Fluitest U/CSF

ULTRASENSITIVE PROTEIN

Order information: Limitations – interference:

Criterion: recovery + 10 % of initial values
Catalog No. Contents Icterus: No significant interference up to an index I of 20 (approximate conjugated
Hit I / 917 and unconjugated bilirubin concentration: (20 mg/dl).
H9601 R1 6 x 20 ml R2 6x 9 ml
(ILab* / AU*) Hemolysis: Due to protein nature of haemoglobin hemolysis leads elevated values
( * ) Kit contains only reagent barcode for Hitachi system. dependent on the degree of lysis of the erythrocytes.
No significant interference from:
System information: Ascorbic Acid Creatinine Glucose
Hitachi 911: ACN 171 Phosphorus Urea Magnesium
Hitachi 912/917: ACN 769 Sodium Citrate Caffeine Cefazolin Sodium
Chlorpromazine Calcium L-Dopa Gentamicin
Intended use: Sulfate Sodium Oxalate Uric Acid
For the quantitative determination of protein in urine and cerebrospinal fluid on
automated clinical chemistry analyzers. Testing procedure:
Summary: Applications for automated systems are available on request.
Urine is formed by ultrafiltration of plasma across the glomerular capillary wall. Materials provided:
Proteins with a relative molecule mass > 40 000 are almost completely retained, • Working solutions as described above
while smaller substances easily enter the glomerular filtrate. Additional materials required
Most CSF protein originates by diffusion from plasma across the blood-CSF barrier. • Calibrators and controls as indicated below
Elevated levels occur as a result of increased permeability of the blood-CSF barrier • 0.9% NaCl
or with increased local synthesis of immunoglobulins.
Turbidimetric methods using trichloroacetic acid (TCA) or sulfosalicylic acid (SSA) Manual procedure:
require precipitation of the protein in the sample; the resulting turbidity may be Wavelength: 505 nm
unstable and flocculate. Dye-binding methods such as Coomassie blue and Temperature: 37°C
pyrogallol red-molybdate exhibit different sensitivities to various proteins and the Cuvette: 1 cm
reagent may stain glassware. The Analyticon U/CSF assay is based on the method Zero adjustment: against reagent blank
described by Iwata and Nishikaze, later modified by Luxton, Patel, Keir and
Thompson. In this method, benzethonium chloride reacts with protein in a basic Blank Sample/Calibrator
medium to produce a turbidity that is more stable and evenly distributed than that R1 500µl 500 µl
observed with the SSA or TCA methodologies. This direct assay shows similar R2 200 µl 200 µl
reactivity to albumin and gamma-globulin, and no interference due to short peptides.
Interference from magnesium ions has been eliminated by the addition of EDTA. Mix, read absorbance (A1), then add:
Protein measurements in urine are used in the diagnosis and treatment of disease
conditions such as renal or heart diseases, or thyroid disorders, which are Sample/Calibrator --- 30 µl
characterized by proteinuria or albuminuria. NaCl (0,9%) 30 µl ---
CSF protein measurements are used in the diagnosis and treatment of conditions
such as meningitis, brain tumors, and infections of the central nervous systems. Mix, incubate 10 min. and read absorbance A2.

Test principle: Calculation:

The sample is preincubated in an alkaline solution containing EDTA, which A = (A2 – A1) sample or calibrator
denatures the protein and eliminates interference from magnesium ions.
Benzethonium chloride is then added, producing a turbidity that is read at 505 nm. The protein concentration in patient samples has to be calculated from A using
U/CSF protein determinations can be performed as an endpoint assay with sample mathematic function as logit/log or can be read from a graph using values of 6
blank or a rate assay. levels of standards. For zero value is recommended to use saline solution
(0,9%).
Reagent Concentration:
R1: Measuring /reportable range:
Sodium hydroxide 530 mmol/l Rate Assay:
EDTA 74 mmol/l 6-200 mg/dl (60-2000 mg/l)
R2: Endpoint Assay:
Benzethonium chloride 32 mmol/l 2-200 mg/dl (20-2000 mg/l)
Determine samples with U/CSF protein concentrations > 200 mg/dl (2000 mg/l) via
Preparation and stability: the rerun function. On instruments without rerun function, manually dilute samples
R1: ready to use. with 0.9% NaCl (eg. 1 + 3). Multiply the result by the appropriate dilution factor (eg.
R2: ready to use. 4).
The reagents are stable up to the stated expiry date:
at +2° to +8°C and protected from light. Expected values:
Onboard stability: Urine:
R1: 21 days opened and refrigerated on the analyzer Random < 12 mg/dl (< 120 mg/l)
R2: 21 days opened and refrigerated on the analyzer 24 hr < 150 mg/day

Notes: Cerebrospinal Fluid:

For in vitro diagnostic use. 15 – 45 mg/dl (150 – 450 mg/l)
Each laboratory should investigate the transferability of the expected values to its
C – Corrosive own patient population and if necessary determine its own reference range. For
Reagent R1 contains corrosive components (sodium hydroxide). R34: diagnostic purposes, the U/CSF results should always be assessed in conjunction
Causes burns. S26: In case of contact with eyes, rinse immediately with the patient's medical history, clinical examinations and other findings.
with plenty of water and seek medical advice. S45: In case of accident
or if you feel unwell, seek medical advice immediately (show the label Analytical sensitivity (lower detection limit)
where possible). Detection limit: 6 mg/ dl or 60mg/l
The lower detection limit represents the lowest measurable U/CSF protein
Exercise the normal precautions required for handling all laboratory reagents. concentration that can be distinguished from zero. It is calculated as the
concentration lying three standard deviations above that of the lowest standard.
Specimen:
Centrifuge samples containing precipitate before performing the assay.
Collection and preparation:
Urine:
Use random or 24 hour urine specimens. Use no preservatives.
Refrigerate specimen during collection.

Cerebrospinal Fluid (CSF):

No special additives are required. Blood in a CSF specimen invalidates the protein
value.

Specimens may be stored at temperatures between +2° and +8°C for 48 hours.

Analyticon® Biotechnologies AG (PUCSF_GB-D_21_001_03.01_2013-01-02) S1/4

Am Mühlenberg 10, 35104 Lichtenfels / Germany
 Fluitest U/CSF
ULTRASENSITIVE PROTEIN

Imprecision:
Reproducibility between day was determined by an internal protocol using human
controls. The following results were obtained (n = 15).
Urine Between day
Sample Mean SD CV
mg/dl mg/dl %
Control 1 20.0 0.32 1.61
Control 2 63.0 0.98 1.56
Control 3 98.0 2.03 2.08
Reproducibility within run was determined by an internal protocol using human
controls. The following results were obtained (n = 21).
Urine Within run
Sample Mean SD CV
mg/dl mg/dl %
Control 1 23.0 0.67 2.89
Control 4 79.4 0.50 0.63

Method comparison:
® ®
A comparison of the Analyticon Fluitest U/CSF (y) with a commercial obtainable
assay (x) gave the following result:
y = 0.976 x + 2.091 ; r = 0.996

Quality Control:
Lyphocheck Urine and Liquicheck CSF controls of BIORAD®

Calibration:
S1: 0.9% NaCl
S2 -S6: Bio Cal U/CSF 5 x 1 ml #14960

Calibration frequency
Recalibration is recommended
• After bottle change
• As required following quality control procedures
• After 7 days, the use of Chimneys in R1 can extend calibration stability to 14
days

Disposal:
Please note the legal regulations.

Literature:
1. Iwata I, Nishikaze O. Clin Chem. 1979;25/7:1317 – 1319.
2. Koumantakis G. Fluorescein Interference with Urinary Creatinine and Protein
Measurements. Clin Chem. 1991;37/10:1799.
3. Luxton R, Patel P, Keir G, Thompson E. Clin Chem. 1989; 35/8: 1731 – 1734.
4. Tietz NW. clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd ed. Philadelphia, Pa. WB
Saunders co; 1995;520.
5. Tietz NW. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia, Pa: WB
Saundes co; 1987:336,339,340,341.

