As. ed. Tercera. Emmons CW, Binford CH, Utz JP, Kwon-Chung KJ. Medical Mycology. Philadelphia, Lea & Febiger, 1977
III. PRACTICA N 3 Observacin de estructuras fngicas y hongos ambientales Marco terico Levaduras, crecen como clulas nicas. Muchas se reproducen por un proceso asexual llamado brotacin o gemacin. La clula madre produce un brote llamado blastonidio o blastospora, la cual se separa y crece igual que su progenitora. Muchas levaduras tambin producen estructuras llamadas pseudohifas. Estas son blastoconidias individuales que estn elongadas y permanecen unidas. Estas se diferencian de las hifas verdaderas de los mohos por una constriccin de la pseudohifa vista al finadle las clulas individuales. Las hifas verdaderas vistas en los mohos y ciertas levaduras no tienen constriccin. Ciertas levaduras producen tres tipos de estructuras: blastosporas, pseudohifas e hifas. Otra estructura producida por pocas especies de levaduras es el tubo germinativo. Este es una estructura tubular que se desarrolla en la superficie de la levadura. Este tiene paredes paralelas sin constriccin. Los tubos germinativos son vistos al examen directo de muestras clnicas o despus del desarrollo de levaduras en medios que estimulan su produccin. a. Reproduccin sexual. Las levaduras se reproducen sexualmente ya sea por ascosporas o basidiosporas. Las ascosporas son esporas sexuales formadas dentro de un saco especial, llamado asco. Las basidiosporas son formadas sobre unas estructuras en forma de garrote, llamada bside. b. Reproduccin asexual. Todas las levaduras verdaderas pueden producir blastosporas y pueden producir otras estructuras asexuales. Las levaduras pueden producir pseudohifas y verdaderas hifas. Si la hifa verdadera se fragmenta en clulas individuales, estas son llamadas artroconidias. Muchas levaduras producen blastoconidias y pseudohifas. Una excepcin son especies de Trichosporon, los cuales producen blastoconidias, artroconidias, pseudohifas e hifas verdaderas. Mohos, el filamento individual de un moho es llamado hifa, Las paredes de las hifas son paralelas y no constreidas, como si lo son las pseudohifas las cuales se ven en las levaduras. a. Reproduccin sexual. Los mohos se reproducen sexualmente va ascosporas, basidiosporas o por zigosporas. Las zigosporas son formadas despus del contacto y unin de las puntas de dos hifas. Estas puntas contienen esporas sexuales y se unen para formar una espora en reposo de pared gruesa, llamada zigospora. Esta espora es ms grande que la hifa y es formada por el flujo de protoplasma y ncleos en la estructura. b. Reproduccin asexual. Los mohos se reproducen asexualmente usando una variedad de clulas o estructuras. En los Zygomicetes, la estructura bsica es llamado esporangio. Esta es una clula en forma de saco en la cual estructuras internas son formadas en unidades individuales, llamadas esporangiosporas. Estas esporangiosporas pueden ser aleatoriamente distribuidas en el esporangio, o pueden estar dispuestos en hilera. Los esporangios son llevados por una hifa especializada llamada esporangiforo, el cual se origina de la hifa vegetativa. Muchos hongos de inters mdico no producen esporangios, pero producen estructuras llamadas conidias. Conidia por definicin son estructuras que desarrollan de manera asexual, diferente de un esporangio. Las conidias son producidas de hifas especializadas llamadas clulas conidigenas. c. Tipos de conidias estn basados en su clula de origen. i. Aleuroconidia. Conidia nica producida por liberacin al final de la clula conidigena. ii. Aneloconidia. Blastoconidia producida en la base de la clula conidigena (anlido); el conidio ms antiguo est en el pice y la ms joven en la base. Cuando un conidio es producido, una cicatriz o anelacin es dejada en la superficie externa de la clula conidigena. iii. Artroconidia. Conidia producida por fragmentacin de la hifa en clulas individuales. iv. Blastoconidia. Conidia producida por brotacin o brotes de una porcin de la clula preexistente o progenitora v. Fialoconidia. Conidia producida de una clula conidigena (filide) que no incrementa su longitud cuando las conidias son producidas. vi. Poroconidia. Conidia producida a travs de poros en la clula conidigena. Competencias
Describe la morfologa microscpica de algunos hongos y tipo de conidiognesis estudiados en micologa mdica. Materiales y equipos Lminas con microcultivos de diferentes mohos. Lminas con levaduras de diferentes gneros. Microscopio. Procedimiento Realizar el estudio macroscpico y microscpico con objetivos de 10x, 20x y 40x de aumento, localizando y diferenciando las principales estructuras reproductivas fngicas. Resultados Realizar esquemas de sus observaciones microscpicas, que observ y aumento (ficha de trabajo 3). Cuestionario Cmo demostrara la presencia de levaduras ascgenas? En la industria panadera Cul es la levadura ms importante? Fuentes de informacin Kern E, Martha y Blevins S., K. 1997. Medical Mycology: a self-instructional text. 2da. Edicin. F.A. Davis Company. Philadelphia. De Hoog GS, Guarro J, Gen J, Figueras MJ. 2000. Atlas of clinical fungi. 2nd Ed. Utrecht & Reus, Centraalbureau loor Schimmelcultures / Universitat Rovira i Virgili. Koneman, E y Roberts, G. 1987. Micologa. Practica de laboratorio. Traducido por Editorial Mdica Panamericana s.a. ed. editorial mdica panamericana s.a. Bs. As. ed. Tercera. Emmons CW, Binford CH, Utz JP, Kwon-Chung KJ. 1977. Medical Mycology. Philadelphia, Lea & Febiger.
IV. PRACTICA N 4 Susceptibilidad antifngica por disco difusin (M44-A2004) Marco terico En los ltimos aos se ha vuelto una necesidad realizar pruebas de susceptibilidad antifngica de mas fcil disponibilidad, la prueba de susceptibilidad antifngica por disco difusin (M44-A2004), provee y establece la metodologa por disco difusin para especies de Candida, interpretacin de resultados para fluconazol y rangos de control de calidad para fluconazol y voriconazol. Competencias Describe los procedimientos de laboratorio para la determinacin de susceptibilidad antifngica para especies de Candida mediante el mtodo de disco difusin. Materiales y equipos Estufa de 35 C Estndar de turbidez Mc Farland 0.5 Hisopos de algodn Solucin salina fisiolgica. A. Mueller-Hinton con glucosa 2% y 0.5 ug/ml de azul de metileno (AMH+GMB) Regla Procedimiento Preparar un inculo de la levadura a testar y ajustar a la escala 0.5 Mc Farland, equivale a 1 x10 6 a 5 x10 6 clulas por ml. Sumergir y humedecer el hisopo de algodn estril en la suspensin del inculo. Remover el exceso de humedad por rotacin del hisopo en el interior de la pared del tubo por encima del nivel del fluido. Estriar el hisopo sobre el medio AMH+GMB dos o mas veces, rotando aproximadamente 60 cada vez. Los discos se dispensan sobre la superficie del agar, presionando ligeramente. Las placas se invierten y se colocan en la estufa a 35 C. por 24 hrs. Resultados Medir los dimetros de las zonas de inhibicin completa, usando una regla, interpretando con los rangos establecidos (fluconazol 25 ug, sensible 19 mm y resistente menor o igual a 14 mm) Cuestionario El medio de cultivo empleado para la prueba de susceptibilidad antifngica Por cunto tiempo puede ser almacenados hasta su uso? A que familia de antifngicos pertenecen las drogas empleadas en la M44-A CLSI? Fuentes de informacin Method for antifungal disk difusin susceptibility testing of yeasts. M44-A, 2004. CLSI.
