Microbiologia Indust Cap 1-6

Cap.
1 Aspectos de Microbiologa
Captulo Aspectos de Microbiologa
Cap. 1 Aspectos de Microbiologa
CAPITULO 1 ASPECTOS DE MICROBIOLOGA 1.1 Los microorganismos en nuestra vida Para mucha gente palabras como germen, microbio o microorganismo llevan a la imaginacin un grupo de pequeas criaturas que no encajan bien en ninguna de las categoras que recoge la vieja pregunta: Es animal, vegetal o mineral? Los microorganismos son seres vivos diminutos, demasiado pequeos individualmente para poderlos observar a simple vista. El grupo comprende bacterias, hongos (levaduras y mohos), protozoos y algas microscpicas. Tambin incluye los virus, esas entidades acelulares
contempladas a veces como un lmite entre lo viviente y no viviente. Hay tendencia a asociar estos pequeos organismos con infecciones desagradables, enfermedades graves como el SIDA o molestias tan frecuentes como un alimento en mal estado. Sin embargo, la mayora de los microorganismos realizan contribuciones cruciales para el bienestar de los habitantes del mundo, ayudando a mantener el equilibrio entre organismos vivos y sustancias qumicas en el medio ambiente. Los microorganismos marinos y de agua dulce forman la base de la cadena alimenticia en los ocanos, lagos y ros. Los microorganismos del suelo ayudan a degradar los residuos e incorporan orgnicos; nitrgeno de este gaseoso modo del aire a los
compuestos
reciclan
componentes qumicos del aire y la tierra. Algunas bacterias y

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algas realizan una importante funcin en la fotosntesis, un proceso que genera oxgeno y alimento y que es crtico para nuestra vida sobre la tierra. El hombre (y muchos otros animales) depende de las bacterias de su intestino para la digestin y la sntesis de algunas vitaminas que requiere el organismo, como algunas del grupo B necesarias para el metabolismo y la vitamina K para la coagulacin de la sangre. Los microorganismos tienen tambin aplicaciones
comerciales. Se utilizan en la sntesis de compuestos qumicos como acetona, glicerina, cidos orgnicos, enzimas, alcoholes y muchos medicamentos. La industria alimentaria utiliza frecuentemente microbios para la produccin de vinagre, col fermentada, encurtidos, bebidas alcohlicas, aceitunas de mesa, salsa de soja, mantequilla, queso, yogur y pan. Hoy en da sabemos que los microorganismos se encuentran en todas partes. Pero no hace mucho, antes de la invencin del microscopio, los microorganismos eran desconocidos para los cientficos. Miles de personas moran vctimas de epidemias devastadoras, el deterioro de los alimentos no poda muchas veces evitarse y familias enteras moran porque no se dispona de vacunas y antibiticos para combatir las infecciones. 1.1.1 Historia de la microbiologa Uno de los descubrimientos ms importantes de la historia de la biologa tuvo lugar en 3665 con la ayuda de un microscopio relativamente burdo. Un ingls,
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Robert Hooke, comunic al mundo que las unidades estructurales vivas ms pequeas eran celdillas o clulas, como las llam l. Hooke fue capaz de ver clulas individuales con el microscopio que haba desarrollado, una versin perfeccionada del
microscopio compuesto (el que utiliza dos juegos de lentes). El descubrimiento de Hooke marc el
nacimiento de la teora celular; la teora de que todos los seres vivos estn compuestos de clulas. Las posteriores investigaciones sobre estructura y funciones de las clulas se han basado en esta teora. Aunque el microscopio de Hooke era capaz de mostrarle protozoos y probablemente bacterias, careca de las tcnicas de tincin que le hubieran permitido ver tales microbios con claridad. El comerciante holands y cientfico aficionado Antn van Leeuwenhoek fue el primero en observar realmente microorganismos mediante lentes de aumento. Entre 1674 y 1723 escribi una serie, de cartas a la Royal Society de Londres describiendo los animlculos que haba visto con su microscopio sencillo de una sola lente. Los detallados dibujos de van Leeuwenhoek sobre animlculos en agua de lluvia, infusiones de granos de pimienta y en el material tomado de raspados de los dientes se han identificado como representaciones de bacterias y protozoos.
1.1.2 La Edad de Oro de la microbiologa Durante un perodo de unos 60 aos, que comenz con los trabajos de Pasteur, tuvo lugar un florecimiento de los estudios sobre microbiologa. La poca que va de 1857 a 1914 ha sido denominada apropiadamente la Edad de Oro de la Microbiologa. Durante este perodo tuvieron lugar rpidos avances, encabezados principalmente por Pasteur y Robert Koch, que condujeron al establecimiento de la microbiologa como ciencia. Estos aos vieron el descubrimiento de los agentes causales de muchas enfermedades, la relacin entre microorganismos y enfermedad y el papel de la inmunidad en la prevencin y cura de las enfermedades infecciosas. Durante ese productivo perodo los
microbilogos estudiaron las actividades qumicas de los microorganismos, y mejoraron de las tcnicas de y
microscopa
cultivo
microorganismos
desarrollaron vacunas y mtodos quirrgicos. 1.1.3 Fermentacin y pasteurizacin Una de las etapas clave para establecer la relacin entre microorganismos y enfermedad tuvo lugar cuando un grupo de comerciantes franceses pidi a Pasteur que averiguara por qu se agriaban el vino y la cerveza. Confiaban en desarrollar un mtodo que pudiera prevenir el deterioro sufrido por esas bebidas al ser transportadas a largas distancias. En esa poca muchos cientficos crean que los azcares presentes
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en tales fluidos eran transformados en alcohol por efecto del aire. Hacia 1860 Pastear hall que en realidad eran microorganismos, llamados levaduras, los que convertan los azcares en alcohol en ausencia de aire. Este proceso se conoce como fermentacin y se utiliza para la fabricacin de vino y cerveza. El agriado y el deterioro que ocurren despus son debidos a un grupo distinto de microorganismos, que son las bacterias. En presencia de aire las bacterias
transforman el alcohol de la bebida en vinagre (cido actico). La solucin propuesta por Pasteur al deterioro de las bebidas alcohlicas fue calentarlas justo lo suficiente para matar a la mayora de las bacterias; el proceso no afecta notoriamente al sabor de las bebidas. Esta tcnica llamada pasteurizacin para matar a se utiliza las ahora
corrientemente
bacterias
potencialmente dainas de la leche y de algunas bebidas alcohlicas. La demostracin de la conexin entre el deterioro de los alimentos y los
microorganismos fue el primer paso para establecer la relacin entre microorganismo y enfermedad. 1.1.4 Desarrollo actual de la microbiologa El conjunto de trabajos desarrollados en la Edad de Oro de la Microbiologa fue la base de diversos logros monumentales alcanzados en el siglo XX. Se
desarrollaron nuevas ramas de la microbiologa, como

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la inmunologa y la virologa. Ms recientemente el desarrollo de un conjunto de tcnicas nuevas, la tecnologa del DNA recombinante, ha revolucionado la investigacin y las aplicaciones prcticas de todas las reas de la microbiologa. 1.1.4.1 Inmunologa La inmunologa, el estudio de la inmunidad, se remonta en realidad al desarrollo de la primera vacuna por Jenner en 1798. Desde entonces el conocimiento del sistema
inmunitario se ha ido acumulando lentamente, para expandirse con rapidez en el siglo XX. Se dispone ahora de vacunas como para el
numerosas
enfermedades,
sarampin, la parotiditis, la polio, la rubola y la hepatitis B. Uno de los mayores retos de este siglo para los inmunlogos es averiguar cmo el virus del SIDA altera el sistema inmunitario y cmo podra estimularse dicho sistema para que eliminase el virus. 1.1.4.2 Virologa El estudio de los virus, la virologa, naci durante la Edad de Oro de la Microbiologa. En 1892 Dimitri Iwanowski dio a conocer que el organismo causante del mosaico del tabaco
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era tan pequeo que atravesaba filtros lo bastante tupidos como para detener todas las bacterias. En esa poca Iwanowski no era consciente de que el organismo en cuestin era un virus en el sentido que damos hoy al trmino. En 1935 Wendell Stanley demostr que ese organismo, llamado virus del mosaico del tabaco, era esencialmente distinto de otros microorganismos y tan sencillo y homogneo que poda ser cristalizado como si fuera un compuesto qumico. El trabajo de Stanley facilit el estudio de la qumica y estructura de los virus. Desde el desarrollo del microscopio electrnico, en la dcada de 1940, los microbilogos han podido observar con detalle la estructura de los virus y hoy se sabe mucho acerca de su estructura y actividad. 1.1.4.3 Tecnologa del DNA recombinante El conjunto de mtodos que denominamos tecnologa del DNA recombinante tuvo su origen en dos El campos primero, la cientficos gentica
relacionados.
microbiana, estudia los mecanismos por los cuales heredan los microorganismos sus caracteres. El segundo, la biologa
molecular, estudia especficamente cmo las molculas de DNA almacenan la informacin gentica y cmo el DNA dirige la sntesis de protenas funcionales.
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1.1.5 Nomenclatura microorganismos
clasificacin
de
los
El mtodo de nomenclatura que se utiliza actualmente para los organismos fue establecido en 1735 por Carolus Linnaeus. Los nombres cientficos se latinizan porque el latn era el idioma utilizado tradicionalmente por los escolares. La nomenclatura cientfica asigna a cada organismo dos nombres: el primero es el gnero y se escribe siempre con mayscula, le sigue el epteto especfico (especie) con minscula. Una especie se nombra con el conjunto de gnero y epteto especfico y ambas palabras se escriben subrayadas o en cursiva. Por costumbre, una vez que se ha mencionado un nombre cientfico puede ser abreviado en lo sucesivo con la inicial del gnero seguida del epteto especfico. Los nombres cientficos pueden, entre otras cosas, describir el organismo, honrar a un investigador o identificar el hbitat de la especie. El gnero de la bacteria Escherichia coli alude a un cientfico, Theodor Escherichia, mientras que el epteto especifico colinos recuerda que E. coli vive en el colon o intestino grueso. En 1969 Robert Whittaker, de la Universidad de Cornell, propuso un sistema de clasificacin en cinco reinos basado en la organizacin celular y modelos
nutricionales de los organismos. El sistema de cinco reinos ha sido ampliamente aceptado y agrupa a todos
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los organismos en los siguientes reinos: Procariotae o Monera (eubacterias y
arqueobacterias). Protista (hongos mucosos, protozoos y algunas algas). Fungi (levaduras unicelulares, mohos pluricelulares y hongos carnosos). Plantae (algunas algas, musgos, helechos, conferas y plantas con flores). Animalia (que incluye, entre otros, esponjas,
gusanos, insectos y vertebrados). 1.1.6 La diversidad de los microorganismos 1.1.6.1 Bacterias Las bacterias son organismos unicelulares muy pequeos y relativamente sencillos cuyo material gentico no est rodeado por una membrana nuclear especial. Por este motivo las bacterias se denominan procariotas,
palabra griega que significa prencleo. Las bacterias constituyen el reino llamado Monera por Whittaker; otros, incluidos a este los reino
microbilogos, Procaryiotae.
denominan
Las clulas bacterianas suelen presentar una morfologa determinada entre varias posibles. Bacilo (en forma de bastoncillo), coco (clula
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esfrica u ovoide) y espirilo (en forma espiral o helicoidal) son las morfologas ms
corrientes, pero algunas presentan forma estrellada pueden racimos o cuadrangular. en Las bacterias cadenas, tales
agruparse u otras
parejas,
formaciones;
agrupamientos suelen ser nicos dentro de una especie concreta. Las bacterias estn recubiertas por paredes celulares que estn compuestas
principalmente por una sustancia denominada pptido glucano (en cambio la celulosa es el componente principal de las paredes de las plantas). Las bacterias se reproducen
generalmente dividindose en dos clulas hijas iguales, proceso denominado
fisinbinaria. Para su nutricin la mayora de las bacterias utilizan materia orgnica, que puede obtenerse en la naturaleza a partir de microorganismos muertos o de un husped vivo. Ciertas bacterias pueden formar sus propios nutrientes por fotosntesis y algunas pueden nutrirse a partir de compuestos inorgnicos. Muchas bacterias pueden
nadar mediante el movimiento de unos apndices llamados flagelos.
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1.1.6.2
Hongos Los hongos son eucariotas, organismos cuyas clulas poseen un ncleo definido que
contiene el material gentico celular y que est rodeado por una cubierta especial llamada membrana nuclear. Constituyen el reino Fungi. Los hongos pueden ser
unicelulares o pluricelulares. Los hongos macroscpicos pluricelulares, como las setas, pueden parecerse algo a las plantas, pero a diferencia de la mayora de ellas no pueden llevar a cabo la fotosntesis. Los hongos verdaderos tienen sus paredes celulares compuestas principalmente por una sustancia llamada quitina. Las levaduras, formas
unicelulares de hongos, son microorganismos ovoides mayores que las bacterias. Los mohos son los hongos ms caractersticos y forman micelios que son largos filamentos ramificados y entrelazados. El crecimiento algodonoso que se encuentra a veces sobre el pan y la fruta corresponde a micelios de mohos. Los hongos pueden reproducirse de forma sexual o asexual. Se nutren
absorbiendo materia orgnica en solucin de su medio ambiente: suelo, agua o un husped animal o vegetal.
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1.1.6.3
Protozoos Los protozoos son microbios eucariticos unicelulares que pertenecen al reino Protista. Se clasifican con arreglo a sus medios de locomocin. Las amebas se mueven
utilizando prolongaciones de su citoplasma llamadas seudpodos (falsos pies). Otros protozoos poseen flagelos o apndices ms cortos y numerosos llamados cilios. Presentan variedad de formas y viven como entes libres o como parsitos (organismos que obtienen sus nutrientes o de huspedes vivos),
absorbiendo
ingiriendo
compuestos
orgnicos del medio ambiente. Los protozoos pueden reproducirse sexual o asexualmente. 1.1.6.4 Algas Las algas son eucariotas fotosintticos, con amplia variedad de morfologas, que poseen a la vez formas sexuales y asexuales de reproduccin. Las algas de inters para los microbilogos son miembros del reino Protista y generalmente unicelulares. Abundan en aguas dulces y marinas, suelo y asociadas a plantas. Como organismos fotosintticos las algas necesitan luz y aire para la produccin de alimentos y el crecimiento pero no requieren
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generalmente
compuestos
orgnicos
del
medio
ambiente.
Como
resultado de la fotosntesis las algas producen oxgeno e hidratos de carbono que son ingeridos por otros organismos, incluidos los animales. Las algas juegan un importante papel en el equilibrio de la naturaleza. 1.1.6.5 Virus Los virus son muy distintos de los otros grupos microbianos citados. Son tan
pequeos que la mayora pueden verse nicamente con microscopio electrnico y no son celulares. Con una estructura muy simple la partcula vrica contiene un centro (core) formado por un solo tipo de cido nucleico, ya sea DNA (cido desoxirribonucleico) o RNA (cido ribonucleico). Este centro est rodeado por una cubierta proteica que algunas veces est a su vez revestida por una capa adicional, una membrana lipdica llamada envuelta. Todas las clulas vivas poseen RNA y DNA a la vez, pueden llevar a cabo reacciones qumicas y pueden reproducirse como unidades autosuficientes. Los virus pueden reproducirse solamente en el interior de las clulas de otros organismos. Los virus son, por tanto, parsitos de otras formas de vida.
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1.1.7 Los microbios y el bienestar humano Como se mencion anteriormente slo una minora de los microorganismos son patgenos. Tambin son una minora los microbios que causan el deterioro de los alimentos, como las manchas blandas en frutas y vegetales, la putrefaccin de la carne, el
enranciamiento de grasas y aceites y el pan viscoso. La inmensa mayora de los microbios benefician de muchas maneras al ser humano as como a otros animales y plantas. En los siguientes apartados se resaltan algunas de estas actividades beneficiosas, que sern tratadas con ms detalle en captulos posteriores. 1.1.7.1 Reciclando elementos vitales Los descubrimientos de dos microbilogos de la dcada de 1880 constituyen la base del conocimiento actual de los ciclos biolgicos que mantienen la vida sobre la Tierra. Martinus Beijerinck y Sergei Winogradsky fueron los primeros en demostrar que las bacterias elementos atmsfera. estudio de contribuyen vitales La entre al el reciclado suelo y de la el los
ecologa las
microbiana, entre
relaciones
microorganismos y el medio ambiente, y la fisiologa microbiana, el estudio de las actividades metablicas de los microbios, nacieron a partir de los trabajos de Beijerinck
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y Winogradsky. Hoy la ecologa microbiana se ha ramificado e incluye el estudio de las interacciones de las poblaciones microbianas con plantas y animales en distintos ambientes. Concierne tambin a los eclogos
microbianos la contaminacin de las aguas y del medio ambiente. Sabemos hoy que elementos qumicos como nitrgeno, carbn, oxgeno, azufre y fsforo son esenciales para la vida y estn
disponibles slo en cantidades limitadas, aunque bastante grandes. Se encuentra nitrgeno, oxgeno y carbono (como dixido de carbono) en forma de gases en la atmsfera. El azufre y el fsforo estn almacenados en la corteza terrestre. Son fundamentalmente los microorganismos los que convierten estos elementos en formas que pueden ser utilizadas por las plantas y los animales. El ciclo del nitrgeno es un ejemplo de cmo un elemento El es reciclado es por un
microorganismos.
nitrgeno
componente fundamental de todas las clulas vivas: est presente en las protenas y en los cidos nucleicos, DNA y RNA. Aunque el nitrgeno supone el 79% de la atmsfera, los animales y las plantas no pueden utilizarlo en
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esa forma gaseosa. Algunas bacterias del suelo y las cianobacterias (pertenecientes al reino Monera) de las aguas combinan el nitrgeno con otros elementos (llevan a cabo la fijacin de nitrgeno), de modo que puedan ser incorporados a las clulas vivas y entrar en la cadena alimenticia. Cuando otras bacterias ayudan a descomponer animales y plantas muertos los compuestos que
contienen nitrgeno son liberados al medio ambiente, este nitrgeno presente en el suelo es transformado de nuevo por otros microbios en nitrgeno gaseoso. En el ciclo del carbono las plantas verdes y las algas toman dixido de carbono del aire y lo transforman en alimento utilizando la luz del sol a travs de la fotosntesis; Cuando este alimento es consumido por otros organismos, incluyendo seres humanos, se produce
dixido de carbono a travs del proceso denominado respiracin. Los
microorganismos, principalmente bacterias, juegan otro papel crucial en el ciclo del carbono al devolver tambin dixido de carbono a la atmsfera cuando descomponen residuos orgnicos de animales y plantas muertos. Las algas, las plantas superiores y algunas bacterias participan tambin en el ciclo del oxgeno al devolver oxgeno al aire
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durante la fotosntesis. 1.1.7.2 Utilizacin de microbios para el
tratamiento de aguas residuales Con la preocupacin creciente por la
conservacin del medio ambiente somos conscientes de nuestra responsabilidad de reciclar la preciada agua y evitar la
contaminacin de ros y ocanos. Uno de los contaminantes principales son las aguas residuales que contienen excrementos
humanos y de animales, agua de lavado, residuos industriales y aguas superficiales de arrastre. Las aguas residuales contienen un 99,9% de agua con unas centsimas del 1% de slidos en suspensin, el resto est formado por una variedad de materiales disueltos. Estos materiales indeseables y los
microorganismos peligrosos son eliminados en las plantas de tratamiento de aguas residuales. Para ello se combinan varios procesos fsicos y qumicos con la utilizacin de microbios beneficiosos. Primero se retiran slidos grandes como papel, madera, vidrio, grava y plstico; queda el lquido con orgnicos que las bacterias
materiales
convierten en subproductos como dixido de

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carbono, nitratos, fosfatos, sulfatos, amonio, cido sulfhdrico y metano. 1.1.7.3 Losmicroorganismos en el control de los insectos Los insectos diseminan enfermedades que causan daos devastadores en las cosechas. Por eso el control de los insectos es importante para la agricultura as como para la prevencin de las enfermedades humanas. Actualmente varios tipos de bacterias estn siendo utilizados para reducir las infestaciones por insectos. Bacillus thurigiensis es una bacteria que ha sido ampliamente utilizada en los Estados Unidos para controlar plagas como el gusano de la alfalfa, la oruga de la cpsula del algodonero, las orugas
taladradoras del maz, las orugas de la col, las del brote del tabaco y las orugas polfagas de los frutales. Esta especie bacteriana produce cristales de protena que son txicos para el aparato digestivo de los insectos. Se cultivan enormes cantidades de esta bacteria, se desecan y se incorporan a polvos de fumigar que se aplican a los cultivos.
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1.1.7.4
La moderna microbiologa industrial y la ingeniera gentica Se mencion el uso comercial producir de
microorganismos
para
varios
alimentos y compuestos qumicos comunes. Dos aspectos recientes de la microbiologa industrial han atrado considerable atencin: la protena de unicelular, origen un sustituto y la
alimenticio
microbiano,
ingeniera gentica, una nueva tecnologa que expande enormemente el potencial de las bacterias consideradas como factoras
bioqumicas en miniatura. a) Protena unicelular
La demanda de alimentos se incrementa con el crecimiento de la poblacin mundial. En respuesta a esta demanda los cientficos investigan nuevas fuentes de alimentos. Una de ellas es la protena unicelular, producida (con otros nutrientes) por microorganismos cultivados sobre desechos industriales. La ventaja de la protena unicelular sobre las cosechas vegetales crecen es que los y
microorganismos
rpidamente
pueden producir un rendimiento elevado, que se estima en unas 15 veces mayor que la cantidad de semilla de soja (un alimento de
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alto contenido proteico) y 50 veces mayor que la cantidad de maz cultivado en el mismo tiempo. Por ejemplo, 1,5 tm de levaduras pueden producir Sin 50 tm de la protena protena
diariamente.
embargo,
unicelular no es muy apetitoso y en algunos casos debera ser suplementada con
aminocidos esenciales para proporcionar una dieta proteica equilibrada. Por el
momento la protena unicelular se utiliza principalmente para la alimentacin animal. b) La Ingeniera gentica ingeniera gentica tiene tambin
importantes aplicaciones en la agricultura pero de momento la mayora de sus contribuciones al bienestar humano se han realizado en aspectos mdicos. Las tcnicas de DNA recombinante se han utilizado para producir varias protenas naturales que resultaran de otro modo muy costosas y difciles de aislar y purificar. Tales protenas presentan un
potencial enorme de utilizacin clnica. Entre ellas se encuentra la insulina, una hormona utilizada para disminuir la concentracin
sangunea de glucosa en diabticos; una hormona de crecimiento necesaria durante la infancia; el interfern, una sustancia antivrica (y posiblemente anticancerosa); el factor VIII, un factor de coagulacin que falta en la
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sangre de la mayora de los hemoflicos; el activador tisular del plasmingeno, sustancia utilizada para disolver los cogulos en sangre en las arterias coronarias; la -endorfina, que suprime el dolor; una protena del virus de la hepatitis B, utilizada como vacuna contra esa enfermedad, y protenas utilizadas para tratar determinadas deficiencias inmunitarias.
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Cap. 2. Observacin de Microorganismos a travs del microscopio
Captulo Observacin de Microorganismos a travs del microscopio
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CAPITULO 2 OBSERVACIN DE MICROORGANISMOS A TRAVS DEL MICROSCOPIO 2.1 INTRODUCCIN Los microorganismos son demasiado pequeos para ser observados a simple vista, por lo que es necesario utilizar un microscopio (micro significa pequeo y skopein significa ver). En la poca de Antn van Leeuwenhoek mirar por un microscopio significaba ver a travs de anillos de arco iris, sombras e imgenes mltiples. En cambio los modernos microbilogos pueden utilizar microscopios que proporcionan, con una gran claridad, aumentos de decenas a cientos de veces superiores a los obtenidos con las lentes sencillas de van Leeuwenhoek. Algunos microbios son ms visibles que otros. Muchos de ellos deben sufrir varios procedimientos de tincin antes de que sus paredes celulares, membranas y estructura pierdan su estado natural incoloro u opaco. 2.2 Unidades de medida Al ser tan pequeos los microorganismos y los elementos que los componen se miden en unidades que resultan poco familiares en nuestra vida normal. Para medir los
microorganismos utilizamos el sistema mtrico, cuya unidad de longitud es el metro (m). Los microorganismos y sus componentes estructurales se
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miden en unidades ms pequeas, como micrmetros, nanmetros y angstroms. Un micrmetro (m), conocido antes como micra (), equivale a 0,000001 m. 2.3 Microscopa: los instrumentos El microscopio simple utilizado en el siglo XVII por Antn van Leeuwenhoek tena slo una lente y era similar a una lupa. Los contemporneos de van Leeuwenhoek, como Robert Hooke, construyeron microscopios con varias lentes llamadas microscopios compuestos. La historia adjudica la construccin del primer microscopio compuesto a un ptico holands, Tacharas Janssen, hacia 1600. No fue hasta 1830, aproximadamente, cuando Joseph Jackson Lister (el padre de Joseph Lister) desarroll un microscopio notablemente mejorado. A partir del microscopio de Lister tuvieron lugar varas innovaciones que condujeron al desarrollo del moderno microscopio compuesto, que es el tipo utilizado actualmente en un laboratorio de microbiologa. 2.3.1 Microscopio ptico compuesto Un moderno microscopio compuesto posee dos grupos de lentes, el objetivo y el ocular y utiliza luz visible como fuente de iluminacin. Utilizando el microscopio ptico compuesto se pueden examinar especmenes muy pequeos y algunos de sus detalles o ultraestructura. Un conjunto de lentes finamente talladas forman una imagen claramente enfocada muchas veces mayor que el espcimen. Este aumento se logra cuando los rayos de luz procedentes de la fuente luminosa han pasado a
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travs de un condensador, que los dirige rige a travs de la muestra; a continuacin entran en las lentes del objetivo, las ms prximas al espcimen y la imagen obtenida es ampliada de nuevo por las lentes del ocular. Figura 2.1. Microscopio ptico co compuesto, (a) Camino recorrido por la luz.
Eje de visin Lentes del ocular Paso de la luz Prisma
Tubo Lentes del objetivo
Muestra
Condensador Iluminador Estativo con fuente de luz
El aumento total de la muestra se calcula multiplicando el aumento proporcionado por las lentes del objetivo por el que suministran las lentes del ocular. La mayora de
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los microscopios utilizados en microbiologa poseen varios objetivos, que proporcionan 10x (bajo aumento), 40 x (alto aumento) y 100 x (de inmersin en aceite). La mayora de los oculares amplan la imagen 10 veces. Multiplicando los aumentos de un objetivo especfico por los del ocular se observa que el aumento total puede ser de 100 x a bajo aumento, 400 x a alto aumento y 1.000x con inmersin en aceite. La figura muestra la relacin entre el poder de resolucin del ojo humano, del microscopio ptico y el microscopio electrnico y el tamao de diversos especmenes. Para conseguir una imagen clara, finamente detallada, al microscopio ptico compuesto, deben teirse las muestras para que contrasten ntidamente con el medio que las rodea. Para alcanzar ese contraste es necesario cambiar el ndice de refraccin de la muestra con respecto al del medio. El ndice de refraccin es una medida de la velocidad relativa a la cual la luz atraviesa un material. Podemos cambiar el ndice de refraccin de las muestras tindolas, procedimiento que se tratar ms adelante. Tras la tincin, cuando los rayos de luz atraviesan dos sustancias (la muestra y el medio que la rodea) con distintos ndices de refraccin, sufren un cambio de direccin (se refractan) en el lmite entre las dos sustancias, aumentando el contraste entre la muestra y el medio.
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Figura 2.2. Relacin entre los tamaos de diversas muestras y el poder de resolucin del ojo humano, del microscopio ptico y del microscopio electrnico. La zona coloreada seala el margen de tamao de los organismos de los que trata este libro.
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2.3.2 Microscopia de campo oscuro El microscopio de campo oscuro se utiliza para examinar algunos microorganismos que, o bien son invisibles en su forma viva al microscopio ptico normal, o no pueden ser teidos por los mtodos corrientes, o sufren tal distorsin al ser teidos que no pueden identificarse sus caractersticas. Un microscopio de campo oscuro utiliza en vez de un condensador normal un condensador de campo oscuro, que contiene un disco opaco. El disco bloquea la luz que llegara directamente al objetivo. Slo la luz que ha sido refractada por la muestra alcanza las lentes del objetivo. Como no hay un fondo luminoso la muestra aparece iluminada sobre un fondo negro, el campo oscuro. A menudo las estructuras internas de la clula no son visibles. Esta tcnica se utiliza frecuentemente para examinar microorganismos sin teir suspendidos en un lquido. 2.3.3 Microscopa de contraste de fases Otra forma de observar los microorganismos es con un microscopio de contraste de fases. Esta tcnica es particularmente detallado de til las porque permite un examen de los
estructuras
internas
microorganismos vivos. Adems no es necesario fijar la preparacin (fijar los microorganismos al portaobjetos) ni
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teirla,
procesos
que
podran
daar
los
microorganismos. La microscopa de contraste de fases se basa en ligeras variaciones del ndice de refraccin. Al atravesar los rayos de luz la preparacin su velocidad puede ser alterada por las diferencias de espesor y por las propiedades fsicas de las distintas partes de la muestra. Los rayos de luz sufren distintas difracciones y recorren distintos caminos (se desfasan unos con respecto a otros) antes de alcanzar el ojo del observador. Estas diferencias de fase son detectadas por el observador como diferencias de contraste entre la muestra y el fondo. Tambin se aprecian ms ntidamente en microscopa de contraste de fases detalles de las estructuras internas de la muestra que aparecen como diferencias de luminosidad sobre un fondo oscuro. 2.3.4 Microscopa de fluorescencia La microscopa de fluorescencia saca partido de la fluorescencia. Los compuestos fluorescentes absorben luz de onda corta (ultravioleta) y emiten luz de longitud de onda mayor, que puede verse utilizando filtros adecuados. Algunos microorganismos fluorescen de forma natural bajo una iluminacin especial. Si la muestra a examinar no fluoresce de forma natural se tie con colorantes fluorescentes llamados
fluorocromos. Los microorganismos teidos con un fluorocromo y examinados con luz ultravioleta, o prxima al ultravioleta, aparecen como objetos
luminosos, brillantes, sobre un fondo oscuro.

