Hematologa

Cristian Bentez lvarez

Curso 2013-2014

INDICE

PRIMERA EVALUACION:

PRCTICA N1: Manejo del microscopio .. 3 PRCTICA N2: Visualizacin de cristales en la saliva 6

PRCTICA N3: Preparacin de sangre en fresco 8 PRCTICA N4: Tincin supravital con azul de metileno 11 PRCTICA N 5: Realizacin de una extensin 13 PRCTICA N 6: Tincin de Giemsa 16 PRCTICA N 7: Tincin de Wright 20 PRCTICA N 8: Tincin de Wright Rpida .. 23 PRCTICA N 9: Tincin de May-Grnwald 26 PRCTICA N 10: Tincin de May-Grnwald Giemsa 28 PRCTICA N 11: Tincin Panptica rpida . 30 PRCTICA N 12: Recuento diferencial leucocitario (RDL) 34 PRCTICA N 13: Tincin y contaje de reticulocitos 36 PRCTICA N 14: Determinacin del hematocrito por micrmetro 41 PRCTICA N 15: Recuento de eritrocitos en cmara 43 PRCTICA N 16: Recta de calibrado de Dicromato potsico . 47 PRCTICA N 17: Protocolo Hemoglobina . 50

SEGUNDA EVALUACION:

PRCTICA N 18: PRCTICA N 19: PRCTICA N 20: Protoclo Hemoglobina A2.

PRCTICA N 21: V.S.G .. PRCTICA N 22: PRCTICA N 23:

PRCTICA N1: MANEJO DEL MICROSCOPIO.

FUNDAMENTO:
El fundamento de esta prctica es aprender a manejar el microscopio, familiarizarnos con sus componentes y comprobar todas aquellas caractersticas y propiedades que hemos aprendido.

MATERIALES:
o o o o o o o o Papel de filtro Microscopio 1 Porta Tijeras Bolgrafo Celo Papel cuadriculado Bata

REACTIVOS:
En esta prctica no hay reactivos.

MUESTRAS:
No es una muestra biolgica

TCNICA:
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. Colocar el papel de filtro en el puesto de trabajo. Colocar el microscopio encima del papel de filtro. Enchufar el microscopio y encenderlo. Colocarnos el revolver en el objetivo de menor aumento. Situar el porta con la muestra en la platina, en el centro del orificio. Enfocamos con el objetivo de menor aumento (4x), ajustar el interpupilar. Apuntar las coordenadas de cada parte de la muestra, sta se realizara con el objetivo de (4x, 10x, 40x). Una vez finalizado, se baja la luz hasta que no se visualice nada. Apagamos el microscopio con el botn de apagado y lo dejamos reposar, despus bajamos la platina. Quitamos la muestra. Ponemos el microscopio al menor aumento. Desenchufamos el microscopio. Enrollamos el cable. Lo guardamos en su bolsa y en su sitio.

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22

Tabla coordenadas objetivo de: (4x) SP 37 82,8 IN 46 103,5 IZ 14 94 DE 71,6 94,7

X Y

-Observacin: Se observa una lnea continua de tinta, aumento bastante la luz para que sea vea mejor ya que es muy oscura la tinta. -Leyenda del objetivo: BE PLAN 4x/0.10 /- W25 Tabla coordenadas objetivo de: (10x) SP 45,7 IN 46 IZ 14 DE 74,5 4

81,6

105

94

91,5

-Leyenda del objetivo: BE PLAN 10x/0.25 /- W6.7 Tabla coordenadas objetivo de: (40x) SP 37 82,9 IN 37,5 104,3 IZ 75 93 DE 5,4 93,2

X Y

-Observacin: Se observa lneas enlazas entre s, se necesita tener la luz del microscopio al mximo para visualizar bien la muestra y se vea bien ptima. El condensador lo abro para que me entre ms luz y el diafragma le subo para tener mayor poder de resolucin. La lente est casi pegada al papel que esto encima del porta. Adjunto una foto de la visin de la muestra ampliada al 40x.

-Leyenda del objetivo: BE PLAN 40x/0.65 /0,17 W0, 6

DATO DE INTERES:
-Tabla de aumento de oculares: AUMENTO DE LOS OCULARES X10 AUMENTO DE CADA OBJETIVO X4 X10 AUMENTO COMBINADO X40 X100 5

X40 X100

X400 X1000

PRCTICA N2: VISUALIZACIN DE CRISTALES EN LA SALIVA.

FUNDAMENTO:
Visualizar cristales de estrgeno en la saliva, la proporcin de estos cristales de estrgeno est relacionado con el momento del ciclo menstrual de la mujer, de tal forma se aprecia una mayor concentracin en el mico de la ovulacin.

MATERIALES:
o o o o o Papel de filtro Microscopio Porta Bata Guantes

REACTIVOS:
En esta prctica no hay reactivos.

MUESTRAS:
Saliva.

TCNICA:
PARTE A: Obtencin de la muestra. -Enjuagar la boca para eliminar artefactos.

-Dispensar un poco de muestra de saliva sobre el portaobjetos. -Dejamos secar la muestra PARTE B: Visualizacin de la muestra. -Seguimos todos los puntos que se han especificado en la prctica N1. -Enfocamos la visualizacin con todos los objetivos (4x-10x-40x), excepto con el de inmersin.

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22

En esta prctica podemos observar los cristales que se forman en la saliva durante el periodo preovulatorio, por lo que, en teora, slo se pueden observar en mujeres. Esto no es del todo cierto puesto que, en ocasiones, tambin se han observado cristales en la saliva del hombre. A continuacin se describe las caractersticas que he ido observando durante la prctica.

-Observacin: En esta foto que adjunto a la izquierda, se observa con el objetivo (4x), la saliva que an no est seca, lo que hace que se observen las burbujas. He de decir que una vez seca la saliva, con el aumento de (x4) apenas se puede observar ningn cristal, solo puntos que no se puede percibir lo que son.

-Observacin: En la siguiente foto con el objetivo de (x10), Se empieza a observar pequeas ramificaciones de la saliva con aspecto de hoja de helecho, son como muchos puntos unidos entre s, se puede decir que la observacin de esta cristalizacin es mediana. A la hora de enfocar esta muestra, al ser transparente he tenido en cuenta que se necesitaba un poco ms de contraste, para ello he cerrado bastante el diafragma y he bajado el condensador.

-Observacin: Por ltimo, la observacin con el objetivo de (x40), muestra que me presto una compaera, ya que al estar en ciclo menstrual, es ms fcil ver la cristalizacin de la saliva. Se aprecia perfectamente la visualizacin de una clara y abundante cristalizacin, lo cual como valoracin del resultado podramos decir que la muestra que me prestaron, la chica se encuentra en un estado de fertilidad clara.

PRCTICA N3: PREPARACIN DE SANGRE EN FRESCO.

FUNDAMENTO:
Observar la sangre sin los efectos secundarios ejercidos por la tincin.

MATERIALES:
o o o o o o o o o Microscopio Cubre Porta Papel de filtro Guantes Capilares sin heparinizar Lancetas Algodn Bata

REACTIVOS:
Alcohol 96. Laca de uar (Elemento fijador).

