Articulo 3
Articulo 3
Articulo 3
Artículo Original
Universidad de La Frontera,
Aim: To detect pathogens associated with STIs in symptomatic men and its relationship with sexual behavior. Aravena, Temuco, Chile.
Servicio Dermatología (GB).
Methodology: DNA was obtained from exfoliated cells of penis from 20 symptomatic men. Pathogens were detected Centro de Medicina Traslacional,
using qPCR or PCR followed by reverse line blot. Sexual behavior was evaluated through a survey. Results: Two Universidad de La Frontera, Temuco,
or more infectious agents were detected in 50% of samples. U. urealyticum was found in 25%, meanwhile C. Chile.
trachomatis and M. hominis were detected in 15%. VHS-1, VHS-2 and M. genitalium were detected only in 5%. Los autores no poseen conflictos
HPV was found in all samples. The most frequent HPV genotypes were VPH 16, 11, 70. There were no statistical de intereses para la publicación de
link found between sexual behavior and the studied microorganisms Conclusion: Infectious agents associated with este artículo.
STIs were detected in symptomatic men. HPV was the most frequent pathogen and it was detected in multiple Esta investigación fue financiada
por el Proyecto CORFO
genotypes. It is necessary to increase the sample size to associate significantly the sexual behavior with the results. N° 12IDL2-18157, Proyecto DIUFRO
Key words: qPCR, reverse line blot, sexually transmitted infections (STIs). DI13-0039, Proyecto CORFO
Palabras clave: RPC en tiempo real cuantitativa (qPCR), reverse line blot, infecciones de transmisión sexual N° 09CN14-5960, Proyecto
L
riesgo (BR). Los VPH de AR son: 16, 18, 26, 31, 33, 34, Priscilla Brebi Mieville
[email protected]
as infecciones de transmisión sexual (ITS) re- 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68, 73 y 82. Por otro lado,
presentan un grupo de enfermedades que afectan los VPH de BR incluyen los genotipos: 6, 11, 40, 42, 43,
la salud sexual y reproductiva de millones de 44, 54, 55, 57, 61, 70, 71, 72, 81, 83 y 845. Los VPH 16
personas, siendo un problema público de interés1. Agentes y 18 son los genotipos más frecuentes y están asociados
etiológicos responsables de las ITS incluyen hongos, a la patogénesis del cáncer cervical, de vulva, de pene y
bacterias, parásitos y virus. Algunos de estos microorga- anal. Mientras que los genotipos de VPH de BR 6 y 11
nismos son eliminados al cabo de un período de tiempo, están involucrados en el desarrollo de lesiones benignas
mientras que otros son recurrentes y algunos se mantienen como verrugas y condiloma acuminado6. Generalmente, el
en el organismo en forma asintomática, permitiendo el hombre es portador asintomático de este microorganismo,
progreso de la enfermedad y generando consecuencias transmitiendo el virus a sus parejas femeninas y/o mas-
como inflamaciones del tracto genito-urinario, infertilidad culinas, quienes podrían desarrollar cáncer al infectarse
e incluso el desarrollo de cáncer2. Dentro de los agentes con VPH de AR7.
que pueden cursar en forma asintomática destacan: virus Los virus VHS-1 y VHS-2, son causantes de úlceras ge-
papiloma humano (VPH), virus herpes simplex tipo 1 nitales recurrentes, pero muchas veces son asintomáticos3.
y 2 (VHS-1 y VHS-2), Chlamydia trachomatis, Myco- Además, su infección facilita la adquisición y transmisión
plasma genitalium, Mycoplasma hominis y Ureaplasma del virus de inmunodeficiencia adquirida (VIH)8.
