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ATIVIDADE MICROBIANA DO SOLO EM POMAR DE

LARANJA EM RESPOSTA AO CULTIVO DE ADUBOS VERDES1
THAIS NUCCI BUZINARO2, JOSÉ CARLOS BARBOSA3 , ELY NAHAS4

RESUMO- Adubos verdes (AVs) são condicionadores do solo utilizados para a melhoria da estrutura e
fertilidade do solo. Este estudo avaliou o efeito de Crotalaria spectabilis Roth (crotalária), Cajanus cajan
(L) Millsp (guandu) e Brachiaria decumbens Stapf (braquiária) nas propriedades microbiológicas e
bioquímicas do solo sob laranjal. As leguminosas foram plantadas nas entrelinhas do laranjal e, após 3
meses, cortadas e lançadas nas entrelinhas. A braquiária, já estabelecida, foi roçada e lançada nas entrelinhas.
Após 5 meses, as amostras de solo foram coletadas na entrelinha e na linha, na profundidade de 0-20 cm. O
delineamento experimental foi em parcela subdividida. Efeito significativo (p< 0,05%) da aplicação dos AV
sobre as contagens de bactérias, as atividades da desidrogenase e nitrificante foram obtidas e aumentaram,
em média, de 20, 39 e 190%, respectivamente. O número de fungos diminuiu de 57%. A atividade da urease
e a solubilizadora, e os conteúdos de matéria orgânica e umidade não foram influenciados pela aplicação dos
AVs. Dentre as plantas, respostas significativas foram obtidas decorrentes do estímulo da atividade da
desidrogenase em 57% pelo guandu, da urease em 58% pela braquiária, solubilizadora em 346% pela crotalária
e nitrificante em 236% pelo guandu ou braquiária em relação aos demais AVs. Estes resultados sugerem que
a aplicação de AVs durante anos consecutivos pode estimular a ação dos microrganismos e melhorar a
qualidade do solo.
Termos para indexação: desidrogenase, urease, atividade nitrificante, solubilização.

SOIL MICROBIAL ACTIVITIES IN ORCHARD CITRUS AS

A RESPONSE TO GREEN MANURE CULTIVATION

ABSTRACT - Green manure (GM) is a soil conditioner used to improve soil structure and fertility. This
study evaluated the effect of Crotalaria spectabilis Roth (showy rattlebox), Cajanus cajan (L) Millsp
(pigeonpea) and Brachiaria decumbens Stapf (brachiaria) on soil microbial and biochemical attributes of
the citrus orchard. The leguminous was planted at the intercrops and, after 3 months, they were cut and
applied in the intercrops. The grown brachiaria was cut and applied in the intercrops. After 5 months, the soil
samples were taken from the rows and intercrops in the depth of 0-20 cm. A split-plot design was used.
Significant effect (p < 0.05%) from the GM application on the bacteria counts and dehydrogenase and
nitrifying activities was obtained an it increased, on average, 20, 39, and 190%, respectively. Fungi number
decreased 57%. Urease and solubilizing activities and organic matter and moisture contents were not
influenced by the GM application. Among the plants, significant responses were found due to the stimulating
activities of dehydrogenase of 57% by pigeonpea, urease 58% by brachiaria, solubilizing 346% by showy
rattlebox and nitrifying 236% by pigeonpea or brachiaria in relation to the others GM. These results suggest
that GM application for successive years can stimulate microorganisms activity and to improve soil quality.
Index Terms: dehydrogenase, urease, nitrifying activity, solubilization.

1
(Trabalho 021-08). Recebido em: 08-01-2008. Aceito para publicação em: 13-03-2009.
2
Enga Agra, MS, ex-aluna do Programa de PG em Microbiologia Agropecuária/UNESP, Jaboticabal-SP.
3
Eng. Agr. Professor Titular do Departamento de Ciências Exatas, FCAV/UNESP, 14884-900. Jaboticabal-SP, E-mail:
[email protected]
4
Eng. Agr. Professor Titular do Departamento de Produção Vegetal, FCAV/UNESP, 14884-900. Jaboticabal-SP, E-mail:
[email protected].

