ENZIME

Enzimele n procese
metabolice

Enzime
1. Istoric
2. Definiie
3. Caracteristici ale catalizei enzimatice
4. Mecanisme de aciune cinetica reaciilor enzimatice
5. Structur
6. Specificitate
7. Localizare intracelular
ENZIME - Istoric
Sunt cunoscute de secole
Procese enzimatice Procese de fermentaie ACRIREA LAPTELUI
FERMENTAREA MUSTULUI OETIREA VINULUI
FABRICAREA BERII
1640 Medicul olandez VON HELMONTZ introduce termenul de
FERMENTAIE
Apare termenul de FERMENI
lb. latin fervere = a fierbe, a fermenta (bule de gaze care se degaj)

Enzime. Definiie

catalizatori biochimici propriu-zii = biocatalizatori

biocompui de natur organic

proteine nalt specializate

biomolecule caracterizate prin - eficien

-

specificitate

putere catalitic deosebit

- capacitate de reglare mult superioar

catalizatorilor, utilizai in vitro, n chimia anorganic i organic

acioneaz n condiii blnde de reacie (condiii fiziologice, compatibile cu

viaa celulei umane):
pH neutru (~7);
temperatura organismului uman (~36C);
presiune atmosferic normal.
CARACTERISTICILE CATALIZEI ENZIMATICE
I. Caracteristicile aproximativ comune catalizei chimice

Mresc viteza de reacie fr s se consume;

Cantiti mici de enzime sunt capabile s transforme cantiti mari de substrat = vitez de
reacie foarte mare => eficien extraordinar;
Dup terminarea unei reacii pot cataliza transformarea altei molecule de substrat;
Enzimele catalizeaz numai reaciile care sunt termodinamic posibile (G < 0). Nu modific
starea de echilibru, ci viteza cu care se ajunge la echilibru;
Catalizeaz n general reacii reversibile

AI. Caracteristicile specifice catalizei enzimatice, sunt determinate de condiiile deosebite

existente n organismele vii:
- Structura proteic a enzimelor:
CONDIII BLNDE DE REACIE (pH, temperatur, presiune)
- Natura biocompuilor transformai
Substane cu inerie chimic mare
Particularitile catalizei enzimatice:
Cataliz microeterogen (i omogen i eterogen): enzimele sunt compui macromoleculari
fixai pe formaiuni subcelulare;
Grad (foarte) mare de specificitate = > menine ordinea n celule

Procesele enzimatice sunt procese autoreglate (enzimele catalizeaz n general reacii care
se petrec n lan)
mbtrnirea enzimelor = proces determinat de natura lor proteic (n organismele vii au

loc permanent procese de degradare i de sintez proteic = turnover)

MECANISMUL CATALIZEI ENZIMATICE

EXPLICAIA EFICACITII ACIUNII ENZIMELOR
Enzimele mresc viteza reaciilor chimice !
Eficacitatea catalizatorilor, n general i deci i a enzimelor poate fi explicat aplicnd
LEGEA LUI ARRHENIUS:
Ea
dlnk
dT

n care:
=

RT2

k=constanta de vitez
Ea=energia de activare

T=temperatura (grade Kelvin)

R=constanta gazelor
Accelerarea vitezei unei reacii cu enzime n raport cu viteza unei reacii fr catalizator poate fi
chiar de 106 1017 ori
=> VITEZA DE REACIE DEVINE ASTFEL APROPIAT DE LIMITA TEORETIC
=> Ca i n cazul unor reacii spontane din chimia general
accelerarea vitezei unei reacii chimice are loc prin mai multe modaliti:
1.) Prin creterea numrului de molecule bogate n energie care s realizeze ciocnirile eficace
dintre molecule, printr-un exces de energie necesar activrii moleculelor (energie solar,
descrcri electrice, creterea temperaturii, etc) DAR, acestea sunt condiii improprii organismului
viu!!
2.) Prin scderea energiei de activare - n organismul viu
Enzimele scad energia de activare prin formarea unui complex intermediar activat
enzim-substrat (ES) nalt energetic, cu reactivitate mare.
Deci, pentru realizarea actului catalitic, enzima E trebuie s se fixeze pe substratul specific S
pentru a forma complexul Enzima-Substrat (ES)

