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    Selección Micro Muta Do 2009

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    Este documento describe dos métodos para seleccionar microbios mutados: 1) Selección al azar de sobrevivientes después de mutagénesis. 2) Búsqueda dirigida examinando la producción de antibióticos u otras propiedades, como el aislamiento selectivo de mutantes resistentes a antibióticos o deficientes en nutrientes.

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    Este documento describe dos métodos para seleccionar microbios mutados: 1) Selección al azar de sobrevivientes después de mutagénesis. 2) Búsqueda dirigida examinando la producción de antibióticos u otras propiedades, como el aislamiento selectivo de mutantes resistentes a antibióticos o deficientes en nutrientes.

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    Seleccion Micro Muta Do 2009

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    SELECCIÓN DE MICROBIOS MUTADOS

    Implica la búsqueda del mutante.


    Existen básicamente dos formas de búsqueda: 1)Búsqueda al
    azar o SELECCIONANDO AL AZAR de los sobrevivientes de una
    población mutagenizada la cepa mutante, y 2)Búsqueda
    dirigida EXAMINANDO LA PRODUCCIÓN DE ANTIBIÓTICO U OTRA
    PROPIEDAD en un proceso de fermentación que recuerde de
    cerca el proceso a gran escala:

    1.BÚSQUEDA AL AZAR:
    Implica que después del tratamiento con el mutágeno y
    de la expresión de la mutaciones inducidas se
    inspecciona la habilidad de producir el producto de
    interés por selección al azar entre los
    sobrevivientes en fermentaciones modelo que están
    cuidadosamente adaptadas al medio y a los parámetros
    de fermentación del procedimiento a gran escala, a
    fin de maximizar la similitud para que las cepas sean
    adecuadas para la producción industrial. Las mejores
    cepas del ciclo de mutación son repetidamente mutadas
    y seleccionadas. Los mutantes con altos rendimientos
    son mucho más raros que aquellos con un ligero
    aumento. Normalmente deben ser probados de varios
    cientos a varios miles de aislados por ciclo de
    mutación.

    2.BÚSQUEDA DIRIGIDA:
    2.1. AISLAMIENTO SELECTIVO DE MUTANTES:

    AISLAMIENTO DE MUTANTES RESISTENTES:


    Se hace a través de un medio selectivo que
    contiene la sustancia tóxica que impide el
    crecimiento de la cepa silvestre. La sustancia
    tóxica puede ser un antibiótico o un
    antimetabolito (presentan similitud estructural
    con los metabolitos, pueden causar
    retroinhibición pero no substituyen a los
    metabolitos normales, causan la muerte de las
    células normales pero no a las mutantes que
    pueden formar un exceso de metabolitos).

    AISLAMIENTO DE AUXÓTROFOS:
    Se hace sembrando la población mutagenizada
    sobre un medio completo con agar, en el que los
    mutantes bioquímicamente deficientes pueden
    también crecer. Se puede realizar por diferentes
    técnicas:

    a.TÉCNICA DE LEDERBERG (réplica en placa): Los


    clones son transferidos a medio mínimo en el
    que las colonias auxótrofas no pueden crecer,
    para que después estos mutantes sean
    recuperados de las placas maestras y sean
    caracterizados su defecto.

    b.TÉCNICA DE ENRRIQUECIMIENTO POR FILTRACIÓN:


    De una suspensión de esporas fúngicas, después
    de que han sido expuestos al agente mutágeno,
    una porción de ellas no afectadas por la
    mutación originan microcolonias fúngicas
    protótrofas en medio mínimo; las cuales son
    separadas por filtración; dejando en el
    filtrado las esporas de los auxotrofos que son
    incapaces de crecer en el medio mínimo por
    efecto de la mutación. El filtrado con las
    esporas de los auxotrofos es entonces sembrado
    en un medio enrriquecido para comprobación de
    las características de auxotrofia de las
    colonias que resultan.

    c.TÉCNICA DE SELECCIÓN POR PENICILINA: sobre


    todo para organismos unicelulares en el cual
    basándose en que la penicilina mata a las
    células en crecimiento pero no a las células
    que no crecen , las células que crecen son
    matadas selectivamente por tratamiento con el
    antibiótico , enrriqueciendo de esta forma a
    los auxotrofos que no pueden crecer en medio
    mínimo.
    Similar a la técnica de selección por
    penicilina se emplean en lugar de la
    penicilina otras sustancias dependiendo del
    microorganismo a aislar para aislar mutantes.

    2.2. OTROS PROCEDIMIENTOS: incluyen:

     La incorporación de reactivos o colorantes


    indicadores en la placa para ver la actividad
    de enzimas de la cepa mutante.
     El método del taco de agar en el que cilindros
    con colonias aisladas se transfieren a placas
    de ensayo después de una incubación en una
    cámara húmeda a partir del cual el diámetro de
    las zonas de inhibición que se producen sirve
    como medida de la producción de antibiótico de
    cada cepa (esta producción de antibiótico que
    es sobre medio sólido guarda una correlación
    muy ligera con la que se lleva a cabo en
    fermentación sumergida por lo que es
    problema).

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