Técnicas de Preparação e Estudo de Lâminas Citológicas
Técnicas de Preparação e Estudo de Lâminas Citológicas
Técnicas de Preparação e Estudo de Lâminas Citológicas
lâminas citológicas
4. Desidratação
5. Inclusão
a. em parafina para
Microscopia Óptica (MO).
b. em resinas para
7. Montagem 6. Obtenção de cortes Microscopia Eletrônica de
a. em lâminas de vidro para MO. a. com navalha metálica para MO. Transmissão (MET).
b. em grades metálicas para MET. b. com lâmina de vidro ou de
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diamante para MET.
Técnicas de Preparação de Lâminas
Preparação do material que se deseja observar à microscopia =
etapas de confecção:
1º - Coleta do Material
-Partes dos órgãos ou tecidos são retiradas – bisturi, pinça ou
lâmina de barbear – extremamente finos (máx. 4 mm)
2º - Fixação
• Evita a destruição
das células por suas
próprias enzimas,
ou por bactérias.
• Insolubiliza as
proteínas dos
tecidos.
• Formaldeído 4-10%
em solução
tamponada (pH 7,4).
2. Fixação:
• Fragmentos com 5 mm
de espessura
• Tempo de fixação
variável dependendo do
tamanho do fragmento
e do fixador.
Técnicas de Preparação de Lâminas
3º - Processamento
3.1 - Desidratação
• Tem como
finalidade retirar
água dos tecidos.
• Consiste em
banhos de
concentrações
crescentes de
etanol: 70%, 80%,
90%, 2x 100%.
4. Diafanização ou Clareamento
• Objetivo: retirada do álcool da
peça (as substâncias
inclusoras dissolvem-se mal
no álcool) --- torná-la
transparente;
• O etanol é substituído por um
líquido miscível com o meio
de inclusão (xilol).
• Os tecidos embebidos em
xilol tornam-se translúcidos,
razão porque essa etapa é
denominada diafanização ou
clareamento.
• 3.3 - Inclusão (Impregnação)
• Estufa a 60ºC:
parafina ocupa os
espaços antes
ocupados pelo xilol.
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4º - Microtomia
• Cortes de 5 m de
espessura.
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Micrótomo
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Cortes Histológicos
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5º - Colagem do Corte à Lâmina
• Colocação dos
cortes em
lâminas de
vidro.
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Lâmina contendo cortes sem
coloração:
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7. Coloração:
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Reação e corantes histológicos comuns
C
REAGENTES RESULTADOS
O
L Hematoxilina (base) Azul: núcleo; regiões ácidas do citoplasma:
matriz da cartilagem.
O Eosina (ácido) Rosa: regiões básicas do citoplasma; fibras de
R colágeno.
A Tricrômico de Masson Azul-escuro: núcleos.
Ç Vermelho: músculo; queratina; citoplasma.
Azul-claro: mucinógeno, colágeno.
Õ
E Orceína, corante para fibras elásticas Castanho: fibras elásticas.
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Hematoxilina-Eosina
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Tricrômico de Masson
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Resorcina-Fucsina de Weigert
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8. Montagem:
• Uso de lamínulas.
• Meio de montagem:
resinas (Entellan) ou
bálsamo do Canadá.
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7º - Montagem