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incorporado no solo influenciaram a atividade da

INTRODUÇÃO urease (Arunachalam et al., 1999). A utilização de
resíduos orgânicos junto com fertilizantes
Fontes renováveis de resíduos agrícolas, inorgânicos aumentou a quantidade de matéria
estercos de animais e adubos verdes têm sido orgânica e a atividade microbiana ureolítica e da
utilizados visando à recuperação das características fosfatase alcalina (Goyal et al., 1999).
físicas e químicas do solo (Sylvia et al. 2005). O Este estudo foi conduzido em uma área em
emprego destes materiais fornece matéria orgânica e que sistemas permanentes, como florestas e
nutrientes necessários para o crescimento e pastagens, foram convertidos em áreas de cultivo
desenvolvimento das plantas, o que possibilita a de laranjal e têm recebido, desde sua instalação,
produção de alimentos orgânicos mais saudáveis e braquiária como cobertura vegetal (Buzinaro, 2006).
com menor quantidade de adubos químicos. Em adição, os solos utilizados para o plantio de
Os adubos verdes têm sido utilizados para laranjal apresentaram textura arenosa e com baixa
melhorar as características físicas (Nascimento et al., retenção de umidade, e havia a expectativa de que
2005) e químicas do solo (Varinderpal-Singh et al., poderiam ser melhorados pela utilização de adubos
2006) e a produtividade em várias culturas verdes. Este trabalho objetivou estudar a influência
(Fontanétti et al., 2006). A contribuição na fertilidade da adubação verde de Cajanus cajan (Linnaeus)
do solo pelo fornecimento de nutrientes é uma das Millsp (1900), Crotalaria spectabilis Roth (1821) e
qualidades esperadas pela aplicação do adubo verde. Brachiaria decumbens Stapf (1918) nas contagens
As leguminosas podem contribuir com o nitrogênio e na atividade microbiana do solo de pomar de laranja
fixado, aumentando e conservando o nitrogênio no da cultivar Valência.
solo. Este efeito foi obtido com a aplicação de
sesbania (Sesbania aculeata Pers.), obtendo-se MATERIAL E MÉTODOS
resultados superiores ao do milho ou de quantidades
equivalentes de adubo nitrogenado na cultura do O estudo foi realizado na Fazenda Primavera,
arroz irrigado (Ashraf et al., 2004). município de Balbinos (460 m de altitude), São Paulo,
Os adubos verdes são decompostos com uma área de 367,8 ha, composta de floresta
gradualmente pela ação da biota existente no solo e nativa tropical subcaducifólia, pastagem e laranjal
principalmente pelos microrganismos. Desta forma, (Citrus sinensis Linnaeus Osbeck). Foi selecionada
a tendência é o aumento da diversidade e atividade uma área de laranjal da cultivar Valência com cerca
microbiana pela mineralização de resíduo orgânico de 17 ha, plantada no espaçamento de 7m (entre
(Stark et al., 2007). Contudo, a decomposição de linhas) por 4 m (entre plantas) e com 3 anos de idade.
resíduos vegetais está sujeita a diversos fatores, tais O solo foi classificado dentro da classe textural
como a atuação de macro e microrganismos arenosa e apresentou a seguinte composição físico-
decompositores e às características do solo. O química (mmolc dm-3): K, 3,1; Ca, 11,0; Mg, 9,0; H+AL,
crescimento dos microrganismos no solo é limitado 15,0; SB, 23,1; T, 38,1; V, 6,1%; e P resina, 8,0 mg dm-
na ausência de fonte de carbono e a adição de matéria 3
; pH em CaCl2, 5,1; e granulométrica (g kg-1): argila,
orgânica pode influenciar no tamanho e na atividade 60; silte, 40; areia fina, 690, areia grossa, 210. O clima
da comunidade microbiana. Assim, diversos adubos é o tropical úmido do tipo Aw, segundo o sistema de
verdes aumentaram a produção de trigo devido à classificação de Köeppen, com verão quente e
melhoria das propriedades do solo e à atividade inverno seco, e precipitação pluvial média anual de
microbiana medida pela produção de CO 2 1.700 mm.
(N’Dayegamiye & Tran, 2001). No decorrer de 2004, foram realizadas a
A transformação da matéria orgânica ocorre calagem com 10 t/ha de calcário dolomítico
em decorrência da liberação de enzimas pelos (PRNT=80) e a adubação, utilizando-se de 2,8 kg do
microrganismos que reduzem os compostos fertilizante de fórmula 19-10-19 (N: nitrato de amônio,
orgânicos em sua forma mais simples e disponível. P: superfosfato simples e K: cloreto de potássio)
Desta forma, a atividade enzimática tem potencial de por planta, parcelados em 2 aplicações, sendo a
indicar as transformações biológicas do solo em última em fevereiro de 2005. Foram utilizadas três
resposta às mudanças no manejo. Dentre as diversas espécies de plantas como adubos verdes, isto é,
enzimas presentes no solo, a medida da atividade da crotalária (C. spectabilis), feijão-guandu (Cajanus
desidrogenase é bastante utilizada, pois reflete a cajan.) e capim- braquiária (B.decumbens). A
atividade oxidativa total da microbiota do solo. O crotalária e o guandu foram semeados em março de
tipo de vegetação e a quantidade do material orgânico 2005, a lanço, nas quantidades de 80 e 40 sementes/

