Manual Hematologia Lab.

INTRODUCCIN
Dentro de todos los procedimientos analticos, que comprometen directamente al laboratorio

clnico, lo hematolgico cumple una funcin primordial, ya que a partir de ellos logramos vislumbrar
el estado general del individuo y muchas patologas que se encuentran directamente relacionadas
con la sangre.
La adquisicin de avanzados mtodos, como son los automatizados, hacen que la prctica
hematolgica y los resultados obtenidos de ella, sean entregados con mayor eficiencia para
implantar, si el caso lo amerita, un tratamiento rpido y certero.
En la apropiacin de conocimientos y habilidades hematolgicas es de vital importancia la
realizacin de procedimientos manuales que nos permite correlacionar, identificar y confirmar, los
resultados dados por mtodos automatizados, no obstante teniendo en cuenta, su sensibilidad y
especificidad.
Por ltimo, es de gran relevancia que los estudiantes de Bacteriologa de la Universidad de San
Buenaventura conozcan todos los mtodos empleados en el laboratorio, puedan correlacionar y
obtener a partir de ellos aprendizajes significativos.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLINICO
Trate todos los pacientes y el material biolgico como potencialmente infectantes.
Mantenga el sitio de trabajo en perfecto orden y aseo.
No coma, beba, fume almacene alimentos o use cosmticos en el rea de trabajo.
Realice los procesos siguiendo las tcnicas correctas.
Lvese cuidadosamente las manos, mnimo durante 10 segundos, frotndose con agua y
jabn, antes y despus de cada procedimiento e, igualmente, si se tiene contacto con
material potencialmente infectante.
Utilice en forma sistemtica guantes de ltex en todo procedimiento que implique

manipulacin de material biolgico. Mantengamos siempre limpios lavndose las manos
enguantadas con hipoclorito al 0.5%, sumergindolas durante 10 s.
Abstngase de tocar con las manos enguantadas alguna parte del cuerpo y de manipular
objetos diferentes a los requeridos durante el procedimiento. Una vez finalizado el
procedimiento deje los guantes en una solucin de hipoclorito al 0.5%.
Emplee mascarilla en los procedimientos que puedan originar salpicaduras o en los que
requieran el uso de aerosoles.
En el laboratorio es necesario utilizar batas, preferiblemente blancas y de manga larga.
Evite deambular por reas diferentes a las de trabajo con elementos de proteccin
personal o con material biolgico.
Todo el personal que labora en el laboratorio clnico est en alto riesgo de infectarse con el
virus de Hepatitis B, por tanto requiere esquema de inmunizacin completo.
Mantenga los elementos de proteccin personal en un lugar seguro y en ptimas

condiciones higinicas.
No reutilice material contaminado como agujas, jeringas o lancetas.

Maneje con estricta precaucin el material cortopunzante y dispngaselo o deschelo en
guardianes de seguridad para facilitar su transporte y destino final; debe contener
hipoclorito al 0.5%.
No desacople manualmente la aguja de la jeringa o del portatubo; cuando se va a

desechar, utilice el destructor del guardin de seguridad.
No reinserte la aguja en su protector una vez la haya utilizado.
En caso de derrame o contaminacin accidental de sangre u otros lquidos sobre la

superficie de trabajo, piso o pared se debe aplicar sobre stas hipoclorito al 0.5% y dejar
actuar esta solucin durante 30 min. Posteriormente se debe realizar otra limpieza con
hipoclorito a la misma concentracin y luego lavar con agua y jabn. El personal encargado
de realizar este procedimiento debe utilizar guantes, mascarilla y bata de laboratorio.
Recuerde que la sangre y fluidos orgnicos de cualquier paciente deben considerarse

potencialmente infectantes.
Deseche los microhematocritos en los recipientes dispuestos para ello guardianes de

seguridad.
Nunca vierta en la poceta, material contaminado con muestras biolgicas; depostelo en un

recipiente con hipoclorito al 0.5%.
Despus de utilizar la cmara de neubauer o las micropipetas, enjuaguelas inicialmente en

hipoclorito al 0.005% y 0.5% respectivamente.
En el laboratorio no debe usted pipetear con la boca. Cuando se requiera, haga uso de los
propipeteadores y los microaspiradores.
TOMA DE MUESTRA
La sangre para poder ser estudiada debe extraerse del organismo y en ocasiones fraccionarse en
sus componentes fundamentales: plasma o suero y clulas.
La extraccin se puede utilizar por diferentes mtodos, algunos de los cuales van a minimizar el
riesgo de infeccin.
La recoleccin de las muestras es quizs, el nico momento de contacto del bacterilogo con el
paciente, Adems quien realiza el procedimiento tiene enormes responsabilidades:
1. Debe evitar los errores causantes de variaciones pre-analticas que lleven a alteraciones
en los resultados.
2. Debe recordar que de la buena atencin y servicio proporcionado al paciente, quedar

satisfecho no slo este y sus familiares, sino tambin su mdico.
Interaccin con el paciente.
Revise cuidadosamente la solicitud de exmenes, asegurndose de haber entendido

claramente las pruebas solicitadas.
Transmita al paciente confianza, seguridad y profesionalismo durante el procedimiento.
Trate de eliminar cualquier temor que el paciente pueda manifestar.
Explquele el procedimiento que le ser practicado.
Si el paciente est hospitalizado, no se gue solamente por el nmero de la cama o historia

clnica, confirme con l, sus nombres y apellidos.
Asegrese de que el paciente adopte una posicin segura y cmoda.

PUNCION VENOSA
Mtodo convencional con jeringa desechable.

La puncin venosa permite extraer mayor cantidad de sangre para las pruebas necesarias; Las
venas de eleccin suelen ser las de la cara anterior del brazo porque resulta fcil acceder a
ellas.
Materiales y equipos
Alcohol al 70%
Algodn o gasa
Torniquete o cinta elstica
Tubos recolectores con anticoagulante y/o tubos secos
Jeringa desechable # 20 o 21
Cinta para enmascarar
Lminas o laminillas
Guardianes de seguridad
Procedimiento
De acuerdo con el examen requerido, seleccione el recipiente adecuado para recoger la

muestra, bien sea tubo seco o con anticoagulante.
Rotule con el nombre completo del paciente y su identificacin, en los laboratorios clnicos
ms modernos se usa el cdigo de barras como identificacin del paciente.
Revise cuidadosamente todo el equipo requerido para el proceso; inserte la aguja en la

jeringa, mueva suavemente el mbolo para cerciorarse de que est en buen estado.
Prepare adems las lminas o laminillas para realizar los extendidos de sangre perifrica,
si el examen solicitado lo requiere.
Indique al paciente el procedimiento a realizar con el fin de tranquilizarlo y facilitar la

flebotoma.
Seleccione el sitio donde va a puncionar, generalmente el lugar de eleccin es la regin

antecubital, de piel fina y mvil, venas de grueso calibre y relativamente superficiales. Las
venas indicadas son la ceflica mediana y la baslica mediana.
Palpe y elija la vena con el dedo ndice, Las venas se hacen ms prominentes y se
penetran con mayor facilidad si el paciente cierra el puo.
Limpie con algodn y alcohol el sitio elegido, con un movimiento que va del centro a la
periferia,
Coloque el torniquete unos cuatro centmetros por encima del lugar de la venipuntura para
producir congestin venosa y pida al paciente que abra y cierre el puo varias veces.
Sostenga el brazo del paciente justamente por debajo de lugar donde se va a puncionar.
Con el bisel de la aguja hacia arriba y siguiendo el curso de la vena, inserte la aguja rpida
y firmemente en la piel y luego llegue a la vena; si la vena est canalizada, la sangre se
aspirara con el mbolo de la jeringa segn la capacidad de la misma.
La sangre se extrae lentamente para evitar la formacin de burbujas y la hemlisis.
Libere el torniquete y retire la aguja lentamente.
Presione con un algodn seco el punto de puncin.
Antes de retirar la aguja de la jeringa, si el examen requiere extendido de sangre perifrica,

coloque en las lminas o laminillas, pequeas gotas de sangre, para realizar las
extensiones.
Retire la aguja y vierta la sangre en el recipiente, lentamente por las paredes. los que
contienen anticoagulantes deben mezclarse por inversin varias veces para lograr la
anticoagulacin de la sangre.
Enjuague y sumerja la jeringa en una solucin de hipoclorito de sodio al 0.5% o en los

recipientes dispuestos para ello.
La aguja se descarta en los guardianes de seguridad.
Puncin venosa con tubos al vaco

Los tubos al vaco permiten recoger determinado volumen de muestra; estn sellados con un tapn
de goma identificado de diferentes colores, los cuales indican el tipo de anticoagulante que
contienen, y responden a un patrn internacional.
Materiales
Alcohol al 70%
Algodn o gasa
Torniquete o cinta elstica
Lminas o laminillas
Tubos al vaco
Aguja multimuestreo para tubo al vaco
Portatubo
Procedimiento
El procedimiento para obtener sangre con este mtodo es similar al descrito para la jeringa
desechable; la diferencia radica en el procedimiento de manejo de los tubos al vaco; el cual debe
realizarse de la siguiente manera:
Inserte la aguja en el portatubo; la parte ms corta de la aguja es la que entra en contacto

con el tapn de goma que sella el tubo y la otra se inserta en la vena. Una vez la aguja
entra en contacto con la vena, se empuja el tubo hasta el fondo del portatubo, se rompe el
vaco y la sangre entra al tubo. Tenga cuidado de no mover la aguja, pues sta, aun con
este movimiento debe permanecer dentro de la vena.
Cuando se agota el vaco se suspende el flujo de sangre y puede sustituirse el tubo por
otro si se requiere, o se retira todo el conjunto de la misma manera que se describi para el
mtodo de la jeringa desechable.
Reserve la gota de sangre de la aguja para realizar los extendidos de sangre perifrica.
La aguja debe ser depositada en los guardianes de seguridad.
El portatubo es reutilizable.
Esquema de las venas del antebrazo a seleccionar
PUNCION CAPILAR
Se usa cuando se requieren cantidades muy pequeas de sangre o cuando no se
pueden practicar puncin venosa.
La puncin capilar se usa en los siguientes pacientes:
Infantes menores de seis meses de edad

Nios, jvenes o adultos cuando se precisa obtener una pequea muestra
Adultos que presenten quemaduras graves o choque
Pacientes cuyas venas se estn utilizando para terapia intravenosa
Materiales Y Equipos
Algodn y alcohol
Lancetas estriles
Tubos capilares
Pipetas y diluentes requeridos
Lminas o laminillas
Mtodo
Localice el sitio donde va a puncionar. En los adultos puede ser cualquiera de los
pulpejos de la mano y en los nios se elige el taln, el dedo gordo del pie o los
pulpejos de los dedos de la mano.
Prepare el sitio donde va a puncionar. D unos ligeros golpes en la zona elegida para
conseguir un mayor flujo de sangre.
La zona no debe estar fra, edematosa ni ciantica. Con una torunda de algodn
impregnada de alcohol realice una buena asepsia.
Seque el sitio y proceda, con la lanceta estril, a efectuar la puncin, que debe ser de
ms o menos 3 mm de profundidad.
Descarte la primera gota mediante el uso de algodn seco.
Aplique una moderada presin, aproximadamente 1 cm del sitio de puncin, para

obtener las gotas de sangre.
Realice el llenado de las pipetas requeridas adems si el examen lo exige

proceda a realizar los extendidos.
Presione por unos minutos el lugar de la puntura con algodn seco.
Deposite la lanceta en un guardin de seguridad.
Observaciones
El anticoagulante utilizado en la muestra para hemograma es el EDTA, en

proporcin de 1mg por ml de sangre. Este anticoagulante no tiene influencia
perturbadora sobre la determinacin de parmetros hematolgicos. Los eritrocitos y
leucocitos permanecen inalterados durante las primeras 24 horas, en lo que refiere al
nmero. El volumen de los eritrocitos no se altera.
Si al puncionar la vena usted encuentra dificultad en canalizarla, no traumatice el

tejido pues podra provocar formacin de hematomas; preferiblemente, retire la
aguja y repita el procedimiento en otro sitio; no retire la aguja del sitio de puncin
sin antes haber aflojado el torniquete del brazo del paciente. Al retirar la aguja no
utilice algodn impregnado de
alcohol para presionar sobre el lugar de puncin, porque ello produce vaso dilatacin y
aumenta el sangrado.
Evite la agitacin excesiva de la muestra sangre-anticoagulante, ya que esto puede

conducir a la destruccin de clulas sanguneas (hemlisis).
Aviso clnico:
1. No oprima el sitio de la puncin para obtener sangre por que se altera la composicin
hemtica e invalida los resultados.
2. Muchas veces se facilita la toma de la muestra si se calienta la extremidad o se coloca en
postura colgante.
Cuidados del paciente despus de la prueba
Aplique una pequea curacin o cinta adhesiva sobre el sitio de la puncin, si bien hay que verificar
presencia de hemorragia. De haberla, presione. En caso que persista el sangrado, busque
en los antecedentes del paciente si ha sido sometido a un tratamiento con anticoagulante o
cido acetilsaliclico (aspirina, ASA).
Causas de error en la extraccin sangunea
Empleo de tubos y jeringas sucios o hmedos.
Empleo de anticoagulantes inadecuado o proporcin errnea.
Colocacin del torniquete durante un tiempo excesivo, antes de practicar la puncin

venosa.
Extraccin sangunea excesivamente lenta, con coagulacin parcial de la sangre en la

jeringa o en el tubo de recogida.
Perforar la vena (filtrar), ya que produce en el paciente hematomas y lesin de tejidos y en

la muestra acelera la coagulacin y adems, diluye la sangre.
Introduccin de la sangre en el tubo de recogida bajo presin con la aguja puesta, lo que
facilita la formacin de espuma y la aparicin de hemlisis.
Llenado insuficiente de los tubos al vaco.
Agitacin excesiva y brusca de la mezcla sangre anticoagulante, con la formacin de

hemlisis y si la agitacin es insuficiente se formarn microcogulos.
Presin excesiva del dedo, trae consigo lquidos hsticos.
Errores de identificacin.
USO Y APLICACIONES DE LOS ANTICOAGULANTES.

El estudio de las clulas sanguneas es de suma importancia, para conocer el estado fisiolgico y
morfolgico de estas; de acuerdo a las alteraciones que observamos podremos identificar que tipo
de patologa se esta presentando.
Todo lo anterior lo podemos realizar a travs de una serie de tcnicas hematolgicas que nos
facilitaran dicho estudio, en las cuales utilizamos reactivos o sustancias que procuren que las
clulas sanguneas a estudiar se encuentran en el estado ms parecido al fisiolgico cuando se
encuentren circulando por el torrente sanguneo.
Es el caso de los Anticoagulantes, los cuales tienen como funcin evitar la coagulacin de la
sangre. Debemos tener en cuenta que el anticoagulante de eleccin debe tener las siguientes
caractersticas: No debe alterar la morfologa de los Leucocitos, el tamao de los Hemates ni
producir hemlisis, adems, debe
impedir la agregacin plaquetaria. El ms utilizado es el EDTA precisamente porque cumple las
caractersticas anteriormente mencionadas.
Estuvimos indagando sobre los distintos anticoagulantes que existen y encontramos una gran
variedad de estos:
EDTA: (cido Etilendiaminotetraactico sal disdica tripotsica) se puede utilizar en

forma slida o lquida; este anticoagulante es quelante muy fuerte del calcio impidiendo el
proceso de coagulacin al fijarlo sin producir su precipitacin a una concentracin de 1.5
mg/ml.
EDTA K3: Es utilizado fundamentalmente para la realizacin de recuentos celulares ya

que respeta la morfologa eritrocitaria y leucocitaria al menos durante 24 horas a 4C.
Permite la realizacin de frotis sanguneo dos horas despus de la extraccin de sangre e
impidiendo la aglutinacin de las plaquetas.
HEPARINA: Es un Anticoagulante fisiolgico que impide que la protombina se transforme

en trombina; es un mucopolisacrido cido. Presenta el inconveniente que si no se agita
rpida y de manera uniforme con la sangre inmediatamente despus de extrada pueden
formarse microcogulos; Aunque no altera el volumen eritrocitario ni la morfologa de los
leucocitos; no es recomendable su empleo para la realizacin de la extensin sangunea,
ya que con los colorantes habituales producen una coloracin de fondo excesivamente
azulado o produciendo tinciones panpticas.
CITRATO SODICO: Utilizado para pruebas de rastreo y ensayos. El acta impidiendo que
el calcio imprescindible para la coagulacin se ionice evitando as que esta ocurra.
Tambin se utiliza para las pruebas de hemostasia como VSG dependiendo la proporcin
anticoagulante/ sangre.
OXALATO SODICO: Al igual que el citrato sdico este es recomendado para las pruebas
de hemostasia en la proporcin de (1 volumen de solucin y 4 volmenes de sangre) En
caso de no disponer de EDTA se puede utilizar como alternativa utilizar Wintrobe: Oxalato
de Potasio 4 gr., Oxalato de Amonio 6 gr., agua destilada 500 ml. e). ACD: (cido ctricocitrato dextrosa). Tiene las mismas indicaciones que el citrato sdico pero debido a las
caractersticas de sus PH es el anticoagulante de eleccin para asegurar una buena
conservacin de los eritrocitos (Banco de sangre, transfusiones y estudios metablicos
eritrocitarios). La proporcin es de (1 volumen de solucin ACD y 4 volmenes de

sangre). La mezcla est constituida por: cido ctrico monohidratado 0.9 gr., citrato
trisodico dihidratado 2 gr., dextrosa 2 gr. Y agua destilada 120 ml.
Adems de los comnmente utilizados en el laboratorio existen otro tipo de anticoagulantes

como los ORALES O CUMARINICOS los cuales son derivados de la cumarina (4dihidroxicumarina) a los que tambin se les llama antivitamina K y los CIRCULANTES los
cuales son anticuerpos antifosfolipidos que interfieren en la conversin de protombina en
trombina que aparece en el Lupus Eritematoso (enfermedad Autoinmunitaria).
PRUEBAS HEMATOLOGICAS BASICAS

