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Comparação entre métodos de quantificação em cromatografia gasosa: um

experimento para cursos de química

Article in Química Nova · January 2009

DOI: 10.1590/S0100-40422009000500043

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8 authors, including:

Gabrieli Parrilha Maria Cristina Canela

Federal University of Minas Gerais Universidade Estadual do Norte Fluminense
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 Quim. Nova, Vol. 32, No. 5, 1338-1341, 2009

COMPARAÇÃO ENTRE MÉTODOS DE QUANTIFICAÇÃO EM CROMATOGRAFIA GASOSA: UM

EXPERIMENTO PARA CURSOS DE QUÍMICA
Educação

Carolina Bastos Pereira Ligiero, Lindomar Augusto dos Reis, Gabrieli Lessa Parrilha, Milton Baptista Filho e Maria
Cristina Canela*
Centro de Ciência e Tecnologia, Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro, Av. Alberto Lamego, 2000, 28013-
602 Campos dos Goytacazes – RJ, Brasil

Recebido em 23/4/08; aceito em 3/2/09; publicado na web em 7/5/09

COMPARISON OF QUANTIFICATION METHODS IN GAS CHROMATOGRAPHY: AN EXPERIMENT FOR CHEMISTRY

COURSES. This article describes an experiment designed to teach quantitative determination in gas chromatography (GC) in Organic
and Analytical Chemistry practical classes. The experiment consisted of extracting and analyzing eugenol from clove seeds to perform
a quantitative approach aimed at comparing results obtained by external and internal calibration procedures. Therefore, this experiment
proved to be very effective tool to enhance students awareness on the need to understand different types of calibration in GC and on how
to avoid common experimental errors, and to find the best ways to eliminate their interference during the quantitative analysis phase.

Keywords: GC; quantitative analysis; teaching.

INTRODUÇÃO uma microsseringa podem chegar a um erro relativo alto.5

Outro método que pode ser utilizado para análises quantitativas
A cromatografia gasosa é um tópico apresentado nos cursos de com maior precisão é a padronização interna. Nesta metodologia po-
Química, tanto nas disciplinas de Química Analítica como de Química dem ser minimizadas as incertezas introduzidas na injeção da amostra
Orgânica. No primeiro caso, a cromatografia gasosa é mostrada na devido às pequenas quantidades de amostras injetadas e diferentes
maioria das vezes como uma ferramenta analítica quantitativa, uma vez analistas. É especialmente indicada para técnicas com pouca repro-
que o cromatógrafo está ligado a um detector capaz de responder a um dutibilidade, como no caso das injeções manuais.6 Na padronização
determinado composto de maneira proporcional a sua concentração.1,2 interna uma quantidade de uma substância medida cuidadosamente,
No caso da Química Orgânica, um enfoque maior é dado ao aspecto que atua como padrão interno, é introduzida em cada padrão e na
qualitativo e de separação de misturas, embora a sua utilização em amostra, e a razão entre as áreas do pico do analito e do padrão interno
termos quantitativos também ocorra. A cromatografia gasosa é normal- funcionam como parâmetro analítico.3,5 Na escolha de um composto
mente utilizada como ferramenta analítica nos laboratórios de Química como padrão interno deve-se observar que o pico referente ao padrão
Orgânica durante o curso de graduação.3 Os livros de Química Orgânica, esteja bem resolvido dos demais picos dos componentes da amostra
entretanto, raramente trazem teorias sobre o assunto, apenas ressaltando e elua próximo ao sinal do analito. O padrão interno deve, ainda, ser
um dos detectores utilizados que é o espectrômetro de massas.4 altamente puro, não reagir com nenhum dos componentes da amostra
A difusão e o desenvolvimento da cromatografia gasosa se deram e ser quimicamente similar ao analito de interesse.6
por seu potencial para realizar análises quantitativas com velocidade Além da escassa disponibilidade de propostas de experimentos
e rapidez na determinação de compostos orgânicos presentes em utilizando cromatografia gasosa em Química Orgânica na literatura,
concentrações relativamente baixas em diferentes tipos de amostras. é mais raro ainda encontrar experimentos com uma abordagem
As matrizes complexas normalmente sofrem diferentes processos de quantitativa que ressaltem a função da padronização interna nesta
extração e o composto de interesse pode ser então quantificado através técnica instrumental.7
desta técnica, que passa assim a ter grande importância na pesquisa Este trabalho propõe a realização de um experimento para ser
científica básica e nas suas aplicações na indústria. ministrado nas disciplinas de laboratório de Química Orgânica ou
O método direto para análises cromatográficas quantitativas envolve Analítica com o objetivo de oferecer aos seus participantes aprendizado
a preparação de uma série de soluções-padrão de composições próximas sobre cromatografia gasosa e ainda sobre como conduzir comparações
à concentração do analito na amostra, com o objetivo de realizar uma entre a qualidade dos resultados obtidos com os diferentes métodos
calibração externa. Os cromatogramas dos padrões são então obtidos, quantitativos. Além disso, pretende mostrar como o erro de injeção
e as alturas ou as áreas dos picos terminam lançados em um gráfico em através de diferentes analistas pode influenciar no resultado final de uma
função da concentração. Idealmente a curva obtida deve ser uma reta que análise quantitativa. Neste caso, o método de experimentação envolve
passa pela origem e a concentração da amostra é obtida a partir da equa- a quantificação do teor de eugenol no óleo extraído de cravo-da-índia
ção desta reta.5 Porém, algumas vezes se obtêm curvas com coeficientes através dos métodos de calibração direta e padrão interno.
lineares positivos ou negativos, cabendo ao analista a realização de um
tratamento criterioso dos dados da curva. As fontes mais importantes de PARTE EXPERIMENTAL
erros analíticos através do uso deste método são as incertezas no volume
da amostra e na preparação dos padrões, além de problemas durante o Obtenção do óleo de cravo-da-índia
processo de injeção. As amostras são normalmente pequenas e as incer-
tezas associadas à injeção de um volume reprodutível deste tamanho com O óleo essencial foi obtido através da utilização de 16 g de
cravo-da-índia e 200 mL de água destilada pelo método de desti-
*e-mail: [email protected] lação por arraste de vapor (Figura 1). A mistura foi colocada em
Vol. 32, No. 5 Comparação entre métodos de quantificação em cromatografia gasosa 1339

