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    Extraccion de Caseina

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    ANiita GAbiiela Arriiaga
    La práctica determinó el punto isoeléctrico de la caseína en la leche mediante espectrofotometría UV-Vis. Se precipitó la caseína de la leche usando ácido acético y se prepararon muestras a diferentes pH. El análisis arrojó un punto isoeléctrico de 4.67, con un error del 1.52% en comparación con el valor teórico de 4.6.

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    Extraccion de Caseina

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    ANiita GAbiiela Arriiaga
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    La práctica determinó el punto isoeléctrico de la caseína en la leche mediante espectrofotometría UV-Vis. Se precipitó la caseína de la leche usando ácido acético y se prepararon muestras a diferentes pH. El análisis arrojó un punto isoeléctrico de 4.67, con un error del 1.52% en comparación con el valor teórico de 4.6.

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    caseina

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    La práctica determinó el punto isoeléctrico de la caseína en la leche mediante espectrofotometría UV-Vis. Se precipitó la caseína de la leche usando ácido acético y se prepararon muestras a diferentes pH. El análisis arrojó un punto isoeléctrico de 4.67, con un error del 1.52% en comparación con el valor teórico de 4.6.

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    Extraccion de Caseina

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    ANiita GAbiiela Arriiaga
    La práctica determinó el punto isoeléctrico de la caseína en la leche mediante espectrofotometría UV-Vis. Se precipitó la caseína de la leche usando ácido acético y se prepararon muestras a diferentes pH. El análisis arrojó un punto isoeléctrico de 4.67, con un error del 1.52% en comparación con el valor teórico de 4.6.

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    PRÁCTICA No.

    2 EXTRACCIÓN DE CASEÍNA Y DETERMINACIÓN DE PI


    PRACTICE No. 2 CASEIN EXTRACTION AND DETERMINATION OF PI
    Bioquímica
    Bogotá, Colombia
    24/10/2015

    Resumen

    En diversos compuestos conformados por macromoléculas se presentan fenómenos como la


    precipitación, a partir de la cual se da lugar a diferentes productos. Este es el caso de la caseína,
    la cual es la proteína que se encuentra en mayor cantidad en la leche y debido a su punto
    isoeléctrico presenta la característica de precipitación. A partir de la precipitación de la caseína
    por acción del ácido acético, su tratamiento químico y la preparación de 10 muestras con
    diferentes ajustes de pH, se pudo medir su absorbancia mediante el método de espectrofotometría
    UV/Vis y construir la curva de titulación, para luego determinar el punto isoeléctrico, el cual fue
    de 4,67, presentando un porcentaje de error de 1,52, teniendo como referencia el valor de 4,6.

    Palabras clave: Espectrofotometría UV/Vis, Caseína, Punto isoeléctrico.

    Abstract

    In various compounds formed of macromolecules such as precipitation phenomena occur, from


    which it gives rise to different products. This is the case of casein, which is the protein found in
    greater amounts in the milk and due to its isoelectric point has the characteristic of precipitation.
    From the precipitation of casein by the action of acetic acid, the chemical treatment and
    preparation of 10 samples with different pH adjustments, absorbance could be measured by the
    method of UV / Vis spectrophotometry and build the titration curve for then determine the
    isoelectric point, which was 4.67, showing an error rate of 1.52, with reference to the value of
    4.6.
    Keys words: Spectrophotometry UV/Vis, Casein, Isoelectric point.