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Lentes del ocular
Lentes del objetivo Luz sin difractar Muestra Lentes del condensador Disco opaco Slo la luz difractada por la muestra es captada por las lentes del objetivo
Luz (b) Campo claro
Luz (b) Campo oscuro
Lentes del ocular
Placa de difraccin (fases) Lentes del objetivo Luz sin difractar (fases inalteradas por la muestra) Luz difractada (fase alterada por la muestra) Muestra Lentes del condensador Diafragma anular
Luz (c) Contraste de fases Figura 2.3. Microscopios de campo claro, campo oscuro y contraste de fases, (a) Recorrido de la luz en un microscopio de campo claro, (b) Recorrido de la luz en un microscopio de campo oscuro. Este es similar a un microscopio de campo claro pero utiliza un condensador especial que contiene un disco opaco, el cual elimina la luz del centro del haz. La nica luz que alcanza la preparacin incide ide angularmente; por tanto, slo la luz difractada por la muestra (flechas de color) alcanza las lentes del objetivo. (c) Microscopa de contraste de fases. Los rayos de luz se difractan de distinta forma y recorren rutas diferentes hasta alcanzar el ojo del observador. Los rayos de luz difractada aparecen en color; los de luz no difractada se representan en negro. 34
2.3.5 Microscopa electrnica Los objetos inferiores a 0,2 m, como los virus o las estructuras internas celulares, deben observarse con un microscopio electrnico. Su poder de resolucin es mucho mayor que el de los otros microscopios citados debido a que la lentitud de onda de los electrones es alrededor de 100.000 veces menor que la de la luz visible. Por ello el microscopio electrnico se utiliza para examinar estructuras demasiado pequeas para ser resueltas con el microscopio ptico. En el microscopio electrnico se utiliza un haz de electrones en lugar de luz. Los electrones libres viajan formando ondas, exactamente igual que la luz. En lugar de lentes de vidrio el microscopio electrnico utiliza lentes electromagnticas para enfocar un haz de electrones a travs de un tubo, en el que se ha hecho el vaco, sobre la muestra. Hay dos tipos de microscopios electrnicos: los microscopios electrnicos de transmisin y los
microscopios electrnicos de barrido. 2.3.5.1 Microscopa electrnica de transmisin En el microscopio electrnico de
transmisin un haz de electrones enfocado con precisin pasa a travs de una seccin ultrafina de la muestra, especialmente
preparada. El haz es enfocado sobre una

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pequea
rea
de
la
muestra
por
un
condensador de lentes electromagnticas, que realiza aproximadamente la misma
funcin que el de un microscopio ptico: dirigir el haz de electrones en lnea recta para iluminar la preparacin. 2.3.5.2 Microscopia electrnica de barrido El microscopio electrnico de barrido soluciona ese problema asociado a la
microscopia electrnica de transmisin. En la microscopia electrnica de barrido un can de electrones proporciona una haz de
electrones enfocado con precisin, llamado haz primario. Estos electrones atraviesan lentes electromagnticas y son dirigidos sobre la superficie de la muestra. El haz primario de electrones arranca nuevos electrones de la superficie de la muestra y estos electrones secundarios colector de son transmitidos hasta un y
electrones,
amplificados
utilizados para formar una imagen sobre una pantalla o sobre una placa fotogrfica. El microscopio electrnico de barrido es
especialmente til en el estudio de estructuras superficiales de clulas intactas y virus. 2.4. Preparacin de muestras para microscopa ptica Como la mayora de los microorganismos aparecen casi
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incoloros al microscopio ptico normal, a menudo es necesario prepararlos para la observacin. Una forma de hacerlo es mediante tincin (teido). Se comentarn a continuacin las distintas tcnicas de tincin. 2.4.1. Preparacin y tincin de extensiones La mayora de los estudios sobre las morfologas y agrupaciones celulares de los microorganismos se hacen a partir de preparaciones teidas. Teir significa simplemente colorear los microorganismos con un colorante que resalta algunas estructuras. Sin embargo, para poderlos teir es necesario que los
microorganismos hayan sido adheridos o fijados al portaobjetos; de otro modo la tincin podra eliminarlos por lavado. Para fijar una muestra se comienza por extender una delgada pelcula del material que contiene los
microorganismos sobre la superficie del portaobjetos. Esta pelcula se denomina extensin. Despus de dejarla secar al aire el portaobjetos se pasa lentamente a travs de la llama de un mechero Bunsen varias veces, con el lado de la extensin haca arriba. El flameado desnaturaliza (coagula) las protenas
microbianas y adhiere a los microorganismos sobre el porta. Este procedimiento de fijado suele matar al microorganismo. Se aplica entonces el colorante, lavndolo despus con agua y se enjuaga el
portaobjetos con papel de filtro. Los microorganismos

37
teidos estn listos para el examen microscpico. Para la tincin se utilizan sales compuestas de un ion positivo y otro negativo, uno de los cuales es coloreado y denominado cromforo. En los llamados colorantes bsicos es el ion positivo y en los colorantes cidos es el negativo. A pH 7,0 las bacterias tienen carga ligeramente negativa y por lo tanto el ion positivo coloreado de un colorante bsico es atrado por la clula bacteriana. Ejemplos de colorantes bsicos son el cristal violeta, el azul de metileno y la safranina. Los colorantes cidos no son atrados por la mayora de las bacterias porque los iones negativos del colorante son repelidos por la superficie bacteriana cargada
negativamente. De modo que el colorante es repelido por la bacteria y colorea en cambio el fondo de la preparacin. Esta preparacin de bacterias incoloras sobre un fondo coloreado se llama tincin negativa. Es til para la observacin de la morfologa externa de la clula, del tamao y de las cpsulas, porque las clulas resultan muy visibles al contrastar con el fondo oscuro. Las distorsiones del tamao y la morfologa celulares son mnimas porque no es necesario el fijado por calor y las clulas no toman el colorante. Ejemplos de colorantes cidos son la eosina y la nigrosina. Para aplicar los colorantes cidos o bsicos los microbilogos utilizan tres tipos de tcnicas de tincin: simple, diferencial y especial.
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2.4.2 Tipos de Tinciones 2.4.2.1 Tinciones simples Un colorante simple es una solucin acuosa o alcohlica de un slo colorante bsico. Aunque distintos colorantes se unen
especficamente a partes diferentes de la clula, el objetivo primario de una tincin simple es destacar al microorganismo entero, de forma que la morfologa y las agrupaciones celulares resulten visibles. El colorante se aplica a la extensin fijada durante un tiempo determinado; preparacin despus se seca se y lava se y la
examina.
Ocasionalmente se aade un compuesto qumico a la solucin para intensificar la tincin. Un aditivo de este tipo se conoce como mordiente. Algunos de los colorantes simples utilizados corrientemente en el
laboratorio son el azul de metileno, la carbolfuchsina, el violeta de genciana y la safranina. 2.4.2.2 Tinciones diferenciales En contraste con las tinciones simples, las tinciones diferenciales dan reacciones
distintas con diferentes tipos de bacterias y por lo tanto permiten distinguirlas. utilizadas Las ms
39
tinciones
diferenciales
frecuentemente para las bacterias son la tincin de Gram y la tincin de cido-alcohol resistencia. a) Tincin de Gram La tincin de Gram fue desarrollada en 1884 por el bacterilogo dans Hans Christian Gram. Es uno de los procedimientos de tincin ms tiles porque divide a las bacterias en dos grandes grupos: gram-positivas y gram-negativas. En esta tcnica se cubre la extensin fijada por calor con un colorante bsico morado, generalmente cristal violeta. Como imprime un color morado a toda la preparacin se denomina tincin primaria. Al poco tiempo se lava el colorante y se cubre la extensin con yodo, un mordiente. Cuando se lava el yodo tanto las bacterias gram-positivas como las gram-negativas aparecen de color violeta oscuro o morado. A continuacin la
preparacin se lava con una solucin de etanol o de etanol y acetona. Esta solucin es un agente decolorante que elimina l color morado de las clulas de algunas especies pero no de otras. Se lava entonces el alcohol y se tie la preparacin con safranina, un colorante bsico rojo. La extensin es lavada
40
de
nuevo,
secada
examinada
al
microscopio. El colorante morado y el yodo se combinan con las bacterias colorendolas de violeta oscuro o morado. Las bacterias que retienen este color despus del intento de decoloracin con alcohol se clasifican como gram-positivas. Las bacterias que pierden el color violeta oscuro o morado tras la decoloracin se clasifican como gram-negativas. Como las bacterias gram-negativas quedan incoloras tras el lavado con alcohol ya no son visibles. Por este motivo se aplica entonces la safranina que tie las bacterias gram-
negativas de rosado. Colorantes como la safranina, que se utilizan para proporcionar contraste, se denominan colorantes de
contraste. Como las bacterias gram-positivas retienen la tincin morada inicial no se ven afectadas por la tincin de contraste con safranina. b) Tincin de cido-alcohol resistencia Los microbilogos utilizan esta tincin para identificar bacterias pertenecientes a los
gneros Mycobacterium y Nocardia. Aunque muchas bacterias de este grupo no son patgenas, hay dos miembros que son
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importantes
productores
de
enfermedad,
Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae. La diferencia y principal con del otros
Mycobacterium
Nocardia
microorganismos es que estos dos gneros poseen ceras en sus paredes celulares. En la tcnica de tincin de cido-alcohol resistencia se aplica sobre la extensin fijada el colorante rojo carbolfuchsina y el
portaobjetos se calienta suavemente sobre una llama durante varios minutos. El calor facilita la penetracin y retencin del
colorante. Se deja enfriar la preparacin y se lava con agua. A continuacin se trata con cido y alcohol, un decolorante, que elimina el colorante rojo de las bacterias que no son cido-alcohol resistentes. Las bacterias cidoalcohol resistentes retienen el color rojo porque la carbolfuchsina es ms soluble en las ceras que forman parte de su pared celular que en el cido-alcohol. En las bacterias no cido-alcohol carecen de resistentes, ceras, la cuyas paredes es la
carbolfuchsina durante
rpidamente
eliminada
decoloracin, quedando sus clulas sin teir. La extensin se tie entonces con azul de metileno como colorante de contraste. Las bacterias que no son cido-alcohol resistentes aparecen azules tras la tincin de contraste.
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c) Tinciones especiales Las tinciones especiales se utilizan para teir aisladamente partes especficas de los microorganismos, como endosporas y flagelos y para poner en evidencia la presencia de cpsulas. d) Tincin negativa de cpsulas Muchos microorganismos poseen una
cubierta gelatinosa llamada cpsula. En microbiologa clnica la demostracin de la presencia de cpsula es un medio para determinar la virulencia de un
microorganismo, la capacidad de un patgeno para producir enfermedad. La tincin de cpsulas es ms difcil que otros tipos de tincin porque los materiales capsula) son solubles en agua y pueden ser desplazados o eliminados durante los lavados. Para
demostrar la presencia de cpsula pueden mezclarse las bacterias con una solucin que contenga una solucin coloidal de quenas partculas coloreadas (tinta china
generalmente que sirva de fondo y teir despus las clulas el un colorante simple como la safranina.
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e) Tincin de esporas (endosporas) Aunque son relativamente poco frecuentes en las clulas bacterianas, seis gneros de bacterias pueden formar endosporas. La endospora, formada dentro de la clula, protege al microorganismo de las condiciones ambientales adversas. Las endosporas no pueden ser teidas por los mtodos corrientes como la tincin simple o la de Gram, porque los colorantes no atraviesan la pared de la endospora. Sin embargo, las endosporas son muy refrctiles y pueden detectarse fcilmente al microscopio ptico. La tincin de endosporas ms utilizada es la de Schaeffer-Fulton. El colorante primario, verde malaquita, se aplica a la extensin fijada por calor y se calienta hasta el desprendimiento de vapores durante unos cinco minutos. El calor facilita la penetracin del colorante a travs de la pared de la endospora. A continuacin se lava la
preparacin durante unos 30 segundos con agua para eliminar el verde malaquita de todas las partes de la clula, excepto de la endospora. El paso siguiente es la aplicacin del colorante de contraste, safranina, para desplazar cualquier residuo de verde
malaquita del resto de la clula y teirla. En una

44
tincin
correctamente
realizada
las
endosporas aparecen verdes dentro de las clulas rojas o rosadas. f) Tincin de flagelos Los flagelos bacterianos son estructuras de locomocin demasiado pequeas para verse al microscopio ptico. Para poderlas visualizar se utiliza un procedimiento de tincin tedioso y delicado que emplea un mordiente y
carbolfuchsina para engrosar el dimetro de los flagelos hasta hacerlos aparentes al microscopio ptico. Los microbilogos utilizan el nmero y disposicin de los flagelos como una ayuda para la identificacin.
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Cap. 3. Clula procaritica
Captulo Clula procaritica
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47
CAPTULO 3 CLULA PROCARITICA 3.1. Introduccin Los miembros del mundo procariota comprenden un vasto y heterogneo grupo de organismos unicelulares. Este grupo incluye las eubacterias o bacterias verdaderas y las arqueobacterias. Los millares de especies bacterianas se diferencian por muchos factores, entre los que se cuentan la morfologa, la composicin qumica (a menudo detectada por reacciones de tincin), los requerimientos nutricionales y las actividades bioqumicas. Las caractersticas clave para distinguir las clulas
procariticas (lo que significa proncleo en griego) son las siguientes: 1. Su material gentico (DNA) no est encerrado dentro de una membrana. 2. Carecen de otros orgnulos rodeados de membranas. 3. Su DNA no est asociado a protenas de la clase delas histonas (protenas cromosmicas especiales que se hallan en eucariotas). 4. Sus paredes celulares contienen casi siempre pptido glucano, un polisacrido complejo. 5. Suelen dividirse por fisin binaria. En este proceso se copia el DNA y la clula se divide en dos. La fisin binaria implica menos estructuras y procesos que la mitosis y divisin celular de los eucariotas.
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3.2.
Tamao,
morfologa
disposicin
de
las
clulas
bacterianas Se da una gran variedad de tamaos y morfologas entre las bacterias. La mayora de ellas oscilan entre 0,2 y 2,0 m de dimetro y presentan una de las tres morfologas bsicas siguientes: la esfrica o de coco (que significa baya), la de bastoncillo o bacilo y la espiral. Los cocos suelen ser esfricos, pero pueden ser ovalados, alargados o con un lado aplanado. Cuando los cocos se dividen para reproducirse pueden permanecer unidos uno a otro. Los cocos que permanecen en parejas tras dividirse se llaman diplococos. Aquellos que se dividen en dos planos y forman grupos de cuatro se conocen como tetradas. Los que se dividen por tres planos regulares y quedan divididos en grupos cbicos de ocho se llaman sarcinas y aquellos que se dividen siguiendo planos al azar y forman racimos como los de uva o anchas lminas son estafilococos. Estas agrupaciones son
frecuentemente tiles para la identificacin de algunos cocos. Los bacilos se dividen solamente a travs de su eje ms corto, de forma que hay menos agrupamientos de bacilos que de cocos. Los diplobacilos aparecen en parejas tras la divisin y los estreptobacilos se presentan en cadenas. Algunos bacilos tienen el aspecto de cigarrillos, otros poseen extremos afilados como los cigarros puros. Existen an otros que son ovalados y se parecen tanto a los cocos que se llaman cocobacilos. Sin embargo, la mayora de los bacilos se presentan de forma aislada. (fig.3.2)
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El trmino bacilo tiene dos significados en microbiologa; usado como hasta ahora se refiere a la morfologa bacteriana, pero puede ser tambin el origen de un nombre genrico. Por ejemplo, la bacteria Bacillus anthracis es el agente etiolgico del carbunco. Las bacterias espirales pueden tener una o ms vueltas; nunca aparecen rectas. Los bacilos curvados en forma de coma se denominan vibrios. Otros, llamados espirilos, poseen una morfologa helicoidal caracterstica, que recuerda un sacacorchos, con un cuerpo celular bastante rgido. Hay an otro grupo de bacterias espirales llamadas espiroquetas. A diferencia de los espirilos, que poseen flagelos, las espiroquetas se mueven por medio de un filamento axial, parecido a un flagelo pero que se encuentra dentro de una vaina externa flexible que rodea a la bacteria. Como se ver ms adelante, algunos gneros bacterianos presentan
morfologas y disposiciones ms complejas. Adems de las tres morfologas bsicas hay tambin clulas en forma de estrella (gnero Stella) y se han descubierto recientemente clulas planas, cuadrangulares (el propuesto gnero Arcula). La morfologa de una bacteria viene determinada por la herencia. Sin embargo, ciertas condiciones ambientales pueden alterar esa morfologa y cuando esto ocurre la identificacin se hace an ms difcil. Adems algunas bacterias, como Rhizobium y Corynebacterium, son
genticamente pleomrficas, lo que significa que pueden

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presentar muchas morfologas. En la figura 3.1 se muestra la estructura de una clula procaritica (bacteriana) caracterstica. http://youtu.be/EEiqbuTk8us
Figura 3.1. Clulas en forma de estrella y cuadrangulares, (a) Stella (en forma de estrella) (36.000x). (b) Arcula (de forma cuadrada) (1.700x).
Figura 3.2. Morfologas tpicas de bacterias. 51
3.3.
Estructuras externas a la pared celular Entre las estructuras externas a la pared celular procaritica se encuentran el glucoclix, que puede tomar la forma de una cpsula o de una capa mucilaginosa, los flagelos, los filamentos axiales y las fimbrias (pili). 3.3.1 Glucoclix Glucoclix es un polmero gelatinoso compuesto de polisacridos, de polipptidos, o de ambos. El material del glucoclix es viscoso (pegajoso).y en su mayora se forma en el interior de la clulas para ser excretado a la superficie. Si est sustancia est organizada y
firmemente unida a la pared celular el glucoclix se denomina cpsula. El glucoclix se describe como una capa mucilaginosa. Las cpsulas son un importante mecanismo de virulencia (la medida en la que un patgeno produce enfermedad) en algunas especies. Las cpsulas protegen a menudo a las bacterias patgenas de la fagocitosis por clulas del husped. Otra funcin del glucoclix pegajoso es la adhesin de la bacteria sobre distintas superficies con el fin de sobrevivir en su ambiente natural. Mediante la
adhesividad las bacterias pueden fijarse a superficies tan diversas como las rocas de un torrente de aguas rpidas, las races de las plantas, los dientes y tejidos
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humanos e incluso a otras bacterias. 3.2.2 Flagelos Los flagelos (palabra que significa ltigo) son largos apndices filamentosos que impulsan a la bacteria. Los flagelos se presentan en las clulas bacterianas en cuatro disposiciones diferentes: monotricos (un solo flagelo), anfitricos (un solo flagelo en cada extremo de la clula), lofotricos (dos o ms flagelos en uno o en ambos extremos de la clula) y peritricos (flagelos distribuidos en toda la superficie celular). El flagelo tiene tres partes fundamentales. La regin ms externa, el filamento, es constante en dimetro y contiene la protena globular (aproximadamente
esfrica) flagelina, dispuesta en varias cadenas que forman una hlice alrededor de un ncleo hueco. Las protenas flagelares sirven para identificar algunas bacterias. El filamento se une a un gancho ligeramente ms grueso, formado por una protena distinta. La tercera porcin del flagelo es el cuerpo basal, que le sirve de anclaje a la pared celular y a la membrana citoplasmtica. Las bacterias flageladas son mviles, es decir, tienen la capacidad de moverse por s mismas. Cada flagelo procaritico es un rotor helicoidal, semirrgido, que empuja a la clula al girar a partir del cuerpo basal. La rotacin del flagelo puede ser en el sentido de las
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agujas de un reloj o en el contrario, a lo largo de su eje. En cambio, los flagelos eucariticos tienen un
movimiento ondulante. El movimiento de un flagelo procaritico es la consecuencia de la rotacin de su cuerpo basal y es similar al giro del eje de un motor elctrico. Al rotar el flagelo forma un remolino que desplaza el agua y propulsa a la bacteria. Una ventaja de la movilidad es que permite a una bacteria moverse hacia un ambiente favorable o alejarse de uno adverso. La aproximacin o alejamiento de una bacteria con respecto a un estmulo
determinado se llama taxis. Tales estmulos pueden ser qumicos (quimiolaxis) o luminosos (fototaxis). Las bacterias mviles poseen receptores en diversas localizaciones, como en la pared celular o debajo de ella. Estos receptores recogen estmulos qumicos, como oxgeno, ribosa o galactosa. En respuesta al estmulo la informacin es transmitida a los flagelos. Si la seal quimiotctica es positiva es un atractante, la bacteria se mueve hacia el estmulo con muchas carreras y pocos tumbos. Si la seal quimiotctica es negativa, un repelente, aumenta la frecuencia de los tumbos y la bacteria se aleja del estmulo. 3.3.3 Filamentos axiales Los filamentos axiales poseen una estructura similar a la de los flagelos y estn anclados en un extremo de la espiroqueta. La rotacin de los filamentos hace que la
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clula helicoidal y rgida gire en direccin opuesta avanzando como un sacacorchos. Las clulas
eucariticas no poseen filamentos axiales. 3.3.4 Fimbrias Las fimbrias, o pili (en singular pilus), son apndices en forma de vellosidades unidos a las clulas bacterianas de forma muy parecida a los flagelos, pero son considerablemente ms cortas y delgadas. Como los flagelos, las fimbrias estn compuestas por una protena (llamada pilina) dispuesta helicoidalmente alrededor de un ncleo central. Las fimbrias pueden presentarse en los extremos de la clula bacteriana o estar uniformemente distribuidas sobre toda la
superficie. Pueden darse desde unas pocas a varios cientos de fimbrias por clula. Muchas bacterias gramnegativas poseen fimbrias. Las clulas eucariticas no las poseen. Hay fimbrias de dos tipos, con funciones diferentes. En el primer tipo, las fimbrias comunes, permiten a la clula adherirse a las superficies, incluyendo las de otras clulas. Esta funcin es similar a la del glucoclix. Un segundo tipo de fimbria, llamadas pelos (o pili) sexuales, facilitan la unin de las clulas bacterianas previa a la transferencia de DNA desde una clula a la otra.
55
3.4
La pared celular La pared celular de las clulas bacterianas es una estructura compleja, semirrgida, responsable de la morfologa
caracterstica de la clula. La pared celular recubre la frgil membrana citoplasmtica y la protege a ella y a las partes internas de la clula de los cambios adversos del medio ambiente. Casi todos los procariotas tienen pared celular. La funcin primordial de la pared celular es prevenir la ruptura de la clula bacteriana cuando su presin osmtica interna es mayor que la del medio externo. Sirve tambin de punto de anclaje a los flagelos, ayuda a mantener la morfologa de la clula y provoca sntomas de enfermedad en algunas especies. Aunque algunos eucariotas, como plantas, algas y hongos, poseen paredes celulares, stas difieren qumicamente de las de los procariotas, su estructura es ms simple y son menos rgidas. 3.4.1 Composicin y caractersticas La pared celular bacteriana est formada por una red macromolecular llamada pptido glucano (o murena). El pptido glucano es un mucopolisacrido formado por unidades repetidas de un disacrido unido a cadenas de cuatro o cinco aminocidos. Los monosacridos que lo forman, N-acetil-glucosamina (NAG) y cido N-acetilmurmico (NAM) (de murus, pared), derivan de la glucosa y llevan unidos aminocidos. Las frmulas
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estructurales del NAG y NAM aparecen en la figura 3.3. Los distintos componentes del pptido glucano se ensamblan en la pared celular de la siguiente manera.
Figura 3.3. N-acetil-glucosamina (NAG) y cido N-acetil acetil-murmico (NAM) unidos como aparecen en el pptido glucano. La unin que establecen se denomina de tipo -1,4. 1,4. Las zonas coloreadas sealan las diferencias entre ambas molculas.
La N-acetil-glucosamina y el cido ido N-acetil-murmico N aparecen alternados formando cadenas, constituyendo cada una de ellas un esqueleto azucarado. Hay de 10 a 65 molculas de azcar en cada cadena. A cada molcula de cido N-acetil-murmico murmico se une una cadena lateral de tetrapptido, formada ormada por cuatro aminocidos. Estos aminocidos se presentan en forma D y L alternadas, algo exclusivo del pptido glucano
57
puesto que los aminocidos que se hallan en las protenas son siempre de la forma L. Las cadenas laterales adyacentes de tetrapptidos pueden unirse una a otra directamente o a travs de un puente peptdico Cruzado, que consta de uno a cinco aminocidos. En la mayora de las bacterias Gram-positivas la pared celular consta de varias capas de pptido glucano conectadas por cadenas peptdicas laterales y puentes cruzados. Esta disposicin da lugar a una estructura muy rgida. Las capas de pptido glucano son considerablemente ms espesas en las bacterias grampositivas que en las gram-negativas. Las paredes celulares de muchas bacterias gram-positivas contienen cidos teicoicos, que hacen posible la identificacin de estas bacterias por mtodos inmunolgicos. Los cidos teicoicos estn formados principalmente por un alcohol (glicerol o ribitol) y fosfato y estn unidos a las capas de pptido glucano o a la membrana citoplamtica. Debido a su carga negativa (de los grupos fosfato) los cidos teicoicos pueden controlar la entrada y salida de cationes (iones positivos) de la clula unindose a ellos.
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Figura 3.4.Comparacin entre las estructuras y los componentes de las paredes celulares de bacterias gram-positivas positivas (a) y gram-negativas gram (b).
Las
bacterias
gram-negativas negativas
tambin
contienen
pptido glucano, pero en una proporcin muy pequea y no poseen en absoluto cidos teicoicos. El E pptido glucano se encuentra en el espacio periplsmico, espacio existente entre la membrana citoplasmtica y la membrana externa y est unido covalentemente a las lipoprotenas protenas de esta ltima membrana. El espacio periplsmico tiene la consistencia de un gel y contiene una elevada concentracin de enzimas degradativas y protenas de transporte. Al contener tan slo una pequea cantidad de pptido glucano las paredes celulares de las bacterias gram-negativas negativas son ms sensibles a la ruptura mecnica. La capa de pptido glucano de las bacterias gramgram negativas est rodeada de una membrana externa
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compuesta de lipoprotenas, lipopolisacridos (LPS) y fosfolpidos. Mientras que las lipoprotenas de la membrana citoplasmtica estn constituidas por
protenas unidas covalentemente a lpidos, las de la membrana externa de la pared celular constan de protenas unidas no covalentemente a lpidos. En la figura 3.4.se presenta la comparacin entre las estructuras y los componentes de las paredes celulares de bacterias gram-positivas y gram negativas. 3.4.2 Paredes celulares atpicas Entre los procariotas se encuentran de forma natural clulas que no poseen paredes o que presentan muy poco material de pared. Entre ellas se incluyen los miembros del gnero Mycoplasma y microorganismos relacionados. Los micoplasmas son las bacterias ms pequeas que se conocen que puedan crecer y reproducirse fuera de las clulas vivas del husped. Como no poseen paredes celulares atraviesan la mayora de los filtros bacteriano y fueron confundidas al principio con virus. Sus membranas citoplasmticas son nicas entre las bacterias por contener lpidos llamados esteroles, que se cree que contribuyen a protegerla de la lisis por presin osmtica. Las arqueobacterias tienen paredes celulares compuestas por azcares y protenas y nunca presentan pptido glucano.
60
3.5.
Estructuras internas a la pared celular Hasta aqu hemos estudiado la pared celular procaritica y las estructuras externas a ella. Miraremos ahora el interior de la clula procaritica para examinar la estructura y funcin de la membrana citoplasmtica y de otros componentes del citoplasma de la clula. 3.5.1 Membrana citoplasmtica La membrana citoplasmtica es una delgada
estructura que se extiende por dentro de la pared celular encerrando el citoplasma de la clula. La membrana citoplasmtica procaritica est formada principalmente por fosfolpidos, que son el componente mayoritario y por protenas. Las membranas adems
citoplasmticas
eucariticas
contienen
azcares y esteroles, como el colesterol. Por su carencia de esteroles las membranas citoplasmticas de procariotas son menos rgidas que las eucariotas. Una excepcin la constituyen las procariotas sin pared llamados esteroles. 3.5.1.1 Estructura Tanto las membranas celulares procariticas como eucariticas aparecen como bicapas: se observan dos lneas oscuras separadas por un espacio claro. Las molculas de micoplasmas, cuya membrana contiene
fosfolpidos estn dispuestas en dos filas