Hemograma, cuadro hemtico o biometra hemtica
ERITROGRAMA
El eritrograma es la evaluacin cualitativa y cuantitativa del componente eritrocitario y alguna de
sus propiedades. Es la parte del hemograma que ms aporta a la clnica. Las alteraciones de los
glbulos rojos pueden ser numricas, descriptivas o mixtas. Los hallazgos obtenidos en el
eritrograma no son, por s solos, suficientes para establecer un diagnstico; ste debe hacerse de
acuerdo con la clnica ms los estudios de laboratorio complementarios en cada caso.
MEDICION DE HEMOGLOBINA
Objetivos
Cuantificar los gramos de hemoglobina por decilitro de sangre, por el mtodo de la
cianmetahemoglobina. Este mtodo fue recomendado por el Comit Internacional para la
Estandarizacin en Hematologa. (ICSH) en 1966 y modificado en 1977. es an hoy el mtodo de
eleccin, por la estabilidad de la reaccin y la facilidad de su empleo.
Fundamento
Al mezclar la sangre con el reactivo de Drabkin, se transforma la hemoglobina en
cianometahemoglobina. La intensidad de color de esta reaccin se mide en un fotocolormetro o
espectrofotmetro. La densidad ptica de la solucin es proporcional a la concentracin de
hemoglobina, todas las formas de hemoglobina se miden por este mtodo, excepto la
sulfahemoglobina.
Los pasos de la reaccin son los siguientes:
1. hemoglobina + ferrocianuro = metahemoglobina
2. metahemoglobina + cianuro potsico = cianometahemoglobina
sangre venosa anticoagulada con EDTA, o sangre obtenida por puncin capilar.
Reactivo de Drabkin
Tubos de 13 x 100 mm
Pipeta de Salhi (20 uL = 0.02 mL) o pipeta automtica
Tapones de caucho o vinipel para los tubos
Fotocolormetro debidamente calibrado
Cubetas de cristal para el fotocolormetro
Propipeteadores y microaspiradores
Curva de calibracin para obtener la constante de cada aparato y poder leer la
hemoglobina directamente
Mtodo
Prenda el fotocolormetro o espectrofotmetro y espere a que alcance la temperatura
adecuada para su funcionamiento.
Dispense 5 mL de reactivo de Drabkin en un tubo de 13 x 100 mm, con ayuda del

propipeteador.
Mezcle cuidadosamente la sangre, por inversin, unas 30 veces para obtener una buena
homogenizacin de la muestra.
Aspire, con la ayuda del microaspirador, los 20 uL (0.02 mL) de sangre en la micropipeta
de Salhi o con la pipeta automtica.
Elimine el exceso de sangre adherido a las paredes externas de la pipeta antes de

introducirla en la solucin de Drabkin.
Lleve la pipeta hasta el fondo del tubo y deposite la sangre, procurando lavar las paredes
internas de la pipeta,; esto se logra mediante aspiraciones y expulsiones consecutivas de
reactivo dentro del tubo, (evite la formacin de burbujas).
tape el tubo y mezcle varias veces por inversin.
Deje reposar durante 10 min para que se produzca la hemlisis total de clulas rojas y se
complete la reaccin.
Transfiera la solucin a las cubetas del fotocolormetro.
Lea la reaccin obtenida a 540 nm, usando como blanco el reactivo de Drabkin.
Calcule la concentracin de hemoglobina, multiplicando por una constante que resulta de

la calibracin del mtodo.
Observaciones
Cuando la solucin que se obtiene de la mezcla de sangre - reactivo de Drabkin no es

cristalina y se presenta turbidez, el resultado dar un sesgo positivo a causa de un
conteo excepcionalmente alto de leucocitos. En este caso, centrifugue la muestra y use
el sobrenadante para la lectura en presencia de hemoglobina s o C, para lo cual diluya
la muestra en proporcin 1;1 con agua destilada, lea en el fotocolormetro y multiplique
el resultado por 2; o tambin en presencia de globulinas anormales, se recomienda

mezclar 0.1 gr de carbonato de potasio al reactivo de Drabkin. Cuando encuentre
suero lipmico, mezcle el tubo que contiene el Drabkin con 0.02 mL del plasma
lipmico y selo como blanco.
La determinacin de hemoglobina no est afectada por la concentracin de

anticoagulante usado.
La curva de calibracin se prepara a partir de estndares de hemoglobina con
concentraciones conocidas que pueden obtener comercialmente.
La medicin de hemoglobina constituye el criterio fundamental para determinar la
existencia de anemia. La OMS ha establecido como lmites inferiores de normalidad
valores de 13 g/dL en los hombres y 12 gr/dL en las mujeres.
Mtodos electrnicos
En todos los instrumentos automatizados o semiautomatizados se determina la hemoglobina
fotocolormetricamente por el mtodo de la cianometahemoglobina. La diferencia con el mtodo
manual es que la lectura es digital e instantnea en g/dL.
Fuentes de error
Una puncin venosa inadecuada puede producir hemoconcentracin y por ende valores ms altos
de hemoglobina.
Pipetas mal graduadas.

No eliminar el exceso de sangre en el exterior de la pipeta.
No tomar la cantidad de sangre necesaria.
Mala calibracin del fotocolormetro.
Mala lectura.
Cristalizacin del reactivo (el reactivo debe guardarse a temperatura ambiente)
Hemlisis y lipemia.
Valores de referencia
Los valores normales dependen de la edad, sexo, altitud geogrfica, rgimen alimenticio y otros
factores individuales, adems del mtodo utilizado para la determinacin.
Los valores aceptados a nivel del mar son:
Hombres
13 16 gr/dl
Mujeres
12 14 gr/dl
Nios
11 15 gr/dl
Preparacin de un control de hemoglobina

Este control consiste en:
Almacenar las
refrigeracin.
Preparar un Pool de estas muestras.
Obtener un hemolizado.
Con base en los valores obtenidos diariamente de cada muestra utilizada para preparar el
pool, sacar la media y obtener la desviacin estndar.
Trabajar diariamente este pool, con un margen de error de 2 desviaciones estndar.
muestras
valoradas
diariamente
(preferiblemente
normales)
en
Curvas para valoracin de hemoglobina
Conseguir muestras previamente valoradas con concentraciones de hemoglobinas bajas,

normales y altas (aproximadamente de 5 a 6 muestras).
Valorarlas nuevamente en el equipo de nuestro laboratorio.
Trazar la curva en papel semilogartmico con base a los porcentajes de tramitancia

obtenidos contra las concentraciones conocidas previamente.
Obtener de esta curva las concentraciones correspondientes a las posibles tramitancias

para realizar una tabla.
Otro mtodo para realizar estas curvas de hemoglobina es utilizando patrones comerciales,
los cuales tienen la ventaja de proporcionar curvas muy estables.
MEDICIN DEL HEMATOCRITO

El Comit Nacional de Estndares en el Laboratorio Clnico ha recomendado que la expresin
volumen de clulas empacadas sea usada para describir la medida de la masa eritroide y el
trmino hematocrito se utilice para describir los materiales utilizados en el mtodo.
Objetivo
Obtener la relacin existente entre el volumen de masa eritroide y el volumen total de sangre, por
medio del microhematocrito o hematocrito capilar, o el hematocrito electrnico o automatizado.
Hematocrito capilar o microhematocrito
Al aplicar a una muestra de sangre total una fuerza centrifuga de 8000 a 12000 r/min se logra un
mximo de empaquetamiento de glbulos rojo. El micromtodo ha demostrado ser mejor, por lo
cual se emplea en la mayora de los laboratorios.
Sangre total anticoagulada con EDTA o sangre capilar.
Tubos capilares de vidrio, desechables, de 1mm de dimetro interior y 7.5 cm de longitud.
En el mercado estos tubos tienen dos presentaciones:
Con heparina, para ser utilizados en muestras obtenidas por puncin capilar. Se
identifican por llevar una franja roja en uno de sus extremos.
Sin heparina, se identifican por una franja azul y deben llenarse con sangre
anticoagulada.
Plastilina.
Centrifuga para microhematocritos.
Tabla de lectura de microhematocrito.
Mtodo
Mezcle cuidadosamente la sangre por inversin unas 30 veces, para lograr una
homogenizacin completa de la muestra.
Llene las dos terceras partes del capilar con la muestra evitando la formacin de
burbujas.
Selle con plastilina uno de los extremos del capilar.
Lleve los capilares a la microcentrifuga y colquelos debidamente equilibrados.

Centrifugue por 3 a 5 minutos de acuerdo con el control del tiempo establecido.
Obtenga directamente en la tabla de lectura el valor del hematocrito en porcentaje.
Realice el procedimiento por duplicado.

Esquema del mtodo de lectura del hematocrito
Calibracin de centrfuga de microhematocrito

Las microcentrfugas para hematocrito tienen una velocidad fija que, dependiendo de la marca va
de 8.000 a 12.000 r/min. El tiempo de centrifugacin es variable. La microcentrifuga se calibra
colocando tubos capilares idnticos y microcentrifugando por diferentes perodos de tiempo, hasta
cuando no exista mas empaquetamiento de las clulas.
Procedimiento
1. montar 6 parejas de microhematocrito y centrifugarlos a 1, 2, ,3 ,4 5 y 6 minutos.
2. anotar el hematocrito para cada uno.
3. el tiempo de centrifugacin debe ser el ms corto en el cual ocurra el mximo
empaquetamiento celular.
4. escribir los resultados en el registro de calibracin y en la tarjeta de la centrifuga.
5. anotar la fecha y firma de persona que hizo la calibracin.
Observaciones
Cada mes debe chequearse la velocidad con un tacmetro y el tiempo con un cronometro. Deben
anotarse los resultados en el libro de control de calidad.
Mtodos electrnicos
Los mtodos electrnicos se basan en el clculo matemtico a partir del promedio de volumen
corpuscular medio y del nmero de glbulos rojos determinados electrnicamente.
La principal diferencia entre el hematocrito por centrifugacin y el determinado indirectamente
mediante mtodos electrnicos consiste en que este ltimo corresponde al llamado hematocrito
real, esto es, aquel que no considera el efecto de plasma atrapado en los hemates y debe tenerse
siempre en cuenta cuando se determina mediante centrifugacin. Por esta razn, los hematocrito
manuales 2 a 3% por encima de los electrnicos.
Observaciones
las burbujas de aire producidas durante el llenado del capilar no afectan el resultado pero
denotan una tcnica pobre.
Los resultados obtenidos entre dos hematocrito de un mismo paciente 1 a 2%. De no ser
as repita el procedimiento.
Una microcentrfuga mal calibrada genera resultados errneos
Hay casos en donde encontramos el hematocrito por Wintrobe formando un bisel, lo cual
pude alterarnos la lectura, por lo tanto se procede de la siguiente manera:
45 %
43 %
Se hace la lectura hasta la parte inferior del bisel y luego, se hace hasta la parte superior, entonces, se suman y
se dividen y de esta manera se promedia el valor final.
El hematocrito no es fidedigno inmediatamente despus de una hemorragia o de una transfusin.
45 + 43 = 88 /2 = 44 %
Estos valores de referencia para el hematocrito, al igual que para la hemoglobina varan con la
edad y el sexo.
Hombres
Mujeres
Nios
Recin nacidos
39 50%
36 43 %
33 43 %
47 64 %
Fuentes de error
Error de la muestra
En sangre capilar puede haber error si el masaje es excesivo o se ejerce mucha presin
local. Tambin por la existencia de edema, cianosis o palidez de dicha zona.
En cuanto a sangre venosa pueden ser debidos a xtasis por mantener tiempo prolongado
el torniquete, edema o cianosis de la regin, los cuales disminuyen y aumentan el valor del
hematocrito en forma falsa, respectivamente.
Retraso en la mezcla muestra anticoagulante, lo cual puede traer formacin de

microcogulos y por ende, disminuye el hematocrito.
Exceso de anticoagulante altera el hematocrito.
Error por centrifugacin
Si el aparato no est bien calibrado, los elementos celulares durante la centrifugacin

no sern agrupados en forma ptima, en estos casos las lecturas obtenidas no son
claras.
RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS
Existen dos mtodos para realizar el recuento de eritrocitos: el recuento manual y el conteo
electrnico de clulas.
Objetivo
Contar el nmero de glbulos rojos por milmetro cbico o por litro de sangre total, por el mtodo
manual o el mtodo electrnico.
Mtodo manual
Fundamento
Una muestra de sangre diluida en un medio isotnico se deposita en la cmara de neubauer, para
visualizar y contar los eritrocitos.
Solucin salina al 0.85% como diluyente

Pipeta para dilucin de glbulos rojos o pipetas de thomas.
Microaspirador
Cmara de neubauer o hemocitmetro
Laminilla de cuarzo
Microscopio
Sangre venosa anticoagulada con EDTA. Se puede utilizar tambin sangre capilar
Mtodo
Mezcle cuidadosamente la sangre anticoagulada durante 1 minuto aproximadamente, con

el fin de obtener una muestra homognea.
Llene la pipeta de glbulos rojos con la muestra de sangre hasta la marca de 0.5
exactamente utilizando el microaspirador.
Elimine el exceso de sangre de las paredes externas de la pipeta para no contaminar el

lquido diluyente.
Aspire el lquido diluyente (solucin salina 0.85%) hasta la marca 101 exactamente.
Coloque la pipeta en posicin horizontal y con el dedo ndice tape firmemente la punta de
la misma. Suelte el aspirador del otro lado de la pipeta.
Sujete la pipeta entre los dedos pulgar e ndice y somtala a una agitacin horizontal e
inclinada durante 3 minutos aproximadamente. Este proceso debe hacerse preferiblemente
en agitadores mecnicos. La perla de vidrio debe moverse libremente.
Descarte las cuatro primeras gotas para eliminar el contenido del capilar que no contiene
hemates.
Coloque la laminilla de cuarzo sobre las reas de la cmara de neubauer y verifique su

limpieza mediante observacin microscpica.
Llene la cmara, sujetando la pipeta como si fuera un lpiz, controlando el flujo de lquido
con el dedo ndice. La punta de la pipeta se sita en el borde del cubreobjeto en cada uno
de los extremos de la cmara y por capilaridad se llena la plataforma correspondiente. No

deben haber burbujas y los surcos adyacentes no deben contener lquido.
Coloque la cmara en la platina del microscopio y deje reposar por 3 minutos para que las
clulas se distribuyan.
Utilice el objetivo de bajo poder (10x) para localizar el cuadro central y comprobar que las
clulas estn uniformemente distribuidas. Si no es as, repita el procedimiento.
Pase luego al objetivo de 40x y con la luz reducida, proceda a contar clulas en 5 (A, B, C,
D, E) de los 25 cuadros pequeos situados en el gran cuadro central.
Realice el recuento en el siguiente orden: cuadro superior izquierdo (a), superior derecho
(B), inferior derecho (C), inferior izquierdo (D) y central (E)
Realice el conteo en cada uno de los cuadrantes antes mencionados. Cuente las clulas
que toquen la parte izquierda y superior de la lnea externa y prescinda de los que toquen
la lnea derecha e inferior.
Tenga cuidado de no contar doblemente las clulas. Anote el nmero de clulas contadas
en cada cuadro y el total del retculo.
Proceda de igual forma a contar el retculo opuesto.
La diferencia entre el nmero ms elevado y el nmero ms bajo entre los diez cuadros no
debe ser superior a 25.
Determine el valor medio de los dos retculos

Esquema de conteo de eritrocitos
Esquema de cmara de neubauer
Calculo
El recuento de los eritrocitos por mm3 se calcula teniendo en cuenta:
1. rea contada
2. profundidad de la cmara
3. dilucin empleada
400 (nmero total de cuadros 25 x16)

10 (constante de la cmara de acuerdo al tamao y profundidad)
200 (dilucin efectuada en la pipeta de thomas)
80 (total de cuadros contados 5 x16)
R = 400 x 10 x 200 / 80 = 10.000

Multiplicar el nmero de clulas contadas x el factor 10.000
Hombres
Mujeres
Nios
Recin nacidos
4.0 6.0 (10 ) / ul

3.8 5.4 (10 ) / ul
4.0 5.2 (10 ) / ul
mayor de 6.0 (10 ) / ul
Causas de error
Dilucin de la muestra incorrecta.
Pipetas dilutoras mal calibradas o sucias.
Llenado incompleto de la pipeta.

Llenado incompleto de la cmara.
Presencia de cogulos o microcogulos.
Error en la realizacin del recuento.