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m2, respectivamente, na entrelinha de plantio do determinada pelo método de Casida (1977), e a da

laranjal. Após aproximadamente 3 meses e antes da urease, segundo a metodologia de McGarity & Myers
frutificação, as plantas foram cortadas, e toda a (1967). O conteúdo de umidade foi determinado após
massa vegetal foi lançada fora da projeção da copa secagem do solo a 105°C, por 24 horas, e o de matéria
do laranjal numa extensão de até 1 metro. A gramínea, orgânica, após incineração do solo em mufla a 550°C,
já estabelecida na área, foi roçada e jogada de modo por 24 horas.
semelhante às leguminosas. Foi utilizado um delineamento em parcelas
Após 5 meses do corte dos adubos verdes, subdivididas com 3 adubos como tratamentos
as amostras de solo foram coletadas com o uso de principais (guandu, crotalária e braquiária) e 2 locais
enxadão, na profundidade de 0-20 cm, tanto na linha de coleta do solo, na entrelinha (local em que foram
de plantio do laranjal, até a distância de 30 cm do aplicados os resíduos da adubação verde) e linha
tronco das árvores, onde não foi lançado o adubo (local em que não foram aplicados os resíduos) de
verde (denominada de “linha” e considerada como plantio de laranjal, com 5 repetições. Os resultados
controle), como na faixa onde foram lançados os foram transformados em log (x +10), em que x foi a
restos vegetais (denominada, neste trabalho, de variável estudada, e submetidos à análise de
“entrelinha”). Cada parcela compreendeu uma linha variância, utilizando-se do programa ESTAT. As
de plantio do laranjal de 50m. As parcelas foram médias foram comparadas pelo teste de Tukey (P
distribuídas ao acaso no laranjal. Em cada parcela, <0,05).
3 amostras simples foram retiradas e, a seguir,
reunidas em uma amostra composta. Este
procedimento foi repetido 5 vezes ao acaso na linha RESULTADOS E DISCUSSÃO
e na entrelinha de plantio, resultando em 10 parcelas
por tratamento principal (adubo verde). As amostras A influência da aplicação da massa vegetal
foram acondicionadas em sacos plásticos, proveniente de braquiária, crotalária ou guandu, nas
transportadas ao laboratório, onde foram peneiradas contagens de bactérias e fungos do solo sob laranjal
(2 mm) e divididas em duas partes, sendo parte da cultivar Valência, pode ser observada na Figura
mantida em geladeira a 4o C até o seu uso, e outra 1A,B. Nenhum efeito significativo (Tukey, p < 0,05)
parte, seca ao ar livre e mantida em temperatura foi obtido pela aplicação destes vegetais nas
ambiente. contagens destes grupos de microrganismos.
Amostras de solo (10g, peso úmido) foram Quando se compararam as contagens observadas na
adicionadas a 95mL de solução de pirofosfato de entrelinha (onde foram aplicados os adubos verdes)
sódio a 0,1% e agitadas por 30min em agitador em relação às linhas de plantio (controle, sem
orbital. Após diluição em série, volumes destas aplicação do adubo verde), foi observado um efeito
suspensões foram adicionados ao meio de cultura significativo (p < 0,05), porém diferenciado (Figura
fundido e distribuídos nas placas de Petri. Foram 1). Enquanto o número médio de bactérias da linha e
utilizados os meios de Bunt & Rovira (1955), para da entrelinha aumentou em 20%, as contagens dos
contagem de bactérias, e de Martin (1950), para fungos decresceram 57%. As contagens das
contagem de fungos. O tempo de incubação foi de bactérias, na entrelinha, aumentaram no solo em 46%
72 h para as bactérias e de 96 h para os fungos, à (guandu) e 70% (crotalária, Figura 1A) e as dos fungos
temperatura de 30 °C, e as contagens foram feitas em 26% (guandu, Figura 1B) em relação ao solo sob
conforme Vieira & Nahas (2005). A atividade braquiária. Em um sistema de plantio convencional e
nitrificante foi determinada após incubação do solo plantado com guandu ou mucuna, foi também
por 30 dias, com o teor de umidade ajustado a 60 % observada redução na contagem de fungos em
da capacidade de retenção de água (CRA) e com ou relação à área com vegetação espontânea (Carneiro
sem adição de 160 μg de (NH4)2SO4 por grama de et al., 2004). Possivelmente, no presente estudo, o
solo úmido. O nitrato produzido foi extraído e aumento da contagem de fungos na linha de plantio
determinado pelo método de Keeney & Nelson resultou mais de uma resposta maior à adubação
(1982). A atividade solubilizadora de fosfato foi química fosfatada (Barroti & Nahas, 2000) do que ao
determinada após incubação do solo por 30 dias, efeito da adição dos adubos verdes na entrelinha.
com o teor de umidade de 60 % CRA e com ou sem Neste estudo, o aumento nas contagens de
adição de 3,84mg de fluorapatita (32,8% de P) por bactérias em consequência da aplicação de adubos
grama de solo. O fosfato solúvel produzido foi verdes foi bem menos expressivo do que o relatado
extraído e determinado pelo método de Watanabe por Biederbeck et al. (2005), de 385%. Contudo,
& Olsen (1965). A atividade da desidrogenase foi nenhum efeito foi observado sobre a contagem de

