BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR

GUA DE PRCTICA

Trujillo
2017-10

1 Actividades de Prctica P.C.

 BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

GUA DE PRCTICA DE
BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR
CICLO ACADMICO 2017-10

Trujillo Per
2017

Gua de Prcticas de Biologa Celular y Molecular 2017-10

2 ed. Trujillo. 50p.

Ninguna parte o la totalidad de esta publicacin, puede ser

reproducida, almacenada transmitida por ningn medio, ya
sea electrnico, mecnico, ptico, de grabacin o por
fotocopia, sin autorizacin escrita del autor.

Derechos reservados 2017

Segunda edicin: Marzo 2017

Impresa en Trujillo

2 Actividades
Impreso en de Prctica
Trujillo P.C.
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NORMAS PARA LA REALIZACIN DE LAS PRCTICAS DE BIOLOGA

NORMAS

1. La asistencia a la prctica es obligatoria. La tolerancia de entrada al laboratorio es de 10

minutos, no se permitir la entrada al laboratorio una vez iniciada la prctica.
2. Preste atencin a las explicaciones de los docentes antes de comenzar el trabajo de laborato-
rio. La mayora de las veces, sus comentarios son complementarios a la informacin que se
incluye en la gua de prcticas. Tome las notas que crea necesarias y, si lo considera oportuno,
realice dibujos que le ayuden a comprender mejor lo explicado.
3. Lea cuidadosamente la gua de prcticas antes de realizar las experiencias y trate de
comprender cada una de ellas. Si tiene alguna duda, pregunte a los docentes.
4. Asegrese de llevar la bata de laboratorio. Utilcela durante todo el desarrollo de la prctica, es
imprescindible que se lleve siempre abrochada. La bata protege sus ropas de las salpicaduras
de los colorantes y reactivos que se utilizan en el laboratorio. No se debe usar la bata fuera del
laboratorio, por ejemplo en cafeteras o bibliotecas. Ya que si se ha contaminado con productos
qumicos o con agentes biolgicos, puede contaminar otras zonas limpias. Ningn estudiante
sin guardapolvo ser admitido en el laboratorio.
5. Asegrese de llevar al laboratorio los materiales solicitados. Todos los miembros de la mesa de
trabajo deben hacerse responsables de llevar el material que se les solicita para realizar la
prctica. Por eso, antes de iniciar una prctica compruebe que dispone de todo el material
necesario, en caso de no contar con ellos, deber conseguirlos en ese momento.
6. Debe rotular e identificar debidamente todos los tubos de ensayo, las lminas o los materiales
que utilice en el laboratorio.
7. Siga las instrucciones de cada prctica y elabore su informe correspondiente segn las
indicaciones de su docente.
8. Los informes de la prctica slo lo presentan los estudiantes que hayan asistido y permanecido
en la prctica.
9. Debe guardar sus informes de laboratorio con el fin de usarlos como material de estudio para el
examen parcial.
10. Trabaje cerca de la mesa de trabajo, adoptando una buena postura y estando fsicamente
cmodo.
11. Mantenga la mesa de trabajo limpia y libre de objetos personales (ropa, folders, bolsos,
telfonos mviles, etc.). Coloque dichos objetos en las zonas indicadas por los docentes.
12. No fume ni ingiera alimentos en el laboratorio. No se aproxime pinzas, lpices, papeles u otros
utensilios a la boca. No beba agua contenida en material del laboratorio.
13. El material de desecho debe disponerse en recipientes adecuados para su posterior desconta-
minacin y limpieza. Es muy importante que coloque cada tipo de material en su contenedor
(material biolgico, lquidos, vidrio, papel etc.). No debe tirar las puntas de las pipetas o agujas
en el contenedor sino verterlos en los bidones preparados para tal fin.
14. Tanto en caso de accidente personal (cortes, quemaduras, etc.), como en el caso de rotura de
algn tubo de ensayo o frasco de vidrio de los reactivos, cada de ste al suelo o sobre la mesa
de trabajo, debe comunicrselo inmediatamente a los docentes responsables de las prcticas.
15. Al finalizar la prctica, cada mesa de trabajo debe quedar limpia, lave el material de laboratorio,
limpie su mesa de trabajo y coloque los bancos en su lugar. Compruebe que quedan cerrados
los caos de agua, apagados los mecheros y, por ltimo, antes de abandonar el laboratorio, es
aconsejable que se lave, cuidadosamente, las manos con jabn.
3 Actividades de Prctica P.C.
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PROCEDIMIENTOS DE SEGURIDAD
a) Responsabilidades
Antes de la prctica: Consigue los materiales que requieres para la prctica y llevarlos
oportunamente el da de la prctica.
Durante la prctica: Aprende el manejo cuidadoso de las muestras y los reactivos que
puede ser irritables.
Despus de la prctica: establecer los resultados, conclusiones y discusin de la misma y
elaborar el informe correspondiente.
b) Equipos de proteccin personal: bata de laboratorio
c) Cuadro de deteccin de riesgos.