Clulas mal distribuidas.
Mala agitacin de la muestra.
Error en los clculos.
Observaciones
Cuando el paciente tiene anemia aguda. Lleve la sangre hasta la marca 1 y diluya hasta la
marca 101. el factor de dilucin es 100.en caso de policitemia, en donde el conteo de
clulas es alto, la dilucin debe ser mayor. Lleve la sangre hasta la marca 0.3 y diluya
hasta la marca 101. el factor de dilucin es 333.
Asegrese de que el diluyente est libre de sangre u otros contaminantes.
Limpie la cmara y la laminilla de cuarzo con un trapo libre hilos. El uso de etanol al 95%
facilita el proceso de limpieza.
El conteo de las clulas rojas demora ms tiempo que el conteo de las clulas blancas
puesto que su nmero es mucho mayor. El proceso debe hacerse tan rpidamente como
sea posible evitando que se seque la dilucin lo que causara inexactitud en el recuento
final.
La homogenizacin de la muestra para el recuento eritrocitario y dems mediciones del

hemograma constituye un aspecto fundamental y es fuente de error constante en sesgo
positivo o negativo.
El rango de error es del 20%.
Contadores celulares electrnicos

La determinacin del nmero de eritrocitos, leucocitos y plaquetas en la sangre ha sido un
procedimiento fundamental en hematologa.
Los mtodos manuales proveen mediciones satisfactorias en los recuentos de los leucocitos y
plaquetas pero son relativamente inexactos para los eritrocitos. Los mtodos de conteo celular
electrnico son ahora utilizados ampliamente y permiten una enumeracin exacta de los tres
tipos de elementos, incluidos los eritrocitos. Dichos aparatos han contribuido de manera
decisiva no slo a incrementar la rapidez en la obtencin de los anlisis sino tambin,
fundamentalmente, a mejorar la exactitud y precisin de dichos resultados.
Los contadores electrnicos utilizados se basan en el principio de la impedancia elctrica ,
como los contadores de Coulter, en los cules el nmero de impulsos de voltaje , motivado por
cambios en la resistencia elctrica, se encuentran como nmero de clulas; o bien trabajan con
rayos lser, que son los equipos ms nuevos en el comercio . Tanto los mtodos manuales
como los automatizados o semiautomatizados requieren la implementacin de programas
rigurosos de control de calidad.
Variabilidad en los valores de referencia
Segn sea la naturaleza la variabilidad biolgica puede dividirse en:
Variabilidad fisiolgica: causada por las fluctuaciones metablicas y otros procesos

fisiolgicos.
Variabilidad patolgica: causada por las enfermedades.
Variabilidad iatrognica: causada por acciones teraputicas, incluida la ingesta de

medicamentos.
Variaciones fisiolgicas
Hay ciertos factores que influyen en el recuento de eritrocitos como son:
La postura: el recuento de los elementos de la sangre son considerablemente ms bajos

cuando el sujeto ha estado recostado.
Ejercicio fsico intenso: produce recuentos bastantes ms altos que los obtenidos en
condiciones bsales.
Edad: el recuento eritrocitario normal del recin nacido es mayor que el del adulto.
Sexo: las mujeres tienen un recuento eritrocitario mas bajo que los hombres.
Altitud: las personas que viven a grandes altitudes presentan, en general, recuentos
eritrocitarios e ndices de hemoglobina mas altos que los residentes a nivel del mar; cuanto
mayor es la altitud mayor ser la tensin del oxigeno.
RECUENTO DE RETICULCITOS
Objetivos
Contar los reticulocitos existentes en 500 glbulos rojos y reportar su nmero en valores
relativos y absolutos.
Fundamento
Los reticulocitos, eritrocitos inmaduros, son el resultado de la prdida del ncleo que sufre el
normoblasto ortocromtico. Su tamao varia de 10 a 15 micras de dimetro. Tienen una vida
media de dos das en mdula sea, de all salen a la circulacin donde requieren un da para
convertirse en clulas rojas maduras.
En microscopa electrnica son fciles de reconocer por su superficie irregular, con
invaginaciones y presencia de mltiples organelas como mitocondrias, pequeo nmero de
ribosomas, remanentes del aparato de Golgi y protoporfirina.
Al microscopio de luz se identifican mediante coloraciones supravitales como el azul de cresil
brillante. El colorante se absorbe y los remanentes de cido ribonucleico ARN ribosomal y
dems organelas citoplasmticas se precipitan como sustancia reticulofilamentosa visible en

los extendidos secos como grnulos amorfos intracelulares que se tien de azul profundo.
Coloreado con Wright, el reticulocito se identifica por su basofilia difusa llamada policromatofilia
y por poseer un tamao ligeramente ms grande que el eritrocito maduro.
Miale reconoce cuatro estadios del reticulocito, clasificados de acuerdo con su grado de
madurez. La clula debe poseer al menos dos granulos de precipitado bien definidos y
separados de la membrana para considerarlos como reticulocitos.
Sangre venosa anticoagulada con EDTA

Tubos de ensayo
Gotero
Azul de cresil brillante, recin filtrado
Bao de Maria a 37C
Lminas
Aceite de inmersin
Microscopio
Mtodo
Coloque en el tubo de ensayo dos gotas previamente mezclada.
Agregue dos gotas de colorante filtrado.

Mezcle suavemente.
Incube por 10 a 15 min en el bao de mara a 37C. al finalizar los 15 min, mezcle bien el
contenido del tubo.
Realice extendidos en lmina y deje secar al ambiente.

Coloque el extendido sobre la platina del microscopio y enfoque en bajo poder (10x) para
localizar el rea donde los glbulos rojos no estn superpuestos.
Pase al objetivo de 100x cuidadosamente y agregue una gota de aceite de inmersin.
Inicie el conteo. Las clulas rojas toman una coloracin griscea verdosa. El ARN presente
en los reticulocitos se colorea de azul intenso. El retculo puede ser abundante o escaso
dependiendo del estado de desarrollo de la clula. El ms joven muestra mayor cantidad
de ARN.
Cuente todas las clulas rojas en el campo seleccionado y al tiempo enumere los
reticulocitos, localice un segundo campo y contine hasta que todos los reticulocitos
existentes en 500 clulas rojas hayan sido contados. Algunos autores recomiendan contar
1000 clulas. Recuerde que a mayor nmero de clulas contadas menor ser el error
estadstico.
Observaciones
El recuento se puede realizar en sangre capilar y los extendidos se pueden realizar en

laminilla.
El azul de cresil brillante debe filtrarse antes de usarse y el tiempo de coloracin de los
reticulocitos no es crtico, pero no debe ser menor de 10 min.
Se recomienda repetir el conteo cuando se obtienen valores por encima del 3%.
La relacin sangre/colorante no tiene que ser exactamente igual. Para mejores resultados
use una mayor proporcin de sangre cuando el paciente tenga un hematocrito bajo. Aada
una menor cantidad de muestra cuando el hematocrito sea inusualmente alto.
La presencia de altos niveles de glucosa en sangre y el uso de heparina como

anticoagulante pueden producir, en los reticulocitos, una coloracin plida.
Es importante que la sangre y el colorante se mezclen bien antes de realizar los

extendidos; los extendidos coloreados pueden guardarse por 24h sin afectar los
resultados.
Interpretacin
El conteo de reticulocitos es una herramienta diagnostica importante puesto que el reflejo de la
cantidad de clulas rojas efectivas viables que se producen en la mdula sea. Su utilidad real
es conocer la capacidad de respuesta de la mdula en aquellos casos en los cuales hay
disminucin de las clulas en sangre perifrica y es necesario que la medula aumente su
produccin para as compensar el dficit de dichas clulas.
Esta informacin es de fundamental importancia en el diagnstico de anemias por falla en la

produccin (anemia aplsica) y por aumento en la destruccin (anemia hemoltica).
Cuando se altera la duracin del estadio reticulocitario en la mdula sea, especficamente en
las anemias graves, se emplean otras herramientas de laboratorio para evaluar la produccin
de eritrocitos, como se expresa a continuacin.
Porcentaje corregido de reticulocitos
Tiene por objeto establecer los reticulocitos reales teniendo en cuenta la concentracin de
clulas rojas en sangre perifrica ya que la volemia del paciente afecta su nmero. En otras
palabras, sta correccin debe hacerse cuando se encuentra un hematocrito por debajo del
establecido como normal, aplicando la siguiente formula:
Porcentaje de reticulocitos corregidos =
Porcentaje de reticulocitos x hematocrito del paciente / hematocrito normal
Indice de produccin de reticulocitos (IPR)
Es una medida que estima la tasa de eritropoyesis efectiva en comparacin con la tasa normal
de 1. La evaluacin del IPR se realiza cuando en sangre perifrica aparecen reticulocitos
prematuros y/o clulas rojas nucleadas por estimulacin acertada de mdula sea, la cual
libera a la circulacin reticulocitos recin formados, sin madurar.
Para determinarlo se divide por 2 el porcentaje de reticulocitos corregidos y as se compensa el
tiempo que tomar el reticulocito para madurar en sangre perifrica.
IPR = porcentaje corregido de reticulocitos / 2
INDICES CORPUSCULARES ERITROCITATIOS
Se denominan ndices corpusculares eritrocitarios a una serie de valores, resultado matemtico
de relacionar los datos de concentracin de hemoglobina, de hematocrito y el nmero de
glbulos rojos.
Los ndices eritrocitarios son:
VCM: volumen corpuscular medio
CHCM: concentracin de hemoglobina corpuscular media
HCM: hemoglobina corpuscular media
Estos ndices proporcionan informacin sobre el tamao de los eritrocitos, la cantidad de
hemoglobina en cada eritrocito y la concentracin de hemoglobina de los glbulos rojos y
constituyen la primera aproximacin a la clasificacin morfolgica de las anemias.
VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO

Se obtiene de relacionar el volumen de clulas empacadas (hematocrito) y el nmero de
eritrocitos en millones/mm3.
VCM: Hematocrito (%) / recuento de glbulos rojos en millones/mm3 x 10
El VCM obtenido por los mtodos clsicos tiene la desventaja de la variabilidad y del error que
encierra el recuento de glbulos rojos. Sin embargo, con los mtodos semiautomatizados o
automatizados de contadores de partculas, el VCM es mucho ms confiable. Ejemplo:
Si el hematocrito de un paciente es de 42% y el nmero de eritrocitos 4.500.000/mm 3, el VCM
ser = 42/45 x 10-13 = 93 fL
La unidad clsica del VCM es la micra cbica y en unidades internacionales es el femtolitro (10 15
/L).
El valor de referencia del VCM tiene variaciones dependientes de la edad.
Entre la tercera y la cuarta semana de vida postnatal, el nio alcanza los valores promedio del
adulto.
Este ndice habla del tamao medio de la poblacin eritroide; valores por debajo del rango
normal se denominan poblacin microctica y valores por encima del rango normal se
denominan poblacin macroctica.
Una variacin del VCM de 5 fL, por los mtodos automatizados, puede ser el primer indicio de
alteracin en el tamao celular.
HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA
Esta constante relaciona la concentracin de hemoglobina y el recuento eritrocitario por mm 3.
Representa el peso de hemoglobina por glbulo rojo.
HCM = hemoglobina (g%) / recuento de glbulos rojos en millones/mm 3 x 10
La unidad clsica del HCM es el micromicrogramo (uug es la millonsima de g). en unidades
internacionales se utiliza el picogramo (10-12g). Ejemplo:
Si la hemoglobina de un paciente es 15 g/dL y el nmero de eritrocitos es de 4.900.000mm 3, el
VCM ser:
15 (g%) / 4.9 x 10-6 x 10 = 31 pg
Para obtener los picogramos se pasaron los g a uug (1 g = 10 -12 uug) y los dL a uL (1 uL = 10-6
dL).
Tambin tienen valores de referencia dependiente de la edad:

A los 12 aos ya obtenemos los valores de referencia del adulto que estn entre 28-32 pg.
El HCM es importante en los estados carenciales, especficamente de hierro.
CONCENTRACION DE LA HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA
Proporciona informacin sobre el peso de la hemoglobina en relacin con el volumen de cada
clula roja y se obtiene de acuerdo con la siguiente frmula:
CHCM: hemoglobina (g%) /hematocrito (%) x 100
La unidad clsica ha sido el porcentaje, en tanto la unidad internacional con respecto al L es
g/dL o g/L. Ejemplo:
Si un paciente tiene un hematocrito de 45% y una hemoglobina de 15 g/dL, el CHCM ser:
15 (g%) / 45 % x 100 = 33 %
Esta constante no vara con la edad, el sexo ni la altura sobre el nivel del mar ya que como se
expres es una relacin de peso a volumen.
Los ndices enunciados: VCM, HCM y CHCM se utilizan para determinar el tipo morfolgico de las
anemias, de acuerdo con el dimetro de los glbulos rojos y su contenido de hemoglobina. Se hace
importante comparar siempre los promedios con el aspecto morfolgico de los eritrocitos en el
extendido de sangre perifrica con el fin de comprobar la exactitud y detectar la verdadera
variacin de tamao y contenido de hemoglobina (vese tabla).
Tipo de anemia
Normoctica
normocrmica
Macroctica
normocrmica
Microctica
hipocrmica
VCM
80-100
HCM
27-32
CHCM
32-36
Mayor de 105
27-32
32-36
Menor de 75
Menor de 27
Menor de 32
Una anemia normoctica normocrmica puede relacionarse con hemorragia aguda, anemias
hemolticas, hemoglobinopatas, insuficiencia renal crnica, etc. La anemia macroctica
normocrmica se asocia con anemias megaloblsticas causadas por deficiencia de vitamina
B12 y/o cido flico. La anemia microctica hipocrmica, tpicamente, se asocia con talasemias
y deficiencia de hierro.
EXTENDIDO DE SANGRE EPERIFERICA

Se entiende por extensin sangunea la formacin de una fina pelcula de sangre sobre una
lmina o laminilla.
Objetivos
Realizar extensiones de sangre perifrica en lmina o laminilla.
Actualmente se utilizan en los laboratorios tres mtodos para elaborar extendidos de sangre:
1. extendido en cubreobjetos
2. extendido en portaobjetos
3. extendido automatizado
Mtodo en cubreobjetos o laminilla
utilice dos cubreobjetos cuadrados de 22 mm de lado, escrupulosamente limpios.
En uno de ellos coloque una pequea gota de sangre, de 2 a 3 mm de dimetro.
Con la otra mano sujete un segundo cubreobjeto por uno de sus vrtices y colquelo
sobre el cubreobjetos que tiene la gota de sangre, de manera que forme una figura
semejante a una estrella de 8 puntas. Permita que la sangre se extienda por
capilaridad en las dos superficies.
En pocos segundos deslice los dos cubreobjetos en sentido paralelo a su superficie
con movimiento uniforme y rpido. No deben separase por traccin.
Permita que los extendidos se sequen al aire libre.
Los extendidos estn ahora listos para ser coloreados.
Marque los extendidos, en su rea mas gruesa, con lpiz de grafito.
Esquema de extendido en cubreobjetos o laminillas
Mtodo en portaobjetos o laminilla
Utilice dos portaobjetos escrupulosamente limpios.
Transfiere una pequea gota de sangre de 2 a 3 mm de dimetro, a uno de los dos

portaobjetos, aproximadamente a 1 cm de uno de los extremos.
Coloque la lmina con la gota de sangre hacia la derecha y sostngala con la mano
izquierda en posicin horizontal, con la ayuda de los dedos ndices y pulgares en los
extremos opuestos.
Una segunda lamina o portaobjetos difusor se sostiene con el dedo pulgar en el

borde de uno de sus lados y los cuatro dedos en el otro. Coloque el extremo de esta
lmina difusora al frente de la gota de sangre que est sobre el primer portaobjeto,
de manera que se forme un ngulo de 30 a 40 entre las dos lminas.
Desplace hacia atrs el portaobjeto difusor sobre la gota de sangre que, por
capilaridad, debe esparcirse en las dos terceras partes de su anchura.
Empuje la lmina extensora, rpida y suavemente, sobre la longitud de la lmina

que est horizontal. Extienda asolo las dos terceras partes del largo de la lmina.
La nica presin aplicada debe ser el peso de portaobjetos.
Deje secar el frotis al aire, no soplando sobre el.
Los extendidos estn ahora listos para ser coloreados.
marque debidamente con lpiz de grafito, en la zona ms fuerte del extendido.
En una extensin sangunea en lmina, correctamente realizada deben distinguirse tres zonas
claramente diferenciadas, cabeza, cuerpo y cola.
La cabeza es la zona ms gruesa del extendido, donde se inicia el frotis sanguneo. El cuerpo
ocupa la mayor parte de la extensin, es de espesor uniforme y se convierte en la zona ideal para
el estudio microscopio; all los glbulos rojos deben estar ligeramente superpuestos y con la
depresin central claramente definida. La cola es la parte final de la extensin con una terminacin
irregular, es un rea delgada.
Esquema de extendido en portaobjeto o lmina
Esquema de partes de un extendido
Mtodo automatizado
Las preparaciones automatizadas de extensin en portaobjetos utilizan instrumentos especiales
que, por centrifugacin, proporcionan al bacterilogo un mtodo simple y rpido que garantice
extendidos de buena calidad y de distribucin celular muy homognea. Estas centrfugas se
conocen comercialmente como hemaspinner y hemaprep.
Hoy ya existen en el mercado centrifugas porttiles de bajo peso, conocidas comercialmente como
miniprep, que pueden llevarse al lugar donde se encuentra el paciente. El manejo de estas
centrifugas es relativamente fcil: se coloca una pequea gota de sangre en un portaobjetos (el
tamao de la gota es crtico ara obtener una extensin ideal). Se le aplica una centrifugacin de
5000/min y tras unos segundos se detiene.
Causas de error
Utilizar una gota de sangre demasiado grande o muy pequea lleva a la realizacin
de extendidos gruesos donde las clulas se superponen entre
s, o a extendidos delgados, donde las clulas aparecen muy separadas y

deformadas.
Si la gota de sangre es pequea la extensin queda muy corta y si es grande, se llega

al extremo de la lmina sin que la extensin est terminada.
El espesor del extendido en lmina o portaobjetos depende de la velocidad del

movimiento de la lmina difusora y del ngulo al cual es sostenida. Un ngulo
mayor da lugar a un extendido ms grueso.
La extensin en conjunto, no debe cubrir la superficie total del portaobjetos o del

cubreobjetos.
Si las laminas o laminillas presentan grasa, la extensin presenta huecos o agujeros

sin sangre.
El portaobjetos difusor debe tener los extremos bien esmerilados; de no ser as, la
extensin presentara ondulaciones o surcos.
Esquema de causas de error en un extendido
TINCION DE WRIGHT
Objetivo
Teir extensiones de sangre perifrica con el colorante de wright para lograr el reconocimiento
microscpico de los eritrocitos, leucocitos y plaquetas y estudiar la morfologa normal y las
diferentes alteraciones.
Fundamento
El colorante de Wrigt es un colorante policromtico compuesto de eosina, de composicin qumica
cida, y azul de metileno, de composicin bsica.
Las distintas estructuras celulares se tien con el colorante de pH antagnico; es as como los
cidos nucleicos toman el colorante bsico y la hemoglobina y tiene afinidad con el colorante
cido. Otras estructuras se tien por combinacin de ambas y se llaman neutrfilas.
Extendidos de sangre en lmina o laminilla