61
paralelas formando una bicapa fosfolipdica. Cada molcula de fosfolpido consta de una cabeza polar formada por un grupo fosfato y glicerol que es hidrfila (afn al agua) y soluble en agua y una cola apolar compuesta por cidos grasos que son hidrfobos (repelen el agua) e insolubles en agua. Los extremos polares se sitan en las dos superficies de la bicapa fosfolipdica y los extremos apolares en el interior de la bicapa. (fig. 3.5)
Figura 3.5. Membrana citoplasmtica. Tal como se dispone en la bicapa fosfolipdica. (a) Fotografa al microscopio electrnico de la bicapa fosfolipdica que forma la membrana citoplasmtica de la bacteria Bacillus brevis (175.000x). Pueden verse las capas de la pared d celular por fuera de la membrana (b) Modelos compactos de varias molculas, (c) Dibujo de una membrana mostrando la bicapa de fosfolpidos y protenas.
62
3.5.1.2
Funciones La funcin ms importante de la membrana citoplasmtica es actuar como una barrera selectiva a travs de la cual entran y salen sustancias de la clula. En esta tarea las membranas citoplasmticas son
selectivamente permeables (tambin se las denomina a veces semipermeables). Este trmino indica que determinadas molculas y iones atraviesan la membrana mientras que otros no pueden. La permeabilidad de la membrana depende de varios factores. Las molculas grandes (como las protenas) no pueden atravesarla porque son mayores que los canales de las protenas integrales. Las molculas ms pequeas (como agua,
aminocidos y algunos azcares sencillos) suelen pasar fcilmente a travs de la membrana. Los iones penetran tan slo muy lentamente. Las sustancias que se disuelven fcilmente en lpidos (como oxgeno, dixido de carbono y molculas orgnicas apolares) entran y salen con mucha ms facilidad que otras puesto que la membrana se compone principalmente de fosfolpidos. El movimiento de materiales a travs depende de la membrana de citoplasmtica las molculas
63
tambin
transportadoras que se describirn en breve. 3.5.1.3 Mesosomas Las membranas citoplasmticas de las
bacterias contienen a menudo uno o ms plegamientos grandes, irregulares,
denominados mesosomas. Generalmente los mesosomas se ven asociados a la zona nuclear o prxima al lugar de divisin de la clula. Los mesosomas no estn presentes en las clulas eucariotas. Aunque la funcin exacta de los mesosomas es desconocida podran jugar un papel en la reproduccin y el metabolismo. Cuando se divide una clula bacteriana (fisin binaria) se forma una pared llamada septo transverso y el material gentico de la clula parental se reparte entre las dos clulas hijas idnticas. Los mesosomas podran iniciar la formacin del septo transverso y unir el DNA bacteriano a la membrana podran citoplasmtica. ayudar tambin Los a
mesosomas
separar el DNA en cada clula hija despus de la fisin binaria. 3.5.2 Citoplasma En una clula procaritica el trmino citoplasma hace referencia a todo lo que hay en el interior de la membrana citoplasmtica. El citoplasma est formado
64
por un 80%de agua y contiene principalmente protenas (enzimas), azcares, lpidos, iones inorgnicos y muchos compuestos de bajo peso molecular. Los iones inorgnicos estn presentes en el citoplasma en concentraciones mucho ms altas que en la mayora de los medios. El citoplasma es espeso, semitransparente y elstico. Las principales estructuras que se
encuentran en el citoplasma son DNA, partculas llamadas ribosomas y depsitos de reserva llamados inclusiones. El citoplasma procaritico carece de algunas
caractersticas del citoplasma eucaritico, como un citoesqueleto y corrientes citoplasmticas. 3.5.3 Regin nuclear La regin nuclear, o nucleoide, de una clula bacteriana contiene una nica molcula circular, larga, de DNA bicatenario: el cromosoma bacteriano. Esta es la informacin gentica de la clula, su DNA, portador de toda la informacin necesaria sobre la estructura y funciones celulares. A diferencia de los cromosomas de las clulas eucarioticas, los cromosomas bacterianos no estn rodeados por una cubierta nuclear. Los nucleoides pueden ser esfricos, alargados o en forma de halterio. Las bacterias contienen a menudo, adems del cromosoma bacteriano, pequeas molculas circulares de DNA bicatenario llamadas plsmidos. Se trata de
65
elementos genticos extracromosmicos, es decir, que no tienen conexin con el cromosoma bacteriano principal y que se replican de forma autnoma. Los plsmidos suelen contener de 5 a 100 genes, que no suelen ser cruciales para el crecimiento de la bacteria bajo las condiciones ambientales normales y pueden ser adquiridos o perdidos sin riesgo para la clula. Bajo determinadas condiciones, sin embargo, los plsmidos son ventajosos para la clula. Los plsmidos pueden albergar genes que determinen actividades como la resistencia a antibiticos, tolerancia a metales txicos, produccin de toxinas y sntesis de enzimas. Los plsmidos pueden ser transferidos de una bacteria a otra. 3.5.4 Ribosomas Todas las clulas, tanto eucariticas como
procariticas, contienen ribosomas, que actan como lugares para la sntesis de protenas. Las clulas que presentan una elevada velocidad de sntesis de protenas tienen un nmero mayor de ribosomas. El citoplasma de una clula procaritica contiene miles de estas pequesimas estructuras, que dan al citoplasma un aspecto granuloso. Los ribosomas estn formados por dos subunidades, cada una compuesta por protenas y un tipo de RNA llamado RNA ribosmico (RNAr). Los ribosomas procariticos difieren de los eucariticos en el nmero de protenas y molculas de RNA que contienen y son
66
algo ms pequeas y menos densas que los ribosomas de las clulas eucariticas. A causa de ello los ribosomas procariticos se denominan ribosomas 70S y los de las clulas eucariticas se conocen como ribosomas 80S. La letra S corresponde a unidades Svedberg, que indican la velocidad relativa de
sedimentacin durante la centrifugacin a velocidad ultraelevada. 3.5.5 Inclusiones Dentro del citoplasma de las clulas procariticas (y eucariticas) se encuentran varios tipos de depsitos de reserva conocidos como inclusiones. Algunas inclusiones son comunes a una amplia, variedad de bacterias mientras que otras estn limitadas a un pequeo nmero de especies y sirven, por lo tanto, como un criterio para la identificacin. Entre las inclusiones bacterianas ms notables se encuentran las siguientes: 3.5.5.1 Corpsculos metacromticos Se trata de una forma de reserva de fosfato inorgnico (polifosfato) que puede utilizarse en la sntesis de ATP. Los corpsculos metacromticos se encuentran en algas, hongos y protozoos, as como en bacterias.
67
3.5.5.2
Grnulos de polisacridos Estas inclusiones estn formadas tpicamente por glucgeno y almidn y puede demostrarse su presencia al tratar las clulas con yodo. En presencia de yodo los grnulos de glucgeno aparecen marrn rojizo y azules los de almidn. a) Inclusiones lipdicas Las inclusiones lipdicas aparecen en varias especies de Mycobacterium,
Bacillus, Azotobacter, Spirillum y otros gneros. Un lpido hallado corrientemente como material de reserva y exclusivo de las bacterias es el polmero de cido poli-hidroxi-butrico. Las inclusiones lipdicas se ponen de manifiesto utilizando como los
colorantes
Iiposolubles,
colorantes de Sudn. b) Grnulos de azufre Ciertas bacterias, conocidas como
bacterias del azufre, que pertenecen al gnero Thiobacillus, obtienen energa al oxidar azufre y compuestos de azufre. Estas bacterias pueden depositar
grnulos de azufre en el interior de la clula, donde le sirven como reserva de energa.

68
c) Carboxisomas Son inclusiones polidricas o exagonales que contienen la enzima ribulosa-1, 5dfosfato carboxilasa. Las bacterias que utilizan dixido de carbono como nica fuente de carbono necesitan esta enzima para la fotosntesis. Entre las bacterias que contienen carboxisomas se
encuentran las bacterias nitrificantes, las cianobacterias y las bacterias del azufre. d) Vacuolas de gas Son cavidades huecas que se encuentran en muchos procariotas cianobacterias, acuticos, bacterias y
incluyendo fotosintticas
anoxignicas
halobacterias. Cada vacuola est formada por filas de varias vesculas gaseosas individuales, que son cilindros huecos cubiertos por protenas. La funcin de las vacuolas de gas es mantener la
flotabilidad, de modo que las clulas puedan permanecer en el agua a la profundidad adecuada para recibir
suficiente cantidad de oxgeno, luz y nutrientes.
69
3.5.6 Endosporas El proceso de la formacin de endosporas dentro de la clula vegetativa (parental) se conoce como
esporulacin o esporognesis. En la primera fase observable de la esporognesis el crecimiento de una invaginacin de la membrana citoplasmtica llamada septo esporal asla una pequea porcin del citoplasma y un cromosoma bacteriano recin replicado. El septo esporal se transforma en una membrana doble que rodea al cromosoma y al citoplasma. Esta estructura totalmente encerrada dentro de la clula original se conoce como prespora. Entre las dos membranas se depositan capas espesas de pptido glucano y a continuacin se forma una gruesa cubierta de la espora de protena alrededor de la membrana ms externa. Es est cubierta la responsable de la resistencia de las endosporas a muchos compuestos qumicos agresivos. Las endosporas pueden permanecer latentes durante largos perodos de tiempo, incluso cientos de aos y volver al estado vegetativo por un proceso denominado germinacin. Las endosporas son importantes desde el punto de vista clnico y de la industria alimentaria porque son resistentes a procesos que matan normalmente a las clulas vegetativas. Tales procesos desecacin, incluyen uso de
calentamiento,
congelacin,
compuestos qumicos y de radiaciones. Mientras que la mayora de las clulas vegetativas son destruidas por
70
temperaturas que superen los 70 C, las endosporas pueden sobrevivir una hora o ms en agua hirviendo. Las bacterias formadoras de esporas constituyen un problema lema en la industria alimentaria porque tienen posibilidades de sobrevivir en caso de cualquier defecto en el tratamiento y porque cuando pueden crecer algunas especies producen toxinas y enfermedades.
Figura 3.6. Endosporas. (a) Esporognesis, el proceso de formacin de endosporas. (b)Fotografa al microscopio electrnico de una endospora de Bacillus sphaericus. (c) Distintas localizaciones de las endosporas. Izquierda: Endospora central de Bacillus megaterium (40.500x); centro:endospora subterminal de B. antrhacis (38.000x); derecha endospora terminal, redonda, en el extremo de una clula de Clostridium tetani (14.000x aproximadamente).
3.6
Grupos bacterianos Todas las bacterias comparten la caracterstica de tener una organizacin celular procaritica, pero es difcil correlacionar las propiedades estructurales y funcionales con algunas relaciones evolutivas. La revisin ms reciente del Manual Bergey distribuye a las
71
bacterias en cuatro divisiones (o phyla) atendiendo a las caractersticas de sus paredes celulares. Cada divisin se subdivide en secciones, basndose en caractersticas como tincin de gram, morfologa celular, agrupaciones celulares, requerimientos de oxgeno, movilidad y propiedades
nutricionales y metablicas. Los grupos se nombran de acuerdo con estas caractersticas; por ejemplo, espiroquetas, cocos y bacilos gram-negativos aerbicos, bacterias
fotosintticas anoxignicas, cocos y bacilos /armadores de esporas, etctera. Cada seccin comprende varios gneros; en algunas de ellas los gneros se agrupan en familias y rdenes mientras que en otras no. TABLA 3.1. Resumen de algunas caractersticas seleccionadas a de los grupos bacterianos, segn la 1. edicin del Bergey's Manual of Systematic Bacteriology.
Nombre del grupo Espiroquetas
Gneros importante Treponema, Borrelia, Leptospira Spirillum, Campylobacter, Azospirillum Spirosoma, Meniscus Pseudomonas, Neisseria, Branhametta, Brucella, Bordetella, Frandsella, Legtonella, Agrobacterium
Hbitat Acutico; parsitos de animales Suelos y aguas; tracto intestinal humano y cavidad oral Aguas y sedimentos Suelo, agua, parsitos de animales
Caractersticas distintivas Morfologa helicoidal, movilidad por filamentos axiales, varios patgenos importantes, gram-negativos Morfologa helicoidal, movilidad por flagelos sin filamentos axiales; los vibroides no tienen una vuelta completa de hlice. Raras, la mayora acuticas, no patgenas, con morfologa de S, C o anillo Comprende microorganismos de inters clnico, industrial y ambiental
Bacterias gram-negativas, aerobias/ microaerfilas, mviles, helicoidales/ vibroides Bacterias curvadas, gramnegativas, inmviles (raramente mviles) Cocos y bacilos gramnegativos aerbicos
72

Nombre del grupo Espiroquetas Bacilos gram-negativos anaerbicos facultativos Gneros importante Salmonella, Shigella, Klebsiella, Yersinia, Vibrio, Haemophilus, Gardnerella, Pasteurella Bacteroides, Fusobacterium Desulfovibrio Hbitat Caractersticas distintivas
Suelo, plantas, Incluye muchos patgenos importantes tracto intestinal de animales
Bacilos gram-negativos anaerbicos, rectos, curvados o helicoidales Bacterias disimilatorias, reductoras de sulfato o azufre . Cocos anaerbicos gramnegativos Rickettsias y clamidias
Animales e insectos Sedimentos anaerbicos Principalmente el tracto intestinal de animales Parsitos de artrpodos y animales Parsitos de animales, plantas, insectos Simbiontes intracelulares de protozoos, insectos, helmintos, plantas, etc. Suelo, piel y mucosas de animales Suelo, tracto intestinal de animales Productos lcteos, cavidad oral y genital; heces de animales Patgenos humanos; microorganismos del suelo Suelo, plantas, animales Suelo y animales
Anaerobios obligados; la mayora viven en el tracto intestinal, algunos en la boca y tracto genital Reducen formas oxidadas de azufre hasta SH2-Gram-negativas Anaerobios inmviles
Veillonella
Micoplasmas
Rickettesia, Coxiella, Chlamydia Mycoplasma
Bacterias intracelulares obligadas; muchas son patgenos importantes; gramnegativos Pleomrficos; carecen de pared celular; algunos son Bacterias diversas que viven simbiticamente en protozoos, insectos y hongos; gram-negativas
Endosimbiontes
Holospora, Blattabacterium
Cocos grampositivos
Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus Bacilos y cocos formados de Bculos, endosporas Clostridium Bacilos gram-positivos no esporulados Lactobacillus, Listeria
Algunos son patgenos importantes
Bacillus: aerobios o anaerobios facultativos; Clostridium: anaerobios. Gram-positivos Lactobacillus forma cido lctico a partir de azcares; de inters industrial; Listeria es un patgeno de animales Morfologa pleomrfica; varios patgenos importantes
Irregular, bacilos grampositivos no esporulados
Micobacterias
Gardnerella, Corynebacterium, Propionibacterium, Actinomyces Mycobacterium
Nocardioformes
Nocardia
Bacterias gemantes y/o con apndice Bacterias envainadas
Hyphomicrobium, Caulobacter Sphaerotilus
Bacterias deslizantes, no frutescentes, no fotosintticas
Cytophaga, Beggiatoa
Principalmente acutico, para algunas el sucio Acutico; causan problemas en la depuracin de aguas residuales Acutico
Mycobacterium es un patgeno importante; cido alcohol-resistente, grampositivo Forma filamentos ramificados; se reproduce por fragmentacin; a menudo cido-alcohol resistente; algunas son patgenas Presentan prosteca; Hyphomicrobium se reproduce por gemacin; Caulobacter tiene pednculo. Clulas encerradas en una vaina hueca
Cytophaga degrada celulosa; Beggiatoa oxida SH2
73

Nombre del grupo Espiroquetas Bacterias deslizantes, frutescentes Bacterias quimiolitotrofas aerbicas Arqueobacterias Gneros importante Myxococcus Nitrosomonas, Nitrobacter, Thiobacillus Methanobacterium, Halobacterium, Sulfolobus Hbitat Estircol, suelo Suelo Sedimentos anaerbicos, ambientes de temperatura o presin osmtica extremadas Sedimentos anaerbicos . Acutico Caractersticas distintivas Las clulas se agrupan para formar un cuerpo frutescente Bacterias nitrificantes y oxidativas de azufre; de importancia agrcola y ambiental Sin relacin con otros grupos bacterianos; sin pptido-glucano en sus paredes celulares; las productoras de metano son tiles en el tratamiento de aguas residuales Incluye las bacterias verdes y rojas; las verdes y rojas del azufre utilizan SH2 como donador de electrones y liberan azufre. Producen oxgeno durante la fotosntesis; muchas especies fijan nitrgeno atmosfrico Comunes en el suelo; filamentos ramificados con conidiosporas; Frankia implicada en simbiosis con plantas para fijar nitrgeno
Bacterias fotosintticas anoxignicas Bacterias fotosintticas oxignicas Actinomicetos
Chromatium, Rhodospirillum, Chorobium Chroococcus, Anabaena Streptomyces, Frankia, Micromonospora
Suelo; algunos acuticos
3.7
Arqueas Introduccin Hay profundas diferencias evolutivas entre los dominios Bacteria y Archaea. A pesar de tratarse de procariotas, segn los criterios de secuenciacin molecular las arqueas no estn ms relacionadas con las bacterias de lo que estn con el dominio Eucaria. Ascendiendo en el rbol, se ramifican algunos grupos de metangenos con caractersticas filogenticas distintivas, que incluyen los grupos Methanococcus. Methanobacterium y Methanosarcina-Methanospirillum. Los organismos halfilos extremos (por ejemplo, Halobacterium-Halococcus) forman un grupo homogneo, al igual que el procariota acidfilo, termoflico y sin pared celular Thermoplasma.
3.7.1 Arqueas haloflicas extremas Las arqueas halofilicas extremas son un grupo diverso de procariotas que viven en ambientes de elevada salinidad,
74
como, por ejemplo las salinas, los lagos salados naturales, o los habitis salinos artificiales, como las superficies de alimentos en salazn (algunos tipos de pescado y carne). Estos hbitats se designan a menudo como hipersalinos. El trmino halfilo extremo se utiliza para indicar no slo que los organismos son haloflicos, sino que su requerimiento de sal es muy elevado, cercano en algunos casos a la saturacin. Una definicin aceptada es la de organismo que requiere al menos 1.5 M (alrededor de 9%) de NaCl para su crecimiento, aunque la mayora de las especies requieren 2-4- M NaCl (1223%) para el crecimiento ptimo. En la prctica, todos los halfilos extremos crecen a 5.5 M de NaCl (32%, el lmite de saturacin), si bien a estos niveles de salinidad algunas especies crecen muy lentamente. 3.7.1.1 Taxonoma de las arqueas haloflicas extremas En la Tabla se relacionan las especies reconocidas hasta ahora. La secuenciacin del cido ribonucleico ribosmico 16S (rRNA) y otros estudios han definido ocho gneros: Halobacterium, Halococcus, Haloferax, Haloarcula, Halorubrum, Halobaculum,
Natronobacterium y Natronococcus. Frecuentemente reciben la denominacin de halobacterias, ya que fue Halobacterium el primero de este grupo que se describi, y sigue siendo el mejor estudiado. Las halobacterias carecen de peptidoglicano en la pared celular, contienen lpidos unidos a ter, y poseen polimerasas RNA arqueanas. Son insensibles a la mayora de los antibiticos y presentan los atributos
75
generales de los representantes de este dominio.

Tabla 3.2. Taxonoma de algunas arqueas haloflicas extremas
Gnero Halobacterium H. salinarum Halorubrum Morfologa Bacilos Bacilos DNA (mol % GC) 66-71 Habitat y comentarios
H. sodomense H. saccharavorum H. lacusprofundi Bacilos H. trapanicitm Halobaculum pleomrficos Bacilos H. gomorrense Haloferax H. volcanii H. mediterranei H. gibbonsii H. denitrificans Discos irregulares, tringulos, rectngulos Cocos Discos aplastados o forma de copa
68 71 65-66 64
Aislados de salazones, curtidos, lagos hipersalinos organismos relacionados, probablemente de las mismas especies que H. halobium y H. cutirubrum Mar Muerto, requiere altas concentraciones de Mg2 Salinas; utiliza azcares De un lago Antrtico; crece a 4 C De extracciones salinas, Trapani, Italia
70 63-66 60-62
62 64
Mar Muerto; requiere altas concentraciones de Mg2+ concentracin ptima de NaCl alrededor de 1.5 M Mar Muerto; requiere altas concentraciones de Mg2+ Salinas; utiliza almidn Salinas marinas en Espaa Salinas de la Baja California; capaces de reduccin desasimilativa del nitrato Valle de la Muerte, California Salinas marinas en Espaa Pescado en salazn Salinas; utiliza azcares Todas las especies de lagos sdicos muy salinos; pH ptimo para el crecimiento 9.5 Lagos sdicos muy salinos
Haloarcula H. vallismortis H. hispnica Halococcus
65 63 60-66 59 65 63 64 64
H. morrttuae H. saccharolyticus Bacilos Natranabacterium Cocos N. gregoryi N. magadii N. pharaonis Natronococcus N. occultus
Todas las arqueas haloflicas son Gram negativas, se reproducen por fisin binaria y no forman esporas o estructuras de reposo. La mayora carecen de
motilidad, aunque algunas cepas son ligeramente mviles mediante flagelacin lofotrica.
76
3.7.1.2 Fisiologa de las arqueas haloflicas extremas Todas ellas son quimioorganotrficas y la mayora de las especies, aerobios obligados. Casi todas las halobacterias usan aminocidos o cidos orgnicos como fuentes de energa y requieren algunos factores de crecimiento (principalmente vitaminas) para un crecimiento ptimo. Algunas especies de Halobacterium oxidan carbohidratos, aunque es una habilidad poco frecuente. Las cadenas de transporte de electrones que contienen citocromos a, b y c estn presentes en Halobacterium y la energa se conserva durante el crecimiento aerbico va una fuerza protonmotriz que se origina a partir de procesos quimiosmticos
mediados por membrana. Se sabe que algunas cepas de Halobacterium crecen anaerobiamente. En algunas cepas se ha demostrado la existencia de crecimiento anxico a expensas de la fermentacin de azcar y por respiracin anaerbica ligada a la reduccin de nitrato o fumarato. Todas las arqueas haloflicas extremas requieren grandes cantidades de sodio para el crecimiento. 3.7.1.3 Bacteriorrodopsina y sntesis de ATP mediada por la luz Algunas especies de halfilos extremos presentan la interesante propiedad de realizar una sntesis de ATP mediada por la luz, sin intervencin de pigmentos cloroflicos.
77
La elevada pigmentacin de las arqueas haloflicas extremas se debe a los carotenoides de color rojo y anaranjado, principalmente C50, llamados
bacteriorruberinas y tambin a los pigmentos inducibles que participan en el metabolismo energtico. Aunque Halobacterium salinarum y otros halfilos extremos carecen de clorofilas y bacterioclorofilas, en
condiciones de baja aireacin sintetizan e insertan en sus membranas una protena llamada
bacteriorrodopsina. 3.7.2 Metanogenos: Arqueas productoras de metano La produccin biolgica de metano est a cargo de un grupo especial de procariotas, los metangenos. La formacin de metano est limitada a los habitis anxicos, pues slo tiene lugar bajo estrictas condiciones de anoxia. 3.7.2.1 Sustratos y rendimiento energtico Hay por lo menos diez sustratos que se convierten en metano por la accin de uno u otro rnetangeno. El dixido de carbono, CO2 es un sustrato casi universal, donde los electrones necesarios derivan, por lo general, del H2. Los metangenos que crecen sobre H2 + CO2 son autotrficos y el CO2, sirve tanto de fuente de carbono como de aceptor de electrones. Adems del CO2, hay una variedad de otros compuestos que algunas especies metanognicas convierten en metano. La formacin de metano a partir de H2+ CO2 se considera del tipo respiracin anaerbica, donde el
78
CO2, es el aceptor de electrones. Sin embargo, estudios bioqumicos sealan la ausencia de un sistema convencional de transporte de electrones con
citocromos y quinonas en los metangenos que crecen sobre H2 + CO2. Existe, no obstante, un buen conocimiento de los portadores de electrones que intervienen en la reduccin del CO2. Este proceso requiere diversas coenzimas especficas, exclusivas de los metangenos. Esas molculas funcionan como cofactores de las enzimas que reducen
secuencialmente intermediarios de C, empezando con CO, y produciendo CH4. Se conocen tres clases de sustratos metanognicos, todos los cuales liberan energa libre adecuada para la sntesis de ATP. La primera clase utiliza sustratos del tipo CO2: CO2+4H2 CH4+2H20 G =-131 kJ/reaccin 4HCOO + 4H
+ 0
CH4 + 3 CO2 + 2 H2O G =-145 kJ/reaccin

0
4CO + 2 H2O
CH4+ 3CO2 G =-210 kJ/reaccin

0
En la segunda clase, el grupo metil de los compuestos que contienen metilo se reduce a metano. En el caso del metanol o la metilamina, la reaccin global a metano presenta la siguiente estequiometra:
79
4 CH3OH
0
3 CH4 + CO2 + 2 H2O
G =-319 kJ/reaccin 4 CH3NH3Cl + 2 H2O G =-230 kJ/reaccin Tabla 3.3. Sustratos convertibles a metano por diferentes arqueas metanognicas
Sustratos tipo CO2 Dixido de carbono CO2 (con electrones derivados de H2, algunos alcoholes o piruvato) Formiato, HCOOMonxido de carbono, CO Sustrato de metilo Metanol, CH3OH Metilamina, CH3NH3+ Dimetilamina, (CH3)2NH2+ Trimetilamina, (CH3)3NH+ Metilmercaptano, CH3SH Dimetilsufuro, (CH3)2s Sustratos acetotrficos Acetato, CH3COO0
3 CH4 + CO2 + 4 NH4Cl
En estas reacciones, algunas molculas del sustrato funcionan como donadores de electrones y se oxidan a CO2, mientras que otras se reducen y son por tanto aceptares de electrones. Durante el crecimiento sobre compuestos de metilo, el poder reductor para la metanognesis tambin puede venir del H2. De hecho, Methanosphaera stadtmaniae, crece solamente sobre metanol en presencia de H2. En este caso la estequiometra es: Algunos metangenos crecen sobre otros alcoholes. Methanospirilium y Melhanogeniitm, por ejemplo,
crecen con 2-propanol como donador de electrones,

80
cuatro molculas de 2-propanol se convierten en cuatro molculas de acetona junto con la reduccin de CO2 a CPL. Etanol, l-propanol y l-butanodiol tambin son oxidados por algunas cepas, y los productos son actalo, propionato o butirato, y CH4 (de la reduccin del CO2). El piruvato tambin funciona como donador de electrones para la reduccin de CO2 a CH4 por algunas especies de Methanococcus. La ltima reaccin metanognica es la acetotrfica, la escisin del acetato a CH4 ms CO2: CH3COO + H2O
-
CH4 + HCO3
0
G =-31 kJ/reaccin Slo dos gneros de metangenos, Metkanosarcina y Methanothrix (Methanosaeta), tienen especies
acetotrficas. La conversin de acetato a metano aparece como un proceso ecolgico muy importante en digestores de residuos y en medios anxicos de agua dulce, donde no hay una competencia excesiva por el acetato entre las bacterias reductoras del sulfato y metanognicas. 3.7.2.2 Fisiologa de las arqueas metanognicas Cuando los metangenos crecen de forma autotrfica, el CO2, es la principal fuente de carbono. Sin embargo, el crecimiento de casi todos ellos es estimulado por el acetato, y en algunas especies por ciertos aminocidos. En cultivos de laboratorio, algunos metangenos
81
requieren adiciones complejas, como extracto de levadura o digeridos de casena; otros metangenos del rumen necesitan una mezcla de cidos grasos de cadena ramificada. Todos los metangenos utilizan NH4 como fuente de nitrgeno, y se sabe que algunas especies fijan nitrgeno molecular (Fijacin de N2). El metal traza nquel, componente de una importante coenzima metanognica, el Factor
430 +
, es requerido por todos los
metangenos, y est tambin presente en las enzimas hidroganasa y monxidode carbono deshidrogenase. El hierro y el cobalto, junto con el nquel, son importantes oligoelementos para los metangenos, y los nicos requeridos de manera absoluta para su crecimiento. a. Coenzimas metanognicas especiales Se sabe que diversas coenzimas son exclusivas de este grupo de procariotas. Estas coenzimas desempean importantes funciones en la
bioqumica de la metanognesis. Por su relevancia en la va productora de energa, muchas de ellas estn