FORMAREA COMPLEXULUI ACTIVAT ENZIM - SUBSTRAT (Es)

O reacie enzimatic parcurge mai multe stadii:
E+S

ES

ET

E+P

COMPLEXUL ACTIVAT (ES) rezult prin formarea unor combinaii specific reactive ntre gruprile
catalitice i substrat

Centrul activ al enzimei (galben) are o conformaie

molecular adaptat la substrat (rou)

Exemplul clasic:
Reacia catalizat de CATALAZ
H2O2 + H2O2 2 H2O + O2

G < 0

Descompunerea H2O2 LA CLDUR: ENERGIA DE ACTIVARE = 18 kcal (76 kJ/mol)

Descompunerea H2O2 CU CATALIZATOR MINERAL (Pt):
ENERGIA DE ACTIVARE = 8 kcal (49 kJ/mol)
Descompunerea H2O2 CU ENZIMA CATALAZA:
ENERGIA DE ACTIVARE = 2,3 kcal (8 kJ/mol)
Aplicnd legea i ecuaia lui Arrhenius s-au calculat constantele de vitez pentru:
Recia catalizat de PLATIN Reacia
catalizat de CATALAZ
k catalaz
= 106

S-A DEMONSTRAT C :
k platin

Deci, la 37OC CATALAZA DESCOMPUNE PEROXIDUL DE HIDROGEN DE CIRCA UN MILION DE ORI MAI
REPEDE DECT PLATINA

H2O2 + H2O2

2 H2O + O2

G < 0

Scderea energiei de activare n reacia de descompunere a peroxidului de hidrogen la cldur (1) n

prezena platinei (2) i a enzimei catalaza
MECANISME CARE INTERVIN I POT EXPLICA FORMAREA
COMPLEXULUI ACTIVAT ENZIM - SUBSTRAT (ES)

=> Efect de PROXIMITATE

(POZIIONARE, APROPIERE, VECINTATE) dintre centrul activ al enzimei i moleculele care
urmeaz a fi transformate.
=> EFECT DE AEZARE CONFORMAIONAL FAVORABIL
=> EFECT DE CATALIZ COVALENT
Exemplu: formarea unei baze Schif ntre substrat i unele grupri
funcionale din centrul activ al enzimei.

EFECT DE CATALIZ ACID-BAZ

20
ENZIMELE INDUC ARANJAREA SUBSTRATULUI NTR-O POZIIE RELATIV FAVORABIL LA GRUPRILE
CATALITICE NLESNINDU-LE INTERACIUNILE (EFECT DE APROPIERE)
Interaciile dintre centrul activ i substrat au loc
prin intermediul acelorai legturi care stabilizeaz
i structura proteic, i anume:
interacii hidrofobe, electrostatice, de hidrogen, sau de tip van
derWaals.

Formarea complexului enzim-substrat (ES) activat, starea

tranziie (T*) i formarea produsului de reacie (P)

CENTRII ACTIVI AI ENZIMELOR

Centrul activ al enzimei sau centrul catalitic al enzimei reprezint o parte special
structurat a enzimei care fixeaz substratul asupra cruia acioneaz

Reprezint regiuni bine determinate de pe suprafaa enzimei

STRUCTURA ENZIMELOR
Cu foarte rare excepii enzimele sunt proteine sau heteroproteine
Excepiile, descoperite n ultimii 20 de ani structur de acizi
ribonucleici de tip catalitic = ribozime
Exemple: Ribonucleaza P este un complex protein ARN
EXIST DOU MARI CATEGORII DE ENZIME DIN PUNCT DE VEDERE STRUCTURAL:
I. CU STRUCTUR UNITAR: - PROTEINE SIMPLE - CONSTITUITE NUMAI DIN AMINOACIZI
AI. CU STRUCTUR BINAR: - HETEROPROTEINE PROTEINE CONJUGATE:
PROTEIN + COFACTOR (PARTE NEPROTEIC)

I. ENZIMELE CU STRUCTUR UNITAR - PROTEINE

SIMPLE
Exemple:

RIBONUCLEAZA (124 RESTURI DE AA) ARE 12.700 DALTONI

TRIPSINA (24.000 DALTONI)

PEPSINA (33.000 DALTONI)

MURAMIDAZA (LIZOZIM) 129 AA

DALTON = 1,661 x 10-24 grame

Activitatea acestor enzime depinde numai de structura proteinelor

I.