Colorante de wright
Tampn de fosfatos (pH 6.4).
Cubetas para tincin
Agua corriente
Cronmetro
Papel de filtro
Mtodo
Es variable y debe estandarizarse en cada laboratorio. Un modelo es el siguiente:
En las cubetas de coloracin coloque los extendidos en un plano horizontal con la

extensin de sangre hacia arriba.
Cubra toda la superficie de los extendidos con wright. El tiempo ptimo de accin del
colorante se determina por ensayo y error cada lote de colorante.
Agregue la cantidad necesaria de agua o tampn para cubrir la lmina o laminilla hasta
formar un cojn Estandarice el numero de gotas de tampn o agua necesarias para
lograrlo.
Sople suavemente el extendido para mezclar, hasta obtener una pelcula uniforma de
apariencia metlica verdosa. Estandarice el tiempo necesario para lograr una coloracin
ptima.
Remueva el colorante con agua corriente manteniendo los extendidos en posicin

horizontal.
El lavado debe ser rpido para evitar la precipitacin del colorante sobre la superficie del
extendido.
Deje secar al aire.
Quite con una gasa humedecida en alcohol, el colorante que queda adherido al dorso de la
lmina o laminilla, teniendo cuidado de que alcohol no tenga contacto con la superficie
coloreada.
Los extendidos en laminilla se pueden montar para uso temporal colocndolos con la
pelcula de sangre hacia abajo y sobre una lmina en la que se ha depositando una gota
de aceite de inmersin. Pueden hacerse preparaciones permanentes con medios de
montaje como Entelln, Por ejemplo.
Mtodos automatizados
Existen en el mercado instrumentos completamente automatizados, para la tincin de lminas,
como el Hemastainer que posee canastas con capacidad de albergar 100 laminas y sumergirlas
en soluciones colorantes a intervalos de tiempo. El proceso completo, incluido el secado, dura
aproximadamente 12 min.
Otro ejemplo es el Hema-tek que colorea lminas en un minuto.
El sistema Larc, clasificador automtico de leucocitos que incluye un microscopio computarizado
que clasifica los leucocitos que normalmente se encuentran en la sangre y una centrifuga que
facilita la obtencin de una capa nica de clulas para hacer el extendido; adems utiliza una
tincin de wright, especialmente desarrollada, que se aplica mediante un instrumento automtico,
capaz de conseguir caractersticas uniformes de una tincin celular.
Aunque los instrumentos automatizados proporcionan, generalmente buenos resultados, es
importante anotar que los procedimientos manuales tcnicamente desarrollados, arrojan resultados
satisfactorios.
Control de calidad
Una tincin de Wright bien preparada y cronometrada funcionara correctamente si la extensin se
ha hecho en forma adecuada. La calidad de la tincin no puede juzgarse cuando la extensin es
gruesa.
El criterio ms fiable sobre la calidad de la tincin y su procedimiento es la forma como se tien los
monolitos. Los autores prefieren comprobar la tincin con una extensin fina preparada con sangre
de lactante, habitualmente rica en monolitos. El ncleo debe tener una estructura vesicular fina, y
en el citoplasma, de color grisceo, deben verse los caractersticos grnulos rosados muy finos. Si
los grnulos monocitarios aparecen gruesos y de color prpura hay que pensar en una falla en la
tincin.
Observaciones
Una tincin satisfactoria debe dar los resultados siguientes:
Glbulos rojos: de rosado a naranja.
Neutrofilos: cromatina prpura oscura, citoplasma rosa plido, grnulos lilas.
Eosinfilos: cromatina prpura oscura, citoplasma azul plido, grnulos naranja brillante.
Basfilos: cromatina prpura oscura, grnulos azul oscuro.
Linfocitos: cromatina prpura oscura, citoplasma azul cielo.
Monocitos: cromatina prpura media, citoplasma azul grisceo, grnulos lila.
Plaquetas: granulomero de violeta a prpura, hialomero azul claro.
Si antes de terminar un lote de colorante la calidad de la coloracin se altera, proceda a
estandarizar de nuevo.
Causas de error en la tincin
Tincin basfila
Extensin gruesa
Exceso de colorante
Lavado insuficiente
Tiempo de tincin prolongado
Tincin cida
Extensin delgada
Exceso de tampn
Poco colorante
Tiempo insuficiente de exposicin al colorante
Hidratacin
Exceso de enjuague
Hidratacin del colorante
Precipitacin
Temperaturas ambientales altas
Lavado insuficiente
Colorante no filtrado
INFORME CORRECTO DEL REPORTE DEL E.S.P

Serie roja: se evalua tamao, forma, color e inclusiones
Anisocitosis Poiquilocitosis Hipocromia Policromatofilia
Se reportan de la siguiente manera:
Ligera:
Moderada:
de 6 a 10 clulas presentan la caracterstica
Marcada:
ms de 10 clulas presentan la caracterstica
Con predominio de: ..............................++
de 1 a 5 clulas presentan la caracterstica
Ej. Anisocitosis marcada con predominio de macrocitos. Hipocroma moderada. Poiquilicitosis

moderada con dacriocitos ++, dianocitos +.
Serie blanca
Se informa cmo se encuentran los leucocitos en nmero (Aumentados, disminuidos, ligeramente
aumentados, normales en nmero...), especificando el tipo de clulas predominantes (con
predominio de neutrfilos...). Anotar tambin las anomalas morfolgicas, granulaciones txicas,
desviacin a la izquierda, hipersegmentacin, linfocitos reactivos, clulas plasmticas y si hay
presencia o no de clulas inmaduras.
Serie plaquetaria
Se informa cmo se encuentran las plaquetas en nmero (normal, aumentadas, disminuidas,
ligeramente disminuidas...) y si se observa la presencia de macroplaquetas. Tambin debe
anotarse si las plaquetas se encuentran dispersas o agregadas.
VELOCIDAD DE SEDIMENTACION DE LOS ERITROCITOS

Objetivo
Determinar, en unidades de longitud y tiempo, la propiedd que tienen los glbulos rojos de
formar pilas de monedas.
Fundamento
Los eritrocitos poseen una carga electrosttica negativa en su membrana, lo cual genera
fenmenos de repulsin que llevan a mantener los glbulos rojos suspendidos, conservando su
individualidad. Esta fuerza de repulsin se denomina potencial zeta.
En condiciones normales, si se coloca la sangre en un tubo vertical, las clulas, por la fuerza
de la gravedad, caen porque son ms densas que el plasma.
Si la carga electrosttica disminuye por alguna causa, los eritrocitos producen mayor cantidad
de pilas de monedas que aumentarn la masa de la partcula y, en consecuencia, la velocidad
de sedimentacin. sta se expresa como la distancia en milmetros por unidad de tiempo,
generalmente una hora, que recorren los eritrocitos al caer.
La sedimentacin se puede determinar por mtodos manuales o automatizados. El mtodo
manual recomendado por el ICSH es el de Westergreen y entre los mtodos automatizados
est el Coulter Zetafuge y el Ves-matic.
Esquema de diferenciacin entre aglutinacin y el fenmeno de rouleaux
Mtodo de Westergreen
Sangre venosa anticoagulada, preferiblemente con EDTA.

Pipeta de Westergreen: pipeta de vidrio graduada en mm (0-200 mm) con una longitud
de 300 mm y un dimetro de 2.5 mm.
Gradilla para sedimentacin de Westergreen. Soporte con un sistema de sujecin para
mantener las pipetas en posicin vertical.
Propipeteadores
Temporizador
Mtodo
Mezclar suavemente la sangre, por inversin, durante un minuto para homogenizar la

muestra.
Con la ayuda del propipeteador aspirar la sangre dentro de la pipeta de Westergreen hasta
la marca 0. evitar la formacin de burbujas. Colocar la pipeta de la gradilla de Westergreen
en forma perpendicular apoyando su parte inferior en el soporte de goma y presionando
fuertemente para evitar la prdida de la muestra. La parte superior de la pipeta se fija en el
extremo de la gradilla.
Marcar una hora en el temporizador.
Al trmino de los 60 min, determinar la distancia recorrida por los eritrocitos en su cada y
reportarla en mm.
Esquema de la gradilla y pipeta de westergreen
Observaciones
la sedimentacin de los eritrocitos se cumple en 3 etapas: un perodo inicial que dura 10

min aproximadamente, durante el cual se construyen las pilas de monedas; en este
periodo la sedimentacin es lenta. Un segundo
perodo ms largo, aproximadamente 40 min, en donde la sedimentacin se realiza ms

rpidamente y a una velocidad constante. Finalmente, una fase de velocidad lenta durante la cual
se realiza el agrupamiento de los eritrocitos que se han sedimentado.
La sedimentacin de los eritrocitos se encuentra afectada por factores propios de los

glbulos rojos, por la composicin del plasma y por factores tcnicos o mecnicos, los
macrocitos caen con mayor rapidez; los microcitos, con menor velocidad que los eritrocitos
normales; el efecto es significativo slo en casos extremos. Los esferocitos y los
drepanocitos pierden la propiedad de formar pilas de monedas, por lo cual aquellas
entidades que cursan con presencia de estas estructuras presentan una sedimentacin
disminuida o nula. El nmero de glbulos rojos por unidad de volumen de sangre modifica
la sedimentacin; sta es inversamente proporcional al nmero de eritrocitos. En la anemia
se aumenta la sedimentacin, ya que un nmero pequeo de partculas tiene ms facilidad
para formar pilas de monedas en un volumen mayor de plasma; por el contrario, en las
policitemias la sedimentacin es escasa o nula. Las variaciones en la composicin del
plasma afectan la sedimentacin; el aumento de las molculas proteicas del plasma,
especialmente el fibringeno y las globulinas, aceleran la eritrosedimentacin. Estas
protenas actan disminuyendo el potencial zeta y favoreciendo la formacin de pilas de
monedas. Por esto la sedimentacin se encuentra aumentada en aquellas entidades
caracterizadas por hiperfibrinogenemia, (infeccin, necrosis tisular), normalmente en el
embarazo o cuando hay aumento en la cantidad de inmunoglobulinas (mieloma mltiple).
Los factores tcnicos o mecnicos tienen que ver con el calibre y la longitud de la pipeta
de sedimentacin. El dimetro interior de la pipeta influir en los valores; as un dimetro
menor de 2 mm disminuye la velocidad de sedimentacin por la dificultad que tienen las
clulas para descender; en cambio, la sedimentacin es ms rpida en pipetas de mayor
calibre. La altura de la columna de sangre influye sobre el resultado: cuanta ms alta sea
dicha columna, ms rpida ser la primera fase de sedimentacin, a causa del retraso del
apilamiento de las clulas, en el fondo. La concentracin y el tipo de anticoagulante
utilizado puede afectar el tamao de los hemates y alterar la sedimentacin. El EDTA
produce un efecto mnimo sobre ellos. En cuanto a la posicin de la pipeta, cabe anotar: si
sta pierde grados mnimos de verticalidad, la velocidad de sedimentacin se acelera. La
influencia de la temperatura en nuestro medio no es muy significativa.
La temperatura del laboratorio debe mantenerse entre 20 y 25C. si la sangre ha estado

refrigerada, debe recuperar la temperatura ambiente antes de proceder a estudiarla. Las
burbujas de aire atrapadas en la pipeta denotan mal llenado y afectan el descenso de los
hemates y el ascenso del plasma. Sobre el factor tiempo, se sabe que la velocidad de
sedimentacin permanece invariable durante casi 12 h sise conserva a 4C y la sangre ha
sido anticoagulada con EDTA.
Mtodos automatizados
Los sistemas de eritrosedimentacin automatizados proporcionan resultados equiparables a los
obtenidos por el mtodo manual de Westergreen.
Un sistema es el llamado Diese que utiliza unos tubos especiales compatibles con los vacutainer
estndar; estos tubos tienen anticoagulante incorporado. Se colocan verticalmente para luego
proceder a las lecturas (0,30 y 60 min) mediante sensores de luz infrarroja que miden el descenso
del nivel de opacidad con respecto a la primera.
Las diferencias de tamao y de dimetro entre las columnas de sangre del mtodo Westergreen y
el Diese, hacen que los resultados obtenidos mediante el sistema Diese a los 30 y 60 mi
correspondan a la primera y segunda hora del mtodo de Westergreen.
El Zetafuge es un sistema que utiliza la centrifugacin de unos capilares en posicin vertical en
cuatro ciclos de 45 s cada uno. Esta centrifugacin comprime y dispersa los eritrocitos lo que
origina la sedimentacin. Los capilares son ledos de forma semejante a los del hematocrito, dando
un resultado, en porcentaje, es la velocidad de sedimentacin zeta.
Hombres:0 -10 mm/hr

Mujeres: 0 - 20 mm/hr
Nios: 0 - 15 mm/hr
SICKLEMIA
Anemia falciforme o Drepanoctica: Es una enfermedad homocigotica de la Hbs en el cual el cido

glutminico del aminocido en la sexta posicin sobre la cadena B es sustituido por la valina.
La sustitucin se realiza en la carga y por lo tanto en su movimiento electrofontico.
La Hb s es libremente soluble cuando se encuentra completamente oxigenada. Al eliminarlo ocurre
la polimerizacin de la Hb anormal formando tactoides rgidos que deforman la clula de all su
nombre.
Hay que tener en cuenta que debemos diferenciar entre una anemia falciforme y un rasgo
falciforme, para ello es necesario una electroforesis de Hb, lo cual la anemia falciforme va a revelar
una banda nica anormal de la Hb S (90 100 %) y el resto de Hb F; mientras que un rasgo
falciforme tambin presenta una banda de Hb s a diferencia de los hemates que contienen de 20 a
40% de
Hb A.
El tipo de anemia es homocgotica normocrmica dependiendo de la variabilidad en el grado de

anemia que presente el paciente.
Mtodos
Mtodo de Metabisulfito de sodio al 2.

Mtodo de Solubilidad en tubo.
Test cualitativo de Siclindex.
Mtodo de sangre completa en cmara cerrada.
Mtodo de metabisulfito de sodio al 2%.

Fundamento
La sangre se mezcla con Metabisulfito de sodio, un agente de reduccin fuerte que desoxigena la
Hb. Se forman Clulas en presencia de Hemoglobina S.
Reactivos
Metabisulfito de sodio al 2%
Metabisulfito de sodio al 0,2 gr.
Agua destilada 10 ml.
Muestra
Sangre venosa con anticoagulante (EDTA) o sangre capilar.
Tcnica
1. Se pone una gota de sangre en una lmina.

2. Se aaden dos gotas de Metabisulfito de sodio al 2% a la muestra de sangre y se mezcla
bien.
3. Se cubre la mezcla con un cubreobjetos.
4. Se extrae el excedente con una gasa o con un papel de filtro ejerciendo una suave presin sobre
el cubreobjetos, se sella alrededor de la laminilla con parafina o vaselina.
5. Se examina la preparacin para buscar clulas falciformes inmediatamente, a los 15 minutos, a
los 30 minutos, a la hora y a las 2 horas.
6. Se da el resultado positivo, si se hallan clulas falciformes dentro de las 24 horas de montada la
muestra.
NOTAS
1. Un control negativo debe usarse con cada prueba.
2. Esta prueba no puede distinguirse entre Sicklemia y el rasgo hereditario de sikclemia. Otros
criterios tienen que tomarse en cuenta como: Condicin fsica, morfologa de los glbulos rojos,
hemoglobina y la historia mdica de la familia.
3. El resultado positivo siempre indica la presencia de Hb S en forma homocigota o en forma

heterocigota. Si se sospecha de una Hbs cuyo resultado de Sicklemia sea negativo debe repetirse
la prueba y confirmar con electroforesis de hemoglobina para el diagnstico.
Causas de error
Por falsos negativos
1. Cantidad de Hb S pequea, menor de 7 g%.
2. Deterioro del agente reductor.
3. Exceso de muestra.
4. Burbujas de aire debajo del cubreobjetos.
Falsos positivos
1. Desecamiento de la lmina.
RECUENTO DE LEUCOCITOS
Existen dos mtodos para el conteo de leucocitos: el manual y el electrnico.
Mtodo manual
Objetivo
Contar el nmero de glbulos blancos por milmetro cbico o por litro de sangre total
Fundamento
La sangre mezclada con la solucin diluente, acido actico al 3%, hemoliza las clulas rojas: esta
dilucin se coloca en la cmara de neubauer para visualizar y contar los leucocitos.
Sangre venosa con EDTA o sangre capilar

Acido actico al 3%
Micro aspirador
Pipeta para dilucin de leucocitos
Cmara de neubauer
Laminilla de cuarzo
Microscopio
Agitador elctrico
Mtodo
Mezcle suavemente la sangre, por inversin para lograr la homogenizacin de la

muestra.
Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 0.5 exactamente; haga uso
del microscopio.
Limpie las paredes externas de la pipeta para que no contamine el lquido diluente.
Aspire el cido actico hasta la marca 11, exactamente.
Sujete la pipeta entre los dedos pulgar e ndice, desprenda el micro aspirador y agite la
pipeta en forma horizontal durante tres minutos para obtener la hemlisis total de las
clulas rojas o lleve la al agitador elctrico.
Para llenar la cmara de neubauer realice los siguientes pasos:
1. coloque la laminilla de cuarzo sobre la cmara y verifique su limpieza mediante

observacin microscpica.
2. Con el dedo ndice tape el extremo superior de la pipeta y colquela en forma
vertical.
3. Descarte las cuatro primeras gotas de la dilucin para eliminar el contenido del
capilar que no contiene leucocitos.
4. Use el dedo ndice para controlar la gota que sale de la pipeta, con la cual va a
llenar los retculos de la cmara.
5. Coloque la cmara sobre la platina del microscopio y espere aproximadamente un
minuto para iniciar el conteo.
6.
Use el objeto de bajo poder 10x para observar la distribucin de las
clulas en la cmara y ajustar la intensidad de la luz de manera que
visualice
mejor
las clulas blancas.
7. Cuente
todos los leucocitos contenidos en los
cuatro
cuadrados grandes de las esquinas
siguiendo
las mismas instrucciones que para el
recuento
de glbulos rojos (vase figura 1).
Esquema de
cmara de neubauer
A
1/5
mm
B
1
mm
E
D
recuento de glbulos blancos en la
Recuento de leucocitos x100

Recuento corregido = --------------------------------------------------------------------100 + numero de clulas nucleadas rojas x100 cel blancas
Clculos
El recuento de leucocitos por milmetro cbico se calcula teniendo en cuenta:
1.
2.
3.
4.
constante del tamao y profundidad de la camara ( 10 )

numero de clulas contadas
dilucin empleada 1:20
numero de cuadrantes contados en la camara ( 4 )
Dilucin x constante de la cmara

Leucocitos / mm3 = -------------------------------------------------------Numero de cuadrantes contados
20 x 10
Leucocitos / mm3 = --------------------- = 50
4
Leucocitos / mm3 = numero de leucocitos contados x 50
Observaciones
Cuando el paciente presenta leucopenia con una cifra igual o inferior a 2500 / mm3 la
muestra de sangre debe aspirarse hasta la marca uno para obtener una dilucin de 1:10
(El factor de multiplicacin es de 25 ).
En ciertas situaciones como la leucemia. El recuento de leucocitos puede ser

extremadamente alto, por lo cual se emplea la pipeta de glbulos rojos hasta la marca uno
(1:100) o hasta la marca 0.5 (1:200)
Los factores de multiplicacin sern 250 y 500 respectivamente.
a mayor nmero de clulas contadas menor ser el error estadstico. La diferencia entre el
valor menor y el mayor en los cuatro cuadrantes no debe exceder de 10 clulas cuando se
cuentan los ocho cuadrados esta diferencia no debe ser mayor de 15 leucocitos. El
porcentaje de error es 15%.
En algunas entidades hematolgicas, la presencia de eritroblastos circulantes aumentan el

recuento de leucocitos ya que son clulas nucleadas, y el cido actico no las destruye.
Por esto se hace necesario corregir el recuento inicial con la siguiente frmula
Recuento inicial x 100