um balão de fundo redondo com pérolas de vidro, adaptado a um Condições cromatográficas

condensador com um béquer para coleta do destilado. O líquido
do balão foi aquecido em uma manta aquecedora até a ebulição. As análises cromatográficas foram realizadas em um cromatógra-
O produto obtido apresentou-se como uma emulsão (água mis- fo a gás acoplado a um detector de ionização em chama (CG-DIC)
turada ao óleo de cravo). O arraste a vapor foi finalizado quando modelo Shimadzu 17A, utilizando uma coluna DB-1 J&W de 30 m,
o volume no balão atingiu cerca de 50 mL. O líquido resultante diâmetro interno 0,25 mm e espessura do filme de 0,25 µm. A tem-
foi extraído em um funil de separação com 3 porções de 50 mL peratura do injetor e do detector foram mantidas em 200 e 230 oC,
de diclorometano (Vetec). As três porções orgânicas foram então respectivamente, e a programação do forno foi de 50 até 230 oC com
reunidas, secadas com sulfato de sódio (Syntht) e submetidas à uma taxa de aquecimento de 15 oC min-1. O gás carregador utilizado
evaporação em evaporador rotatório, fornecendo então 1,94 g de foi o hidrogênio com uma vazão na coluna de 1,8 mL min-1. O volume
óleo de cravo (12%). de injeção foi de 1 µL.

Tratamento dos dados

Os tratamentos estatísticos e a geração dos gráficos foram feitos

no software Origin 7.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

A Figura 2 mostra o cromatograma obtido a partir da injeção de

um dos padrões. Os sinais com tempos de retenção de 5,32 e 6,29 min
referem-se à carvona (padrão interno) e ao eugenol, respectivamente.
É possível observar na figura que a resolução obtida permitiu a sepa-
ração completa dos dois componentes, não havendo sobreposição dos
picos cromatográficos. Os valores obtidos para as áreas dos padrões
Figura 1. Aparato experimental para extração por arraste de vapor e a razão entre as áreas são apresentados na Tabela 2.