ENZIMELE CU STRUCTUR UNITAR

Centrul activ este reprezentat de un numr mic de aminoacizi.

Exemplu: la chimotripsin centrul activ este format din HISTIDIN i SERIN
OBSERVAIE! Aminoacizii din centrul catalitic al enzimei:

Pot fi la distan din punct de vedere al structurii primare

Dar spaial apropiai din punct de vedere al structurii tridimensionale

Ribonucleaza: centrul activ His + Ser
Colinesteraza: centrul activ Ser
Hexokinaza: centrul activ- gruprile SH ale cisteinei
Centrul catalitic al anhidrazei carbonice
Zn2+ + 3 molecule de His + H2O
AI.ENZIMELE CU STRUCTUR BINAR: HETEROPROTEINE PROTEINE CONJUGATE:
PROTEIN + COFACTOR (PARTE NEPROTEIC)
Structura binar este indispensabil manifestrii aciunii catalitice
-

COMPONENTA PROTEIC SE NUMETE APOENZIM

COFACTORUL poate fi:

COENZIM (legtura dintre apoenzim i componenta neproteic este labil, se poate separa prin
dializ sau prin alte mijloace de partea proteic)
GRUPARE PROSTETIC (cofactorul se fixeaz pe apoenzim prin legturi covalente i nu pot fi
separate prin dializ)

COFACTORII, din punct de vedere chimic pot fi:

VITAMINE

HORMONI

METALE

Coenzimele i gruprile prostetice au structuri chimice, funcii i mecanisme de

aciune diferite.
Unii cofactori sunt considerai cosubstrate
DE EXEMPLU: REACIILE REDOX

ROLUL COMPONENTEI PROTEICE:

Confer specificitatea de substrat
Dirijeaz i specificitatea de aciune
ROLUL COFACTORULUI:
Particip la realizarea funciei catalitice
Confer specifictatea de reacie (de aciune)

Reprezentarea schematic a structurii enzimelor i a centrilor activi:

a
protein-enzima, cu structur unitar;
b- heteroproteina, cu structur binar (apoenzima + cofactor

STRUCTURA ENZIMELOR
STRUCTURA APOENZIMEI
STRUCTURA PRIMAR
Se refer la scheletul covalent al lanului polipeptidic i la secvena de
aminoacizi componeni.
Se specific:

numrul de aminoacizi

felul aminoacizilor

succesiunea lor n lan

tipurile de legturi

locul punilor disulfurice (-S-S-)

Structura primar a enzimei

Ribonucleaza A din pancreasul bovin

STRUCTURA SECUNDAR
Desemneaz aranjamentul obinuit ntr-o singur dimensiune n spaiu,
prin dispunerea elicoidal a catenei polipeptidice.
Conformaia unic, n zig-zag, este determinat de starea
de hibridizare a atomilor participani la structura lanului
Exist dou tipuri de lanuri:
-

-helix

-helix (tip foaie pliat).

Structur secundar de tip -helix (a) i -helix (tip foaie pliat) (b)

STRUCTURA TERIAR
Desemneaz asamblarea n spaiul tridimensional (organizarea spaial) a lanurilor polipeptidice cu
structur primar i secundar bine definite
Determin tipurile de legturi noncovalente stabilite ntre radicalii aminoacizilor care pot
stabiliza conformaia respectiv
Exist dou tipuri diferite de structuri teriare :
1) globular (ghem), Ex: albumina, ribonucleaza, lizozimul
2) fibrilar (fibre), Ex: colagenul
Caracteristicile structurii teriare:

 Imprim enzimelor diferite proprieti biologice.

Este stabilizat prin:
- interaciuni electrostatice; - legturi
de hidrogen;
- interaciuni de tip hidrofob; - puni
disulfurice;
- interaciuni ntre radicalii polari ai aminoacizilor.