V. PRACTICA N 5 Aislamiento de hongos de fuentes naturales Marco terico Los hongos son organismos cosmopolitas, se encuentran sobre una gran diversidad de hbitat (suelo, aire, agua, plantas, animales, etc.). Loe hongos por su hbitat natural especfico, se clasifican como geoflicos, acuticos, zooflicos, fitoflicos o antropoflicos. Tambin se les puede aislar de fuentes no naturales como superficies de mesas, catteres, estufas, aire acondicionado, microscopios, entre otros. Existe diversidad de tcnicas que nos permiten aislar diferentes especies de hongos a partir de variados sustratos. En determinados casos es necesario utilizar medios especiales que faciliten el aislamiento de dichos hongos. Competencias Explica y describe las diferentes tcnicas empleadas en la recuperacin de hongos a partir de fuentes naturales. Materiales y equipos a. A. Sabouraud. b. A. micobiotic c. A. papa dextrosa d. Tubrculos y frutas contaminadas e. Tierra de jardn f. Solucin salina fisiolgica g. Agua destilada h. Asas de Khole i. Gradilla Procedimiento Inoculacin directa a. Con el asa micolgica coger una pequea porcin de la muestra, proveniente de fruta o tubrculo infectado por hongos. b. Inocular por puntura con el asa micolgica sobre el agar papa dextrosa. c. Incubar a temperatura ambiente por una semana. Exposicin de placas al medio ambiente a. Las placas de A. Sabouraud y micobiotic exponerlas al medio ambiente elegido, por 15 minutos. b. Incubar a temperatura ambiente por una semana. Resultados Esquematizar y presentar los resultados de sus experiencias. Cuestionario Qu grupo de hongos son los ms frecuentemente aislados del aire? Qu temperatura de incubacin empleara para su aislamiento? Fuentes de informacin Kern E, Martha y Blevins S., K. 1997. Medical Mycology: a self-instructional text. 2da. Edicin. F.A. Davis Company. Philadelphia. De Hoog GS, Guarro J, Gen J, Figueras MJ. 2000. Atlas of clinical fungi. 2nd Ed. Utrecht & Reus, Centraalbureau loor Schimmelcultures / Universitat Rovira i Virgili
VI. PRACTICA N 6 Examen de cultivos (fragmentacin del talo, cinta adhesiva, microcultivos) Marco terico Una vez que la colonia del hongo ha madurado, lo cual se observa por su morfologa microscpica, la apariencia colonial puede ayudar a identificar a un hongo, sin embargo esta morfologa puede variar grandemente entre cepas de hongos, tiempo y temperaturas de identificacin y medios de cultivo empleados. Para mohos, la identificacin final depende bsicamente de la morfologa microscpica, aunque existen pocas pruebas bioqumicas tiles. Para levaduras las pruebas bioqumicas son la base principal para su identificacin, con menor nfasis en la apariencia microscpica y macroscpica. Hay diferentes procedimientos frecuentemente usados para el examen microscpico de un cultivo fngico: a. Montaje por fragmentacin del talo Una preparacin por fragmentacin es la tcnica mas comn y rpida para montaje de hongos y su examen microscpico. Desde que el crecimiento de los mohos, fragmentado con agujas de diseccin, conidias o esporas pueden ser dislocadas de las clulas conidigenas o esporgenas. Puede ser necesario el uso de tcnicas de microcultivos si la identificacin no puede ser realizada de los montajes con cinta scotch. b. Montaje con cinta adhesiva (scotch) Este Mtodo usualmente mantiene la posicin original de las estructuras fngicas caractersticas. Sin embargo, el organismo debe crecer sobre medios plaqueados adems de ser examinados por este mtodo. c. Microcultivos Exacta identificacin de hongos filamentosos basada sobre examen microscpico de estructuras de esporulacin de una colonia. Mientras que la fragmentacin del talo es til, ella tiene 2 principales desventajas: 1) Si demasiado desarrollo es removido o no es bien desmenuzado, o si el material es tomado de un rea sin esporulacin, ser dificultoso discernir estructuras de esporulacin. 2) Esporas y conidias son a menudo separadas durante la preparacin del montaje. El sistema de microcultivo consiste de una mini cmara de incubacin diseada para producir condiciones ptimas de esporulacin. Permite examinar la colonia en varios estadios de desarrollo y mejora las oportunidades de observar la configuracin natural de las esporas y conidias sobre las estructuras fructferas. Competencias Explica las ventajas y desventajas del montaje por fragmentacin del talo, con cinta scotch y microcultivos, para el examen de los crecimientos fngicos. Materiales y equipos a. Asas Micolgicas b. Mechero c. Lminas portaobjetos d. Laminillas cubreobjetos e. Pinzas f. Cinta scotch g. Azul de Lactofenol h. Lactofenol de Aman i. Sistema estril j. Placa k. Angulo de vidrio hueco l. Papel filtro m. Papel Procedimiento a. Montaje por fragmentacin del talo
i.Colocar una gota de azul de lactofenol justo por fuera del centro de la lmina portaobjetos limpia. ii.Con la aguja de inoculacin, remover suavemente un fragmento del crecimiento entre la mitad del centro y borde de la colonia. Colocar el material en el lactofenol. iii.Con las dos agujas de diseccin, fragmentar suavemente la porcin de colonia hasta diseminarla finamente en el azul de lactofenol. iv.Colocar el cubreobjetos por el borde del azul de lactofenol, y presionar suavemente con un objeto punteagudo. v.Evitar la formacin de burbujas de aire bajo el cubreobjetos. Remover el exceso de azul de lactofenol de los bordes del cubreobjetos por secado con papel toalla. vi.Sellar los bordes del cubreobjetos con esmalte de uas para preservar el montaje b. Montaje con cinta adhesiva (scotch) i. Doblar una cinta adhesiva transparente con el lado adhesivo hacia fuera, de aproximadamente 4 cm. ii. Mantener la punta asegurada con una pinza y presionar firmemente la superficie de la colonia con el lado adhesivo. iii. Retirar la cinta suavemente. Hifas areas quedan adheridas a la cinta. iv. Separar las puntas de la cinta y colocarla sobre una pequea gota de azul de lactofenol sobre una lmina portaobjetos gasta que se adhiera completamente sobre la lmina. v. Examinar bajo el microscopio c. Microcultivos i. Preparacin del sistema estril (1) Encaje en el fondo de la placa petri, papel filtro del mismo dimetro. (2) Poner una varilla de vidrio doblada en forma de V sobre el papel de filtro, colocar encima una lmina portaobjetos. Sobre el papel de filtro depositar adems 2 cubreobjetos de 22x22. (3) Volver a poner la tapa, envolver con papel, hornear a 180 C x 1 h. Verter una capa delgada de agar papa dextrosa en una placa de petri estril y cortar bloques de agar de 5 mm de lado y aproximadamente 3-4 mm de espesor. Depositar un bloque de agar sobre el portaobjetos. Usando en todo momento una tcnica asptica, remover con un asa en ngulo recto, una parte de material esporulante de la colonia e inocular en los cuatro lados del bloque. Con la ayuda de una pinza, colocar el cubreobjetos encima del bloque y presionar ligeramente. Adicionar 1-2 ml de agua destilada estril al papel de filtro, volver a tapar la placa petri, incubar y observar esporulacin a intervalos regulares examinando la preparacin bajo el microscopio. Realizar el montaje con azul de lactofenol, cuando el hongo esporule antes que sobre-desarrolle en el cubreobjetos, lo cual sucede usualmente entre 7-21 das.
Resultados Presentar los resultados de sus observaciones de los hongos procesados, Ficha de trabajo 4. Cuestionario Para un microcultivo permanente, que coloraciones alternativas podra emplear? Con fines docentes que tcnica es la mas recomendable para la demostracin microscpica de hongos? Fuentes de informacin Koneman, E y Roberts, G. 1987. Micologa. Practica de laboratorio. Traducido por Editorial Mdica Panamericana s.a. ed. editorial mdica panamericana s.a. Bs. As. ed. Tercera
VII. PRACTICA N 7 Examen e identificacin de cultivos de dermatofitos Marco terico Los dermatofitos son un grupo de hongos causantes de la dermatofitosis, conidialmente se les agrupa en tres gneros (trichophyton, epidermophyton y microsporum) y de acuerdo a su presencia en la naturaleza son antropoflicos, geoflicos y zooflicos. De acuerdo a su ubicacin topogrfica en individuos afectados pueden ser conocidos como tia capitis, tia barbae, t. unguium, tia corporis, tia pedis, etc. El estudio para su identificacin estriba fundamentalmente en el reconocimiento de estructuras conidiales as como de caractersticas macroscpicas. Competencias Describe a los dermatofitos causantes de tias en nuestro pas. Materiales y equipos a. Cepas i. Microsporum canis ii. Microsporum gypseum iii. Trichophyton rubrum iv. Trichophyton mentagrophytes v. Trichophyton tonsurans b. Asas de Khole en ngulo recto c. Azul de lactofenol d. Lminas portaobjetos e. Laminillas cubreobjetos f. Agar urea de Christensen g. Agar papa dextrosa Procedimiento a. De las cepas suministradas realizar exmenes directos con ALF. b. Visualizar y esquematizar estructuras propias de las diferentes especies de dermatofitos. c. Inocular los dermatofitos sobre Agar urea de Christensen, Medio de arroz y Agar papa Dextrosa, registrar los resultados desde los tres das hasta las dos semanas. Resultados Presentar mediante esquemas y cuadros los resultados de sus hallazgos. Cuestionario Cul es el dermatofito ms comn en nuestro pas? Qu grupo etreo es el mas afectado en la tia capitis? Fuentes de informacin Kern E, Martha y Blevins S., K. 1997. Medical Mycology: a self-instructional text. 2da. Edicin. F.A. Davis Company. Philadelphia. De Hoog GS, Guarro J, Gen J, Figueras MJ. 2000. Atlas of clinical fungi. 2nd Ed. Utrecht & Reus, Centraalbureau loor Schimmelcultures / Universitat Rovira i Virgili.