+
presentes
en
cantidades
mucho
ms
elevadas que otras coenzimas, como por ejemplo NAD o FMN en otros procariotas. Se detalla a continuacin la estructura y funcin de cada una de estas coenzimas, a modo de preludio de la discusin posterior de la bioqumica de la
metanognesis.
82
3.7.3 Arqueas hipertermoflicas Algunos de estos organismos pueden crecer a temperaturas por encima del punto normal de ebullicin del agua, y todos poseen temperaturas ptimas de crecimiento por encima de los 80 C. 3.7.3.1 Perspectiva de las arqueas hipertermoflicas La mayora de estos organismos se han aislado de suelos o aguas calientes geotrmicos, que contienen sulfuro y azufre elemental. La mayora de las especies metabolizan el azufre. El azufre elemental se forma a partir del H2S de origen geotrmico, bien sea por oxidacin espontnea de H2S con O2, o bien por una reaccin del H2S con SO2 (este ltimo es un componente de los gases volcnicos). En ambientes terrestres, los manantiales ricos en azufre, los
depsitos de lodo y los suelos pueden alcanzar temperaturas de hasta 100 C y por lo general van de moderada a extremadamente cidos, debido a la produccin de cido sulfrico, H2SO4 procedente de la oxidacin biolgica de H2S y S . Con slo unas pocas excepciones, los hipertermfilos son anaerobios estrictos. Su metabolismo productor de energa es bien quimioorganotrfico o quimiolitotrfico. El requerimiento de azufre, que es casi universal en el grupo, se basa en la necesidad de un aceptor de
83
0
electrones para la respiracin anaerbica o de un donador de electrones para el

0
metabolismo
quimiolitotrfico. El azufre elemental (S ) se reduce a H2S usando electrones derivados de la oxidacin de compuestos orgnicos, o de H2.
84
Cap. 4. Clula eucaritica
Captulo Clula Eucaritica
85
86
CAPTULO 4 CLULA EUCARITICA 4.1. Introduccin Como se menciona antes, entre los organismos eucariticas se encuentran algas, protozoos, hongos, plantas superiores y animales. La clula eucaritica es caractersticamente mayor y de estructura ms compleja que la clula procaritica. Brevemente las clulas eucariticas contienen orgnulos rodeados de membranas; las clulas procariticas no. Los orgnulos son estructuras especializadas que llevan a cabo funciones especficas. El material gentico de las clulas eucariticas est rodeado de una membrana, organizado en cromosomas y
estrechamente asociado a histonas y otras protenas.
Figura 4.1. Diagrama muy esquemtico de una clula eucaritica con todos los orgnulos posibles. 87
4.2
Flagelos y cilios Muchos tipos de clulas eucariticas poseen proyecciones que le sirven para la locomocin celular o para mover sustancias a lo largo de la superficie de la clula. Estas proyecciones contienen citoplasma y estn rodeadas por la membrana citoplasmtica. Si las proyecciones son escasas y largas en relacin al tamao de la clula se denominan flagelos. Cuando son numerosas y cortas, con aspecto de vellos, se conocen como cilios. Tanto los flagelos como los cilios constan de nueve pares de microtbulos que rodean a un par interno central. Las algas euglenoides utilizan un flagelo para la locomocin mientras que los protozoos, como Paramecium, emplean cilios.
4.3
La pared celular La pared celular eucaritica es considerablemente ms sencilla. La mayora de las algas poseen paredes celulares formadas por el polisacrido celulosa (como las plantas). Las paredes celulares de algunos hongos contienen tambin celulosa, pero en la mayora de ellos el principal componente estructural de la pared celular es el polisacrido quitina, un polmero de unidades de N-acetil-glucosamina (la quitina es tambin el principal componente de la estructura del exoesqueleto de crustceos e insectos). La pared celular de las levaduras contiene adems los polisacridos glucano y manano. En los eucariotas que carecen de pared celular la membrana citoplasmtica puede ser la cubierta ms externa; sin embargo, clulas como las de los mohos mucilaginosos y
88
amebas, que estn en contacto directo con el medio ambiente, pueden presentar otras cubiertas por encima de ella. Los protozoos no tienen una pared celular tpica; en su lugar poseen una cubierta externa flexible llamada cutcula. 4.4 La membrana citoplasmtica En las clulas eucariticas que carecen de pared celular la membrana citoplasmtica es la cubierta externa de la clula. En cuanto a su funcin y estructura, las membranas citoplasmticas eucariticas y procariticas son muy similares. Sin embargo, existen diferencias en las protenas. En los eucariotas los azcares sirven de receptores que realizan funciones como las de reconocimiento clula-clula y permiten tambin la adhesin de bacterias. Adems las membranas citoplasmticas eucariticas contienen esteroles, lpidos complejos que no se encuentran en las procariticas (con la excepcin de las membranas de los micoplasmas). Los esteroles parecen estar asociados a la capacidad de las membranas para resistir la lisis debido al incremento de presin osmtica. Las sustancias pueden atravesar las membranas
citoplasmticas, tanto eucariticas como procariticas, por difusin simple, osmosis, difusin facilitada o transporte activo. En las clulas eucariticas no se da la translocacin de grupos; en cambio pueden utilizar un mecanismo adicional llamado endocitosis. Para ello una porcin de la membrana citoplasmtica rodea una partcula o una molcula grande, la encierra y la introduce en la clula. La endocitosis es una de
89
las formas por las que los virus pueden entrar en las clulas animales. Dos tipos muy importantes de endocitosis son la fagocitosis y la picnocitosis. En la fagocitosis proyecciones de la clula llamadas seudpodos engloban partculas y las introducen en la clula. Mediante la fagocitosis las clulas blancas destruyen bacterias y otros cuerpos extraos. En la picnocitosis la membrana citoplasmtica forma invaginaciones que
introducen el fluido extracelular en la clula con cualquier sustancia que est disuelta en l. 4.5 Citoplasma El citoplasma de las clulas eucariticas comprende la matriz que hay dentro de la membrana celular y fuera del ncleo. El citoplasma es la sustancia en la que se encuentran diversos componentes celulares. Una diferencia importante con el citoplasma procaritico es que el eucaritico presenta una estructura interna compleja, compuesta de varillas y
extremadamente
pequeas
llamadas
microfilamentos
filamentos intermediarios y de cilindros llamados microtbulos. Conjuntamente forman el citoesqueleto. Otra diferencia entre el citoplasma eucaritico y procaritico es que muchas de las enzimas importantes que se encuentran en el fluido citoplasmtico de los procariotas se hallan recluidas en los orgnulos de los eucariotas.
90
4.6.
Orgnulos 4.6.1 Ncleo El orgnulo eucaritico ms caracterstico es el ncleo. El ncleo suele ser esfrico u ovalado, es
frecuentemente la mayor estructura de la clula y contiene casi toda la informacin hereditaria de la clula (DNA). En las mitocondrias y cloroplastos de los organismos fotosintticos se encuentra algo de DNA. El ncleo est separado de la membrana por una doble membrana llamada membrana nuclear. Cada una de estas dos membranas presenta una estructura parecida a la membrana citoplasmtica. Diminutos poros de la membrana nuclear permiten la comunicacin del ncleo con la red de membranas del citoplasma, llamada retculo endoplsmico. 4.6.2 Retculo endoplsmico Dentro del citoplasma hay un sistema formado por pares de membranas paralelas que encierran estrechas cavidades de formas variables. Este sistema, que no est presente en procariotas, se conoce como retculo endoplsmico o RE. El RE es una red de canales que circulan a travs del citoplasma y son continuacin tanto de la membrana plasmtica como de la membrana nuclear. Se cree que el RE proporciona una superficie para reacciones
91
qumicas, una ruta para el transporte de molculas dentro de la clula y una zona de almacenamiento para molculas sintetizadas. El RE juega un papel tanto en la sntesis de lpidos como en la de protenas. 4.6.3 Ribosomas Unidos a la superficie externa de parte de RE se encuentran ribosomas, que se hallan tambin libres en el citoplasma. Como en los procariotas, los ribosomas son el lugar de sntesis de protenas en la clula. Los ribosomas del RE y del citoplasma eucaritico son algo ms grandes y ms densos que los de la clula procaritica. Estos ribosomas eucariticos son
ribosomas 80S. Un ribosoma 60S est formado por una subunidad grande 60S que contiene tres molculas de RNAr y una subunidad pequea 40S con una molcula de RNAr. Los cloroplastos y las mitocondrias contienen ribosomas 70S, lo que puede ser indicativo de su evolucin a partir de procariotas. 4.6.4 Complejo de Golgi Esta estructura suele constar de cuatro a ocho sacos aplanados (cisternas) con extensiones en sus extremos (vesculas). Las cisternas aparecen apiladas unas sobre otras. El complejo de Golgi est a veces conectado con el RE. Una de sus funciones es la de almacenar y secretar (liberar al exterior de la clula) algunas protenas, lpidos y azcares.
92
El complejo de Golgi tambin tiene una funcin en la sntesis de azcares que se combinan con las protenas para formar complejos llamados glucoprotenas. Las glucoprotenas son tambin secretadas de la clula mediante vesculas. 4.6.5 Mitocondrias Las mitocondrias, orgnulos esfricos o alargados, aparecen repartidas por el citoplasma de las clulas eucariticas. Una mitocondria est formada por una doble membrana de estructura similar a la de la membrana citoplasmtica. La membrana mitocondrial externa es lisa, pero la interna se dispone formando una serie de pliegues llamadas crestas. El centro de la mitocondria se denomina matriz. Las mitocondrias se denominan frecuentemente
centrales energticas de la clula debido a su papel fundamental en la produccin de ATP. 4.6.6 Cloroplastos Las algas y las plantas verdes contienen un orgnulo exclusivo llamado cloroplasto. Un cloroplasto es una estructura rodeada de membrana que contiene el pigmento clorofila y las enzimas necesarias para las fases de captacin de luz de la fotosntesis. La clorofila est contenida en granos membranosos aplanados llamados tilacoides. Las pilas de tilacoides se llaman grana. Como las mitocondrias los cloroplastos
93
contienen ribosomas 70S, DNA y enzimas implicadas en la sntesis de protenas. 4.6.7 Lisosomas A diferencia de las mitocondrias los lisosomas poseen una sola membrana y carecen de estructuras definidas. Pero contienen poderosas enzimas digestivas capaces de romper muchas clases de molculas. Ms an, estas enzimas son capaces de digerir bacterias que penetren en la clula. 4.6.8 Centriolos Localizadas cerca del ncleo se encuentran un par de estructuras cilndricas, los centriolos. Cada centriolo es un anillo de nueve haces
uniformemente espaciados, cada uno de los cuales est formado por tres microtbulos. Los dos centriolos estn dispuestos de tal modo que el eje longitudinal de uno de ellos es perpendicular al del otro. Los centriolos tienen una funcin en la divisin de la clula eucaritica y como cuerpos bsales en la formacin de los cilios y flagelos. 4.7 Hongos El estudio de los hongos se conoce como micologa. Los hongos incluyen levaduras, mohos y hongos carnosos. Las levaduras son microorganismos unicelulares. Los mohos son organismos pluricelulares, como el mildiu, las royas y el tizn.
94
Y entre los hongos carnosos se encuentran las setas y los bejines. Todos los hongos son hetertrofos, precisando de
compuestos orgnicos como fuente de energa y de carbono. Son aerobios o anaerobios facultativos; no se conocen hongos anaerbicos estrictos. La mayora de los hongos viven como saprofitos en el suelo y agua, donde descomponen principalmente materia vegetal. 4.7.1 Caractersticas de los hongos Los hongos pluricelulares se identifican en base a su aspecto fsico, incluidas las caractersticas coloniales y la formacin de esporas. Las colonias se describen como estructuras vegetativas porque estn compuestas de clulas implicadas en el catabolismo y crecimiento. Los hongos suelen reproducirse por esporas. 4.7.2 Estructuras vegetativas 4.7.2.1 Mohos y hongos carnosos El talo (colonia) de un moho o de un hongo carnoso consiste en largos filamentos
celulares agrupados; estos filamentos se llaman hifas. En la mayora de los mohos las hifas contienen tabiques, llamados septos, que dividen las hifas en unidades
diferenciadas, mononucleares, semejantes a clulas. Este tipo de hifas se denominan hifas

95
tabicadas. Sin embargo, en algunas clases de hongos la hifa no contiene septos y aparece como clulas largas, continuas, con muchos ncleos. Estas hifas se conocen como hifas cenocticas. Incluso en los hongos con hifas tabicadas suele haber aberturas en los septos que dan continuidad al citoplasma de las clulas adyacentes, de modo que estos hongos son tambin en realidad organismos cenocticos. Las hifas del talo crecen alargndose por sus extremos. Cada parte de una hifa es capaz de crecer y cuando se separa un fragmento puede alargarse para formar una nueva hifa. En el laboratorio los hongos se suelen cultivar a partir de fragmentos obtenidos del talo.
Figura 4.2. Estructuras vegetativas de los hongos, (a) Las hitas tabicadas poseen septos que las dividen en unidades semejantes a clulas. (b) Las hifas cenocticas carecen de septos, (c) Las hifas crecen por alargamiento de sus extremos, (d) Las seudohifas son cadenas cortas de clulas que forman algunas levaduras.
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Cuando las condiciones ambientales son apropiadas las hifas crecen, se entrelazan y forman una masa llamada micelio, que es observable a simple vista. La parte del micelio implicada en la obtencin de nutrientes se llama micelio vegetativo y la relacionada con la reproduccin se conoce como micelio reproductivo o areo, llamado as porque se proyecta sobre la superficie del medio en el que crece el hongo. 4.7.2.2 Levaduras Las levaduras son hongos unicelulares, no filamentosos, con una morfologa
caracterstica esfrica u ovalada. Al igual que los mohos, las levaduras se hallan
ampliamente distribuidas en la naturaleza; se encuentran frecuentemente en forma de polvillo blanco que recubren los frutos y las hojas. Como la mayora de las levaduras forman colonias de organismos unicelulares no se reproducen como una unidad; en su lugar la colonia crece a medida que aumenta el nmero de levaduras. Este aumento suele ocurrir por gemacin. En la gemacin la clula parental forma una protuberancia
(yema) sobre su superficie externa. Cuando la yema se alarga el ncleo de la clula parental se divide y uno de los ncleos emigra a la
97
yema. El material de la pared celular se deposita entre la yema y la clula parental y la yema acaba finalmente por separarse. Las levaduras son capaces de crecer como anaerobios facultativos. Las levaduras pueden utilizar oxgeno o un compuesto orgnico como aceptor final de electrones, lo que supone una adaptacin valiosa. Si disponen de oxgeno las levaduras para realizan una
respiracin
aerbica
metabolizar
azcares hasta dixido de carbono y agua. Si carecen de l fermentan azcares
produciendo etanol y dixido de carbono. Esta fermentacin es la base de las industrias cervecera, vincola y panadera. Son especies de Saccharomyces las que producen etanol para la preparacin de bebidas y dixido de carbono para subir la masa del pan. 4.7.2.3 Hongos dimrficos Algunos hongos y especialmente las especies patgenas, muestran un dimorfismo, es decir, dos formas de crecimiento. Tales hongos pueden crecer como moho o como levadura. A menudo el dimorfismo depende de la temperatura: a 37 C el hongo es levaduriforme y a 25C es filamentoso.
98
4.7.3 Estructuras reproductoras Para identificar un hongo es necesario examinar las estructuras reproductoras o esporas. La reproduccin tiene lugar en los hongos por formacin de esporas. Estas esporas son, sin embargo, muy diferentes de las endosporas bacterianas. Cuando un moho forma una espora sta se separa y germina dando lugar a un nuevo hongo. Las esporas se forman a partir del micelio areo de una gran variedad de modos dependiendo de la especie. Las esporas fngicas pueden ser sexuales o asexuales. Las esporas asexuales son producidas por el micelio areo de un organismo y cuando germinan dan lugar a organismos genticamente idnticos al parental. Las esporas sexuales son el resultado de la fusin de dos cepas opuestas de la misma especie de hongos que se aparean. Los organismos que crecen a partir de esporas sexuales poseen caractersticas genticas de las dos cepas parentales. 4.7.3.1 Esporas asexuales Las esporas asexuales son producidas por un hongo individual a travs de una mitosis y la consiguiente divisin celular; no hay fusin de ncleos celulares. Hay varios tipos de esporas
99
sexuales producidas por hongos. Uno de ellos, las artrosporas, se forman por
fragmentacin de una hifa tabicada en clulas aisladas, ligeramente ms especie que forma tales gruesas. Una esporas es
Coccidioides immitis. Otro tipo de esporas asexuales son las clamidosporas, esporas de pared gruesa que se forman como segmentos en medio de una hifa. Un hongo que produce Una clamidosporas es Candida es una
albicans.
esporangiospora
espora asexual formada en el interior de un saco (esporangio) situado al final de una hifa area llamada esporangiforo. El esporangio puede contener cientos de esporangiosporas. Este tipo de esporas son producidas por el gnero Rhizopus. Un cuarto tipo de espora asexual importante es la conidiospora, una espora uni o pluricelular que no est
encerrada en un saco. Las conidiosporas se forman en cadenas al final de un conidiforo; Penicillium produce este tipo de esporas. Finalmente las blastosporas son esporas asexuales formadas por gemacin a partir de la clula parental. 4.7.3.2 Esporas sexuales Una espora sexual fngica es el resultado de
100
un proceso de reproduccin sexual que comprende tres fases: 1. Un ncleo haploide de una clula
donadora (+) penetra en el citoplasma de una clula receptora (). 2. Los ncleos (+) y () se fusionan para formar un ncleo zigtico, diploide. 3. Por meiosis el ncleo diploide da lugar a ncleos algunos haploides de los (esporas cuales sexuales), ser
pueden
recombinantes genticos. Los hongos producen esporas sexuales con menos frecuencia que las asexuales y a menudo slo lo hacen en circunstancias especiales. Los ascomicetos patgenos de plantas producen ascosporas solamente
cuando las plantas hospedadoras llegan al final de la estacin de crecimiento. Esto sugiere que las ascosporas se inician por cambios de la humedad, temperatura o disponibilidad de nutrientes. Las ascosporas sobreviven hasta que las plantas
hospedadoras crecen de nuevo. Las esporas sexuales sirven de criterio para agrupar a los hongos en varias divisiones. Un tipo de espora sexual es la zigospora,
101
grande y rodeada de una gruesa pared. Esta clase de espora es el resultado de la fusin de los ncleos de dos clulas morfolgicamente similares y son producidas por hongos de la divisin Zygomycota. Un segundo tipo de esporas sexuales son las ascosporas, que resultan de la fusin de los ncleos de dos clulas, que pueden ser morfolgicamente similares o distintas. Estas esporas se forman dentro de una estructura en forma de saco llamada asca. Un ltimo tipo de espora sexual son las basidiosporas, que se forman externamente sobre una base o pedestal llamado basidio.
Figura 4.3. Esporas asexuales representativas, (a) Formacin de artrosporas por fragmentacin de las hifas. (b) Las clamidosporas son clulas de pared gruesa que aparecen entre las hifas. (c) Las esporangiosporas se forman dentro de un esporangiforo (saco de esporas), (d) Las conidiosporas se disponen en cadenas en el extremo de un conidiforo. (e) Las blastosporas se forman por gemacin de las clulas parentales.
102
Figura 4.4. Morfologas tpicas de hongos y sus esporas
103
4.7.4 Adaptabilidad nutricional Los hongos suelen estar adaptados a ambientes que seran adversos para las bacterias; por ello pueden sobrevivir crecimiento en lugares donde no se espera un son
microbiano.
Los
hongos
quimiohetertrofos y, como las bacterias, absorben nutrientes en vez de ingerirlos, que es lo que hacen los animales. Sin embargo, los hongos difieren de las bacterias en ciertos requerimientos ambientales y en las siguientes caractersticas nutricionales: 1. Los hongos suelen crecer mejor a pH cido (5,0), que inhibe el crecimiento de las bacterias ms corrientes. 2. La mayora de los mohos son aerbicos, por lo que crecen sobre superficies ms que en el interior de los sustratos. Las levaduras son anaerobios
facultativos. 3. La mayora de los hongos son ms resistentes quelas bacterias a la presin osmtica y capaces, por tanto, de crecer en presencia, de
concentraciones elevadas de azcar o de sal. 4. Los hongos son capaces de crecer sobre sustancias con muy poco contenido en humedad, generalmente demasiado bajo para permitir el crecimiento de las bacterias. 5. Los hongos requieren algo menos de nitrgeno para crecer que las bacterias. 6. Los hongos son capaces de utilizar hidratos de carbono complejos, como lignina (madera), que la
104
mayora de las bacterias no pueden metabolizar. Estas caractersticas son factores importantes para que los hongos puedan crecer sobre sustratos tan poco apropiados como paredes pintadas o el cuero de los zapatos. 4.7.5 Grupos de Hongos 4.7.5.1 Clasificacin de los Hongos Inferiores Segn su estado evolutivo los hongos se clasifican en dos grandes grupos,
denominados hongos inferiores y hongos superiores Todos los hongos inferiores son cenocticos v se dividen en cinco clases, atendiendo a la estructura de sus esporas y gametos. Los ms importantes son los Quitridiomicetos y los Oomicetos, que son acuticos, y los
Zigomicetos, que son terrestres. Las esporas asexuales de estos tres grupos son
esporangiosporas. a) Los Quitridiomicetos Son mohos acuticos que crecen sobre materiales orgnicos que caen en los arroyos o estanques, formando masas ensortijadas blanquecinas. Por ejemplo, al cabo de unos pocos das de estar sumergidos en agua, una
105
fruta o un pez muerto se recubren de una capa de Quitridiomicetos y otros mohos acuticos. En un momento determinado de su ciclo de vida, los Quitridiomicetos dan lugar a esporangiosporas y gametos mviles con un nico flagelo polar. Algunas clasificaciones colocan a los Quitridiomicetos dentro de los Protistas. Allomyces es uno de los gneros mejor estudiados. Se desarrolla en lagunas v arroyos tropicales. b) Los Oomicetos Son mohos acuticos que (con tienen dos
esporangiosporas
biflageladas
flagelos) y esporas sexuales inmviles que se forman despus de una fusin entre gametos femeninos inmviles y gametos masculinos, mviles o inmviles. La fina capa de agua que rodea a las partculas del suelo en
descomposicin constituye un medio idneo para que estos organismos puedan completar su ciclo de vida. Algunos Oomicetos infectan a las plantas, muy pocos a las personas. Otros, como los que pertenecen al gnero
Saprolegnia, se encuentran frecuentemente en arroyos y estanques y son parsitos de peces.
106
c) Los Zigomicetos Los Zigomicetos no forman clulas
nadadoras, pudiendo completar su ciclo de vida en un ambiente desprovisto de agua. Como ejemplo de ellos est el moho de color negro Rhizopus nigricans, que se desarrolla sobre el pan rancio u otros alimentos
derivados de cereales. Las esporangiosporas de los Zigomicetos no tienen flagelos, y cuando se liberan de los esporangios son dispersadas por el aire. Los gametos de los Zigomicetos poseen normalmente el aspecto de cortas hitas, que se hinchan y fusionan entre s cuando entran en contacto, formando un zigoto que sufre una meiosis para dar lugar a una zigospora muy resistente. Los gametos masculinos no se distinguen de los femeninos, pero pertenecen a uno de los dos grupos sexuales, designados ms (+) y menos (). Los gametos ms slo se fusionan con gametos menos y viceversa. Varios gneros de Zigomicetos, entre ellos Rhizopus, incluyen especies que producen enfermedades
denominadas zigomicosis en individuos que estn inmunolgicamente, o por cualquier otra causa, debilitados.
107
Tabla 4.1. Propiedades de los grupos principales de hongos

Clase Caractersticas diferenciales Hongos inferiores Cuando existe, el micelio es cenoctico y carece de septos Quitridiomicetos Mohos acuticos con gametos y esporangiosporas uniflageladas Oomicetos Mohos acuticos con gametos masculinos y esporangiosporas biflageladas, gametos femenino inmviles y esporas sexuales Zigomicetos Hongos terrestres con zigosporas y esporangiosporas inmviles. Varios gneros parasitan a enfermos debilitados Hongos Micelios (si existen) con septos; todas Superiores las especies son terrestres; conidios y gametos (si existen) inmviles Ascomicetos Ascosporas formadas dentro de un saco (asca); algunos parasitan plantas o animales Basidiomicetos Basidiosporas formadas en un basidio en forma de porra; algunos parasitan plantas o animales Deuteromicetos Hongos superiores que carecen de u esporas sexuales; algunos parasitan Hongos plantas o animales imperfectos Levaduras Unicelulares, clulas ovales; la gran mayora son Ascomicetos y Deuteromicetos pero algunos son Basidiomicetos o Zigomicetos; algunos parasitan plantas o animales Ejemplos
Allomyces(crecimiento difuso en lagunas y arroyos tropicales) Saprolegnia (crecimiento difuso en peces de agua dulce)
Rhizopus(moho del pan rancio)
Peziza (un hongo anaranjado en forma de copa que crece en el suelo y sobre madera hmeda) Amanita (seta de color blanco o rojo de los bosques) Penicillum (hongo de color verde o azul que crece sobre frutas; se utiliza para producir U penicilina Saacharomyces cerevisiae (levadura del pan, cerveza y vino)
4.7.5.2
Clasificacin de los hongos superiores Los micelios de todos los hongos .superiores poseen septos perforados con un poro central. Se dividen en Ascomicetos, Basidiomicetos v Deuteromicetos, dependiendo de si forman o no esporas sexuales y del tipo de las mismas. Las esporas asexuales en los tres grupos son siempre conidios. a) Ascomicetos La reproduccin sexual de todos los
Ascomicetos es muy similar: se fusionan los

108
extremos de hitas de un mismo talo o de talos diferentes (homotlicos o heterotlicos,
respectivamente). El ncleo que se encuentra en el zigoto as originado experimenta una meiosis y, a veces, los cuatro ncleos resultantes se dividen de nuevo,
transformndose luego en esporas sexuales, llamadas ascosporas, dentro del asca (un saco que se forma en la pared del zigoto). Una vez liberadas del asca, Las ascosporas germinan para dar lugar a un micelio
vegetativo, completndose as el ciclo de la reproduccin sexual. La reproduccin asexual tiene lugar mediante la formacin y posterior germinacin de conidios. Las principales diferencias entre las especies de Ascomicetos radican en el tipo de
disposicin de las ascas. Algunos producen ascas individuales, y tienen aspecto de moho durante todo su ciclo de vida; otros originan tilas de ascas dispuestas en una estructura denominada ascocarpo de muy variada morfologa. Las especies de Peziza, tienen forma de copa. Son de color naranja brillante o rojizo y se pueden observar en el suelo de los bosques. Otros, como en el caso de Morchella (colmenillas), tienen forma de seta, con un sombrerillo en forma de globo. Las colmenillas o cagarrias son muy codiciadas
109
por su delicioso sabor. b) Basidiomicetos La mayora de los Basidiomicetos forman basicliocarpos (setas en forma de
champin, cuescos de lobo o bejines, o con forma de ostra en troncos de rboles), otros son mohos, y unos pocos, levaduras. La reproduccin asexual se realiza mediante la formacin de conidios. La reproduccin sexual de los Basidiomicetos que forman micelio es exclusiva del grupo, va que en una etapa determinada de su ciclo de vida poseen un extenso crecimiento en forma de dicarion. En este estado las hifas de ambos tipos se han fusionado, v el micelio contiene ncleos provenientes de los dos tipos sexuales. Sin embargo, aunque los citoplasmas de los dos micelios se fusionan, los ncleos no lo hacen. En el caso de los Basidiomicetos con forma de champin o de bejn, la etapa de dicarion es subterrnea y cuando las condiciones son favorables, gran parte del citoplasma fluye a travs del micelio hacia la superficie,
desarrollndose rpidamente el basidiocarpo o estructura fructificante tpica. En el interior del basidiocarpo, los ncleos de los diferentes tipos .sexuales se fusionan por parejas, experimentan una meiosis y se transforman
110
en
esporas
sexuales
denominadas
basidiosporas. Estas basidiosporas se forman en los basidios, que son clulas en forma de porra localizadas en las laminillas de las setas en los poros de las setas con poros o en el interior de los bejines. Una vez que las esporas han madurado, son expulsadas
desde las laminillas (o poros) al espacio existente entre ellas, de donde caern al suelo para germinar posteriormente.
Figura 4.5.Ciclo de vida de un Zigomiceto: (a) El zigomiceto Rhizopuses conocido comnmente como el moho negro del pan, ya que recubre y ennegrece el pan; (b) Rhizopus produce muchos esporangios llenos de esporangiosporas negras; (c) Luego, las zigosporas dan lugar a dos hifas (+ y -), que se hinchan y se fusionan.
111
c) Deuteromicetos Los Deuteromicetos forman conidios pero no esporas sexuales. Por lo tanto, no originan setas o bejines, sino que crecen como mohos o levaduras. A los Deuteromicetos tambin se les conoce como Hongos imperfectos, ya que dos miclogos del siglo XIX, Charles y Louis Tulasne, denominaron perfecto al
estado sexual del ciclo de vida de los hongos, y por lo tanto, imperfectos, a los bongos que carecan del mismo. El trmino Deuteromiceto es un trmino que se utiliza por conveniencia. As, un hongo superior que no forme esporas sexuales no se puede asignar a los Ascomicetos ni a los Basidiomicetos, por lo que se asigna, a veces temporalmente, a los Deuteromicetos. Por ejemplo, un hongo de de un un tipo sexual o
determinado
Ascomiceto
Basidiomiceto que sea heterotlico, no podra tornar esporas sexuales en anuencia de su tipo sexual complementario y podra ser asignado a los Deuteromicotos. En cambio, si se produce el contacto con el tipo sexual complementario, se formaran esporas
sexuales y el hongo en cuestin podra ser considerado Basidiomiceto.