33

STRUCTURA CUATERNAR

Specific protein-enzimelor oligomere, poate rezulta din: - asocierea unor

lanuri polipeptidice cu structur teriar;

- asocierea unor protomeri (dimeri, trimeri, tetrameri, etc)

Protomerii se leag ntre ei prin legturi de tip noncovalent, realizate prin puncte sau suprafee
complementare.
Caracteristic enzimelor de tip allosteric, cu funcii nalt specifice.
Activitatea catalitic a enzimelor depinde de integritatea conformaiei
proteinei native.
Prin denaturare sau disociere n subunitile componente, activitatea sa catalitic se pierde (de
obicei).

Integritatea structurii primare, secundare, teriare i cuaternare sunt eseniale pentru activitatea catalitic
a enzimelor

Niveluri de organizare n structura apoenzimei

SPECIFICITATEA ENZIMATIC
1. SPECIFICITATEA DE REACIE = capacitatea enzimei de a cataliza un anumit tip de reacie (sau
reacie nrudit) posibil din punct de vedere termodinamic.
Exemple:

oxidoreductaze

transferaze
- Determinat n special de structura chimic a cofactorului (coenzimei sau a gruprii prostetice)
Excepii:
Enzimele dependente de piridoxal-fosfat (PLP) sunt enzime care au n

structura lor vitamina B6 activat, pot cataliza reacii de:

decarboxilare

transaminare

izomerizare

- Mecanismele sunt diferite !

SPECIFICITATEA DE SUBSTRAT = proprietatea enzimei de a aciona asupra unei anumite substane sau
asupra unui grup de substane cu unele caracteristici chimice comune.
Determinat de natura apoenzimei (partea proteic a enzimelor).
Asigur ordinea desfurrii reaciilor chimice n celul, mpiedicnd formarea i degradarea
haotic a diferiilor constitueni.
Gradul de specificitate variaz de la o enzim la alta.
Specificitatea de substrat poate fi
explicate sugestiv cu ajutorul
modelului lact-cheie (lock and
key model): numai un substrat
potrivit, cu o structur
complementar centrului activ al
enzimei va putea fi convertit n
produi de reacie.
A. Specificitatea absolut de substrat
Exemple: ureaza, fumaraza, arginaza
- acioneaz asupra unui singur substrat cataliznd un singur tip de reacie chimic.

Specificitatea stereochimic
Configuraia spaial a moleculelor substratului.

Asimetria structural
este o caracteristic
generala a sistemelor
biologice !

Specificitatea optic tipuri de specificitate absolut de substrat

Specificitatea geometric

Capacitatea de a recunoate specific substraturi care conin centri asimetrici.

Acioneaz numai asupra unuia dintre izomerii optici
Exemple: - L aminoacid oxidaza, D aminoacid oxidaza, maltaza
- fumaraza, enzim ce catalizeaz reacia de hidratare numai pentru izomerul trans, acidul
fumaric
- lactat dehidrogenaza (LDH) acid L-lactic
OBSERVAIE: Existena specificitii se poate corela cu necesitile metabolice ale celulei.
B. Specificitatea relativ de substrat
Catalizeaz acelai tip de reacie dar pot aciona asupra mai multor substrate cu
structuri chimice comune.
Exemple:

Peptidazele hidrolizeaz legturile peptidice.

Specificitatea peptidazelor se manifest fa de anumite legturi peptidice la care

particip aminoacizi determinai:
Exemplu: Pepsina hidrolizeaz numai legturile peptidice realizate ntre un aminoacid dicarboxilic i un
aminoacid cu structur aromatic.

Fenoloxidazele - catalizeaz reaciile de oxidare a diferiilor fenoli.

Glucozidazele - hidrolizeaz legturile glucozidice dintre un glucid (specificitate mare) i un alt
compus (agliconul).
LOCALIZAREA ENZIMELOR N ORGANE I ESUTURI
-

Repartizarea poate fi neuniform.

Se cunosc enzime prezente n cvasi-totalitatea esuturilor animale.

