LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA IDENTIFIKASI LIPID

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA PERCOBAAN KE II IDENTIFIKASI LIPID Disusun Oleh: Nama dan NPM : Ambar Puspita Madyaningratri 10060313055 : Irma Astri Pebriliani 10060313056 : Tri Marleni 10060313057 : Ramli Maulana Latief 10060313058 Shift : C Kelompok : 1 Nama Asisten : Lisnawati, S.Farm. Tgl. Praktikum : Selasa, 24 Februari 2015 Tgl. pengumpulan Laporan : Selasa, 03 Maret 2015 LABORATORIUM FARMASI TERPADU UNIT B PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS ISLAM BANDUNG 2015 Tujuan Tujuan dilakukannya praktikum ini adalah agar mahasiswa dapat mengetahui dan memahami metode identifikasi lipid dari beberapa uji yang dilakukan. Serta mengetahui lipid golongan apa saja yang dapat ditentukan oleh masing-masing uji. Teori Dasar Lipida adalah senyawa organik berminyak atau berlemak yang tidak larut di dalam air, yang dapat diekstrak dari sel dan jaringan oleh pelarut nonpolar, seperti kloroform, atau eter. Jenis lipida yang paling banyak adalah lemak atau triasilgliserol, yang merupakan bahan bakar utama bagi semua organisme. (Lehninger, 1982) Lipid mempunyai beberapa fungsi diantaranya adalah sebagai komponen struktural membran, sebagai bahan bakar, sebagai lapisan pelindung dan sebagai vitamin dan hormon (Martoharsono, 1981) Lipid secara umum dapat dibagi ke dalam dua kelas besar, yaitu lipid sederhana dan lipid kompleks. Yang termasuk lipid sederhana antara lain adalah: 1) trigliserida dari lemak atau minyak seperti ester asam lemak dan gliserol, contohnya adalah lemak babi, minyak jagung, minyak biji kapas, danbutter, 2) lilin yang merupakan ester asam lemak dari rantai panjang alkohol, contohnya adalahbeeswax, spermaceti, dancarnauba wax, dan 3) sterol yang didapat dari hidrogenasi parsial atau menyeluruh fenantrena, contohnya adalah kolesterol dan ergosterol (Scy Tech Encyclopedia 2008).  Lipida dapat diklasifikasikan dengan beberapa cara. Secara tradisional lipida diklasifikasikan menjadi 5 golongan: a.       Gliserida dan asam lemak, termasuk di dalamnya lemak dan minyak b.      Fosfolipida c.       Spingolipida d.      Glikolipida e.       Terpenoid, termasuk di dalamnya getah dan steroida (Lehninger, 1982) Lipid tersusun atas asam lemak, biasanya merupakan molekul tak bercabang yang mengandung 14 sampai 22 atom karbon. Senyawa ini hampir selalu mempunyai jumlah atom yang genap. Baik asam lemak jenuh maupun tidak jenuh dapat diperoleh kembali dari hidrolisis senyawa lipid. (Westhem, 1956) Asam lemak jarang terdapat bebas di alam tetapi terdapat sebagai ester dalam gabungan dengan fungsi alkohol. Karena asam lemak merupakan molekul tak bercabang maka asam lemak pada umumnya adalah asam monokarboksilat berantai lurus (Page, 1989) Banyak uji identifikasi lipid yang dapat dilakukan seperti uji kelarutan lipid, uji akrolein, uji Lieberman-Burchard, uji ketengikan, uji Salkowski untuk kolesterol, uji bilangan iod, uji penyabunan, dan lain-lain. Pada praktikum ini hanya dilakukan uji kelarutan lipid, uji akrolein, dan uji Lieberman-Burchard. Uji Kelarutan Lipid Uji ini terdiri atas analisis kelarutan lipid maupun derivat lipid terdahadap berbagai macam pelarut. Dalam uji ini, kelarutan lipid