VIII. PRACTICA N 8 Procesamiento de microcultivos
Marco terico Microcultivos Exacta identificacin de hongos filamentosos basada sobre examen microscpico de estructuras de esporulacin de una colonia. Mientras que la fragmentacin del talo es til, ella tiene 2 principales desventajas: 1) Si demasiado desarrollo es removido o no es bien desmenuzado, o si el material es tomado de un rea sin esporulacin, ser dificultoso discernir estructuras de esporulacin. 2) Esporas y conidias son a menudo separadas durante la preparacin del montaje. El sistema de microcultivo consiste de una mini cmara de incubacin diseada para producir condiciones ptimas de esporulacin. Permite examinar la colonia en varios estadios de desarrollo y mejora las oportunidades de observar la configuracin natural de las esporas y conidias sobre las estructuras fructferas. Competencias Explica las ventajas y desventajas del montaje permanente y semipermanente a partir de microcultivos, para el examen de los crecimientos fngicos. Materiales y equipos Asas Micolgicas Mechero Lminas portaobjetos Laminillas cubreobjetos Pinzas Cinta scotch Azul de Lactofenol Lactofenol de Aman Blsamo de Canad Procedimiento Para montar el cubreobjetos remover este, del bloque de agar con una pinza. Cubrir el rea de crecimiento con azul de lactofenol o lactofenol de Aman, y montar sobre un portaobjetos limpio, montaje semipermanente. Para montar el portaobjetos sostenerlo con pinzas, con un asa de inoculacin en punta levantar el bloque de agar y descartar en solucin desinfectante. Limpie el reverso del portaobjetos con papel toalla embebido con solucin desinfectante sin alterar el preparado. Coloque una gota de medio de montaje permanente (blsamo de Canad), en el centro del crecimiento y aplicar un cubreobjetos, montaje permanente. Observar bajo el microscopio a diferentes aumentos y reconocer los gneros de hongos encontrados. Resultados Microcultivos permanentes y semipermanentes de hongos ambientales para ser lminas de referencia para los estudiantes. Cuestionario Ventajas de los microcultivos permanentes y semipermanentes. Fuentes de informacin Koneman, E y Roberts, G. 1987. Micologa. Practica de laboratorio. Traducido por Editorial Mdica Panamericana s.a. ed. editorial mdica panamericana s.a. Bs. As. ed. Tercera
IX. PRACTICA N 9 Identificacin de levaduras (tubo germinativo, morfologa y fisiologa) Marco terico La identificacin de levaduras de importancia mdica cada vez se hace ms necesaria, por ello recurrimos a pruebas que nos garanticen su correcta identificacin. Entre estas pruebas tenemos a la prueba del tubo germinativo, estudio de la morfologa y pruebas fisiolgicas entre otras. Competencias Describe la identificacin de las levaduras de importancia mdica. Materiales y equipos a. Plasma o suero estril i. Alcuotas de 0,5 ml almacenados a -20 C. b. Organismos control i. C. albicans ii. C. tropicalis c. Asas de Khole d. Bao mara a 35 C. 1 C e. Lminas portaobjetos. f. Laminillas cubreobjetos g. Harina de Maiz con Tween 80 (AHM-T80) h. Galeria API 20 C AUX i. Cmara de incubacin j. Ampolla de API C Mdium k. Hojas de resultados l. Index de identificacin de levaduras m. Pipetas de rango multiple de 50-200 ul y tips. n. Recipiente con desinfectante. o. Tubos de 16 x 150 mm con agua destilada estril. Procedimiento a. Tubo germinativo i. Tocar ligeramente una colonia con el asa de Khole. ii. Suspender las levaduras en el plasma o suero. iii. Incubar en bao mara a 35 C por 2.5 h. iv. Colocar 2 a 3 asadas de la suspensin sobre un portaobjetos rotulado con el nmero de muestra. v. Cubrir la suspensin con laminilla cubreobjetos. vi. Examinar a 40x y 100x para la deteccin o ausencia de tubos germinativos. b. Morfologa i. Preparar placas con Agar Harina de Maiz con Tween 80 (AHM-T80). ii. Con un lpiz para vidrio dividir la placa en 4 sectores y utilizar cada sector rotulando con el nmero de muestra de cada levadura aislada. iii. Con una aguja de inoculacin tocar ligeramente la colonia a probar, practicar dos estras de aproximadamente 1.5 cm. de longitud separadas por 1 cm., sin excavar el medio. iv. Despus de flamear y enfriar la aguja de inoculacin, practicar una estra en forma de S cruzando las dos estras realizadas anteriormente, el aspecto final del preparado es similar al signo de dlares $. v. Finalmente cubrir el preparado con una laminilla cubreobjetos previamente flameada y enfriada. vi. Incubar la placa a 28 C y examinar a 24, 48 y 72 h. bajo el microscopio retirando la tapa, empleando objetivo de bajo (10x) y alto (40x) poder. c. Fisiologa i. Preparar una suspensin de la levadura problema correspondiente al tubo 2 de la escala de Mc. Farland. ii. Verter 5 ml de agua destilada estril en la cmara de incubacin.
iii. Tomar 100 ul de la suspensin e inocular la ampolla de API C Mdium, agitar y dispensar aproximadamente 197 ul en cada cpula de la galeria API 20 C AUX, hasta su llenado horizontal no exceder. iv. Colocar la galeria dentro de la cmara de incubacin y tapar. v. Incubar a temperatura ambiente 48 72 horas. vi. Registrar las lecturas de las 48 y 72 hrs. Respectivamente en la hoja de resultados. Resultados a. Con el perfil encontrado ubicar en el index de perfiles la identificacin de la levadura. Cuestionario fenotpicamente como diferenciara a C. albicans de C. dubliniensis? Fuentes de informacin Kern E, Martha y Blevins S., K. 1997. Medical Mycology: a self-instructional text. 2da. Edicin. F.A. Davis Company. Philadelphia. De Hoog GS, Guarro J, Gen J, Figueras MJ. 2000. Atlas of clinical fungi. 2nd Ed. Utrecht & Reus, Centraalbureau loor Schimmelcultures / Universitat Rovira i Virgili. Koneman, E y Roberts, G. 1987. Micologa. Practica de laboratorio. Traducido por Editorial Mdica Panamericana s.a. ed. editorial mdica panamericana s.a. Bs. As. ed. Tercera.
X. PRACTICA N 10 Examen e identificacin de cultivos de hongos demateaceos, Sporothrix schenckii Marco terico Las micosis subcutneas son aquellas que involucran la piel y el tejido subcutneo. Su diseminacin a otros rganos usualmente no ocurre. Sin embargo involucra grandes masas musculares pudiendo llegar incluso a los huesos. Los agentes productores de estas micosis generalmente habitan el suelo de regiones tropicales y subtropicales. El hombre acta como husped accidental, pudiendo infectarse ya sea por implantacin traumtica de los organismos o por introduccin de esporas viables dentro de la lesin. Las presentaciones clnicas de estas afecciones incluyen micetomas, cromomicosis, rinosporidiosis y esporotricosis. La cormomicosis es una enfermedad que afecta pies y manos. Los agentes causales de esta enfermedad son conocidos como hongos demateaceos, debido a que ellos tienen un pigmento marrn a negro debido a la presencia de melanina. Estos hongos son de crecimiento lento, geofilicos. Los agentes mas comunes son Cladosporium carrioni, Phialophora verrucosa, Fonsecae pedrosoi y raramente Fonsecae compacta. La esporotricosis es una micosis producida por Sporothrix schenckii. La lesin primaria es usualmente sobre algn dedo de la mano, es un ndulo subcutneo pequeo, mvil, que crece lentamente y se adhiere a la piel, tornndose rosado luego con necrosis, finalmente se ulcera. Competencias Describe a mohos demateaceos de importancia mdica y a Sporothrix schenckii. Materiales y equipos a. Cepas de demateaceos y Sporothrix schenckii. b. Asas de Khole en ngulo recto c. Azul de lactofenol d. Lminas portaobjetos Laminillas cubreobjetos Procedimiento a. De las cepas suministradas realizar exmenes directos con ALF. b. Visualizar y esquematizar estructuras propias de las diferentes especies de demateaceos y Sporothrix schenckii. c. Enfocar y esquematizar lminas patrones de microcultivos y cortes histolgicos. Resultados Presentar mediante esquemas los resultados de sus hallazgos. Cuestionario Cul es el gnero de demateceo mas frecuente encontrado en el laboratorio de micologa? Fuentes de informacin Kern E, Martha y Blevins S., K. 1997. Medical Mycology: a self-instructional text. 2da. Edicin. F.A. Davis Company. Philadelphia. De Hoog GS, Guarro J, Gen J, Figueras MJ. 2000. Atlas of clinical fungi. 2nd Ed. Utrecht & Reus, Centraalbureau loor Schimmelcultures / Universitat Rovira i Virgili.