MUESTRAS:
Sangre venosa anticoagulada con EDTA. Sangre capilar: Cmo obtener la sangre capilar? A. B. C. D. Elegir preferiblemente el 3 o 4 dedo de la mano contraria a la que se suele utilizar. Desinfectar la zona con el algodn, ste impregnado de alcohol. Dejar que el alcohol se seque. Pinchar con la lanceta en la zona plenamente desinfectada, siendo la zona ideal el lateral del pulpejo. E. Desechar si es posible la primera gota con un algodn seco.

TCNICA:
1. 2. 3. 4. Colocar una gota de sangre en el cubre. Colocar el cubre sobre el porta y presionarlo suavemente para que se expanda la gota. Sellar con laca de uas para evitar que se seque la muestra. Observar la preparacin con los siguientes objetivos: 4x-10x-40x.

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22 -CODIGO DEL TUBO DE SANGRE CON EDTA: 047816

El tubo de EDTA, lleva el tapn violeta y por lo tanto indica que lleva en su interior sangre anticoagulada. Una excesiva prolongacin con el anticoagulante hace que se altere las clulas sanguneas. Antes de utilizar la sangre, la homogenizamos para que se mezcle con el plasma.

Es una prctica muy til para ver la sangre en fresco, sin tinciones y apreciar la sangre al natural, aunque tiene la desventaja de que no se aprecian con tanta nitidez las distintas clulas sanguneas como en una muestra teida. A continuacin muestro mis observaciones que he obtenido con los diferentes objetivos: (4x10x-40x) en cada tipo de sangre (capilar, venosa).

Sangre venosa anticoagulada con EDTA -Observacin: Con el objetivo (4x), se puede decir que es imposible ver clulas sanguneas de forma clara, solo se observan puntos de color rojo.

-Observacin: Con el objetivo (10x), se empiezan a observar los eritrocitos pero muy amontonados. Foto adjuntada a la izquierda.

-Observacin: Con el objetivo (40x), se ven perfectamente los eritrocitos con su forma redonda, no se aprecian sntomas de que se muevan ya que es una muestra de sangre vieja.

Sangre capilar -Observacin: Mismas observaciones con los objetivos de (4x, 10x) -Observacin: Con el objetivo (40x), Primera foto se puede observar en esta muestra proporcionada por un compaero, las pilas de monedas (Fenmeno de Rouleaux), es decir, los eritrocitos estn juntos y tienen forma de monedas

-Observacin: Con el objetivo (40x), en esta segunda foto se puede observar que los eritrocitos en ese caso se ven como bolitas redondas, en stos se observa que se estn moviendo como una especie de deslizamiento 10

entre ellos, ya que es sangre capilar recin extrada, es recomendable ver esta sangre antes de 4 minutos aproximadamente ya que entre 4-7 minutos se empieza a coagular la sangre fresca. Tambin he encontrado equinocitos, stos tienen como una especia de picos en la membrana y plaquetas que son los pequeos puntos que estn como muy pegados. He tenido que cerrar bastante el diafragma para que se viera bien las muestras, ya que con mucha luz no se perciban bien las formas redondas.

PRCTICA N4: TINCIN SUPRAVITAL CON AZUL DE METILENO.

FUNDAMENTO:
-Qu es una funcin supravital? Es cuando se emplea el colorante sobre la clula o tejidos vivos aislados del organismo. -Es una funcin diferencial? No, solo tie las bsicas. - Utilizaremos como colorante el azul de metileno, ste es un colorante bsico que tie sustancias acidas.

MATERIALES:
o o o o o o o o o o Papel de filtro Microscopio Guantes Cubre Porta Tubos de ensayo Parafilm Gravilla Pipetas Pasteur Capilares sin heparinizar

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REACTIVOS:
Azul de metileno

MUESTRAS:
Sangre anticoagulada con EDTA

TCNICA:
1. 2. 3. 4. 5. Mezclar en un tubo de ensayo la misma proporcin de sangre que de azul de metileno. Tapar y dejar incubar la muestra 10 minutos a temperatura ambiente. Dispersar una gota de la mezcla en el cubre. Depositar el cubre sobre el porta Observar el microscopio con los objetivos secos (4x, 10x, 40x)

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22 -CODIGO DEL TUBO DE SANGRE CON EDTA: 006192

-Observacin: Es muy importante que para favorecer la mezcla de la sangre con el azul de metileno homogenizamos 10 minutos. Pasados los 10 minutos volver a homogenizar.

Resultados de lo que vi en esta tincin: -Observacin: En esta foto con el aumento de (4x), apenas se perciben ncleos y eritrocitos, solo se ven puntos y rayitas azules que podemos decir que son los elementos teidos (Leucocitos).

-Observacin: En esta foto con el aumento de (10x), Se empiezan a percibir los eritrocitos que son los puntos transparentes/blancos y los leucocitos que son los que estn teidos sus ncleos de color azul, aun no se puede percibir las plaquetas.

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-Observacin: En las siguientes fotos encuentro varios tipos de leucocitos (40x), ya se diferencian perfectamente los eritrocitos de los leucocitos y las plaquetas se ven.

Neutrfilo en cayado

Linfocito y plaquetas agregadas

Eosinfilo

PRCTICA N5: REALIZACION DE UNA EXTENSIN.

FUNDAMENTO:
Qu es una extensin sangunea? Una extensin es una capa donde se encuentran las clulas extendidas

MATERIALES:
o o o o o o o o Papel de filtro Guantes Gravilla Capilares sin heparinizar Capilares heparinizados 2 portas (Soporte y Extensor) Lancetas Algodn

REACTIVOS:
Alcohol 96

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MUESTRAS:
Sangre venosa anticoagulada con EDTA. Sangre capilar: Obtenida como en la prctica N 3.

TCNICA:
1. Con los dedos ndice y pulgar de una mano, sujetar un extremo del porta normal (porta soporte), a nivel de sus bordes, y situarlo sobre una mesa. Tambin puede apoyarse, simplemente, el porta sobre el extremo del dedo corazn de la mano que lo sujeta .De esta forma, el porta soporte forma un ngulo con la mesa. 2. Con un capilar cargado mediante capilaridad de sangre problema, depositar una pequea gota de sta (de unos 5) en la cara superior de ese porta, a no menos de 2 cm del extremo opuesto al que agarra la mano. 3. Colocar un extremo del porta esmerilado (porta difusor o extensor) un poco por delante de la gota de sangre y formando un ngulo de 45 con el porta soporte. Es conveniente utilizar siempre el mismo porta extensor, para adaptarlo a esta funcin. 4. Desplazar suavemente hacia atrs el porta extensor, hasta que alcance la gota de sangre. 5. Dejar que la gota se extienda, por capilaridad, a lo largo del extremo del porta extensor que toca el porta soporte 6. Antes de que la sangre alcance los bordes de ese extremo, deslizar el porta extensor hacia delante, con un movimiento firme y uniforme, y a una velocidad media. Este deslizamiento debe acabar, aproximadamente, a 1 cm del extremo final del porta soporte, con un movimiento de ascensin del porta extensor. 7. Secar rpidamente la extensin, agitndola al aire, para que sus clulas no se distorsionen. 8. Escribir el nombre en el porta que soporta la extensin.

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RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22 -CODIGO DEL TUBO DE SANGRE CON EDTA: 048149

ngulo ideal para hacer la extensin 45: Observacin sobre el ngulo: Las primeras me salan muy cortas y gruesas apenas se extendan lo cual significaba que aplicaba un ngulo mayor de 45, tambin me salan algunas largas y muy finas lo cual significaba que aplicaba un ngulo menor de 45. A base de prctica me empezaron a salir con un grosor y longitud adecuada.

