Aminoácidos

Proficiência Bioquímica Experimental
Professor: Ricardo de Freitas Branco
Aluna: Djanyna Voegel De Carvalho Schmidt
Aminoácidos
1. Objetivo
Determinação dos valores de pK e do ponto isoelétrico de soluções de aminoácidos

por meio da titulação e a construção da curva de titulação para cada aminoácido utilizado
partindo da observação do efeito tamponante de misturas.
2. Metodologia
Inicialmente, realizou-se a calibração do peagâmetro com as soluções de tampão de

pH 4 e de pH 7. Em seguida, organizou-se os equipamentos para a execução da prática. Em
uma proveta, retirou-se uma alíquota de 20 cm3 de solução do aminoácido glicina a 0,02
mol.dm-3 e transferiu-se para um béquer de 25 cm 3, adicionou-se uma barra magnética ao
béquer e o levou ao agitador magnético. Mergulhou-se o eletrodo do peagâmetro na solução,
tomando o devido cuidado. Anotou-se o pH inicial. Em seguida, carregou-se uma bureta de
25 cm3 com solução de hidróxido de sódio 0,5 mol.dm-3 e aferiu-se o menisco. Realizou-se a
titulação adicionando 0,15 cm3 de cada vez e anotando-se o pH, até o pH 12.
Em uma proveta, retirou-se uma alíquota de 20 cm 3 de solução do aminoácido ácido
glutâmico a 0,02 mol.dm-3 e transferiu-se para um béquer de 50 cm 3, adicionou-se uma barra
magnética ao béquer e o levou ao agitador magnético. Mergulhou-se o eletrodo do
peagâmetro na solução, tomando o devido cuidado. Anotou-se o pH inicial. Em seguida,
adicionou-se 40 gotas de ácido clorídrico 0,5 mol.dm -3 até observar o pH próximo de 1.Na
sequência, carregou-se uma bureta de 25 cm3 com solução de hidróxido de sódio 0,5 mol.dm-3
e aferiu-se o menisco. Realizou-se a titulação adicionando 0,15 cm 3 de cada vez e anotando-
se o pH, até o pH 12.
3. Resultados e discussões
Os aminoácidos têm um grupo carboxila e um grupo amino ligados ao mesmo átomo

de carbono. Os grupos amino e carboxílico se ionizam prontamente, um amino pode agir
como ácido e como base, ou seja, a mudança de pH interfere no seu comportamento.
A glicina é o aminoácido mais simples, contém apenas um hidrogênio em sua cadeia
lateral. Com dois átomos de hidrogênio ligados ao átomo de carbono alfa, a glicina também é
menor dos aminoácidos e o único que não é quiral. Foi descoberto como um componente da
gelatina em 1820, tornou-se o primeiro aminoácido a ser identificado em hidrolisados de
proteínas.
Realizou-se a titulação da glicina 0,02 mol.L- com hidróxido de sódio 0,5 mol.L- e
encontrou-se os dados que em seguida, plotou-se um gráfico de pH versus o volume de
NaOH, que pode ser visto no gráfico 1.
Gráfico 1: Curva de titulação da glicina
Durante a titulação da glicina antes de atingirmos o primeiro ponto de inflexão, temos

uma elevada concentração de prótons livres no meio, desfavorecendo a perda do hidrogênio
ligado ao ácido carboxílico da molécula e tendo como carga global um valor muito positivo,
sendo assim, o equilíbrio reacional é mostrado na figura 1.
Figura 1: Ionização da glicina parte 1
É necessário entender que o pK de cada etapa na titulação equivale ao ponto médio da

perna correspondente da curva, nesse momento pK se iguala ao pH do meio reacional. Ao
chegarmos no primeiro ponto de inflexão temos o pK1 que corresponde ao ponto de equilíbrio
entre as moléculas a e b, neste ponto, a carga positiva começa a diminuir .
Após a passagem do pK1, ainda temos a reação exposta na figura 1, e novamente
ocorre um deslocamento no equilíbrio para a direita, onde aumenta-se a concentração de
moléculas b, pois a maior parte das moléculas já foram convertidas.
Em seguida, o equilíbrio se desloca até que não haja hidrogênio para retirar do ácido,
neste momento, temos o ponto isoelétrico , onde a carga geral da molécula é zero e a
molécula não conduz corrente elétrica, visto que temos a amina carregada positivamente e do
outro lado o ácido desprotonado, onde a molécula b é a única espécie presente neste ponto.
Após isso, a hidroxila que está sendo adicionada, irá retirar o hidrogênio da amina,
começado um novo deslocamento de equilíbrio, onde há o aparecimento de uma espécie mais
eletronegativa, porém em menor quantidade, neste momento a carga global começa a se
tornar negativa. O equilíbrio reacional corresponde a figura 2:
Figura 2: Ionização da glicina parte 2
Quando houver um equilíbrio entre as espécies b e c, temos o segundo ponto de