112
como Por
un esta
Ascomiceto razn,
algunos
hongos
clasificados han
inicialmente sido
como
Deuteromicetos
posteriorment posteriormente
reasignados a un gnero de Ascomicetos o Basidiomicetos. Otros hongos, que por
mutacin han perdido la capacidad de formar esporas sexuales, continan clasificados
como Deuteromicetos.
Figura 4.6. (a) Los Ascomicetos pueden producir hileras de ascas dispuestas en un ascocarpo. (b) Los ascocarpos pueden tener forma de copa, como en el caso de Peziza.
Puesto que los Deuteromicetos no poseen esporas sexuales, se identifican
principalmente por la morfologa morfolog y disposicin de sus conidios. Por ejemplo, los conidios del hongo imperfecto Penicillium forman largas cadenas sobre conidiforos ramificados,
dando lugar a una estructura en forma de pincel (penicillus significa "pincel" en latn). Los conidios de un gnero muy relacionado, Aspergillas, forman largas cadenas sobre un conidiforo en forma de globo. Algunas especies de Penicillium producen el antibitico penicilina y algunas especies de Aspergillus
113
causan la aspergilosis, enfermedad que afecta a animales, , incluido el ser humano. La mayora de los hongos que causan
enfermedades en humanos, entre los que se encuentran Blastomyces, Cryptococcus,
Histoplasma y Candida, son Deuteromicetos.
Figura 4.7. Ciclo de vida de un Basidiomiceto, una seta con lminas. Las basidiosporas originadas por meiosis germinan para dar lugar a micelios. Las hifas haploides se fusionan, formando micelios dicariticos. Cuando las condiciones son favorables se forma una seta. Luego, en las lminas se forman los basidios, se fusionan los ncleos (fertilizacin), y se originan las basidiosporas. 114
4.7.5.3
Levaduras El trmino levadura es un trmino descriptivo, no taxonmico. Inicialmente, slo eran
consideradas como levaduras las cepas de Saccharomyces cerevisiae (o levadura del pan) que se utilizaban para la fabricacin de pan, cerveza o vino. S. cerevisiae es un anaerobio facultativo, que en ausencia de oxgeno fermenta los azcares hasta etanol y dixido de carbono. El gas dixido de carbono es el que hace que la masa del pan se hinche y que parezca que la cerveza o el vino hiervan en la fermentacin (la palabra levadura viene del griego zestos, que significa "hervir"). Actualmente, los microbilogos utilizan este trmino para designar los cientos de especies de hongos no filamentosos, unicelulares v con clulas redondeadas u ovaladas. La mayora de las levaduras son Ascomicetos o
Deuteromicetos, algunas son Basidiomicetos y unas pocas son Zigomicetos. Las levaduras, que incluyen tanto formas aerobias como anaerobias facultativas, estn ampliamente distribuidas en la naturaleza. As, se
encuentran sobre las hojas, frutas v carnes en salazn tales como el tocino y el jamn; en el nctar de las flores, en el suelo, y sobre nuestros cuerpos como miembros de la
115
microbiota
habitual.
La
mayora
de
las
levaduras se multiplican por gemacin, y slo unas cuantas por divisin. 4.8 Algas 4.8.1 Introduccin Las algas resultan familiares en forma de largas cintas marrones de aguas costeras, del verdn de los charcos y de las manchas verdes del suelo o rocas. Las algas son principalmente acuticas, aunque algunas pueden hallarse en el suelo o sobre los rboles cuando hay suficiente humedad. Generalmente las algas se encuentran en aguas fras y templadas, si bien las grandes mallas flotantes que forma el alga marrn Sargassum se encuentran en el subtropical mar de los Sargazos. Algunas especies de algas marrones crecen en aguas antrticas. Las algas son fotoauttrofas; por ello se encuentran a lo largo de la zona ftica (iluminada) del agua. Su situacin depende de la disponibilidad de nutrientes, longitud de onda de la luz y clase de sustrato. Las algas rojas y marrones necesitan rocas, conchas u otras algas a las que unir sus seudorraces. La clorofila (pigmento captador de luz) y otros pigmentos accesorios implicados en la fotosntesis son responsables de los colores peculiares de muchas algas. Algunas algas son unicelulares, otras se
116
presentan en colonias de cientos o miles de clulas. Las algas se distribuyen como protistas o como plantas atendiendo caracteres. 4.8.2 Ecologa y aplicaciones Las algas son organismos acuticos. Sin embargo, unas pocas colonizan ambientes terrestres muy a su estructura, pigmentos y otros
hmedos, tales como la superficie de suelos, rocas v troncos de rboles mojados en reas lluviosas. Las algas viven tanto en agua dulce como salada y sus actividades metablicas afectan profundamente a la ecologa terrestre. Son los principales organismos fijadores de CO2 de la Tierra y se estima que el 80 por ciento de la fotosntesis del planeta es llevada a cabo por el fitoplancton, algas microscpicas que flotan en el ocano (planktos en griego significa "ir a la deriva"). El fitoplancton constituye la base de la cadena alimentaria de los peces y animales acuticos. Indirectamente, las algas influyen profundamente en nuestras vidas -sin ellas el planeta no sera habitable para el ser humano, aunque tengan un escaso efecto directo sobre nosotros. No causan enfermedades infecciosas, son fotosintticas v no pueden vivir dentro del cuerpo. El alga incolora Prototheca constituye una excepcin, siendo un alga verde que ha perdido su capacidad de realizar la fotosntesis y que se asocia a la bursitis, una inflamacin de las articulaciones.
117
En los pases asiticos, algunas algas marinas se consumen como alimento. El cido algnico (algina), un polisacrido que se obtiene a partir del quelpo, un alga de gran tamao de color pardo que crece profusamente en la Costa del Pacfico, se utiliza como espesante en helados, salsas, alimentos precocinados y otro tipo de alimentos. Otro polisacrido espesante, el carragenano, que se utiliza en productos lcteos, como por ejemplo helados, natillas y leche evaporada, es producida por el alga roja Chondrus crispus, tambin conocida como el musgo irlands. Se llama as debido a que sus propiedades fueron descubiertas por vez primera en Carragheen, Irlanda, Otras algas rojas, como las especies de Gelidium y Gracilaria, que se encuentran mayoritariamente en el Ocano Pacfico occidental, son las fuentes exclusivas del agar, que usan los
microbilogos para solidificar los medios de cultivo. La tierra de diatomeas, depsitos de valvas de diatomeas, un grupo de algas, se utiliza en la industria. Las valvas silceas (cristalinas), extradas de regiones que una vez fueron el fondo de antiguos mares, se utilizan para pulimentar, como material aislante .y como aditivos para aumentar el grado de filtracin de los lquidos. Los miembros del grupo de los dinoflagelados, tales como Gymnodmium y Gonyaulax, elaboran una potente neurotoxina que puede llegar a producir la muerte de una persona. Estos dinoflagelados proliferan en mares poco profundos durante los meses de primavera y verano formando floraciones o densas acumulaciones
118
de clulas. Se les denomina mareas rojas debido a que sus pigmentos de color rojo tien el agua. Los mariscos que se alimentan de estos organismos no sufren dao alguno, pero los peces o las personas que ingieren dichos mariscos pueden sufrir parlisis peligrosas. 4.8.3 Clasificacin Las algas se dividen en seis grupo atendiendo a la morfologa de sus talos (si son unicelulares,
cenocticos, filamentosos o con forma de planta), a la estructura de sus paredes celulares (si carecen de pared o si tienen paredes de celulosa, algina o slice) y a los pigmentos que producen. Todas las algas contienen clorofila a, el tipo que se encuentra en las plantas, y pueden o no contener otras dos clorofilas modificadas, la clorofila b y la clorofila c. Las clorofilas son los pigmentos que intervienen en las reacciones bsicas de la fotosntesis, que convierte la luz solar en energa qumica. Adems de la clorofila, las algas contienen pigmentos fotosintticos
accesorios: carotenoides (tales como los pigmentos que proporcionan a las zanahorias y tomates su color caracterstico) o ficobilinas (similares en estructura a los citocromos). Ambos pigmentos accesorios recogen la energa lumnica y se la ceden a las clorofilas. Los pigmentos que contiene un alga en particular
determinan su hbitat, ya que crece mejor en aquellos ambientes ricos en la longitud de onda de la luz que sus
119
pigmentos absorben. Las combinaciones de pigmentos tambin proporcionan a los diversos grupos de algas sus colores caractersticos. Los pigmentos son tambin el fundamento de los nombres comunes que reciben los tres grupos de algas, las algas verdes, las algas pardas y las algas rojas. Los otros tres y grupos, las los euglenoides, se los
dinoflagelados
diatnicas,
distinguen
principalmente por su morfologa. As, los Euglenoides son seres unicelulares que se mueven por medio de dos flagelos de igual longitud. Los Dinoflagelados son unicelulares y poseen normalmente dos flagelos, uno de ellos dispuesto a lo largo de un surco situado sobre el ecuador de la clula y el otro extendindose a partir del surco. Las diatomeas son clulas rodeadas por una pared rgida de slice, elaboradamente esculpida, que se asemeja a las dos partes de una placa de Petri unidas entre s.
120
Figura 4.8. Hbitats de algas. Las algas unicelulares y filamentosas pueden hallarse en tierra y existen en forma de plancton en ambientes acuticos. Las algas pluricelulares verdes, marrones y rojas requieren un lugar de fijacin adecuado, suficiente agua que las soporte y luz de las longitudes de onda adecuadas.
4.8.3.1
Dinoflagelados Los dinoflagelados son algas planctnicas unicelulares que flotan libremente. Sus
paredes celulares constan de muchas placas individuales hechas de celulosa y slice. Los
121
dinoflagelados marinos del gnero Gonyaulax producen neurotoxinas que causan la
parlisis de los mariscos. Esta enfermedad alcanza al hombre cuando los moluscos, como mejillones o almejas, ingieren gran cantidad de dinoflagelados y son a su vez consumidos por el hombre. La presencia de gran concentracin de Gonyaulax da al mar un color rojo profundo, de donde viene el nombre de mareas rojas. Durante una marea roja no deben pescarse moluscos para el consumo humano. Una enfermedad similar, llamada ciguatera, es la consecuencia del paso del dinoflagelado Gamberdiscus toxicus a travs de la cadena alimenticia hasta concentrarse en los grandes peces. La ciguatera es endmica (est siempre
presente) en el sur del Pacfico y en el mar del Caribe. 4.8.3.2 Euglenoides Son algas unicelulares, flageladas, con una membrana celular parcialmente rgida llamada cutcula y se mueven por medio de un flagelo anterior. Algunos euglenoides facultativos y en son la
quimiohetertrofos
oscuridad ingieren materia orgnica a travs del citostoma.
122
Figura 4.9. Algas, (a) Peridinium, un dinoflagelado. Algunos dinoflagelados presentan dos flagelos en surcos opuestos, perpendiculares. Al moverse ambos flagelos simultneamente se produce la rotacin de la clula, (b) Euglena. Los anillos semirgidos que mantienen la membrana citoplasmtica permiten a Euglena cambiar de morfologa, (c) Nereocystis, un alga marrn. El falso tallo hueco y los neumocystis llenos de gas mantienen el tallo erecto para asegurar la captacin de la cantidad idad adecuada de luz solar para el crecimiento, (d) Microcladia, un alga roja. Las algas rojas, delicadamente ramificadas, deben su color a los pigmentos accesorios de ficobiliprotena. (e) Chlamydomonas, un alga verde. Dos flagelos en forma de ltigo impulsan lsan a esta clula.
Los euglenoides se estudian frecuentemente junto a los protozoos, porque carecen de pared celular y pueden moverse y alimentarse ali
123
utilizando el flagelo. Todos los euglenoides, salvo uno, tienen una mancha ocular roja en su extremo anterior. Este orgnulo, que contiene carotenoides, es sensible a la luz y dirige a la clula en la direccin apropiada por medio del flagelo preemergente. Tabla 4.2. Caractersticas de algunas divisiones de algas.
Dinoflagelados Euglenoides Diatomeas Algas marrones Clasificacin Color Protistas Marrn Protistas Verde No; cutcula de protena 1 Protistas Marrn Pectina y slice En gametos Unicelular Auttrofa Protistas Marrn Celulosa y alginato En gametos Algas rojas Protistas Rojizo Celulosa No Algas verdes Plantas Verde Celulosa En formas unicelulares y gametos Unicelular y pluricelular Auttrofa
Pared celular Celulosa y slice Flagelos 2
Disposicin celular Nutricin
Unicelular Auttrofa; algunos hetertrofa Clorofila a y c, caroteno, xantinas
Unicelular Auttrofa; algunos hetertrofa Clorofila a y b, caroteno
Pluricelular La mayora pluricelular Auttrofa Auttrofa
Pigmentos
Clorofila a y, c, caroteno, xantofilas S Aceite
Clorofila a y Clorofila a y d, Clorofila a y c, xantofilas ficobiliprotenas b
Reproduccin Algunos (?) sexual Material reserva Almidn
No Polmero de glucosa
S Almidn
Hidrato de Similar a carbono almidn (laminarina)
4.8.3.3
Diatnicas Las diatnicas son algas unicelulares o filamentosas con paredes celulares
complejas, compuestas de pectina y una capa

124
de slice. Las dos partes de la pared se unen como las mitades de una placa de Petri. Los dibujos distintivos de las paredes son una herramienta til para la identificacin de las diatomeas. Las diatomeas almacenan la energa capturada a travs de la fotosntesis en forma de aceite. Una parte importante del petrleo mundial se form a partir de 300
diatomeas
que vivieron
hace unos
millones de aos. 4.8.3.4 Algas marrones Algas marrones son macroscpicas; algunas alcanzan longitudes de 50 metros y la mayora se encuentran en aguas costeras. Las algas marrones tienen una tasa de crecimiento extraordinaria; algunas crecen ms de 20 cm diarios y pueden, por tanto, ser cosechadas regularmente. Los alginatos, espesantes utilizados en muchos alimentos, como helados y decoraciones de tartas, se extraen de sus paredes celulares. Los alginatos se emplean en la produccin de una amplia variedad de artculos no alimenticios pluricelulares, que incluyen neumticos y cremas para las manos. Son organismos delicadamente ramificados, que viven en profundidades ocenicas mayores que la de los habitis de las otras algas. Los pigmentos rojos les permiten absorber la luz azul que penetra a
125
mayor profundidad. El agar se extrae del alga roja Gelidium. Otro material gelatinoso, llamado carragaen, procede de una especie de alga roja llamada musgo irlands. El carragaen puede ser un componente espesante sante en leche evaporada, helados y medicamentos, 4.8.3.5 Algas verdes Se suelen clasificar como plantas porque tienen paredes celulares con celulosa, contienen clorofila a y b y almacenan almidn, como las plantas. Se cree que las algas verdes han dado lugar ugar a las plantas terrestres. La mayora de las algas verdes son microscpicas; algunos tipos filamentosos forman el verdn de los estanques.
126
Figura 4.10. Morfologas tpicas de algas
4.8.4 Estructura y reproduccin El cuerpo de un alga multicelular se denomina talo. Los talos de las algas grandes pluricelulares comprenden falsas races ramificadas que anclan el alga a una roca, un falso tallo a menudo hueco y lminas parecidas a hojas. Las clulas que recubren el talo o pueden realizar la fotosntesis. El talo carece de tejido conectivo (xilema y floema), caracterstico de las plantas vasculares; las algas absorben nutrientes del agua a travs de toda su superficie. El talo no est lignificado porque no tiene que ofrecer r el mismo soporte que el tallo de una planta.
127
Es la presin del agua que lo rodea la que mantiene el talo del alga; algunas son sostenidas adems por flotadores o vejigas llenas de gas. Todas las algas pueden reproducirse asexualmente. Las filamentosas y pluricelulares forman fragmentos y cada uno es capaz de originar un nuevo talo. Cuando un alga unicelular se divide lo hace primero el ncleo (mitosis), despus los dos ncleos se dirigen a los extremos opuestos de la clula y sta se divide en dos clulas completas (citocinesis). La reproduccin sexual tiene lugar en algunas algas. Hay especies que se reproducen asexualmente durante varias generaciones y despus, bajo condiciones distintas, se reproducen sexualmente. Otras especies alternan generaciones, de modo que la descendencia procedente de una reproduccin sexual se reproduce asexualmente y la siguiente lo hace sexualmente. 4.8.5 Lquenes Un liquen es una asociacin entre un alga verde (o una cianobacteria) y un hongo. Los dos organismos establecen una relacin mutualista, de la que ambos se benefician. Un liquen es muy distinto del alga o del hongo cuando crecen solos y si se separan sus componentes el liquen 20.000 deja de existir. de Existen lquenes
aproximadamente
especies
ocupando hbitats muy diversos. Como los lquenes pueden habitar en zonas en las cuales no podran
128
sobrevivir ni los hongos ni las algas aisladamente, son a menudo la primera forma de vida que coloniza el suelo o las rocas expuestos al medio ambiente por vez primera. Los lquenes segregan cidos orgnicos que desgastan qumicamente las rocas y acumulan
nutrientes necesarios para el crecimiento de las plantas. Los lquenes se encuentran entre los
organismos que ms lentamente crecen en la Tierra. 4.9 Protozoos Los protozoos son organismos eucariticos unicelulares que pertenecen al reino Protista. Entre los protozoos se dan muchas variaciones sobre esta estructura celular, como veremos a continuacin. Los protozoos habitan en el suelo y se alimentan de bacterias y pequeas partculas de
nutrientes. Algunos forman parte de la microflora normal de los animales. Los protozoos se clasifican en divisiones atendiendo a sus medios de locomocin. Restringiremos su estudio a las cuatro divisiones de protozoos que comprenden especies causantes de enfermedades. Una de ellas, Sarcodina, est formada por amebas. Las amebas se mueven extendiendo proyecciones del citoplasma en forma de lbulos, generalmente romas, llamadas seudpodos. Puede fluir un nmero cualquiera de seudpodos desde un lado de la clula amebiana y el resto de la clula fluye despus hacia los seudpodos. Otra divisin, Mastigofora o flagelados, se caracteriza por la presencia de flagelos. Los flagelos son capaces de realizar
129
movimientos semejantes a los de un ltigo, que impulsan a la clula a travs del medio. La mayora de los flagelados poseen uno o dos flagelos, pero algunas de las especies parsitas tienen hasta ocho. Las especies de la divisin Ciliata presentan proyecciones ones similares a los flagelos, pero ms cortas, llamadas cilios. Los cilios aparecen distribuidos de forma precisa alrededor de la clula y se mueven coordinadamente para impulsar a la clula. Las especies pertenecientes a la cuarta divisin aqu estudiada estudiada,
Esporozoa, son incapaces de movimiento independiente.
Figura 4.11. Ejemplos de protozoos, (a) Ameba. Para moverse e ingerir alimento las amebas extienden porciones del citoplasma llamadas seudpodos. Una vez rodeado por los seudpodos el alimento queda en una vacuola alimenticia, (b) Paramecium, un ciliado. Las clulas de los ciliados estn recubiertas rtas de hileras de cilios. Estos se mueven al unsono para lograr la locomocin y para atraer partculas de alimento hacia el protozoo. Paramecium tiene estructuras especializadas para la ingestin (citostoma), eliminacin de desechos (poro anal) y regulacin in de la presin osmtica (vacuolas contrctiles). El macroncleo est implicado en la sntesis de protenas y otras actividades continuas de la clula. El microncleo sirve para la reproduccin sexual.
130
4.9.1 Nutricin Los protozoos son hetertrofos aerbicos, aunque muchos protozoos intestinales son capaces de crecer anaerbicamente. Un flagelado que contiene clorofila, Euglena, puede crecer en la oscuridad como
hetertrofo, por lo que se le incluye a menudo entre los protozoos. Todos los protozoos viven en zonas con abundancia de agua. Algunos transportan los nutrientes a travs de la membrana celular; otros poseen una cubierta protectora llamada cutcula, y requieren estructuras especiales para ingerir sus alimentos. Los ciliados toman los nutrientes gracias al movimiento ondulante de sus cilios que los dirigen hacia una abertura similar a una boca, llamada citostoma. Las amebas engullen el alimento rodendolo con sus seudpodos y fagocitndolo. En los protozoos la digestin tiene lugar en vacuolas unidas a la membrana y los residuos se eliminan a travs de la membrana o mediante un poro anal. 4.9.2 Reproduccin Los protozoos se reproducen asexualmente por fisin, gemacin o esquizogonia. La esquizogonia es una fisin mltiple en la que el ncleo sufre mltiples divisiones antes de que lo haga la clula. Cuando se han formado muchos ncleos se concentra alrededor de cada uno de ellos una pequea porcin de citoplasma y tiene lugar la separacin de las clulas
131
hijas. Se ha observado reproduccin sexual en algunos protozoos. Los ciliados se reproducen sexualmente por conjugacin, muy distinta del proceso bacteriano del mismo nombre. Durante la conjugacin de los
protozoos se fusionan dos clulas y emigra un ncleo haploide (el microncleo) de cada una de ellas a la otra. El ncleo haploide que ha migrado se fusiona con el que ha permanecido en la clula. Las clulas parentales, ahora fertilizadas, se separan para dividirse ms tarde dando lugar a clulas hijas cuyo DNA es producto de una recombinacin. Algunos protozoos originan gametos o gametocitos, clulas sexuales haploides que se fusionan durante la reproduccin para formar un zigoto diploide. 4.9.3 Enquistamiento Bajo ciertas condiciones adversas algunos protozoos son capaces de formar una cpsula protectora llamada quiste. De este modo el organismo puede sobrevivir cuando carece de alimento, humedad u oxgeno, cuando la temperatura no es adecuada o en presencia de sustancias txicas. El quiste tambin permite a las especies parsitas la supervivencia fuera del husped, lo que es importante porque estos protozoos pueden tener ciclos de vida que impliquen ms de un hospedador.
132
4.9.4 Divisiones de protozoos Segn el tipo de locomocin, los protozoos se dividen en cuatro grupos con varios phyla. Los flagelados se mueven por medio de uno o ms flagelos; los ameboides se desplazan extendiendo pseudpodos, largas prolongaciones lobulares de la clula; los esporozoos son inmviles; y los ciliados se mueven mediante numerosos cilios. 4.9.4.1 Mastigophora Los protozoosflagelados (tambin llamados Mastigophora) euglenoides, se de parecen las a que las algas difieren
principalmente en que no son fotosintticos. A veces los alglogos y los protozologos se disputan la pertenencia de estos dos grupos. Los alglogos afirman que los protozoos flagelados son algas que han perdido la capacidad de fotosntesis, mientras que los protozologos flageladas son aducen en que realidad las algas
protozoos
fotosintticos. Los flagelos tienen un movimiento de tipo ltigo, aunque tanto la disposicin de los mismos como el modo en que impulsan a los diversos protozoos difieren notablemente. La mayora de los flagelados poseen nicamente dos flagelos. En algunas especies, uno o los
133
dos flagelos estn situados en posicin anterior, tirando de la clula. En otras, uno o ambos flagelos se encuentran dispuestos posteriormente, propulsando a la clula. Otros flagelos se insertan cerca de la superficie celular, pero no se extienden hacia el exterior celular, sino que estn cubiertos por una membrana expandida llamada membrana
ondulante, que impulsa a la clula por ondulacin a la ve/ que el flagelo se mueve en su interior. Los miembros de un phylum de protozoos flagelados, los tripanosomas (que incluyen la especie que causa la enfermedad del sueo africana y la Ieishmaniosis) se caracterizan por su aspecto en forma de hoja, posesin de un solo flagelo y presencia de una membrana ondulante en una etapa de su ciclo de vida. Los miembros de otro phylum, los
diplomonadinos, poseen un cuerpo doble que contiene dos conjuntos de orgnulos, por lo que la clula tiene el aspecto de una cara humana. Los diplornonadidos poseen de dos a seis flagelos. Como ejemplo de ellos est Giardia lamblia, que causa un tipo de disentera y que puede sobrevivir fuera del hospedador en forma de quiste durante largos periodos de tiempo.
134
4.9.4.2
Sarcodina Los ameboides (tambin llamados Sarcodina) pueden encontrarse en el mar, en agua dulce y en el suelo (incluso en el desierto), y asociados a anmales. Es un vasto gruo de microorganismos. Algunos protozologos los dividen en 12 phyla, uno de los cuales contiene 48000 especies descritas, agrupadas en ocho clases. Sin embargo, todos los miembros poseen la capacidad de producir pseudpodos en alguna etapa de su ciclo de vida. En otros estadios, algunos pueden no tener la forma ameboide, y otros pocos incluso pueden producir gametos flagelados. Puesto que pueden tanto extender como retraer sus pseudpodos, los ameboides poseen aspectos muy diferentes segn se encuentren en estado de reposo o como formas dotadas de motilidad. Adems, los pseudpodos morfologas, pueden pudiendo tener ser diferentes gruesos y
redondeados en algunos casos, o finos y alargados, en otros. Los pseudpodos son orgnulos tiles tanto para la locomocin como para la alimentacin. Se extienden para arrastrar a la clula a lo largo de un sustrato slido v engloban las partculas de alimento, incluso clulas. Si las
135
condiciones
son
favorables,
se
forman
microtbulos por condensacin de la protena actina (relacionada con la protena de los msculos microtbulos de los presionan animales), la Estos
membrana
plasmtica y dan lugar a protuberancias hacia las que fluye el citoplasma, formndose un pseudpodo. A continuacin, las molculas de actina se desagregan haciendo que el
pseudpodo se retraiga, arrastrando as a la clula. Son muy pocos los ameboides que causan enfermedades Entamoeba en la especie por humana. es
histolytica,
ejemplo,
responsable de la disentera amebiana, que se contrae al inferir aguas o alimentos contaminados que contienen quistes. Otra especie, Naegleria fowleri, produce un tipo raro, y generalmente mortal, de encefalitis que se contrae al nadar en aguas contaminadas. 4.9.4.3 Esporozoa Todos los miembros de este grupo son parsitos, siendo un nico phylum con ms de 300 gneros y 4000 especies. Algunos
esporozoos poseen un ciclo de vida complejo, en el que cambian su morfologa. Al
esporozoo en estado vegetativo durante el

136
cual se multiplica activamente, se le denomina trofozoito; cuando est en la etapa infecciosa para su hospedador animal o humano,
esporozoito; y cuando penetra e infecta a los eritrocitos, merozoito. Generalmente el ciclo comprende ms de un hospedador. As, Plasmodium spp., que produce la malaria en la especie humana, primates interiores,
pjaros y reptiles, puede encontrarse en las tres formas antes mencionadas, parte de su ciclo de vida tiene lugar en el cuerpo humano y en la hembra del mosquito Anopheles. Un ciclo de vida tpico tambin posee etapas de esquizogonia, en las que se produce
repentinamente en los individuos con malaria un gran aumento en el nmero de merozoitos, siendo ste el responsable de los
caractersticos episodios de escalofros y fiebre elevada. La especie Toxoplasma gondii, agente causal de la toxoplasmosis, de animales,
enfermedad
sistmica
especialmente gatos, y del ser humano, posee un ciclo de vida menos complicado. Las personas contraen la enfermedad al ingerir los quistes, presentes en la carne de animales infectados, contaminado o con al consumir heces de material gato que
contengan clulas de Toxoplasma.
137
4.9.4.4
Ciliphora Los protozoos ciliados tambin constituyen un nico phylum: Cliophora. La mayora poseen dos ncleos llamados macroncleo y
microncleo. El primero es mayor, poliploide (es decir, que posee varias copias de su dotacin de cromosomas) y el que dirige el crecimiento vegetativo y la divisin celular. El microncleo aparentemente es slo ms pequeo en y la
interviene
reproduccin sexual. As, las cepas que carecen de microncleo son capaces de reproducirse asexual, pero indefinidamente no pueden de forma la
realizar
reproduccin sexual. Los cilios son orgnulos de locomocin. Al batir de forma coordinada pueden desplazar rpidamente a la clula, hacerla girar v detenerla bruscamente funciones que
necesitan los ciliados va que algunos se alimentan de bacterias, hongos u otros protozoos. La alimentacin puede ser a veces muy especfica. Por ejemplo, Didinium
nosutum se alimenta nicamente de especies de Paramecium (otro ciliado), que engulle enteras. Ya que Didinium no es mucho mayor que Paramecium, al tragar agranda
enormemente su citostoma. No puede comer