Observacin sobre la velocidad: Al aplicar mayor velocidad me salan rayas que me estropeaban la extensin, por lo contrario al aplicar poca velocidad me salan estras en la extensin. A base de prctica fui encontrando ms o menos la velocidad adecuada

Observacin sobre la sangre: La sangre capilar se aprecia mucho ms clara que la sangre venosa, sta ltima posee ms viscosidad. 15

Adjunto foto: La de arriba (Venosa), la de abajo (Capilar).

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PRCTICA N6: TINCIN DE GIEMSA.

FUNDAMENTO:
Es una tincin hematolgica diferencial, no vital. Esta tincin de Giemsa es poco especial porque no lleva etanol en su composicin.

MATERIALES:
o o o o o o o o o o Papel de filtro Bata Guantes Gravilla Tubos de ensayo de 10ml Pipetas Pasteur Frasco lavador Cubetas de tincin Puentes de tincin Microscopio

REACTIVOS:
Metanol Colorante de Giemsa Solucin tampn pH 7.2 (Agua) Aceite de inmersin (Aceite de cedro) Solucin para limpiar los objetivos

MUESTRAS:
Extensin de sangre capilar Extensin de sangre venosa anticoagulada con EDTA

TCNICA:
1. 2. 3. 4. 5. Se prepara una extensin como en la prctica N5. Colocar la extensiones secas sobre el puente de tincin situado encima de la cubeta Cubrir la extensin con metanol y dejar reaccionar de 3-5 minutos. Escurrir el producto sobrante y dejar secar Preparamos una disolucin del colorante Giemsa con agua a 1/5, y mezclamos suavemente en el tubo de ensayo. 17

6. 7. 8. 9. 10. 11. 12.

1--- Soluto (Giemsa en este caso) 4---Disolvente (Agua) Cubrir las extensiones con el colorante y dejar reposar durante 25 minutos. Escurrir pasado los 25 minutos, lavamos bien y dejamos secar. Visualizar la extensin en el microscopio con los objetivos secos (4x,10x,40X) Para visualizar con el objetivo de (100x) colocamos el revolver con el objetivo de menor aumento para poder dispersar bien la gota del aceite de inmersin. Colocar dicha gota sobre la extensin en la zona del punto de luz. Colocamos el objetivo de (100x) y subimos la platina lentamente para que el objetivo contacte con la muestra Realizar un barrido por toda la extensin desde la cabeza a la cola en forma de zic-zac.

13. Al final de la observacin limpiar el objetivo de inmersin con la solucin limpiadora (85% Alcohol de 96, 5% Acetona, 10% Alcohol Etlico) y papel de laboratorio.

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22

Foto del colorante sobre la extensin mientras se tea.

OBSERVACIONES UNA VEZ TEIDAS:

Observacin Objetivos Secos: Se observan puntitos que no se diferencian cuales estn teidos y cules no, a simple vista es imposible identificar si son eritrocitos, leucocitos o plaquetas. Adjunto foto con el objetivo (10x):

Sangre venosa: En las tinciones sobre la sangre venosa, se ven mal los eritrocitos ya que la sangre lleva un tiempo extrada y se ve alterada. 18

En la foto observamos un linfocito, su ncleo tiene la cromatina muy condensada y una forma muy redondeada que cubre casi todo el citoplasma. Por lo poco ms que he podido observar en esta tincin de sangre venosa, he visto los eritrocitos muy juntos con un color morado claro y no he podido identificar otra clase de leucocitos.

Sangre capilar: Se muestra la existencia de varios tipos de leucocitos, y los voy identificando por sus caractersticas que ms les definen. Esta tincin se ve azulada no como en Wright que se ve ms anaranjada.

Monocitos: Se caracterizan por su tamao que es mucho ms grande que el de los eritrocitos, su citoplasma es ms basfilo que el de un neutrfilo, los monocitos suelen tener el ncleo arrionado, y la cromtica ms laxa que un linfocito. Tambin se aprecian algunas vacuolas que son caractersticas de stos. Tienen la posibilidad de encontrarse de (3,5-9%). Neutrfilos: Presentan un ncleo segmentado por que se une por unos pequeos estrechamientos, es de color violeta de tonalidad normal tirando a oscura. El citoplasma es rosado muy clarito (Lila), su tamao es menor que el de un monocito pero mayor que un eritrocito. Es muy frecuente identificarlos por su gran porcentaje (40-75%)

Linfocitos: Posee un ncleo redondo de tonalidad violeta y bastante condensado, el citoplasma sobresale por los lados ste tiene un color basfilo/morado. Su tamao es poco ms mayor que el de los eritrocitos. Tambin es frecuente identificarlos tienen un gran porcentaje (20-45%) Plaquetas y Eritrocitos: Se observa con frecuencia plaquetas agregadas de color moradas y en esta tincin los eritrocitos tienen una tonalidad azulada.

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Basfilos: No he encontrado en esta extensin sangunea, dado su porcentaje tan bajo. (01,5%) Eosinfilo: No he encontrado en esta extensin sangunea, dado su porcentaje tan bajo. (01,5%)

Observaciones: -Si en la preparacin se observa precipitados de colorante puede ser debido a varias causas: lavado insuficiente al final del proceso, utilizacin de porta o cubreobjetos sucios, mala filtracin del colorante, mala distribucin del colorante etc. - Durante la tincin este colorante utilizado es alcalino por ello la tincin es ms azulada. - En Giemsa es comn que la granulacin eosinfila no presenta la tonalidad rojoanaranjada caracterstica sino que presenta una tonalidad parda rojiza.

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PRCTICA N7: TINCIN DE WRIGHT.

FUNDAMENTO:
El colorante de Wright lleva en su composicin metanol, por lo tanto no es necesario un paso previo de fijacin antes de la coloracin como en la tincin de Giemsa.

MATERIALES:
o o o o o o o o o o Papel de filtro Bata Guantes Gravilla Tubos de ensayo de 10ml Pipetas Pasteur Frasco lavador Cubetas de tincin Puentes de tincin Microscopio

REACTIVOS:
No se usa metanol Colorante de Wright Solucin tampn pH 7.2 (Agua) Aceite de inmersin (Aceite de cedro) Solucin para limpiar los objetivos

MUESTRAS:
Extensin de sangre capilar Extensin de sangre venosa anticoagulada con EDTA

TCNICA:
1. Cubrir la extensin con el colorante de Wright sin diluir (estamos fijando), dejar 1 minuto. 2. Escurrimos, lavamos y secamos. 3. Preparamos la dilucin del colorante de Wright a . 4. Cubrimos la extensin con sta dilucin y la dejamos 4 minutos. 5. Escurrimos, lavamos y secamos.

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6. Para visualizar con el objetivo de (100x) colocamos el revolver con el objetivo de menor aumento para poder dispersar bien la gota del aceite de inmersin. 7. Colocar dicha gota sobre la extensin en la zona del punto de luz. 8. Colocamos el objetivo de (100x) y subimos la platina lentamente para que el objetivo contacte con la muestra 9. Realizar un barrido por toda la extensin desde la cabeza a la cola en forma de zic-zac.