ditentukan oleh sifat kepolaran pelarut. Apabila lipid dilarutkan ke dalam pelarut polar maka hasilnya lipid tersebut tidak akan larut. Hal tersebut karena lipid memiliki sifat nonpolar sehingga hanya akan larut pada pelarut yang sama-sama nonpolar. (Puspita.2013) Dengan reaksi sebagai berikut: Uji Akrolein Uji kualitatif lipid lainnya adalah uji akrolein. Dalam uji ini terjadi dehidrasi gliserol dalam bentuk bebas atau dalam lemak/minyak menghasilkan aldehid akrilat atau akrolein. Menurut Scy Tech Encyclopedia (2008), uji akrolein digunakan untuk menguji keberadaan gliserin atau lemak. Ketika lemak dipanaskan setelah ditambahkan agen pendehidrasi (KHSO4) yang akan menarik air, maka bagian gliserol akan terdehidrasi ke dalam bentuk aldehid tidak jenuh atau dikenal sebagai akrolein (CH2=CHCHO) yang memiliki bau seperti lemak terbakar dan ditandai dengan asap putih. (Puspita, 2013) Dengan reaksi sebagai berikut: CH2 OH KHSO4 CH OH [CH=CHCHO] + H2O CH2 OH Gliserol Akrolein Uji Lieberman-Burchard Uji Lieberman Buchard merupakan uji kuantitatif untuk kolesterol. Prinsip uji ini adalah mengidentifikasi adanya kolesterol dengan penambahan asam sulfat ke dalam campuran. Sebanyak 10 tetes asam asetat dilarutkan ke dalam larutan kolesterol dan kloroform. Setelah itu, asam sulfat pekat ditambahkan. Tabung dikocok perlahan dan dibiarkan beberapa menit. Mekanisme yang terjadi dalam uji ini adalah ketika asam sulfat ditambahkan ke dalam campuran yang berisi kolesterol, maka molekul air berpindah dari gugus C3 kolesterol, kolesterol kemudian teroksidasi membentuk 3,5-kolestadiena. Produk ini dikonversi menjadi polimer yang mengandung kromofor yang menghasilkan warna hijau. Warna hijau ini menandakan hasil yang positif. Reaksi positif uji ini ditandai dengan adanya perubahan warna dari terbentuknya warna pink kemudian menjadi biru-ungu dan akhirnya menjadi hijau tua. (Puspita, 2013) Dengan reaksi sebagai berikut: Alat Dan Bahan Alat Bahan Tabung reaksi Penangas air Pipet tetes Gelas ukur Kertas saring Spiritus lamp Penjepit tabung Rak tabung Korek api Air Alkohol dingin Alkohol panas Kloroform Minyak Olive oil/minyak zaitun Gliserol Minyak jelantah KHSO4 Asam asetat anhidrat Asam sulfat pekat Gajih/lemak Prosedur Kerja Uji kelarutan Uji Akrolefin Uji Lieberman-burchard untuk kolesterol Data Pengamatan dan Perhitungan Uji Kelarutan Lemak/Lipid Pada awal pengamatan: air,alkohol dingin,alkohol panas,dan kloroform berwarna bening/tidak berwarna. Tabel Hasil Pengamatan Uji Kelarutan Lemak/Lipid Pelarut Lemak Lemak Hasil Pengamatan Setelah Ditambahkan Lemak Minyak Reaksi Positif Air Minyak Tidak larut,minyak terpisah diatas _ Alkohol Dingin Minyak Tidak larut,minyak menggumpal dibawah,terdapat noda agak samar _ Alkohol Panas Minyak Tidak larut,minyak menggumpal dibawah,terdapat noda agak samar _ Kloroform Minyak Bening dan larut,nodanya besar + Keterangan : (+) menghasilkan kelarutan lemak/lipid Gambar setelah ditambahkan minyak Air Alkohol dingin Alkohol panas Kloroform Gambar dari masing-masing noda pada saat diteteskan pada kertas saring Uji Akrolein Tabel Hasil Pengamatan Uji Akrolein Lipid Bau Awal Sebelum Dipanaskan Hasil Pengamatan Saat Ditambahkan KHSO4 dan Dipanaskan Reaksi Positif Olive Oil Bau olive oil Baunya