Leucocitos / mm3 = -------------------------------------------------------100 leucocitos + nmero de eritroblastos encontrados en el
Recuento diferencial
Ej. Si el recuento inicial de leucocitos es de 25.000/mm3, al realizar el recuento diferencial, en
100 clulas blancas encontramos 25 eritroblastos
25.000 x 100
Rto corregido = ---------------- =
125
20.000 leucocitos/mm3
Para definir los valores de referencia del recuento de leucocitos deben tenerse en
cuenta las siguientes variables fisiolgicas:
Edad: al nacer el nmero de leucocitos puede oscilar entre 9.0 y 30,0 x 10 9 /L;
disminuye progresivamente y alcanza en la adultez un valor de 4,5 a 11x10 9 /L. en el
anciano el promedio de leucocitos es de 5,8 x 109 /L.
Desviacin de las condiciones basales como estrs fsico y estrs emocional, las
cuales llevan a una leucocitosis a expensas del compartimiento marginal.
Embarazo. En el embarazo se observa leucocitosis hasta de 18,0 x10 9 /L; aparece a

partir del tercer mes, aumenta progresivamente Hasta el momento del parto y empieza
a normalizarse a partir del Segundo da posparto.
Raza. Se ha encontrado que los individuos de raza negra presenta una ligera
leucopenia.
Mtodo electrnico
El principio es el mismo que para el conteo de eritrocitos; la diferencia radical en que las
clulas rojas se lisan antes de iniciar el conteo. Para esto se utiliza una saponina que, en el
sistema Coulter, se denomina zapoglobin.
Recuento diferencial de leucocitos o frmula leucocitaria
Objetivo
Determinar el valor relativo y el valor absoluto de cada tipo de clula blanca presente en el
extendido de sangre perifrica, coloreado con Wright.
Fundamento
En los extendidos de sangre coloreados con Wright, las clulas blancas obtienen patrones
morfolgicos caractersticos reconocibles microscpicamente, lo cual permite identificar cada
uno de los leucocitos presentes en sangre perifrica. Al mismo tiempo, se realiza un estudio de
la morfologa de los eritrocitos, los leucocitos y las plaquetas a la vez que se hace un
estimativo burdo de su recuento.
Extendido de sangre perifrica en laminilla y coloreado con Wright.

Aceite de inmersin.
Microscopio
Mtodo
Coloque la lmina sobre la platina del microscopio.

Examine el extendido de sangre utilizando el objetivo de bajo poder 10x, con el propsito
de:
Establecer el control de calidad. La garanta de calidad de los recuentos diferenciales comienza

con una adecuada extensin sangunea; la tincin de los monolitos constituye el criterio ms fiable
para juzgar la coloracin de Wright.
Las clulas blancas deben estar uniformemente distribuidas, recuerde que el extendido en la
laminilla, la distribucin de los leucocitos es ms uniforme, mientras que las extensiones en lmina
producen casi siempre una marginacin leucocitaria inaceptable, que condiciona recuentos
diferenciales inexactos.
Estime el nmero de clulas blancas que debe estar de acuerdo con la valoracin cuantitativa que
usted obtuvo. Si no lo est, el recuento leucocitario debe repertirse.
Examine los bordes de los extendidos hechos en lmina; si hay agregados plaquetarios es esta
rea, el extendido muestra una disminucin en el nmero de plaquetas. En esta situacin descarte
el extendido y realice otro.
Escoja la porcin del extendido donde slo se observe una ligera superposicin de los eritrocitos.
Coloque una gota d aceite de inmersin y cuidadosamente cambie al objetivo de 100x.
Con el objetivo de 100x realice el recuento diferencial y observe la morfologa de las clulas
blancas. Empiece en la porcin delgada del extendido, donde las clulas rojas estn ligeramente
superpuestas; gradualmente mueva la lmina, desde el borde superior externo del extendido hasta
el borde inferior externo, contando y clasificando cada leucocito en los campos sucesivos. Contine
en esta forma hasta que cuente el nmero requerido de clulas el registro se hace en papel o
tabuladores mecnicos.
Mientras cuenta las clulas blancas tome nota de cualquier anormalidad morfolgica presente en
ellas. Observe la morfologa eritroide. Anote cualquier
variacin de lo normal y proceda a semicuantificar para realizar el informe y la morfologa y nmero
de plaquetas. Un extendido normal debe tener aproximadamente 8-20 plaquetas por campo. Un
mtodo para estimar burdamente el nmero de plaquetas es determinar el nmero promedio por
campo, utilizando entre 5 y 10 campos diferentes y multiplicando este resultado por 20.000 (para
extendidos en lmina).
Observaciones
El recuento diferencial y la revisin del extendido deben realizarse una vez hechas las
mediciones cuantitativas del hemograma.
El nmero de clulas por contar viene dado por el recuento leucocitario: 100 para un
recuento normal, 300 para un recuento entre 20.000 y 50.000/mm 3 o 20-50x109 /L y de
400 a 500 para recuentos superiores a 50.000/mm 3 o 50x109 /L. si se conocen por la
frmula leucocitaria los porcentajes relativos y se sabe el recuento leucocitario total,
nada impide calcular los valores absolutos as:
Nmero absoluto de clulas por L= porcentaje de cada tipo de clula en el diferencial x

recuento de leucocitos por L.
Si un diferencial muestra:
Ms de 10% de eosinfilos
Ms de 2% de basfilos
Ms de 12% de monocitos,
Ms linfocitos que neutrfilos (excepto en los nios), se deben contar 200 clulas.
Estos resultados se dividen por 2 y se anota claramente en el informe que fueron
contadas 200 clulas.
El informe de la presencia de eritroblastos debe incluir.
Nmero de eritroblastos por 100 clulas blancas.
Caracterizacin morfolgica.
Nmero de eritroblastos por mm3 .
El porcentaje de error en el recuento diferencial se ha descrito entre el 10% y el 15%; esto

se da tanto por la distribucin al azar en pequeas muestras como por el error del
observador. Es necesario que los bacterilogos que realizan el recuento diferencial tengan
un adecuado conocimiento de la morfologa celular se deben seguir criterios uniformes
dentro del laboratorio para identificar las clulas, aunque lo ideal es que lo sean tambin
entre todos los hematlogos. Con respecto ala segunda fuente de error, parece ocurrir
porque la concepcin de los que es una banda neutrofila, cuando se compara con un
neutrofilo maduro o un monolito, cuando se compara con un linfocito atpico, no es igual en
todos los hematlogos.
La precisin del mtodo manual mediante el anlisis repetido de la misma

muestra es
relativamente buena para los neutrfilos y linfocitos y baja para los leucocitos restantes
especialmente aquellos que se encuentran en muy escasa proporcin como los basfilos.
Igualmente, es estudio de la exactitud realizado mediante el anlisis comparativo de los
resultados obtenidos pos observadores diferentes, nos pone de manifiesto la linealidad
para neutrfilos y linfocitos, en menor escala para monocitos, bandas y eosinfilos y
prcticamente nula par los basfilos.
Cuando el recuento de clulas blancas es menor de 1.000 es difcil encontrar clulas en el

extendido de sangre; en esta situacin el diferencial se realiza contando 50 clulas. Esto
debe anotarse claramente en el informe.
Variaciones Fisiolgicas
La formula diferencial varia con la edad el nio, en trminos generales, posee mas
linfocitos que el adulto normal, y alrededor de los 10 aos comienza a estabilizarse en los
valores normales del adulto; el anciano presenta un recuento de leucocitos entre los 3.100
y 8.500 / mm3 o 3,1-8,5x109 / L y el recuento diferencial tiene una media de 65
10% de
polimorfonucleares neutrfilos y linfocitos de 30
9%.
En el embarazo, y sobretodo durante el ultimo trimestre, hay un aumento de

polimorfonucleares neutrofilos y bandas neutrofilas.
Variaciones patolgicas
Neutrofilia: incremento absoluto en el nmero de neutrofilos: apendicitis, infecciones

bacterianas, leucemia mieloide crnica.
Eosinofilia: incremento absoluto del nmero de eosinfilos: reacciones alrgicas, fiebre

escarlata, infecciones parasitarias, leucemia eosi-noflica.
Linfocitosis: incremento absoluto en el nmero de linfocitos: infecciones virales, tos ferina,

mononucleosis infecciosa, leucemia lifoctica crnica.
Monocitosis: incremento absoluto del nmero de monocitos: brucelosis, tuberculosis

leucemia monoctica, endocarditis bacteriana subaguda, fiebre tifoidea, infecciones por
rickettsia, enfermedades de colgeno, enfermedad de Hodgkin, enfermedad de gaucher.
PLAQUETOGRAMA
Las plaquetas o trombocitos constituyen el elemento forme ms pequeo de la sangre; su
evaluacin en el hemograma manual usualmente slo se realiza en los extendidos coloreados. En
el electrnico, su estudio aporta, adems del valor numrico, otros parmetros de importancia
diagnstica, tales como promedio del volumen plaquetario e histograma plaquetario. A esta
valoracin la llamamos plaquetograma.
Recuento de plaquetas
Existen dos mtodos para el conteo de plaquetas: manual y electrnico.
Mtodo manual
Objetivo
Contar las plaquetas existentes en un milmetro cbico o en un litro de sangre total.
Fundamento
El conteo de plaquetas se realiza en sangre anticoagulada con EDTA y diluida con oxalato de
amonio al 1% o citrato de sodio al 3,8%, mediante el uso de la pipeta para dilucin de hemates y el
hemocitmetro.
Sangre anticoagulada con EDTA.

Solucin de oxalato de amonio al 1% o solucin de citrato de sodio al 3,8%.
Pipeta para dilucin de hemates.
Cmara de recuento de Neubauer.
Laminilla de cuarzo.
Microaspirador.
Caja de petri con papel de filtro humedecido.
Agitador elctrico de pipetas.
Microscopio.
Mtodo
Mezcle cuidadosamente, por inversin por lo menos 30 veces, la sangre anticoagulada con
el fin de obtener una muestra homognea.
Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 1,0 exactamente; haga uso del
microaspirador.
Elimine el exceso de sangre de las paredes externas de la pipeta para no contaminar la

solucin diluente.
Aspire el lquido diluente hasta la marca 101 exactamente.
Sujete la pipeta entre los dedos ndice y pulgar, desprenda el microaspirador y agite la
pipeta en forma horizontal durante 3 min o llvela al agitador elctrico.
Deje reposar la pipeta por 10 minutos si est trabajando con oxalato de amonio con el fin
de lograr la hemlisis total de los glbulos rojos. En caso de trabajar con citrato de sodio
omita este paso.
Agite nuevamente.
Descarte las primeras 4 gotas para eliminar el lquido del capilar e inmediatamente llene la
cmara.
Llene el hemocitmetro en ambos lados y coloque en ambiente hmedo por 10 min. El

ambiente hmedo se logra cubriendo la cmara con un plato de petri que llevar adherido
un disco de papel de filtro humedecido con agua.
Coloque la cmara en el microscopio. Enfoque con objetivo de 40x y observe el llenado de

la cmara. No debe haber agregados plaquetarios. Cuidadosamente enfoque el cuadrado
central.
Disminuya la intensidad de la luz. As le ser ms fcil distinguir y contar las plaquetas.
Las plaquetas se reconocen como estructuras pequeas, opacas, redondas o alargadas,

medianamente refrctiles, y a veces con prolongaciones.
El nmero est determinado por el conteo de los 25 cuadrados en que subdivide el

cuadrado central, descartando las plaquetas que tocan las lneas derecha e inferior.
Clculo
El nmero de plaquetas por mm3 se calcula de acuerdo con:
Volumen del rea contada: 0,1mm3 (1x1x0, 1).

Dilucin utilizada: 1:100.
Nmero de clulas contadas.
Plaquetas/mm3 = nmero de clulas contadas x 1 x dilucin / volumen de rea contada

Plaquetas/mm3 = B x 10 x 100
Plaquetas/ mm3 = Bx 1.000
El rango normal para el recuento de plaquetas es de 150.000 a 400.000/mm 3 o 150 a 400 x 109 / L.
Observaciones
Las plaquetas se cuentan ms fcilmente utilizando microscopio de contraste de fase, pero

si el microscopio de luz se adecua correctamente y el conteo se hace con un estricto
control de calidad el resultado ser igualmente confiable. Especial atencin debe tenerse
con las soluciones diluentes. stas no deben estar contaminadas, pues tanto las partculas
como las bacterias pueden simular plaquetas. Los lquidos diluentes se deben mantener
refrigerados y filtrar antes de su uso. La limpieza del hemocitmetro y de las pipetas es
importante en este procedimiento.
Si se observan agregados en el recuento, el procedimiento debe repetirse. El uso de EDTA

como anticoagulante ayuda a disminuir la agregacin plaquetaria. La diferencia del nmero
de plaquetas entre los dos cuadrados centrales de la cmara no debe ser mayor de 10
plaquetas. el rango de error para el recuento de plaquetas en el microscopio de luz es de
16-25%2 ; para el microscopio de contraste de fase es de 8- 10% 3. no se debe informar el
recuento de plaquetas sin confrontarlo con el extendido de sangre perifrica, coloreado con
Wright.
Mtodo electrnico
El recuento de plaquetas por mtodos electrnicos se caracteriza por su alto grado de precisin
coeficiente de variacin menor de 4%- . ste se realiza, en la mayora de los equipos, al mismo
tiempo que el recuento de eritrocitos.
Identificacin de las plaquetas coloreadas con wright
Objetivo
Con objetivo de 100x identificar morfolgicamente las plaquetas coloreadas con wright en
extendidos de sangre perifrica y apreciar su nmero por campo.
Fundamento
Los extendidos hechos directamente con sangre sin anticoagulante se colorean con wright para
observar su apetencia tintorial, su morfologa y su nmero.
Sangre sin coagulante.

Portaobjetos o cubreobjetos.
Colorante de wright.
Microscopio.
Aceite de inmersin.
Mtodo
Realice por lo menos cuatro extendidos en cubreobjetos o en portaobjetos, segn lo

prefiera. Tia con wright.
Coloque al microscopio y observe en 10x para calificar la calidad de la muestra en cuanto a

coloracin y extensin. Si el extendido est tcnicamente perfecto coloque el objetivo de 100x
e identifique las plaquetas. stas presentan una tonalidad levemente basfila, lo cual permite
detallar una zona central granular llamada crommero y una zona perifrica ms clara
denominada hialmetro. Observe el tamao de la plaqueta circulante. Normalmente est entre
2 y 4 u.
Correlacione el nmero de plaquetas observadas con el recuento obtenido en cmara.

Usualmente se observan de 8 a 20 plaquetas 4 individuales por campo con objetivo de alto
poder.
Frecuentemente se pueden observar, en bajo porcentaje, algunas plaquetas con tamao

mayor, llamadas megatrombocitos.
Informe la presencia de agregados planetarios como un hallazgo normal. Su ausencia

puede estar asociada con ingestin de medicamentos que inhiben el proceso de
agregacin.
Anormalidades de tamao o granularidad se deben observar e informar
TROMBOCITOS, HEMOSTASIA Y COAGULACIN SANGUNEA
Trombocitos
Introduccin
Cuando las plaquetas se descubrieron por primera vez, existi bastante confusin en torno a su
naturaleza y funcin. de hecho algunos autores pensaron que las plaquetas eran artefactos.
Donne1 hizo la primera descripcin de las plaquetas; pens que eran producidas por las partculas
grasas del quilo. Bizzozero 2 las estudi en los vasos mesentricos de los animales y descubri sus
cualidades de adhesividad, su participacin en la formacin del trombo y su papel en la
coagulacin sangunea.
Despus de un desarrollo gradual del concepto de que las plaquetas eran partculas celulares, en
1910 se demostr que procedan de los megacariocitos.
Las propiedades fsicas de las plaquetas estn relacionadas con los efectos de las superficies
extraas y del ambiente en que se hallan. sus propiedades son:
Adhesividad. Es la propiedad de adherirse a otras partculas, superficies, bacterias. La

adhesividad plaquetaria juega un papel importante en la hemostasia porque se adhieren al
endotelio lesionado. Esta caracterstica puede ser el resultado de una carga negativa
superficial o puede depender de factores plasmticos adsorbidos en su superficie (Factor
Hageman, trombina) que se hallan normalmente en medios pobres en calcio pero que
contengan euglobulina, esta posee propiedades de retraccin del cogulo y de aceleracin
de su formacin que se reducen durante las reacciones de hipersensibilidad.
Las plaquetas pueden sufrir aglutinacin mediante la cual permanecen unidas hasta que se
rompen.
La metamorfosis viscosa consiste en la formacin de grandes cogulos, amorfos y hialinos

con prdida de la identidad plaquetaria durante el proceso. Esta propiedad puede estar
relacionada con la aglutinacin, pero tiene lugar en presencia de iones calcio y de la
fraccin globulina del suero.
Formacin de plaquetas
La formacin de trombocitos ocurre su mayor parte en la medula sea a partir de las clulas
reticulares multipotenciales primitivas (hemohistioblastos). El pulmn parece ser otra fuente de
megacariocitos, con formacin posterior de plaquetas. Sin embargo, algunos autores creen que los
megacariocitos pulmonares son clulas ya gastadas.
La clula ms primitiva es el megacarioblasto, que mide de 25 a 35 u y es redondo u oval con uno
o dos ncleos y de dos a seis nuclolos pequeos e indiferenciados.
El citoplasma tiene un relacin nucleocitoplasmtica de 10/1, es irregular y basfilo, y
ocasionalmente muestra extrusiones irregulares.
La siguiente clula en el proceso de maduracin es el megacarioblasto en el que, tras repetidas