10. Al final de la observacin limpiar el objetivo de inmersin con la solucin limpiadora (85% Alcohol de 96, 5% Acetona, 10% Alcohol Etlico) y papel de laboratorio.

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22 -CODIGO DEL TUBO DE SANGRE CON EDTA: 869906 OBSERVACIONES UNA VEZ TEIDAS:

Sangre venosa: Monocitos: Gran tamao comparado a los dems leucocitos, su citoplasma presentan una tonalidad azul griscea con grnulo rojizos bastante finos y sus vacuolas caractersticas.

Neutrfilos: Los ncleos de los neutrfilos aparecen de color prpura oscuro, su citoplasma es rosado y clarito, en este caso es un neutrfilo segmentado, tambin se pueden encontrar en cayado, pero tiene un 35% de encontrarse.

Linfocitos: Los ncleos de los linfocitos aparecen de color prpura oscuro y de forma redonda, su citoplasma es ms basfilo que el de los neutrfilos y ms oscuro

Plaquetas y Eritrocitos: Los eritrocitos se observarn de color naranja o rosado. Las plaquetas toman coloracin violeta o prpura.

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Eosinfilo, Basfilos: No encontrados en esta extensin.

Sangre capilar: No pude observar la muestra ya que la tincin/extensin se ve mal y salen los eritrocitos muy pegados y los leucocitos no puedo identificarlos.

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PRCTICA N8: TINCIN DE WRIGHT RPIDA.

FUNDAMENTO:
El colorante de Wright lleva en su composicin metanol, por lo tanto no es necesario un paso previo de fijacin antes de la coloracin como en la tincin de Giemsa.

MATERIALES:
o o o o o o o o o o Papel de filtro Bata Guantes Gravilla Tubos de ensayo de 10ml Pipetas Pasteur Frasco lavador Cubetas de tincin Puentes de tincin Microscopio

REACTIVOS:
No se usa metanol Colorante de Wright Solucin tampn pH 7.2 (Agua) Aceite de inmersin (Aceite de cedro) Solucin para limpiar los objetivos

MUESTRAS:
Extensin de sangre capilar Extensin de sangre venosa anticoagulada con EDTA

TECNICA:
1. Cubrir la extensin con el colorante de Wright sin diluir y lo dejamos actuar 1 minuto. 2. Directamente sobre el porta con el colorante de Wright, aadimos la misma cantidad de agua que hemos aadido de colorante de Wright. A continuacin homogenizamos 3. Lo dejamos actuar 4 minutos 4. Escurrir, lavar y secar 5. Para visualizar con el objetivo de (100x) colocamos el revolver con el objetivo de menor aumento para poder dispersar bien la gota del aceite de inmersin. 24

6. Colocar dicha gota sobre la extensin en la zona del punto de luz. 7. Colocamos el objetivo de (100x) y subimos la platina lentamente para que el objetivo contacte con la muestra 8. Realizar un barrido por toda la extensin desde la cabeza a la cola en forma de zic-zac.

9. Al final de la observacin limpiar el objetivo de inmersin con la solucin limpiadora (85% Alcohol de 96, 5% Acetona, 10% Alcohol Etlico) y papel de laboratorio.

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22 -CODIGO DEL TUBO DE SANGRE CON EDTA: 869906 Sangre venosa: Neutrfilo en cayado: Tiene el ncleo en forma de C, por eso decimos que est en callado, su citoplasma es rosado y los eritrocitos al ser sangre venosa se ven apilados, es difcil encontrar leucocitos en la sangre venosa ya que quizs sta lleve unos das desde su extraccin y al estar con el anticoagulante se halla alterado.

Sangre capilar:

Monocitos: Se caracterizan por su tamao que es mucho ms grande que el de los eritrocitos, su citoplasma presenta una tonalidad azul griscea y sus vacuolas caractersticas. Su ncleo en este caso se ve muy clarito (lila) pero comparado a un neutrfilo se ve que es claramente un monocito, Tienen la posibilidad de encontrarse de (3,5-9%).

Neutrfilos: Los ncleos de los neutrfilos aparecen de color prpura oscuro pero no tanto como un linfocito, su citoplasma es rosado y clarito, en este caso es un neutrfilo segmentado, tambin se pueden encontrar en cayado, pero tiene un 3-5% de encontrarse.

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Eosinfilos: Presenta un ncleo dividido de color violeta o morado pero de tonalidad normal, ni muy laxo y muy condensado, el citoplasma esta degranulado y tiene un color rojizo/anaranjado.

Linfocitos: El citoplasma de los linfocitos presentar varias

tonalidades azules se ve solo una parte muy pequea del citoplasma. El ncleo aparece de una tonalidad oscura (violeta oscuro), es redondo y est bastante condensado. Se podra confundir con un basfilo, pero apenas hay grnulos y el citoplasma se asoma y se ve que sobre salen unos pelitos.

Plaquetas y Eritrocitos: Los eritrocitos se observarn de color naranja o rosado. Las plaquetas toman coloracin violeta o prpura. Se encuentran algunos equinocitos.

Basfilos: Imagen proporcionada por un compaero, ya que no encontrbamos ninguno dado su porcentaje bajo para encontrarlos. (0-1,5%. Lo identifico como un basfilo por su tonalidad, tamao y su ncleo se ve que esta granulado en su totalidad. El ncleo cubre todo el citoplasma, ste se ve entre los puntos y parece tener un tono anaranjado.

Observaciones: -Si en la preparacin se observa precipitados de colorante puede ser debido a varias causas: lavado insuficiente al final del proceso, utilizacin de porta o cubreobjetos sucios, mala filtracin del colorante, mala distribucin del colorante etc. - Durante la tincin este colorante utilizado es cido por ello la tincin es ms rojiza.

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PRCTICA N9: TINCIN DE MAY-GRNWALD. FUNDAMENTO:

El colorante de May-Grnwald lleva en su composicin metanol, por lo tanto no es necesario un paso previo de fijacin antes de la coloracin como en la tincin de Giemsa.

MATERIALES:
o o o o o o o o o o Papel de filtro Bata Guantes Gravilla Tubos de ensayo de 10ml Pipetas Pasteur Frasco lavador Cubetas de tincin Puentes de tincin Microscopio

REACTIVOS:
Colorante de May-Grmwald

MUESTRAS:
Extensin de sangre capilar Extensin de sangre venosa anticoagulada con EDTA

TCNICA:
1. Cubrir la extensin con el colorante de May-Grnwald sin diluir y se deja actuar 4 minutos. 2. Escurrimos, lavamos y dejamos secar 3. Preparamos una dilucin del colorante May-Grnwald. Cubrimos la extensin y dejamos actuar 10 minutos 4. Escurrimos, lavamos y dejamos secar

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22

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Monocito: Tama0 grande respecto a los otros leucocitos, ncleo de color violeta y arrionado, citoplasma presenta vacuolas y tiene una tonalidad morada/basfila pero es un poco ms oscuro que el del neutrfilo.

Neutrfilo: Tamao ms grande que un eritrocito, ncleo segmentado por unos pequeos hilos y es de color violeta, se puede apreciar que es ms oscuro que el del monocito.

Linfocito: Tamao pequeo comparado a los otros leucocitos, posee un ncleo muy redondo y muy condensado de color violeta oscuro, en este caso se ve que el citoplasma se ha alterado y es como si hubiera explotado.

Eritrocitos y plaquetas: Plaquetas moradas y agregadas. Eritrocitos con un color azul/rojizo.