urealyticum2,3. Por otro lado, C. trachomatis es responsable de la ITS
El VPH es responsable de la ITS más frecuente, bacteriana más común en el mundo1. En el hombre se
afectando tanto a hombres como a mujeres4. Según la asocia a uretritis, epididimitis y prostatitis3. En cambio, en
capacidad oncogénica del virus, éste ha sido agrupado la mujer participa en el desarrollo de uretritis, cervicitis,
enfermedad inflamatoria pélvica (EIP), embarazo ectópico presuntiva de una ITS, como adenopatía inguinal, con-
e infertilidad9. diloma y/o erosión genital, flujo uretral purulento, test
Mycoplasma genitalium es una bacteria asociada con VDLR alterado o uretritis. Los participantes firmaron un
uretritis, cervicitis, endometritis, EIP y un alto riesgo consentimiento informado antes de la toma de muestra,
de transmisión de VIH10. En el hombre es causante de aprobado por el Comité de Ética de la Facultad de Me-
uretritis, prostatitis y su relación con infertilidad aún dicina de la Universidad de La Frontera, quién revisó y
no es clara11. En el caso de M. hominis, en hombres se autorizó la ejecución de esta investigación. Además, a los
asocia a uretritis y en mujeres a cervicitis, EIP y vaginosis participantes se les solicitó que contestaran una encuesta
bacteriana principalmente12. a fin de conocer sus hábitos sexuales.
Otro microorganismo asociado a uretritis y a otras
inflamaciones del tracto urogenital es U. urealyticum; Muestras clínicas
sin embargo, aún no está definida su relación con infer- La toma de muestra fue realizada por el médico tratante
tilidad12. (Dermatólogo). Este procedimiento consistió en recolectar
Dentro de los factores de riesgo para contraer estas células exfoliadas del pene en tres zonas distintas: el
infecciones se encuentran: el número de parejas sexua- cuerpo del pene, el surco coronal y, en el caso de que
les, el número de parejas sexuales de la pareja, uso de presentaran una lesión visible, también se recolectó una
preservativos, consumo de alcohol y otras drogas, nivel muestra de esa área, utilizando una tórula de algodón
educacional y nivel socioeconómico, entre otros3. estéril para todas las zonas. Cada tórula fue depositada
Muchas veces puede existir co-infección entre estos en 1 mL de tampón de lisis pH 7,4 (Tris 0,01 M pH 7,8;
patógenos, lo que potencia el desarrollo de la enfermedad EDTA 0,05 M pH 8,0; SDS 0,5%).
relacionada con uno o más agentes etiológicos13. Por lo
tanto, el objetivo de este estudio fue detectar agentes Extracción de ADN
infecciosos asociados a ITS en un grupo de hombres A las muestras se les extrajo ADN, mediante un método
sintomáticos mediante biología molecular y relacionarlos manual descrito previamente14. Brevemente, las proteínas
con su comportamiento sexual. fueron precipitadas con acetato de amonio 5 M pH 7,5 y el
ADN con isopropanol. Posteriormente, el ADN obtenido
se lavó con etanol 70% y se resuspendió en agua destilada
Metodología estéril. El ADN fue almacenado a -80 ºC para evitar su
degradación. La calidad del ADN extraído fue verificada
Pacientes mediante cuantificación en espectrofotómetro NanoDrop
En el presente estudio participaron 20 hombres, con 1000 (Thermo Fisher Scientific. Wilmington, DE, U.S.A)
un rango de edad de 18 a 66 años, siendo el promedio donde se obtuvieron coeficientes de pureza A280/260
de 33,8 años. Estas personas asistieron al Policlínico de superiores a 1,8. Además, para evaluar la integridad del
Dermatología del Hospital Hernán Henríquez Aravena, ADN se realizó una RPC dirigida al gen constitutivo
Temuco, Chile, entre los años 2005 y 2006. Clínicamente, β-globina (268 pb).
los individuos consultaron por presentar sintomatología
RPC en tiempo real cuantitativa (qPCR)
La detección del ADN de VHS 1 y 2, M. hominis, M.