Preparo dos padrões para as curvas de calibração

Foram confeccionadas cinco soluções-padrão com diferentes

concentrações de eugenol obtido comercialmente (Firmenich) em
25 mL de diclorometano (Vetec). Como padrão interno adicionou-se
uma quantidade fixa de 46 mg (1,84 g L-1) de carvona (Firmenich) a
cada padrão. As massas e concentrações de eugenol em cada padrão
são mostradas na Tabela 1.

Tabela 1. Preparação dos padrões

Concentração de eugenol
Padrão Massa de eugenol (mg)
(g L-1)
1 20,8 0,83
2 31,2 1,25 Figura 2. Cromatograma do padrão contendo eugenol e carvona
3 52,0 2,08
4 72,8 2,91 Tabela 2. Resultados das injeções dos padrões
5 93,6 3,74
Razão Áreas Eugenol/
Padrão Área Eugenol Área Carvona
Carvona
Preparo da amostra analítica 1 33423 87415 0,382
2 49625 88792 0,559
Uma alíquota de 51 mg da amostra do óleo essencial extraída
do cravo-da-índia foi diluída para 25 mL de diclorometano. Como 3 60810 69865 0,870
padrão interno foram adicionados 46 mg de carvona, conforme feito 4 120861 102089 1,184
anteriormente com os padrões. 5 176752 111873 1,580
Injeção das amostras
A curva de calibração direta, Figura 3, foi obtida através de um
As injeções das soluções-padrão para a construção das curvas de gráfico da concentração de eugenol versus a área dos respectivos
calibração foram feitas por um mesmo analista. A amostra de óleo sinais. O valor do coeficiente de correlação linear (R) de 0,97007,
de cravo-da-índia foi injetada por quatro analistas diferentes. Os maior que o valor crítico tabelado de Pearson para N= 5 (N é o número
cromatogramas obtidos foram integrados e as curvas de calibração de pontos da curva) indica uma correlação linear significativa entre
foram feitas utilizando-se as áreas dos picos. os dados. Já a curva para calibração interna, Figura 4, foi construída
1340 Ligiero et al. Quim. Nova

Figura 3. Curva de calibração externa do eugenol Figura 4. Curva de calibração utilizando padrão intern

usando a concentração de eugenol versus a razão entre as áreas dos lineares foram considerados estatisticamente não significativos para
sinais de eugenol e carvona de cada solução-padrão. O valor de R= as duas curvas, não sendo utilizados nas equações das retas para os
0,99867 mostra que a correlação linear para este caso foi mais sig- cálculos das concentrações.
nificativa que para a curva anterior. A análise da amostra extraída do cravo-da-índia foi feita em
Idealmente as curvas de calibração deveriam passar pela ori- replicata por quatro analistas, o que é um procedimento comum nos
gem, porém, isso não foi observado para as curvas obtidas. Desta casos em que a prática é realizada por uma equipe e onde todos devem
forma, levou-se em consideração o valor dos desvios referentes participar. A Tabela 4 mostra os resultados obtidos por cada analista
a cada parâmetro das equações das retas (coeficientes lineares e levando em consideração os dois tipos de calibração.
angulares), fornecido pelo software utilizado na confecção dos Por análise de variância one-way dos resultados obtidos para os
gráficos, para avaliar a significância dos mesmos (Tabela 3). Para dois tipos de calibração, Tabela 5, foi possível constatar que as médias
que o parâmetro seja estatisticamente significativo, a razão entre o das duas metodologias são significativamente diferentes a um nível
valor do parâmetro e o desvio deve ser maior que o valor tabelado de confiança de 95%.9
para o t de Student.8 Em um modelo linear, o número de graus de Assim sendo, através desta prática foi possível demonstrar a pouca
liberdade (GL) é dado por GL= N - 2, onde N é o número de pon- reprodutibilidade que existe nos resultados quando vários analistas
tos da curva. Para um limite de confiança de 95%, o t de Student estão envolvidos na injeção de uma amostra com fins quantitativos
tabelado é igual a 3,182; desta forma, os valores dos coeficientes na técnica de cromatografia gasosa e, principalmente, que a utili-

Tabela 3. Análise estatística de significância dos parâmetros das curvas

Parâmetros Valores Obtidos Desvio t calculado

Calibração Direta
Coeficiente Linear (A) 0,44844 0,28912 1,55105 não significativo
Coeficiente Angular (B) 1,94074.10 -5
2,80483.10 -6
6,91928 significativo
R 0,97007
Eq. da Reta usada nos Cálculos Y= 94074.10-5 X
Calibração Interna
Coeficiente Linear (A) -0,09426 0,07437 1,26747 não significativo
Coeficiente Angular (B) 2,46856 0,07361 33,5357 significativo
R 0,99867
Eq. da Reta usada nos Cálculos Y= 2,46856 X

Tabela 4. Resultados obtidos com diferentes analistas

Razão Áreas Cal. Dir. Conc. Cal. Int. Conc.