XI. PRACTICA N 11 y 13 Examen y procesamiento de muestras clnicas (11) Presentacin de Resultados (13) Marco terico Las micosis tienen como agentes a mohos y levaduras, siendo las micosis ms frecuentes en el laboratorio de micologa las micosis superficiales y cutneas, se pone nfasis especial en el aislamiento e identificacin de estos agentes; para lograr este objetivo complementamos el diagnstico clnico con los hallazgos en el laboratorio de micologa. Competencias Describe agentes productores de micosis superficial y cutnea. Materiales y equipos a. Muestras clnicas (raspados de uas, piel, LCR, orina, etc.). b. A. Sabouraud, micobiotic. c. Aceite de oliva. d. Estufas 35 C. e. Asas micolgicas f. Tinta china g. KOH 20% h. Lminas portaobjetos i. Lminillas cubreobjetos Procedimiento De acuerdo a los conocimientos y destrezas adquiridos, aislar e identificar los agentes productores de micosis en las muestras clnicas asignadas. Resultados Aislamiento e identificacin de hongos a partir de muestras clnicas asignadas Presentacin de resultados, respaldados por los hallazgos documentados en el procesamiento de las muestras clnicas asignadas. Cuestionario Cules son los dermatofitos ms frecuentemente aislados? Para el aislamiento de dermatofitos y especies del gnero Malassezia, se emplean los mismos procedimientos? Fuentes de informacin Saldarriaga O., Yamille y Pineda G., F. 2001. Manual de micologa aplicada. 1ra. Edicin. Editorial Universidad de Antioquia. Medelln. Kern E, Martha y Blevins S., K. 1997. Medical Mycology: a self-instructional text. 2da. Edicin. F.A. Davis Company. Philadelphia. De Hoog GS, Guarro J, Gen J, Figueras MJ. Atlas of clinical fungi. 2nd Ed. Utrecht & Reus, Centraalbureau loor Schimmelcultures / Universitat Rovira i Virgili, 2000. Koneman, E y Roberts, G (1987) Micologa. Practica de laboratorio. Traducido por Editorial Mdica Panamericana s.a. ed. editorial mdica panamericana s.a. Bs. As. ed. Tercera. Emmons CW, Binford CH, Utz JP, Kwon-Chung KJ. Medical Mycology. Philadelphia, Lea & Febiger, 1977
XII. PRACTICA N 12 Seminarios: CALIDAD EN EL LABORATORIO DE MICOLOGIA Marco terico En el laboratorio de micologa se deben garantizar los procedimientos y materiales, empleados en el correcto y oportuno aislamiento e identificacin de hongos productores de micosis; por ello es pertinente manejar el control de calidad, inventario de almacn y mantenimiento preventivo de equipos por ello deben contarse con fichas de registro de los mismos. Competencias Propone fichas de registros de control de calidad de medios de cultivo, reactivos, almacn y mantenimiento de equipos de un laboratorio de micologa. Materiales y equipos Manuales de medios de cultivos de diferentes marcas (Oxoid, Merck, etc) Hojas de seguridad de materiales de reactivos Hojas oficio cuadriculadas Procedimiento Elaborar fichas de control de calidad para Agar Sabouraud, Agar Micobiotic, Hidrxido de potasio 20%, Azul de lactofenol. Elaborar fichas de registro de temperaturas de incubadoras. Elaborar fichas de mantenimiento preventivo de microscopios. Resultados Fichas de control de calidad de medios de cultivo, reactivos y mantenimiento preventivo de equipos. Cuestionario Son necesarios los registros de control de calidad en micologa? Con que frecuencia se realiza el mantenimiento preventivo de los microscopios? Fuentes de informacin Henry D. Isenberg. Clinical Microbiology Procedures Handbook, 2nd edition, ASM Press, 2004.
XIV. PRACTICA N 14 Examen de preparaciones microcpicas de H. capsulatum y P. brasiliensis 14.1 Marco terico La Histoplasmosis es una infeccin aguda, subaguda crnica producida por especies del gnero Histoplasma. Existen 3 formas clnicas, Histoplasmosis (H. clsica, Enfermedad de Darling o H. de pequeas formas) cuyo agente es Histoplasma capsulatum; H. africana (H. de grandes formas) cuyo agente es H. duboisii y la Linfangitis epizotica de caballos o mulos producida por H. farciminosum. Su hbitat es el suelo rico en excremento de aves y murcilagos. Su va de ingreso es la inhalatoria (infeccin asintomtica). H. duboisii, tambin tiene la misma va pero puede llegar incluso a piel y hueso. Su teleomorfo es un ascomiceto la Emmonsiella capsulata. La paracoccidioidomicosis es causada por Paracoccidioides brasiliensis, siendo una enfermedad endmica de Sudamrica. Hongo saprfito, cuyo habitat es el suelo. Las esporas son inhaladas, produciendo lesiones pulmonares similares a la tuberculosis y otras micosis. Presentaciones menos frecuentes son en la mucosa oral y encas, como consecuencia de infeccin traumas del chactado de vegetales contaminados. 14.2 Competencias 14.2.1 Describe a H. capsulatum y P. brasiliensis como productores de micosis sistmicas en nuestro pas. 14.3 Materiales y equipos 14.3.1 Montajes permanentes de cultivos y cortes histolgicos de H. capsulatum y P. brasiliensis. 14.4 Procedimiento 14.4.1 Enfocar y esquematizar lminas patrones de microcultivos y cortes histolgicos. 14.5 Resultados 14.5.1 Presentar mediante esquemas los resultados de sus hallazgos. 14.6 Cuestionario 14.6.1 Cules son los hongos dimrficos que se encuentran en nuestro pas? 14.6.2 Para la demostracin de H. capsulatum que coloraciones alternativas se pueden usar? 14.7 Fuentes de informacin 14.7.1 Kern E, Martha y Blevins S., K. 1997. Medical Mycology: a self-instructional text. 2da. Edicin. F.A. Davis Company. Philadelphia. 14.7.2 De Hoog GS, Guarro J, Gen J, Figueras MJ. 2000. Atlas of clinical fungi. 2nd Ed. Utrecht & Reus, Centraalbureau loor Schimmelcultures / Universitat Rovira i Virgili.
XV PRACTICA N 15 Examen de preparaciones de hongos productores de micosis oportunistas 15.1 Marco terico El avance tecnolgico de la medicina y el aumento de la sobrevida de los pacientes con enfermedades complejas e inmunodeficiencias, crean una gran y altamente poblacin susceptible, pacientes en riesgo incluyen pacientes con cncer (con y sin neutropenia), transplantes de rganos, SIDA, ciruga abdominal, alimentacin parenteral, infantes prematuros, quimioterapia, entre otros. Todo hongo que se encuentra en el ambiente es un potencial productor de micosis oportunistas, las condiciones del husped son cruciales para que se produzca este fenmeno. Hasta la dcada de los 80 las especies fngicas relacionas a micosis en humanos eran de aproximadamente 150 especies, hasta el ao 2000 se incrementa sustancialmente llegando casi a 400 especies, siendo una pequea fraccin de las aproximadamente 100,000 especies de hongos descritas, lo cual hace suponer que cualquier hongo es un potencial oportunista. 15.2 Competencias 15.2.1 Describe a hongos productores de micosis oportunistas. 15.3 Materiales y equipos 15.3.1 Montajes en fresco y permanentes de cultivos y cortes histolgicos de hongos. 15.4 Procedimiento 15.4.1 Enfocar y esquematizar lminas patrones de montajes, microcultivos y cortes histolgicos. 15.5 Resultados 15.5.1 Presentar mediante esquemas los resultados de sus hallazgos. 15.6 Cuestionario 15.6.1 Cules son los hongos productores de micosis oportunistas? 15.6.2 Para la demostracin de la cpsula de Cryptococcus neoformans que procedimiento se utiliza? 15.7 Fuentes de informacin 15.7.1 Kern E, Martha y Blevins S., K. 1997. Medical Mycology: a self-instructional text. 2da. Edicin. F.A. Davis Company. Philadelphia. 15.7.2 De Hoog GS, Guarro J, Gen J, Figueras MJ. 2000. Atlas of clinical fungi. 2nd Ed. Utrecht & Reus, Centraalbureau loor Schimmelcultures / Universitat Rovira i Virgili.