Riesgo Causa
Cortaduras. Frascos de vidrio y tubos de ensayo
Irritacin de mucosas Alcohol 96, cido ntrico
Quemaduras. Mecheros
Golpes. Con objetos, ocasionados por falta de precaucin o indisciplina.
Alergias Muestras colectadas o reactivos

d) Acciones preventivas
Usar el equipo de proteccin personal.
Trabajar siguiendo cuidadosamente el protocolo de la prctica.
Cumplir con las normas establecidas en el reglamento del laboratorio.
Avisar al responsable de la prctica de cualquier accidente por insignificante que parezca.
e) Acciones de contencin
Toda persona que sufra algn accidente cuando se encuentre realizando alguna prctica dentro
de laboratorio, ser remitida al Departamento de Bienestar Universitario. Es importante
considerar que se solicitar informacin acerca de las vacunas recibidas por el afectado, ya que
en los casos de cortaduras es indispensable haber recibido la vacuna antitetnica.
Por otra parte, se emiten las siguientes recomendaciones para las situaciones que no requieran
atencin mdica
Accidente por cortaduras: Detener el sangrado y hacer una curacin.
Irritacin de mucosas: Lavar con agua corriente la zona afectada.
Quemaduras Valorar la gravedad y evaluar si es necesario trasladar a un hospital.
Golpes: Valorar la gravedad y evaluar si es necesario trasladar o no al Departamento de
Bienestar Universitario.
Alergias: Trasladar inmediatamente a un centro mdico.
f) Cuadro de disposicin de desechos.

Deshechos o residuos Disposicin

Vidrios Depsitos para desecho de vidrio
Papeles contaminados con muestras no biolgico -
infecciosas o productos de la limpieza de la mesas Depsito para basura comn
de trabajo.
Lquido de muestras no biolgico-infeccioso Drenaje comn
Material o muestra catalogada como biolgico
Depsito para biolgico-infeccioso
infeccioso.

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IDENTIFICACIN DE BIOMOLCULAS:
1 AGUA, SALES MINERALES Y CARBOHIDRATOS

1. OBJETIVOS

1. Demostrar el porcentaje de agua en una muestra biolgica.

2. Demostrar a travs del anlisis del suero que en la composicin qumica de la materia viva
participan las sales minerales disueltas en agua.
3. Determinar en forma cualitativa la presencia de azcares reductores y almidn, a travs de
reacciones qumicas.

2. INTRODUCCIN

La vida se desarrolla siempre en medio acuoso, lo que queda, al eliminarla, es un residuo

formado por sales minerales. El papel primordial del agua en el metabolismo de los seres vivos
se debe a sus propiedades fsicas y qumicas, derivadas de la estructura molecular. Las sales
minerales son molculas inorgnicas de fcil ionizacin en presencia de agua y que en los seres
vivos aparecen tanto precipitadas, disueltas como cristales o unidas a otras biomolculas. Las
sales minerales tienen funcin estructural, de regulacin del pH, de la presin osmtica y en las
reacciones bioqumicas.
Los carbohidratos son compuestos de gran importancia para los seres vivos, los cuales son
muy abundantes en la naturaleza. Las unidades bsicas de los carbohidratos son los
monosacridos, los cuales no hidrolizables en unidades ms pequeas. El principal
monosacrido es la glucosa, una aldohexosa, que es el combustible principal para la mayora de
los organismos. Los oligosacridos contienen de dos a diez unidades de monosacridos unidas
covalentemente. Por su parte, los polisacridos estn constituidos por gran nmero de unidades
de monosacridos unidos covalentemente, los cuales pueden alcanzar grandes pesos
moleculares. Los polisacridos desempean dos funciones biolgicas principales: almacenar
energa metablica y aportar elementos estructurales a la clula. La glucosa acta en el
organismo como combustible energtico de uso inmediato, mientras polisacridos y grasas son
biomolculas de reserva que deben ser catabolizadas antes de su aprovechamiento como
fuentes de energa. Los carbohidratos estn ampliamente en organismos vegetales y animales
con funciones metablicas y estructurales.
Es posible detectar por medio de pruebas bioqumicas colorimtricas, la presencia de estos
compuestos, ya sea en muestras obtenidas de tejidos animales o vegetales.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Biolgico Laboratorio Reactivos y soluciones

