COLESTEROL - LDL DIRECTO

MÉTODO COLORIMÉTRICO
Para la determinación “in vitro” del colesterol – LDL en suero

PRINCIPIO DEL TEST PROCEDIMIENTO

El reactivo permite determinar directamente los niveles de colesterol-LDL en suero o
plasma, sin necesidad de pretratamiento ni centrifugación de la muestra. Técnica BL PR CAL
El método consiste en dos pasos específicos. En el primero de ellos, los quilomicrones, μL μL μL
VLDL y HDL se eliminan selectivamente, no así el LDL, mediante reacciones de oxidación Agua desionizada 5,00 -- --
(colesterol esterasa, colesterol oxidasa) y degradación (catalasa) originando un complejo Muestra -- 5,00 --
denominado colestenona y H2O2. En el segundo paso el LDL presente en la muestra, con Calibrador -- -- 5,00
ayuda de tensioactivos específicos, se transforma en un complejo coloreado (quinona) Reactivo (A) 300 300 300
cuantificable espectrofotométricamente.
Mezclar e incubar a 37ºC / 5 min Leer la absorbancia (Abs1 PR
UTILIDAD DIAGNÓSTICA o Abs1 CAL) de la muestra y del calibrador.
Las LDL son lipoproteínas de baja densidad, que transportan colesterol, triglicéridos y Reactivo (B) 100 100 100
lípidos, en la sangre a diversas partes del cuerpo. Un nivel elevado de colesterol-LDL está
relacionado con infartos de miocardio y enfermedades cardiovasculares. Otras patologías Mezclar e incubar a 37ºC / 5 min Leer frente al blanco de
que presentan valores elevados de LDL son: nefrosis, diabetes, hipotiroidismo, obesidad. reactivo, las absorbancias de la muestra (Abs2 PR) y del
Una única prueba de laboratorio no permite establecer un diagnóstico. Los resultados se calibrador (Abs2 CAL).
han de evaluar en el contexto de todos los datos clínicos y de laboratorio obtenidos. Lectura
Longitud de onda: 600 nm
REACTIVOS Blanco: el contenido del tubo BL
Kit 1 x 40 mL. (Ref. 99 18 70). Contiene: Cubeta: 1 cm. paso de luz
A.1 x 30 mL Reactivo (A) Ref. 99 18 72
B.1 x 10 mL Reactivo (B) Ref. 99 18 74 CÁLCULOS
C.1 x 2 mL Calibrador colesterol-LDL liofilizado Ref. 99 18 78 (Abs2 PR - Abs1 PR)
x conc. del calibrador = colesterol-LDL (mg/dL)
Kit 1 x 80 mL. (Ref. 99 18 80). Contiene: (Abs2 CAL - Abs1 CAL)
A.1 x 60 mL Reactivo (A) Ref. 99 06 13
B.1 x 20 mL Reactivo (B) Ref. 99 06 16 Unidades S.I.
C.1 x 2 mL Calibrador colesterol-LDL liofilizado Ref. 99 18 78 mg/dL x 0,0259 = mmol/L

VALORES DE REFERENCIA
Riesgo de enfermedades coronarias:
< 100 mg/dL Óptimo
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO
130 - 159 mg/dL Moderado
Los reactivos (A) y (B) están listos para su uso.
160 - 189 mg/dL Alto
Calibrador: Rehidratar el vial con 2 mL de agua desionizada. La concentración viene
> 189 mg/dL Muy alto
indicada en la etiqueta del vial.

COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVO PRESTACIONES. CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO

Reactivo de trabajo Las características de funcionamiento del producto dependen tanto del reactivo como del
Las concentraciones en los reactivos son: sistema de lectura manual o automático empleados. Los siguientes datos se han obtenido
Reactivo (A) de forma manual:
Tampón Goods pH 7,0 100 mM
N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3,5-dimetoxianilina 0,45 mM Sensibilidad, como límite de detección: 4 mg/dL
Catalasa ≥ 225 U/L Linealidad: El ensayo es lineal hasta 500 mg/dL. Para concentraciones mayores, diluir la
Colesterol esterasa ≥ 600 kU/L muestra 1/2 con salina (NaCl 0,9%). Multiplicar el resultado por 2.
Colesterol oxidasa ≥ 380 kU/L Exactitud, como % de recuperación: 98,5%
Estabilizantes no reactivos Precisión en la serie, como CV%: 0,68%
Precisión entre series, como CV%: 0,96%
Reactivo (B) Veracidad. Los resultados obtenidos con el reactivo no presentan diferencias significativas
Tampón Goods pH 7,0 100 mM al compararlo con el reactivo considerado de referencia.
4-aminoantipirina 1,2 mM Los datos detallados del estudio de las prestaciones del reactivo están disponibles bajo
Peroxidasa ≥ 1200 kU/L demanda.
Estabilizantes no reactivos
INTERFERENCIAS
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Pueden interferir en el ensayo concentraciones de ác. ascórbico > 50 mg/dL, hemoglobina
Los componentes del kit mantenidos a 2 - 8ºC son estables hasta la fecha de caducidad > 500 mg/dL y de bilirrubina > 20 mg/dL,muestras lipémicas.
indicada en la etiqueta. Los reactivos (A) y (B), una vez abiertos son estables 2 meses a No intercambiar reactivos de diferentes lotes.
2-8ºC, protegidos de la luz solar directa. No utilizar muestras hemolizadas, ni envejecidas.
El calibrador, una vez rehidratado es estable durante 28 días a 2-8ºC.
CONTROL DE CALIDAD
Indicaciones de alteración de los reactivos: Es recomendable la inclusión de sueros control, Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) y
Presencia de partículas o turbidez. Blanco del reactivo de trabajo > 0,100 Seriscann Anormal (Ref. 99 46 85) en cada proceso de medida para verificar los resultados.
Se aconseja que cada laboratorio establezca su propio programa de control de calidad y los
procedimientos de corrección de las desviaciones detectadas.
MATERIAL NECESARIO NO SUMISTRADO
Material común de laboratorio. AUTOANALIZADORES
Espectrofotómetro, analizador automático o fotómetro termostatizado a 37ºC. Cubeta de Adaptaciones a distintos analizadores automáticos están disponibles bajo demanda.
1cm de paso de luz.
BIBLIOGRAFÍA
Freedman, D., et al., (2004), Clin. Chem., 50, 1189-1200.
PRECAUCIONES Methods of Enzymatic Analysis, 3rd Edition, VIII, Edited by H. U. Bergmenyer. (1985),
Los reactivos contienen azida sódica al 0,09%, manipular con precaución. 154 - 160.
Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos. El calibrador Bachorick, P.S., et al. (1995) Clin. Chem., 41, Nº 10.
debe considerarse como una muestra humana y por lo tanto potencialmente infeccioso. Tietz, NW., Textbook of Clinical Chemistry 5th Edition, W.B. Saunders, Philadelphia (2012).
Utilizar protección adecuada. Se aconseja consultar la ficha de datos de seguridad antes de CLSI Guidelines and Standards, CLSI, Wayne, P.A
la manipulación del reactivo. La eliminación de residuos debe hacerse según la normativa Young D.S., Effect of drugs on Clinical Lab. Test, 5th Ed. AACC Press (2000).
local vigente. National Cholesterol Educarion Program Expert Panel. Third report of the National
Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and
MUESTRA Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (ATP III), (2001) NIH Publication. Bethesda:
Suero. El suero puede conservarse a 2 - 8ºC durante 1 día. No congelar. National Heart, Lung, and Blood Institute.
Zapico E. y Ordóñez J. (2002),Clin Invest Ar ter ioscl;14(5):272-6.

QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.

Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN www.qca.es
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: 11.2021 PRO4-9_LDLDI_11
LDL - CHOLESTEROL DIRECT
COLORIMETRIC METHOD
For “in vitro” determination of LDL - Cholesterol in serum