divisiones nucleares, se origina el megacariocito, cuyas dimensiones son de 25 a 50 u; el ncleo es
de forma irregular, grande, ms apretado que la clula blstica y lobulado, pero nico. Contiene de
cero a dos nuclolos; el citoplasma es moderadamente basfilo y contiene, en ocasiones, algunos
grnulos azurfilos.
El siguiente progenitor es el megacariocito. Mide 40 a 100 u y su ncleo es polipoide, pleomrfico
multiforme, pero nico con una cromatina irregularmente distribuida. El nmero de nuclolos puede
ser grande o no existir. El citoplasma es abundante y plido con grnulos azurfilos finos. En los
cultivos in Vitro se aprecia que los megacariocitos presentan en el citoplasma numerosos
seudpodos en ocasiones estos seudpodos son filiformes y que sus extremos salen las
plaquetas.
Las plaquetas normales de sangre perifrica tienen un dimetro de 2 a 4 u y un volumen de 7 a 8
u3 .Son esfricas, ovales o en forma de bastn. El citoplasma contiene grnulos que a veces se
agrupan en el centro de la plaqueta, dando el aspecto de un granulmero en contraste con el
citoplasma o hialmetro. Cuando los grnulos estn estrechamente unidos, dan el aspecto de un
ncleo, pero esta estructura nunca se ha demostrado en una plaqueta.
La trombopoyesis puede estar bajo control humoral. Se ha demostrado que el plasma de los
conejos anmicos existe una fraccin termoestable soluble en ter que aumenta el nmero de
plaquetas de las ratas normales cuando se les administra oral o parenteralmente. Adems, existen
pruebas de que la produccin de plaquetas est regulada por el nmero de plaquetas circulantes, y
que esta regulacin est producida por un mecanismo humoral.
Parece ser que la destruccin de plaquetas sea un proceso casual; las plaquetas se consumen a
medida que se necesitan. Algunos autores han comprobado que las plaquetas desaparecen de la
sangre cuando envejecen. No se ha establecido definitivamente la vida media de las plaquetas,
pero parece ser de 9 a 11 das en los estudios efectuados con Cr -51 o con difluorfosfato marcado
con P32
Funcin de las plaquetas
las plaquetas toman parte en la vasoconstriccin. Aunque la vasoconstriccin puede ser un

mecanismo hemosttico primario, puede tambin ser secundario a la formacin de
acumulos plaquetaros y quizs tambin a un factor vascular mal definido que falta en la
enfermedad de willebrand. Se ha pensado que la vasoconstriccin puede verse reforzada
por un factor que se libera en las plaquetas (por ejemplo la serotonina). Sin embargo, la
importancia de este factor en la hemostasia se esta poniendo en duda porque la deplecin
de serotonina no da lugar a ninguna alteracin demostrable de hemostasia.
hay dos reacciones bsicas que deben ocurrir para que se coagule la sangre: una
suficiente cantidad de tromboplastina activa y una conversin de protrombina en trombina
la disminucin del numero de plaquetas o la presencia de plaquetas anmalas hace que no
se forme el coagulo. La liberacin del factor plaquetario 3 (factor 3 similar ala
tromboplastina) al lado de la lesin vascular es especialmente necesaria para la formacin
de tromboplastina activa y la posterior formacin de fibrina. La formacin de fibrina tambin
facilita la eliminacin de los cuerpos extraos circulantes (bacterias y virus).
de las plaquetas pueden extraerse diversos factores qumicos; cada uno de ellos posee
sus especiales propiedades fisiolgicas. Entre estos factores qumicos estn las
antitrombina, las sustancia similares a la tromboplastina, catalizadores e histamina estos
factores se liberan junto al lugar de la lesin vascular y toman parte en la formacin del
coagulo.
Es importante que exista una relacin cuantitativa entre el numero de plaquetas y la

retraccin del coagulo; por ello, en la sangre trombocitopenica hay normalmente, aunque
no siempre, una defectuosa retraccin del coagulo (otros factores son la concentracin de
fibrinogeno y la cantidad disponible de fibrina). Parece haber cierta relacin entre este
proceso y el trombo embolismo. Debido a las propiedades de adhesin y aglutinacin que
tienen las plaquetas, estn asociadas con la formacin de fenmenos tromboembolicos y
la absorcin de factores de coagulacin. Tambin es posible que la retraccin de l coagulo
sea, en efecto, una ligadura fisiolgica que mantiene unidos los bordes del vaso lesionado
y asegura la hemostasia.
En resumen, puede decirse que la actividad plaquetaria es precisa para que tenga lugar la
coagulacin. Cuando las plaquetas se lisan o degeneran se libera una sustancia
fosfolipdica. Es esencial para la segunda fase de la formacin del coagulo, en la que es
fundamental la generalizacin de troboplastina. Finalmente la ruptura de las plaquetas se
lleva a cabo mediante el contacto con superficies extraas, mediante la trombina y
posiblemente por la accin de los factores activos de contacto existentes en el plasma y en
el suero.
Recuento de plaquetas
El principio del recuento de plaquetas es independiente de la tcnica utilizada. Se basa en la
facilidad con que las plaquetas aglutinan y se adhieren a una superficie extraa, necesitando de
especiales precauciones durante la toma de sangre y efectuando una rpida dilucin en la solucin
anticoagulante. El pequeo tamao de las plaquetas hace que el recuento directo en un
hemocitometro sea mas difcil que cuando se trata de otras clulas. En el mtodo directo el
recuento de plaquetas se calcula durante el recuento leucocitario. En el mtodo directo con cmara
de recuento, se mezcla la sangre venosa o capilar en una pipeta eritrocitica con un lquido
diluyente. Es preciso actuar con rapidez para evitar la aglutinacin de las plaquetas; las dems
clulas pueden o no destruirse segn el liquido de dilucin utilizado con frecuencia, suelen persistir
los hemates y las plaquetas se encuentran en un hemocitometro.
Es difcil contar las plaquetas porque se aglutinan, fragmentan y rompen con facilidad y rapidez.
Debido a su pequeo tamao es difcil diferenciarlas en la tincin de grasa y residuos. Otro
inconveniente en su adhesividad al vidrio as como a cualquier partcula extraa. Adems las
plaquetas no estn uniformemente repartidas por la sangre. El error es, pues, mucho mayor que en
el recuento de leucocitos y hemates pero es despreciable en la practica porque solamente se
valoran las grandes variaciones en el numero de plaquetas.
Mtodo directo
A este mtodo pertenecen las siguientes tcnicas la de rees ecker utilizando microscopio de luz, el
mtodo unopette, el mtodo del microcopio de contraste de fases y el mtodo de recuento
electrnico especialmente el del contador coulter.
Mtodo de Rees- Ecker con microscopio de luz
Se utiliza una pipeta de hemates, llenndola de sangre hasta la seal 0,5. el lquido de dilucin se
lleva hasta la seal 1 y se mezclan durante 3 a 5 minutos. Se desprecian las primeras gotas y se
llenan dos cmaras del hemocitmetro. Estas dos cmaras se cubren con una placa de Petri que
contenga papel de filtro hmedo. Despus de 15 minutos se cuentan las plaquetas utilizando un
ocular de 10x.
Las ventajas de esta tcnica son:
Los trombocitos pueden contarse a la vez que los eritrocitos.
Las plaquetas son cuerpos redondos muy refringentes de color lila azulado, cuyo dimetro
es a 1/5 del dimetro del hemate.
La sangre venosa da resultados mas reproducibles porque puede recogerse con un tubo
de ensayo siliconado sin prdida de plaquetas debido a la adhesividad que tienen respecto
al vidrio. Tampoco se precisa utilizar vaselina sobre la piel, por lo que la contaminacin con
lquidos titulares es mnima.
Los inconvenientes de este mtodo son los siguientes:
Es importante un ajuste correcto de la luz para distinguir las plaquetas de los residuos,
levaduras o precipitados de colorante. Se necesita bastante experiencia.
Si existen partculas extraas demasiado grandes o abundantes, debe repetirse el

recuento con una nueva muestra de sangre y con liquido de dilucin filtrado de nuevo,
especialmente si al cargar la cmara solo con liquido de dilucin puede estar estropeado,
especialmente si los hemates se hemolisan debido a la formacin de cido frmico a partir
del formaldehdo oxidado. Por lo tanto, debe utilizarse liquido de dilucin reciente guardado
en frascos de vidrio tapados y guardados en el refrigerador.
Para una mayor exactitud debe realizarse una comparacin con una extensin teida.
El valor normal es de 200.000 a 275.000/mm 3 . +16,3 por ciento si se llenan dos cmaras y
se cuentan 250 plaquetas.
El mtodo unopette.
Utiliza EDTA K3 y oxalato amnico; es una tcnica directa para contar leucocitos y plaquetas. Un
diluyente preserva las plaquetas de la misma forma que en el mtodo de cocana de Feisly y Ludin.
En este mtodo, evitan los inconvenientes de manejar un narctico y las plaquetas se estabilizan
tambin en la cmara de recuento, por lo que no es preciso utilizar un microscopio de contraste de
fases. Adems, el sistema Unopette, facilita el recuento plaquetario y lo hace ms rpido y seguro y
aumenta la exactitud porque elimina el empleo de las pipetas y reduce el error de dilucin a un
mnimo inferior al 2%. La siguiente descripcin ha sido adoptada de un folleto publicado por
Becton, Dickinson & Company, Rutherford, New Jersey.
El mtodo se basa en la hemlisis de los hemates mediante hipotonicidad y en el bloqueo de la
actividad plaquetaria mediante el Mg++ y el Ca ++ con el cido etilendiaminotetreactico (EDTA).
El EDTA es el nico anticoagulante que no resulta adecuado porque las plaquetas tienen una
tendencia adherirse a los acmulos de hemates. Esta acumulacin se elimina mediante la adicin
de un segundo anticoagulante, el oxalato amnico. Una dilucin al 1/50 de sangre en un diluyente
que contenga el 0.44% de oxalato amnico y el 022% de EDTA K 3 proporciona una suspensin
uniforme de plaquetas y leucocitos y produce una hemlisis total de los hemates. Esto facilita
contar los leucocitos y las plaquetas en la misma cmara no es preciso teir los leucocitos ni las
plaquetas, pero si se desea puede efectuarse aadiendo al diluyente 3 u . De una solucin al
0,75% de cristal violeta despus de que se ha completado la hemlisis
En este mtodo se utilizan recipientes Unopette que contienen 1,225ml. De un diluyente formado
por oxalato amnico al 044% y EDTA K3 al 0,22%. Este recipiente se abre introduciendo el tapn.
La sangre se obtiene por puncin venosa con un tubo Vacutainer B.D. que contiene 0.05ml. de
solucin EDTA K3 al 30% (dilucin final en 7ml. Desangre, 024%). Tambin se puede obtener
sangre capilar mediante puncin digital. Para facilitar un flujo libre de sangre es importante
introducir totalmente la punta del estilete desechable en dedo. Tras eliminar la primera gota de
sangre, se recoge 25ul. De sangre en un tubo capilar de autollenado calibrado en cuanto se forma
una gota de sangre lo suficientemente grande.
La sangre llena automticamente el tubo capilar el flujo se detiene cuando se ha obtenido el
volumen de 25ul. Es preciso eliminar el exceso de sangre del exterior del tubo. La sangre del tubo
Vacutainer se mezcla en un dispositivo rotario inmediatamente antes de que el tubo capilar se llene
con los 25ul.de sangre.
Para hacer la dilucin, se oprimen ligeramente las paredes del recipiente Unopette antes de que el
capilar se introduzca en el recipiente abierto. Cuando se deja de oprimir, se produce una presin
negativa y pasa la sangre desde el capilar al diluyente.
El tubo capilar se lava con diluyente, presionando ligeramente el recipiente e introduciendo lquido
en el capilar y en la cmara superior. Cuando se deja de presionar, el diluyente vuelve al recipiente
y se efecta la mezcla girando suavemente el recipiente entre las manos por unos 10 seg, se
esperan unos 8-10 min para que tenga lugar la hemolisis total. Antes de cargar el hemocitometro
con sangre diluida se gira de nuevo el depsito de plstico hacia delante y atrs entre las manos
durante 20 segundos. Debe evitarse la agitacin porque lesiona los leucocitos y las plaquetas con
la consiguiente disminucin del recuento.
Para llenar la cmara de recuento se coloca la micro pipeta en el deposito en posicin invertida se
desprecian las dos primeras gotas. Para cargar un rea de recuento se precisa una sola gota se
llenan ambas reas del recuento.
Se cuentan primero los leucocitos con objetivo de 10x y con un ocular de 10x se cuentan los
cuatro cuadrados de las esquinas y los cuadrados grandes centrales de los dos lados de la cmara
cada uno de ellos mide 1mm2 por lo tanto, se cuentan los leucocitos de una zona de 10mm2, de
0.1 mm. De profundidad que contiene un volumen de 1--- de sangre diluida. El recuento total se
multiplica por 50 (factor de dilucin) para obtener el nmero de leucocitos por microlitro de sangre
sin diluir.
Despus de contar los leucocitos se han sedimentado las plaquetas, y pueden contarse sin enfocar
el objetivo a los diversos niveles de la cmara de recuento. Si solamente se efecta un recuento
plaquetario se deja la cmara en reposo 5 min. con el fin de que se sedimenten las plaquetas. En
estos estudios se utiliza un objetivo de 20x. en cada rea de recuento se cuentan todas las
plaquetas contenidas en cinco de los 25 cuadrados pequeos del cuadrado grande central, cada
uno de los cuales mide 0.04 mm2 (los cuatro de las esquinas y el central). As, pues, se cuentan
las plaquetas de una zona de 0.2 mm2 en una profundidad de 0.1 mm, es decir un volumen de
0.2---. De sangre diluida. El nmero obtenido se multiplica por 2500 50 (factor de dilucin) x 50
(factor de divisin) para obtener el numero de plaquetas de 1--- de sangre diluida.
Mtodo del microscopio de contraste de fases (Brecker-Cronkite).

En este mtodo la sangre debe recogerse en dos jeringas siliconizadas, utilizando una aguja de
calibre 20 y dos tubos de ensayo siliconizados para evitar la agrupacin de plaquetas. En un tubo
se mezclan dos ml de EDTA y 2ml de sangre con una pipeta de hemates hasta la seal 1. el
liquido de dilucin (oxalato amoniaco al 1%) se lleva hasta la seal 101 y se agita durante tres
minutos hasta que se produzca la hemlisis. Se desprecian las cuatro primeras gotas y despus se
llena una cmara con pipetas utilizando cubreobjeto del numero 1. este proceso se repite con la
combinacin EDTA sangre, pero sin emplear oxalato. Se llenan los dos lados de una cmara
hmeda durante 15 min. Se cuentan los 25 cuadrados (1 mm2) y el resultado se multiplica por
1000 para obtener el numero de plaquetas por milmetro cbico. El recuento de plaquetas se
efecta mediante microscopia de contraste de fase con el condensador de luz ajustado. Las
plaquetas resaltan
como cuerpos individuales ovale so redondos de color negro con un brillo prpura y poseen un halo
brillante sobre fondo oscuro. Al enfocar se ven las plaquetas con una o mas prolongaciones finas.
Expresado de otra forma bajo granes aumentos, se cuentan los cuatro cuadrados de las esquinas y
un cuadrado grande central en ambos lados de la cmara de neubauer.
PRUEBAS QUE EVALUAN LA HEMOSTASIA PRIMARIA Y SECUNDARIA

TIEMPO DE COAGULACIN
Mtodo
Tiempo de coagulacin de Lee White.
Material
Material para tomar muestra de sangre venosa.
Cronmetro.
Tubos de ensayo.
Procedimiento
Marcar dos tubos de vidrio como tubo #1 y tubo #2.
Por puncin venosa extraer 3 ml de sangre aproximadamente.
Poner en marcha el cronmetro una vez entra la primera gota de sangre a la jeringa.
Adicione 1 ml de sangre a cada tubo marcado anteriormente, inicio
por el tubo #1.
Coloque los tubos en bao Mara a 37C hasta que el cronometro
marque 5 minutos.
Al cumplirse los 5 minutos inspeccione el tubo #1 inclinandolo
suavemente.
Realice lo anterior cada 30 segundos hasta que la sangre coagule
completamente y no fluya sangre por las paredes del tubo.
Marcar el tiempo que demor la sangre en coagular en el tubo #1.
Una vez coagulado el primer tubo realice lo mismo con el tubo #2.
Inclinandolo cada 30 segundos.
Anotar el tiempo en que tard en coagular este tubo.