138
de nuevo durante al menos dos horas. Los cilios son tambin orgnulos accesorios para la alimentacin, ya que al moverse arrastran pequeas partculas de alimento hacia el citostoma. Algunas especies
inmviles, , que se fijan al sustrato por medio de pednculos, utilizan sus cilios nicamente para la alimentacin. Muchos ciliados estn asociados a animales. El rumen de las vacas y de otros herbvoros contiene ciliados que digieren la celulosa, transformndola en alimento para el animal. Slo unos pocos ciliados son parsitos de animales, y solamente uno, Balantidium coli, es patgeno del ser humano. Causa la balantidiasis, una diarrea infecciosa grave del intestino grueso.
139
Figura 4.12. Morfologa tpica de los protozoos
140
Cap. 5. Virus
Captulo Virus
141
Cap. 5. Virus
142
Cap. 5. Virus
CAPTULO 5 VIRUS 5.1 Caractersticas generales de los virus Los virus fueron originalmente distinguidos de otros agentes infecciosos porque son particularmente pequeos (virus filtrables) y porque son parsitos intracelulares obligados, es decir, requieren absolutamente la clula hospedadora para poder multiplicarse. Sin embargo, estas dos propiedades son tambin compartidas con algunas bacterias pequeas como las rickettsias. Hoy en da se sabe que las verdaderas caractersticas tpicas de los virus estn relacionadas con su simplicidad estructural y de composicin, as como con su mecanismo de multiplicacin. Teniendo en cuenta esto los virus son entidades que: 1. Contienen slo un tipo de cido nucleico, bien DNA o bien RNA. 2. Contienen una envuelta proteica (algunas veces rodeada por una envuelta de lpidos, protenas y carbohidratos) que rodea los cidos nucleicos. 3. Solamente se multiplican dentro de las clulas vivas usando la maquinaria sinttica de la clula. 4. Provocan la sntesis de estructuras especializadas que permiten la transferencia del cido nucleico vrico a otras clulas. Dado que los virus poseen muy pocas o ninguna enzima para llevar a cabo su propio metabolismo (por ejemplo, enzimas que intervienen en la sntesis de protenas o cidos nucleicos
143
Cap. 5. Virus
o que generan ATP), para poder multiplicarse los virus necesitan apoderarse de la maquinaria metablica de la clula hospedadora. 5.2 Rango de hospedadores El rango de hospedadores de un virus es el espectro de clulas que el virus puede infectar. Los virus, en general, se multiplican solamente en clulas de determinadas especies y teniendo en cuenta esto pueden ser divididos en tres grandes clases: virus animales, virus bacterianos (bacterifagos) y virus de plantas. El tipo particular de rango de hospedadores de un virus viene determinado por los requerimientos vricos para su adsorcin especfica a la clula hospedadora y la disponibilidad en el hospedador de los factores celulares requeridos para la multiplicacin del virus. Para que el virus sea capaz de infectar a la clula hospedadora la superficie exterior del virus tiene que interaccionar qumicamente con receptores
especficos que estn en la superficie de la clula. Los dos componentes complementarios se mantienen unidos
mediante enlaces dbiles como son, por ejemplo, los puentes de hidrgeno. Para algunos bacterifagos el receptor es un componente de la pared celular de la bacteria. En otros casos puede ser un componente de las fimbrias o de los flagelos. Para virus animales el receptor est situado en la membrana plasmtica de la clula hospedadora. 5.3 Tamao El tamao de los virus fue estimado en un principio mediante
144
Cap. 5. Virus
filtracin a travs de membranas de dimetro de poro conocido. Hoy en da el tamao de los virus se determina bien por ultra centrifugacin o bien por microscopa electrnica. Esta ltima tcnica es la que parece producir los resultados ms exactos. Los virus varan considerablemente en tamao. Aunque la mayora de ellos son bastante ms pequeos que las bacterias, algunos virus grandes (como, por ejemplo, el virus de la viruela) son aproximadamente del mismo tamao que algunas de las bacterias ms pequeas (como, por ejemplo, los micoplasmas, las rickettsias y las clamidias). El tamao de los virus vara desde 20 a 300 nm de dimetro.
Figura 5.1. Tamaos de virus. Los lmanos de algunos virus (color claro) y bacterias (color gris) se comparan al de una clula sangunea roja humana, situada a la derecha de la figura. Las dimensiones se expresan en nanmetras (nm) y en longitud por anchura o en dimetro.
145
Cap. 5. Virus
5.4 Estructura vrica
Un virin es una partcula vrica completa, totalmente formada, compuesta por cido nucleico rodeado por una cubierta que se denomina cpsida, que le protege del medio ambiente y le sirve al mismo tiempo de vehculo para la transmisin de una clula a otra.
5.4.1 cido nucleico Como se ha mencionado antes, dentro de la cpsida del virus slo hay un tipo de cido nucleico, bien DNA o RNA, que es su material gentico. El porcentaje de material gentico en relacin al de protena va desde alrededor del 1%para el virus de la gripe hasta aproximadamente el 50% para algunos bacterifagos. La cantidad total de cido vara desde unos miles de nucletidos (o pares de nucletidos) hasta 250.000 nucletidos. En contraste con las clulas procariotas y eucariotas, en las cuales el DNA es siempre et material gentico primario (y el RNA slo juega un papel auxiliar), en los virus puede existir tanto DNA como RNA como material gentico, pero nunca ambos. El cido nucleico de un virus puede ser de cadena sencilla o de cadena doble. Por lo tanto, hay virus con la tpica estructura de DNA de doble cadena, con DNA de cadena sencilla, con RNA de cadena doble y con RNA de cadena sencilla. En algunos virus el cido nucleico es lineal y en otros es circular, y en otros virus (como, por ejemplo, el virus de la gripe) el cido nucleico est
146
Cap. 5. Virus
fragmentado (dividido en diferentes segmentos). 5.4.2 Cpsida y envuelta Los cidos nucleicos de los virus estn rodeados por una cubierta proteica denominada cpsida. La cpsida, cuya arquitectura viene determinada finalmente por el cido nucleico, es la responsable de la mayora de la masa del virus, especialmente en los virus pequeos. Todas las cpsidas estn compuestas de sub-unidades proteicas a las cuales se les denomina capsmeros. En algunos virus las protenas que componen los
capsmeros son slo de un tipo y en otros virus hay varios tipos de protenas diferentes entre los diferentes capsmeros. Los capsmeros individuales son
normalmente visibles mediante microscopa electrnica. La organizacin de los capsmeros es caracterstica de cada virus. En algunos virus la cpsida est cubierta por una envuelta que, generalmente, consiste en una
combinacin de protenas, lpidos y carbohidratos. Dependiendo del virus la envuelta puede o no estar recubierta por espenlas, que son glicoprotenas
complejas que se proyectan hacia afuera en la superficie de la envuelta. Algunos virus se asocian a las clulas hospedadoras a travs de estas espculas. Las espenlas son tan tpicas de algunos virus que pueden ser utilizadas para su identificacin.
147
Cap. 5. Virus
Aquellos virus cuya cpsida no est cubierta por una envuelta se denominan virus desnudos. La cpsida de un virus desnudo protege al cido nucleico de las nucleasas que se encuentran en los fluidos biolgicos y adems permite la adsorcin del virus a las clulas hospedadoras susceptibles de ser infectadas.
Figura 5.2. Esquema de la estructura de dos tipos de virus.(a) Virus desnudo, (b) Virus con envuelta y espculas.
5.4.3 Morfologa general Teniendo en cuenta la arquitectura de la cpsida, segn se observa en fotografas al microscopio electrnico y por cristalografa de rayos X, los virus pueden ser clasificados morfolgicos. a) Virus helicoidales Los virus helicoidales en diferentes categoras o tipos
recuerdan largas varillas que pueden ser rgidas o

148
Cap. 5. Virus
flexibles. La cpsida, que rodea al cido nucleico, tiene forma de cilindro hueco de estructura helicoidal. Un ejemplo de virus helicoidal a modo de varilla rgida es el virus del mosaico del tabaco. Otro ejemplo es el bacterifago M13. b) Virus polidricos Muchos virus animales, de plantas y bacterianos son de este tipo; esto es, tienen la cpsida con mltiples caras. La cpsida de la mayora de los virus polidricos tiene la forma de un icosaedro, poliedro regular con veinte caras triangulares y doce vrtices. Los capsmeros de cada una de las caras forman un tringulo equiltero. Un ejemplo de virus polidrico con forma icosadrica son los adenovirus. Otros virus polidricos son los poliovirus. c) Virus con envuelta Como ya se ha mencionado anteriormente, la cpsida de los virus est cubierta, en algunas ocasiones, por una envuelta. Los virus que poseen envuelta son toscamente esfricos y bastante pleomrficos, esto es,
variables en forma porque la envuelta externa no es rgida. Cuando virus helicoidales o polidricos se incluyen en envueltas se les denomina virus helicoidales con envuelta o virus polidricos con envuelta. Un ejemplo de virus helicoidal con envuelta es el virus de la gripe. Un ejemplo de virus polidrico (icosadrico) con envuelta es el virus herpes simplex.
149
Cap. 5. Virus
d)
Virus complejos Algunos virus, particularmente virus bacterianos, tienen estructuras bastante complicadas y se denominan virus complejos. Ejemplos de virus animales complejos son los poxvirus, los cuales no contienen cpsidas
claramente identificables sino que tienen una serie de envueltas alrededor del cido nucleico. Algunos bacterifagos tienen una cpsida a la cual se le adicionan otro tipo de estructuras. Si se miran con detalle estos virus, se nota que la cpsida (la cabeza) es polidrica y la cola es helicoidal. La cabeza contiene el cido nucleico.
Figura 5.3. Morfologa de un virus helicoidal, (a) Diagrama de una parte del virus del mosaico del tabaco. Varias filas de capsmeros se han eliminado para que pueda verse el cido nucleico, (b) Fotografa al microscopio electrnico del virus del mosaico del tabaco, en la que se puede observar su aspecto de varilla helicoidal (147.000X).
150
Cap. 5. Virus
Figura 5.4. Morfologa de un virus polidrico con forma icosadrica. (a) Diagrama de un icosaedro, (b) Fotografa al microscopio electrnico de un adenovirus (174.000x). Algunos de los capsmeros de la cubierta proteica son visibles.
Figura 5.5. Morfologa fologa de un virus helicoidal con envuelta, (a) Diagrama de un virus helicoidal con envuelta. (b) Fotografa al microscopio electrnico del virus de la gripe (119.000x). Ntese el halo de espculas que se proyectan hacia fuera desde la superficie externa de cada envuelta.
151
Cap. 5. Virus
Figura 5.6. Morfologa de un virus polidrico (icosadrico) con envuelta, (a) Diagrama de un virus polidrico con envuelta. (b) Fotografa al microscopio electrnico de un grupo de virus herpes simplex (48,000x). En la a parte inferior derecha se puede observar un virus que est adquiriendo su envuelta, mediante gemacin, al atravesar la membrana nuclear de la clula hospedadora.
5.5
Clasificacin de los virus Como se ha mencionado anteriormente, por cuestiones prcticas los virus se han clasificado como virus animales, virus bacterianos y virus de plantas, teniendo en cuenta el rango de hospedadores a los que pueden infectar. Esta clasificacin es conveniente pero ero no es aceptable
cientficamente. En el viejo sistema los virus animales eran clasificados teniendo en cuenta los rganos que afectaban y en los cuales producan la enfermedad. Era una clasificacin basada en la sintomatologa
152
Cap. 5. Virus
Figura 5.7. Morfologa de virus complejos, (a) Fotografa al microscopio electrnico del virus vacunal, una cepa de poxvirus utilizada para la vacunacin humana contra la viruela (42.000x}. (b) Diagrama de un bacterifago T-par T (HO.OOOx). (c) Bacterifago T4 (HO.OOOx).
153
Cap. 5. Virus
Tabla 5.1. Clasificacin de los virus de animales segn la replicacin del cido nucleico
Tamao de la cpsida (dimetro en nm) 18-25
Tipo de cido nucleico
Grupo y ejemplos
Morfologa
Caractersticas clnicas o especiales
DNA Parvovirus monocatenario (adeno asociados)
Polidricos desnudos
Virus muy pequeos; la mayora requiere coinfectar con adenovirus para su crecimiento; probablemente infectan slo ratas, ratones y hmsters. Virus pequeos, inductores de tumores; el virus de las verrugas de humanos (papiloma) y algunos virus que producen cncer en animales (polioma y de simios) pertenecen a esta familia. Virus de tamao mediano que producen diversas infecciones respiratorias en humanos; algunos producen tumores en animales. Virus de tamao mediano que causan diversas enfermedades en humanos como las calenturas, varicela, zster y mononucleosis infecciosa, e implicados en un tipo de cncer denominado linfoma de Burkitt. Virus bastante grandes, complejos, con forma de ladrillo, productores de enfermedades como la viruela humana, molluscum contagiosum (lesin de la piel de tipo verruga) y viruela bovina; el virus vacunal confiere inmunidad frente a la viruela. Los virus con RNA ms pequeos; se conocen al menos70 enterovirus humanos, incluidos polio-, coxsackie- yechovirus; existen ms de 100rinovirus que constituyen la causa ms comn de los catarros. Estn incluidos muchos virus transmitidos por artrpodos; producen enfermedades como la encefalomielitis equina oriental, la encefalomielitis equina venezolana, la encefalomielitis de St. Louis, la fiebre amarilla y el dengue.
DNA bicatenario
Papovavirus (papiloma, polioma y de simios)
Polidricos desnudos
40-57
Adenovirus
Polidricos desnudos
70-80
Herpes virus Polidricos (herpes simplex, con herpes zster) envuelta
150-250
Poxvirus (viruela Complejos humana, viruela con bovina, vacunal) envuelta
200-350
RNA Picornavirus monocatenario (poliovirus, depolaridad + rinovirus, virus de la hepatitis A)
Polidricos desnudos
18-38
Togavirus (arbovirus, alfavirus, fiavivirus)
Polidricos con envuelta
40-60
154
Cap. 5. Virus
Tamao de la cpsida (dimetro en nm) 80-200
Tipo de cido nucleico
Grupo y ejemplos
Morfologa
Caractersticas clnicas o especiales
RNA monocatenario de polaridad
Ortomixovirus (gripe A, B y C)
Helicoidale s con envuelta
Virus de tamao mediano con envuelta con espculas; tienen la capacidad de aglutinar glbulos rojos; producen gripe. Morfolgicamente similares a los ortomixovirus pero ms grandes en general; producen parainfluenza, sarampin y parotiditis.
Paramixovirus (sarampin, parotiditis o paperas) Coronavirus
150-300
Helicoidale s con envuelta Helicoidale s con envuelta
80-130
Asociados con infecciones del tracto respiratorio superior y con el catarro comn. Virus en forma de bala, con envuelta con espculas; producen la rabia y la enfermedad de Newcastle de los pollos. Virus con RNA que contienen grnulos; algunos de sus miembros producen infecciones vricas lentas. Implicados en infecciones respiratorias leves y en gastroenteritis infantil; producen la fiebre de las garrapatas de Colorado. Incluyen todos los virus oncognicos con RNA; contienen un dmero de RNA monocatenario con polaridad positiva; producen leucemia y tumores en animales, y SIDA. . Virus con DNA bicatenario parcial; producen hepatitis y tumores hepticos.
Rabdovirus (rabia)
70-180
Arenavirus (lassa)
Helicoidale s con envuelta Polidricos desnudos
50-300
RNA bicatenario
Reovirus
60-80
Con transcripcin inversa
Retrovirus
100-120
Hepatitis B
Polidricos con envuelta
42
5.6
Multiplicacin vrica El cido nucleico de un virin contiene solamente unos pocos genes necesarios para la sntesis de nuevos virus. Entre stos se incluyen genes que codifican para los componentes estructurales del virin, tales como protenas de la cpsida y
155
Cap. 5. Virus
genes que codifican para enzimas que son necesarias para que se complete el ciclo vital del virus. La mayora de las enzimas vricas (o enzimas especficas del virus), esto es las enzimas que vienen codificadas en el cido nucleico vrico, no forman parte del virin. Son sintetizadas y llevan a cabo su funcin solamente cuando el virus est en el interior de la clula hospedadora y luego no se engloban en la partcula vrica. Para que un virus pueda multiplicarse debe invadir a una clula hospedadora y apropiarse de la maquinaria metablica de sta. Un solo virus puede producir varios cientos, o incluso miles, de virus similares en una sola clula. Este proceso cambia drsticamente el metabolismo de la clula
hospedadora y generalmente causa la muerte de sta. 5.6.1 Multiplicacin de los bacteirfagos Aunque los mtodos que un virus utiliza para entrar y salir de una clula hospedadora varan, los
mecanismos bsicos de la multiplicacin vrica son similares tanto para virus animales como de plantas y bacterifagos que tambin se denominan simplemente fagos. Empezaremos por describir la multiplicacin de los bacterifagos T-pares en su hospedador, E. coli. Bacterifagos T-pares Los bacterifagos T-pares son viriones grandes, complejos y desnudos, cuya caracterstica estructura de cabeza y cola se muestra en la figura 12-14-. La cantidad de DNA contenida en estos bacterifagos es solamente
156
Cap. 5. Virus
el 6% de la que contiene E, coli. El bacterifago tiene suficiente DNA para alrededor de 100 genes. El ciclo de multiplicacin de estos fagos, como el de todos los virus, puede ser dividido en diferentes etapas, que seran: adsorcin, penetracin, biosntesis de los componentes virales, maduracin y liberacin. a) Adsorcin del fago a la clula hospedadora. Despus de una colisin casual entre las partculas del fago y la bacteria ocurre la adsorcin. Durante este proceso algunos sitios especficos (ligandos) del virus se asocian que a los en receptores la clula
complementarios
existen
bacteriana. Esta asociacin es producto de una interaccin qumica en la cual se forman enlaces dbiles entre los receptores y los ligandos con los que stos reaccionan. Los bacterifagos T-pares usan las fibras del final de la cola para llevar a cabo la adsorcin. El receptor suele ser una estructura de la pared celular de la bacteria. Otros fagos se adsorben a flagelos o a fimbrias. b) Penetracin. Despus de la adsorcin los
bacterifagos T-pares inyectan su DNA (cido nucleico) dentro de la bacteria. Para llevar a cabo este proceso la cola del bacterifago libera una enzima, denominada lisozima del fago, que produce la ruptura de una pequea zona de la
157
Cap. 5. Virus
pared celular de la bacteria. Durante el proceso de penetracin la vaina de la cola del fago se contrae y la parte interna de la cola es empujada a travs de la pared hacia el interior de la clula bacteriana. Cuando la parte final de la parte interna de la cola alcanza la membrana plasmtica el DNA del bacterifago sale de la cabeza de ste y pasa a travs de la parte interna de la cola y a travs de la membrana plasmtica y entra en la clula
bacteriana. La cpsida de la mayora de los bacterifagos permanece en el exterior de la clula bacteriana. c) Biosntesis de los componentes vricos. Una vez que el DNA de los bacterifagos ha alcanzado el citoplasma de la clula hospedadora empieza a tener lugar la biosntesis de los cidos nucleicos y de las protenas. Inicialmente el fago utiliza los nucletidos de la clula hospedadora y sus enzimas para sintetizar muchas copias de DNA fgico. Despus de esto, enseguida comienza la biosntesis de las protenas vricas. d) Maduracin .La siguiente secuencia de
acontecimientos que ocurre, despus de los anteriormente mencionados, es la maduracin. En este proceso el DNA fgico y las protenas de la cpsida son ensambladas para formar los viriones
158
Cap. 5. Virus
completos. El proceso de ensamblaje est regido por los productos de ciertos s genes vricos en un proceso que se lleva a cabo paso por paso. Las cabezas y las colas de los fagos se organizan por separado, a partir de sus subunidades proteicas. La cabeza se organiza alrededor del DNA y despus la cola se asocia a sta. (Para muchos de los virus ms simples las protenas de la cpsida se ensamblan alrededor del cido nucleico de una manera espontnea para formar los viriones, sin la necesidad de la intervencin de los productos de otros genes vricos).
Figura 5.8. Ciclo lisognico del bacterigrafo en E. coli
e)
Liberacin El estadio final de la multiplicacin vrica es la liberacin de los viriones, las partculas vricas. Por liberacin entendemos la salida de las
159
Cap. 5. Virus
partculas vricas totalmente formadas a partir de la clula hospedadora. El trmino lisis es
generalmente usado para este estadio en la multiplicacin de los bacterifagos T-pares dado que en este caso la membrana plasmtica realmente se rompe (se lisa). En el interior de la clula se sintetiza una enzima denominada
lisozima, que est codificada por el genoma del fago. Esta enzima causa la rotura de la pared celular de la bacteria y los bacterifagos recin producidos se liberan as al exterior. La liberacin de bacterifagos produce la infeccin de otras clulas susceptibles que se encuentren en el rea y el ciclo de multiplicacin vrica empieza de nuevo en estas clulas, Lisogenia La secuencia de acontecimientos que acabamos de describir para la multiplicacin de los bacterifagos Tpares implica que la infeccin del virus provoca la lisis de la clula y, por lo tanto, la muerte de sta. Esta secuencia de acontecimientos se denomina ciclo ltico. Algunos fagos pueden producir indistintamente bien ciclo ltico o, por el contrario, incorporar su DNA en el interior del DNA de la bacteria hospedadora. En este ltimo caso el fago permanece latente y no causa la lisis de la bacteria hospedadora. Este estadio de latencia del fago se denomina lisogenia y los fagos con tal capacidad se denominan fagos lisognicos o
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Cap. 5. Virus
fagos atemperados. Las clulas bacterianas que sufren el proceso de lisogenia se conocen como clulas lisognicas. 5.6.2 Caractersticas generales de la replicacin vrica La esencia de la replicacin vrica puede ser definida de manera simple: el virus debe inducir a la clula hospeda-dora a sintetizar todos los componentes necesarios para fabricar ms virus. Estos componentes deben luego ser ensamblados en la estructura
apropiada, y los nuevos viriones deben escapar de la clula para infectar otras clulas. Las diferentes fases de este proceso de replicacin en el caso de un bacterifago pueden ser resumidas en cinco etapas 1. Unin o fijacin (adsorcin) del virus a una clula hospedadora susceptible. 2. Penetracin (inyeccin) del virin o de su cido nucleico en la clula. 3. Sntesis de cido nucleico y protena; tiene lugar desde el comienzo hasta el final de la infeccin. Al principio, el virus redirige el metabolismo celular hacia la sntesis de cido nucleico y protenas vricas. Ms tarde, se sintetizan protenas
estructurales que son componentes de la cubierta vrica. 4. Ensamblaje de las subunidades estructurales (y
161
Cap. 5. Virus
componentes de membrana en virus envueltos) y empaquetamiento del cido nucleico para originar nuevas partculas vricas. 5. Liberacin de los viriones maduros de la clula.
Figura 5.9. Ciclo replicativo de un virus bacteriano. Se indican las etapas Generales de la replicacin del virus.
162
Cap. 5. Virus
5.6.3 Etapas en penetracin a)
la multiplicacin
vrica:
fijacin
Fijacin La interaccin entre el virus y el hospedador se caracteriza por su alta especificidad. En general, esta especificidad se manifiesta a nivel del proceso de unin. La partcula del virus (desnudo o envuelto) tiene una o ms protenas de superficie que interaccionan con componentes especficos de la superficie de la clula. Los receptores de la superficie de la clula llamados receptores. En ausencia del receptor, el virus no puede adsorberse, y en consecuencia no puede
infectar. Si el receptor se altera, el hospedador puede hacerse resistente a la infeccin b) Penetracin La unin de un virus a la clula origina cambios en el virus y/o en la clula que tienen lugar en la penetracin. Los virus deben replicarse dentro de las clulas, y, por tanto, como mnimo el genoma vrico debe entrar en su interior. Una clula que permite la multiplicacin de un virus se denomina permisiva para ese virus.
163
Cap. 5. Virus
(a)
(b)
(c)
(d)
Capa de lipopolisacrido (membrana externa) Pepidoglucano Membrana citoplsmica
Figura 5.10 Fijacin de la partcula del bacterifago T4 a la pared celular de Escherichia coli e inyeccin del DNA. (a) Partcula no fijada, (b) Fijacin a la pared por fibras de la cola interaccionando con el polisacrido. (c) Contacto entre la pared celular y las espculas de la cola, (d) Contraccin de la vaina de la cola e inyeccin del DNA. Para una descripcin detallada da de la pared celular de Gram negativa.
Diferentes virus tienen diferentes estrategias de penetracin. En el caso de algunos virus de animales, el virus envuelto es decpsidado en la membrana plasmtica, pero en muchos otros el virin entero entra en la clula por endocitosis. En tales casos, el virus debe ser posteriormente decapsidado (parcial o totalmente) para que el genoma tenga acceso a la clula y pueda replicarse. A veces, esta decapsidacin tiene
164
Cap. 5. Virus
lugar en el citoplasma mientras que en otras se produce en la membrana nuclear. 5.6.4 Generalidades de los virus de animales a) Diferencias entre procariotas y eucariotas que afectan a la multiplicacin vrica En el caso de muchos bacterifagos, slo el genoma y una o dos protenas alcanzan el citoplasma. En el de los virus animales, sin embargo, el virin entero, u al menos la nucleocpsida, suele penetrar en el citoplasma por endocitosis, y una vez, all debe ser decpsidado. b) Clasificacin de los virus de animales Hay muchas ms clases de virus animales envueltos que virus bacterianos envueltos. Sin duda, esto se debe a las diferencias en la superficie de las clulas hospedadoras. La mayora de los virus de animales que han sido estudiados en detalle son los que han podido ser cultivados en cultivos celulares. Los virus de anmales se clasifican segn los mismos esquemas que los virus bacterianos, como ocurre en el Sistema de Clasificacin de Baltimore, que clasifica los virus sobre la base de los tipos de genomas y las estrategias replicativas.
165
Cap. 5. Virus
c) Consecuencias de la infeccin en las clulas animales Los virus pueden tener efectos variados en las clulas. La infeccin ltica ocasiona la destruccin de la clula hospedadora. Sin embargo, la infeccin vrica puede ir seguida de otros efectos posibles. En el caso de los virus envueltos, la liberacin de los viriones, que ocurre por una especie de gemacin, puede ser lenta y la clula hospedadora puede permanecer sin Usarse, esto es, viva, v continuar produciendo virus durante un largo periodo de tiempo. Tales infecciones se denominan infecciones persistentes. Los virus pueden causar tambin una infeccin latente en un hospedador. En una infeccin latente, hay un retraso entre la infeccin por el virus y la aparicin de los sntomas. Las ampollas febriles (herpes labial), causados por el virus herpes simplex, son el resultado de una infeccin vrica latente; los sntomas reaparecen espordicamente tan pronto como el virus emerge de la latencia. El estado latente en la infeccin vrica de una clula animal, no se debe generalmente a la integracin del genoma vrico en el genoma de la clula animal, como es el caso de las infecciones latentes por virus temperados.
166
Cap. 5. Virus
Virus con DNA
Virus con RNA
Figura 5.11. Formas y tamaos relativos de los principales grupos taxonmicos de los virus de vertebrados. El genoma de los hepadnavirus tiene una cadena de DNA y parte de su complementaria.
5.6.5 Retrovirus Los retrovirus contienen un genoma de RNA en el virin pero se replican
:
travs
de
un
DNA
intermediario. El trmino retro signific ignific hacia atrs, y el nombre de este tipo de virus deriva del hecho de que parecen transferir la informacin hacia atrs, desde el RNA al DNA. Estos virus usan la enzima transcriptasa reversa para llevar a cabo esta interesante
transferencia de informacin. Los retrovirus son interesantes por muchas razones; Por ejemplo, fueron los primeros virus en los que se del mostr la capacidad de causar cncer y se han estudiado ms s extensamente por sus caractersticas carcinognicas. Tambin, un retrovirus, el virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) causa el sndrome de
167
Cap. 5. Virus
la Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). Adems, el genoma de los retrovirus puede integrarse en el de la clula hospedadora a travs del DNA intermediario, y este proceso de integracin est siendo estudiado como un medio de introducir genes extraos en un hospedador, un proceso denominado terapia gnica. Algunas propiedades de los retrovirus se asemejan a las de los virus RNA y otras a las de los virus DNA. Los retrovirus recuerdan en gran medida a elementos genticos mviles y se consideran a menudo como elementos transponibles escapados de las clulas Los retrovirus son virus envueltos. Poseen varias protenas en la cubierta y siete protenas internas tpicas, cuatro de las cuales son estructurales y tres enzimticas. Las actividades enzimticas que se encuentran en la partcula del virus son la transcriptasa reversa, una endonucleasa de DNA (integrasa) y una proteasa. El virin tambin contiene molculas
especficas de tRNA celular que se usan en la replicacin. a) Viroides Los viroides son pequeas molculas de RNA monocatonario circular que constituyen los
patgenos ms pequeos conocidos.
168
Cap. 5. Virus
Los viroides causan un nmero de enfermedades importantes para las cosechas. La forma extracelular de un viroide es el RNA desnudo, sin cpsida de ningn tipo. Resulta ms interesante aunque la molcula de RNA que no contiene genes que codifican para protenas, y, por tanto, el viroide es totalmente dependiente de la funcin del hospeda do rapara su replicacin. Los viroides se consideran a veces intrones fugados y como los intrones que se autoprocesan, parecen ser reliquias de un mundo de RNA. Priones Los priones representan el extremo opuesto a los viroides. Tienen una forma extracelular distintiva, pero esta forma extracelular parece por estar
constituida
exclusivamente
protena.
Aparentemente, no contiene cido nucleico, o, si lo tiene, la molcula no es lo suficientemente larga para codificar el nico tipo de protena presente en el prin. Sin embargo, la partcula proteica del prin es infecciosa, y se conocen varios priones que causan una variedad de enfermedades en animales, tales como el prurito lumbar de las ovejas scrapie, la encefalopata espongiforme bovina en el ganado vacuno (BSE o enfermedad de las vacas locas) Adems de serias enfermedades, la infeccin del prin origina la produccin de ms copias de la protena, del prin.
169
Cap. 5. Virus
170
Cap. 6. Crecimiento Microbiano
Captulo Crecimiento Microbiano
171
172
CAPITULO 6 CRECIMIENTO MICROBIANO 6.1 Introduccin Cuando hablamos de crecimiento microbiano nos referimos en realidad al nmero de clulas, no a su tamao. Los microbios que crecen estn aumentando de nmero y forman acumulas de cientos de microorganismos, colonias de cientos de miles o poblaciones de miles de millones. En general, no nos referimos al tamao de una clula individual ya que no vara mucho durante su vida en la mayora de los casos. As la masa total de una poblacin bacteriana suele ser aproximadamente proporcional al nmero de clulas; la tasa de incremento de la masa de una poblacin es
frecuentemente una medida de su velocidad de reproduccin. Conociendo las condiciones necesarias para el crecimiento microbiano podremos predecir la rapidez con que crecern los microorganismos en distintas situaciones y determinar cmo controlar su crecimiento. Las poblaciones microbianas pueden hacerse muy grandes en un tiempo muy corto y su crecimiento incontrolado puede producir serias enfermedades o deteriorar los alimentos. 6.2 Requerimientos para el crecimiento microbiano Los requerimientos para el crecimiento microbiano pueden dividirse en dos categoras: fsicos y qumicos. Los aspectos fsicos incluyen la temperatura, el pH y la presin osmtica. Son requerimientos qumicos el agua, las fuentes de carbono y nitrgeno, las sustancias minerales, el oxgeno y los factores
173
orgnicos de crecimiento. 6.2.1 Requerimientos fsicos a) Temperatura Los microorganismos se dividen en tres grupos de acuerdo con su margen ptimo de temperatura. Son los sicrfilos (microbios adaptados a bajas
temperaturas), los mesfilos (microbios adaptados a temperaturas moderadas) y termfilos (microbios adaptados a altas temperaturas). La mayora de las bacterias crecen slo dentro de un margen limitado de temperaturas y sus temperaturas tolerables mxima y mnima distan unos 30 C. Crecen difcilmente a ciertas temperaturas dentro de este intervalo y bien a otras. El crecimiento de cada especie bacteriana presenta unas temperaturas mnima, mxima y ptima. La temperatura mnima de crecimiento es la temperatura ms baja a la cual la especie puede crecer. La temperatura ptima de crecimiento es aqulla a la que la especie crece mejor. La temperatura mxima de crecimiento es la mayor temperatura a la que el crecimiento es posible. Un grupo comn de sicrfilos, causante a menudo de problemas, crece a temperaturas de
refrigeracin, o incluso por debajo de 0 C, pero puede tambin crecer a temperaturas superiores a los 20C. No obstante pocos de ellos crecen bien en
174
temperaturas superiores a los 30 C y su temperatura ptima de crecimiento tiende e a ser relativamente baja (frecuentemente por encima de los diez o por
Termfilos
Tasa de crecimiento
Mesfilos Sicrfilos
debajo de los veinte). Se ha propuesto llamar sicrtrofos a estos microorganismos y es corriente utilizar este trmino para describir a las bacterias capaces de crecer a temperaturas normales del frigorfico (4 C). Algunos aplican el trmino de sicrfilo a ambos tipos de microorganismos: los que crecen mejor entre 15 y 20 C y aqullos cuyo intervalo de crecimiento se sita entre 0 y 30 C. Los mesfilos, con una temperatura de crecimiento ptima entre 25 y 40 0 C, representan el tipo de microbio crobio ms comn. Los microorganismos que se han adaptado a vivir en el cuerpo de animales superiores suelen tener una temperatura ptima cercana a la de su husped. La temperatura ptima para la mayora de las bacterias patognicas es de
175
alrededor de 37 C y los incubadores para el cultivo de muestras clnicas estn normalmente ajustados a esta temperatura. Los mesflos incluyen la mayora de los microorganismos causantes de enfermedad y del deterioro de alimentos. Un grupo muy interesante de microorganismos son los termfilos, capaces de crecer a altas temperaturas. La mayora de estos
microorganismos tienen una temperatura de crecimiento ptima entre 50 y 60 C b) pH El pH se refiere a la acidez o alcalinidad de una solucin. La mayor parte de las bacterias crecen mejor en un estrecho margen de pH cercano a la neutralidad, entre 6,5 y 7,5. Muy pocas bacterias crecen a pH cido inferior a 4,0. Esta es la razn por la que una serie de alimentos, como el chucrut, los pepinillos y muchos quesos, se conservan gracias a los cidos producidos por la fermentacin bacteriana. No obstante, algunas bacterias, las acidfilas, son notablemente tolerantes a la acidez. Una bacteria autotrfica, que se encuentra en las aguas de drenaje de las minas de carbn y que oxida azufre para dar cido sulfrico, puede sobrevivir a un pH de 1. Los mohos y las levaduras crecen dentro de un intervalo de pH mayor que las bacterias, pero el
176
pH ptimo de los mohos y levaduras suele ser inferior al de las bacterias, habitualmente entre 5 y 6. La alcalinidad tambin inhibe el crecimiento microbiano pero raramente se utiliza para
conservar los alimentos. c) Presin osmtica Los microbios obtienen casi todos sus nutrientes disueltos en el agua que los rodea. Por lo tanto necesitan agua para su crecimiento y de hecho estn formados por un 80 a 90% de agua. Las presiones osmticas elevadas producen un
efecto de eliminacin del agua necesaria para la clula. Cuando una clula microbiana est en una solucin cuya concentracin de solutos es mayor que la de la clula (es hipertnica) el agua intracelular sale a travs de la membrana citoplasmtica hacia la zona de mayor
concentracin salina. La prdida osmtica de agua produce
plasmlisis. Lo que resulta ms importante de este fenmeno es que el crecimiento de la clula se inhibe a medida que la membrana
citoplasmtica se aleja de la pared celular. As la adicin de sales (u otros solutos) a una solucin y el aumento resultante de la presin osmtica puede servir para conservar los alimentos. El pescado salado, la miel y la leche condensada
177
azucarada se mantienen durante largo tiempo por este mtodo; las altas concentraciones de sal o azcar extraen el agua de cualquier clula microbiana que se encuentre presente evitando as su crecimiento. Ms frecuentes son los halfilos facultativos, que no necesitan altas concentraciones salinas pero que son capaces de crecer en concentraciones de sal de ms del 2%, concentracin que inhibe el crecimiento de muchas otras bacterias. Unas pocas especies de halfilos facultativos pueden tolerar incluso un 15 %de sal S la presin osmtica es anormalmente baja (hipotnica), como ocurre con el agua destilada, el agua tiende a entrar en la clula en vez de salir. 6.2.2 Requerimientos qumicos a) Carbono Adems del agua uno de los requerimientos ms importantes para el crecimiento microbiano es una fuente de carbono. El carbono es la estructura bsica de la materia viva y es necesario para todos los compuestos orgnicos que constituyen la clula viva. La mitad del peso seco de una bacteria tpica es
178
carbono. Los quimiohetertrofos obtienen la mayora de su carbono a partir de la fuente de energa, es decir, de compuestos de orgnicos carbono y como protenas, Los
hidratos
lpidos.
quimioauttrofos y los fotoauttrofos obtienen su carbono del dixido de carbono. b) Nitrgeno, azufre y fsforo Adems del carbono los microbios necesitan otros elementos importantes para la sntesis de su material celular. Por ejemplo, la sntesis de protenas requiere cantidades considerables de nitrgeno, as como de azufre. La sntesis de DNA y RNA tambin requiere nitrgeno y algo de fsforo y lo mismo ocurre con la sntesis de ATP, una molcula tan importante para el
almacenamiento qumica dentro
y transferencia de de la clula.
energa
En conjunto
nitrgeno, azufre y fsforo constituyen alrededor del 18 %del peso seco de la clula; de esta cantidad el 15% es nitrgeno. El nitrgeno se utiliza principalmente para formar el grupo amino de los aminocidos de las protenas. necesidad Muchas bacterias material cubren esta y
degradando
proteico
reincorporando los aminocidos a protenas de nueva sntesis y a otros compuestos que

