AISLAMIENTO DE HONGOS

INTRODUCCIN

Los hongos son organismos eucariontes y saprtrofos, es decir que se alimentan de materia
orgnica muerta: restos de plantas y animales, sustancias de desecho, productos sintticos y
cualquier elemento soluble que difunda en el medio. Necesitan compuestos carbonados ricos en
energa elaborados por otros organismos; son descomponedores por excelencia cumpliendo un
papel muy importante en los ciclos de los nutrientes junto con las bacterias, actinomycetes y
protozoos.

Cualquier especie fngica es capaz de descomponer slo ciertos compuestos orgnicos (celulosa,
quitina, queratina, lignina, protenas, hidrocarburos, etc.) y un cierto nmero de microorganismos
incluyendo a bacterias y protozoos, son requeridos para llevar a cabo la completa descomposicin
del residuo, existiendo una secuencia que depende de sus habilidades nutricionales. Algunas
especies inician el proceso de descomposicin, pero su actividad se detiene ante la acumulacin
de determinados metabolitos (productos del metabolismo) o por la incapacidad de proseguir el
desdoblamiento por falta de enzimas adecuadas, siendo reemplazadas por otros que continan y
terminan el proceso.

Asimismo, los hongos pueden vivir a expensas de tejidos vivos de un organismo, absorbiendo
azcares y aminocidos simples de las clulas vivas del hospedante (bitrofos), por lo que
ocasionan enfermedades; o bien le causan la muerte por toxinas o la destruccin de tejidos por
enzimas y luego utilizan la materia orgnica (necrtrofos). Tambin pueden intercambiar
sustancias asocindose con otros organismos (simbiosis), tales como cianobacterias o algas verdes
para formar los lquenes, o pueden encontrarse en el suelo vinculados con races de plantas
superiores, formando micorrizas.En el caso de los lquenes esta relacin ntima les permite
colonizar diferentes sustratos, incluso rocas, que de manera independiente son incapaces de
degradar; por su parte las micorrizas, cuya interaccin favorece el crecimiento de la planta y la
obtencin de nutrientes por parte del hongo en suelos que les son desfavorables.

Morfolgicamente pueden ser unicelulares o ms comnmente estar formados por hifas, que en
conjunto forman el micelio; pudindoselos encontrar en todo tipo de ambientes, terrestres o
acuticos, ocupando diferentes nichos ecolgicos, con produccin de esporas de distinto tipo y
origen, dispersadas por el viento, agua o vectores tales como insectos o vertebrados.

Los hongos, durante la fase vegetativa (de nutricin y crecimiento), son haploides (n) en la mayor
parte de su ciclo de vida. El micelio vegetativo crece dentro o sobre el sustrato y absorbe los
nutrientes; desarrolla hifas areas, las cuales generalmente constituyen la porcin ms visible de
la colonia, y en las que se diferencian hifas frtiles, que son reproductivas y formadoras de
esporas.

El ciclo de vida inicia con la germinacin de una de las esporas, prosigue con el crecimiento en un
sustrato, aumenta la biomasa, y termina nuevamente con la esporulacin y la diseminacin de los
propgulos. La reproduccin puede ser asexual (mitosis) o sexual (meiosis), y pueden presentarse
simultneamente.
Los hongos producen metabolitos secundarios y el hombre los procesa para diferentes industrias
como: panadera, cervecera, quesera, en la produccin de antibiticos (penicilinas,
cefalosporinas), inmunodepresores (ciclosporina), hormonas y esteroides, cidos orgnicos (cido
lctico y el cido ctrico empleado en la elaboracin de un refresco de gran consumo), enzimas
(celulasa, catalasa, amilasa, renina). Saccharomyces cerevisiae es una levadura valiosa no
nicamente por su valor comercial sino como sistema modelo en estudios de gentica eucariota.

Los hongos tienen un papel esencial en la descomposicin de la celulosa, con la produccin de

bixido de carbono y agua; por otra parte, representan prdidas econmicas al degradar papel,
telas, cuero, hidrocarburos y otros productos; el aspecto til es su responsabilidad en el reciclaje
de la madera en los bosques y su empleo para la biorremediacin de suelos contaminados por
materiales txicos. Degradan casi todo, con excepcin de algunos plsticos y pesticidas.

Por otra parte, son causa de prdidas econmicas en la produccin agrcola y ganadera debido a
las enfermedades que causan a animales y plantas.

OBJETIVOS

Adquirir los conocimientos bsicos para la manipulacin de hongos filamentosos.

Identificar algunos tipos de hongos de acuerdo a sus caractersticas morfolgicas macroscpicas y

microscpicas.

