penetapan kadar susu

PEN U N TU N PRAKTI KU M BI OKI M I A M . T. SI M AN JU N TAK J. SI LALAH I Fa k u lt a s M a t e m a t ik a d a n I lm u Pe n g e t a h u a n Ala m Ju r u sa n Fa r m a si Un iv e r sit a s Su m a t e r a Ut a r a I . PROTEI N A. REAKSI UJI PROTEI N 1 . PEN GEN D APAN PROTEI N OLEH GARAM- GARAM AN ORGAN I K Kelar ut an pr ot ein ak an ber k ur ang bila k edalam lar ut an dit am bahk an gar am- gar am anor ganik . Pengendapan t er us t er j adi k em am puan ion gar am unt uk m enghidr asi, sehingga t er j adi k om pet isi gar am anor ganik dengan m olek ul pr ot ein unt uk m engik at air . Kar ena anor ganik lebih m enar ik air m ak a j um lah air y ang t er sedia unt uk m olek ul ak an ber k ur ang. pr ot ein k ar ena ant ar a gar am pr ot ein Pereaksi: a. am m onium sulfat b. per eak si Millon ( 150 gr / l lar ut an m er k ur i sulfat dalam 15% v / v asam sulfat ) c . pereaksi Biuret Cara Kerj a: 1. Jenuhkan 10 m l larut an prot ein dengan am m onium sulfat , dengan car a penam bahan am m onium sulfat k r ist al sedik it dem i sedik it , aduk hingga lar ut . Tam bah dan aduk lagi sehingga sedik it gar am am m onium y ang t ert inggal t idak larut lagi ( t erbent uk larut an lew at j enuh) . Saring. 2. uj i kelarut an endapan dalam per eak si Millon dan pada filt r at ny a t am bahk an per eak si Biur et . Pe n g e n d a p a n Pr ot e in ole h g a r a m a n or g a n ik Ta b u n g Pe r e a k si H a sil Ke t e r a n g a n I ( endapan ) Millon ………… ………………. . I I ( filt r at ) Biuret ………… ………………… 2 . U JI KOAGU LASI Pr ot ein dengan penam bahan asam at au pem anasan ak an t er j adi koagulasi. Pada pH iso- elekt r ik ( pH lar ut an t er t ent u biasanya ber kisar 4 – 4, 5 dim ana pr ot ein m em puny ai m uat an posit if dan negat if sam a, sehingga saling m enet r alk an) k elar ut an pr ot ein sangat m enur un at au m engendap. Pada t em per at ur diat as 60 o C k elar ut an pr ot ein ak an ber k ur ang ( k oagulasi) k ar ena pada t em per at ur y ang t inggi ener gi k inet ik m olek ul pr ot ein m eningk at sehingga t er j adi get ar an y ang cuk up k uat unt uk m er usak ik at an at au st r uk t ur sek under , t ert ier dan kuart ener yang m enyebabkan koagulasi. Pereaksi: © 2003 Digit ized by USU digit al libr ar y 1 a. asam aset at 1M b. per eak si Millon Cara Kerj a: 1. ke dalam t abung r eaksi yang ber isi 5 m l lar ut an pr ot ein dit am bahkan dua t et es asam aset at 1M. 2. let ak k an t abung dalam air m endidih selam a lim a m enit . 3. am bil endapan dan uj ilah k elar ut anny a dalam air dan per eak si m illon. Uj i Koa gu la si Ta b u n g Pe r e a k si H a sil Ke t e r a n g a n I ( endapan ) Air ………… ………………. . I I ( endapan ) M illon ………… ………………… 3 . PEN GEN D APAN D EN GAN ALKOH OL Pr ot ein dapat diendapk an dengan penam bahan alk ohol. Pelar ut or ganik ak an m engubah ( m engur angi) k onst ant a dielek t r ik a dar i air , sehingga k elar ut an pr ot ein ber kur ang, dan j uga kar ena alkohol akan ber kom pet isi dengan pr ot ein t