Exemple:
enzimele din lanului respirator
enzimele din ciclul Krebs
fosfatazele

Alte enzime nu sunt elaborate dect de ctre anumite celule ale unor organe.
Exemplu:
pepsina
Un caz interesant: existena mai multor izoforme enzimatice sau izoenzime-n organe diferite, n cadrul
aceluiai organism.
Exemplu:
La om exist izoenzime ale lactat dehidrogenazei (LDH) n funcie de organ ( t.muscular,hepatic)

Glande salivare -

amilaza

Glande fundice ale

stomacului ( pepsina)

Pancreas exocrine
-amilaza
Chimotripsina
Tripsina

Intestin subire

Lipaza

Maltoza
Lactoza

ZAHAROZA

LOCALIZAREA INTRACELULARA
A Enzimelor

Tehnici
moderne
de
fracionare
omogenatului celular prin
ultracentrifugare diferenial =>
Repartizarea

enzimelor

pe

diferite

formaiuni subcelulare;

Orientarea reaciilor enzimatice n

funcie de nevoile celulei => reglarea
met celular

Nucleul
Enzimele necesare biosintezei acizilor nucleici
Exemplu: ADN polimeraza
Mitocondriile
Sediul respiraiei celulare i a fosforilrii oxidative, deci conin enzimele necesare acestui proces
Reticulul endoplasmic rugos (RER)
Asociat cu ribozomii, conine o mare varietate de enzime care asigur att sinteza de proteine i
polizaharide
(glicoproteine)
Reticulul endoplasmic neted (REN)
Enzimele necesare oxidrii i detoxifierii compuilor xenobiotici (medicamente,
pesticide)
Lizozomii
Sunt bogai n enzime hidrolitice, de degradare

FACTORII CARE INFLUENEAZ VITEZA UNEI REACII ENZIMATICE

1.
2.
3.
4.
5.

Temperatura mediului de reacie

pH-ul mediului de reacie
Concentraia enzimei
Concentraia substratului
Efectorii enzimatici - activatori
inhibitori

1. TEMPERATURA MEDIULUI DE REACIE

Temperatura mediului de reacie

efector fizic

Temperatura poate modifica:

stabilitatea enzimei;
afinitatea enzimei pentru substrat;
viteza de scindare a complexului enzim-substrat [ES];

afinitatea enzimei pentru diferii activatori i inhibitori: temperatura influeneaz pozitiv viteza de
reacie pn la atingerea unei temperaturi optime, dup care viteza de reacie scade rapid.

Temperatura optim
=
temperatura
corespunztoare
vitezei
maxime
de
aciune a enzimei
(aproximativ 40- 50C)

2. INFLUENA pH-ului MEDIULUI DE REACIE ASUPRA ACTIVITII

ENZIMELOR
pH-ul mediului de reacie = concentraia ionilor de hidrogen

pH-ul optim al unei enzime: pH-ul mediului de reacie pentru care activitatea enzimei respective ca
i viteza de reacie este maxim.
pH-ul optim poate varia n funcie de: - natura substratului,
- concentraia de substrat,
- originea enzimei,
- temperatur, presiune.
Pentru enzimele din organismul uman pH-ul optim de aciune este chiar pH-ul normal al
mediului n care ele i ndeplinesc funcia catalitic.
La majoritatea enzimelor pH-ul optim este n jurul valorii 7
Influena exercitat de pH-ul mediului se datoreaz:
ionizrii centrilor activi din molecula enzimei;
ionizrii substratului, modificndu-se astfel activitatea
sa pentru centrii activi ai enzimei
Exemplu amilaza salivar acioneaz numai la nivelul cavitii bucale
deoarece este inhibat de pH-ul acid al stomacului.
pentru majoritatea enzimelor, variaia vitezei de reacie n funcie de
pH are aspectul unei curbe n form de clopot (pH = 5,5-8).
Excepii:
pepsina, tripsina, papaina, arginaza, colinesteraza

FACTORII CARE INFLUENEAZ VITEZA UNEI REACII ENZIMATICE

1.
2.
3.
4.
5.

Temperatura mediului de reacie

pH-ul mediului de reacie
Concentraia enzimei
Concentraia substratului
Efectorii enzimatici - activatori
inhibitor

INFLUENA CONCENTRAIEI ENZIMEI ASUPRA VITEZEI DE REACIE

Viteza unei reacii enzimatice depinde de concentraia enzimei din mediul de reacie.
v = k [E]
unde k constanta caracteristic pentru fiecare reacie enzimatic v viteza
de reacie
[E] concentraia de enzim
Viteza de reacie este proporional cu concentraia enzimei.Dar, cu ct concentraia de enzim este mai
mare cu att cantitatea de substrat necesar desfurrii reaciei va fi mai mare.