PRINCIPLE PROCEDURE
The LDL-cholesterol reagent allows measuring the LDL-cholesterol fraction levels in serum
or plasma directly, without the need for any sample pretreatment or centrifugation.
The method consists of two specific steps. In the first one, chylomicron, VLDL and HDL are Procedure BL SA CAL
selectively eliminated by means of specific oxidation reactions with cholesterol esterase μL μL μL
and cholesterol oxidase, and also by a specific degradation reaction wiht catalase, forming Deionized water 5.00 -- --
cholestenone and H2O2. Sample -- 5.00 --
In the second step the remainder of LDL-cholesterol can be spectrophotometrically Calibrator -- -- 5.00
measured when a color is formed as it is transformed (quinone complex) by the presence Reagent (A) 300 300 300
of specific surfactants.
Mix well and incubate at 37ºC / 5 min Read the absorbance
DIAGNOSTIC USE (Abs1 PR o Abs1 CAL) of the sample and of the calibrator.
LDL are low density lipoprotein, they transport cholesterol, triglycerides and lipids to cells. Reagent (B) 100 100 100
Even within the normal range of total cholesterol concentrations, an increase in LDL
cholesterol can occur with an associated increased risk for coronary heart disease. High Mix well and incubate at 37ºC / 5 min Read (against the
levels of LDL could be associated with obesity, diabetes and nephrosis. reagent blank), the absorbance of the sample (Abs2 PR) and of
Single test result could not be used to make a clinical diagnosis. It should integrate clinical the calibrator (Abs2 CAL).
and laboratory data.
Reading:
REAGENTS Wavelenght: 600 nm
Kit 1 x 40 mL. (Ref. 99 18 70). Contents: Blank: the contents of BL
A. 1 x 30 mL Reagent (A) Ref. 99 18 72 Cuvette: 1 cm. light-path
B. 1 x 10 mL Reagent (B) Ref. 99 18 74
C. 1 x 2 mL Freeze-dried LDL-cholesterol calibrator Ref. 99 18 78 CALCULATIONS
(Abs2 PR – Abs1 PR)
Kit 1 x 80 mL. (Ref. 99 18 80). Contents: x conc. of calibrator = LDL-cholesterol (mg/dL)
A. 1 x 60 mL Reagent (A) Ref. 99 06 13 (Abs2 CAL – Abs1 CAL)
B. 1 x 20 mL Reagent (B) Ref. 99 06 16
C. 1 x 2 mL Freeze-dried LDL-cholesterol calibrator Ref. 99 18 78
S.I. Units
mg/dL x 0.0259 = mmol/L
WORKING REAGENT PREPARATION
REFERENCES VALUES
Reagents (A) and (B) are ready-to-use.
Coronary heart disease risk:
The calibrator, should be rehydrated with 2 mL of deionized water and let stand for 20 min
< 100 mg/dL Optimal
prior to be used. Its concentration is stated on the vial label.
130 - 159 mg/dL Borderline high
160 - 189 mg/dL High
REAGENT COMPOSITION
> 189 mg/dL Very high
The concentrations in the reagents are:
Reagent (A)
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Good´s buffer pH 7.0 100 mM
The performance characteristics depend on the method used. It is recommended to
N-(2-hydroxy-3-sulphopropyl)-3.5-dimethoxyaniline 0.45 mM
calculate these data for each particular test protocol. These results have been obtained
Catalase ≥ 225 U/L
using an autoanalyzer.
Cholesterol estearase ≥ 600 kU/L
Cholesterol oxidase ≥ 380 kU/L
Sensitivity, as detection limit: 4 mg/dL
Non reactive stabilizers
Linearity: 500 mg/dL. Samples that give higher concentration should be diluted in saline
NaCl 0.9% (1+1) and the final result have to be multiplied per 2.
Reagent (B)
Accuracy: 98.5%
Good´s buffer pH 7.0 100 mM
Repetitivity, as CV%: 0.68%
4-aminoantipyrine 1.2 mM
Reproducibility, as CV%: 0.96%
Peroxidase ≥ 1200 kU/L
Trueness: Results obtained with this reagent did not show systematic differences when
Non reactive stabilizers
compared with reference reagent.
Details of the comparison experiments are available on request.
STORAGE AND STABILITY
When kept at 2 - 8ºC, the reagent will remain stable until the expiration date stated on the
INTERFERENCES
label.
Concentrations of ascorbic acid higher than 50 mg/dL, hemoglobin higher than 500 mg/dL
Reagents (A) and (B), once opened are stable for 2 months when stored at 2º - 8ºC and
and of bilirubin higher than 20 mg/dL can interfere with the assay.
protected from direct sunlight.
Discard aged, hemolyzed or lipemic sera.
Once rehydrated, the calibrator will remain stable for 28 days when stored at 2º - 8ºC.
Signs of reagent deterioration: QUALITY CONTROL
Presence of particles or turbidity in the reagent. Working reagent blank > 0.100 Control serum, Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) and Seriscann Anormal (Ref. 99 46 85)
should be included in each test series. Each particular laboratory should establish its own
ADDITIONAL EQUIPMENT control program.
General laboratory equipment.
Spectrophotometer or photometer thermostatable at 37ºC. Cuvette: 1 cm light-path. AUTOANALYZERS
Adaptations to different autoanalyzers are available on request.