179
contienen nitrgeno. Otras bacterias utilizan el nitrgeno de los iones amonio (NH41"), que est ya en su forma reducida y que se encuentra normalmente en el material orgnico celular. An hay otras bacterias capaces de extraer nitrgeno de los nitratos (compuestos que se disocian en solucin liberando el ion nitrato, NO3-). Algunas bacterias importantes, incluidas las cianobacterias (algas verde-azuladas), utilizan el nitrgeno gaseoso (N2) directamente de la atmsfera. El proceso por el cual absorben N2 se conoce como fijacin de nitrgeno. Las bacterias simbiticasTijadoras de nitrgeno ms importantes pertenecen a los gneros Rhizobium y Bradyrhizobium y se asocian a legumbres tales como trbol, soja, judas y guisantes. El nitrgeno fijado en la simbiosis es utilizado tanto por la planta como por la bacteria. El azufre se utiliza para sintetizar aminocidos y vitaminas, como tiamina y biotina, que contienen este elemento. El fsforo es esencial para sintetizar cidos nucleicos y los fosfolpidos de las membranas celulares. Entre otros lugares se encuentra formando los enlaces de alta energa del ATP.
180
c)
Oligoelementos Los microbios requieren cantidades muy
pequeas de otros elementos minerales, como hierro, cobre, molibdeno y cinc; a stos se les denomina Oligoelementos. La mayora son esenciales para la actividad de determinados enzimas actuando normalmente como
cofactores. Aunque estos elementos se aaden a veces a los medios de laboratorio se asume normalmente que estn presentes en el agua corriente o en otros componentes del medio. Incluso el agua mejor destilada pero agua a contiene veces se para
cantidades especifica
suficientes, el uso de
corriente
asegurarse que estos oligoelementos estn presentes en el medio de cultivo. d) Oxgeno Los microbios que utilizan oxgeno molecular, los llamados aerobios, producen ms energa a partir de los nutrientes que los microbios que no lo emplean. Los organismos que precisan
oxgeno para vivir se denominan aerobios obligados. Los aerobios obligados tienen una desventaja porque el oxgeno es poco soluble en agua y gran parte del medio ambiente es pobre en l. Por consiguiente la mayora de las bacterias han
181
desarrollado, o conservado, la capacidad de continuar su crecimiento en ausencia de oxgeno. Tales organismos, incluyendo algunos de los que existen en el tracto intestinal, se llaman
anaerobios facultativos. En otras palabras, los anaerobios facultativos pueden utilizar oxgeno cuando est presente pero son capaces de seguir creciendo utilizando la fermentacin o la respiracin anaerbica cuando el oxgeno no est a su alcance. Sin embargo, su eficiencia en la produccin de energa disminuye en ausencia de oxgeno. Ejemplos de anaerobios facultativos incluyen al conocido Escherichia coli ya muchas levaduras. Los anaerobios obligados, son bacterias que no pueden utilizar oxgeno molecular en las reacciones que producen energa. De hecho el oxgeno es daino para la mayora de ellas. Comprender cmo un organismo puede ser daado por el oxgeno requiere una breve exposicin de las distintas formas txicas de este elemento. Son las siguientes: 1. El oxgeno singlete es el oxgeno molecular normal (O2) que ha pasado a un estado de alta energa y es extremadamente reactivo. Se suele formar por la accin de la luz visible. Est presente en clulas fagocitarias, donde juega un papel en la destruccin de
182
clulas extraas una vez que han sido ingeridas por los fagocitos. 2. Los radicales libres superxido (O2 ) se producen en cantidades pequeas durante la respiracin normal de los organismos que utilizan oxgeno como aceptor final de electrones, formando agua. En presencia de oxgeno los anaerobios obligados, como las bacterias del gnero Clostridium, tambin forman algunos radicales libres superxido. Estos radicales son tan txicos para los componentes organismos celulares que que todos crecer los en
-
pretenden
presencia de oxgeno atmosfrico deben sintetizar una enzima la superxido
dismutasa, para neutralizarlos. La toxicidad se debe a que los radicales carecen de un electrn y lo toman con avidez de las molculas vecinas, que a su vez se convierten en radicales, y as
sucesivamente. A menos que se detenga rpidamente esta reaccin en cadena la clula puede resultar gravemente daada. Las bacterias aerbicas, las anaerobias facultativas que, crecen aerbicamente y anaerobias comentarn aerotolerantes ms tarde) (que se esta
producen
enzima. Mediante la superxido dismutasa transforman los radicales libres superxido

183
en oxgeno molecular (O2) y perxido de hidrgeno (H2O2): O2 + O2 +2H

+
H2O2 + O2
El H2O2 se convierte inmediatamente en oxgeno y agua por mediacin de otra enzima, la catalasa: 2H2O2 2H2O+ O2
La catalasa se detecta fcilmente por su accin sobre el perxido de hidrgeno. Cuando se aade una gota de agua oxigenada a una suspensin de clulas bacterianas liberan que producen de ese catalasa Se se dice es
burbujas que
oxgeno.
entonces
microorganismo que
catalasa-positivo.
Cualquiera
utilice
agua oxigenada para desinfectar una herida se dar cuenta de que las clulas del tejido humano tambin poseen catalasa. La
actividad de estas dos enzimas, catalasa y superxido dismutasa, neutraliza formas txicas del oxgeno, lo que permite que las clulas crezcan mientras utilizan oxgeno como aceptor final de electrones. Otra enzima que destruye el perxido de
hidrgeno es la peroxidasa; se diferencia de la catalasa en que no libera oxgeno en la reaccin: H2O2 + 2H

184
+
2H2O
3.
El ion perxido (O ) es otra forma txica de oxgeno que se genera probablemente en pequeas cantidades durante la respiracin normal. Se conoce mejor como principio activo de los de agentes antimicrobianos y perxido de
2-
perxido benzoilo. 4.
hidrgeno
El radical libre hidroxilo (OH ) es otro compuesto intermediario del oxgeno y
probablemente el ms reactivo. Se forma en el citoplasma de la clula por efecto de radiaciones ionizantes. Tambin se produce en la reaccin entre los radicales libres superxido y perxido, de modo que en la mayora de las respiraciones aerbicas se forman algunos radicales hidroxilo. Los anaerobios estrictos, como la mayora de los miembros del gnero Clostridium, no producen ni superxido dismutasa ni
catalasa. Por lo tanto son muy sensibles al oxgeno ya que las condiciones aerbicas conducen probablemente a la acumulacin de radicales libres superxido en el
citoplasma de la clula. La capacidad de formar endosporas ha ayudado
probablemente a la supervivencia de estas bacterias sensibles al oxgeno.
185
Los anaerobios aerotolerantes no pueden utilizar el oxgeno en su metabolismo pero lo toleran bastante bien. Crecen en la
superficie de medio slido sin necesidad de las tcnicas especiales que requiere el cultivo de anaerobios estrictos. e) Factores orgnicos de crecimiento Los factores orgnicos de crecimiento son compuestos organismo orgnicos es incapaz esenciales de que el
sintetizar;
debe
obtenerlos directamente del medio ambiente. Un grupo de estos factores necesarios para los seres humanos son las vitaminas. La mayora de las vitaminas funcionan como coenzimas, los complementos requeridos para la funcin de ciertas enzimas. Muchas bacterias pueden
sintetizar todas sus propias vitaminas y no dependen de fuentes externas. Sin embargo, algunas bacterias carecen de las enzimas necesarias para la sntesis de ciertas vitaminas y para ellas son factores orgnicos de crecimiento. Otros factores de crecimiento requeridos por algunas bacterias son aminocidos, purinas y pirimidinas. 6.3 Medios de cultivo Las sustancias nutritivas preparadas en el laboratorio para el crecimiento de microorganismos se conocen como medio de
186
cultivo. Algunas bacterias pueden crecen satisfactoriamente en casi cualquier medio de cultivo, otras necesitan medios especiales y an hay algunas que no pueden crecer en ninguno de los medios inertes desarrollados hasta ahora. Los microbios que crecen y se multiplican dentro o sobre un medio de cultivo constituyen lo que se denomina cultivo microbiano. Qu condiciones debe reunir el medio de cultivo? En primer lugar debe contener los nutrientes adecuados para el microorganismo que queremos hacer crecer. Tambin debera contener una suficiente humedad y oxgeno y un pH correctamente ajustado. Para que el cultivo contenga solamente los microorganismos que aadamos al medio (y su descendencia) el medio debe estar inicialmente estril; esto quiere decir que originalmente no debe contener ningn microorganismo vivo. Finalmente el cultivo en crecimiento debe ser incubado a la temperatura adecuada. Cuando se desea cultivar bacterias en un medio slido se aade un agente solidificante al medio, como el agar. El agar es un polisacrido complejo que procede de una alga marina y que se ha utilizado mucho tiempo como espesante de alimentos como gelatinas, sopas y helados. El agar tiene algunas propiedades muy importantes que lo hacen valioso para la microbiologa y no se ha encontrado an ningn sustituto realmente satisfactorio. Son pocos los microbios que pueden degradar el agar, as que permanece slido. Tambin es importante el hecho de que funde aproximadamente a la temperatura de ebullicin del agua,
187
pero permanece en un estado lquido mientras la temperatura baja hasta cerca de 40 C. Para su uso en el labora torio el agar es mantenido por tanto en baos de agua a unos 50 C. Esta temperatura no afecta a la mayora de las bacterias cuando se vierte el medio sobre un inoculo bacteriano. Las suspensiones bacterianas tambin se pueden mezclar con el agar fundido en el bao de agua para conseguir una suspensin uniforme de bacterias; esta tcnica se puede utilizar para ensayos de sensibilidad a antibiticos y otros fines. Una vez que el agar se ha solidificado se puede incubar hasta temperaturas cercanas a los 100 C antes de q ue se lice; esta propiedad es particularmente til cuando se estn cultivando bacterias termfilas. Los medios con agar suelen emplearse en tubo de ensayo o en placas de Petri. Cuando se deja solidificar el medio con el tubo inclinado, para disponer de una superficie mayor para el crecimiento, se habla de agar inclinado. Cuando solidifica con el tubo vertical se llama agar (para siembra en) picadura. Las placas de Petri, que recibieron el nombre de su inventor, son cajas cilndricas planas con una tapa que sobresale sobre la parte inferior para evitar contaminaciones. 6.3.1 Medios qumicamente definidos Un medio qumicamente definido es aqul del que se conoce la composicin qumica exacta.
188
TABLA 6.1. Medio qumicamente definido para el cultivo de una bacteria quimioauttrofa capaz de usar iones amonio como fuente de energa.
Concentracin Componente (gramos/litro) Sulfato amnico [SO4(NH4)2] 0,5 Bicarbonato sdico [CO3HNa]* 0,5 Fosfato disdico [PO4HNa2] 13,5 Fosfato monopotsico [PO4H2K] 0,7 Sulfato magnsico [SO4Mg-7H2O] 0,1 Cloruro frrico [Cl3Fe 6H2O] 0,014 Cloruro clcico [Cl2Ca-2H2O] 0,18 Agua 1 litro *El CO3HNA es una fuente de dixido de carbono (la fuente de carbono) en solucin. Datos de D. Pramer y E. L. Schmidt, Experimenta Soil Microbioogy, Minneapolis, Burgess, 1964.
6.3.2 Medios complejos La mayora de las bacterias heterotrficas y los hongos se cultivan de forma rutinaria en medios complejos cuya composicin qumica exacta vara ligeramente de un lote a otro. Estos medios estn formados por nutrientes como extractos de levadura, de carne o de vegetales, o por digeridos de protenas de stas u otras fuentes. TABLA 6.2.Composicin del agar nutritivo, un medio complejo para el cultivo de bacterias hetertrofas.
Componente Peptona Extracto de carne Cloruro sdico Agar Agua
Concentracin (gramos/litro) 5,0 3,0 8,0 15,0 1 litro

189
6.3.3 Medios y mtodos para cultivos anaerbicos El cultivo de bacterias anaerbicas plantea problemas especiales. Como los anaerobios pueden morir al ser expuestos al oxgeno, se deben utilizar unos medios adecuados denominados medios reductores. Estos medios contienen ingredientes, como el tioglicolato sdico, que se combinan con el oxgeno disuelto en el medio de cultivo y lo eliminan. Para cultivar de forma rutinaria y mantener cultivos puros de anaerobios obligados los microbilogos utilizan el medio reducido almacenado en tubos normales tapados
hermticamente. ticamente. Estos medios se calientan brevemente antes de ser usados, de forma que s queda algo de oxgeno absorbido es eliminado.
Figura 6.2. . Recipiente de anaerobiosis utilizado en el cultivo de bacterias anaerbicas en placas de Petri. Cuando se aade agua al sobre que contiene bicarbonato sdico y borohidruro de sodio se forma hidrgeno y dixido de carbono. El hidrgeno y el oxgeno atmosfrico rico del recipiente reaccionan en la superficie de un catalizador de paladio, situado en una cmara enrejillada, combinndose para dar agua. De este modo se elimina el oxgeno. Hay adems un indicador de anaerobiosis en el recipiente; contiene azul de metileno, ileno, que es de color azul cuando est oxidado y que se torna incoloro al desaparecer el oxgeno. 190
Cuando el cultivo se debe realizar en placas de Petri para poder observar colonias aisladas se utilizan jarras especiales que albergan varias placas de Petri en una atmsfera exentarte oxgeno. El oxgeno se elimina por el siguiente proceso: se coloca en la jarra un sobre con compuestos qumicos (bicarbonato sdico y borohidruro sdico) al que se aaden unos mililitros de agua y se cierra hermticamente la jarra. La reaccin de los compuestos qumicos con el agua produce hidrgeno y dixido de carbono. Un catalizador de paladio combina el oxgeno presente en la jarra con el hidrgeno producido en la reaccin qumica formando agua. Como resultado el oxgeno desaparece en poco tiempo; adems el dixido de carbono producido ayuda al crecimiento de muchas bacterias anaerbicas. 6.3.4 Medios selectivos y diferenciales Los medios selectivos se utilizan para inhibir el crecimiento de bacterias no deseadas y facilitar el de las que se buscan. Por ejemplo: El agar glucosado de Sabouraud, que tiene un pH de 5,6, se usa para aislar hongos, que a este pH aventajan a las bacterias en su crecimiento. Los colorantes como el verde brillante inhiben selectivamente a las bacterias gram-positivas y este colorante es la base del medio denominado agar Verde Brillante, utilizado para el aislamiento de Salmonella. Los medios diferenciales hacen ms fcil la distincin
191
de las colonias de los microorganismos buscados de otras colonias que crecen en la misma placa. De forma similar los cultivos puros de microorganismos dan reacciones identificables en medios diferenciales en tubo o en placa. A veces se utilizan medios que son a la vez selectivos y diferenciales Otro medio que es a la vez selectivo y diferencial es el agar de MacConkey. Este medio contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el crecimiento de bacterias gram-positivas. Como tambin contiene lactosa las bacterias gram-negativas que crecen utilizando este disacrido pueden distinguirse de bacterias similares que no lo hacen. La capacidad de distinguir entre fermentadores de lactosa (colonias rojas o rosas) y no fermentadores (colonias incoloras) es til para
diferenciar entre bacterias patgenas como Salmonella de otras bacterias semejantes. 6.3.5 Medios de enriquecimiento En ocasiones las bacterias presentes en una muestra en muy pequeo nmero pueden pasar indetectadas o pueden tener caractersticas fisiolgicas inusuales. En estos casos puede ser necesario realizar un cultivo de enriquecimiento. Los medios que se emplean suelen ser lquidos y proporcionan nutrientes y condiciones ambientales que favorecen determinado el desarrollo .eme de no un son
microorganismo
192
pero
adecuados para el crecimiento de otros. 6.3.6 Obtencin de cultivos puros Las muestras de suelo, aguas o alimentos. Si se siembran estas muestras sobre la superficie de un medio slido se formarn colonias que son clones de un mismo organismo. Una colonia procede
tericamente de una sola espora o clula vegetativa, o de un grupo de microorganismos iguales unidos en acmulos o cadenas. Las colonias microbianas tienen a menudo un aspecto caracterstico que permite distinguir un microbio de otro. Desde luego las bacterias deben distribuirse sobre una superficie suficiente como para que las colonias que se forman estn visiblemente separadas unas de otras. La mayora de las tcnicas microbiolgicas requieren cultivos puros, o clones, de bacterias. El mtodo de aislamiento ms frecuentemente utilizado para
conseguir cultivos puros es el mtodo de siembra en estra: Se introduce un asa estril de siembra en un cultivo mixto que contiene ms de un tipo de microorganismo y se desliza luego sobre la superficie del medio nutriente formando estras. A medida que se dibujan las estras las bacterias pasan del asa al medio en nmero cada vez menor. Las ltimas clulas se depositan lo bastante separadas para crecer formando colonias aisladas. Las colonias pueden recogerse con un asa de siembra y transferirse a un tubo de ensayo
193
con medio nutritivo para obtener un cultivo puro formado por un solo tipo de bacteria. El aislamiento por estra funciona bien cuando el microorganismo a aislar est presente en un nmero suficiente. Sin embargo, a veces se encuentra slo en nmero muy reducido. El microorganismo del suelo capaz de utilizar fenol como nutriente es un ejemplo de este caso. Debe aumentarse antes su nmero mediante enriquecimiento antes de aislarlo por estra. TABLA 6.3.Medios de cultivo.
Tipo de medio Aplicacin
Qumicamente definido
Cultivo de quimioauttrofos, fotoauttrofos y para ensayos microbiolgicos. Para la mayora de los microorganismos quimiohetertrofos. Para anaerobios estrictos. Inhibe el crecimiento de microorganismos indeseables, favorece el de los buscados. Permite distinguir las colonias de los microorganismos buscados de las de otros. Similar a los selectivos, pero diseado para aumentar el nmero de los microorganismos buscados hasta niveles detectables.
Complejo Reductor Selectivo
Diferencial
De enriquecimiento
194
Figura 6.3. Curva de crecimiento microbiano en un sistema cerrado. Las cuatro fases de la curva de crecimiento, que se describen en el texto, estn identificadas en esta curva.
6.4
Conservacin de cultivos bacterianos Para la conservacin a corto plazo de cultivos bacterianos puede utilizarse la refrigeracin. Para mantenerlos durante largos perodos de tiempo se utilizan normalmente otros dos mtodos, la congelacin a muy bajas temperaturas
(congelacin profunda) y la liofilizacin. La congelacin profunda consiste en resuspender un cultivo puro de microbios en un medio lquido y congelarlo rpidamente a temperaturas que oscilan entre los 50 y los 95 C . Normalmente el cultivo puede descongelarse hasta varios aos ms tarde y ser utilizado. En la liofilizacin se congela rpidamente una suspensin de microbios a temperaturas de 54 a 72 C y se elimina el agua a continuacin median te un elevado vaco (sublimacin). Mientras se mantiene el vaco
195
se cierra el vial a la llama de un soplete. El residuo, con aspecto pulverulento, contiene los microbios supervivientes y puede conservarse durante aos. Los microbios pueden revivirse en cualquier momento por hidratacin con un medio nutritivo lquido apropiado. 6.5 Crecimiento Microbiano El crecimiento puede definirse como un aumento de los constituyentes celulares. Si un microorganismo es cenoctico, es decir, multinucleado, en el que las divisiones nucleares no se acompaan de divisiones celulares, el crecimiento produce un incremento de tamao, pero no del nmero de clulas. El crecimiento ocasiona un aumento del nmero de clulas cuando los microorganismos se multiplican por procesos como gemacin o fisin binaria. En el ltimo caso, las clulas individuales se agrandan y dividen para originar dos clulas hijas de un tamao aproximadamente igual. 6.5.1 Curva de crecimiento El crecimiento de una poblacin se estudia analizando la curva de crecimiento de un cultivo microbiano. Cuando los microorganismos se cultivan en un medio lquido, crecen normalmente en un cultivo discontinuo o sistema cerrado (batch culture), es decir, se incuban en un recipiente cerrado al que no se aade ms cantidad de medio que la inicial; en consecuencia, las
concentraciones de nutrientes disminuyen y las de residuos aumentan. Se puede representar el
crecimiento de los microorganismos que se multiplican