erhadap air. Pereaksi: a. HCl 0,1 M b. NaOH 0,1 M c . Buffer asesat 1M ( pH 4,7) d. Et anol 9 5 % Cara Kerj a: 1. Sediakan 3 t abung reaksi dan isi m asing- m asing t abung r eaksi dengan 5m l larut an prot ein. 2. Ke dalam t abung I : t am bahk an 1m l HCl 0,1M dan 6m l et anol 95% I I : 1m l NaOH 0,1M dan 6m l et anol 95% I I I : 1m l Buffer aset at dan 6m l et anol 95% 3. Lihat t abung- t abung m ana yang t idak larut . Pe n g e n d a p a n d e n g a n a lk oh ol Ta b u n g Pe r e a k si H a sil Ke t e r a n g a n I ( 5 m l Prot ein ) 1 m l HCl 0,1 N 6 m l et anol 95 % ………. …………… I I ( 5 m l Prot ein ) 1 m l NaOH 0,1 N 6 m l et anol 95 % ………. …………… I I I ( 5 m l Prot ein ) 1 m l buffer aset at 6 m l et anol 95 % ……… …………… © 2003 Digit ized by USU digit al libr ar y 2 4 . D EN ATU RASI PROTEI N Denat ur asi dapat diar t ik an suat u pr oses t er pecahny a ik at an hidr ogen, ik at an gar am at au bila susunan r uang at au r ant ai polipet ida suat u m olek ul prot ein ber ubah. Dengan per k at aan lain denat ur asi adalah t er j adi k er usak an st r ukt ur sekunder , t er t ier dan kuar t ener , t et api st r ukt ur pr im er ( ikat an pept ida) m asih ut uh. Pereaksi: a. buffer aset at 1M ( pH 4,7) b. HCl 0,1M c . NaOH 0,1M Cara Kerj a: 1. Sediak an t iga t abung reaksi m asing- m asing t abung diisi dengan 9m l lar ut an pr ot ein. 2. Ke dalam t abung I : t am bahkan 1m l HCl 0,1M I I : 1m l NaOH 0,1M I I I : 1m l Buffer aset at 3. Tem pat kan ket iga t abung dalam air m endidih selam a 15 m enit dan dinginkan pada t em per at ur kam ar . 4. Lihat ke dalam t abung m ana t er j adi endapan. 5. Lanj ut kan per cobaan di at as t er hadap t abung I dan I I dengan m enam bahk an 10m l buffer aset at . D e n a t u r a si Pr ot e in a ) Ta b u n g Pe r e a k si H a sil Ke t e r a n g a n I ( 9 m l larut an Prot ein ) 1 m l HCl 0,1 N ………. …………… I I ( 9 m l larut an Prot ein ) 1 m l NaOH 0,1 N ………. …………… I I I ( 9 m l larut an Prot ein ) 1 m l buffer acet at ……… …………… H a sil Ke t e r a n g a n b ) Ta b u n g Pe r e a k si I ( Hasil a ) 10 m l buffer acet at ………. …………… I I ( Hasil a ) 10 m l Buffer aset at ………. …………… B. PEN EN TU AN KAD AR CASEI N Casein m er upak an pr ot ein y ang t er dapat dalam susu. Ham pir 80% pr ot ein dalam susu t er dir i dar i casein di sam ping Lak t album in dan lak t oglobulin. Pereaksi: a. Asam aset at 1 N dan 0,25 N b. NaOH 0,1 N c . For m aldehide 40% d. Fenolft alein © 2003 Digit ized by USU digit al libr ar y 3 Cara kerj a : 1. 20 m l sam pel m asuk k an dalam beak er glas, panask an di penangas air pada suhu 40 o C. bila digunak an sam pel susu k ent al diencer k an dengan aquades per bandingan 1: 2 dan susu bubuk dit am bahkan aquades 1: 9. 2. Tam bahk an 1,5 m l asam aset at 1 N, aduk hom ogen dan diam k an selam a 20 m enit . Tam bah lagi 4, 5 m l asam aset at 0, 25 N ( unt uk m encapai pH isoelek t r ik dar i casein) aduk dan diam kan selam a 1 j am . 