Hgado, corazn de pollo Pipetas de 2, 5 y 10 ml Soluc. de glucosa al 1%
Hueso de pollo Tubos de ensayos de 10 ml (20) Soluc. de sacarosa al 1%
Jugo de fruta * Vaso de precipitado de 500 ml (2) Suspens. de almidn al 1%
Orina de diabtico * Perita (propipeta) Reactivo de Fehling
Azufre en polvo * Mechero y pinzas Solucin de lugol
Balanza de triple brazo Alcohol etlico
Placas petri Hidrxido de sodio al 10%
Gradillas Papel indicador de pH
Con (*) material a traer por el estudiante el da del TP.

5 Actividades de Prctica P.C.

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4. PROCEDIMIENTO

1. Determinacin del porcentaje de agua en la materia viva

El agua entra a formar parte de la materia viva en una proporcin importante (alrededor del
70%). Si calentamos porciones de rganos de animales o plantas, el agua que forma parte
de los mismos se evapora, quedando como residuo la denominada materia seca.
Por diferencia de pesos, antes y despus de la evaporacin, podremos calcular la cantidad
de agua contenida en la muestra de materia viva utilizada

Protocolo para la determinacin del porcentaje de agua en muestras biolgicas.

1. Pesar en la balanza de triple brazo, las placas Petri por separado, anotando el peso de
cada uno de ellos (rotlelas con un plumn indeleble, para evitar errores).
2. Cortar en pequeas porciones el hgado, luego colquelos sobre las Placas Petri. Pese
las placas con la muestra y anote el dato en la tabla de resultados.
3. Repite el mismo procedimiento con los restantes rganos (corazn y hueso)
4. Colocar las 3 muestras en la estufa de desecacin, por el tiempo de 1 hora.
5. Sacar las 3 placas de la estufa y pselas nuevamente. Anote los datos en la tabla de
resultados.
6. Calcule, el contenido en agua de la siguiente manera:
Peso del material fresco : X
Peso del material seco : Y
Cantidad de agua perdida en la desecacin: X Y = Z
% de agua de la muestra: Z/X x 100

Peso total Peso de Peso de Prdida de peso

Muestra Peso de % de
(placa Petri muestra muestra (agua eliminada)
biolgica paca Petri agua
+ muestra) hmeda (X) seca (Y) (X-Y)

% de agua % de agua
Muestra % de agua % de agua % de agua
Promedio Esperado (segn
biolgica Mesa 1 Mesa 2 Mesa 3
observado bibliografa)

2. Propiedades fsicas del agua: tensin superficial.

Los lquidos tienen un volumen fijo. Sin embargo, su forma vara (cambia el rea de la
superficie que los envuelve): se adaptan al recipiente (ocupando la zona ms baja por
gravedad) dejando una superficie libre (no totalmente plana) o adoptan formas especiales:
gotas, pompas y burbujas. Las fuerzas superficiales (cohesin: lquido-lquido, adhesin:
lquido-slido) son responsables de muchos fenmenos con inters biolgico, basadas en
los conceptos de tensin superficial y capilaridad.

Protocolo para la determinacin de la tensin superficial.

Tensin superficial
1. Agregar agua hasta la mitad de un vaso de precipitado (beaker) de 500 ml.
2. Dejar caer azufre en polvo (o pimienta) sobre el vaso, hasta que la superficie quede
cubierta. Se podr ver como el polvo o trozos quedan flotando en la superficie del agua.
3. Luego, agregar unas gotas de alcohol (bilis o jabn lquido). Observe que en al agua, el
azufre en polvo empezar a caer (o la pimienta parecer huir despavorida, ya sea
hundindose en el agua, o corriendo a los borde del vaso.