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bactérias, fungos e actinomicetos em solos sob plantio convencional após 4 anos consecutivos,
cultivo orgânico e convencional (Shannon et al., comprovando que o tempo de aplicação dos
2002), mostrando diversidade de resposta à adição resíduos influiu na atividade da urease, o que pode
de adubos verdes. O estímulo do crescimento ter ocorrido no presente estudo.
bacteriano, em decorrência da aplicação de A atividade nitrificante foi estimulada (Tukey,
leguminosas em relação à gramínea, pode ser devido p < 0,05) 2,9 vezes, em média, em relação ao controle,
a sua capacidade de enriquecer o solo mediante mostrando um efeito expressivo da aplicação dos
simbiose com as bactérias fixadoras do N 2 adubos verdes, resultante, principalmente, do
atmosférico, seu alto conteúdo de compostos guandu e da braquiária (Figura 3A). Isto indica um
nitrogenados e um sistema radicular profundo e processo de transformação dos compostos
ramificado, que garante maior capacidade de extrair nitrogenados e inclusive da mineralização do
nutrientes (Miyasaka et al., 1984). nitrogênio orgânico devido à adição dos adubos
A atividade da desidrogenase variou verdes. Estes resultados assemelham-se aos
significativamente entre os locais de amostragem e observados por Stampford et al. (1994), que
sob o efeito dos adubos verdes. Contudo, esta verificaram um aumento significativo nos teores de
variação foi mais devida ao efeito do guandu, N-NO3- e N-NH4+ do solo após utilização de adubos
constatando-se aumento da atividade da verdes, levando a incrementos de produção na
desidrogenase em 54 e 60% (média linha-entrelinha) cultura do sorgo em sucessão. Quando os três
em relação à braquiária e crotalária, respectivamente. adubos verdes foram comparados, a atividade
Também, a atividade desta enzima foi 33 a 51% (média decresceu significativamente na seguinte ordem:
de 39%) maior na entrelinha do que na linha de plantio braquiária > guandu > crotalária (Figura 3A). Essa
(Figura 2A). Da mesma forma, Benitez et al. (2000) resposta pode ter sido obtida porque a crotalária
constataram aumento na atividade da desidrogenase mineraliza-se mais lentamente que o guandu
na rizosfera de pimenteira em função da incorporação (Alcântara et al., 2000).
de resíduos da extração de azeite de oliva em relação A crotalária proporcionou diferenças
ao controle onde não foram incorporados os significativas na atividade solubilizadora em relação
resíduos. A atividade da desidrogenase reflete bem a aos tratamentos com guandu ou braquiária,
atividade metabólica microbiana, correlacionando-se mostrando efetiva influência na solubilização do
com a biomassa de bactérias e de fungos e fósforo inorgânico adicionado no solo (Figura 3B).
constituindo apreciável índice indicador das A atividade solubilizadora na linha não diferiu com a
transformações dos nutrientes no solo (Aon et al., da entrelinha. A capacidade de solubilização está
2001). Estes resultados sugerem que o aumento da intimamente relacionada à comunidade de
atividade da desidrogenase pela adição de resíduos microrganismos solubilizadores de fosfato (Nahas
vegetais pode indicar um processo de mineralização et al., 1994). Embora não tenha havido diferença
catalisado pelos microrganismos do solo. Contudo, significativa, a solubilização de fluorapatita
foi constatado efeito da aplicação dos adubos verdes observada no solo sob guandu foi 2,5 vezes maior
sobre a atividade da desidrogenase (Figura 2A), mas do que sob braquiária. Esta influência também foi
não sobre as contagens de bactérias ou de fungos relatada por Sylvester-Bradley et al. (1982), que
(Figura 1A,B). De fato, a desidrogenase não se constataram maior presença de bactérias
correlacionou com a contagem de bactérias ou de solubilizadoras de P em solo sob cultivo de
fungos (Arunachalan et al., 1999), sugerindo que esta leguminosas do que em gramíneas. Em adição,
enzima pode ser influenciada por outros fatores. Carneiro et al. (2004) relataram que o guandu
Nenhum efeito significativo foi obtido estimulou a ocorrência de bactérias e fungos
quando se comparou o local de aplicação dos adubos solubilizadores de fosfato.
verdes sobre a atividade da urease (Figura 2B). Não foi constatada nenhuma diferença
Contudo, foi constatado que a aplicação das significativa nos conteúdos de umidade e matéria
leguminosas inibiu (p < 0,05) a atividade da urease orgânica entre a linha e a entrelinha do laranjal ou
em 39 a 45% (média linha-entrelinha) em relação à entre os diferentes adubos (Figura 4A,B). O curto
braquiária (Figura 2B). Palma et al. (1999) também período de aplicação dos resíduos (somente uma
não constataram diferenças significativas na safra) neste estudo pode ter influído nos resultados
atividade da urease em solo com alta adição de apresentados.
resíduos. No entanto, Barreto & Westerman (1989)
evidenciaram aumento da atividade da urease no solo
sob plantio direto de aveia em relação a solo sob