Mantenimiento de Cepario
Tcnica de cultivos cubiertos con aceite Obtener un pequeo pero activo crecimiento fngico sobre un corto inclinado de ASD. Vierta encima de esta aceite mineral pesado estril de buen grado (viscosidad 330 a 100 F, autoclavado a 15 lb/in 2 por 45 min. en un frasco de 250 ml medio lleno). Es absolutamente necesario que el aceite cubra no solamente la colonia del hongo sino tambin completamente la superficie del agar; de otra forma el agar expuesto puede actuar como mecha y en su momento causar que el medio se seque y la colonia muera. Los cultivos stock son almacenados parados a temperatura ambiente, y muchos de ellos pueden permanecer viables por muchos aos. Desafortunadamente, algunos de ellos son dificultosos de mantener vivos. Para transferir un hongo con cultivo en aceite, remover una pequea porcin de la colonia con una aguja de inoculacin larga o un palo aplicador estril. Escurrir el aceite a lo largo del interior del tubo y colocar el inculo sobre un agar fresco inclinado.
Tcnica de cultivo en agua destilada Raspar una torunda estril humedecida sobre la superficie de una colonia fngica con conidiacin/esporulacin activa. Lavar la torunda en un tubo tapa rosca conteniendo aproximadamente 4 ml de agua destilada estril. Ajstese la tapa y almacenar a temperatura ambiente. Adicionar agua destilada estril peridicamente si ocurre alguna evaporacin. Para preparar un subcultivo, agitar el cultivo en agua para suspender al hongo. Abrir el tubo, flamear la boca y con una pipeta pasteur estril transfiriendo aproximadamente 0.4 ml de la suspensin a un ASD inclinado. Incubar el ASD a 25- 30 C.
Tcnica de refrigeracin de cultivos Cultivar un hongo sobre APD en tubo de vidrio tapa rosca. Incubar a 25-30 C hasta que el organismo alcance la madurez y se encuentre produciendo activamente conidias o esporas. Cerrar la tapa ajustada y colocar los tubos dentro de un congelador. Mejores resultados son obtenidos a -70 C, pero a -20 C tambin puede ser usado exitosamente. Si los organismos son almacenados a -20 C, puede ser necesario subcultivarlos anualmente.
GLOSARIO
Abombado: De figura convexa. En micologa se refiere a una cualidad del sombrero cuya cspide aparece bruscamente hinchada en forma de mameln. Acrvulo: capa de hifas que da lugar a conidifros, densamente empaquetados, que constituyen una masa en forma de almohadilla. Son caractersticos de los Melanconiales. Acetbulo. Receptculo esporfero con forma de copa ancha. Acicular. Esporas o ascosporas con forma semejante a una aguja, generalmente rectas. Acre: spero y picante al gusto y al olfato. Acrgeno: Que crece o nace en el vrtice. Desarrollo de clulas conidiales en el pice del conidiforo. Aculeolada/o: Caracterstica del sombrero de una seta que tiene mechones o que se halla erizada de aguijones. Acuminado: Afilado, que se estrecha gradualmente para terminar en un punto. Adnato. Apotecio aplanado sin constriccin en la base. Aleuria: Talospora terminal o lateral con una faceta plana de implantacin a cuyo nivel se rompe el esporforo, para su liberacin, dejando un collarete membranoso en la base de la aleuria o aleuriospora (esporas pequeas de los dermatofitos). Aliceo. Referente al ajo. Alutceo. De color de cuero. Afiloforales: Setas que carecen de laminillas, como las clavarias. Todo el cuerpo se halla cubierto por el himenio. Agarical: Orden de hongos que comprende setas verdaderas, Las setas tpicas provistas de laminillas en la cara inferior del sombrero, la mayora son carnosas y se descomponen con facilidad. Anamorfo: estructuras caractersticas de la reproduccin asexuada de los hongos, utilizada generalmente para describir la forma imperfecta de los dermatofitos. Anastomosada. Parfisis ramificadas que presentan puntos de fusin unas con otras. Anastomosis: Dicese cuando dos lminas se unen o juntan. Anelascaceas (anelasceas, anelferas). Ascas con un anillo apical. Anlido: Tipo de clula conidigena que produce conidios blsticos de una forma basipeta; se alarga con la produccin de cada conidio, quedando restos o cicatrices en su superficie externa en forma de anillos. Aneloconidio: Conidio producido por un anlido. Anteridio: gametangio masculino, visible en el estado teleomorfo de algunos hongos. Antropofilo: Hongo, generalmente dermatofito, que se desarrolla exclusivamente en el hombre. Apice o apical: Extremo superior o punta de una cosa. Apculo: Punta corta, aguda y poco resistente. Apfisis: Dilatacin en el extremo de un filamento miceliano (esporangioforo), situada debajo del esporangio de los Zygomycetos. Apotecio: Ascocarpo abierto, fruto aplanado de los Discomycetes (Ascomycotino). Artroconidio (artrspora): Talospora resultante de la segmentacin de una hifa en elementos cilndricos. Asco: Estructura en forma de saco del estado perfecto de Ascomycotina, en cuyo interior se forman las esporas (ascosporas), generalmente en numero par. Ascocarpo: El fruto compuesto de hifas diferenciadas que contienen los ascos. Ascogonio: Clula u rgano femenino de Ascomycotina. Ascohimenial: Con ascas en el himenio. Ascomiceto (Ascomycotina): Hongo que se reproduce sexualmente mediante ascos. Ascosporas: Esporas sexuadas que se forman en el interior del asco, generalmente en numero par (la mitad del signo + y la otra mitad del signo -) Ascostroma: Ascocarpo estromtico, portador de ascos directamente en lculos, dentro del estroma. Aseptado. Sin paredes transversales. Asexual: Reproduccin en la que no intervienen la cariogamia ni la meiosis. Aspergilosis: Enfermedades del hombre y los animales ocasionadas por varias especies de Aspergillus. Asporgeno: No formador de esporas.
Asterospreas: Se refiere a las setas cuyas esporas estn siempre adornadas con puntas, crestas y redes en relieve. Aterciopelado: Calidad del terciopelo. De finura y suavidad parecidas al terciopelo. Cuando nos referimos al sombrero o al pie de una seta queremos significar que presenta un aspecto mate, suave y fino como el terciopelo Autocompatible: Autofertil; hace referencia al talo que se reproduce sexualmente sin la intervencin de otros. Autoincompatible: Autoesteril; se refiere al talo que no se puede reproducir sexualmente por si mismo, sin la intervencin de otro. Autolisis: Autodegradacin del micelio debida a un proceso enzimtico por agotamiento de los nutrientes, principalmente nitrogenados. Auttrofo: Microorganismos que crecen sin necesidad de utilizar compuestos orgnicos como fuente de energa. Auxonograma: Mtodo seguido para el estudio de las levaduras basado en las propiedades de asimilacin de compuestos hidrocarbonatos y nitrogenados. Balistospora: Espora proyectada activamente en la madurez, presente en Basidiomycotina. Bside: Clula habitualmente terminal, de los basidiomicetos en la cual se forman esporas externas de origen sexual. Basidiocarpo: Cuerpo fructfero que lleve basidios. Basidiospora: Esporas sexuadas que se originan en la parte externa de un basidio despus de la cariogamia y la meiosis, propias de Basidiomycotina. Baspeto: Que crece en direccin hacia la base. Bayo: Referido a las setas, de un color pardo rojizo. Biatorino. Apotecio blando y coloreado, lecideno. Bipolar: Genricamente que tiene dos polos. En micologa se dice de una especie cuyos micelios se clasifican en dos grupos tales que un micelio primario no puede producir un micelio secundario ms que reunindose con un micelio del otro grupo. Biseriado: Dispuesto en dos filas o ringleras. Bisoide: En el excpulo el tejido formado por hifas libres y flexuosamente entrelazadas. Bsporas. Dos esporas. Bitunicado: Asco que presenta una pared interna elstica que, en el momento de liberar las esporas, se estira ms all de la pared externa. Blstica: Conidiogenesis en la que comienza a formarse una blastopora que termina separndose de la clula madre mediante un tabique. Blastoconidio: Conidio de origen blstico. Blastospora: Espora formada por gemacin (sin blastoconidio). Bucle: Rizo en forma helicoidal. Bullado: Referido al talo, con arrugas o ampollas pequeas. Calccola: Cualidad de algunos hongos que solamente crecen y se desarrollan sobre terrenos calcreos. Campilidio: Estructura especial de reproduccin asexual encontrada en algunos grupos de hongos liquenizados; la capa conidigena est parcialmente expuesta, una parte de ella est cubierta por un lbulo de simetra bilateral. Capiliceo. Estructuras estriles filiformes, presentes entre las esporas en los cuerpos fructferos de muchos Myxomicetes y Gasteromycetes . Cariogamia: Fusin de dos ncleos. Carpforo. Aparato reproductor de las setas. Es el conjunto formado por el sombrero, el himenio y el pie, es decir la propia seta. Catenulado: Referido a los conidios. Conidios sin septos, con constricciones que los conectan como eslabones de una cadena. Cenoctico: Clulas o hifas u otras estructuras que contienen muchos ncleos y, en el caso de las hifas, muy pocos tabiques. Cerebriforme. Que tiene aspecto fsico de la sustancia del cerebro. Cereo: parecido a la cera de abeja. Clamidospora (clamidoconidio): Talospora de pared celular gruesa, intercalar o terminal, que almacena material nutritivo, actuando como rgano de resistencia.