Influena concentraiei de enzim [E] asupra vitezei de reacie:

-

n
n
n
n

condiii normale (N),

cazul reducerii concentraiei de substrat (B),
prezena activatorilor (A) sau a inhibitorilor (I) enzimatici n mediul de reacie,
prezena unor impuriti (C).

Poriunea din grafic O C = perioad de lag

FACTORII CARE INFLUENEAZ VITEZA UNEI REAC II ENZIMATICE
1. Temperatura mediului de reacie
2. pH-ul mediului de reacie
3. Concentraia enzimei
4. Concentraia substratului
5.
Efectorii enzimatici - activatori
-inhibitori
INFLUENA CONCENTRAIEI SUBSTRATULUI ASUPRA VITEZEIREACIILOR ENZIMATICE
Ecuaia Michaelis-Menten
Formarea complexului activat enzim - substrat (ES)
Prima teorie privitoare la dependena vitezei unei reacii enzimatice de concentraia substratului a fost
elaborat n 1913, la Berlin,de Leonor Michaelis i de Maud Menten.
Ipoteza formrii unui complex activat ntre enzim i substrat, notat ES.
E + S ES ET* EP E + P
Schematic, reacia enzimatic se desfoar astfel:

E+S

ES

E+P

unde se noteaz: [E] = concentraia total a enzimei

[S] = concentraia substratului
[ES] = concentraia complexului activat enzim-substrat
([E]-[ES]) = concentraia enzimei libere

Se consider c reacia global este ireversibil, deci c produsul de reacie nu rmne legat de enzim.

E+S

ES

E+P

Fiecare din cele trei reacii se caracterizeaz printr-o vitez de reacie, respectiv printr-o constant de vitez
specific (k):

E + S

k+1

ES

+2

E + P

-1
Se consider prima parte a reaciei, care este reversibil:
E + S k+1 ES

-1

Cele dou viteze de reacie, pentru ambele sensuri, sunt

proporionale cu concentraiile reactanilor:

v+1 = k+1([E] - [ES]) [S] v 1 k 1[ES]

La echilibru, cele dou viteze de reacie sunt egale : v+1 = v-1

k+1([E] - [ES]) [S] = k-1[ES]

DECI, n orice moment al reaciei vitezele de formare i de

scindare a complexului ES sunt aproximativ egale, aa nct
[ES] poate fi considerat constant.

Se mparte ecuaia cu
factorul k+1[ES]:

k+1([E] - [ES]) [S] = k-1[ES]

k+1[ES]
Se separ constantele de vitez i rezult:

([E] - [ES]) [S]

[ES]

-1

+1

-1

=K
+1

k+1[ES]

([E] - [ES]) [S]

[ES]

unde KM a fost denumit iniial constanta Michaelis,

fiind de fapt constanta de disociere a complexului

enzim-substrat.

= KM
(1)

KM [ES] = ([E] - [ES]) [S]

KM [ES] = [E] [S] - [ES] [S]
KM [ES] + [ES] [S] = [E] [S]

[ES](KM+[S] ) = [E] [S]

[E] [S]
ES=

(2)

KM+ [S]

Prelucrm a doua parte a reaciei

enzimatice:

+1

E + S

ES

+2

E + P

-1

[ES]
[ES] =

+2

EP

(3)

+2

v+2 k2[ES]

+2

ntr-o reacie enzimatic se urmrete formarea produsului de

reacie P, deci
viteza de reacie notat v+2 poate fi considerat ca vitez
propriu-zis a reaciei
enzimatice notat v, vitez de
interes practic.
v
Se egaleaz relaia (4) cu relaia
(2):

+2

= [E] [S]

(5)

KM+ [S]

din relaia (4) rezult:

v = k+2 [ES]

[ES] =

(4)

+2

[ES] = [E]

v Vmax

Vmax = k+2 [E] (8)

k
v=

+2

[E] [S]

(6)