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3. Reconocimiento de la presencia de una sal mineral en una muestra.

La leche contiene una protena llamada Casena que cuando precipita (por
desnaturalizacin) forma lo que se conoce como cuajo; este procedimiento se usa para la
produccin, por ejemplo del yogur. La parte lquida que queda al precipitar la protena se
conoce como suero.
Protocolo para la determinacin de la tensin superficial.
Prepare una gradilla con tres tubos de ensayo, segn se muestra en el cuadro siguiente:

Reactivo Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo5 Tubo6

Suero sanguneo 2 mL -- -- -- -- --
Suero de leche -- 2 mL -- -- -- 2 mL
Orina -- -- 2 mL -- -- --
Agua destilada (control -) -- -- -- 2 mL -- --
Agua de cao (control +) -- -- -- -- 2 mL --
Nitrato de plata 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL --
Oxalato de amonio -- -- -- -- -- 1 mL

Si en un material de origen biolgico existen cloruros (Cl-), al aadirle una solucin de nitrato
de plata, el in cloro va a reaccionar con los iones plata (Ag+) para formar un precipitado
insoluble en agua (cloruro de plata) y de color blanco lechoso.
AgNO3 + NaCl AgCl + NaNO3
Si en un material de origen biolgico existen iones calcio (Ca 2+), al entrar en contacto con
una solucin de oxalato amnico, dicho catin va a reaccionar formando oxalato clcico. El
oxalato clcico es un compuesto blanco cristalino que es insoluble en agua.
Ca2+ + 2(COONH4) CaC2O4

4. Reconocimiento de carbohidratos
Los carbohidratos comprenden azcares simples (monosacridos), sus polmeros (oligo y
polisacridos) y pueden formar parte de otras molculas orgnicas (ARN, ADN, entre otros.).
Distribuidos ampliamente en la naturaleza, los carbohidratos representan, en trminos de masa,
la clase ms abundante de biomolculas orgnicas sobre la Tierra. Desempean varios papeles
cruciales en los organismos vivos. Cuando un organismo ingiere y metaboliza estos compuestos,
los tomos se reacomodan formando compuestos sencillos reutilizables.
a. Test para la deteccin de azcares simples (monosacridos)
Una de las propiedades ms destacadas de los monosacridos en general (glucosa, fructosa,
etc.) y de algunos disacridos (sacarosa, lactosa, etc.) es el poder reductor que les confiere
el grupo funcional aldehdo o cetona de sus molculas. Esta propiedad de los azcares se
pone de manifiesto frente a sales de cobre II (Cu++). El reactivo de Fehling es utilizado para
detectar la presencia de azcares con capacidad reductora, tiene dos soluciones separadas
(A y B), que se mezclan en partes iguales en el momento de utilizarlo. La mezcla de las
soluciones A y B de Fehling es de color azul intenso (se les brindar el rx. de Fehling ya
preparado). El resultado positivo de la presencia de un azcar reductor es la formacin de un
precipitado rojo ladrillo de xido de cobre (Cu2O). La reaccin que ocurre es de tipo xido-
reduccin, en la cual el grupo funcional aldehdo o cetona del azcar reductor se oxida a
cido y el Cu++ se reduce a Cu+.
b. Test para la deteccin de polisacrido-almidn

7 Actividades de Prctica P.C.

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El almidn es un polisacrido de reserva caracterstico de los vegetales. Los polisacridos

son las biomolculas ms abundantes de reserva de energa en la Tierra. En las clulas
vegetales el almidn se encuentra como una mezcla de amilopectina (80-90 %) y amilosa
(10-20%). Esta ltima se colorea de azul violeta en presencia de una solucin de iodo
llamado reactivo de lugol, debido a una reaccin fsica (no qumica) de adsorcin. La
molcula de iodo (I2), se introduce en la estructura helicoidal de la molcula de almidn
dando como resultado el color violceo.
En el cuadro siguiente se describen las actividades a desarrollar para la determinacin en
muestras biolgicas de hidratos de carbono.

Protocolo para la determinacin de carbohidratos.