inflexão que é o pK2 , onde a carga global diminui ainda mais. É interessante dizer que, após
atingir o valor de pK2 o meio reacional possui grande quantidade de hidroxila livre que
continuará retirando prótons da amina e deslocando ainda mais o equilíbrio para produção de
moléculas c.
Por meio dos pKs encontrados pode-se calcular o ponto isoelétrico pela equação 1:]
pK 1 + pK 2
pI =
2
(Equação 1)
O ácido glutâmico, também conhecido como glutamato, é um aminoácido que

apresenta dois grupos ácidos e um grupo básico em sua estrutura, podendo assim apresentar
quatro possibilidades em sua estrutura de acordo com o pH, e protonação ou desprotonação
dos grupos ácido e base.
Realizou-se a titulação do ácido glutâmico 0,02 mol.L- com hidróxido de sódio 0,5
mol.L- e encontrou-se os dados que Em seguida, a partir desses dados, plotou-se um gráfico
de pH versus o volume de NaOH, que pode ser visto no gráfico 2.
Gráfico 2: Curva de titulação do ácido glutâmico

No início da titulação, tem-se um meio com muito próton livre, sendo assim, há uma
menor concentração das moléculas de ácido glutâmico desprotonadas, porém elas estão no
meio e o próton liberado está relacionado a um grupo específico da molécula ,trata-se do
-COOH mais próximo do nitrogênio de carga positiva na molécula, isso ocorre por conta da
maior estabilização da molécula por ressonância entre os oxigênios. Como mostra a estrutura
de ressonância na figura 3.
Figura 3: Estrutura de ressonância do ácido glutâmico
Inicialmente, antes de atingirmos o primeiro ponto de inflexão, temos uma elevada

concentração de prótons livres no meio, desfavorecendo a perda do hidrogênio ligado ao
ácido carboxílico da molécula e tendo como carga global um valor muito positivo, sendo
assim, o equilíbrio reacional é mostrado na figura 4.
Figura 4: Ionização do ácido glutâmico parte 1
Em seguida, temos o ponto de equilíbrio em que a concentração das moléculas I e II

são iguais, este ponto de inflexão é chamado de pK 1, como consta na figura 4, neste ponto, a
carga global é positiva.
Após a passagem do pK1,o equilíbrio se desloca até que não haja hidrogênio para
retirar do ácido, neste momento tem-se o ponto isoelétrico, onde a carga geral da molécula é
zero e ela não conduz corrente elétrica, neste ponto, a única espécie presente é a molécula II.
Após o ponto isoelétrico, o segundo grupo que irá perder o hidrogênio, será o ácido
carboxílico, como mostra o equilíbrio na figura 5, neste momento o carga global se tornará
levemente negativa.
No segundo ponto de inflexão, as concentrações das moléculas II e III será igual, este
ponto é o pK2, e a carga global ficará mais negativa.
Em seguida, a molécula III terá seu hidrogênio referente ao grupo amina
desprotonado formando a molécula IV como está exposto na figura 6, enquanto a carga
global se torna muito negativa.
Ao ponto que as concentrações das espécies III e IV se tornam iguais teremos o pK 3e

a carga global ficará extremamente negativa. É interessante dizer que, após atingir o valor de
pK3 o meio reacional possui grande quantidade de hidroxila livre que continuará retirando
prótons da amina e deslocando ainda mais o equilíbrio para produção de moléculas IV.
Por meio dos pK1 e pK2,, pois é entre os dois que temos a mudança da carga geral de
positiva para negativa, pode-se calcular o ponto isoelétrico (pI) pela equação 1.

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Durante a titulação da glicina antes de atingirmos o primeiro ponto de inflexão, temos

É necessário entender que o pK de cada etapa na titulação equivale ao ponto médio da

Quando houver um equilíbrio entre as espécies b e c, temos o segundo ponto de

O ácido glutâmico, também conhecido como glutamato, é um aminoácido que

Gráfico 2: Curva de titulação do ácido glutâmico

Inicialmente, antes de atingirmos o primeiro ponto de inflexão, temos uma elevada

Em seguida, temos o ponto de equilíbrio em que a concentração das moléculas I e II

Ao ponto que as concentrações das espécies III e IV se tornam iguais teremos o pK 3e

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