Clava: Palo toscamente labrado que va aumentando de dimetro desde la empuadura hasta el extremo opuesto. Claviforme: En forma de clava. Clavada: Referido a las ascas. Ascas alargadas con la base pronunciadamente ms alargada y el pice ms redondeado. Cleistotecio: Ascocarpo cerrado sin ostolo, de forma esfrica, con pared constituida por una trama de micelio compacto, en cuyo interior existen ascos y ascosporas. Columela: Dilatacin, en forma de cpula situada en el interior de un esporangio, visible sobre todo al romperse la pared del esporangio. Conidio: Espora asexuada externa no mvil, que suele formarse en el pice o en el lado de una clula esporgena; en algunos casos, una clula hifal preexistente puede convertirse en un conidio, desprendindose al madurar. Conidioforo: Estructura especializada que soporta las clulas conidigenas o sobre la cual se desarrollan directamente las conidias. La forma de los conidiforos y conidios es muy importante en taxonoma. Continuo: Referido al talo. Talo compuesto de una nica mancha de forma y tamao variable. Coprfilo: Dcese de las especies de hongos que se desarrollan sobre el estircol. Copronos: Especie de hongo del orden de los agaricales, familia de las coprinceas, cuya caracterstica principal es que se convierten lquido o simplemente desaparece el sombrero en la madurez. Coremio: Grupo de hifas (o Esporoforos), generalmente verticales, a veces fusionadas, que en sus vrtices originan las esporas. Coriceo: Perteneciente o relativo al cuero. Corimbiforme: Nacimiento de grupos de ramas convexas o planas de las que pueden nacer ramas secundarias, que surgen de diferentes puntos de una rama principal. Cortcola: Talo que prefiere como sustrato las cortezas de troncos o ramas. Crateriforme. Que tiene forma de crter. Cuculiforme: Que tiene la forma de cpula. Cuerpo de Woronin: cuerpo esfrico denso en electrones, existente en las hifas de Ascomycotina y muchos Deuteromycotina; suelen encontrarse situados cerca de los tabiques. Dehiscente. Que tiende a abrirse por s solo. Delicuescente: Cualidad de los copronos, los cuales, se convierten en lquido en la madurez. Dematiceo: Hifas o esporas de color oscuro o fuliginoso (del latn, fuligio, holln). Dermatofito: Hongos queratinfilos de los gneros Microsporurm, Trichophyton y Epidermophyton, agentes de las tias o dermatofitosis. Dermatofitosis: Enfermedades producidas por los dermatofitos (tia). Dermatomicosis: Enfermedades que afectan a los tejidos queratinizados, ocasionadas por hongos queratinfilos. Deuteromiceto: Hongo en el que se desconoce su forma sexuada, reproducindose solo asexuadamente (anamorfo). Se les denomina tambin hongos imperfectos. Se incluyen dentro de la subdivisin Deuteromycotina. Diahifa: Hifas especializadas que se forman en los hifforos de las Gomphillaceas, productoras de clulas conidiales que sirven como propgulos. Dicaritico: Clulas que tienen dos ncleos haploides, en general, genticamente diferenciados. Dicotmica: Hifa que se divide en dos ramas aproximadamente iguales. Dictiospora (dictioconidio): Espora con tabiques verticales y horizontales (espora muriforme). Dimrfico: Hongos que morfolgicamente muestran dos formas diferentes (levaduriforme y filamentosa). Propio de algunos agentes patgenos de micosis profundas. Diploide: Ncleo que contiene un nmero doble de cromosomas (2 n). Disgnico: Se refiere a variedades atpicas de crecimiento lento y atpico de algunas especies. Disperso: Talo compuesto de varias manchas aparentemente aisladas que pueden o no estar conectadas por un protalo hialino. Ectotrix: Que se desarrolla por fuera del pelo, entre la corteza y la epidermcula. Endotrix: Que se desarrolla en el cuerpo del pelo. Elipsoide: Esporas ms anchas en el centro y delgadas hacia los pices, con forma de elipse. Epifitos: Se denominan as a los hongos que viven sobre otras plantas.
Epitecio: Parte superior del himenio, generalmente formado por el pice de las parfisis, pude ser incoloro o pigmentado por la presencia de cristales y puede o no contener clulas del ficobionte. Equinulado (del latn echinum y el griego ekhinos = erizo de mar): En castellano, equin (o) se usa como prefijo en voces compuestas. Muy utilizado por los ingleses (echinulate) para las formaciones espinosas de algunos elementos fngicos, como los macroconidios de Microsporum. Erumpentes: Apotecios inmersos en el talo en un estadio joven, finalmente cuando maduros rompen el talo, emergiendo y exponiendo el himenio; pueden perder totalmente los restos del talo que lo cubran o mantenerlo en forma de lbulos, generalmente triangulares que cubren parcialmente el disco. Esclerocio: Estructura esfrica, compactada, formada por hifas, sin esporas, que puede permanecer durante largos periodos de tiempo en condiciones ambientales desfavorables conservndose viable. Especie: Unidad de clasificacin; grupo de individuos estrechamente relacionados parecidos unos a otros en ciertos caracteres heredados; se designa mediante una nomenclatura binomial formada por su nombre genrico y el epteto especifico. Esponuloso: Cubierto de diminutas espinas. Espora: Es la menor unidad de propagacin de los hongos, frecuentemente multicelular, de origen sexuado o asexuado. Esporada: Amasijo de esporas recogido de un carpforo. Se utiliza para definir, exactamente, el color de las esporas e identificar algunos tipos de setas. Para obtener una esporada, basta con colocar el sombrero de una seta, a la que hayamos separado el pie al ras, sobre un papel blanco con las laminillas hacia abajo y esperar 24 horas. Esporangio: Fructificacin asexuada de los Zygomycetes, con pared peridial homognea, anhista, y numerosas esporas internas. Esporangioforo: Hifa que soporta los esporangios. Esporangiolo: Esporangio pequeo, que contiene pocas esporas. Esporangiospora: Espora formada dentro de un esporangio. Esporodoquio: Estroma en forma de almohadilla, recubierto de conidioforos. Esporforo: Sinnimo de conidioforo. Esporulacin. Accin y efecto de esporular: producir esporas. Esterigma: Pedculo o la ltima ramificacin del esporforo que sostiene un esporangio, un conidio a una basiodiospora. Estipe: Pie de una seta. Estolon: Hifas que crecen horizontalmente sobre la superficie del medio, originando con frecuencia rizoides que penetran en el agar y esporangiforos que ascienden hacia el aire. Estroma: Masa o matriz de filamentos vegetativos que rodea a un fruto o que lleva una fructificacin. Eucariote: Clulas que tienen ncleo provisto de membrana nuclear, grnulos o filamentos de cromatina y un nucleolo. Eumiceto: Hongo verdadero. Excpulo: Pseudotejido externo en forma de anillo o copa que sirve de soporte al himenio. Excoriada: Cualidad de la piel cuando se halla despellejada Facultativo: Microorganismo parsito no obligado; puede vivir como saprobio. Falciforme: Que tiene forma de hoz. Fase imperfecta: Fase asexuada (ordinariamente conidial) de un hongo. Fialide: Esporforo en forma de frasco con un cuello y abierto en forma de copa en su extremidad, que origina conidios blsticos de manera baspeta, sin aumento detectable de su longitud. Ficobionte / fotobionte: Alga que participa de la simbiosis liqunica. Ficomicetos: Hongos que se clasifican en la clase Phycomycetes, que inclua las actuales subdivisiones Zigomycotina y Mastigomycotina. Trmino en desuso. Ficomicosis: Termino que actualmente se ha sustituido por zigomicosis. Filiforme: Esporas con forma de hilo, muy delgadas y generalmente curvadas. Filosfera: Referente a todos los organismos que habitan sobre una hoja. Fimcola: Dcese de los hongos que se reproducen sobre el estircol. Fisin: Forma de divisin transversal de una clula de un hongo, generalmente de las levaduras. Flagelo: Estructura en forma de ltigo, liso o barbulado, que sirve para la propulsin de una clula mvil.