MARCO TERICO

La mayora de los hongos viven libres en el suelo o en el agua y obtienen su energa por
respiracin ofermentacin de materiales orgnicos solubles presentes en estos ambientes.
El aire no es un medio en el que pueden desarrollarse los microorganismos pero es el portador de
aerosoles biolgicos como polvo, gotitas de agua y otros, que pueden estar cargados de los
diversos grupos de microorganismos.De las capas de aire se han encontrado esporas de hongos
que proceden principalmente del suelo, de la vegetacin y del mar. Algunos de los gneros ms
comnmente aislados del aire son Penicillium, Aspergillus,Rhizopus, Mucory Cladosporium, entre
otros.

Todos los hongos se reproducen por esporulacin. Cuando la espora se encuentra en un medio
nutritivo adecuado, se hincha y germina emitiendo uno o ms tubos germinativos que se alargan
distalmente hasta constituir filamentos delgados y largos que se denominan hifas, las cuales
pueden ramificarse despus.
En algunas especies se forman septas a lo largo de la hifa, quedando entonces dividida en
pequeos compartimentos como una caa de bamb llamndose entonces hifa septada, otras
veces no hay septaciny el protoplasma fluye continuamente a lo largo de la hifa, describindose
entonces como hifa no septadacenocitica. En la mayora de los hongos las hifas son septadas.

A medida que las hifas se siguen dividiendo se forma un crecimiento algodonoso o filamentoso de
hifas entrelazadas llamado micelio.

El conjunto de micelios se conoce como talo. En algunas formas superiores las hifas se unen
formandocuerpos fructferos grandes y de estructura compleja como es el caso de las setas. La
parte del micelio que penetra en el substrato y absorbe substancias nutritivas se llama
miceliovegetativo, la parte que se proyecta sobre la superficie del substrato origina el micelio
areo, que a su vez da origen a esporas asexuales llamadas conidias, cuya misin es la de dispersar
el hongo a nuevos hbitats.

Algunos hongos tambin producen esporas sexuales formadas como resultado de la reproduccin
sexual. Las
que estn encerradas en una especie de saco (Asca) se llaman ascosporasy las que se forman en el
extremo
de una hifa o basidio se denominan basidiosporas.

Las propiedades de las esporas sexuales son un criterio importante en la clasificacin e

identificacin de los
hongos. Aunque los hongos constituyen un grupo grande y diverso, prcticamente hay tres grupos
importantes: Los mohos, las levaduras y las setas.

Los mohos son hongos filamentosos que estn ampliamente distribuidos en la naturaleza y son
habituales en pan viejo, queso o frutas. Presentan una gran variedad de formas y tamaos. Cada
filamento crece fundamentalmente en el pice, por extensin de la clula terminal.

Las levaduras son hongos unicelulares y la mayora son Ascomicetos. Normalmente tienen forma
oval ocilndrica y su principal forma de reproduccin es la gemacin, se desarrollan bien en
hbitats con abundante
azcar tales como frutas, flores, e incluso la corteza de los rboles. Las levaduras tienen gran
importancia biotecnolgica en la industria cervecera y de la panificacin y en la produccin de
protena de origen unicelular
(biomasa). El principal agente de la fermentacin alcohlica es Sacharomyces cerevisiae.

Las setas son hongos filamentosos pertenecientes a los Basidiomycetesque forman cuerpos
fructferos denominados setas y que producen basidiosporas como esporas sexuales. Una
actividad ecolgica muyimportante de los Basidiomycetes, es la descomposicin de la madera,
papel, ropa y otros derivados de productos naturales. Estos Basidiomycetes, por tanto, son
capaces de producir celulasas con actividades degradantes de lignina que utilizarn como fuente
de carbono y energa.

Agar Saborau

Uso: Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos patgenos y

saprfitos. Tambin es til para el cultivo de levaduras.
Fundamento: Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos,
particularmente los asociados con infecciones cutneas (piel, pelo).
En el medio de cultivo, la peptona, la triptena y la glucosa son los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH cido, inhiben
el desarrollo bacteriano y favorecen el crecimiento de hongos y levaduras. El agar es el agente
solidificante.
Puede ser suplementado con otros agentes selectivos de crecimiento.
FRMULA (en gramos por litro)

Peptona......................................................................................................................................5.0.
Triptena.....................................................................................................................................5.0.
Glucosa.....................................................................................................................................40.0.
Cloranfenicol.............................................................................................................................0.05.
Agar..........................................................................................................................................15.0.

