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    Aflatoxinas en Alimentos Balanceados de Perro

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    Este documento presenta un protocolo de investigación para detectar aflatoxinas en diferentes alimentos balanceados para perros. El objetivo es determinar la presencia de aflatoxinas utilizando cromatografía en capa fina. Se espera encontrar aflatoxinas debido a que los alimentos suelen contener cereales como maíz y arroz, pero esto probablemente no cause signos clínicos en los perros. La metodología incluye la extracción y purificación de muestras de alimento, seguida de cromatografía en capa fina y

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    Este documento presenta un protocolo de investigación para detectar aflatoxinas en diferentes alimentos balanceados para perros. El objetivo es determinar la presencia de aflatoxinas utilizando cromatografía en capa fina. Se espera encontrar aflatoxinas debido a que los alimentos suelen contener cereales como maíz y arroz, pero esto probablemente no cause signos clínicos en los perros. La metodología incluye la extracción y purificación de muestras de alimento, seguida de cromatografía en capa fina y

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    Aflatoxinas en Alimentos Balanceados de Perro

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    Este documento presenta un protocolo de investigación para detectar aflatoxinas en diferentes alimentos balanceados para perros. El objetivo es determinar la presencia de aflatoxinas utilizando cromatografía en capa fina. Se espera encontrar aflatoxinas debido a que los alimentos suelen contener cereales como maíz y arroz, pero esto probablemente no cause signos clínicos en los perros. La metodología incluye la extracción y purificación de muestras de alimento, seguida de cromatografía en capa fina y

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    de 7

    Licenciatura en Medicina Veterinaria y Zootecnia.

    Mdulo: Enfermedades sistmicas y toxicolgicas

    Docente: Silvia D. Pea B.

    PROTOCOLO DE INVESTIGACIN

    Deteccin de Aflatoxinas en diferentes alimentos balanceados para caninos.

    Alumnas: Puebla Renteria Elena


    Villeda Enrquez Sandra

    16/05/17
    INTRODUCCIN
    Las micotoxinas son microorganismos abiticos de origen fngico que pueden
    crecer en una gran variedad de cultivos, por ende su prevalencia en materias
    primas vegetales (alimentos o piensos) puede ser relativamente alta. Las
    micotoxinas son producidas por una gran variedad de mohos filamentosos
    especialmente de los gneros Aspergillus, Penicillium, Fusarium, y Alternaria, fruto
    de su metabolismo secundario (Marn et.al, 2013).
    Las aflatoxinas son metabolitos txicos secundarios procedentes de Aspergillus
    flavus. En los ltimos aos la necesidad de investigar estas toxinas ha
    incrementado debido a la incidencia de stas en los alimentos (Martinez, 2013).
    Entre los alimentos considerados ms susceptibles a la contaminacin por hongos
    y por ende con aflatoxinas, se incluyen principalmente: maz, cacahuates,
    pistachos, semillas de algodn y la pulpa seca del coco (copra). De igual manera
    se han encontrado aflatoxinas en semillas oleaginosas tales como la semilla de
    girasol y la soya, as como en almendras, avellanas y nueces (Martinez, 2013).

    MARCO TERICO
    Aflatoxinas: son micotoxinas cancergenas, teratognicas, mutagnicas, que
    tienen tropismo por rganos como hgado, cerebro y rin. Estas toxinas son
    producidas bajo condiciones ptimas de temperatura y humedad por A. flavus
    (Serrano, 2015).
    Las aflatoxinas de mayor inters son las B1, B2, G1 y G2 (toman el nombre con
    base en la fluorescencia que presentan en capa fina de gel). Los micelios de A.
    Flavus y otras especies afines productoras de aflatoxinas, son capaces de
    colonizar semillas de oleaginosas de man, girasol, algodn, soja, ssamo,
    avellanas, almendras y cereales y sus derivados almacenados en sacos o silos
    (Martinez, 2013).
    De las cuatro aflatoxinas principales (B1, B2, G1 y G2), la que se observa
    habitualmente en mayores concentraciones es la B1, es considerada el compuesto
    biolgicamente ms activo de la familia de las aflatoxinas y se presenta en un
    nmero importante en alimentos para animales as como tambin en maz,
    algodn y man (Rojas, 2009).
    PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

    La alimentacin de los perros se basa principalmente en alimentos balanceados


    de diferentes marcas precios y calidad, sin embargo se sabe que la composicin
    de dichos alimentos son a base de cereales como maz, arroz, los cuales tienen
    un riesgo de contener aflatoxinas que son dainas para el animal.
    Algunos estudios han mostrado que los nutrientes y el tipo de sustrato son
    importantes para la produccin de aflatoxinas, la cual se puede ver estimulada por
    un alto nivel de carbohidratos y un bajo nivel de protenas; los carbohidratos
    proveen los dos carbonos precursores para la sntesis de la toxina (Rojas &
    Wilches, 2009)
    Por otro lado, ciertos autores sugieren que las concentraciones de CO2 e
    interacciones ligeramente elevadas con la temperatura e incluso factores como la
    disponibilidad del agua pueden estimular el crecimiento de algunas especies
    micotoxignicas, entre ellas las aflatoxinas (Magan et. al, 2011).
    Lo anterior refiere un riesgo para la salud animal puesto que se puede propiciar la
    existencia de aflatoxinas debido a las caracteristicas tanto fisicas, quimicas y
    ambientales as como el almacenamiento, empaquetado del alimento, etc. Es por
    eso, que es importante conocer el tipo de alimento que consumen los perros y
    poder realizar un anlisis de riesgo donde se tomen en cuenta los aspectos ms
    importantes en cuanto a la deteccin de aflatoxinas.
    HIPTESIS
    Se espera encontrar aflatoxinas en los alimentos balanceados para perros, sin
    embargo, esto no ser la causa de los signos clnicos que se presenten en estos
    animales.