Tabla 1. Partidores específicos utilizados en el estudio
genitalium, U. urealyticum y C. trachomatis se realizó
mediante RPC cuantitativa en tiempo real, la que fue
Micro- Blanco Fragmento Secuencia (5’->3’) ejecutada en forma independiente y específica para cada
organismo (pb) microorganismo. Para ello se utilizó el kit Brilliant II
Herpesvirus Gen ADN polimerasa 181 For TGGCCAAGCTGACGGACATTT SYBR® Green QPCR Master Mix with ROX (Agilent
humano 1 Rev GAGAGCTTGATCTTGTCGGTT Technologies, CA, USA). Los partidores se usaron en una
Herpesvirus Gen glicoproteína I y 195 For TGTTTCTGGGCAGCTGTATC concentración final de 0,2 µM (Tabla 1). A la mezcla de
humano 2 glicoproteína E Rev CTATCGACGTTAGGGAAGGCAT RPC se le agregó 1 µL de ADN por muestra, para obtener
Chlamydia Gen proteína principal de 203 For TCAAGGAGTGGAGTGTCTGCGTA un volumen final de 20 µL. Como controles positivos se
trachomatis la membrana externa Rev TGTCGCTCCGATGCAGATGTTT emplearon controles comerciales de cada microorganismo
Ureaplasma Gen 16S ARN ribosomal 182 For GCAGGCGGGTTTGTAAGTTTGGTA estudiado (Amplirun®. Vircell, Granada, España). Como
urealyticum Rev AGCCTAAGCGTCAGTGATAGTCCA control negativo se utilizó ADN genómico humano
Mycoplasma Gen 16S ARN ribosomal 159 For TGGAGAATCACTGACGCAGCTAAC comercial en una dilución 1:50 (Novagen®, Madison,
hominis Rev TGCGAAGGATGTCAAGAGTGGGTA
WI, USA) y para el control blanco se adicionó agua en
Mycoplasma Proteína ribosomal S3 30S 189 For TAGGCCATTACTGACGCTTACGCT lugar de ADN.
genitalium Rev GTCCCCGTCAATTCCGTTTGAGTT
La RPC cuantitativa en tiempo real se realizó en el
Tabla 2. Parámetros clínico-patológicos de los individuos analizados y agentes detectados en muestras genitales
VPH: Virus papiloma humano, BR: bajo riesgo, AR: alto riesgo. VHS-1: Virus herpes simplex tipo 1. VHS-2: Virus herpes simplex tipo 2. Test VDRL: Venereal disease research
laboratory test. CT: Chlamydia trachomatis. MG: Mycoplasma genitalium. MH: Mycoplasma hominis. UU: Ureaplasma urealyticum.
tado en 100% (20/20) de las muestras analizadas. Es parte, se utilizaron muestras de exfoliado celular del pene,
importante señalar que en 90% (18/20) de los casos, las cuales se pueden obtener fácilmente con tórulas y por
se encontró infección por dos o más genotipos de VPH medio de un protocolo simple de extracción es posible
en forma simultánea, en los que siempre se identificó obtener ADN. Este tipo de muestra ha sido recomendada
la presencia de un genotipo de alto riesgo oncogénico. para la detección de agentes infecciosos como el VPH17.
Por otra parte, en dos muestras se encontró ADN de Otros tipos de muestra desde donde es posible la detección
un sólo genotipo de VPH, y en ambos casos se trató de patógenos asociados a ITS en el hombre, incluyen
de un genotipo de bajo riesgo oncogénico (6 o 11), lo muestras de orina, de semen y secreción uretral17.