Valor de referencia
8 12 minutos a 37C.
TIEMPO DE SANGRIA (METODO DE IVY)

Principio
Esta prueba valora la capacidad hemosttica in vitro y consiste en medir el tiempo transcurrido
desde la realizacin de una pequea incisin cutnea hasta que cese la hemorragia a su travs.
La prueba mide el tiempo necesario para obtener un tampn hemosttico eficaz y por tanto
representa una valorizacin global y simultanea de los procesos de adhesin, agregacin y
liberacin plaquetarias.
El mtodo anterior es poco sensible y menos reproducible introducido por Duque.
En 1935 IVY introdujo la aplicacin de un manguito de presin en el brazo y la prctica de la
incisin en la cara anterior del antebrazo.
Por ltimo la introduccin de dispositivos automticos para la realizacin de la incisin ha venido a
uniformar y a aumentar su reproducibilidad.
Material
Espigmomanmetro.
Dispositivos automticos para la incisin.
Cronmetro.
Papel de filtro.
Tcnica
Se coloca esfignomanmetro en el brazo del paciente y se regula a 40 mm/hg,
mantenindolo a esta presin a lo largo de la prueba.
Se extrae el dispositivo automtico a su reservoria estril y se sita en la parte superior de
la cara anterior del
antebrazo,(Previamente desinfectado) y alejada de venas
superficiales a unos tres centmetros por debajo del pliegue del codo y paralelo al mismo.
Se presiona el disparador del dispositivo y al mismo tiempo se
cronmetro.
pone en marcha el
La sangre que brota espontneamente se va sacando cada treinta segundos, sin tocar la
incisin, anotndose el tiempo que
tarde en cesar la hemorragia, que ser el resultado
de la prueba,
cuando el tiempo se alarga ms de 20 minutos puede detenerse
la
prueba aplicndose una compresa con material hemosttico.
Interpretacin de resultados y valores de referencia
El valor normal del tiempo de sangra con el mtodo descrito es de
siendo claramente patolgicos los tiempos superiores a 10 minutos.
hasta 6 u 8 minutos,
La prueba se prolonga por reduccin del nmero de plaquetas o por alteraciones

funcionales paqueteras o plsticas (enfermedad de Von Willebrand relacionadas con los
procesos de adhesin y agregacin o liberacin plantearas.
La ingesta de cido acetil saliclico durante la semana que precede a la prueba suele
inducir muy ligeras alteraciones en los resultados de sujetos normales, pero aumenta la
prolongacin secundara a cualquier defecto.
TIEMPO DE PROTROMBINA ( PT )
Valorizacin global de la va extrnseca
Principio
El plasma citratado en presencia de tromboplastna (factor tisular y una mezcla de fosfolpidos) y
cloruro de calcio, se coagula a una velocidad dependiente de las actividades de la protombina
(factor II), los factores V,VII y X y el fibringeno, siempre que no existan inhibidores de la reaccin.
La prueba se describi con la adiccin por separado de la tromboplastina CaCl2 25 mmol/l en
volmenes iguales al del plasma. Actualmente las tromboplastinas comerciales se presentan ya
mezcladas con el cloruro de calcio.
Material
Tromboplastina calcica.
Plasma citratado del paciente.
Plasma citratado control (reactivo control PT).
Cronometro o Coagulmetro (equipo).
Bao de Mara a 37C.
Pipetas automticas de 100 y 200 ul.
Tubos estriles.
Mtodo o tcnica (PT)
Disponer un volumen (100 ul) de plasma en los tubos estriles o en las cubetas de
reaccin del aparato utilizado y dejar calentar a 37C durante dos minutos.
Aadir de forma instantnea dos volmenes (200 ul) de tromboplastina calcica

previamente incubada a 37C y medir el tiempo de coagulacin que para la mayora de
las tromboplastinas comerciales es de 10 15 segundos para el plasma normal.
Es imprescindible realizar simultneamente a la valorizacin de la muestra problema, es

decir un control de PT que viene comercialmente.
Interpretacin de resultados
El PT es sensible al dficit de los factores determinados en l.
Se altera poco en presencia de heparina excepto a elevadas concentraciones, por contener
tromboplastinas comerciales.
Es muy importante en cada laboratorio establecer su margen de referencia.
TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA (PTT)

Valorizacin Global de va Intrnseca.
Principio
El plasma citratado coagula en presencia de cefalina (mezcla de fosfolpidos) y cloruro clcico a
una velocidad dependiente de la concentracin de todos los factores de las vas intrnsecas,
siempre que no existan inhibidores de la reaccin.
Material
Cefalina activada.
Solucin de Cloruro de Calcio mmol/ l.
Plasma citratado del paciente.
Plasma citratado control (reactivo control PTT).
Cronmetro o Coagulmetro (equipo).

Bao Mara a 37C.
Tubos estriles.
Pipetas automticas de 100 ul.
Mtodo o tcnica
Disponer 1 volumen (100 ul) de plasma en los tubos o en las cubetas de reaccin del
aparato utilizado y dejar calentar a 37C durante dos minutos.
Aadir 1 volumen (100 ul) de cefalina que se debe mantener a temperatur ambiente y
poner en marcha el primer cronometro.
Al cabo de 5 minutos de incubacin (o segn las instrucciones del reactivo, puede variar 3
4 minutos) aadir de manera instantnea 100 ul de cloruro de calcio previamente
incubado a 37C y medir el tiempo de coagulacin.
Realizar siempre un PTT control que viene comercialmente.
Vara entre 20 35 segundos para el plasma normal.
Interpretacin del resultado

El PTT es sensible al dficit de los factores medidos en l, algunos de ellos tambin incluidos en el
PT (factores X y V, protombina y fibrinogeno). La prueba es especialmente dependiente de la
concentracin de factor VIII.
Entre los factores cuyo dficit puede prolongar la prueba se hallan algunos no necesarios para el
desarrollo de la coagulacin in vivo y cuya anomala es un simple hallazgo de laboratorio que no
comporta riesgo hemorrgico: factor XII, precalicrena y cininogeno de alto peso molecular.
CUADRO HEMTICO AUTOMATIZADO

Generalidades
De acuerdo al tipo de tecnologa utilizada para realizar el cuadro hemtico, suele emplearse el
trmino generacin para hacer referencia al grado de automatizacin del equipo.
Clasificacin vigente:
Primera Generacin: cuadro hemtico normal.
Segunda Generacin: cuadro hemtico semiautomatizado.
Tercera Generacin: cuadro hemtico automatizado; presenta grficos de histogramas de

glbulos rojos, plaquetas y un recuento diferencial de glbulos blancos en tres partes.
Cuarta Generacin: cuadro hemtico automatizado, con perforacin de tapa; entrega

grficas de histograma para glbulos rojos y plaquetas y un informe de dispersograma para
glbulos blancos, a los que agrupa en cinco tipos de clulas.
Estos equipos automatizados para recuentos celulares han sido diseados teniendo en cuenta
algunas propiedades de las clulas, entre otras:
Son malas conductoras de la electricidad.
Tienen variedad de tamaos.
Tienen una densidad caracterizable y diferente para cada una.
Cada una refracta la luz con una intensidad diferente.
Tienen una composicin citoqumica diferente y caracterizable para cada una.
La relacin ncleo-citoplasma es diferente para cada una.
Teniendo en cuenta estas propiedades, desde 1.956 se han venido desarrollando principios que
permiten contar y medir partculas; las casas comerciales emplean para el diseo uno o varios de
stos, unos ms utilizados que otros, dado los altos costos de algunos. En nuestro medio
encontramos los siguientes:
PRINCIPALES TECNOLOGAS EMPLEADAS EN LA AUTOMATIZACIN
Impedancia elctrica.
Dispersin y absorcin de luz.
La tecnologa que utiliza radiofrecuencia o luz electromagntica de alta frecuencia constituye la

base para la fabricacin de equipos de cuarta y quinta generacin, pero no es muy empleada en
nuestro medio debido a sus altos costos.
Impedancia Elctrica
Se basa en la ley de Ohm y utiliza la propiedad de las clulas de ser malas conductoras de la
electricidad.
Ley de Ohm: U = RI
U = voltaje
R = resistencia
I = corriente
Si I es constante, entonces U tendr variaciones proporcionales a la variacin de R. Esto significa

que si se establece una corriente continua entre dos electrodos y al hacer vaco se hace pasar a
travs de esta corriente una clula que se encuentra diuida en una solucin isotnica, conductora y
desparticularizada, la mala conduccin de electricidad de la clula hace que se produzca un
aumento en la resistencia (R) y se genere un pulso. Este pulso se traduce en un cambio de en el
voltaje y su es tamao proporcional al de la clula, as como el nmero total de pulsos contados es
igual al nmero de clulas en la dilucin.
El sistema est compuesto por:
Electrodos interno y externo, cmara de reaccin y orificio o poro de apertura.
Sistema de vaco, dilutor y sistema transductor. Discriminadores, lectores e impresora.
Haz de luz monocromtica 550 nm, el cual, aunque no hace parte del sistema de
impedancia, es un complemento que permite la lectura de hemoglobina.
Esquema del metodo impedancia electrica
Abertura
Clula
Las soluciones que traen estos equipos son las siguientes:
Agente lisante.
Lquido dilutor isotnico, conductor de electricidad y desparticularizado.
Agente limpiador.
Existen en el mercado casas comerciales que proveen estas soluciones en unidades selladas, de
modo que el operario no tenga que abrirlas o manipularlas, evitando as contaminaciones.
Por este mtodo de resistencia elctrica se cuenta el nmero de pulsos que es directamente
proporcional al nmero de clulas, lo que permite realizar el recuento de glbulos blancos 10 3 /uL,
rojos 106 /uL y plaquetas 103 /uL (las unidades mencionadas corresponden Unidades
Internacionales en el Sistema Americano).
Asimismo, al medir el tamao del pulso, este es directamente proporcional al volumen de la clula
en la apertura. Los volmenes son graficados en un histograma de frecuencias a partir de los
cuales se realiza el informe de volumen corpuscular medio (VPM fL) y recuento diferencial de
glbulos blancos en tres partes: linfocitos, mononucleares y granulocitos.

directa mide hemoglobina por el mtodo de cianometahemoglobina g/dl.
Adems, en forma
Dentro de su sistema electrnico est diseado para calcular hematocrito (Hto %), hemoglobina
corpuscular media (HCM pg), concentracin de hemoglobina corpuscular media (CHCM %) y el
ancho de distribucin tanto de glbulos rojos como plaquetas ADE y ADP; estos clculos los
obtiene a partir del histograma de frecuencias, calculando el VC (coeficiente de variacin) a partir
de la X (media) y la DE (desviacin estndar).
Los clculos anteriores los realiza mediante las siguientes formulas:
Hto = # G.R. x VCM

10
HCM = Hb x 10
# G.R.
CHCM = Hb x 100
Hto
ADE = DE x 100
X (media)
pg
%
%
La dilucin ideal es aquella que permite que pase una sola clula a la vez por la apertura y que,
adems, permite el conteo sin errores en un rango de clulas aceptable, para leucocitos 1,0 a 99,9
x 103 /uL, hemates hasta 7,0 x 106 /uL y plaquetas hasta 999 x 103 /uL. Estos equipos realizan
internamente dos diluciones: la primera, 1:300, a la cual se le dispensa automticamrnte la
solucin lisante para realizar el recuento de leucocitos y medir Hb; las plaquetas presentes no
interfieren, dado su tamao inferior al de leucocitos; las clulas que se tienen en cuenta en este
caso son las que tienen un tamao superior a 30 fL y el recuento de clulas inferior a 30 fL - que
obedecera a plaquetas se descarta, ya que es una dilucin no adecuada para contar plaquetas y
ocurrira el error de coincidencia. En la segunda dilucin, 1:15.000, cuentan hemates y plaquetas;
los leucocitos que quedan son tan pocos que no interfieren en el recuento.
Para diferenciar plaquetas de hemates dentro del histograma discrimina los pulsos, y los
superiores a 36 fL son considerados como glbulos rojos, y entre 2 y 20fL son considerados como
plaquetas.
Es muy importante respetar la dilucin que programa la casa comercial, ya que es la mxima que
permite un recuento exacto y que impide cometer errores de coincidencia. El error de coincidencia
se presenta cuando en la apertura coinciden dos clulas o ms y son contadas como una sola; en
este caso se disminuye el recuento total y se aumenta el volumen corpuscular de las clulas en la
dilucin.
Dispersin y Absorcin de Luz
Los equipos que emplean la tecnologa de dispersin de luz son considerados como cuarta
generacin. El sistema permite hacer un nmero mayor de mediciones directas y el informe de por
lo menos 22 y hasta 24 parmetros en los equipos que incluyen recuento de reticulocitos.
Como fuente de luz generalmente se usa rayo lser, aunque tambin se ha utilizado luz de
tungsteno.
Componentes:
Fuente de lser.
Sistema de vaco.
Fotodetector de interferencia.
Fotodetector de refraccin.
Detector de absorcin.
Luz monocromtica 550 nm.
Lectores e impresora.
El sistema cuenta el nmero de interferencias que se suceden al hacer pasar las clulas por el haz
de luz, y ste es directamente proporcional al recuento de clulas, glbulos blancos, rojos y
plaquetas; adems, cuenta un nmero mayor de clulas (aproximadamente 10.000) que con otros
mtodos, lo cual le permite disminuir el error estadstico de recuento.
As mismo, mide el tamao de la interferencia y la refraccin que se produce al inferir la luz sobre
la superficie _ dispersin de luz_ . Tanto el tamao de la interferencia como el ngulo de refraccin
son detectados y reportados como la medida directa de los volmenes celulares.
La densidad de las clulas es medida directamente, lo cual permite hacer una lectura directa de
parmetros que en los otros sistemas se calculaban, como es el caso de la HCM. La hemoglobina
es medida como cianometahemoglobina mediante un haz de luz monocromtica a 550 nm.
El recuento diferencial leucocitario lo realiza dividiendo la poblacin leucocitaria en cinco partes:
neutrfilos, eosinfilos, basfilos, linfocitos, monocitos. Los reactivos del sistema incluyen enzimas
que producen diferentes tipos de reacciones histoqumicas en los citoplasmas celulares; las
enzimas ms utilizadas son la peroxidasa alcalina y el azul alcin. Las diferentes reacciones estn
caracterizadas para cada clula en funcin de la cantidad de substrato contenido en cada clula, el
cual produce una mayor o menor absorcin de luz. Los datos de absorcin, refraccin y tamao
deben ser concordantes para la clasificacin final. Los basfilos, por lo general, son detectados al
utilizar un reactivo que lisa las membranas celulares de todos, excepto las de ellos; as son
detectadas como clulas de mayor tamao en esa dilucin.
Calcula los parmetros de hematocrito y el ADE (ste ultimo a partir del histograma de
frecuencias).
Consideraciones iniciales para el anlisis automatizado
Cuando un bacterilogo opta por la automatizacin, su decisin obedece a uno de los

siguiente motivos: el ms apremiante, cuando se produce un aumento del volumen de
trabajo en la magnitud que atenta contra la calidad del mismo y con el cual la prctica
manual pierde credibilidad; o cuando sin un volumen de trabajo alto donde todava la
prctica manual puede manejarse dentro de los estndares de calidad se pretende
reportar un mayor nmero de parmetros que manualmente no se alcanzara y que en ese
momento son necesarios para que el clnico pueda realizar una mejor aproximacin al
diagnstico.
En ambos casos la intencin apunta a mejorar la calidad del producto. No obstante, para
lograr esa mejora en la calidad no basta con adquirir el equipo, es necesario tener en
cuenta las siguientes consideraciones para que el objetivo de calidad sea una realidad:
Las muestras se deben tomar con el sistema de tubos al vaco. Mientras ms sensible el
mtodo, mayor exigencia en la toma de muestras; es necesario evitar los microcogulos de
fibrina, que no son visibles al ojo humano y que se forman en la jeringa o aguja mientras se
realiza la mezcla con el anticoagulante. La fibrina formada interfiere con los volmenes
celulares, lo que produce errores en los informes, tanto de blancos como de rojos y
plaquetas. Asimismo es necesario no reutilizar los tubos, para asegurar que el vaco sea el
necesario para que se d la relacin muestra anticoagulante.
Partiendo de la importancia de guardar siempre la relacin muestra anticoagulante,

existen en el comercio tubos al vaco especiales para volmenes pequeos de sangre,
para pacientes peditricos o geritricos.
Al escoger el equipo es muy importante asegurarse de que la casa comercial tenga una
buena representacin tcnica en el pas; adems, se recomienda la compra de equipos de
dilucin interna, en el uso de copillas que por economa no se desechan y el sistema de
limpieza que se utiliza entre muestras.
Adicionalmente estos equipos aumentan el riesgo biolgico para el operario, ya que se

expone a contaminacin innecesaria, y cae en el incumplimiento de las normas de
bioseguridad que rigen actualmente en los laboratorios clnicos.
Si bien en nuestro medio el costo del equipo constituye uno de los factores importantes en
la decisin de compra, es necesario tener en cuenta que no siempre el equipo ms costoso
es el mejor para las necesidades del laboratorio, ni el ms econmico debe constituirse en
la mejor opcin. Hay que fijarse en que cumpla con los requisitos mnimos mencionados y,
especialmente, que se ajuste a las necesidades presentes y futuras del laboratorio. En
este momento hay una gran variedad de casas comerciales que producen muy buenos
equipos, consulte siempre las diferentes posibilidades del mercado y no tome la decisin
nicamente fijndose en el precio.
Al trabajar con los equipos automatizados de tercera generacin realizan diferencial en

tres partes - , se debe tener la precaucin de esperar un tiempo prudencial de por lo menos
30 minutos despus de tomada la muestra, para que el tamao de las clulas se estabilice
con el anticoagulante EDTA tripotsico. Si el resultado es de carcter urgente debe tener
claro que el informe del diferencial no es confiable, por lo tanto se recomienda realizar el
recuento diferencial en forma manual.
Como especificacin interna de los equipos de impedancia, el manual tcnico especifica

que debe disponerse de conexin con polo a tierra para conectar el equipo; omitir esto
causar interferencias, especialmente con el recuento de plaquetas.
Es importante tener en cuenta la presentacin de los reactivos necesarios para operar el

