Virusologie LP

Sunteți pe pagina 1din 7

Virusologie LP 3

Virusuri= paraziti intracelulari

 Diagnostic direct prin determinare de antigene /acid nucleic/


izolare intr-un organism viu

 Indirect: prin determinare de anticorpi.

Reactia de seroneutralizare: identificam aproape virusurile ce


produc efect citopatic pignotic litic ( de tip enterovirusuri)

Neutralizare- complex antigen (particula virala)-anticorp ( cu ac din


ser).

Virusneutralizare- unde virusul devine neutru. Virusul este


necunoscut. Se cauta cantitatea cea mai mica de virus ce produce
infectia, bazandu ne pe niste anticorpi cunoscuti.

SN- diluez anticorpii pana vedem daca ei mai asigura protectie ( avem
un virus cunoscut).

Etape RSN

1. Titrarea infectivitatii virale

2.blocarea infectivitatii virale

3.demonstrarea neutralizarii infectivitatii virale.

( A se vedea ppt-ul) In prima etapa, diluam particulele virale, deci nr


particulelor scad pe parcurs. Daca la cantitati mici inca este infectios,
virusul e foarte puternic/agresiv. Dupa aceste dilutii , inoculam in niste
culturi celulare care sunt susceptibile peste care adaugam agar
( facem asta pt ca virusul sa se replice dar sa nu disemineze rapid).
Pentru a determina capacitatea unui virus de a infecta o cultura, se
imparte aceste godeuri, se numara plajele si la sfarsit se poate
determina PFU - unitati formatoare de plaje, si se raporteaza la dilutie.

Urmeaza sa blocam actiunea virusului prin adaugare de anticorpi. Se


fac dilutii de anticorpi si se asociaza cu eprubeta de virus de la
virusneutralizare ( deci mai multe de eprubete de anticorpi diferite la
aceasi eprubeta de virusneutralizare). Dupa formarea complexelor ag-
ac, se inoculeaza in culturi celulare . Vom avea un martor pozitiv de
infectie ( infectam doar cu virus o cultura), si un martor negativ, unde
nu punem niciun virus. Pentru o conc mare de ac, nu o sa avem niciun
efect citopatic, pe masura ce titrul de ac scade, o sa apare plaje.
Ultima cultura la nivelul careia nu observam nicio modificare ,
reprezinta titrul de anticorpi protectori.

Tabla de sah - diagnostic mult mai rapid, se bazeaza pe reactia de


SN, se pot determina mai multe enterovirusuri deodata.

Rujeola- ARNss-. eritrem macula-papulara confluent, triplu catar


(conjuctivita, coriza, tuse si sau diaree), cu febra ( peste 38°C). Prezina
semnul Koplick in 40% din cazuri, reprezinta niste depozite de fibrina,
pe interiorul obrajilor.

 Complicatile rujeolei : otita, pneumonie, encefalita-PESS


( panencefalita sclerozanta subacuta).

Rubeola - ARNss+ :rush, febra moderata cu adenopatii. Nu este


papular !!! , nici nu deformeaza relieful , nici nu conflueaza. Semnul :
pete forsheimmer .

 Complicatii : artrita , purpura trombocitopenica, encefalita.


Diagnosticul nu se face niciodata serologic la femei gravide ,
trebuie PCR.

Rubeola in engleza = rujeola, Rubella (eng) - rubeola.

 Diagnosticul virusologic al rubeolei :

o Diagnostic serologic: ser - testare anticorpi specifici , IgM

o Izolare virala (1-3 zile de la debutul rushului).

Oreion- ARN negativ. Parotidita Epidemica : Este prezenta febra, dureri


musculare, si inflamatia glandei parotide, cefalee.

 Complicatile includ meningita, encefalita, orhita, pancreatita,


surdidate, sterilitate. Diagnosticul serologic - IgM .

Vaccin - inactiv, viu atenuat, recombinant.


Atenuat - ROR - reactie adversa : reversie la virulenta ( virusul atenuat
revine la infectivitate+replicare prin niste mutatii , care au survenit fie
deoarece nu s-a mentinut corect la temperatura, fie dupa ceva timp
realizeaza niste mutatii spontane astfel incat sa se replice o data ce a
infectat o celula.). Nu se vaccineaza femeile gravidea cu ROR, riscam
reversia la virulenta si dezvoltarea unor reactii similare infectiei
naturale.