3. Dek ant er k edalam cor ong dengan k er t as sar ing. Cuci endapan dengan aquades sam pai air cucian ber sifat net r al. 4. Kem udian ker t as sar ing dan endapan m asukkan kedalam beker sem ula dan t am bahk an aquades sam pai dengan v olum e ± 20 ml. 5. Tam bahkan 4 m l larut an NaOH 0,1 M, panaskan diat as penangas air sam pai lar ut seper t i susu dan dingink an sam pai suhu 21- 24 o C, t et eskan 3 t et es fenolft alein. 6. Tam bahk an 4 m l for m aldehide 40% ( w ar na r ose hilang) , t it r asi dengan NaOH 0,1 N sam pai t erbent uk w arna rose kem bali. Kadar Casein = m l NaOH 0,1 N × 0,9 % Cat at an: Pr ot ein ber sifat am fot er sehingga sulit dit it r asi sebagai asam m aupun sebagai basa. Supay a dapat dit it r asi sebagai asam , m ak a sifat basa dar i gugus am ino dapat dihilangk an dengan m er eak sik anny a dengan for m aldehide sehingga ion H + dapat dit it rasi dengan NaOH. Reaksi: + H3 N- COO- + 2 HCOH ( HOCH2 ) 2 NH+ - COOProt ein Form aldehide ( HOCH2 ) 2 NH+ - COO- + NaOH ( HOCH2 ) 2 NH+ - COO- + Na+ + H2 O Pe n e n t u a n Ka d a r Ca se in Volum e NaOH 0,1 N V1 = …….. m l V2 = …….. m l V3 = …….. m l V r at a – rat a = ……… m l Kadar Casein = Vol rat a – rat a NaOH 0,1 N x 0,9 % I I . KARBOH I D RAT C. REAKSI U M U M KARBOH I D RAT 1. Reaksi Molish Pr insip: ik at an glik osida pada k ar bohidr at ak an t er hy dr olisa oleh H2 SO4 ( pek at ) m enghasilk an m onosak ar ida y ang k em udian dihy dr asi m em bent uk Fur t ur al. Dan bila dir eaksikan dengan Alpha Naft ol akan m em ber ikan w ar na ungu. Bahan/ Alat : - Larut an karbohidrat - Asam sulfat pekat - Lar ut an alpha naft hol 5% dalam et anol.( dibuat bar u) - Tabung reaksi © 2003 Digit ized by USU digit al libr ar y 4 Cara Kerj a : Ket er angan : Re a k si M o lish Ta b u n g I 1. Dalam t abung reaksi yang bersih dan kering dim asuk k an 2 m l lar ut an k ar bohy dr at dan 3 t et es lar ut an alpha naft hol 2. Melalui dinding t abung t am bah secar a per lahanlahan lar ut an asam sulfat pek at sam pai t er bent uk cincin cok lat . 3. Ulangi per cobaan di at as dengan m em per gunakan 2 m l air sebagai penggant i 2 m l larut an karbohydrat . ( percobaan blanko) . Am at i apa yang t erj adi. Disak ar ida y ang dalam suasana asam ak an t er hidr olisa dan m eny ebabk an r eak si posit if. Reaksi posit if. Dit unj ukkan dengan adanya Endapan Cu 2 O yang berwarna m erah bat a. Ba h a n Pe r e a k si H a sil Ke t e r a n g a n 2 m l Ka r b oh y d r a t 3 t t s a lp h a n a p t h ol H 2 SO 4 P ……… …………. . 2 m l a ir , 3 t t s la r . Alph a n a pt h ol H 2 SO 4 P ……… …………. II 2. Reak si Yodium Pr insip : Seny aw a polisak ar ida ak an m em ber ik an w ar na y ang spesifik dengan y odium . Bahan dan alat : Lar ut an am y ulum Lar ut an dekst r in Lar ut an Yodium Spot plat e Larut an yodium t erdiri dari: Krist al yodium kalium yodida dan aquades Cara kerj a : 1. Pada plat t et es y ang ber sih dan k er ing dim asuk k an 3 t et es lar ut an y ang diper ik sa. 2. Cam pur dengan 2 t et es lar ut an y odium 3. Ter bent uk w ar na bir u unt uk am y lum dan w ar na m er ah anggur unt uk dek st r in. Re a k si Yodiu m Pla t t e t e s Ba h a n Pe r e a k si H a sil Ke t e r a n g a n Lobang I 3 t et es sam pel 2 t et es Yodium ……… …………. . Lobang I I 3 t et es sam pel 2 t et es Yodium ……… …………. . 