CAUTION REFERENCES
The reagents contain sodium azide at 0.09%. Handle with care. Freedman, D., et al., (2004), Clin. Chem., 50, 1189-1200.
The safety statements are on the label. It is advisable to look at the SDS before using Methods of Enzymatic Analysis, 3rd Edition, VIII, Edited by H. U. Bergmenyer. (1985),
the reagent. The calibrator must be considered as a human sample, and, thus, potentially 154 - 160.
infectious. Use adequate protection. Bachorick, P.S., et al. (1995) Clin. Chem., 41, Nº 10.
The disposal of the residues has to be made according to local regulations. Young D.S., Effect of drugs on Clinical Lab. Test, 5th Ed. AACC Press (2000).
National Cholesterol Educarion Program Expert Panel. Third report of the National
Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and
Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (ATP III), (2001) NIH Publication. Bethesda:
SAMPLE National Heart, Lung, and Blood Institute.
Serum. The serum samples can be kept at 2 - 8ºC for 1 day. Do not freeze. Zapico E. y Ordóñez J. (2002),Clin Invest Ar ter ioscl;14(5):272-6.

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Revision: 11.2021 PRO4-9_LDLDI_11
CHOLESTEROL - LDL DIRECTE
MÉTHODE COLORIMÉTRIQUE
Pour la détermination in vitro du cholestérol-LDL dans le sérum

PRINCIPE TECHNIQUE
Le réactif permet de déterminer directement les taux de cholestérol-LDL dans le sérum ou
le plasma, sans prétraitement ni centrifugation préalable de l’échantillon. Technique BL ESSAI CAL
La méthode consiste en deux étapes spécifiques. Pendant la première étape, les μL μL μL
chylomicrons, le VLDL et le HDL sont sélectivement éliminés, à l’exception du LDL, par Eau déionisée 5,00 -- --
des réactions d’oxydation (cholestérol estérase, cholestérol oxydase) et une dégradation Échantillon -- 5,00 --
(catalase) pour former un complexe qui est appelé cholesténone et H2O2. Lors de la Calibrateur -- -- 5,00
seconde étape, le LDL présent dans l’échantillon se transforme, à l’aide de tensioactifs Réactif (A) 300 300 300
spécifiques, en un complexe coloré (quinone) quantifiable par spectrophotométrie.
Mélanger et incuber pendant 5 minutes à 37ºC. Lire l’absorbance
UTILITÉ DE DIAGNOSTIC
(Abs1 ESSAI ou Abs1 CAL) de l’échantillon et du calibrateur:
LDL sont lipoprotéines de faible densité. Ils transportent le cholestérol, les triglycérides et
les lipides dans le sang à différentes parties du corps. Un niveau élevé de cholestérol-LDL Réactif (B) 100 100 100
est associée à des crises cardiaques et les maladies cardiovasculaires. D’autres maladies
qui ont des niveaux élevés de LDL sont: la néphropathie, diabète, l’hypothyroïdie, l’obésité. Mélanger et incuber pendant 5 minutes à 37ºC. Lire contre le
Un unique test de laboratoire ne permet pas d’établir un diagnostic. Les résultats doivent blanc de réactif les absorbances de l’échantillon (Abs2 ESSAI) et
être évalués dans le contexte de toutes les données cliniques et de laboratoire obtenues. du calibrateur (Abs2 CAL).

RÉACTIFS Lecture
Kit 1 x 40 mL. (Réf. 99 18 70). Contenu: Longueur d’onde: 600 nm
A. 1 x 30 mL Réactif (A) Réf. 99 18 72 Blanc: le contenu du tube BL
B. 1 x 10 mL Réactif (B) Réf. 99 18 74 Cuvette: 1 cm de trajet optique
C. 1 x 2 mL Calibrateur cholestérol-LDL lyophilisé Réf. 99 18 78
CALCULS
Kit 1 x 80 mL. (Réf. 99 18 80). Contenu: (Abs2 ESSAI - Abs1 ESSAI)
A. 1 x 60 mL Réactif (A) Réf. 99 06 13 x conc. du calibrateur = cholestérol-LDL (mg/dL)
B. 1 x 20 mL Réactif (B) Réf. 99 06 16 (Abs2 CAL - Abs1 CAL)
C. 1 x 2 mL Calibrateur cholestérol-LDL lyophilisé Réf. 99 18 78
Unités SI
mg/dL x 0,0259 = mmol/L