Basfilos, Eosinfilos:

Observaciones: -Si en la preparacin se observa precipitados de colorante puede ser debido a varias causas: lavado insuficiente al final del proceso, utilizacin de porta o cubreobjetos sucios, mala filtracin del colorante, mala distribucin del colorante etc. - Durante la tincin este colorante utilizado es neutro por ello la tincin es una mezcla azulada y rojiza...

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PRCTICA N10: TINCIN DE MAY-GRNWALD - GIEMSA.

FUNDAMENTO:
El resultado de combinar la tincin de Giemsa con la de May-Grnwald, con el fin ltimo de combinar las ventajas de dichos colorantes, de ah que, esta tincin resalta de manera especial las granulaciones leucocitarias y mejora la coloracin de los hemates.

MATERIALES:
o o o o o o o o o o Papel de filtro Bata Guantes Gravilla Tubos de ensayo de 10ml Pipetas Pasteur Frasco lavador Cubetas de tincin Puentes de tincin Microscopio

REACTIVOS:
Colorante de Giemsa Colorante de May-Grnwald

MUESTRAS:
Extensin de sangre capilar Extensin de sangre venosa anticoagulada con EDTA

TCNICA:
1. Colocar el porta sobre el puente de tincin y colocamos el colorante de May-Grnwald sin diluir y lo dejamos actuar 4 minutos. 2. Preparamos la dilucin de Giemsa a 1/5, aplicamos esta dilucin sobre la extensin y la dejamos actuar 15 minutos. 3. Pasados los 15 minutos, escurrimos, lavamos y secamos.

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22 29

-CODIGO DEL TUBO DE SANGRE CON EDTA: 285977 Es una tincin diferencial porque emplea ms de un colorante

Observaciones: Esta preparacin proporciona una amplia gama de colores. Los hemates se tien de una tonalidad color rosa plido con una zona central ms clara. La cromatina nuclear se tie de rojizo a violeta oscuro dejando dibujadas las estructuras cromticas que sirven para evaluar y determinar el grado de madurez celular. Los linfocitos se tien de azul claro bastante definido adems de presentar pequeos granos azurfilos de color rojo intenso. El citoplasma de los monocitos aparece de un color ligeramente azulado. Las granulaciones de los eosinfilos son rojo-anaranjado casi amarillentas. Las granulaciones de los basfilos son violeta oscuro a negro, mientras que los grnulos neutrfilos rojo-prpura bastante claros. Las plaquetas presentan una porcin azulada y grnulos centrales rojos.

30

PRCTICA N11: TINCIN PANOPTICA RPIDA.

FUNDAMENTO:
Este mtodo de tincin diferencial es un sistema que ana la policroma y la calidad que proporcionan los mtodos clsicos (Giemsa y Wright) con una gran rapidez de ejecucin (15 segundos solamente) Frente a las tcnicas de tincin descritas anteriormente, donde el colorante se extenda sobre el frotis, esta presenta la peculiaridad de ser un mtodo de inmersin, donde el frotis se sumerge en la solucin colorante durante un tiempo determinado.

MATERIALES:
o o o Cubetas de Wertheim o similares Cestillo para portas. Frasco lavador

REACTIVOS:
Solucin N1: Solucin alcohlica de triarilmetano Solucin N2: Solucin tamponada de xanteno Solucin N3: Solucin tamponada de tiazina Agua destilada

MUESTRAS:
Frotis sanguneo preparado recientemente y que se ha secado secar al aire

TCNICA:
1. En tres cubetas de Wertheim o similares se disponen los colorante solucin N1, N2 y N3. 2. Colocamos los frotis en el cestillo para portas y lo sumergimos en la cubeta con la solucin N1 durante 1 segundo. Repetimos la inmersin cuatro veces (en total 5 segundos). Dejamos escurrir. 3. Sumergimos a continuacin otras cinco veces, cada una de un segundo de duracin, en la cubeta con la solucin N2. Dejamos escurrir. 4. Finalmente, sumergimos otras cinco veces de un segundo cada una en la cubeta con la solucin N3. Lavamos con agua destilada y dejamos secar.

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RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22

Sangre capilar (recin extrada)

(40x): Se pueden diferenciar bien los leucocitos ya que hay tanta mezcla de colores.

Neutrfilo: Tamao un poco ms grande que los eritrocitos, ncleo segmentado, de color morado muy oscuro, cromatina bastante condensada, citoplasma tiene una tonalidad rosada.

Monocito: Tamao muy grande comparado a los eritrocitos, ncleo grande y de color violeta, el citoplasma es ms basfilo que el del neutrfilo una mezcla de morado con rosa, presenta vacuolas en el citoplasma

Leucocitos: Tamao ms o menos como el del eritrocito pero no ms grande que un neutrfilo, tienen el ncleo con la cromatina muy condensada y ste tiene forma redonda con una tonalidad morada muy oscura. El citoplasma, se asoman unos pelillos de color lila. Eritrocitos y plaquetas: En esta tincin se ven muy morados los eritrocitos y las plaquetas otro tono morado ms oscuro.

Respecto a los otros leucocitos: No se encontraron dado su poco porcentaje Observaciones: 32

-Si en la preparacin se observa precipitados de colorante puede ser debido a varias causas: lavado insuficiente al final del proceso, utilizacin de porta o cubreobjetos sucios, mala filtracin del colorante, mala distribucin del colorante etc. -En general esta tincin se ve muy morada, en mi caso lo hice de los ltimos y las cubetas de tincin ya estaban muy contaminadas.

33

Neutrfilos

Eosinfilos

Basfilos

Monocitos

Leucocitos

Eritrocitos y plaquetas

Tincin de Giemsa

Tincin de Wright

Ncleo violeta intenso Citoplasma lila con granulaciones violetas Ncleo purpura oscuro. Citoplasma presenta tonalidades azules Ncleo purpura oscuro. Citoplasma presenta tonalidades azules Ncleo violeta azulado clarito

Citoplasma pardo rojizo. Ncleo violeta

No se han encontrado

Citoplasma basfilo Ncleo morado clarito Ncleo de color moradito no muy condensado Citoplasma azul grisceo Ncleo de color moradito no muy condensado Citoplasma azul grisceo Ncleo violeta azulado. Citoplasma azul grisceo Citoplasma ligeramente azulado

Ncleo violeta intenso. Citoplasma azulado Ncleo purpura oscuro. Citoplasma morado claro

Eritrocitos azulados/morados Y plaquetas azules

Ncleo violeta claro Citoplasma color rojoanaranjado intenso. Ncleo violeta claro Citoplasma color rojoanaranjado intenso. Ncleo violeta azulado

No se han encontrado

Eritrocitos naranjas o rosados. Plaquetas Violetas o purpuras. Eritrocitos naranjas o rosados. Plaquetas Violetas o purpuras. Eritrocitos medio rojizos plaquetas violetas/azuladas

Tincin de Wright Rpida

No se han encontrado

Ncleo purpura oscuro. Citoplasma morado claro

Tincin de MayGrnwald

No se han encontrado

Tincin de MayGrnwald Giemsa

Ncleo azul celeste. Citoplasma azul grisceo

Citoplasma rosado con granulaciones amarillentas. Ncleo purpura

No se han encontrado

Ncleo violeta azulado oscuro. Citoplasma azulado Ncleo azul /violeta intenso Citoplasma lila

Eritrocitos rosa plido plaquetas moradas

Tincin Panptica Rpida

Ncleo morado oscuro. Citoplasma rosado con granulaciones rojo violeta.