Flocoso: Crecimiento de aspecto algodonoso de las hifas de algunos hongos sobre la superficie del medio de cultivo. Folicola: Organismos que viven sobre la epidermis de hojas vivas. Forma perfecta: Estado sexuado o teleomorfo de los hongos. Forfito: Husped sobre el que se desarrollan los lquenes. Fuliginoso: denegrido, oscurecido. Fungus: Hongos en latn. Funculo: Cordn pequeo delgado, por el cual los peridiolos de algunas Nidulariales estn unidos al basidiocarpo que los ha formado. Furfurcea: Descamacin fina, como salvado. Fusiforme: Que tiene forma de huso (en francs, fuseaux; en ingles, spindle-shaped). Gametangio: Clula que contiene gametos o acta como un gameto. Gameto: Una clula o ncleo sexual que puede fusionarse con otra clula o ncleo sexual compatible durante la reproduccin. Gemacin: Forma de multiplicacin de las levaduras, en la cual la clula hija se desarrolla a partir de un brote de la clula madre, forma de reproduccin asexuada. Gnero: Categora taxonmica que comprende una o varias especies; el nombre genrico es el primero del binomio. Gefilo: Hongo que vive normalmente en el suelo. Gimnocarpico: Del griego gymnos, descubierto: fruto expuesto. Gimnotecio: Ascocarpo sin ostiolo parecido a un cleistotecio, en el cual las hifas que forman su pared son laxas y los ascos estn situados en su parte central de forma irregular. Es caracterstico de hongos pertenecientes a las familias Gymnoascaceae y Arthrodermataceae. Glabra: Lisa, lampia. Glauco: De color verde claro. Glucano: Polmero de la glucosa que forma parte de la pared de las clulas de levaduras. Glutinoso: Pegajoso. Granular: Se refiere a las colonias de algunos hongos, cuya superficie esta constituida por un polvo de partculas gruesas. Gtula. Gotita de aceite. Hbitat: Territorio en el que una especie o un grupo de especies encuentran un complejo uniforme de condiciones de vida a las que estn adaptadas. Halofilo: Microorganismos que tolera altas concentraciones de sales. Haplofase: La parte del ciclo vital de un hongo, en el cual las clulas son haploide. Haploide: Clulas cuyos ncleos presentan una sola dotacin cromosomita, o numero n de cromosomas. Haploides: Del griego haplooid, simple, ncleo con un numero n de cromosomas, por reduccin cromosmica o meiosis. Haustorio: Organo de absorcin que se origina en una hifa de un parasito y penetra en una celular del husped; con frecuencia, este rgano se forma en parsitos obligados, pero tambin es producido por algunos parsitos facultativos. Helicicospora: Espora enrollada o helicoidal. Hemiangiocrpico: Apotecios que se encuentran abiertos antes de la madurez. Hemisporas: Cadeneta de talosporas resultante de la divisin de una hifa llamada proconidia, limitada en su base por una estrangulacin con pared celular espesada. Heterocaritico: Clula con dos o mas ncleos genticamente diferentes. Heterotlico: Se refiere a las especies que aisladamente son estriles sexualmente, siendo necesario para lograr la reproduccin sexuada que se fusionen dos talos de distinto signo, en los cuales primero tiene lugar la plasmogamia y posteriormente la cariogamia. Heteotrfico: Que requiere compuestos orgnicos como fuentes de energa. Hialino: Sin color, transparente. Hifa: Un filamento, tabicado o continuo (sin tabiques), que constituye una unidad estructural del micelio vegetativo de los hongos. Hifa del griego hyphe, tejido: Rama del micelio filamentoso. Hifa ascogena: Hifa especializada, que da lugar a uno o ms ascos. Hifas peridiales: Hifas gruesas, diferenciadas, que rodean un ascocarpo. Hifforos: Estructuras especializadas de multiplicacin asexual, presentes en las Gomphillaceas. Generalmente provistas de un soporte que sostiene a las diahifas productoras de conidias.
Hifomiceto: Hongos pertenecientes a los Deuteromycetos filamentosos que originan clulas conidigenas libres. Hifopodium: Un apresorio de forma y tamao constante. Higrfano: Que se hace translcido con la humedad. Himenio: Capa de micelio frtil en donde se originan los ascos, basides o conidiforos. Himenio del griego hymen, membrana: Superficie esporgena de Ascomycotina y Basidiomycotina. Hipotecio: Capa del apotecio localizada debajo del himenio, generalmente entre ste y el excpulo basal. Hspido: cubierto de pelo spero, hirsuto, erizado Holoblstico: Conidiognesis blstica en la que todas las capas de la pared celular forman parte de la pared del bastoconidio. Holocrpico: Trmino que se aplica a un organismo cuyo talo se convierte por entero en una o mas estructuras reproductivas. Holomorfo: Se refiere a la totalidad de un hongo (incluyendo su estado anamorfo y teleomorfo). Homotlico: Cultivo puro o monocelular, capaz de formar fructificacin sexuada sin previo apareamiento. Homotalico: Se refiere a los hongos para cuya reproduccin sexuada se requiere solamente un talo, siendo, por lo tanto, autocompatible. Imbricado: Se aplica a las escamas del sombrero cuando se presentan sobrepuestas como las tejas de un tejado. Infundibuliforme: En forma de embudo. Intercalar: Situado entre dos celulas de una hifa. Isidro: Propgulo de multiplicacin asexual, con forma definida y estructura similar a la del talo. Isolocular: Esporas con clulas aproximadamente del mismo tamao. Lamelas: Lminas perpendiculares y paralelas. Lanoso: Textura que recuerda la de la lana. Lenticulares: Que tienen forma semejante a la semilla de la lenteja. Leucospreo: De esporas blancas. Levadura: Hongo unicelular, redondeado u ovoide, que se reproduce por gemacion o escisin. Su anamorfo se incluye en Deuteromycotina y el teleomorfo en Basidiomycotina y Ascomycotina. Levaduriforme: En forma de levadura. Lgncola: Se aplica a los hongos que se desarrollan sobre la madera. Lvido: De un color gris nuboso. Plido. Lculo: Cavidad excavada en un estroma. Macroceflico: Esporas que tienen una clula distal de mayor tamao que las restantes. Macroconidio (macroaleuriospora): El mayor de dos tipos de conidios en los hongos que dan origen a esporas grandes y pequeas; generalmente es multicelular. Macromicetos: Hongos superiores, el ascocarpo de los cuales es de tamao macroscopico (setas). Mcula: Mancha. Mameln: Pequea eminencia carnosa semejante a un pezn que muestran los sombreros de distintas especies de hongos. Mamelonado: que posee mameln. Manano: Polmero de la manosa, abundante en la pared de las levaduras. Meiosis: (del griego, reduccion), reduccin de la cromatina de 2n a n durante la divisin celular. Mesfilo: Microorganismo cuya temperatura optima de crecimiento esta entre 20-35C. Mesoperidio: Lo que est en medio del peridio. Mtula: La clula situada debajo de las fialides en algunos Aspergillus y Penicillium. Micelio: Conjunto de las hifas que constituyen en talo del hongo. Micelio esteril: Un orden de hongos imperfectos (Deuteromycetos) que no originan conidios o esporas. Micobionte. Hongo que participa de la simbiosis liqunica. Micofagia: Comer hongos o setas. Micologa: Ciencia que estudia los hongos. Micorriza: Conjunto de un hongo y las raicillas de una planta que viven en simbiosis ayudndose mutuamente. Micosis: Enfermedad producida por hongos