3. Reaksi Ben edict Prinsip: Cu 2 + akan direduksi ole h gula m enj adi Cu + . Dalam hal ini t er bent uk endapan Cu2 O. r eak si diny at ak an posit if apabila t er bent uk endapan ber w ar na bir u k ehij auan sam pai m er ah bat u bat a. ( t er gant ung pada kadar gula r eduksi yang t er sedia) . © 2003 Digit ized by USU digit al libr ar y 5 Bahan dan alat : - Lar ut an suk r osa ( Lar ..............................................) Larut an lakt osa ( Lar ..............................................) Lar ut an Benedict Tabung r eak si Cara kerj a: 1. Ke dalam t abung r eak si y ang ber sih dan k er ing dim asuk k an 1 m l lar ut an y ang ak an diselidik i k em udian dicam pur dengan 2 m l lar ut an Benedict . Kocok. 2. Didihkan selam a 2 m enit at au m asukkan dalam air yang m endidih selam a 5 m enit . 3. Perhat ikan w arna reaksi yang t erj adi. Larut an Benedict t erdiri dari; Re a k si Be n e d ict CuSO4 . 5H2 O. . . . . . . .................... Na 2 CO3 6 H2 O......................... Nat r ium Cit r at ........................ Aquades................................. Ta b u n g Pe r e a k si H a sil Ke t e r a n g a n I ( 1 m l sam pel) 2 m l Benedict …………… …………… D . PEN EN TU AN KAD AR GLU KOSA 1. Yodim et r i Prinsip: Gluk osa adalah t er m asuk gula r eduk si k ar ena m onosak ar ida y ang m em ilik i gugus OH lak t ol bebas dan dapat ber obah m enj adi gluk osa alifat is dengan gugus aldehide sebagai r eduk t or lem ah dan k em udian dapat dioksidasi oleh ok sidat or lem ah seper t i Yodium m em bent uk asam gluk onat . Pereaksi: a. I ndikat or larut an kanj i b. Lar ut an nat r ium k ar bonat 14,3 % c . Lar ut an Yodium 0,1 N d. HCl encer e. Lar ut an nat r ium t iosulfat 0,1 N Cara kerj a: Dit im bang sek sam a sam pel padat y ang m engandung kira - kira 100 m g gluk osa y ang t idak m engandung r eduk t or lainny a, dilar ut k an di dalam 50 m l air suling di dalam erlenm eyer bert ut up. Dit am bahkan 25 m l yodium 0, 1 N dan 10 m l lar ut an nat r ium k ar bonat 14,3 % , dit ut up dan dibiar k an selam a 30 m enit ditem p at gelap. Kem udian dit am bahk an 15 m l asam k lor ida encer dan y odium y ang t er sisa dengan lar ut an nat r ium t iosulfat 0, 1 N sam pai t er j adi w ar na k uning lem ah. Dit am bahkan lagi indikat or kanj i dan lanj ut kan t it r asi sam pai w ar na bir u hilang. Dilak uk an t it r asi blanko. Tiap m l yodium 0,1 N set ara dengan 9,9185 m g glukosa. Pe n e n t u a n Ka da r Glu k osa Volum e larut an 0,1 N yodium V1 = …….. m l V2 = …….. m l V3 = …….. m l V r at a – rat a larut an Yodium = ……… m l © 2003 Digit ized by USU digit al libr ar y 6 I I I . LI PI D A Lipida adalah seny aw a or ganik y ang t er dapat dalam m ahluk hidup y ang lar ut di dalam pelar ut non- polar t et api t idak lar ut di dalam air . Lipida t er dir i dar i lem