Materiales 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Sol. de glucosa (ml) 3 3 - - - - - - - - -
Sol. de sacarosa (ml) - - 3 3 - - - - - - -
Sol. de almidn (ml) - - - - 3 3 - - - 3 3
Jugo de fruta (ml) - - - - - - 3 3 - - -
Orina de diabtico (ml) - - - - - - - - 3 - -
Rx. de Fehling (ml) 2 - 2 - 2 - 2 - 2 - -
Sol. de Lugol (gotas) - 4 - 4 - 4 - 4 - 4 4
Alcohol etlico - - - - - - - - - 3
Hidrxido de sodio (ml) - - - - - - - - - - 3
Calentar a ebullicin x - x - x x x - x - -
Qu ocurri?, registren lo
observado (+/-)

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IDENTIFICACIN DE BIOMOLCULAS:
2 LPIDOS Y PROTENAS

1. OBJETIVOS
1. Determinar en forma cualitativa la presencia de lpidos y protenas en materiales biolgicos,
a travs de reacciones qumicas.
2. Adquirir destreza en el manejo y cuidado del material de laboratorio.

2. INTRODUCCIN

Los lpidos son grupos heterogneos de compuestos que poseen una consistencia grasosa o
aceitosa, siendo ms o menos insolubles en agua y saludables en disolventes orgnicos (como
por ejemplo: ter, cloroformo, benceno, etc.).Entre los lpidos de importancia biolgicas se
encuentran las grasa neutras, fosfolpidos, esteroides, carotinoides y ceras. Estas molculas son
combustibles biolgicos importantes, sirven de componentes estructurales de las membranas
celulares y algunas son importantes.
Los lpidos ms abundantes en los seres vivos son las grasas neutras. Ellos producen ms doble
de energa por gramo, que los carbohidratos por lo que son una forma econmica de almacenar
reservas alimenticias
Las protenas son uno de los principales componentes de todas nuestras clulas. Los aminoci-
dos son los ladrillos de construccin de la protenas. Los aminocidos se agrupan de acuerdo
con su comportamiento qumico. La sntesis de las protenas ocurren mediante la unin entre si
de las cadenas de aminocidos. Los distintos aminocidos imparten diferentes comporta-
mientos qumicos en la estructura de las protenas. Debido a la presencia de diferentes
aminocidos en las uniones peptdicas las protenas reaccionan con una variedad de
compuestos formando productos coloreados. Existen reacciones de coloracin que son
especficas para aminocidos de esas protenas y son importantes tanto para la deteccin como
para el dopaje de aminocidos y protenas. Existen tambin reacciones generales porque
sirven para caracterizar grupos comunes a todas las protenas como grupos amino o uniones
peptdicas (ninhidrina y biuret)
Entre las funciones dinmicas de las protenas se encuentran el transporte de sustancias, el
control metablico, la contraccin, la comunicacin y la catlisis de transformaciones qumicas.
En cuanto a sus funciones estructurales, las protenas proporcionan la matriz para los tejidos
seo y conjuntivo que dan igualmente forma al organismo.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Biolgico Laboratorio Reactivos y soluciones

Leche * Pipetas de 1 y 5 ml Alcohol etlico
Aceite * Tubos de ensayos de 10 ml (20) Hidrxido de sodio al 10%
Colapiz en solucin* Vaso de precipitado de 500 ml Solucin de Sudan III
Huevo * (sol. albmina) Perita (propipeta) Cloroformo
Mechero Benceno
Pinzas Sulfato de Cobre
Varilla de vidrio Acido ntrico
Gradillas Acetato de plomo
Con (*) material a traer por el estudiante el da del TP.

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4. PROCEDIMIENTO

1. Reconocimiento de lpidos
A diferencia de los carbohidratos y protenas, los lpidos tienen diversas estructuras y
funciones, pero sus caractersticas de solubilidad son semejantes entre ellos. Se definen
operacionalmente como compuestos orgnicos insolubles en agua o ligeramente solubles, que
se encuentran en los sistemas biolgicos. Los lpidos son hidrofbicos (no polares) y/o
anfipticos (que tienen componentes polares y no polares).
Test para la deteccin de lpidos
Sudn III es un colorante soluble en grasa que permite identificar la presencia de lpidos.
Pertenece al grupo de colorantes indiferentes, que son aquellos que no tienen afinidad por
estructuras cidas o bsicas. El colorante (rojo) es insoluble en el agua y tie del mismo color
aquellas sustancias que tienen un poder de disolucin superior al del lquido empleado para
preparar la solucin colorante.
En el siguiente cuadro se describen las actividades a desarrollar para la determinacin en
muestras biolgicas de lpidos del tipo cidos grasos.