Analista Área Eugenol Área Carvona
Eugenol/Carvona Eugenol (g L-1) Eugenol (g L-1)
A 64339 102144 0,630 1,249 1,555
B 62623 97877 0,640 1,215 1,579
C 63283 101065 0,626 1,228 1,570
D 55828 88254 0,633 1,083 1,563
 Vol. 32, No. 5 Comparação entre métodos de quantificação em cromatografia gasosa 1341

Tabela 5. Resultados da ANOVA para as duas calibrações CONCLUSÃO

Fonte GL SQ MQ F F-crítico
Este trabalho apresenta uma proposta de experimento empregando
Modelo 1 0,278269190 0,278269190 97,31001 9,28 a cromatografia gasosa para ser utilizada em uma aula de Química
Orgânica e Analítica, onde os alunos poderão aprender a realizar
Residual 6 0,0171576919 0,00285961531 análises quantitativas através de calibração externa e interna. A partir
do experimento proposto é possível proporcionar aos participantes a
observação e assimilação dos principais fatores que influenciam uma
zação de padronização interna infere um desvio muito menor nos análise quantitativa na cromatografia gasosa e as diferenças entre as
resultados (Tabela 6). Este fato indica uma maior suscetibilidade a calibrações, os erros que podem ocorrer, e os procedimentos neces-
erros na medida de volume e de manuseio do operador do método de sários para minimizá-los através do uso de padrão interno.
calibração externa. Os desvios relativos para o cálculo de eugenol na
amostra com a calibração externa e interna foram de 6,272 e 0,673%, REFERÊNCIAS
respectivamente. O percentual de eugenol obtido no óleo através da
calibração do padrão interno foi compatível com o valor apresentado 1. Skoog, D. A.; West, D. M.; Holler, F. J.; Princípios de Análise
na literatura (70 a 90%)3, enquanto que para a calibração externa o Instrumental, 5ª ed., Bookman: Porto Alegre, 2002.
valor encontrado foi inferior ao esperado. 2. Harris, D. C.; Análise Química Quantitativa, 5ª ed., LTC-Livros Técnicos
e Científicos Editora S.A.: Rio de Janeiro, 2001.
Tabela 6. Comparação entre as diferentes calibrações 3. Palleros, D. R.; Experimental Organic Chemistry, John Wiley & Sons,
Percentual Inc.: Nova Iorque, 1999.
Concentração Desvio Desvio Rela- 4. McMurry, J.; Santos, J. P. C.; Química Orgânica, 4ª ed., LTC-Livros
Calibração de Eugenol
Média (g L-1) Padrão tivo (%) Técnicos e Científicos Editora S.A.: Rio de Janeiro, 1996.
no Óleo
5. Collins, C. H.; Braga, G. L.; Bonato, P. S.; Introdução a Métodos
Externa 1,194 0,075 58,525 6,272 Cromatográficos, 7ª ed., Editora da UNICAMP: Campinas, 1997.
6. McNair, H. M.; Miller, J. M.; Basic Gas Chromatography, John Wiley
Interna 1,567 0,011 76,810 0,673 & Sons, Inc.: Nova Iorque, 1998.
7. Rice, G. W.; J. Chem. Educ. 1987, 64, 1055.
8. Barros Neto, B.; Pimentel, M. F.; Araújo, M. C. U.; Quim. Nova 2002,
Com este experimento é possível demonstrar para os alunos as 25, 856.
diferenças entre os dois tipos de padronização, bem como fornecer 9. Miller, J. C.; Miller, J.N.; Statistics for Analytical Chemistry, 3ª ed., Ellis
a eles a oportunidade de realizar calibrações. Horwood PRT Prentice Hall: West Sussex, 1993.

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