tidak berubah, tidak larut,olive oil menggumpal diatas _ Gliserol Bau gliserol Berbau tidak sedap,gliserol larut + Minyak Jelantah Bau minyak jelantah Baunya tidak berubah, tidak larut,gumpalan minyak diatas berwarna kuning _ Keterangan : (+) menghasilkan bau khas akrolein Gambar pada saat setelah dipanaskan Olive oil Gliserol Minyak jelantah Uji Lieberman-Burchard Pada awal pengamatan : Gliserol,minyak jelantah,minyak dan gajih berwarna bening. Tabel Hasil Pengamatan Uji Lieberman-Burchard Lemak yang digunakan Warna awal lemak yang digunakan Hasil yang terbentuk setelah ditambahkan CH3COOH dan H2SO4 Reaksi Positif Gliserol Kuning bening Tidak berubah warna + Minyak Jelantah Kuning bening Berubahmenjadi kuning sedikit keruh _ Minyak Bening kekuningan Berubah menjadi agak keruh _ Gajih Putih bening Berubah menjadi putih keruh _ Keterangan : (+) menunjukkan adanya kolesterol Gambar setelah ditambahkan asam asetat anhidrit dan asam sulfat Minyak jelantah Gliserol Minyak Gajih Pembahasan Uji Kelarutan Pada Uji ini pertama-tama disiapkan 4 buang tabung, pada tabung 1 diisi 2 mL air, tabung 2 diisi dengan 2mL alkohol dingin, tabung 3 diisi 2 mL alkohol panas, dan tabung 4 diisi dengan 2 mL klorofor. Kemudian ke dalam setiap tabung dimasukkan 0,2 mL minyak lalu dikocok agar partikel-partikel minyak dapat menusup masuk ke dalam larutan-larutan yang ada di keempat tabung tersebut. Setelahnya diambil 2 sampai 3 tetes dari masing-masing tabung dan diteteskan pada kertas saring. Hasil yang praktikan peroleh adalah bahwa pada tabung 1 yang berisi campuran air dan minyak menghasilkan noda/bercak pada kertas saring. Hal ini menandakan bahwa minyak tidak larut dalam air. Kemudian pada tabung 2 yang berisi campuran alkohol dingin dan minyak, terdapat noda/bercak yang agak samar. Hal ini menunjukkan bahwa minyak/lipid sedikit sekali larut dalam alkohol dalam keadaan dingin. Pada tabung 3 yang berisi alcohol dan minyak didapatkan hasil adanya noda/bercak agak samar. Hal ini juga menandakan bahwa alkohol tidak cukup baik dalam melarutkan minyak/lipid, namun lipid sedikitnya dapat larut karena adanya pengaruh suhu yang meningkat. Lalu pada tabung 4 yang berisi kloroform dan minyak, didapatkan hasil bahwa pada kertas saring terdapat noda/bercak besar. Hal ini menunjukkan bahwa klorofom adalah pelarut yang baik untuk lipid. Seperti teori yang disampaikan oleh Armstrong (1995) menyatakan bahwa lemak dan minyak tidak larut dalam pelarut polar seperti air, namun larut dalam pelarut non polar seperti kloroform, eter, dan benzene. Uji Akrolein Pada uji ini disediakan 3 tabung. Di mana pada tabung 1 dimasukkan minyak zaitun, pada tabung 2 dimasukkan gliserol, dan pada tabung 3 dimasukkan minyak jelanta. Lalu ke dalam masing-masing tabung tersebut ditambahkan sejumlah volume KHSO4 dengan perbandingan yang sama terhadap setiap tabung. Penambahan KHSO4 ini berperan sebagai senyawa pendehidrasi untuk mearik molekul air dari gliserol seperti teori yang disampaikan Anwar (1994). Hasil yang didapatkan oleh praktikan adalah bahwa pada tabung 1 dan tabung 3 terdapat bau khas masing-masing dari jenis minyak yang diujikan serta pada kedua tabung tersebut terdapat gumpalan minyak berwarna kuning di atas larutan. Sedangkan pada tabung 