Protocolo para la determinacin de lpidos

Materiales 1 2 3 4 5 6 7
Agua destilada 5 - 5 - - - 2
Aceite (ml) - 5 - 5 5 5 2
Sudan III (gotas) 10 10 10 - - - -
Alcohol - - - 5 - - 3
Hidrxido de sodio - - - - - - 3
Cloroformo - - - - 5 - -
Benceno - - - - - 5 -
Agitar los tubos y dejar en reposo durante 5 x x x x x x x
Calentar hasta la ebullicin - - - - - - x
Qu ocurri?, registren lo observado (+/-)

2. Reconocimiento de aminocidos y protenas

Las protenas son componentes fundamentales de toda clula y, por ende, de todo ser vivo.
Son polmeros de aminocidos y cumplen funciones sin las cuales no habra vida en la forma
conocida. Las protenas tiene variadas funciones tales como: estructurales, enzimticas, de
transporte, hormonales entre otras.
a. Test para la deteccin de protenas
Una de las reacciones ms utilizadas para la identificacin de pptidos y protenas es la de
Biuret. Esta reaccin indica la presencia de enlaces peptdicos por lo cual no sirve para
identificar aminocidos". Todas las protenas reaccionan en medio alcalino cuando se
agrega sulfato cprico (CuSO4) y da colores que varan del violeta al rosado. El color
depende del grado de hidrlisis alcanzado. Los pptidos ms pequeos y los aminocidos
libres no dan color. Por lo tanto, este ensayo se utiliza para seguir la hidrlisis de una
protena.
b. Test para la deteccin de aminocidos
La reaccin xantoproteica permite descubrir la presencia de aminocidos cclicos
(Fenilalanina, tirosina y triptfano). La presencia de estos aminocidos en la molcula
proteica, dan lugar a la reaccin. Los anillos aromticos de los aminocidos se someten a
nitracin que lleva a la formacin de los derivados nitro de las protenas, coloreados de
10 Actividades de Prctica P.C.
 BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

amarillo.

Los aminocidos azufrados, se identifican al calentar una solucin proteica que contiene
aminocidos azufrados, con un lcali, de ellos se desprende azufre en forma de sulfuro de
hidrgeno, que se detecta en la reaccin con el acetato de plomo.
b. Desnaturalizacin de Protenas: Precipitacin por formacin de sales
Las sales de metales pesados precipitan las protenas porque el ion del metal pesado muy
probablemente se combina con la forma aninica de la protena. La protena en el lado
alcalino de su punto isoelctrico existe como in negativo y as al combinarse con el in del
metal o catin, formar proteinatos de por ejemplo proteinato de mercurio, proteinato de
plomo, proteinato de plata, etc. En cambio los reactivos alcaloidales precipitan las
protenas al combinarse el radical acdico del reactivo alcaloidal con la forma catinica de
la protena que predomina en l lado cido del punto isoelctrico. Se forma entonces
precipitados que podramos llamar por ejemplo tanato de protena, fosfomolibdato de
protena, etc.

Protocolo para el reconocimiento de aminocidos y protenas

Materiales 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Solucin de albmina (ml) 5 - - 5 5 - 5 5 5
Colpiz en solucin (ml) - 5 - - - 5 - - -
Leche (ml) - - 5 - - - - - -
Hidrxido de sodio (ml) 4 4 4 3 2 2 - - -
Sulfato de cobre (gotas) 10 10 10 - - - 10 - -
Nitrato de Plata - - - - - - - 10 -
Calentar hasta la ebullicin - - - x - - x - -
Acido ntrico - - - 2 - - - - -
Acetato de plomo (gotas) - - - - 10 10 - - 10
Qu ocurri?, registren lo observado (+/-)

Precauciones de seguridad personal: En esta prctica se maneja agua muy caliente con
temperaturas prximas a 100C. Si se trabaja de manera descuidada o imprudente se pueden
producir quemaduras serias.