Ncleo morado. Citoplasma azul, con grnulos rojos o rojo anaranjado.

No se han encontrado

Ncleo laxo violeta. Citoplasma azul celeste.

Ncleo violeta. Citoplasma azul celeste.

Eritrocitos: Color ros/violeta a plido o intenso. Plaquetas: Color violeta plido o prpura.

34

PRCTICA N12: RECUENTO DIFERENCIAL LEUCOCITARIO (RDL).

FUNDAMENTO:
Aparte de conocer el nmero total de eritrocitos es importante conocer la proporcin de cada una de las subpoblaciones leucocitarias. (Neutrfilos, Monocitos, Linfocitos, Basfilos, Eosinfilos).

MATERIALES:
o o o Microscopio Bata Papel de filtro

REACTIVOS:
Aceite de inmersin Lquido para limpiar el objetivo

MUESTRAS:
Extensin capilar de sangre teida. (La mejor que tengamos)

TCNICA:
1. Con el objetivo de (40x), visualizamos la zona ideal de la extensin. 2. Pasamos al objetivo de (100x) y recorremos la zona de observacin ideal haciendo un barrido en zic-zac.

3. Vamos a contar 100 leucocitos especificando cada tipo que es cada uno. 4. Al finalizar la prctica se limpia el objetivo y se seca para que no queden restos del aceite y del lquido limpiador.

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22

Cogimos nuestra muestra de la tincin panptica rpida y empezamos hacer el recuento.

35

Neutrfilos segmentados 50% Neutrfilos en cayado 4% Monocitos 4% Leucocitos Eosinfilos 2%

Linfocitos 43%

Basfilos 0%

Observaciones:

Nuestro recuento fue 103 leucocitos, y todo ellos se encontraban en los parmetros normales. Ninguna cantidad se vea alterada por lo cual no indicaban una posible: Para el recuento total de leucocitos en una persona se usa el protocolo NCCLS: Consiste en contar los leucocitos presentes en 4 cuadrados observaciones, y se divide por 4 la cifra obtenida, para calcular el nmero de leucocitos que hay en un cuadrado grande. Neutrofilia Neutropenia Linfopenia Linfocitosis Basofilia Basopenia Monocitosis Monopenia Eosinocitosis Eosinsopenia

36

PRCTICA N13: TINCIN Y CONTAJE DE RETICULOCITOS.

FUNDAMENTO:
Podemos observar los reticulocitos a microscopio ptico mediante la tincin de colorantes vitales, azul de metileno nuevo o azul de cresil brillante. Estos colorantes dan lugar a la precipitacin de los restos de ARN, y se observan como filamentos de color azul intenso en el interior de la clula. Segn el grado de maduracin que posea el reticulocito presentar un modelo de retculo distinto, de ovillo denso en el caso de los ms inmaduros o de grnulos escasos para los ms maduros.

MATERIALES:
o o o o o o o Papel de filtro Tubos de ensayo Guantes Pipetas Pasteur Portas esmerilados Capilares Microscopio

REACTIVOS:
Azul de cresil brillante Aceite de inmersin Lquido para limpiar el objetivo

MUESTRAS:
Sangre venosa anticoagulada con EDTA

TCNICA:
1. Mezclamos 3 gotas de la sangre con 3 gotas del colorante, homogenizamos suavemente y dejamos incubar esa mezcla durante 10 minutos a 37. (Temperatura de la mano). 2. Una vez incubado realizamos una extensin por persona. 3. Dejamos secar la extensin y la visualizaremos con el microscopio 4. Realizacin del recuento: Se divide en 4 campos y observamos el 1, se cuenta el total de eritrocitos ms los reticulocitos. 37

Ejemplo: 80 Eritrocitos y 3 reticulocitos. Para el recuento de reticulocitos contaremos 2000 clulas en total, de forma que para contabilizar los eritrocitos por campo hare una divisin mental en cuadrantes y los eritrocitos que cuente en un cuadrante los multiplicare por 4, y los eritrocitos los contare sobre el campo total. Al final del recuento establecer el % de reticulocitos.

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22 -CODIGO DEL TUBO DE SANGRE CON EDTA: 023033

Para visualizarlos hemos puesto el condensador a altura media, y el diafragma casi cerrado, se ve teido violeta, y la tonalidad depende del grado de maduracin que tengan, contra ms maduros ms oscuros.

Clculos: He tenido que contar 3 campos de observacin para que me dieran los 1000 aproximadamente, y mi compaero contaba los otros 1000 restantes (2000 total) y luego hacer la media del % de reticulocitos que haba.

Campo 1: Eritrocitos 108 Reticulocitos 5 108x4 = 432 Eritrocitos en el primer campo Campo 2: Eritrocitos 82 Reticulocitos 4 82x4 = 432 Eritrocitos en el primer campo

Campo 3: Eritrocitos 80 Reticulocitos 4 80x4 = 432 Eritrocitos en el primer campo

38

Eritrocitos totales: 1080 Reticulocitos totales: 13 1080 --------- 13

100 --------- x

X = 1,2 % reticulocitos

Eritrocitos totales: 1100 Reticulocitos totales: 10

1100 --------- 10
100 --------- x

x = 0,9 % reticulocitos

Media de reticulocitos: 2180 --------- 23

100 --------- x

x = 1,055% reticulocitos

En adultos de 0.5 a 1,5%, es decir, se puede emitir el resultado y no hace falta una correccin entra en los valores normales. Observaciones: Si el porcentaje de reticulocitos es menor de 0,5% se dice que se tiene una Anemia arregenerativa. Si el porcentaje de reticulocitos es mayor de 1,5% se dice que se tiene una Anemia regenerativa. Cuando existe anemia, con disminucin del nmero de hemates. Su valor deber ser corregido de acuerdo a la intensidad de la anemia, aplicndose la siguiente frmula: % Reticulocitos corregidos = % reticulocitos observados x hematocrito del paciente hematocrito normal (45)

39

Hemos realizado primero el contaje de reticulocitos antes que el HCT, porque stos maduran rpido (1,2dias) y la sangre que tenamos en el laboratorio estaba recin trada del banco.

40

PRCTICA N14: DETERMINACIN DEL HEMATOCRITO POR EL MICROMETRO.

FUNDAMENTO:
El HCT puede determinarse por mtodos manuales o por mtodos automticos los mtodos manuales consisten en la centrifugacin de la sangre aplicndola una fuerza de 2.000 a 5.000 g (macromtodo) o de 12.000 a 15.000 g (micrometodo) Los mtodos automticos pueden basarse en 2 principios: -El clculo matemtico del HCT a partir de los valores de RBC y de volumen corpuscular medio obtenidos electrnicamente con anterioridad. -El anlisis de la sombra que produce la poblacin eritrocitaria, al reflejarse en un cuerpo oscuro. Con los mtodos manuales se cuentan, junto con el volumen de los hemates el de los leucocitos, el de las plaquetas y el del plasma que queda atrapado entre los hemates. Por ello, el valor de HCT conseguido con mtodos automticos es ms exacto y suele ser 1 o 2 unidades ms bajo que el logrado con mtodos manuales.