PRÉPARATION DU RÉACTIF DE TRAVAIL VALEURS DE RÉFÉRENCE

Les réactifs (A) et (B) sont prêts à l’emploi. Risque de maladie des artères coronaires:
Calibrateur: Réhydrater le flacon avec 2 mL d’eau déionisée et laisser reposer environ 20 < 100 mg/dL Óptimum
minutes avant utilisation. La concentration du calibrateur est indiquée sur l’étiquette du 130 - 159 mg/dL Modéré
flacon. 160 - 189 mg/dL Elevé
> 189 mg/dL Très Elevé
COMPOSITION DU RÉACTIFS
Les concentrations dans les réactifs sont les suivantes: PERFORMANCE. CARACTÉRISTIQUES DE FONCTIONNEMENT
Réactif (A) Le fonctionnement du produit dépend tant du réactif que du système de lecture manuel
Tampon Goods pH 7,0 100 mM ou automatique utilisé. Une technique manuelle a permis d’obtenir les données suivantes:
N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-diméthoxyaniline 0,45 mM
Catalase ≥ 225 U/l Sensibilité comme limite de détection: 4 mg/dL
Cholestérol estérase ≥ 600 kU/l Linéarité: L’essai est linéaire jusqu’à 500 mg/dL. Pour des concentrations plus élevées,
Cholestérol oxydase ≥ 380 kU/l diluer l’échantillon 1/2 avec une solution saline (NaCl 0,9%). Multipliez le résultat par 2.
Stabilisants non réactifs Exactitude: le pourcentage de récupération est de 98,5 %.
Réactif (B) Coefficient de variation dans la série: 0,68 %
Tampon Goods pH 7,0 100 mM Coefficient de variation entre les séries: 0,96 %
4-amino-antipyrine 1,2 mM Justesse. Les résultats obtenus avec le réactif ne sont pas significativement différents par
Peroxydase ≥ 1200 kU/l rapport au réactif de référence considéré.
Stabilisants non réactifs L’étude détaillée de la performance du réactif est disponible sur demande.

CONSERVATION ET STABILITÉ INTERFÉRENCES

Conservés à une température comprise entre 2 et 8ºC, les composants du kit sont stables L’acide ascorbique, l’hémoglobine et la bilirubine à des concentrations supérieures à 50 mg/
jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette. Après ouverture, les réactifs (A) et dL, 500 mg/dL et 20 mg/dL respectivement, ainsi que les échantillons lipémiques peuvent
(B) sont stables pendant 2 mois à une température comprise entre 2 et 8ºC, à l’abri de la interférer avec l’essai.
lumière solaire directe. Ne pas échanger les réactifs des différents lots.
Après réhydratation, le calibrateur est stable pendant 28 jours à une température comprise Ne pas utiliser d’échantillons hémolysés ni anciens.
entre 2 et 8ºC.
CONTRÔLE DE QUALITÉ
Les réactifs seront altéré si: Nous recommandons l’inclusion de sérums de contrôle Seriscann normale (Réf. 99 41 48)
Il existe une présence de particules ou de turbidité. Blanc réactif de travail > 0,100 et Seriscann anormale (Réf. 99 46 85) dans chaque processus de mesure pour vérifier les
résultats.
MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI Nous suggérons que chaque laboratoire d’établir son propre programme et les procédures
Matériel courant de laboratoire. de correction des écarts dans les mesures de contrôle qualité.
Spectrophotomètre, analyseur automatique ou photomètre thermostaté à 37 ºC. Récipient
de 1 cm de trajet optique. AUTOANALYSEURS
Des adaptations aux différents analyseurs automatiques sont disponibles sur demande.
PRÉCAUTIONS
Les réactifs contiennent de l’azide de sodium à 0,09 %. Manipuler avec précaution. BIBLIOGRAPHIE
Les indications de sécurité figurent sur l’étiquette des produits. Le calibrateur doit être Freedman, D., et al., (2004), Clin. Chem., 50, 1189-1200.
considéré comme un échantillon humain et donc potentiellement infectieux. Utiliser des Methods of Enzymatic Analysis, 3e édition, VIII, édité par H. U. Bergmenyer. (1985), 154 -
protections adéquates. Il est conseillé de consulter la fiche de données de sécurité avant de 160. (1985), 154 - 160.
manipuler le réactif. L’élimination des déchets doit être réalisée conformément aux normes Bachorick, P.S., et al. (1995) Clin. Chem., 41, Nº 10.
en vigueur. Tietz, NW., Textbook of Clinical Chemistry 5th Edition, W.B. Saunders, Philadelphia (2012).
CLSI Guidelines and Standards, CLSI, Wayne, P.A
Young D.S., Effect of drugs on Clinical Lab. Test, 5th Ed. AACC Press (2000).
ÉCHANTILLON National Cholesterol Educarion Program Expert Panel. Third report of the National
Sérum. Le sérum peut être conservé entre 2 et 8ºC pendant 24 heures. Ne pas congeler. Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and
Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (ATP III), (2001) NIH Publication. Bethesda:
National Heart, Lung, and Blood Institute.
Zapico E. y Ordóñez J. (2002),Clin Invest Ar ter ioscl;14(5):272-6.

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