equipo, la solucin diluyente por tratarse de una solucin desparticularizada debe
manipularse al mnimo, en lo posible no se debe abrir.
Finalmente, cuando el nmero de clulas es tan alto que se sale de la linealidad del equipo
y se est trabajando con un equipo que no corrige con segunda dilucin tenga mucho
cuidado con el lquido que va a usar para diluir la muestra, debe ser el mismo lquido
isotnico que provee la casa comercial, pero uno diferente al que ese momento est
conectado al equipo. De ninguna manera pinche con jeringa para sacar lquido, puede ser
fuente de contaminacin futura de todo el reactivo. Lo ideal es dejar uno de los estuches
exclusivamente para diluciones.
Interpretacin general del cuadro hemtico
Informe Numrico
Por lo general, el software del equipo trae la informacin utilizando abreviaturas en ingls; en las
siguientes tablas se muestran las abreviaturas utilizadas y las unidades de informe para cada uno
de los parmetros de los equipos que funcionan por impedancia y por dispersin de luz.
Parmetros del cuadro hemtico automatizado impedancia tercera generacin.
PARMETRO
Recuento total de glbulos
blancos
Porcentaje de linfocitos
Porcentaje de
mononucleares
Porcentaje de granulocitos
Nmero absoluto de
linfocitos
Nmero absoluto de
mononucleares
Nmero absoluto de
granulocitos
rojos
Hemoglobina
Hematocrito
Volumen Corpuscular
Medio
Hemoglobina Corpuscular
Media
Concentracin de
Media
Ancho de Distribucin
Eritrocitaria
Recuento Total de
Plaquetas
Volumen Plaquetario Medio
Plaquetocrito
Plaquetaria
ABREVIATURA
WBC
UNIDADES
X 103 /uL
TIPO DE MEDICIN
directa
LY%
MO%
%
%
clculo
clculo
GR%
LY#
%
103 /uL
clculo
directa
MO#
103 /uL
directa
GR#
103 /uL
directa
RBC
106 /uL
directa
HBG
HCT
MCV
g/dL
%
fL
directa
clculo
directa
pg
clculo
MCHC
g/dL
clculo
RDW
clculo
PLT
103 /uL
directa
MPV
PCT
PDW
fL
%
%
directa
clculo
clculo
MCH
Parmetros del cuadro hemtico automatizado dispersin cuarta generacin.
PARMETRO
blancos
ABREVIATURA
WBC
UNIDADES
X 103 /uL
TIPO DE MEDICIN
directa
Porcentaje de linfocitos
Porcentaje de monocitos
Porcentaje de Neutrfilos
Porcentaje de Eosinfilos
Porcentaje de Basfilosos
Nmero absoluto de
linfocitos
Nmero absoluto de
Monolitos
Nmero absoluto de
Neutrfilos
Nmero absoluto de
Eosinfilos
Nmero absoluto de
Basfilos
rojos
Hemoglobina
Hematocrito
Volumen Corpuscular
Medio
Media
Concentracin de
Media
Eritrocitaria
Recuento Total de
Plaquetas
Volumen Plaquetario Medio
Plaquetocrito
Plaquetaria
Reticulocitos #
Reticulocitos %
LY%
MO%
NE%
EO%
BA%
LY#
%
%
%
%
%
103 /uL
clculo
clculo
clculo
clculo
clculo
directa
MO#
103 /uL
directa
NE#
103 /uL
directa
EO#
103 /uL
directa
BA#
103 /uL
directa
RBC
106 /uL
directa
HBG
Hct
MCV
g/dL
%
fL
directa
clculo
directa
MCH
pg
clculo
MCHC
g/dL
clculo
RDW
clculo
Plt
103 /uL
directa
MPV
Pct
PDW
fL
%
%
directa
clculo
clculo
RET #
RET %
#
%
directa
clculo
Se recomienda encontrar los valores de referencia propios para cada poblacin. Para lograr la
correcta interpretacin del cuadro hemtico es necesario recordar la definicin de cada uno de los
parmetros y en que casos los podemos encontrar alterados.
Los siete parmetros relacionados con glbulos rojos: hematocrito, hemoglobina, recuento total de
glbulos rojos, VCM, HCM, CHCM y ADE son utilizados para el diagnstico y seguimiento de
patologas asociadas con la eficiencia en la funcin de stos: el transporte gaseoso; su disminucin
constituye un grupo de patologas conocidas como anemias y su aumento se conoce como
poliglobulia o policitemia.
El hematocrito depende del nmero y del tamao de los glbulos rojos, por lo tanto, en estos
sistemas el dato obtenido es el resultado obtenido de la relacin directa entre nmero de glbulos
rojos y el VCM.
La hemoglobina es medida directamente como cianometahemoglobina. La HCM es la hemoglobina
promedio de los hemates, se relaciona directamente con el hallazgo en perifria de tipocroma. La
CHCM es la relacin directa que existe entre la masa de glbulos rojos expresada como
hematocrito y su hemoglobina, y debe estar entre 32 y 35%, en caso contrario, en perifria se debe
encontrar aniso o poiquilocitosis importante o hemlisis intravascular, o podra tratarse de un falso

hallazgo por error en la toma de la muestra.
Teniendo en cuenta el ADE y el VCM, David Bessman clasifica las anemias en:
Microcticas Homogneas: ADE normal y VCM disminuido
Talasemias, anemia secundaria a enfermedades crnicas.
Microcticas Heterogneas: ADE aumentado y VCM disminuido.
Anemia ferropnica, en algunos tipos de anemias hemolticas, por ejemplo de tipo inmune, en
las que encontramos microesferocitos y esquistositos, podemos encontrar tambin estos
ndices: ADE aumentado y VCM disminuido; no obstante, no estn clasificadas como anemias
microcticas.
Macrocticas Homogneas: ADE normal y VCM aumentado.
Sndrome de DiGuglielmo, anemia aplsica adquirida.
Macrocticas Heterogneas: ADE aumentado y VCM aumentado.
Anemias megaloblsticas, por lo general de origen carencial, anemia hemoltica autoinmune, Hb

SS, presencia de aglutininas fras.
Normocticas Homogneas: VCM normal y ADE normal
Anemia secundaria a enfermedades crnicas. HbS, C sin anemia, pacientes transfundidos,
pacientes en quimioterapia, LLC y LMC en remisin, hemorragias, esferocitosis hereditaria,
deficiencias enzimticas sin anemias, anemias hemolticas sin crisis hemolticas.
Es necesario hacer notar que los esferocitos a pesar de tener un tamao menor y que en el FSP
los observamos de menor tamao que un normocito, lo usual es que el registro del VCM de estos
eritrocitos sea igual que los discolitos, aunque su tamao sea menor (VCM normal, ADE normal)
Normocticas Heterogneas: VCM normal y ADE aumentado.
Deficiencia insipiente de hierro, vitamina B12 o folatos, mielofibrosis, anemia sideroblstica.
Otro caso en que el ADE puede estar muy aumentado ocurre en transfusiones a un paciente con
crisis hemoltica severa, si a este se le realiza un cuadro hemtico, el histograma de rojos va a
mostrar las dos poblaciones celulares: la del paciente, y una segunda que se intercepta con la
primera, donde se puede observar la poblacin de clulas transfundidas. Estas son las curvas
bimodales, de las cuales, por lo general, el clculo del VCM es normal y un ADE muy aumentado.
Notamos como en algunas anemias con respuesta medular, a pesar de tener una morfologa
alterada con microcitosis o poiquilocitosis, el VCM no se altera por el promedio logrado entre los
glbulos pequeos y los grandes de la policromatofilia. Es el caso de la anemia sideroblstica.
Informe grfico
Histogramas
Son grficas de secuencias de volmenes celulares representados en el eje X graficado contra un
nmero relativo representado en el eje Y; no tiene un equivalente numrico real. El eje X se
expresa en fentolitros (fL).
En condiciones normales, en el informe se observan curvas cnicas o cncavas, que en su
mayora son modales, excepto la de plaquetas.
Histograma de Glbulos Rojos

La curva normal de glbulos rojos es cnica, modal y se encuentra representada en tamaos de 60
a 110 fL, con un pico o curva secundaria modal de plana a ligeramente cncava con muy poca
altura que llega a 200 fL.
Algunas de las alteraciones ms frecuentes de la curva de eritrocitos son:
Esquema de histograma normal de glbulos rojos
Desplazadas a la izquierda
Desplazadas a la derecha
Curva bimodal
ADE aumentado
Arranque extenso en Y
Aumento de pico secundario
Histograma de Glbulos Blancos

Los glbulos blancos se agrupan formando tres curvas claramente definidas y estas configuran la
arquitectura normal del histograma de glbulos blancos.
Curva de Linfocitos cnica 50 a 100 fL

Curva de mononucleares plana a cncava 100 a 150 fL
Curva de granulocitos cncava 150 a 380 fL
Esquema de histograma normal de glbulos blancos
Algunas de las alteraciones ms frecuentes de la curva de linfocitos son:
Prdida de altura
Distribucin no normal a la derecha
Arranque extenso en Y
Las alteraciones ms frecuentes de la curva de mononucleares son:
Unin con linfocitos

Unin con granulocitos
Aumento cnico sin perder arquitectura
Aumento cnico con perdida de arquitectura
La curva de granulocitos se altera cuando se presenta:
Unin con mononucleares

Curva cnica modal
Curva cnica extendida a mononucleares
Curva cnica extendida a 450 fL
Cuando hay prdida de la arquitectura en el histograma de glbulos blancos- y si est acompaada

de alteraciones en eritrocitos y plaquetas- por lo general obedece a una respuesta medular
compatible con cualquier tipo de leucemia o mielodisplasia.
Centrada de 30 a 400 fL
Histograma de Plaquetas
La curva normal de plaquetas es cnica, sin distribucin normal y con una representacin muy
amplia en tamaos que va de 2 a 20 fL, dado que el recuento de plaquetas se realiza en la dilucin
mayor- la misma de eritrocitos- el equipo realiza un doble recuento de plaquetas, disminuyen de
esta forma el coeficiente de variacin. Algunos equipos grafican el doble recuento donde muestran
si ha existido o no coincidencia en los mismos.
Esquema de histograma normal de plaquetas
Algunas de las alteraciones ms frecuentes en el recuento de plaquetas son:
No arranque en X
Extendida 25 a 30 fL
Aumento celular en la terminacin
Tope recto
Conformacin de bloques
Curvas negativas
DISPERSOGRAMAS
Los dispersogramas son otro tipo de representacin grfica utilizada para el recuento diferencial de
glbulos blancos donde se mezclan diferentes tecnologas y se tienen en cuenta diferentes
propiedades de los grupos celulares. En estos sistemas vemos interactuar volmenes, refraccin,
conductividad, opacidad celular y absorcin de luz. Las clulas se grafican segn su dispersin en
un cubo, teniendo en cuenta algunas de las propiedades individuales de los grupos celulares.
Se trata pues, de un anlisis tridimensional de las clulas, donde las diferentes casas comerciales
utilizan mnimo tres parmetros que hacen coincidir con las propiedades especficas celulares,
permitiendo de esta forma su clasificacin en cinco grupos:
Neutrfilos
Eosinfilos
Basfilos
Linfocitos
Monocitos
As mismo permite sospechar con un alto grado de certeza presencia de clulas diferentes a las
mencionadas.
El grfico tridimensional es un cubo, pero dada la imposibilidad de presentarlo en esta forma,
existen diferentes cortes para su presentacin plana, cada casa comercial presenta uno o dos
grficos- los que a su juicio sean los ms representativos para la tecnologa empleada-.
El ms empleado consiste en representar el volumen en el eje Y del plano cartesiano y la
dispersin de luz lser en el eje X. Por lo anterior es necesario que al comprar el equipo se preste
atencin a los parmetros que se van a graficar y sobre todo al esquema de representacin normal
para esa propuesta, el cual es diferente en cada caso.
La interpretacin del dispersograma es ms sencilla, comparada con la del histograma, ya que al
ubicar las 5 poblaciones celulares, el grado de coincidencia de los tres parmetros debe haber sido
total; por lo tanto, el grado de confiabilidad es ms grande y las clulas inmaduras, a s como las
anormales y las consideradas como no blancos, se ubican en zonas ya establecidas.
Las alteraciones de este dispersograma se relacionan con un aumento o disminucin de los 5 tipos
de leucocitos que reporta o con la aparicin de clulas que obedecen a diferentes patologas, sean
malignas o no.
REACTIVOS Y TECNICAS HEMATOLOGICAS
Despus del agua, los reactivos son los suministros de laboratorio ms importantes, ya que pueden
afectar directamente calidad de anlisis. Su seleccin (calidad), empleo y mantenimiento son, por
tanto, una parte vital de un buen programa de control de calidad interno.
Los reactivos utilizados en las tcnicas hematolgicas son los siguientes:
Colorante de Giemsa
Componentes
Colorante de Giemsa.
Glicerina pura.
Alcohol metlico absoluto.
Disolver 1 gr. De colorante de Giemsa en polvo en 66 ml de glicerina pura y calentar a 50C
durante 2h aadir 66ml de alcohol metlico absoluto y dejar a temperatura ambiente de 7 a 14 das,
filtrar antes de su empleo.
Tcnica
1. Fijar la extensin en alcohol metlico absoluto durante 3 min.
2. Sumergirla verticalmente en una solucin de colorante de Giemsa
3. Esperar 10 min.
4. Lavar la extensin con abundante agua destilada y dejar secar al
aire libre. Una vez seca, esta lista para ser observada al
microscopio.
Tincin de May Grunwald Giemsa
Componentes
Colorante de Giemsa.
Colorante de May Grunwald.
Tcnica
1. Cubrir la extensin mediante s/n de May Grunwald durante
1 minuto.
2. Aadir unas gotas de agua destilada en tampn PBS, dejarla
durante 2 3 min.
3. Lavar la extensin y teir mediante s/n de Giemsa, durante
20 min.
4. Lavar la extensin con abundante agua destilada y sumergirla en
tampn PBS (PH 6.8) durante 2-5 min.
5. Secar la extensin al aire. Una vez seca, esta lista para la
observacin al microscopio.
Esta tincin resalta de manera especial las granulaciones leucocitarias y mejora la coloracin de
los eritrocitos.
Tincin de WRIGTH
Componentes
Eoseanato de azul de metileno en polvo.
Alcohol metlico absoluto.
Se pesan 0,1 gr. de eosianato azul de metileno en polvo por cada
60ml de alcohol metlico absoluto, el alcohol debe ir aadindose poco a poco hasta la completa
disolucin del reactivo en polvo, para favorecer la reaccin se puede calentar ligeramente. Se deja
en reposo de 24 a 48 horas, y se filtra.
Tcnica
1. Fijar la extensin de sangre agregando el colorante de Writh
durante 3 5 minutos.
2. Lavar con agua, esperar que seque y luego observar al
microscopio.
Se utiliza para teir extendido de frotis de sangre, para diferenciar cada una de las clulas. Se tien
estructuras cidas como el ADN y ARN citoplasmticos
Denominadas estructuras basfilas.
Liquido de Turk
Componentes
Acido actico glacial.
Violeta de genciana (sin acuosa 1%).
Agua destilada CSP.
Solucin Salina
Componentes
Cloruro de Sodio.
Agua destilada CSP.
Solucin de Hayen
Componentes
Sulfato de Sodio
Cloruro de Sodio.
Cloruro de mercurio
Agua Destilada.
2.5 gr.
0.5 gr.
0.25 gr.
100 ml.
Solucin de Gower
Componente
Sulfato sdico
Acido actico glacial
Agua destilada CSP.
12.5 gr.
33.3 gr.
200 ml.
Solucin de Drabkin
Componentes
Ferrocianuro potasico.
Cianuro potasico.
Fosfato monopotasico.
Detergente no inico.
Agua destilada.
Rees Ecker
Componentes
Citrato de Na 3.8%.
Formaldehido al 40%.
Azul de cresil.
* Se debe preparar el mismo da.
Azul de Cresil brillante
Componentes
Azul de cresil brillante.
Cloruro de sodio.
* Se debe filtrar el colorante antes de cada uso.

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INTRODUCCIN

Dentro de todos los procedimientos analticos, que comprometen directamente al laboratorio

Trate todos los pacientes y el material biolgico como potencialmente infectantes.

Mantenga el sitio de trabajo en perfecto orden y aseo.

No coma, beba, fume almacene alimentos o use cosmticos en el rea de trabajo.

Realice los procesos siguiendo las tcnicas correctas.

Utilice en forma sistemtica guantes de ltex en todo procedimiento que implique

En el laboratorio es necesario utilizar batas, preferiblemente blancas y de manga larga.

Mantenga los elementos de proteccin personal en un lugar seguro y en ptimas

No reutilice material contaminado como agujas, jeringas o lancetas.

No desacople manualmente la aguja de la jeringa o del portatubo; cuando se va a

No reinserte la aguja en su protector una vez la haya utilizado.

En caso de derrame o contaminacin accidental de sangre u otros lquidos sobre la

Recuerde que la sangre y fluidos orgnicos de cualquier paciente deben considerarse

Deseche los microhematocritos en los recipientes dispuestos para ello guardianes de

Nunca vierta en la poceta, material contaminado con muestras biolgicas; depostelo en un

Despus de utilizar la cmara de neubauer o las micropipetas, enjuaguelas inicialmente en

2. Debe recordar que de la buena atencin y servicio proporcionado al paciente, quedar

Interaccin con el paciente.

Revise cuidadosamente la solicitud de exmenes, asegurndose de haber entendido

Transmita al paciente confianza, seguridad y profesionalismo durante el procedimiento.

Trate de eliminar cualquier temor que el paciente pueda manifestar.

Explquele el procedimiento que le ser practicado.

Si el paciente est hospitalizado, no se gue solamente por el nmero de la cama o historia

Asegrese de que el paciente adopte una posicin segura y cmoda.

Mtodo convencional con jeringa desechable.

De acuerdo con el examen requerido, seleccione el recipiente adecuado para recoger la

Revise cuidadosamente todo el equipo requerido para el proceso; inserte la aguja en la

Indique al paciente el procedimiento a realizar con el fin de tranquilizarlo y facilitar la

Seleccione el sitio donde va a puncionar, generalmente el lugar de eleccin es la regin

La sangre se extrae lentamente para evitar la formacin de burbujas y la hemlisis.

Libere el torniquete y retire la aguja lentamente.

Presione con un algodn seco el punto de puncin.

Antes de retirar la aguja de la jeringa, si el examen requiere extendido de sangre perifrica,

Enjuague y sumerja la jeringa en una solucin de hipoclorito de sodio al 0.5% o en los

La aguja se descarta en los guardianes de seguridad.

Puncin venosa con tubos al vaco

Inserte la aguja en el portatubo; la parte ms corta de la aguja es la que entra en contacto

La aguja debe ser depositada en los guardianes de seguridad.

Infantes menores de seis meses de edad

Descarte la primera gota mediante el uso de algodn seco.

Aplique una moderada presin, aproximadamente 1 cm del sitio de puncin, para

Realice el llenado de las pipetas requeridas adems si el examen lo exige

Presione por unos minutos el lugar de la puntura con algodn seco.

Deposite la lanceta en un guardin de seguridad.

El anticoagulante utilizado en la muestra para hemograma es el EDTA, en

Si al puncionar la vena usted encuentra dificultad en canalizarla, no traumatice el

Evite la agitacin excesiva de la muestra sangre-anticoagulante, ya que esto puede

Causas de error en la extraccin sangunea

Empleo de tubos y jeringas sucios o hmedos.

Empleo de anticoagulantes inadecuado o proporcin errnea.

Colocacin del torniquete durante un tiempo excesivo, antes de practicar la puncin

Extraccin sangunea excesivamente lenta, con coagulacin parcial de la sangre en la

Perforar la vena (filtrar), ya que produce en el paciente hematomas y lesin de tejidos y en

Llenado insuficiente de los tubos al vaco.

Agitacin excesiva y brusca de la mezcla sangre anticoagulante, con la formacin de

Presin excesiva del dedo, trae consigo lquidos hsticos.

USO Y APLICACIONES DE LOS ANTICOAGULANTES.

EDTA: (cido Etilendiaminotetraactico sal disdica tripotsica) se puede utilizar en