Resuelva:
1. Qu importancia tienen para el organismo los cidos grasas insaturados ?
2. Los glicerofosfolpidos son componentes fundamentales de las membranas biolgicas.
Realiza un diagrama de su estructura (coloca el nombre a las diferentes partes)
3. Qu es un aminocido esencial?. Qu es valor biolgico de una protena ?
4. Qu es una estructura proteica ?. Defina los 4 tipos de estructura proteica.
5. Qu molculas participan en el plegamiento de una protena ?
6. Qu es desnaturalizacin ?. Mencione 4 agentes desnaturalizantes de las protenas

11 Actividades de Prctica P.C.

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3 ACTIVIDAD ENZIMTICA
1 DE AMILASA

1. OBJETIVOS

1. Interpreta la accin enzimtica sobre sustratos especficos

2. Identifica el efecto de la temperatura sobre la velocidad de la reaccin
3. Determina el efecto del pH sobre la cintica enzimtica.
4. determina el efecto de activadores e inhibidores sobre la cintica enzimtica.

2. INTRODUCCIN

Las enzimas son catalizadores biolgicos de naturaleza proteica. Esto significa que son
protenas cuya funcin es acelerar las reacciones bioqumicas. Aunque se trata de protenas
muchas requieren, para ser activas, un componente no proteico conocido como coenzima o
grupo prosttico, segn se encuentre dbil o firmemente asociado a la matriz proteica. La
estructura de este componente no proteico va a variar desde un ion (Ca 2+, Mg2+, Mn2+, y otros)
hasta molculas complejas como NAD+ NADP+ y FAD. En estos casos la actividad enzimtica va
a depender de la presencia simultnea de una porcin proteica (apoenzima) y una porcin no
proteica (coenzima) y el conjunto activo apoenzima ms coenzima, se conoce como holoenzima.
Una consecuencia del hecho de que las reacciones bioqumicas sean catalizadas por enzimas es
la especificidad de stas hacia el substrato: una enzima cataliza la transformacin de un solo tipo
de molcula o de unos tipos diferentes de molculas estructuralmente muy relacionadas, la
especificidad representa una ventaja para la clula.
Hay diferentes factores que afectan la actividad de las enzimas. Los factores ms importantes
son: concentracin de enzima, concentracin de ligandos (sustratos, productos, inhibidores y
activadores), pH, fuerza inica y temperatura.
La actividad de las enzimas estn fuertemente afectadas por la temperatura. Hay dos factores
determinantes, el efecto de la temperatura en las constantes de velocidad de la reaccin y el efecto
de la temperatura en la estabilidad de la enzima. Como es de esperar, un aumento de la
temperatura aumenta la velocidad de la reaccin; sin embargo, sobre cierta temperatura hay
inactivacin de la enzima que lleva a una disminucin en la velocidad. La zona de temperatura en la
cual se observa mayor actividad se conoce como temperatura ptima.
Las reacciones enzimticas se ven notablemente afectada por el pH del medio. En general, son
slo activas en un rango limitado de ste, observndose en la mayora de los casos una zona de
pH ptimo y una disminucin de la actividad a ambos lados del pH ptimo. El efecto del pH en la
actividad enzimtica se debe fundamentalmente a cambios en el estado de ionizacin de los
componentes del sistema; esto puede darse en la enzima libre, en el complejo E-S o en el sustrato.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Biolgico Laboratorio Reactivos y soluciones

Amilasa salival * Pipetas de 2, 5 y 10 mL Sulfato de Cobre
Tubos de ensayos de 10 ml (20) Hidrxido de sodio al 10%
Vaso de precipitado de 200 ml Almidn
Perita (propipeta) Soluc. con pH 3,8, 6,8 y 9
Mechero y pinzas Lugol
Con (*) material a traer por el estudiante el da del TP. Solucin de sacarosa