    OBJETIVO GENERAL
    Determinar la presencia de aflatoxinas en diferentes alimentos balanceados para
    perros.

    OBJETIVOS ESPECFICOS

    Conocer el tipo y composicin de cereales de los alimentos balanceados


    para perros.

    Comparar e identificar posibles signos clnicos de aflatoxicosis, con los


    casos clnicos que se presenten en los perros en el sitio de trabajo.
    METODOLOGA
    El sitio de trabajo ser K9 Empresa de Seguridad Canina e Intramuros ubicada
    en Circonio #60 Col. El Manto. Delegacin Iztapalapa. Mxico D.F
    El muestreo se realizar de acuerdo a las tcnicas de toma y remisin de
    muestras descritas en clase de diferentes autores.
    Mtodo cientfico: Cromatografa de capa fina

    EXTRACCIN

    1. Pesar 50 g de muestra molida en un vaso de licuadora de vidrio de 250 mL o en


    un Erlenmeyer de 250 mL con tapa rosca.
    2. Aadir 100 mL de acetonitrilo-agua, 84+16.
    3. Homogeneizar a alta velocidad durante 2 minutos (licuadora) o agitar
    vigorosamente durante una hora usando un agitador mecnico.
    4. Filtrar a travs de papel cualitativo rpido y transferir cerca de 5 mL del extracto
    a un tubo de ensayo de 15 x 85 mm.

    PURIFICACIN

    5. Insertar el extremo con el tapn de caucho en el tubo de ensayo y presionar


    hasta obtener 2.0 mL de solucin purificada al interior del cartucho
    6. Transferir exactamente 2.0 mL del extracto purificado a un tubo de ensayo
    limpio y evaporar a sequedad bajo nitrgeno o bajo vaco en un bao termostatado
    a 60C.
    CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

    7. Disolver el residuo seco con 100 L de tolueno-acetonitrilo, 95+5 (agregar el


    solvente, tapar el tubo y agitar en vrtex durante 30 segundos).
    8. Sembrar 20 L de cada muestra junto con 5, 10 y 20 L de estndar de trabajo
    en una cromato-placa de silicagel 60 de 10 x 10 cm.. La solucin estndar de
    trabajo contiene 0.4 g/mL de aflatoxina B1 (AFB1), 0.4 g/mL de aflatoxina G1
    (AFG1), 0.12 g/mL de aflatoxina B2 (AFB2) y 0.12 g/mL de aflatoxina G2
    (AFG2) en tolueno-acetonitrilo 95+5 (disponible en Micotox Ltda.).
    9. Desarrollar la placa con cloroformo-acetona, 90+10 hasta 1 cm del borde
    superior. Dejar secar al aire.
    10. Observar la cromatoplaca bajo luz ultravioleta de onda larga (365 nm) y
    determinar el contenido de aflatoxinas de la muestra comparando la intensidad de
    las manchas de aflatoxinas de la muestra con las de los estndares. Las
    aflatoxinas B1 y B2 fluorescen azul, las G1 y G2, fluorescen verde.

    CONFIRMACIN

    Confirmar la presencia de las aflatoxinas asperjando la cromatoplaca con una


    solucin de metanol-cido actico-cido sulfrico, 80+10+10. Observar bajo luz
    ultravioleta de onda larga (365 nm). La fluorescencia de las aflatoxinas cambia a
    color amarillo.

    CLCULOS

    Se toman 50 g de muestra en 100 mL de solvente; del extracto se toman 2 mL que


    se llevan a sequedad y se redisuelven en 100 L, de los cuales se siembran 20 L
    en placa.
    Equivalente en peso de la muestra sembrada:
    50 g x 2/100 ml x 0.02/0.1 ml = 0.2 g en placa.

    (Micotox LTDA)
    Referencias

    Martnez MM, Vargas del Ro LM, Gmez VM. Aflatoxinas: incidencia, impactos en
    la salud, control y
    prevencin. Biosalud. 2013;12(2): 89-109.

    Micotox LTDA. DETERMINACION DE AFLATOXINAS EN CEREALES Y


    ALIMENTO TERMINADO POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA (TLC) Norma
    ICONTEC NTC 1232.

    Rojas Contreras OL, Wilches Flrez AM. Determinacin de aflatoxinas en


    alimentos de mayor consumo infantil comercializados en la ciudad de Pamplona,
    Norte de Santander. Bistua: Revista de la Facultad de Ciencias Bsicas 2009.

    Serrano-Coll HA, Cardona-Castro N. Micotoxicosis y micotoxinas: generalidades y


    aspectos bsicos.
    Rev CES Med 2015;29(1):143-152

    S. Marin, A.J. Ramos, G. Cano-Sancho, V. Sanchis. Mycotoxins: Occurrence,


    toxicology, and exposure assessment. Elsevier: Food and Chemical Toxicology 60
    (2013) 218237.

    N. Magan, A. Medina y D. Aldred, Posible climate change effectson mycotoxin


    contamination of food crops pre and post- harvest. Plant Pathology (2011) 60. 150-
    163.

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