que estaba asociado con el diagnóstico de condiloma En el presente trabajo, se pudo determinar que la mitad
que poseían estos dos participantes. El genotipo de alto de los hombres estudiados presentaba dos o más agentes
riesgo oncogénico más frecuente fue VPH 16 (90%), infecciosos, siendo más frecuente VPH, el que se encontró
seguido por VPH 18 (40%). En cuanto a los genotipos en todos los casos, seguido de U. urealyticum, C. tracho-
de bajo riesgo oncogénico, los más frecuentemente matis y M. hominis. Un estudio de población mixta, donde
detectados fueron VPH 11 y VPH 70, ambos presentes 51% de los participantes eran varones (n: 870), realizó
en 50% de los casos. RPC cuantitativa en tiempo real en muestras uretrales
Por otro lado, U. urealyticum se encontró en 25% de para detectar seis microorganismos causantes de ITS:
los casos, mientras que C. trachomatis y M. hominis fue C. trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas
detectado en 15% de las muestras. En el caso de VHS-1, vaginalis, M. genitalium, U. urealyticum y Ureaplasma
VHS-2 y M. genitalium, fueron detectados en una baja parvum. Se determinó que 33% de los hombres (n: 333)
proporción (5% de los casos para cada uno) (Tabla 2). fueron positivos para la detección de alguno de los pa-
En relación a la encuesta, ésta fue contestada por tógenos. De estos casos positivos, 91% se trató de una
19 de los 20 individuos en estudio. Estos resultados se infección por un solo agente, 8% tuvo una doble infección
reflejan detalladamente en la Tabla 3, donde se describe y sólo 1% tuvo triple infección. Ureaplasma parvum fue
los microorganismos asociados con cada parámetro de el microorganismo prevalente con 18% de los casos18. En
la encuesta realizada a los participantes. Brevemente, en otro estudio mixto, se realizó RPC cuantitativa en tiempo
este grupo, 58% de los hombres había cursado enseñanza real múltiple de siete microorganismos asociados a ITS, C.
media, 63% eran solteros, 79% ingería alcohol y 89% de trachomatis, N. gonorrhoeae, T. vaginalis, M. genitalium,
ellos tenía hábito tabáquico. Respecto a algunos datos M. hominis, U. urealyticum y U. parvum. Se utilizaron
sobre la conducta sexual, destaca que 89% de los hom- muestras de orina de 510 hombres, tanto sintomáticos
bres eran heterosexuales, 53% tuvo su primera relación como asintomáticos. Del total de estas muestras, 61,2%
sexual entre los 15-20 años, 73% nunca usa preservativo fue negativo, 26,5% presentó sólo un patógeno y sólo en
con su pareja habitual, 89% no ha tenido relaciones con 12,4% se detectaron dos o más. El microorganismo más
prostitutas, 89% siempre realiza aseo genital después frecuente fue U. parvum (17,1%), seguido de U. urealyti-
de tener relaciones sexuales y 53% no ha presentado cum (13,9%) y C. trachomatis (11%)19. Otra investigación
verrugas genitales previamente. Si bien, se realizó de población mixta, evaluó la presencia de C. trachomatis,
una prueba estadística para asociar los antecedentes M. genitalium y N. gonorrhoeae con RPC cuantitativa
encuestados con la presencia o ausencia de agentes de en tiempo real múltiple. Se utilizaron muestras uretrales
ITS, debido al número de casos analizados (n: 19) el de un grupo de 260 hombres (236 asintomáticos y 24
poder estadístico de la c2 de Pearson no fue suficiente sintomáticos). Sólo 1,92% (5/260) de los casos presentó
para encontrar asociaciones significativas fiables entre infección múltiple. En hombres asintomáticos el agente
las variables analizadas. infeccioso más común fue C. trachomatis (8,1%), mien-
tras que en sintomáticos fue N. gonorrhoeae20. En general,
los microorganismos más frecuentemente encontrados
Discusión en otras investigaciones concuerdan con los detectados
en el presente estudio. De hecho, los microorganismos
En este trabajo se utilizó RPC cuantitativa en tiempo del género Ureaplasma son los que presentan el mayor
real (VHS-1, VHS-2, C. trachomatis, M. genitalium, M. número de casos de infección seguido por C. trachomatis
hominis y U. urealyticum) y RPC seguida de reverse line y el género Mycoplasma.
blot (VPH) para la detección de agentes asociados a ITS. En relación a VPH, en este grupo de hombres sintomá-
Éstas son técnicas de alta sensibilidad y especificidad, lo ticos, fue identificado en 100% de las muestras genitales,
que facilita la detección en muestras con poca cantidad de de las que 11 provenían de pacientes con condiloma,
ADN16. Además, reverse line blot es una técnica que ha lesión característica. En un estudio realizado en Chile,
sido muy aplicada para tipificar, ya que se pueden detectar en hombres estudiantes sanos (n: 62), se identificó a
los distintos tipos del virus en una sola reacción27. Por otra 84% de casos positivos para VPH, utilizando la misma
Tabla 3. Características socioeconómicas y de comportamiento sexual según los distintos agentes infecciosos asociados a ITS
Molicutes: Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum. *Ítem sin contestar por uno o más encuestados. N.A.: no aplica. **Un individuo puede
tener uno o más microorganismos infectantes.