12 Actividades de Prctica P.C.

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4. PROCEDIMIENTO
1. Actividad Enzimtica de la -amilasa salival
La enzima -amilasa, presente en la saliva, inicia la degradacin del almidn, la principal
fuente de carbohidratos de la dieta humana. Esta enzima hidroliza al azar los enlaces
(14) que unen residuos de glucosa en el almidn, a excepcin de los enlaces cercanos a
los extremos y a los puntos de ramificacin de las cadenas. Por la accin de esta enzima
activada por iones cloruro, en la boca la longitud de la cadena del almidn se reduce de
varios miles a unas ocho unidades de glucosa. La alta concentracin de protones del
estmago inactiva la -amilasa salival. La digestin del almidn contina en el intestino
delgado por la accin de la -amilasa pancretica, como producto se forma una mezcla del
disacrido maltosa, el trisacrido maltotriosa y oligosacridos conocidos como dextrinas que
poseen ramificaciones (16).
El almidn y dextrinas complejas al ser tratados con una solucin de yodo dan un complejo
de coloracin azul, mientras que las dextrinas ms simples, la maltotriosa y maltosa no dan
una reaccin positiva. As, la accin de la -amilasa sobre polisacridos puede ser seguida
midiendo la decoloracin del complejo azul hasta alcanzar el punto acrmico (solucin
incolora).
La maltosa y otros carbohidratos reductores producidos en la reaccin pueden ser
detectados por el test de Fehling. Este mtodo es cualitativo, consiste en una solucin
alcalina de Cu2+ que se encuentra formando un complejo con citrato. El in cprico es
reducido a Cu1+ por compuestos reductores con formacin de hidrxido cuproso amarillo o
de xido cuproso rojo. El cambio de coloracin o la formacin de un precipitado rojo-ladrillo
(Cu2O) indica la presencia de un compuesto reductor.

Protocolos para demostrar la actividad enzimtica de la amilasa salival

Obtencin de la amilasa salival. Para obtener la solucin de enzima. Primero, debe enjuagarse la
boca varias veces con agua y proceda a recoger en un vaso de precipitado de 50 ml limpio
aproximadamente 2 ml de saliva. Adicinele a la saliva recogida 10 ml de agua destilada y
mzclela bien. Filtre esta solucin de saliva y rotule como solucin de enzima.
Protocolo para la determinacin de actividad enzimtica de amilasa salival.

Materiales 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Amilasa salival (mL) 5 -- 4 -- 5 5 5 5 5 5 5 5
Solucin de sacarosa (mL) -- -- 3 3 --- --- -- -- -- -- -- --
Cloruro de Sodio (mL) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 --
Buffer pH 3,8 (mL) -- -- -- -- -- -- -- 3 -- -- -- --
Buffer pH 6,8 (mL) -- -- -- -- 3 3 3 -- 3 -- 3 3
Buffer pH 8,9 (mL) -- -- -- -- -- -- -- -- -- 3 -- --
Sulfato de Cobre (mL) -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- 1
Calentar hasta ebullicin -- -- -- -- -- -- x -- -- -- -- --
Solucin de almidn (mL) 4 4 -- -- 3 3 3 3 3 3 3 3
Incubar en Bao Mara (37C) x x x x -- x x x x x x x
Colocar en vaso con hielo -- -- -- -- x -- -- -- -- -- -- --
Reactivo de Fehling (mL) -- -- 2 2 -- -- -- -- -- -- -- --
Solucin de Lugol (gotas) 4 4 -- -- 4 4 4 4 4 4 4 4
Registrar lo observado (+/-)

13 Actividades de Prctica P.C.

 BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

Resuelva:
1. Las curvas que se muestran en el siguiente grfico representan la actividad de tres tipos
diferentes de enzimas, responda:
a . Interpreta y analiza la informacin de cada grfico.
b. Trata de explicar le concepto de pH ptimo. Son los mismos para todas las enzimas?
c. Por qu la actividad enzimtica es baja a valores de pH muy altos?
d. Por qu la tripsina y la pepsina tiene mximos de actividades en diferentes valores de pH?

2. Realice un grfico de aparicin de producto en funcin del tiempo. Cmo varan las
velocidades en funcin del tiempo?.

Tiempo (segundos) [producto] (mM)

0 0,050
20 0,195
40 0,342
60 0,488
90 0,659
130 0,770
180 0,871
360 0,991

3. El agua oxigenada se emplea como material de curacin, cuando se aplica sobre una herida
siempre hay un ligero burbujeo Explique porque se presenta.
4. Explica la utilidad de la determinacin de la actividad enzimtica en la clnica. De tres
ejemplos.
5. De qu forma los inhibidores o venenos afectan la actividad enzimtica.
6. Aprender utilizar los conceptos de Km, Vmax: Ingresar a la pgina siguiente
http://csm.jmu.edu/biology/courses/bio220/aotw3.html
Pulsar la tecla kinetics_model.xls, despus regrese a la pgina inicial y conteste las
preguntas que se te hacen.

14 Actividades de Prctica P.C.