ak ( sek it ar 95% ) , st er oida, k ar ot enoida, v it am in y ang lar ut dalam lem ak . E. PEM ERI KSAAN KELARU TAN LEM AK Prinsip: Jik a m iny ak dik ocok kuat dengan air ak an t er j adi em ulsi y ang t idak m ant ap k ar ena but ir- but ir m iny ak k ecil ak an m em isah dar i air . Penam bahan em ulgat or m isalny a, pr ot ein, gom , sabun ak an t er bent uk em ulsi y ang st abil. Lem ak lar ut dalam pelar ut non- polar seper t i et er , hek san, bens in, k lor ofor m , t et api t idak lar ut didalam pelar ut polar . Lem ak dalam lar ut an NaOH at au KOH ak an t er j adi penyabunan. Bahan dan alat : Miny ak gor eng, m ent ega Bensin, air, et er, alkohol 95% , NaOH 1 N Tabung r eak si, pipet uk ur Cara kerj a : 1. Siapkan 5 bua h t abung reaksi yang bersih dan kering 2. Tanbahkan pada m asing- m asing t abung reaksi 1 m l m inyak goreng, k enudian dicam pur k an dengan bahan sebagai ber ik ut : Tabung I : dit am bah 1 m l air Tabung I I : dit am bah 1 m l bensin Tabung I I I : dit am bah 1 m l alkohol 9 6 % Tabung I V : dit am bah 1 m l et er Tabung V : dit am bah 1 m l NaOH 1N 3. Aduk- aduk sam pai hom ogen. Diam k an beber apa m enit dan am at i ser t a cat at perubahan yang t erj adi. 4. Ulangi per cobaan di at as dengan m em akai m ent ega sebagai sum ber lipida. Ta b u n g I II III IV V M in y a k g or e n g 1 1 1 1 1 ml ml ml ml ml 1 1 1 1 1 ml ml ml ml ml Pe r e a k si H a sil Ke t e r a n g a n air Bensin alkohol 96% et er NaOH ……… ……… ……… ……… ……… …………. . …………… …………. . …………. …………. F. REAKSI PEN YABU N AN D AN SI FAT- SI FAT ASAM LEM AK Prinsip: Sabun m er upak an gar am alk ali dar i asam lem ak r ant ai panj ang y ang ber sum ber dar i m inyak at au lem ak, dim ana j um lah r ant ai kar bon m ulai dar i asam lem ak pem bent uk sabun dar i at om C- 10- C- 16. Kebany ak an sabun dibuat dengan j alan peny abunan ant ar a lem ak dengan suat u basa m onov alen seper t i nat r ium hidr ok sida m elalui r eak si peny abunan. Bahan dan alat : - Larut an NaOH 1N, HCl 1N, et anol 96% , bensin - Bek er glas, er lenm ey er , bat ang pengaduk - m inyak gor eng kelapa saw it © 2003 Digit ized by USU digit al libr ar y 7 Cara kerj a : 1. 5 gram m inyak goreng dim asukkan ke dalam beker glas kem udian dit am bahk an NaOH 1 N sedik it dem i sedik it sam bil dipanask an pada suhu 70 o C sebanyak 5x 0,142 g = 1,71 g ( yang t er dapat dalam sekit ar 42 m l 1N NaOH) . Pem anasan dilanj ut kan sam pai t er bent uk sabun. Ke dalam larut an sabun y ang t elah t er bent uk dit am bahk an HCl 1N k em udian am at i apa y ang t erj adi. 2. Kedalam cam pur an y ang t elah dit am bahk an HCl dit am bahk an bensin at au alkohol 96 % dan am at i apa yang t erj adi. Re a k si Pe n y a b u n a n Ta b u n g N a OH 1 N Pe m a n a sa n H Cl 1 N I 42 m l 30 m enit 5 ml Hasil ……………. + bensin ---- > + alk ohol 96% ---- > G. PEN EN TU AN KAD AR LEM AK SU SU Met ode ini digunak an unt uk penet apan k adar lem ak susu. Met ode ini bany ak digunak an di Er opa sebagai analisa r ut in. Prinsip: Su su dicam