pH final: 5.6 0.2

Instrucciones
Suspender 65 g del polvo en un litro de agua purificada.Reposar 5 minutos y mezclar hasta
uniformizar.calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver completamente.
Distribuir en tubos o en otros recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 118-121 C
durante 15 minutos.
Colocar los tubos en posicin inclinada para solidificar el medio de cultivo .Tambien puede
distribuirse en placas de petri esteriles.
Nota: Mantener en lugar fresco,pues la exposicin al calor aumenta la hidrlisis de los
componentes.

caractersticas del producto

Medio de cultivo deshidratado:color beige claro,homogneo,libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado:color ambar claro,ligeramente opalescente sin precipitado.

almacenamiento
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 C
Medio de cultivo preparado a 2-8 C

procedimiento
Siembra
Estriar directamente la superficie del medio de cultivo

incubacin
En aerobiosis a 20-25 C
El tiempo depender del hongo y la levadura que se quiera recuperar.Como regla general,incubar
en las condiciones descritas durante 2 a 7 dias.En el caso de investigar dermatofitos,incubar
durante 5 a 20 das y examinar el cultivo cada4 a 6 das.

Penicillium

Reino: Fungi
Phylum: Ascomycota
Clase: Euascomycetes
Orden: Eurotiales;
Familia: Trichomaceae
Gnero: Penicillium
Es un gnero de hongos conocidos como mohos verdes o azules; de algunas especies se obtiene la
penicilina. El micelio del hongo, conjunto de filamentos tubulares llamados hifas, crece en la
superficie de frutas, pan, quesos y otros alimentos. La reproduccin asexual se produce en
Penicillium mediante unas clulas, los conidios, que se forman en el extremo de hifas
especializadas, los conidiforos. stos son ramificados y en forma de abanico. Los rganos
sexuales son gametangios arrollados en hlice. La penicilina fue descubierta por Alexander
Fleming en Penicilliumnotatum, pero en la actualidad se obtiene de cepas de
Penicilliumchrysogenicum que dan mayor rendimiento. En los quesos
azules, Penicilliumroqueforti da sabor, y el color se debe a sus conidios.

La citreoviridina es una toxina producida por Penicilliumcitreonigrum, esta toxina ha provocado

enfermedad aguda en humanos que han consumido arroz contaminado por el hongo. La mayor
parte de los casos se han producido en Japn.Penicilliummarneffeies patgeno, particularmente
en los pacientes HIV positivos, y suaislamiento de la sangre es considerado como un marcador de
SIDA en las reas endmicas.
Con una sola excepcin (Penicilliummarneffei, hongo termodimrfico), los miembros del gnero
Penicilliumson hongos filamentosos. Las especies de Penilliumestn ampliamente distribuidas en la
naturaleza y se hallan en el suelo, la vegetacin cada, el aire y el suelo.

Aspecto macroscpico: Las colonias de Penicillium(diferentes de Penicilliummarneffei) son de

crecimientorpido, filamentosas y vellosas, lanosas o de textura algodonosa. Son inicialmente
blancas y luego se convierten en verde azuladas, gris verdosas, gris oliva, amarillentas o rosadas
con el tiempo. El reverso de la colonia es plido o amarillento.

Penicilliummarneffeies termodimrfico y produce colonias filamentosas, lisas, con surcos radiales

a 25C. Estas colonias son azuladas - gris - verdosas en el centro y blancas en la periferia. Un
pigmento soluble rojo, rpidamente difusible al medio, observado desde el reverso es muy tpico.
A 37C, las colonias de Penicilliummarneffeison cremosas a levemente rosadas y con textura glabra
y plegada.

Aspecto microscpico:

Las especies de Penicillium(excepto P. marneffei), tienen hifas septadas hialinas (1.5-5

dedimetero), con conidiforos simples o ramificadas, mtulas, fialides y conidias. Las mtulas son
ramificaciones secundarias que se forman sobre los conidiforos. Las mtulas acarrean fialides en
forma de frasco. La organizacin de las fialides en la punta de los conidioforos es tpica (llamadas
"penicilli" o pincel). Las conidias (2.5-5 de dimetro) son redondas, unicelulares y observadas
como cadenas no ramificadas en el extremo de las fialides.

En su fase filamentosa, Penicilliummarneffeies microscpicamente similar a otrasespecies de

Penicillium. En su fase de levadura, Penicilliummarneffeipresenta clulas globosas o elongadas con
forma de salchicha (3-5 ) que se multiplican por fisin.
Fig1. Penicillium

Fig2. Morfologia de un hongo penicillium Fig3. Naranja con presencia de hongos

Penicillium

Mucor

Reino:Fungi
Phylum: Zygomycota
Orden: Mucorales
Familia: Mucoraceae
Gnero: Mucor

Mucor es un hongo filamentoso hallado en el suelo, las plantas, los desechos orgnicos y
vegetales. Desde el punto de vista mdico, las especies de Mucor son agentes causales de
enfermedad en el hombre y los animales. No obstante, la mayora de las especies del gnero no
desarrollan en cultivos cuando son incubados a 37C, aunque las cepas aisladas de materiales
clnicos provenientes de pacientes son por lo general termotolerantes.