Lucrare Practica nr 4

Infectia virala gripala ( mare infectivitate) infecteaza celulele


ciliate columnare, ce se regasesc la nivelul nazofaringelui laringelui,
traheei, bifurcatiei traheei. La nivelul bronhiolelor virusul nu se poate
fixa deoarece nu sunt susceptibile, au alta forma. Scopul virusului e de
a distruge clearence-ul/activitatea celulei si se strica mecanismul ciliar
si favorizeaza patrunderea virusurilor, deci practic cilii nu mai bat si nu
se mai produce mucus ( ce ar fi impedicat fixarea virusului).

!!Gripa nu se diagnosticheaza clinic. E important sa ne orientam


clinic. Simptome: febra ridicata, 38,39, cu debut insidios si durata intre
2-5 zile, Mialgie, stare generala modificata, astenie, cefalee, tuse
neproductiva, faringita, rinoree, greata si varsatura, frison. Este
neproductiva deoarece virusul intereseaza caile respiratorii superioare,
nu are treaba cu cele inferioare. Faringele (deci faringitele) nu
reprezinta tinta in mod deosebit pentru virusul gripal. Laringo-
traheobronsitele sunt cauzate mai degraba de V paragripale, nu
gripale.

Produsul patologic ar trebui sa fie exudat faringian ( nu avem sputa),


aspirat nazofaringian, aspirat traheobronsic. Cu produsul patologic
facem diagnostic direct sau indirect. Pt diagnosticul indirect, acesta
este 0, il folosim in scop epidemiologic. Perioada de incubatie este in
medie de 72h, intervalul este scurt, deci nu putem face un diagnostic
corect la un pacient, deoarece trebuie sa asteptam si 14 zile pentru
anticorpi, deci nu folosim diagnosticul indirect in camera de garda. Mai
rapid facem prin PCR sau imunofluorescenta. Mai putem izola virusul ,
dar se prelungeste procedura la vreo 5 zile, este utila pentru a studia
anumite caracteristici a virusului, dupa diagnosticul pus.
Virusul gripal nu este citopatogen ( nu se obtine foarte rapid acest
efect, si este nespecific acest efect). Are pe suprafata hemaglutinine si
neuroaminidaze. In culturi celulare, daca adaugam hematii, acestea se
vor duce la celulele tinta infectate cu virusul. Procesul se cheama
hemadsorbtie.

Demonstrarea prezentei virusului in OGE-reactia de hemaglutinare-


RHA,

ETAPE: ag viral - dilutii binare, suspensii de hematii, se incubeaza la


temp camerei 30 min, apoi avem nevoie de 2 martori, unul pozitiv,
altul negativ.

Rol RHA : demonstrarea prezentei virusului hemaglutinat, titrarea


antigenului hemaglutinat.

In hemaglutinare, facem dilutii de virusul sa vedem cat de puternic e


virusul care face infectia..

In hem-aglutino-inhibare, diluez anticorpii, iar la o anumita dilutie,


acest titru de anticorpi nu mai este eficient . Ultimul godeu in care
apare acest 'banut' , are ultimul suficient de multi anticorpi protectori

!!!Deci la prima avem mai intai cerculete rosii iar la a doua incepem cu
cerculete mici ( ce au anticorpi)

Reactia de imunofluorescenta, poate sa fie directa, indirecta si se


bazeaza pe reactia antigen anticorp. Avem produsul patologic care a
fost recoltat, il intindem pe lama, sa se usuce, urmeaza fixarea sa cu o
solutie care deshidrateaza (acetona de ex), venim cu un anticorp. Daca
ac e marcat, vorbim de reactia IF directa. Daca ac ( primul) nu e
marcat, o sa avem nevoie de un al doilea care o sa -l marcheze pe
primul, fiind o reactie indirecta.

Spalarile : dupa ce am fixat produsul patologic pe lama, este esential


sa facem o spalare pentru a indeparta orice contaminare pentru a nu
pacali anticorpul cu care lucram. Dupa ce punem anticorpii si ii lasam o
anumtia perioada de timp, se vor forma complexe antigen anticorp, si
vor ramane ac liberi, daca nu spalam dupa aceasta etapa, toate
reactile vor fi pozitive. Microscopul nu face diferenta intre ac fixati si
cei nefixati.

Primii anticorpi sunt IgM , apoi apar IgG ( pot ramana si toata viata
IgG). Pt diagnostic serologic avem nevoie de o proba cat mai aproape
de 2saptamani si inca o proba pereche la distanta de alte 2 saptamani.

Lucrare practica 5, 5 noiembrie

Herpesvirusuri

-sunt virusuri cu genom ADN dublu catenar

-au latenta

Herpes simplex 1 afecteaza zona faciala, pe cand 2 afecteaza zona


genitala dar pot fi interschimbate.