Microconidio: La menor de dos formas diferentes de conidios producidos por una misma especie de hongo. Microides: Trmino empleado por Sabouraud para la invasin de los pelos por pequeas esporas ectotrix (propias de T. mentagrophytes). Micromicetos: Hongos cuyos aparatos de fructificacin son de tamao microscpico. Myxomicetes: Cierto orden de hongos. Organismo inferior sin clorofila Mohos: Hongos filamentosos de aspecto algodonoso, que en general se desarrollan como saprobios. Moniliceo: Se refiere a hongos que originan conidiforos aislados y son hialinos o ligeramente coloreados. Moniliasis: Trmino en desuso con que se designaban hace algunos aos a las candidosis. Moniliforme: Hifa con zonas dilatadas a intervalos regulares. Mucilaginosa: Que contiene mucilago (subtancia viscosa ms o menos transparente). Muriforme: Esporas con varios septos transversales y longitudinales que las dividen en numerosas clulas, dndole el aspecto de una pared de ladrillos. Musccola: Que tiene como sustrato a musgos. Naviforme. Con forma de nabo. Napiforme: Que tiene forma de nabo. Noduloso. Provisto de ndulos pequeos Nomen dubium: Del latn, nombre de un taxn que solamente es conocido por el material tipo, pero este no se encuentra, est desaparecido o no sirve para la identificacin del taxn. Obclavado: Forma de maza a la inversa; la porcion distal es mas pequea. Oblongo: Esporas alargadas, con forma intermedia entre fusiforme y bacilar, con la regin media levemente convexa y los pices redondeados. Obtuso: romo, sin punta. Refirindose al sombrero, cuando carecen de cspide evidente y se presentan ligeramente convexos. Ocratoxinas: Micotoxinas de A. ochraceous y P.viridicatum. Ocresporea: color ocre o pardo rojizo de las esporas. Oleaginosas. Aceitosas. Oliva: Del color del verde de las aceitunas. Onfaloide. Parecido al hombligo. Onicomicosis: Enfermedades de las uas por hongos. Oogonia: Clula (gametangio) que contiene uno o mas vulos; propio de los Oomycetes. Oosfera: Gameto femenino grande, desnudo, no mvil. Oospora: Espora de pared gruesa, que se desarrolla a partir de una oosfera, previa fecundacin o partenognesis. Oprculo: Abertura de un fruto o clula frtil mediante una tapa. Orbicular: Circular, redondo. Ostolo: Abertura de un fruto en forma de boca. Ovoide: Esporas en forma de huevo, generalmente un poco alargadas. Papirceo: De consistencia y delgadez del papel. Parfisis: Estructuras estriles, unidas basalmente, existentes en un himenio. Parsito: Dcese del organismo que vive a expensas de otro y de cuya sustancia se nutre. Paraplectenquimtico: Excpulo con hifas densamente entrelazadas formando clulas isodiamtricas que le dan el aspecto de un parnquima verdadero. Pectnea: Hifa en forma de peine. Pedicelo: Columna carnosa que sostiene el sombrerillo de las seyas. Pednculo. Pedicelo. Penicilado: En forma de pincel. Peridio Pared celular de un cuerpo fructfero. Perstoma: Dispositivo destinado a regular la salida de las esporas conforme a la humedad del ambiente. Peritecio: Fructificacin perfecta de los Ascomycotina en forma de frasco, con un poro en la parte superior, ostiolo verdadero y una pared propia, en cuyo interior los ascos nacen de una capa himenial. Pezizal: hongos con apotecios. Orden de dichos hongos. Picnidio: Cuerpo fructfero, generalmente en forma de frasco o botella, en cuyo interior se forman esporas asexuadas.
Picnidiospora: Conidio formado en un picnidio. Pigmentado: Esporas oscuras o con pigmentacin, comunes en el orden Dothideales. Pigmento: materia colorante que poseen los hongos y es el que les da color. Piriforme: Se dice de lo que tiene forma de pera Plectnquima: Conglomerado de hifas vegetativas semejante a un tejido. Pleomrfico: Mutante estril o con escasa fructificacin de los dermatofitos. Pleurgeno: Que nace lateralmente. Del griego pleura, costado. Plisado: Fruncido con pliegues. Poro: En general abertura hacia el exterior. Refirindose a los hongos orificios de los tubos cuyo color es distinto de los propios tubos. Poro germinativo: Orificio superficial, invisible a simple vista. Primordio: Es el origen de una seta. Se presenta como la cabeza de un alfiler generalmente blanca. Proconidio: Hifas vegetativas terminales o laterales, que se forman en cadenetas de talosporas por tabicamiento en sentido baspeto. Protalo: Regin que rodea al talo, formada solamente por hifas, a veces transparente o ms clara, generalmente separando manchas de un mismo talo o talos distintos. Pubescente: vellosidad, peludo. Pseudomicelio (seudomicelio, seudohifa): Filamentos observados en las levaduras del gnero Candida, que se originan por el crecimiento de blastosporas alargadas, que permanecen unidas, diferencindose del micelio por estar el filamento estrechado en los puntos de unin de unas clulas con otras. Quitina: Polisacrido constituido por unidades de N-acetilglucosamina, que forma parte de la pared celular de los hongos. Radicular: se denominan as el conjunto de cordones miclicos que se aprecian a simple vista. Reniforme: De forma de rin. Reproduccin: Produccin de nuevos individuos que poseen todas las caractersticas tpicas de la especie. Reproduccin sexual: Reproduccin en la que interviene la fusin nuclear y la meiosis. Rizoide: Hifas vegetativas semejantes a raicillas. Rodospreo: esporas rojas o rojizas. Rugoso: Que tiene arrugas, lleno de asperezas Salvajes: Se refiere a las cepas de hongos aisladas directamente de la naturaleza o de lesiones. Saprobio (saprofito): Seres hetertrofos que se nutren de materia orgnica muerta. Saxcola: Que prefiere como sustrato a piedras o rocas. Septo: Tabique que separa las clulas de las hifas de los hongos o de algunas conidias o esporas. Ssil: Conidio que se une por su base directamente a la pared de la hifa. Seta: Estructura elevada sobre el talo generalmente delgada formada por haces de hifas aglutinadas. Seudomicelio: (Ver Pseudomicelio). Seudoparnquima: Que simula el tejido de las plantas superiores. Sifonadas: Hifas carentes de tabique (ver cenoctico). Simpodial: Caracterizado por crecimiento continuo, despus que la hifa principal haya formado la espora Terminal, se originan una sucesin de pices, cada uno de los cuales se forma por debajo y a los lados del pice anterior. Sinema: Conjunto de hifas o conidiforos erectos, mas o menos unidos, que forman estructuras alargadas, portadoras de esporas en el pice (sinnimo de coremio). Sinuado: Que tiene senos. Sorus: Grupo de frutos o de esporas. Suberosos: Se dice de los polporos que tienen la consistencia del corcho o incluso de la madera. Talo: Cuerpo vegetativo de un hongo. Taloconidio: Conidio que esta constituido por conidiognesis tlica (artroconidios, aleuroconidios). Talofita: Planta cuya fase somtica esta desprovista de tallo, raz u hojas, y que se propoga por medio de esporas. Taxn: Unidad taxonmica. Taxonoma: Ciencia de la clasificacin. Teleomorfo: Fase sexual de un hongo (forma perfecta).
Teliospora o teleutospora: Espora de invierno (de reposo) de Uredinales o Ustilaginales, que al germinar, producen bsides. Termfilo: Hongo en el que la temperatura optima de crecimiento se encuentra entre 35-45C. Tia: Afeccin cutnea ocasionada por dermatofitos (sinnimo de dermatofitosis). Tomentoso: vello suave de algunas plantas. Se utiliza de una forma grosera como sinnimo de aterciopelado. Trichophyton y Epidermophyton: Patgenos, agentes de las tias o dermatofitosis. Turbinado: que tiene la cualidad de un trompo, es decir, que se engruesa desde la base hacia arriba Umblicado: Con figura de ombligo. Uncinado: del latn uncus, gancho, doblado en forma de gancho. Ungulado: Que tiene forma de casco de caballo Unitunicado: Asco cuyas paredes interna y externa son ms o menos rgidos y no se separan durante la expulsin de las esporas. Velo: Bajo esta denominacin hacemos referencia a todos los tejidos que en los orgenes de la seta abrigan la formacin del himenio, ya se trate de la volva, el anillo o de la cortina. Verticilado: Ramificacin de hifas dispuestas alrededor de un eje y a un mismo nivel. Vescula: Formacin dilatada de algunos conidiforos (Aspergillus). Volva: Velo tenue que suele envolver a los hongos distinta del sombrero Yema: Primordio celular que se forma a partir de una levadura, constituyendo el inicio de una blastognesis y cuyo final es un blastoconidio. Zigomicosis: Micosis debida a hongos de la divisin Zygomicotina. Zigospora: Espora sexual que se origina despus de la fusin de dos gametangios en los Zygomicotina. Zigosporangio: Esporangio que contiene una zigospora y se desarrolla despus de la fusin de dos gametangios. Zigote: Clula diploide resultante de la fusin de dos clulas haploides. Zofilo: Hongo patgeno para los animales. Zoosporangio: Esporangio que contiene zoosporas. Zoosporas: Espora mvil formada en un zoosporangio.