Analyticon® Biotechnologies AG (PUCSF_GB-D_21_001_03.01_2013-01-02) S2/4

Am Mühlenberg 10, 35104 Lichtenfels / Germany
 Fluitest U/CSF
ULTRASENSITIVE PROTEIN

Bestellinformation: Einschränkungen des Verfahrens - Interferenzen:

Als Bewertung gilt: Wiederfindung + vom Ausgangswert.
Katalog-Nr. Inhalt Ikterus: Keine wesentliche Beeinflussung bis zum Index I von 20 (ca. 20 mg/dl
Hit I / 917 konjugiertes und unkonjugiertes Bilirubin).
H9601 R1 6 x 20 ml R2 6x 9 ml
(ILab* / AU*) Hämolyse: Aufgrund der Proteinnatur des Hämoglobins führt Hämolyse in
( * ) Kit enthält nur Reagenzien-Barcodes für Hitachi-System. Abhängigkeit von der Intaktheit der Erythrozyten zu erhöhten Messwerten.
Das Messverfahren zeigt keine deutliche Interferenz mit:
Systeminformation: Ascorbinsäure Calcium Cefazolin, Natriumsalz
Hitachi 911: ACN 171 Chlorpromazine Creatinine Gentamicin
Hitachi 912/917: ACN 769 Coffein Glucose Harnsäure
Harnstoff L-Dopa Magnesium
Anwendungszweck: Natriumcitrat Natriumoxalat Phosphat, anorg.
In vitro Test zur quantitativen Bestimmung von Protein in Urin und Cerebrospinal- Sulfat
flüssigkeit (CSF) mit klinischen Analysenautomaten.
Testverfahren:
Zusammenfassung:
Urin wird durch Ultrafiltration des Plasmas durch die glomerulären Kapillarwände Applikationen für automatisierte Systeme sind auf Anfrage erhältlich.
gebildet. Proteine mit einer relativen molekuaren Masse > 40 000 werden nahezu Gelieferte Materialien
vollständig zurückgehalten während kleinere Substanzen problemlos als • Reagenzien wie vorher angegeben.
glomeruläres Filtrat passieren. Zusätzlich benötigte Materialien
Die meisten Liquor-Proteine diffundieren aus dem Plasma durch die Blut-Hirn- • Kalibrations- und Kontrollmaterial wie nachfolgend beschrieben.
Schranke. Erhöhte Konzentrationen ergeben sich aus einer erhöhten Permeabilität • Natriumchlorid-Lösung (0,9%)
der Blut-Hirn-Schranke oder durch eine Zunahme der lokalen Immunglobulin-
Synthese. Manuelle Testdurchführung:
Turbidimetrische Verfahren mit Trichloressigsäure (TCA) oder Sulfosalicylsäure Wellenlänge: 505 nm
(SSA) beruhen auch einer Präzipitation des Proteins in der Probe; die resultierende Reaktionstemperatur: 37°C
Trübung kann instabil und flockig sein. Farbbindungsreaktionen mit Coommassie- Schichtdicke: 1 cm
Blau und Pyrogallol-Molybdatrot zeigen gegenüber verschiedenen Proteinen Messung: gegen Reagenzienleerwert (RLW)
unterschiedliche Sensitivitäten und können Glasgeräte anfärben. Die Analyticon
U/CSF Methode basiert auf der Methode von Iwata and Nishikaze, die später von RLW Probe/ Kalibrator
Luxton, Patel, Keir und Thompson modifiziert wurde. Bei diesem Verfahren reagiert Reagenz R1 500 µl 500 µl
das Protein in alkalischer Lösung mit Benzethonium-Chlorid. Die entstehende Reagenz R2 200 µl 200 µl
Trübung ist stabiler und gleichmäßiger verteilt, als bei den Verfahren mit SSA und
TCA. Dieser direkte Test zeigt eine vergleichbare Reaktion mit Albumin und Mischen, Extinktion (E1) ablesen, dann zugeben:
Gamma-Globulin, und wird durch kurzkettige Peptide nicht gestört. Durch Zugabe
von EDTA wird eine Beeinflussung durch Magnesiumionen vermieden. Probe/ Kalibrator 30 µl
Proteinbestimmungen im Urin dienen der Diagnose und Behandlung von Nieren- NaCl (0,9%) 30 µl ---
oder Herzerkrankungen oder Störungen der Schild-drüsenfunktion, die durch
Proteinurine bzw. Albuminurie gekennzeichnet sind. CSF-Proteinbestimmungen Mischen.
dienen der Diagnose und Behandlung von Meningitis, Hirntumoren und Infektionen 10 Minuten inkubieren und Extinktion (E2) ablesen.
des Zentralen Nervensystems.
Berechnung:
Testprinzip: ΔE = (E2 - E1)Probe oder Kalibrator)
Die Probe wird in alkalischer, EDTA-haltiger Lösung vorinkubiert, um die Proteine Die Protein-Konzentration in Patientenproben sollte aus dem ΔE der Probe mit
zu denaturieren und Störungen durch Magnesiumionen zu verhindern. Durch Hilfe eines mathematischen Modells wie logit/log berechnet oder aus einer
Zugabe von Benzethonium-Chlorid bildet sich eine Trübung, deren Intensität bei Kalibrationskurve abgelesen werden, beruhend auf den Messergebnissen von 5
505 nm gemessen wird. Standards. Für den Nullpunkt wird die Verwendung einer NaCl-Lösung (0,9%)
empfohlen.
Konzentration der gebrauchsfertigen Lösung:
R1:
Natriumhydroxid 530 mmol/l Messbereich:
EDTA 74 mmol/l Kinetische Messung:
R2: 6 - 200 mg/dl (60 - 2000 mg/l)
Benzethonium-Chlorid 32 mmol/l Endpunkt Test:
2 - 200 mg/dl (20 - 2000 mg/l)
Herstellung und Haltbarkeit: Bei höheren Konzentrationen als 200 mg/dl (2000 mg/l) die Proben mit Rerun-
R1: gebrauchsfertig Funktion nachbestimmen. Bei Geräten ohne Rerun-Funktion die Proben manuell mit
R2: gebrauchsfertig Natriumchlorid-Lösung (0,9%) verdünnen (z.B. 1 + 3) und die Messung
Die Reagenzien sind bei Lagerung im Dunkeln bei +2° bis +8°C bis zum wiederholen. Das Ergebnis ist mit einem geeigneten Faktor (z.B. 4) zu
aufgedruckten Verfallsdatum haltbar. multiplizieren.
Onboard Stabilität:
R1: 21 Tage, geöffnet im Kühlfach der Analysengeräts Referenzbereich:
R2: 21 Tage, geöffnet im Kühlfach der Analysengeräts Urin:
Spontan < 12 mg/dl (< 120 mg/l)
Hinweis: 24 Std. < 150 mg/Tag
In vitro Diagnostikum.
Cerebrospinalflüssigkeit:
15 – 45 mg/dl (150 – 450 mg/l)
C – Ätzend
Reagenz R1enthält ätzende Komponenten (Natriumhydroxid). R34: Jedes Labor sollte die Übertragbarkeit der Referenzbereiche für die eigenen
Verursacht Verätzungen. S26: Bei Berührung mit den Augen gründlich Patientengruppen überprüfen und gegebenenfalls eigene Referenzbereiche
mit Wasser abspülen und Arzt konsultieren. S45: Bei Unfall oder ermitteln. Für diagnostische Zwecke sind die Ergebnisse der ultrasensitiven
Unwohlsein sofort Arzt hinzuziehen (wenn möglich, dieses Etikett Proteinbestimmung stets im Zusammenhang mit der Anamnese, der klinischen
vorzeigen). Untersuchung und anderen Untersuchungsergebnissen zu werten.