Zona zoster si varicela : varicela apare pe intreg corpul, generalizat,


pe cand ZZ este localizata, si de obicei, pe traiectul unui nerv. Eruptia
ZZ este foarte dureroasa. Ei dau latenta in neuronii senzitivi (deci duc
la durere).

Virusul citomegalic (CMV), celula infectata isi mareste considerabil


dimensiunea, si au latenta in limfocitul T

Gamma virusurile au sediu de latenta in limfocitul B. Epstein Barr


produce mononucleaza, dar poate produce limfomul Bur? (Cancer) .

Alfa herpes virusurile: gingivostomatita herpetica ( eruptie herpetica,


veziculara in buchet). Veziculele trebuie sa fie neaparat prezente

Herpesul genital: initial apar si aici vezicule, dar se asociaza cu


prurit/arsura, pacientul se scarpina si datorita mediului umed, avem
niste leziuni de tip ulcerativ. Cu cat leziunile sunt mai vechi, izolarea
virusului devine mai dificil.

Herpesul neonatal: herpes simplex de tip 2. Screeningul TORCH se face


femeilor insarcinate dar unele nu fac acest screening. Eruptia poate sa
fie de tip simpla -> petesii si apar deficite neurologice. Produsul
patologic trebuie sa fie lichid vezicular. Recoltarea trebuie sa fie cand
leziunile sunt acute !!! Cu cat leziunile sunt mai vechi, e din ce in ce
mai dificil sa prelevam produsul patologic.

Produsul patologic: il punem intr-o cultura celulara, si asteptam efectul


citopatic de tip mixt : sincitial si incluzional. Izolarea dureaza 1 zi

Diagonisticul direct : PCR-foarte sensibil, si imunofluorescenta directa.

Produsul patologic este recoltat din vezicule. Cu tamponul exudat o sa-l


1.amprentam pe lama, asteptam vreo 10 minute pt uscare, dupa care
il

2.fixam cu acetona/metanol/etanol dupa care

3.spalam lama pentru indepartarea fixatorului. Dar adaugam ser


fiziologic sau o solutie tamponata si punem intr-un agitator, astfel se
realizeaza spalarea, nu sub jetul de apa ca exista riscul sa pierdem
antigenul.

4. Adaugam anticorpii : (imunofluorescenta indirecta)adaugam


anticorpi dupa anticorpi anti-anticorpi uman marcat
imunofluorescent(de la iepure ultimul, adaugam anticorpul uman la
iepure apoi el face anticorpi pt asta). Realizam spalarea dupa
adaugarea primilor anticorpi, sa nu avem liberi care vor fixa anticorpii
ulteriori.

A 2-a varianta a etapei 4 : adaugam anticorpul marcat direct.

Prin tehnica imuno-indirecta avem un efect de amplificare, deci se


foloseste cand credem noi ca vom avea o cantitate mica de antigen,
avem o sansa mai mare ca acesti anticorpi sa se fixeze de antigen.

Citirea rezultatului se face cu microscopul confocal.

Diagnosticul indirect : au o valoare epidemiologica, de screening

Herpes simplex si in general alfa virusurile, au un efect citopatic de tip


mixt.

PCR- metoda cea mai sensibila. Serologia ne ajuta doar sa ne orientam,


nu putem sa punem in diagnostic direct
Citomegalovirus: diagnosticul se bazeaza pe Shell vials, sau putem sa
folosim imunofluorescenta directa pt detectia antigenelor pp65.

Test de aviditate.

Aviditatea - viteza cu care anticorpii se leaga de antigenul de interes.


Daca eu pun niste anticorpi cu antigenul respectiv, si daca ei se leaga
ff mult in prima etapa, au o aviditate crescuta, inseamna ca anticorpii
sunt foarte bine mobilizati, deci este o infectie veche, au mai avut de a
face cu asa ceva. Daca anticorpii se fixeaza destul de lent, atunci desi
sunt anticorpi IgG ( cu memorie) avem o infectie noua. Deci aviditate
scazuta -> primo infectie.

Daca intr o infectie cu CMV, clasele IgG si IgM negativ -> primo
infectie.

IgG - , IgM pozitiv - repetam testarea

O hepatita cu virusuri hepatitice reale , transaminazele ajung la ordinul


zecilor de mii, ceilalti virusi ajung doar la cateva sute

Virusul Ebstein : transaminaze pana in 1000. Tratamentul este


simptomatic. Diagn : imunofluorescenta sau PCR sau biopsie
tisulara/sange.

S-ar putea să vă placă și