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FIGURA 1- Efeito da aplicação de adubos verdes nas contagens de bactérias (A) e de fungos (B) do solo sob
laranjal. ,linha ,entrelinha
Teste Fbactérias: Adubo verde (P) = 2,72 NS; Locais de coleta (S) = 5,55*; P x S = 3,57 NS

Teste Ffungos: (P) = 0,78NS; (S) = 62,35*; P x S = 9,78*; NS, não significativo; (*), p <0,05

Letras maiúsculas comparam as médias dos adubos verdes, e as minúsculas, as médias dos locais de coleta.

FIGURA 2 - Efeito da aplicação de adubos verdes nas atividades da desidrogenase (A) e da urease (B) do
solo sob laranjal. ,linha ,entrelinha
Teste Fdesidrogenase: (P) = 11,73**; (S) = 28,02**; P x S = 0,22 NS.

Teste Furease: (P) = 6,69*; (S) = 0,06NS; P x S = 2,12NS; NS, (*), ver Figura 1; (**), p <0,01 .

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FIGURA 3 - Efeito da aplicação de adubos verdes nas atividades nitrificante (A) e solubilizante (B) do solo
sob laranjal. ,linha ,entrelinha At., atividade

Teste Fat.nitrificante: (P) = 48,80**; (S) = 69,90**; P x S = 49,83**

Teste Fat. solubilizante: (P) = 47,98**; (S) = 4,61NS; P x S = 4,02*; NS, (*), (**), ver Figuras 1 e 2
Letras maiúsculas comparam as médias dos adubos verdes, e as minúsculas, as médias dos locais de coleta.

FIGURA 4 - Efeito da aplicação de adubos verdes nos conteúdos de matéria orgânica (A) e umidade (B) do
solo sob laranjal. ,linha ,entrelinha

Teste Fmatéria orgânica: (P) = 0,89NS; (S) = 0,00NS; P x S = 0,33NS

Teste Fumidade: (P) = 2,43NS; (S) = 1,83NS; P x S = 0,69NS; NS, ver Figura 1

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414 T. N.BUZINARO et al.

CONCLUSÃO BENITEZ, E.; MELGAR, R.; SAINZ, H.; GOMEZ,

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