    1. Introducción número distinto de grupos ionizables que se


    neutralizan a diferente pH. La caseína es una
    de las fosfoproteínas de la leche que se
    En las proteínas, como en los aminoácidos y
    precipita a pH de 4.6 (Segal & Ortega,
    en cualquier molécula anfotérica, las cargas
    2005).
    pueden ser neutralizadas de manera tal que
    la carga neta sea igual a cero. Este proceso En la leche, la caseína se encuentra incluida
    se realiza al modificar el pH del medio en el en un complejo salino en estado micelar, que
    que se encuentren estas moléculas. Si en una se comporta como sustancia homogénea. La
    mezcla de proteína se alcanza el punto composición de la caseína isoeléctrica varía
    isoeléctrico de una de ellas, ésta se precipita, de una especie a otra. En particular, la
    mientras que el resto quedan disueltas. La caseína humana es más rica en azufre, en
    razón es que la composición química de cistina y en glúcidos que la caseína de vaca
    cada proteína es característica y presenta un (Lacad Godina, 1985). En la presente
    práctica se extrae la caseína mediante la 1 0,5mL 9,5mL -
    acidificación con ácido acético y se 2 1,0mL 9,0mL -
    determina su punto isoeléctrico, es decir, el 3 1,5mL 8,5mL -
    pH en el cual los cuerpos químicos 4 2,0mL 8,0mL -
    5 3,0mL 7,0mL -
    disociados presentan una igualdad de cargas
    6 4,0mL 6,0mL -
    negativas y positivas. 7 6,0mL 4,0mL -
    8 8,0mL 2,0mL -
    2. Materiales y métodos
    9 6,0mL - 4,0mL
    En un vaso de precipitado de 50mL se 10 8,0mL - 2,0mL
    Tabla 1. Proporciones de soluciones de análisis
    adicionaron 10mL de leche, se agregó 1mL
    de ácido acético para precipitar la caseína, 3. Resultados
    posteriormente se inicia a filtrar. Luego se
    procede a adicionar 20mL de etanol, El método que se usó en la práctica para la
    agitando durante 5 minutos. Al descartar el obtención de la caseína fue mediante
    etanol, se agregaron 20mL de éter etílico, acidificación, con ácido acético, a una
    llevando a agitación. Al filtrar nuevamente muestra de leche. A partir de esto, se obtuvo
    la caseína, se pesaron 50mg de muestra, se un precipitado blanco, esto debido a que la
    adicionó agua destilada y KOH, disolviendo solubilidad de la caseína disminuye a un
    totalmente la caseína. Dicha solución se valor de pH 4,6 y el pH de la leche se
    transfirió cuantitativamente a un balón encuentra a un valor de 6.6; al adicionar
    aforado con ácido acético, para preparar una acido las cargas de la proteína se
    serie de soluciones con distintas relaciones neutralizaran y su desnaturalización produce
    en volúmenes de reactivos. la precipitación tal como se observó en la
    práctica (Gil Hernández, 2010).
    En la Tabla 1. se observan las cantidades
    necesarias para tener en cuenta en el análisis Lo anterior se logró evidenciar al realizar la
    de precipitado y de obtención del punto adición de proporciones de ácido de ácido y
    isoeléctrico. Dado a que cada condición va a acetato de sodio al tubo 7, dando un pH de
    permitir la medición en el espectrofotómetro valor cercano a 4.6, siendo de 4,67. Este
    UV/Vis. Dando como resultado datos que dato se observa en la Gráfica 1, en donde se
    generen una gráfica para la posterior aprecia que es el punto más alto y se infiere
    determinación del pI. que es el punto isoeléctrico. Este dato se
    compara con el teórico, para así calcular el
    porcentaje de error, confirmando si el
    método fue acertado y que tan alejado esta la
    parte experimental de los datos reportados
    en la literatura.

    Acetato Ác. Ác. %Error = | |*100%


    Tubo de sodio Acético Acético
    0,1M 0,1M 0,01M %Error = | |*100%
    %Error = 1,52%

    Tubo A pH
    Blanco 0,000
    1 0,027 3,24
    2 0,033 3,68
    3 0,017 3,78
    4 0,000 3,98
    5 0,001 4,20
    6 0,000 4,48
    7 0,034 4,67
    8 0,004 5,10
    9 0,000 5,50
    10 -0,001 6,16
    Tabla 2. Datos para la construcción de la gráfica de A vs pH

    Punto isoeléctrico experimental de la caseína


    0,040
    0,035 pI apróx.
    4,67
    0,030
    0,025
    Absorbancia

    0,020
    0,015
    0,010
    0,005
    0,000
    -0,005
    0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00
    pH
    Gráfico 1. Determinación de punto isoeléctrico experimental de la caseína presente en leche entera.

    Al seguir observando la Gráfica 1. se


    observan unos picos muy bajos en los
    puntos de pH entre 3,98 y 4,48. Esto se
    puede deber a una inadecuada preparación
    de la muestra en los tubos 4, 5 y 6, en donde
    tal vez no se contó con las proporciones
    correctas de los reactivos, afectando la Gil Hernández, Á. (2010). Tratado de
    muestra y de esta forma llevando a una Nutrición: Composición y calidad
    incorrecta lectura de la absorbancia. nutritiva de los alimentos. Madrid:
    Editorial Médica Panamericana, D.L.
    La absorbancia se ve afectada de manera
    directa por la turbidez de las muestras, de Lacad Godina, A. (1985). Ciencia de la
    esta manera, si una muestra presentaba alta leche. Principios de técnica lechera.
    turbidez la lectura saldría incorrecta. De Barcelona: Editorial Reverté, S.A.
    igual forma, pueden interferir diversos Segal, C., & Ortega, G. (2005). Manual de
    compuestos en la muestra que absorben en el práctivas biología molecular de la
    UV/Vis. célula I. México: UNAM.

    Por otro lado, la adición de KOH a la Vian Otuño, Á. (2006). Introducción a la


    caseína que se encontraba sólida produjo un química industrial. Barcelona:
    efecto de solubilización, ya que al ser un Editorial Reverté.
    compuesto básico, tiene la propiedad de
    regenerar el medio hasta alcanzar las
    condiciones iniciales de la muestra.

    4. Conclusiones

    Debido a las propiedades de precipitación


    que presenta la caseína, es posible realizar
    una medición de su punto isoeléctrico a
    partir de una desestabilización por
    acidificación.

    El pI experimental, obtenido a partir de la


    Gráfica 1. fue de 4,67. Mediante la
    comparación con el pI reportado en la
    literatura, se obtuvo un % de error de 1,52%.

    Se infiere que la práctica se realiza con un


    98,49% de exactitud, esto se debe a errores
    comprendidos en el procedimiento de
    extracción de la caseína.

    5. Bibliografía

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