196
por fisin binaria corno el logaritmo del nmero de clulas frente al tiempo de incubacin. La curva resultante tiene cuatro fases diferentes. a) Fase de latencia Cuando se introducen microorganismos en un medio de cultivo fresco, normalmente no se produce un aumento inmediato del nmero de clulas o de masa y, por ello, este perodo se denomina fase de latencia. Aunque la divisin celular no se produce inmediatamente y no hay un incremento neto de masa, la clula est sintetizando nuevos componentes. Una fase de latencia previa al comienzo de la divisin celular puede ser necesaria por diversas razones. Las clulas pueden ser viejas y poseer una cantidad reducida de ATP, cofactores esenciales y
ribosomas; estas sustancias deben sintetizarse antes de que se inicie el crecimiento. El medio puede ser diferente al anterior donde crecan los microorganismos. En este caso, necesitar
nuevas enzimas para usar otros nutrientes. Quizs, los microorganismos hayan sido
alterados y necesiten un tiempo de recuperacin. Cualquiera que sea el motivo, finalmente, las clulas se equipan de nuevo, replican su DNA, comienzan a incrementar su masa y por ltimo, se dividen.
197
La duracin de la fase de latencia vara considerablemente segn la condicin de los microorganismos y la naturaleza del medio. Esta fase puede ser bastante larga si el inoculo procede de un cultivo viejo o de uno que haya sido refrigerado. La inoculacin de un cultivo en otro qumicamente diferente provoca tambin una fase de latencia mayor. Por otra parte, cuando se transfiere un cultivo en fase de crecimiento exponencial vigoroso a un medio nuevo de la misma composicin, la fase de latencia se acorta o no se produce. b) Fase exponencial Durante la fase exponencial o logartmica, los microorganismos crecen y se dividen hasta el nivel mximo posible, en funcin de su potencial gentico, el tipo de medio y las condiciones en que crecen. La velocidad de crecimiento es constante durante la fase exponencial; es decir, los microorganismos se dividen y duplican en nmero a intervalos regulares. Como cada clula se divide en un momento ligeramente diferente del resto, la curva de crecimiento aumenta suavemente, en lugar de realizar discretos saltos. Durante estafase, la poblacin es ms uniforme, qumica y fisiolgicamente; por ello, los cultivos en fase exponencial se utilizan normalmente en estudios bioqumicos y fisiolgicos.
198
c)
Fase estacionaria Finalmente, el crecimiento de la poblacin cesa y la curva de crecimiento se vuelve horizontal. Las bacterias llegan normalmente a esta fase
estacionaria cuando el nivel de poblacin es de aproximadamente 10 clulas por mL. Otros microorganismos no alcanzan normalmente esta densidad de poblacin; los cultivos de protozoos y algas llegan a menudo a una concentracin mxima de 10 clulas por mL. El tamao final de la poblacin depende, por supuesto, de la disponibilidad de nutrientes y otros factores, as como del tipo de microorganismo que se cultive. En la fase estacionaria el nmero total de microorganismos viables permanece constante. Este hecho puede ser resultado del equilibrio entre la divisin y la muerte de las clulas o, simplemente, que la poblacin deje de dividirse, aunque siga activa metablicamente. entran en Las fase
poblaciones
microbianas
estacionaria por varias razones. Un factor obvio es la limitacin de nutrientes; si se reduce intensamente la concentracin de un nutriente esencial, la poblacin crecer lentamente. Los organismos aerobios estn limitados a menudo por la disponibilidad de O2. El oxgeno no es muy soluble y puede reducirse tan rpidamente que slo la superficie de del O2 cultivo adecuada tenga para una el
199
concentracin
crecimiento. En este caso, las clulas situadas por debajo de la superficie no podrn crecer, salvo que el cultivo se agite o airee de otra forma. El crecimiento de una poblacin puede tambin cesar debido a la acumulacin de productos residuales txicos. Parece que este factor limita el crecimiento de muchos cultivos anaerobios (cultivos que crecen en ausencia de O2. Por ejemplo, los estreptococos pueden producir tanto cido lctico y oros cidos orgnicos a partir de la fermentacin de azcares que acidifican su medio, inhibiendo el crecimiento. Los cultivos de estreptococos pueden tambin entrar en fase estacionaria debido a la reduccin del suministro de azcar. En definitiva, un cultivo entra en fase estacionaria como consecuencia de varios
factores que actan conjuntamente. d) Fase de muerte Cambios privacin ambientales de nutrientes perjudiciales, y como de
acumulacin
residuos txicos, originan la disminucin del nmero de clulas viables, hecho que caracteriza la fase de muerte. La muerte de una poblacin microbiana, al igual que su crecimiento durante la fase exponencial, es normalmente logartmica (es decir, una cantidad constante de clulas muere cada hora). Este modelo es vlido aun cuando el nmero total de clulas permanece constante,
200
simplemente porque las clulas no se lisen despus de morir. A menudo, la nica forma de decidir si una bacteria es viable consiste en incubarla en un medio fresco; si no crece ni se multiplica, se considera que est muerta. Aunque la mayor parte de una poblacin microbiana normalmente muere en forma
logartmica, la velocidad de la mortalidad puede disminuir despus de reducirse drsticamente la poblacin. Esto se debe a la supervivencia prolongada de algunas clulas particularmente resistentes. 6.5.2 Expresin matemtica del crecimiento Durante la fase exponencial, cada microorganismo se divide a intervalos constantes. Por ello, la poblacin duplicar su nmero durante un perodo determinado de tiempo, denominado tiempo de generacin o de duplicacin. Esta situacin puede ilustrarse con un ejemplo sencillo. Supongamos que se inocula un tubo de ensayo con una clula que se divide cada 20 minutos. La poblacin ser de 2 clulas despus de 20 minutos, de 4 clulas a los 40 minutos, y as sucesivamente. Como la poblacin se duplica en cada generacin, el aumento de poblacin ser siempre de 2 , donde n es el nmero de generaciones. El aumento de poblacin resultante es exponencial o logartmico. Estas observaciones pueden expresarse en ecuaciones
201
n
para calcular el tiempo de generacin. Supongamos que N0 = nmero inicial de la poblacin N0= nmero final de clulas en un tiempo t n = nmero de generaciones en un tiempo t A partir de los resultados de la Tabla 6.1 podemos inferir que Nt = N0 x 2
n
Despejando n, nmero de generaciones, donde todos los logaritmos son de base decimal, log log log log = log 2 0.301
Tabla 6.4.Ejemplo de crecimiento exponencial Poblacin a n n Tiempo Nmero de divisiones 2 (N0x2 ) Log10Nt 0 0 0 2 =1 1 0.000 1 20 1 2 =2 2 0.301 2 40 2 2 =4 4 0.602 3 60 3 2 =8 8 0.903 4 80 4 2 =16 16 1.204 5 100 5 2 =32 32 1.505 6 120 6 2 =64 64 1.806 *El cultivo hipottico comienza con una clula con un tiempo de generacin de 20 minutos.
202
Figura 6.5. Determinacin del tiempo de generacin. El tiempo de generacin puede determinarse a partir de la curva de crecimiento microbiano. Se representan los datos de la poblacin en un papel cuadriculado semilogartmico, indicando el nmero de clulas en el eje logartmico. Luego, se lee directamente el tiempo de duplicacin del nmero de individuos de la poblacin a partir de la grfica. El logaritmo del nmero de la poblacin puede tambin representarse frente al tiempo en papel normal cuadriculado.
203
Figura 6.6. Crecimiento microbiano exponencial. Los datos de la Tabla para seis generaciones de crecimiento se han representado directamente () y en forma logartmica (-)- La curva de crecimiento es exponencial, como muestra la linealidad de la grfica logartmica.
La velocidad de crecimiento en un cultivo discontinuo puede expresarse por la constante de velocidad media del crecimiento (k). Equivale al nmero de
generaciones por unidad de tiempo, expresado a menudo corno generaciones por hora.
204
log log = 0.301
A partir de las frmulas anteriores se puede calcular el tiempo que tarda una poblacin en duplicar su nmero (n - 1), es decir, el tiempo medio de generacin o tiempo medio de duplicacin (g). Si la poblacin se duplica, entonces, Nt = 2N0 Se sustituye 2 N0en la ecuacin de velocidad media de crecimiento y se despeja k. log log log 2 + log log = 0.301 0.301
El tiempo medio de generacin es la inversa de la constante de velocidad media de crecimiento. 1
El tiempo medio de generacin (g) puede determinarse directamente a partir de una grfica semilogartmica con los datos de crecimiento y la constante de velocidad de crecimiento, a partir del valor g. El tiempo de generacin puede tambin calcularse directamente a partir de las ecuaciones anteriores. Por ejemplo, supongamos que una poblacin bacteriana aumenta de 10 a 10 clulas en 10 horas.
3 9
205
log 10 log 10 9 3 = = 2.0/ 0.30110 3.01 1 = 0.5/ 30/ 2.0./
Los tiempos de generacin cambian notablemente segn la especie microbiana y las condiciones
ambientales. Los valores varan desde menos de 10 minutos (0.17 horas) en unas pocas bacterias, hasta varios das, en algunos microorganismos eucariotas. Los tiempos de generacin en la naturaleza suelen ser ms largos que en cultivo. 6.6 Medicin del crecimiento microbiano Existen muchas formas de cuantificar el crecimiento
microbiano para determinar la velocidad del crecimiento y el tiempo de generacin. Se pueden medir tanto la masa como el nmero celular en la poblacin, porque el crecimiento origina un incremento de ambos. 6.6.1 Medicin del nmero de clulas La forma ms obvia de determinar el nmero de clulas es por recuento directo. La utilizacin de una cmara de recuento es fcil, econmica y relativamente rpida; ofrece tambin informacin acerca del tamao y la morfologa de los microorganismos. Las cmaras de Petroff-Hausser se pueden emplear para contar
bacterias; los hemocitmetros pueden utilizarse con

206
microorganismos
eucariotas.
Estos
portaobjetos
especialmente diseados tienen cmaras de una profundidad conocida, con una rejilla grabada en el fondo de la cmara. Se puede calcular el nmero de microorganismos en una muestra, a partir del volumen de la cmara y las diluciones de la muestra que sean necesarias.
Tabla 6.5. Tiempos de generacin para microorganismos seleccionados
Microorganismo Bacteria Beneckea natriegens Escherichia coli Bacillus subtilis Clostridium bolulinum Mycobacterium tuberculosis Anacystis nidulans Anabaena cylindrica Rhodospirillum rubrum Algas Chlorella pyrenoidosa Scenedesmus quadricauda Asterionella formosa Skeletonema costatum Ceratium tripos Euglena gracilis Protozoos Acanthamoeba castellanii Paramecium caudatum Tetrahymena geleii Leishmania dovonavi Giardia lamblia Hongos Saccharomyces cerevisiae Monillinia fructicola Temperatura ( C) 37 40 40 37 37 41 25 25 25 25 20 18 20 25 30 26 24 26 37 30 25 Tiempo de generacin (horas) 0.16 0.35 0.43 0.58 12 2.0 10.6 4.6-5.3 7.75 5.9 9.6 13.1 82.8 10.9 11-12 10.4 2.2-4.2 10-12 18 2 30
Esta tcnica presenta algunos inconvenientes. La poblacin microbiana tiene que ser bastante grande para que el resultado tenga precisin, debido al pequeo volumen de la muestra. Es tambin difcil o imposible distinguir entre clulas vivas y muertas en las cmaras de recuento.
207
Los
microorganismos
de
mayor
tamao,
como
protozoos, algas y levaduras no filamentosas, pueden contarse directamente con contadores electrnicos, como el contador Coulter. Este mtodo consiste en hacer pasar una suspensin microbiana por un pequeo orificio. Una corriente elctrica fluye a travs del mismo y los electrodos situados a ambos lados del orificio miden la resistencia elctrica. Cada vez que una clula microbiana atraviesa el orificio, aumenta la resistencia elctrica (o disminuye la conductividad) y se cuenta la clula. El contador Coulter ofrece resultados precisos con clulas grandes y se utiliza ampliamente en los laboratorios de los hospitales para contar eritrocitos y leucocitos. No es tan eficaz para contar bacterias debido, entre otros problemas, a la
interferencia con partculas pequeas de residuos y la formacin de filamentos.
208
Figura 6.7. Cmara de recuento de Petroff-Hausser. (a) Imagen lateral de la cmara, mostrando el cubreobjetos y el espacio entre ambos, que ocupa una suspensin bacteriana, (b) Vista superior de la cmara. La rejilla se encuentra en el centro del portaobjetos, (r) Vista aumentada de la rejilla. Se cuentan bacterias en varios cuadrados centrales, normalmente, a un aumento de 400x a 500x. El nmero medio de bacterias en estos cuadrados sirve para calcular la concentracin de clulas en la muestra original. Como hay 25 cuadrados en un rea de 1mm2, el nmero total de bacterias en 1mm2 de la cmara es la suma de las bacterias presentes en los 25 cuadrados. La cmara tiene una profundidad de 0.02 mm y por ello, bacterias / mm3 = (bacterias/cuadrado)(25 cuadrados)(50). El nmero de bacterias por cm es 10 veces este valor. Por ejemplo, supongamos que el recuento medio por cuadrado es de 28 bacterias: bacterias/cm3 = (28 bacterias)(25 cuadrados)(50)(103) = 3.5 x 107.
209
Las cmaras de recuento y los contadores electrnicos permiten contar todas las clulas, vivas o muertas. Existen tambin otras tcnicas factibles de recuento, que son procedimientos especficos para contar clulas capaces de crecer y multiplicarse. En la mayora de estos mtodos de recuento, se siembra una muestra diluida de bacterias u otros microorganismos sobre una superficie de agar slido. Cada microorganismo o grupo de microorganismos desarrolla una colonia clara. El nmero original de microorganismos viables en la muestra puede calcularse a partir del nmero de colonias formadas y la dilucin de la muestra. Por ejemplo, si 1.0 mL de una dilucin de 1 X 10 produce 150 colonias, la muestra original contendra alrededor de 1.5.x 10 clulas por mL. Las tcnicas de siembra en placa son sencillas, sensibles, y se utilizan ampliamente para contar bacterias y otros microorganismos en muestras como alimentos, agua y suelo. Sin embargo, existen varios problemas que pueden provocar recuentos inexactos. Se pueden obtener recuentos bajos si no se separan las agrupaciones de clulas y no se dispersan bien los microorganismos. Como no es posible estar totalmente seguro de que cada colonia proceda de una clula individual, los resultados suelen expresarse en
8 -6
unidades formadoras de colonias (CFU, colony forming units), en lugar de nmero de micro organismos. Las muestras deben producir entre 25 y 250 colonias para obtener resultados significativos.
210
El nmero de microorganismos se determina tambin con frecuencia a partir de colonias que crecen sobre filtros especiales de membrana que tienen poros de un tamao lo suficientemente pequeo para retener bacterias. En esta tcnica, se pasa una muestra a travs de un filtro de membrana especial. Luego, el filtro se coloca sobre un medio con agar y se incuba hasta que cada clula forme una colonia separada. Un recuento de colonias permite obtener el nmero de microorganismos presentes en la muestra filtrada y pueden emplearse medios especiales para seleccionar microorganismos especficos. 6.6.2 Medicin de la masa celular El aumento de la masa celular total, as como el del nmero de clulas, acompaa al crecimiento de una poblacin. Por ello, las tcnicas empleadas para medir los cambios de masa pueden utilizarse para medir el crecimiento. El mtodo ms directo consiste en determinar el peso seco microbiano. Se recogen las clulas que crecen en un medio lquido por
centrifugacin, se lavan, se secan en estufa y se pesan. Esta tcnica es especialmente til para medir el crecimiento de hongos. Sin embargo, requiere mucho tiempo y no es muy sensible. Como las bacterias pesan tan poco, puede ser necesario centrifugar varios cientos de mililitros de cultivo para recoger una cantidad suficiente.
211
Figura 6.8. Concentracin de un nutriente y crecimiento.(a) Efecto de los cambios en la concentracin de un nutriente limitante sobre el rendimiento total microbiano, (b) Efecto sobre la velocidad de crecimiento.
212
Existen tcnicas ms sensibles y rpidas que se basan en la capacidad de las clulas microbianas de dispersar la luz que incide sobre stas. Como el tamao de las clulas microbianas en una poblacin es casi
constante, el grado de dispersin es proporcional a la concentracin

7
de
clulas
presentes.
Cuando
la
concentracin de las bacterias alcanza casi 10 millones de clulas (10 ) por mL, el medio aparece ligeramente turbio. Un incremento de la poblacin produce un incremento de la turbidez y una disminucin de la luz transmitida a travs del medio. Se puede medir el grado de dispersin de la luz con un espectrofotmetro y prcticamente se observa una relacin lineal con la concentracin bacteriana hasta un cierto nivel de absorbancia. Por ello, el crecimiento de una poblacin puede medirse fcilmente espectrofotomtricamente, siempre que la poblacin sea lo suficientemente grande para que pueda medirse la turbidez. Si la cantidad de una sustancia es constante en cada clula, la cantidad total de dicho constituyente celular est directamente relacionada con la masa celular microbiana total. Por ejemplo, se puede analizar una muestra de clulas lavadas recogidas a partir de un volumen conocido de un medio para determinar la cantidad total de protenas o nitrgeno. Un aumento en la poblacin microbiana se reflejar en unos niveles superiores de protenas totales. De forma similar, se puede utilizar el anlisis de clorofila para medir poblaciones de algas, y la cantidad de ATP para
213
estimar la cantidad de masa viva microbiana. 6.7 Rendimiento del crecimiento y efectos de un nutriente limitante Cuando el crecimiento microbiano est limitado por una concentracin baja de un nutriente esencial, el crecimiento neto final o rendimiento celular aumenta con la cantidad inicial del nutriente limitante. sta es la base de los bioanlisis para cuantificar vitaminas y otros factores de crecimiento. La velocidad de crecimiento aumenta tambin con la
concentracin del nutriente, pero de una manera hiperblica. La forma de la curva parece que refleja el grado de captacin de un nutriente por las protenas microbianas transportadoras. A niveles de nutrientes suficientemente altos, los sistemas de transporte se saturan y la velocidad de crecimiento no sigue aumentando con la concentracin del nutriente. La cantidad de masa microbiana producida a partir de un nutriente puede expresarse cuantitativamente como
rendimiento del crecimiento (Y, yield). masa de microorganismos formada masa de sustrato consumido
El valor Y se expresa a menudo en gramos de clulas formadas por gramo de sustrato utilizado, o como rendimiento molar del crecimiento (gramos de clulas por mol de nutriente consumido). Se trata de un ndice de eficacia de conversin de nutrientes en material celular. Microorganismos aerobios cultivados en un medio rico pueden asimilar entre un 20 y un
214
50% del carbono de los azcares que captan. En medios diluidos, algunas bacterias parece que son capaces de aumentar su eficacia y asimilar hasta el 80% del azcar adquirido. Los rendimientos del crecimiento de bacterias fermenta-doras se han estudiado extensamente. Cuando crecen en medios ricos en nutrientes, las bacterias pueden utilizar la
fermentacin de hidratos de carbono slo para generar energa y emplear otras sustancias, p. ej., aminocidos, como materias primas para la biosntesis. La eficacia de la utilizacin de ATP durante la fermentacin queda reflejada en el valor YATP. gramos de clulas formadas mol de ATP producido
Aunque los valores de pueden variar a concentraciones muy bajas de azcar, el YATP para la mayora de las bacterias es de aproximadamente 10.5 g / mol, a niveles elevados de azcar. Por ello, parece que las bacterias utilizan
generalmente energa en la biosntesis con una eficacia bastante constante. Adems, el valor de YATP medido es mucho ms pequeo que el mximo terico de 32, que es el esperado si se emplease todo el ATP en la biosntesis. Gran parte del ATP se utiliza en el transporte, en el metabolismo mecnico y, probablemente, de otras formas. 6.8 Cultivo continuo de microorganismos Hasta ahora se ha tratado de sistemas cerrados,
215
denominados cultivos discontinuos, en los que no se renuevan los aportes de nutrientes ni se eliminan los residuos. El crecimiento exponencial dura solamente unas pocas generaciones y el cultivo alcanza pronto la fase estacionaria. Sin embargo, es posible cultivar microorganismos en un sistema abierto, en el que se mantengan las condiciones ambientales constantes a travs de un suministro continuo de nutrientes y de la retirada de los residuos. Estas condiciones se cumplen en un laboratorio mediante el sistema de cultivo continuo. En este tipo de cultivo se puede mantener una poblacin microbiana en fase de crecimiento exponencial, a una concentracin constante de biomasa durante un perodo largo de tiempo. 6.8.1 Quimiostato Mayoritariamente se utilizan dos clases de sistemas de cultivo continuo: 1) quimiostatos y 2) turbidostatos. Un quimiostato se construye de forma que se alimenta un recipiente de cultivo con un medio estril a la misma velocidad con que se gasta el medio que contiene los microorganismos. El medio de cultivo de un quimiostato contiene un nutriente esencial (p. ej., un aminocido) en cantidades limitadas. Debido a la presencia del nutriente limitante, la velocidad del crecimiento se determina por la velocidad a la que se incorpora ms cantidad de medio en la cmara de cultivo y la densidad final celular depende de las concentraciones del nutriente limitante. La velocidad de recambio del nutriente se expresa como velocidad de dilucin (/)),
216
velocidad a la que el medio fluye en el recipiente de cultivo, respecto del volumen del mismo, donde/es la velocidad de flujo (mL/h) y V es el volumen del recipiente (mL). D=f/V Por ejemplo, si f es 30 mL/h y V, 100 mL, la velocidad de dilucin ser de 0.30 h .
-1
217
Figura 6.9. Sistema de cultivo continuo: quimiostato. (a) Diagrama esquemtico del sistema. El medio fresco contiene una cantidad limitante de un nutriente esencial. La velocidad de crecimiento est determinada por la velocidad del flujo del medio a travs del recipiente de cultivo. (b) Termentador comercial que puede utilizarse como quimiostato. Este aparato emplea recipientes de cultivo de 0.75 a 1.5 litros y se pueden regular durante el crecimiento factores como la temperatura, el pH y la concentracin de oxgeno
Tanto el nivel de poblacin microbiana como el tiempo de generacin estn relacionados con la velocidad de dilucin. La densidad de la poblacin microbiana permanece inalterada a lo largo de un amplio rango de velocidades de dilucin. El tiempo de generacin generaci disminuye (es decir, la velocidad de crecimiento aumenta), al aumentar la velocidad de dilucin. El nutriente limitante quedar casi completamente agotado en estas condiciones de equilibrio. Si la velocidad de dilucin
218
aumenta
con
demasiada
rapidez,
los
microorganismos
pueden
incluso desaparecer
del
cultivo antes de que se multipliquen al eliminarse por el rebosadero, porque la velocidad de dilucin es superior a la mxima de crecimiento. La concentracin de nutriente limitante es mayor a velocidades de dilucin elevadas, porque en esas condiciones habr pocos microorganismos presentes para utilizarlo. A velocidad de dilucin muy baja, un aumento de D causa un aumento tanto de la densidad celular como de la velocidad de crecimiento. Esto se debe al efecto de la concentracin del nutriente sobre la velocidad de crecimiento, a veces denominada relacin de Monod. A velocidades de dilucin bajas, slo hay disponible una cantidad limitada de nutriente. Gran parte de la energa disponible debe utilizarse para el mantenimiento celular, no para el crecimiento ni la multiplicacin. A medida que aumenta la velocidad de dilucin, se elevan la cantidad de nutrientes y la densidad celular resultante, porque la energa est disponible tanto para el mantenimiento como para el crecimiento. La velocidad de crecimiento aumenta cuando la energa total disponible supera la energa de mantenimiento.
219
Figura 6.10. Velocidad de dilucin y crecimiento microbiano en un quimiostato. Efectos del cambio en la velocidad de dilucin en un quimiostato
6.8.2 Turbidostato El segundo sistema de cultivo continuo, el turbidostato tiene una fotoclula que mide la absorbancia o turbidez de un cultivo en el recipiente de cultivo. La velocidad de flujo del medio a travs del recipiente se regula automticamente para mantener una turbidez o
densidad celular predeterminada. El turbidostato se diferencia del quimiostato por varias razones. zones. La velocidad de dilucin en un turbidostato es variable, en lugar de permanecer constante, y el medio de cultivo no contiene un factor limitante. Un turbidostato funciona mejor a velocidades de dilucin altas; un quimiostato es ms estable y eficaz a velocidades de dilucin bajas. Los sistemas de cultivo continuo son muy tiles porque
220
ofrecen un aporte constante de clulas en fase exponencial, que crecen a una velocidad conocida. Estos sistemas permiten el estudio del crecimiento microbiano con niveles muy bajos de nutrientes, concentraciones prximas a las existentes en los medios naturales. 6.9 Crecimiento equilibrado y desequilibrado El crecimiento exponencial, tanto en cultivos discontinuos como continuos, es un crecimiento equilibrado. Es decir, todos los constituyentes celulares se forman a una velocidad constante, unos respecto de otros. Si se modifican las concentraciones de nutrientes y otras condiciones
ambientales, se origina un crecimiento desequilibrado porque las velocidades de sntesis de los componentes celulares varan entre s, hasta que se alcanza un nuevo estado de equilibrio. Esta respuesta se observa fcilmente en un experimento en el que se transfieren bacterias desde un medio pobre en nutrientes a otro ms rico (shift-up). Las clulas elaboran en primer lugar nuevos ribosomas para aumentar su capacidad de sintetizar protenas. Esta fase contina con un incremento de la sntesis de protenas y DNA. Finalmente, tiene lugar el aumento esperado de la velocidad de multiplicacin. Tambin se produce un crecimiento desequilibrado cuando se pasa una poblacin bacteriana de un medio rico en nutrientes a otro ms pobre (shift-down). Posiblemente, los
microorganismos han podido obtener muchos componentes

221
celulares directamente del medio. Cuando se cambian a un medio nutricionalmente inapropiado, necesitan tiempo para elaborar las enzimas que se precisan para realizar la biosntesis de los nutrientes no disponibles. En consecuencia, la divisin celular y la replicacin del DNA continan despus del cambio, pero la sntesis neta de protenas y RNA es ms lenta. Las clulas disminuyen de tamao y modifican su metabolismo hasta que sean capaces de crecer de nuevo. Entonces, se reanuda el crecimiento equilibrado. Estos dos tipos de experimentos (shift-up y shift-down) demuestran que el crecimiento microbiano se encuentra bajo un control preciso y coordinado, respondiendo rpidamente a los cambios producidos en condiciones ambientales.
222

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componentes qumicos del aire y la tierra. Algunas bacterias y

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desarrollaron nuevas ramas de la microbiologa, como

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1.1.5 Nomenclatura microorganismos

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los organismos en los siguientes reinos: Procariotae o Monera (eubacterias y

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generalmente dividindose en dos clulas hijas iguales, proceso denominado

nadar mediante el movimiento de unos apndices llamados flagelos.

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dixido de carbono a travs del proceso denominado respiracin. Los

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durante la fotosntesis. 1.1.7.2 Utilizacin de microbios para el

tratamiento de aguas residuales Con la preocupacin creciente por la

convierten en subproductos como dixido de

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La moderna microbiologa industrial y la ingeniera gentica Se mencion el uso comercial producir de

bioqumicas en miniatura. a) Protena unicelular

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unicelular no es muy apetitoso y en algunos casos debera ser suplementada con

aminocidos esenciales para proporcionar una dieta proteica equilibrada. Por el

Cap. 1 Aspectos de Microbiologa

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Cap. 2. Observacin de Microorganismos a travs del microscopio

Captulo Observacin de Microorganismos a travs del microscopio

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Tubo Lentes del objetivo

Condensador Iluminador Estativo con fuente de luz

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luminosos, brillantes, sobre un fondo oscuro.

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Lentes del ocular

Luz (b) Campo claro

Luz (b) Campo oscuro

Lentes del ocular

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microscopios electrnicos de barrido. 2.3.5.1 Microscopa electrnica de transmisin En el microscopio electrnico de