MATERIALES:
o o o o o Plastilina Capilares Centrifugadora de HCT Algodn Lector de hematocrito o regla milimetrada

REACTIVOS:
En esta prctica no usamos reactivos

MUESTRAS:
Sangre anticoagulada con EDTA

TCNICA:
1. La determinacin ha de hacerse por duplicado 2. Llenar cada tubo capilar con la sangre, hasta las partes de su longitud. El llenado se efecta por capilaridad y se realiza poniendo en contacto uno de los extremo del tubo capilar con la gota de sangre o introducindolo en el tubo de sangre e inclinando ste, posteriormente, para facilitar el proceso 3. Limpiar el exterior de cada tubo con un trozo de algodn o con una gasa.

41

4. Sellar el extremo de cada tubo por el que ha entrado la sangre con plastilina. por el que ha entrado la sangre con plastilina. Para ello, se hace penetrar el tubo en la plastilina, o incluso se atraviesa sta con aqul. 5. Colocar, debidamente equilibrados, los tubos en la centrifuga. En ella los tubos se sitan con su extremo tapado hacia fuera, ajustados al borde exterior y adecuadamente encajados en sus surcos. 6. Centrifugar los tubos a unas 12.000 g durante 5 minutos.

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22

Foto lector de HCT:

Resultado Lector: Formula: HCT 2% HCT

Capilar 1: 50% Capilar 2: 49% 50x2/100= 1 11. (Podemos emitir el resultado ya que se cumple a norma del HCT.)

42

Resultado Regla: Procedimiento Capilar 1: 2,3cm (Plasma), 4,7 (total) 4,7 --------- 100
2,3 --------- x

x = 48,93% HCT

Capilar 2: 2,4cm (Plasma), 4,9 (total) 4,9 --------- 100

2,4 --------- x

X = 48,97% HCT

Formula: HCT 2% HCT

48,97.2/100 =0,97 0,04 0,97 (Podemos emitir el resultado ya que se cumple a norma del HCT.) Resultado final: Media de HCT: 48,95% entra en los parmetros normales. Para un hombre: Podemos decir que entra en el valor de HCT (45-52%) Para una mujer: No entra en el valor de HCT (42-47%) Observaciones: Puede ser bastante normal que en nuestra sangre del banco de sangre tengamos un HCT alterado, ya que para que nuestra sangre este en un estado ptimo la analizan antes y le quitan plasma.

43

PRCTICA N15: RECUENTO DE ERITROCITOS EN CMARA.

FUNDAMENTO:
Para el recuento en cmara de glbulos rojos, se diluye la sangre problema en un lquido apropiado y posteriormente se deposita en la cmara de recuento, donde se cuentan las clulas presentes en algunos cuadrados de uno de los reticulocitos.

MATERIALES:
o o o o o o o Papel de filtro Micropipetas Guantes Puntas de pipeta Tubos Eppendorf Cmara de recuento Cubre objetos

REACTIVOS:
Liquido Hayem Agua

MUESTRAS:
Control normal de sangre CBC-3D Control normal. No es una muestra de un paciente RBC en 4,54 0,2 millones/mm (4,34 4,74)

TCNICA:
1. Diluir el control. Volumen.Control que cojo 1/100 = Vtotal = 2ml (Volumen.Control 10l/2000 l) 44

2. Voy a colocar mi cmara de recuento y voy a familiarizarme con ella, la cmara se ve con varios objetivos, pero el recuento se hace con el de (40x). 3. Se coloca el cubre sobre la cmara. 4. Una vez est el cubre en la cmara, disperso la muestra (en el hueco que hay entre la cmara y el cubre) 5. Contar las clulas y luego aplicar la formula RBC= Hx10x200x4

RESULTADOS:
-CODIGO DEL MICROSCOPIO: 20D6/22

Contaremos:

Resultados y observaciones:

Dentro de cada cuadro azul empezaremos hacer el recuento.

45

Resultados: De un cuadrado grande (16 cuadrados) se encuentran 4 zonas de observacin, cada zona tiene 25 cuadrados, se realiza el recuento en cada una de ellas y el resultado que nos dio fue: Zona 1: 93 Zona 2: 114 Zona 3: 117 Zona 4: 97 TOTAL: 421 RBC

RBC= 421X10X200X4 = 3.368.000 Mi RBC: 3.365.000

Tabla de todos los resultados de clase. OBSERVADORES OBSERVARDOR 1 OBSERVARDOR 2 OBSERVARDOR 3 OBSERVARDOR 4 OBSERVARDOR 5 OBSERVARDOR 6 OBSERVARDOR 7 OBSERVARDOR 8 OBSERVARDOR 9 OBSERVARDOR 10 RBCS 4.064.000 3.952.000 3.120.000 3.632.000 3.496.000 4.392.000 4.560.000 4.352.000 3.856.000 3.648.000 46

OBSERVARDOR 11 OBSERVARDOR 12 OBSERVARDOR 13 OBSERVARDOR 14 OBSERVARDOR 15 OBSERVARDOR 16 OBSERVARDOR 17 OBSERVARDOR 18 OBSERVARDOR 19 OBSERVARDOR 20 OBSERVARDOR 21 OBSERVARDOR 22 OBSERVARDOR 23 OBSERVARDOR 24 OBSERVARDOR 25 OBSERVARDOR 26 OBSERVARDOR 27 OBSERVARDOR 28 OBSERVARDOR 29 OBSERVARDOR 30

4.360.000 3.488.000 3.368.000 4.230.000 4.070.000 3.672.000 3.648.000 3.850.000 4.982.000 4.960.000 3.872.000 4.576.000 3.352.000 3.112.000 3.728.000 4.510.000 4.930.000 4.520.000 4.540.000 3.440.000

Valor normal RBC: 4,34 4,74 Media RBC Y 20% DE correccin: 20% de 4,54 = 0,9

Todos los valores que no entren entre 3,44 5,64 NO entran en el intervalo de control, es decir, no se ha trabajado con exactitud.

Mi RBC: 3.365.000 Desviacin estndar: 478.241,1107 Media RBC de la tabla: 4.128.000 IC= 4.128.000 478.241,1107 en general la clase ha trabajado con exactitud los valores esta correctos. 1- 4.606.241,11 2- 3.649.758,88 IC MEDIA: 4.127.999,99 en general la clase ha trabajado con exactitud los valores estn correctos.

47

PRCTICA N16: RECTA DE CALIBRADO DE DICROMATO POTASICO.

FUNDAMENTO:
Aadir la concentracin de K2Cr2O7 en una muestra utilizando una recta de calibrado preparada a partir de una solucin madre que contiene 280ppm de K2Cr2O7. 280ppm = 280mg/l

MATERIALES:
o o o o o o Papel de filtro Guantes Gravilla Parafilm Tubos de ensayo de 5ml Pipetas graduadas de 1,2,3,5 ml 48

o o o

Fotmetro Papel milimetrado Prepipeta

REACTIVOS:
Dicromato potsico Agua desionizada o destilada

MUESTRAS:
La preparamos en un tubo con 3ml de la solucin madre ms 2 ml de agua desionizada

TECNICA:
1. Preparamos la solucin madre con 280 ppm del Dicromato potsico hasta un volumen de 1l de agua desionizada. 2. Prepara la batera de diluciones con 8 tubos, todos de un volumen final de 5ml y que tengan las siguientes concentraciones: (Lo pongo en resultados) 3. Pasar cada tubo por el fotmetro a una longitud de onda de 405 nanmetros, de menor a mayor concentracin, utilizando el tubo 8 como blanco de reactivo 4. Pasar la muestra por el fotmetro 5. Una vez obtenida la absorbancia de cada uno de los tubos que forma parte de la batera de diluciones, procedemos a construir la recta que relacione absorbanciaconcentracin 6. Con la recta ya dibujada intercolamos la absorbancia de la muestra para obtener as su concentracin.