Die beim Umgang mit Laborreagenzien üblichen Vorsichtsmaßnahmen beachten. Sensitivität (analytische Nachweisgrenze):
6 mg/dl bzw. 60 mg/I
Untersuchungsgut Die Nachweisgrenze entspricht dem niedrigsten messbaren Signal des U/CSF-
Proben, die Präzipitate enthalten, müssen vor dem Test zentrifugiert werden. Reagenz, das von Null unterschieden werden kann. Sie ist berechnet als die
Urin: Konzentration, die drei Standardabweichungen oberhalb des niedrigsten Standards
Spontan- oder 24h –Urin verwenden. liegt.
Keine Konservierungsmittel verwenden.
Während der Probensammlung kühlen.
Cerebrospinalflüssigkeit:
Es werden keine speziellen Zusatzstoffe benötigt. Blut in der Probe macht die
Probenbestimmung wertlos.
Haltbarkeit der Proben: 48 Stunden bei +2° bis +8°C

Analyticon® Biotechnologies AG (PUCSF_GB-D_21_001_03.01_2013-01-02) S3/4

Am Mühlenberg 10, 35104 Lichtenfels / Germany
 Fluitest U/CSF
ULTRASENSITIVE PROTEIN

Impräzision:
Die Reproduzierbarkeit in der Serie wurde mit Kontrollproben (n = 15) gemäß eines
internen Protokolls bestimmt und ergab folgende Ergebnisse:
Urin Tag / Tag
Probe MW SD CV
mg / dl mg / dl %
Kontrolle 1 20,0 0,32 1,61
Kontrolle 2 63,0 0,98 1,56
Kontrolle 3 98,0 2,03 2,08
Die Reproduzierbarkeit von Tag zu Tag wurde mit Kontrollproben (n = 21) gemäß
eines internen Protokolls bestimmt und ergab folgende Ergebnisse:
Urin In der Serie
Probe MW SD CV
mg / dl mg / dl %
Kontrolle 1 23,0 0,67 2,89
Kontrolle 4 79,4 0,50 0,63

Methodenvergleich:
® ®
Bei einem Vergleich von Analyticon Fluitest U/CSF (y) mit einem kommerziell
erhältlichen Test (x) wurden folgende Ergebnisse erhalten:
y = 0,976 x + 2,091 ; r = 0,996

Qualitätskontrolle:
BIORAD® Lyphochek Urin Kontrolle mit Liquicheck CSF Kontrolle

Kalibration:
S1: 0,9% NaCl
S2-S6: Bio Cal U/CSF 5 x 1 ml #14960

Kalibrationshäufigkeit
Die Rekalibrierung wird empfohlen:
• Nach Reagenzienwechsel
• Nach 7 Tagen, durch Benutzung von “Chimneys” in R1 kann die Kalibrations-
stabilität auf 14 Tage erhöht werden.

Entsorgung:
Bitte beachten Sie die jeweiligen gesetzlichen Vorschriften.

Literatur:
1. Iwata I, Nishikaze O. Clin Chem. 1979;25/7:1317 – 1319.
2. Koumantakis G. Fluorescein Interference with Urinary Creatinine and Protein
Measurements. Clin Chem. 1991;37/10:1799.
3. Luxton R, Patel P, Keir G, Thompson E. Clin Chem. 1989; 35/8:1731– 1734.
4. Tietz NW. clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd ed. Philadelphia, Pa. WB
Saunders co; 1995;520.
rd
5. Tietz NW. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3 ed. Philadelphia, Pa: WB
Saundes co; 1987:336,339,340,341.

Analyticon® Biotechnologies AG (PUCSF_GB-D_21_001_03.01_2013-01-02) S4/4

Am Mühlenberg 10, 35104 Lichtenfels / Germany