KM + [S]
(7) unde k+2 = constant catalitic (indic
eficacitatea enzimei)

Vm
(9
[S] )
ax

Ecuaia MichaelisMenten

v=

KM + [S]

58

Ecuaia Michaelis-Menten: expresia matematic ce definete relaia cantitativ dintre viteza unei reacii
enzimatice, concentraia de substrat i valoarea constantei lui Michaelis KM.
Ecuaia permite calcularea KM, n funcie de concentraia substratului

V
v=

max

V
max =

max

[S]

KM + [S]

2KM + [S] = 2 [S], deci KM = [S]

Influena concentraiei substratului [S] asupra cineticii reaciilor enzimatice.

Reprezentarea grafic a ecuaiei Michaelis-Menten

PRELUCRRI ALE ECUAIEI MICHAELIS-MENTEN

E + S

k+1

+2

ES

E + P

-1
Ecuaia Michaelis-Menten se baza pe o ipotez care nu corespunde realitii:
k-1 >> k+2
k+2 = constanta de vitez a reaciei de descompunere a complexului enzim-substrat, n enzim
i produi de reacie (adic n substrat transformat), este suficient de mic pentru a nu influena
mersul reaciei, care este condiionat exclusiv de k+1 i k-1.
Deci n teoria Michaelis-Menten nu are loc transformarea substratului; se consider k+2 ca fiind foarte
mic, ceea ce nu corespunde realitii.
n mod real se micoreaz [S] i crete [P] !!
Aceast contradicie aparent a teoriei Michaelis-Menten se poate elucida dac cinetica reaciilor
enzimatice este interpretat inndu-se seama de cinetica strii staionare.
TEORIA BRIGGS I HALDANE. CINETICA STRII STAIONARE (I)
G.E. Briggs i J.B.S. Haldane au analizat ecuaia general a reaciilor enzimatice i au elaborat n anul
1925 o teorie mai cuprinztoare
Atunci cnd enzima i substratul se gsesc n contact, are loc o micorare rapid a concentraiei enzimei
libere, deoarece aceasta se combin cu substratul formnd complex [ES].
Acest stadiu al reaciei poart denumirea de faz iniial i precede stabilirea fazei staionare, spun
Briggs i Haldane, n care viteza de transformare a substratului este egal cu viteza de formare a
produsului reaciei, iar concentraia complexului [ES] rmne tot timpul constant
Concentraia total de enzim, [E]T = [E] + [ES]

TEORIA BRIGGS I HALDANE. CINETICA STRII STAIONARE (II)

Briggs i Haldane admit

existena la un moment dat a
unui echilibru dinamic ntre
procesul de formare a
complexului (ES) din E + S
i procesul de scindare
(descompunere)
a
complexului activat ES pe
de o parte n E + S, i pe de
alt parte n E + P.
Echilibrul dinamic ntre aceste
dou procese contrare duce la
o concentraie staionar a
complexului [ES].

6
2

ALTE PRELUCRRI ALE ECUAIEI MICHAELIS-MENTEN

Ecuaia Lineweaver-Brk
Hans Lineweaver i Dean Brk au propus n 1934 inversarea ecuaiei MichaelisMenten

Vmax [S]
v=
KM + [S]

KM + [S]
1
=
Vmax [S]
v

Ecuaia Lineweaver-Brk:

1
v

K
=

[S]

max

1
+

(18)

max

Ecuaie de tipul y = ax + b:
unde:

x=

1
[S]

;y=

1
v

(17)

importana practic a reprezentrii Lineweaver-Brk

Mult mai exact pentru evaluarea experimental a KM !
Se poate determina experimental viteza de reacie (1/v)
corespunztoare la cel puin trei valori cunoscute ale
concentraiei de substrat (1/[S]).
Dreapta stabilit experimental intersecteaz
axa 1/v n punctual 1/Vmax;
prin prelungirea ei, dreapta intersecteaz
axa abscisei n punctul 1/KM,

obinndu-se astfel grafic valoarea KM .