pur dengan H2 SO4 dan am il alkohol dalam t abung Gerber k husus lalu disent r ifuse sehingga lem ak susu t er pisah dan m enem pat i bagian at as t abung. Lem ak y ang t er pisah ini dapat dit ent uk an k adar ny a dengan m elihat panj ang kolom lem ak yang t erbent uk. Pereaksi: 1. Asam sulfat 90% ( w / w ) , BJ 1,815 2. Am il alk ohol Peralat an: 1. Tabung but ir om et er Ger ber 2. Sent r ifuse Ger ber ber diam et er 50 cm 3. Pipet volum et r i 10,75 m l ( lihat cat at an 1) Cara kerj a: 1. Masukkan 10 m l H2 SO4 ke dalam t abung but ir om et er dengan t anpa m em basahi leher t abung. 2. Pipet 10,75 m l susu, m asuk k an k e dalam t abung but ir om et er dengan t anpa m em basahi leher t abung. 3. Tam bahk an 1 m l am il alk ohol. Tut up t abung dengan penut upny a, k ocok m erat a, sent rifuge selam a 4 m enit pada 1100 rpm . 4. Tem pat kan t abung dalam penangas air 65 o C, selam a 3 m enit . 5. Baca per sent ase k adar lem ak ( w / w ) , sesuai dengan panj ang k olom t abung yang t elah dikalibr asi. Cat at an: 1. Jum lah sam pel y ang diam bil unt uk analisa ini ber beda- beda unt uk set iap negar a, sebagai cont oh: I ndia 10,75 m l Belanda 10,66 m l Hon g aria 10,80 m l I nggris 10,94 m l AS 11,00 m l 2. Jangan t am bahk an am il alk ohol sedem ik iam r upa sehingga k ont ak langsung dengan asam . © 2003 Digit ized by USU digit al libr ar y 8 3. Per siapk an k ain dan sodium bik ar bonat . Kedua bahan ini ber guna j ik a t abung but ir om et er y ang ber isi H2 SO4 pekat pecah. H . PEN EN TU AN KAD AR PROTEI N D EN GAN M ETOD A LOW RY. 1. Pr insip : Dialam prot ein t erdapat dalam 3 ( t iga ) bent uk, yait u ; a. Prot ein bebas. b. Pr ot ein y ang t idak t er lar ut , t er dapat dalam t ulang, ot ot , r am but dan gum palan dar ah. c . Pr ot ein t er lar ut , t er dapat banyak dalam bahan pangan seper t i susu, t elur dan daging. Penent uan k adar pr ot ein t er lar ut ini ber dasar k an pada ber bagai m et oda , m isalny a : t it r asi for m ol, spek t r ofot om et r i dan sebagainy a. 2. Tuj uan : Unt uk m enent ukan kadar pr t ein t er lar ut dalam suat u bahan secar a cep at . 3. Bahan & Alat : Larut an prot ein yang diselidiki Pereaksi Lowry A dan Lowry B. Lar ut an buffer aset at pH 5.0 Tabung reaksi 20 m l. Seper angk at spek t r ofot om et er 4. Cara kerj a : 1. Penent uan panj ang gelom bang m aksim um . a. Siapk an lar ut an pr ot ein dalam k onsent r asi t er t ent u dalam t abung r eaksi yang ber sih dan ker ing. b. Tam bahk an 8 m L per eak si Low r y A, diam k an selam a 10 m enit . c . Kem udian t am bahk an 1 m L per eak si Low r y B, diam k an selam a 10 m enit . Jum lah seluruh volum e 10 m L. d. Uk ur absor bansi sam pel dar i panj ang gelom bang 400 nm 800 nm , pada alat spekt rofot om et er. e. Bent uk kur va absor bansi Vs panj ang gelom bang. 2. Pem buat an kur va kalibr asi lar ut an pr ot ein. a. Tim bang t elit i 300 m g album in ( pr ot ein ) , lar ut k an dalam 1lit er air ( konsent rasi = 300 m g/ L = 300 µg / m L) . b. Siapk an lar