metodología y el mismo tipo de muestra14. En otro estudio dicho microorganismo. En otros estudios se ha reportado
con jóvenes universitarios de 18 a 20 años, la incidencia una prevalencia de 6% de M. hominis en hombres infér-
de VPH fue de 62,4%, determinada en muestras genitales tiles y en 4,9% en hombres fértiles, a partir de muestras
por RPC7. Por otro lado, utilizando captura híbrida en 204 de semen26, y de 3,1% a partir de muestras de orina de
hombres jóvenes asintomáticos con un promedio de edad hombres sintomáticos y asintomáticos19. Mycoplasma
de 22,5 años, se obtuvo una tasa de incidencia de 5,9% genitalium en este estudio, sólo fue detectado en una
en muestra de exfoliado genital22. También, en muestras muestra de un paciente con diagnóstico de condiloma.
genitales colectadas por personal clínico y por los mismos Sin embargo, se ha determinado en hombres sintomáticos
individuos, se observó una prevalencia de 69,8 y 55,3% una prevalencia de 15,5%25. Mientras que en un grupo
de VPH, respectivamente, utilizando el test basado en de hombres y mujeres, la prevalencia detectada ha sido
RPC, Roche Amplicor® HPV23. El VPH es el patógeno de 0,8%18. También, se ha reportado en un rango de 0
prevalente en el mundo21, por lo tanto, es esperable que sea a 47,5% de casos positivos. Esto depende de distintos
el agente infeccioso más frecuente en este estudio, ya que factores tales como el tipo de muestra y metodología
fue detectado en individuos con sintomatología de ITS. de la detección, entre otros11. De la misma manera, en
En cuanto a la tipificación de VPH, se identificó 46,8% el presente trabajo, VHS-1 se encontró presente en un
de genotipos de BR (VPH 11, 79 y 81) y 56,2% de AR solo caso (5%) proveniente de un paciente que consultó
(VPH 16 y 18). En estudiantes universitarios, analizados por gonorrea. El VHS-2 estaba presente en una muestra
de manera similar, se reportó 30% de VPH de BR (VPH (5%) de un paciente con erosión genital, tipo de lesión
6 y 11) y 70% de AR (VPH 16 y 18)14. En otro grupo de asociada a este virus.
2.621 hombres, a partir de muestras genitales analizadas Los resultados del presente estudio y de los estudios
por RPC y por linear array assay (LAA) para tipificar detallados anteriormente, muestran diferencias, que
VPH, la prevalencia de los genotipos de BR de VPH 6 y 11 se justifican por las distintas metodologías empleadas
fue de 6,6% y 1,3%, mientras que para los de VPH de AR para la detección de agentes infecciosos, tales como las
16 y 18 fue de 8,4 y 2,3%, respectivamente28. Además, en características de la población estudiada, el número de
los 20 individuos analizados en la presente investigación participantes, el tipo de muestra recolectada, la técnica
se encontró que en 80% de ellos, estaba presente una utilizada y los partidores usados.
infección de VPH con múltiples genotipos. Otros estudios Por otro lado, en este estudio el número de participan-
han reportado infecciones múltiples en 32,3%28. tes fue exiguo, lo que limitó el análisis de significancia
El segundo patógeno más frecuente fue U. urealyticum estadística y la relación del comportamiento sexual
estando presente en cinco muestras (25%). Dos de cinco de los individuos con la presencia de uno más agentes
muestras positivas provenían de individuos consultando infecciosos. Así mismo, los resultados obtenidos se
por diagnóstico presuntivo de gonorrea, mientras que uno verían enriquecidos con un grupo control de hombres
consultó por uretritis. Esto se asocia a la sintomatología asintomáticos que complemente el mismo tipo de estudio.