RESULTADOS:
Batera de tubos: TUBO 1 ----------- 280ppm ------------ 5ml TUBO 2 ----------- 224ppm ------------ 4ml TUBO 3 ----------- 196ppm TUBO 4 --------------------- 3,5ml

140ppm ------------ 2,5ml

TUBO 5 ----------- 112ppm ------------ 2ml TUBO 6 ----------- 84ppm ------------ 1,5ml TUBO 7 ----------56ppm ----------- 1ml

TUBO 8 ----------- 0ppm ------------ 0ml

Estas disoluciones no son seriadas, las realizamos todas a partir de la madre.

49

MEDIA: 0,301 (A) 164 ppm

50

51

PRCTICA N17: PROTOCOLO HEMOGLOBINA.

52

RESULTADOS:
-CODIGO DEL TUBO DE SANGRE CON EDTA: 243364 Lo haremos por el mtodo MICRO:

RT (Ml) Calibrador (l) Muestra (l) Control (l) Observaciones:

Blanco 2,5 ----

Patrn 2,5 10 ---

Muestra 2,5 -10 --

Control 2,5 --10

Patrn: Da relacin entre absorbancia y concentracin es imprescindible en la determinacin. Control: Tiene la funcin de valorar si se ha realizado bien la tcnica. [13,3 14,5] Valor medio (Intervalo) Observaciones a la tcnica: -Limpio la punta de la pipeta por los laterales antes de recoger la muestra. Para recoger muestras tomaremos 2 veces el contenido antes de tomar la muestra definitiva. -La absorbancia est sobre 0,407. -El ultimo reactivo del reactivo de Rakim es un detergente, si se homogeniza se forma espuma, por lo cual a la hora de homogenizar se hace lentamente.

Resultados y clculos: Patrn: SPINREACT 15g/dl LOTE: 161A FECHA EXP: 07/2015 REFRIGERAR: 2-8C

53

Control: R&D Systems, Inc. LOTE: B113N FECHA EXP: 2014/02/05 REFRIGERAR: 2-8C

Usaremos la longitud de onda de 540() para obtener la absorbancia. Patrn: 0,354 Muestra: 0,342 Control: 0,341

Clculos con Patrn:

Concentracin Muestra = Absorbancia Muestra/Absorbancia Patrn x 15 Concentracin Muestra = 0,342/0,354 x 15 = 14,49 g/dL de Hb

Interpretacin del resultado: Hombre: Tiene la Hb dentro de los niveles estndar. Mujer: Tiene la Hb en estado muy optimo porque est justo en la mitad en los niveles estndar de la Hb en la mujer.

Concentracin Control = Absorbancia Control/ Absorbancia Patrn x 15 Concentracin Control = 0,341/0,354 x 15 = 14,44 g/dL de Hb

54

Clculos con Factor:

Absorbancia de la Muestra x Absorbancia Patrn 0,342x0,354 = 12,57g/dL de Hb

El resultado nos da bajo de los valores, en comparacin con la clase nos sali a todos menos de 0.407 de absorcin por ello , deducimos que esa pequea alteracin puede ser por el fotmetro o que la longitud de onda no fue la que pona que ussemos.

55

PRCTICA N20: PROTOCOLO HEMOGLOBINA A2.

56

RESULTADOS:
-CODIGO DEL TUBO DE SANGRE CON EDTA: 007866

Fase mvil- Solida o liquida Fase Liquida- Liquido o gaseoso

Observaciones: -Utilizamos un pH acido (carga positiva), para que la Hb se valla desplazando a lo largo de la resina. -Se realiza el hemolizado que es para romper los eritrocitos y con ello permitir que la Hb salga y valorarla. El pH es de 7,6 (Basico), con lo que cargo negativamente la resina. -La columna ha de estar lo mas verticalmente posible. -Elvido es la cantidad de reactivo que atraviesa la columna y se deposita en el tubo. -No hemos usado control por cuestin logstica (Ahorro). -El % de HbA2, no puede dar mas alto de los valores de referencia, ya que es sangre del banco, y de rasgo B-talasemico en ella, impide donacin. -Las cargas positivas y negativas se van uniendo.

Resultados en el espectrofotmetro: (A) Hb A2 0,329 (A) Hb total Fuera de rango Longitud de onda usada: 405nm -No podemos emitir resultados ya que la Absorbancia de la Hb total , se sale de rango y no podemos hacer un porcentaje.

57

PRCTICA N21: V.S.G (VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR).

FUNDAMENTO:
Es un parmetro que valora la velocidad de sedimentacin de los eritrocitos que es muy inespecfico, pero se sigue recomendando su utilizacin porque la relacin coste-informacion. Aunque sea inespecfico, una de sus grandes ventajas es, que sirve para valorar el curso de una enfermedad y la evolucin frente al tratamiento. La tcnica que vamos a utilizar es la de Westerngreen. (Fotometria por luz infrarojo) +Longitud de Honda, -Energia. Hay 3 fases de sedimentacin: 1: Agrupacin 2: Sedimentacin 3 Empaquetamiento

*Fase1: Es lo que afecta en este parmetro, el tiempo que tarden en agruparse da un resultado bueno o malo. Se mide en mm/h

MATERIALES:
o o Sistema de pipetas y gradilla de Westerngren Reloj

REACTIVOS:
Citrato Sdico 58

MUESTRAS:
Sangre anticoagulada con EDTA (El anticoagulante ideal para esta determinacin es el citrato sdico [Tapon NEGRO])

TCNICA:
1. Introducir y mezclar la sangre con el citrato sdico hasta el volumen marcado en dicho tubo. 2. Introducir la pipeta en el tubo y presionar hasta que la muestra alcance la marca de 0. 3. Introducir la pipeta con el tubo dentro de la gradilla. 4. Dejar reposar 1 hora. 5. Valorar lo que ha bajado la calumna de rojos.

RESULTADOS:
-CODIGO DEL TUBO DE SANGRE CON EDTA: E0014 14 010106 21 TABLA DE VALORES: EDAD 0-15 17-50 51-60 61-70 17-50 51-60 61-70
X 20

Nios adultos y jovenes Hombres adultos

Mujeres adultas

510 43 63 64 63 95 105

LIMITE SUPERIOR NORMALIDAD 15 10 12 14* 12 19 20

*Datos relativamente fiables, porque al llegar a esta edad es difcil establecer para este parmetro valores de referencia. Observaciones: A esta practica le afectan factores de temperatura, verticalidad, luz, etc

59

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA V.S.G

N --- VSG N --- VSG TAMAO --VSG TAMAO ---VSG POSIBLES ALTERACIONES MORFOLOGICAS --VSG

CELULARES

ALBMINA--VSG

PLASMTICAS

GLOBULINAS/FIBRIN GENO --- VSG GLOBULINAS/FIBRIN GENO --- VSG

60