ut an pr ot ein t er sebut dalam 10 t abung r eak si Sehingga kadarnya bert ingkat dari 30 – 300 m g / m L Car a pengencer an dapat dilak uk an sebagai ber ik ut : c . Tam bahkan kedalam m asing m asing t abung r eaksi diat as 8 m L per eak si Low r y A,diam k an selam a 10 m enit . d. Kem udian t am bahk an 1 m L lar ut an per eak si Low r y B, diam k an selam a 10 m enit . Volum e akhir set iap t abung adalah 10 m L Sehingga k onsent r asi pr ot ein per lu diper hit ungk an dengan pengencer anny a. e. Dengan alat spek t r ofot om et er diuk ur absor bansi m asing m asing t bg t er sebut pada panj ang gelom bang m aksim um . ( 600 nm ) f . Buat kur va kalibr asi pada ker t as gr afik dengan m enunj ukkan hubungan ant ar a absor bansi dan k onsent r asi © 2003 Digit ized by USU digit al libr ar y 9 Ta b u n g No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m L la r u t a n p r ot e in ( 3 0 0 µg / m L ) 0 0, 1 0, 2 0, 3 0, 4 0, 5 0, 6 0, 7 0, 8 0, 9 m L H 20 µ g pr ot e in / m L 1, 0 0, 9 0, 8 0, 7 0, 6 0, 5 0, 4 0, 3 0, 2 0, 1 0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 3. Penguk ur an sa m pel. a. Lar ut an pr ot ein y ang t er lar ut dar i sam pel, m isalny a enzy m e,album in,dan lain lain diendapk an t er lebih dahulu dengan k r ist al am m onium sulfat ( j um lahny a t er gant ung pada j um lah pr ot ein dalam sam pel, sam pai m engendap sem pur na ) . b. Lar ut an disent r ifugasi de ngan k ecepat an 1500 r pm selam a 15 m enit . Super nat an dipisahk an. c . Endapan ber upa pr ot ein dilar ut kan kem bali dalam lar ut an buffer aset at pH 5,0 sebanyak 5 m l. d. Pipet 1 m L dar i lar ut an pr ot ein pH 5, 0, m asuk k an k edalam m asing m asing t abung r eak si y ang ber sih dan kering ( 3 buah ) . Cam pur dengan 8 m L lar ut an per eaksi Low r y A, diam kan selam a 10 m enit . e. Kem udian kedalam t abung t ersebut dit am bahkan 1 m L larut an pereaksi Low ry B, diam akan selam a 10 m enit . Volum e akhir set iap t abung adalah 10 m L, sehingga k onsent r asi prot ein dalam sam pel per lu diper hit ungk an dengan pengencer an ( dalam hal ini 1 : 10 ) . 5. Dat a : 1. Kurva Kalibrasi ( 600 nm ) Ta b u n g No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 µ g pr ot e in / m L Ab so r b a n si 0 3, 0 6, 0 9, 0 12,0 15,0 18,0 21,0 24,0 27,0 ……………. ……………. ……………. ……………. ……………. ……………. ……………. ……………. ……………. ……………. © 2003 Digit ized by USU digit al libr ar y 10 2. Penguk ur an sam pel Ta b u n g No 1 2 3 4 5 6 7 Ab so r b a n si ……………. ……………. ……………. ……………. ……………. ……………. ……………. 6. Per hit ungan : 7. Cat at an. a. Per eak si Low r y A Asam phosphot ungst at – phosphom olibdat dalam air ( 1 : 1 ) b. Per eak si Low r y B Na 2 CO3 2 % 100 m L dalam lar ut an NaOH 0,1 N, t am bahk an 1m L CuSO4 dan 1 m L K Na Tart rat 2 % c. Lar ut an dapar aset at pH 5,0. Lar ut an I : 0,2 M lar ut an asam aset at Larut an I I : 2 M larut an Na - aset at Cam pur larut an I 14,8 m L + larut an I I 35,2 m L encerkan sam pai 100 m L. © 2003 Digit ized by USU digit al libr ar y 11