El gnero Mucor contiene varias especies de inters mdico, siendo las ms frecuentemente
recuperadas de los casos clnicos: Mucoramphibiorum, Mucorcircinelloides, Mucorhiemalis,
Mucorindicus, Mucorracemosus y Mucorramosissimus.

Las especies de Mucor son causantes de las mucormicosis. Esta enfermedad incluye varias formas
clnicas, entre las cuales se destacan la rinocerebral, la pulmonar, la cutnea, la digestiva y la
diseminada. Todas ellas se asocian por lo general a una determinada causa favorecedora, por
ejemplo, la rinocerebral a la cetoacidosis diabtica y la pulmonar a procesos malignos de la sangre.

Tambin el empleo de la deferoxamina, la insuficiencia renal, las quemaduras extensas y la

adiccin a drogas por va endovenosa constituyen factores asociados a las mucormicosis. La
invasin de los vasos sanguneos, con la consecuente formacin de trombos y necrosis tisular
local, constituyen una caracterstica histopatolgica a tener en cuenta al momento del
diagnstico. Debido a la relativa actividad del itraconazol, aplicado en forma profilctica en
pacientes inmunosuprimidos, la droga puede seleccionar Zygomycetes como agentes infecciosos
en estos pacientes.

Aspecto macroscpico: Las especies de Mucor desarrollan colonias rpidamente entre 25-30C,
cubriendo tambin rpidamente la superficie del agar (en general pocos requerimientos
nutricionales). Si bien en un principio las colonias presentan un color blanco, posteriormente el
mismo se torna grisseo o amarronado con el tiempo. El reverso es siempre blanco

Aspecto microscpico: La microscopia de las colonias revela hifas escasamente o no septadas,

anchas (6-15 m), aunque con bordes no paralelos (producto del ancho variable), esporangiforos,
esporangios que contienen esporangiosporos en su interior. Pueden igualmente visualizarse
artroconidios intercalares y algunos pocos clamidoconidios. Apofisis, rizoides y estolones estn
ausentes. Los esporangiforos son cortos cortos, erectos, taper hacia sus pices y pueden formar
cortas ramificaciones simpodiales. Las columellas es son hialinas. Los esporangios son redondos,
50-300 m de dimetro, de color gris o negro. Luego de la ruptura del los esporangios, los
esporangiosporos se diseminan libremente. Los esporangiosporos son redondos (4-8 m de
dimetro) o levemente ovalados.

Fig4. Mucor sp
Fig5. Mucor en alimentos Fig6. Mucormicosis

MATERIALES

-Fruta y/o verdura con hongos -Azul de algodn o azul de lactofenol

-Mechero Bunsen -Asa de siembra (en punta)
-Microoscopio -Placa Petri
-Lamina cubre objetos -Agar Saboraud
-Porta objetos

PROCEDIMIENTO PARA IDENTIFICACION DE HONGOS EN ALIMENTOS

1. Encender el mechero bunsen para esterilizar el rea a trabajar.

2. En este caso se utilizara una naranja con hongos en su superficie para la muestra.
3. En un porta objetos dejar caer una gota de azul de algodn.
4. Esterilizar el asa de siembra en el mechero Bunsen al rojo vivo.
5. Extraer la muestra de la superficie de la naranja con hongos, utilizando el asa de siembra
en punta.
6. La muestra extraida colocar en el porta objetos, sobre la gota de azul de algodn.
7. Se coloca la lamina cubre objetos para efectos de una mejor visualizacion con el
microscopio.
8. Llevar a microscopio e identificar el tipo de hongo de acuerdo a sus caracteristicas
morfologicas.

PROCEDIMIENTO PARA IDENTIFICACION DE HONGOS EN UN SERVICIO HIGIENICO

1. Tener una placa Petri con agar Saboraud y llevar al rea analizar.
2. Abrir la placa Petri en el rea destinada y dejar a intemperie durante 15 minutos.
3. Pasado los 15 minutos, cerrar la placa Petri y llevar a laboratorio.
4. En el laboratorio, realizar el sellado y etiquetado de la placa para llevar a incubadora y
posteriormente observar la presencia de hongos.
Pginas web revisadas

http://www.cricyt.edu.ar/enciclopedia/terminos/HongosFunc.htm

http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/micologia/generalidades.html

http://www.ecured.cu/index.php/Penicillium

http://www.fba.org.ar/panel-gestion/InformeResultado/MI/mi25.htm