02/06/2016

Plano de ensino
1. Introdução a genética
2. DNA e a estrutura molecular do cromossomo
3. Lei de Mendel, crossing over, herança e
genealogias não mendelianas
4. Mutação: Variabilidade genética
5. Aberrações numéricas e cromossomospatias
6. Envelhecimento: limite de Hayflick
7. PCR e técnicas de DNA recombinante
8. Genética forense
9. Memes
Genética
Prof. Bruno Anjos Blanco

Conceitos básicos

Engenharia genética A Tecnologia do DNA

recombinante,
Produção de DNA recombinante como se convencionou
Métodos de introdução de DNA denominar este conjunto
Hibridização de técnicas,
tem uma ampla aplicação

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Conceitos básicos Passo a passo

Seleção do fragmento desejado no DNA de uma única célula

Temos que produzir uma certa quantidade deste material

Sua aplicação comercial
Produção de cópias deste fragmento = AMPLIFICAÇÃO
ou biotecnológica.
Tem um potencial
Este DNA escolhido precisa sofrer transcrição?
inesgotável
Para teste de paternidade NÃO! Para produção de fármacos SIM!

Transcrição por recombinação

Eletroforese
em Microrganismos

Conceitos básicos Clonagem molecular

• A técnica central da metodologia do DNA
Ela pode ser usada para estudar mecanismos recombinante é a clonagem molecular
de: • Consiste no isolamento e propagação de moléculas
de DNA idênticas.
1. Replicação e expressão gênica,
• A clonagem molecular compreende pelo menos
2. Na determinação da sequencia de um gene e dois estágios importantes.
consequentemente da proteína que ele – Primeiro, o fragmento do DNA de interesse chamado
codifica, de inserto é ligado a uma outra molécula de DNA
3. No desenvolvimento de culturas microbianas chamada de vetor para formar o que se chama de DNA
recombinante.
capazes de produzir substâncias úteis tais como
– Segundo, a molécula do DNA recombinante é
a insulina humana, hormônio de crescimento, introduzida numa célula hospedeira compatível
vacinas e enzimas industriais em grandes geralmente um bactéria, num processo chamado de
quantidades. transformação. A célula hospedeira que adquiriu a
molécula do DNA recombinante é agora chamada de
transformante ou célula transformada

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DNA completo ou fragmentado

por enzimas de restrição
Escolha do material

Eletroforese Hibridização

Marcador
radioativo
Tamanho
A maior dificuldade está em localizar Peso molecular
Polaridade Só depois que é inserido
dentro de todo o DNA o fragmento que numa bactéria é que se
consegue identificar
contém a informação desejada Selecionado o gene
desejado ele pode ser
amplificado ou transcrito
Transcrição
Amplificação
Duas formas são utilizadas para selecionar
o DNA: Eletroforese ou Hibridização PCR Crescimento microbiano Fator promotor induz a
sem fator promotor leitura do gene e produção
da proteína desejada

Enzima de restrição
• As enzimas de restrição ou endonucleases de restrição
são enzimas que fracionam o DNA especificamente
entre os genes, dependendo da estrutura, da atividade
e dos sítios de reconhecimento e clivagem podem
separar no fator promotor ou na poliadenilação
• O sítio de reconhecimento deste tipo de enzima é
TATA box
normalmente uma sequencia de bases idêntica ao DNA
porém invertida
• Atualmente, mais de 1000 enzimas de restrição já foram
identificadas.

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Eletroforese
• A família de fragmentos gerados
por digestão com enzima de
restrição é geralmente detectada
pela separação destes fragmentos
Eletroforese por eletroforese em gel de
agarose.
• Os fragmentos de DNA migram
em função de seus pesos
Técnica moleculares sendo que os
menores migram mais
Testes de paternidade rapidamente

Colocação das amostras

Resultado

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Qual o grau de parentesco entre os

indivíduos acima?

Hibridização

Técnica
Utilização
OMG
Qual o grau de parentesco entre os
indivíduos acima?

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Hibridização
• O DNA é uma molécula muito
grande e com muitas
informações (genes)
• A hibridização é uma técnica para
escolher dentro de todo o DNA o
pequeno seguimento que se
deseja duplicar (gene especifico
da insulina) Qual é a bactéria com gene radioativo?
• Então marcadores radioativos
são inseridos no fragmento
específico
• Os diversos fragmentos são
inseridos em novas bactérias
• As colônias com DNA marcado
são as desejadas

1. Com auxilio de marcadores

radioativos ou de eletroforese, DNA
os fragmentos desejados são
selecionados recombinante
2. O fragmento geralmente é
combinado com o plasmídeo
da galactosidade
3. O plasmídeo contendo as duas
informações (Galactosidade e
Gene selecionado) é inserido
em uma bactéria
4. Este fragmento de DNA pode
ser ampliado, cópias e mais
cópia idênticas
5. Ou pode ser transcrito, basta Gene Humano da Insulina Gene Bacteriano da galactose
adicionar galactose ao meio de
cultura
6. Processos de purificação
separam este DNA ou a
proteína desejada do restante
dos componentes

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PCR
A hibridização é utilizada
para descobrir, dentro de
todo o genoma analisado, • Polymerase chain reaction. Recriar
qual é o gene especifico a cadeia de DNA utilizando uma
que produz a insulina polimerase
Utiliza-se a transformação
bacteriana para a inserção • A técnica é muito simples, consiste
do DNAre. Na técnica o em colocar em um frasco:
Ciclo que ocorre
para aumentar
DNAre é misturado a cultura – DNA polimerase bacteriana
a quantidade do
de bactérias com CaCl2 e termoestável
DNArecombinante
moderado choque térmico. – Desoxinicleotídeos (Adenina,
Isso provoca a inserção Timina, Guanina e Citosina)
intracelular
– Fonte de cátions Mg2+ e K+
– DNA primer
– O material genético que se quer
copiar ou amplificar
• Coloca-se tudo isso num aparelho
chamado termociclador
Amplificação Processos de purificação= proteínas

Diversos ciclos de e etapas...

Permite que pequenas amostras de

DNA sejam rapidamente
amplificada.

A reação é incubada para atividade

da DNA polimerase, produzindo
novas fitas de DNAs a partir dos
iniciadores e utilizando o quatro
desoxirribonucleotídios (dATP, dCTP,
dGTP e dTTP), são primes.

É assim que com apenas uma pequena fração de material

genético pode-se identificar o dono do material genético

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figuras\PCR and Real-time PCR Animation _

Animation PCR et PCR en temps réel.mp4