de uretritis no gonocóccica, que es característica de estos Por otro lado, la metodología empleada estuvo acorde con
microorganismos. En otro estudio, usando muestras los objetivos del estudio y al tipo de muestra utilizada;
uretrales, analizadas con RPC cuantitativa, este microor- sin embargo, llevar a cabo una detección simultánea de
ganismo fue detectado en 18%18. En muestras de semen todos los agentes infecciosos sería beneficioso al reducir
de hombres infértiles esta bacteria ha sido identificada en el tiempo de ejecución de la detección, sobre todo si se
9% de los casos, utilizando RPC convencional24. considera aumentar el número de participantes.
En relación a los otros agentes infecciosos como C. En conclusión, mediante técnicas de biología mole-
trachomatis, ésta fue detectada en 15% de los hombres cular sensibles y específicas, como RPC cuantitativa en
sintomáticos, quienes consultaron por condiloma y go- tiempo real y RPC seguida de reverse line blot, se detec-
norrea; en este caso, esta bacteria se encontraba presente taron agentes infecciosos asociados a ITS en hombres
sin presentar síntomas de infección. En otro estudio rea- sintomáticos, siendo VPH el patógeno más frecuente y
lizado en hombres con uretritis, este microorganismo fue encontrándose en múltiples genotipos en muestras de
encontrado en 15,6% de ellos25. En contraste, en hombres exfoliado celular del pene. Si bien, el grupo evaluado
asintomáticos, la tasa de incidencia reportada ha sido en este estudio fue reducido y sólo incluyó hombres
de 3,4%, en muestras similares22. Además, en muestras con sintomatología de ITS, la información obtenida es
uretrales se ha reportado 5,9% de casos positivos18. útil, debido a la alta frecuencia de microorganismos
En cuanto a M. hominis, esta bacteria fue identificada que en forma rutinaria no se detectan. Se plantea así la
en 15% de las muestras de individuos con diagnóstico necesidad de investigaciones que abarquen un grupo de
presuntivo de condiloma, gonorrea y uretritis no gono- estudio de mayor tamaño y diverso, con el objetivo de
cóccica. Dentro de los síntomas causados por M. hominis determinar la presencia de estos y otros agentes de ITS
se encuentra uretritis lo cual se asociaría al diagnóstico de en la población masculina chilena y relacionarlos con su
comportamiento sexual, identificando grupos de riesgos celular del pene de 20 hombres sintomáticos de ITS.
que justifiquen metodologías de tamizaje y seguimiento Los patógenos fueron detectados por RPC cuantitativa o
de la infección. RPC seguida de reverse line blot. La conducta sexual se
evaluó mediante una encuesta. Resultados: En 50% de las
muestras se detectaron dos o más agentes infecciosos; U.
Resumen urealyticum fue detectado en 25% de los casos, mientras
que C. trachomatis y M. hominis en 15%. VHS-1, VHS-2
Introducción: Las infecciones de transmisión sexual y M. genitalium sólo en 5%. VPH se encontró en todas
(ITS) afectan la salud sexual y reproductiva de millones las muestras y los genotipos más frecuentes fueron VPH
de hombres. Patógenos como virus papiloma humano 16, 11, 70. No se encontró relación estadística entre los
(VPH), virus herpes simplex (VHS-1 y VHS-2), Chla- microorganismos estudiados y la conducta sexual de los
mydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma encuestados. Conclusión: Se detectaron agentes infeccio-
hominis y Ureaplasma urealyticum están asociados a sos asociados a ITS en hombres sintomáticos, siendo VPH
ITS. Objetivo: Detectar patógenos asociados a ITS en el más frecuente y encontrándose en múltiples genotipos.
hombres sintomáticos y relacionarlos con su conducta Es necesario aumentar el tamaño de muestra para asociar
sexual. Metodología: Se obtuvo ADN de exfoliado significativamente la conducta sexual a los resultados.
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