2 yang berisi gliserol dan KHSO4 terdapat bau tidak sedap dan terlihat bahwa gliserol larut dalam larutan. Hal ini menyatakan bahwa uji akrolein positif terhadap gliserol karena menurut Anwar (1994), pada teorinya, hanya gliserol dalam bentuk bebas atau yang terikat berupa senyawa yang akan membentuk akrolein, sedangkan asam-asam lemak tidak. Uji Lieberman-Burchard Uji ini digunakan untuk mengidentifikasi kolesterol secara kuantitatif dengan cara dikonversikan oleh adanya warna hijau yang timbul setelah serangkaian reaksi yang dilakukan. Untuk uji ini dilarutkan sedikit kolesterol (pada tabung 1: gliserol, tabung 2: minyak jelantah, tabung 3: gajih, tabung 4: minyak) dalam kloroform. Kemudian setelah semuanya larut ditambahkan 10 tetes asam asetat anhidrat dan 2 tetes asam sulfat pekat ke dalam masing-masing tabung. Dan hasil yang diperoleh oleh praktikan adalah pada tabung 1 warna awalnya dan akhir reaksi tetap berwarna bening. Pada tabung 2, warna awalnya kuning bening dan setelah direaksikan warnanya menjadi sedikit keruh. Pada tabung 3, warna awalnya putih bening menjadi putih keruh. Dan pada tabung 4, warna awal sebelum reaksi adalah bening kekuningan, setelah mengalami reaksi warnanya berubah menjadi agak keruh. Menurut teori seharusnya pada tabung 2, 3, dan 4 terbentuk warna hijau akibat reaksi antara kolesterol dengan asetat anhidrat (Gilvery & Goldstein, 1996), sedangkan pada tabung 1 gliserol bukan merupakan kolesterol, sehingga memang tidak menghasilkan warna hijau. Warna hijau ini bisa tidak dihasilkan pada tabung reaksi 2, 3, dan 4 karena bisa saja kadar kolesterol yang diujikan berkurang. Kasimpulan Pada uji kelarutan, lipid hanya larut pada pelarut kloroform, karena kloroform merupakan pelarut yang bersifat non polar sama seperti sifat lipid yang non-polar. Pada uji aklolein hanya gliserol yang menghasilkan bau tidak sedap yaitu bau akrolein, karena hanya gliserol yang bisa didehidratasi oleh KHSO4. Pada uji Lieberman-Burchard yang menunjukkan reaksi positif terhadap kolesterol adalah minyak, gajih, dan minyak jelantah. Tapi pada uji ini tidak timbul warna hijau karena kadar kolesterol yang diujikan hanya sedikit sehingga tidak sempat membuat senyawa kompleks yang menyebabkan perubahan warna. DAFTAR PUSTAKA Anwar, Chairil.1994.Pengantar Praktikum Kimia Organik. Yogyakarta: Depdikbud Dirjen Pendidikan Tinggi. Armstrong, Frank B..1995.Buku Ajar Biokimia Edisi ketiga.Jakarta: EGC Gilvery dan Goldstein.1996.Biokimia Suatu Pendekatan Fungsional Edisi Ketiga.Surabaya: Airlangga University Press Lehninger, Albert L..1984.Dasar-dasar Biokimia Jilid 1.Penerjemah: Maggy Thenawijaya.Jakarta: Erlangga. Terjemahan dari: Principles of Biochemistry Martoharsono, Soeharsono.1981.Biokimia Jilid I.Yogyakarta: UGM Press Page, DS dan R. Soendoro.1989.Prinsip-prinsip Biokimia.Jakarta: UI Press Westhem and Jeskey.1956.Introductory Organic Chemistry.New York: Mc Graw_Hill Book Company Inc Puspita, Fika.2013.Uji Identifikasi Lipid.fikapuspita.blogspot.in/2013/07/laporan-uji-kualitatif-lipid.html?m=1 Diakses pada 28 Februari 2015 Pukul 18:08 Scy Tech Encyclopedia.2008.Acrolein test.http://www.answers.com/topic/acrolein_test.Biokimia-Lipid (http://ilmukimia.webs.com) Diakses pada 28 Februari 2015 Pukul 15:04