K
M.
Atunci cnd x = 0 i y
1 (18)
1
1
V
V
= 0,
+ max
[S]
v = max
se determin coordonatele la origine.
pentru y = ax + b, atunci cnd y = 0 1/v = 0,
ecuaia (18)
devine:
Atunci cnd x = 0, deci 1/[S] = 0, relaia
K
M
(18) devine:
1 = 1

max

1
[S] =

[S]
- V1

max

KM

max

1
1
= - KM

1
= V

max

max

64

Semnificaia biochimic a constantei Michaelis-Menten (KM)

KM este un parametru cinetic, practic i util pentru evaluarea aciunii unei enzime;
-

este o caracteristic a fiecrei enzime, independent de concentraia de enzim;

se exprim n uniti de concentraie de substrat (moli/litru).

E + S

Valorile KM variaz :
n funcie de structura substratului ;
n funcie de pH-ul mediului de reacie ;
independent de concentraia enzimei.

k+1

ES

+2

E + P

-1

k -1 k2
KM
k

1
KM este o constant ce poate fi determinat practic din datele experimentale
Pentru o reacie enzimatic simpl, KM red capacitatea de disociere a lui ES n E i S.

KM red tria legturii ntre E i S.

1/KM reprezint n prim aproximaie afinitatea enzimei pentru substratul su.
valori mici ale KM, (1/KM mare) => afinitate mare a enzimei pentru substrat (10 -5 - 10-8 mol/L) ;
valori mari ale KM (1/KM mic) => afinitate mic (legturi slabe ntre E i S) (10-1 - 10-2 mol/L).
Valorile constantelor Michaelis-Menten pentru unele enzime
Denumirea

Codul EC

Sursa biologic

Substrat

KM (M)

enzimei
Alcool
dehidrogenaza

1.1.1.1

Drojdie

Etanol

1,3 x 10-2

NAD+

7,4 x 10-5

Lactat

1.1.1.27

dehidrogenaza
izoenzima H
4

Aspartat

2.6.1.1

Acetaldehid

7,8 x 10-4

NADH

1,0 x 10-2

Inim de bou

Lactat

1,7 x 10-2

Bacillus subtilis

NAD+
Piruvat

1,0 x 10-4
1,4 x 10-4

NADH

2,4 x 10-5

Lactat

3,0 x 10-2

NAD+

9,0 x 10-4

Piruvat

8,0 x 10-4

NADH

6,5 x 10-5

L-aspartat

3,9 x 10-3

2-oxoglutarat

4,3 x 10-4

Oxalacetat

8,8 x 10-5

L-glutamat

8,9 x 10-3

Mucoasa

Acetil L-

7,5 x 10-5

stomacal

alanildiiodtirozina

porc

Acetil L-fenilalanil-L-

Inim de porc

aminotransferaza

Pepsina

3.4.23.1.

fenilalanin

4,3 x 10-4
6
6

Pentru multe enzime valoarea KM = 10-2 - 10-8 M

n cinetica enzimatic se utilizeaz i o alt constant, notat Kcat care
se definete prin raportul :
v
max
K
cat
[E]
[E]T - concentraia totala de enzim
T
Constanta catalitic (Kcat) red numrul de transformri substrat => produs pe care
fiecare centru activ le catalizeaz intr-o unitate de timp (turnover).
Cunoscnd valorile i semnificaiile lui KM i Kcat se poate calcula raportul KM/Kcat, raport
care red eficiena catalitic a enzimei.
Enzima
Acetil
colinesteraza
Anhidraza
carbonic

Substratul
Acetil colin
CO

Anhidraza
carbonic

HC
O

Catalaz

HO
2

Chimotripsin Esterul etilic al

N-acetilglicinei

-1

K (S )

K (M)
M

cat

9,5 x 10

-5

1,4 x 10

1,2 x 10

-2

2,6 x 10

K /K
cat

1,5 x 10

1,0 x 10

8,3 x 10

-2

4,0 x 10

1,5 x 10

2,5 x 10

-2

1,0 x 10

4,0 x 10

4,4 x 10

-1

5,1 x 10

-2

1,2 x 10

-1

Fumaraz

Fumarat

5,0 x 10

-6

8,0 x 10

1,6 x 10

Ureaz

Uree

2,5 x 10

-2

1,0 x 10

4,0 x 10

Medicamen
tele
influeneaz
viteza
reaciilor
enzimatice
i eficiena
catalitic a
enzimelor

67