CREATININA ENZIMTICA

Instrues de Uso

Finalidade .

Sistema para a determinao da creatinina em soro,

plasma e urina por reao de ponto final.

Princpio . A creatinina presente na amostra convertida a creatina

pela ao da enzima creatinina amidohidrolase. A creatina produzida
hidrolisada a sarcosina e uria pela ao da enzima creatina
amidinohidrolase. Em seguida, a enzima sarcosina oxidase promove a
desmetilao oxidativa da sarcosina, levando produo de glicina,
formaldedo e perxido de hidrognio. Na presena de peroxidase, o
perxido de hidrognio formado reage com o N-ethyl-N-sulfopropyl-mtoluidina (ESPMT) e 4-aminoantipirina, produzindo uma quinoneimina
que tem mximo de absorbncia em 546 nm.
A intensidade da cor do produto da reao diretamente proporcional
concentrao de creatinina na amostra.

Creatinina amidohidrolase
Creatinina + H2O

Creatina

Creatina amidinohidrolase
Sarcosina + Uria
Sarcosina oxidase
Sarcosina + H2O + O2

Glicina + Formaldedo + H2O2

Peroxidase
2 H2O2 + ESPMT + 4-aminoantipirina
Quinoneimina + 4 H2O

Caractersticas do sistema . O sistema Creatinina Enzimtica da

Labtest utiliza as enzimas creatinina amidohidrolase, creatina
amidinohidrolase e sarcosina oxidase em conjunto com a reao de
Trinder, para determinar a concentrao de creatinina em amostras de
soro, plasma e urina. A metodologia enzimtica confere uma maior
especificidade determinao do analito, eliminando a interferncia de
protenas plasmticas e outros cromgenos, comumente observada com
1
os mtodos diretos que utilizam a reao de Jaff .
O material calibrador indicado calibrado com o SRM 914 do National
Institute of Standards and Technology (NIST) e torna os resultados
rastreveis ao mtodo definitivo IDMS (diluio isotpica, espectrometria
de massa), atendendo as recomendaoes do National Kidney Disease
Education Program (NKDEP) para padronizao da dosagem da
2
creatinina no soro .

01 Portugus - Ref.: 127

Metodologia . Enzimtico -Trinder

Reagentes

[Somente para uso diagnstico in vitro.]

Creatina + H2O

Ref.: 127
MS 10009010237

1. 1 - Reagente 1 - Armazenar entre 2 - 8 C.

Contm tampo pH 7,4, creatina amidinohidrolase 60 UI/mL,
sarcosina oxidase 17 UI/mL, ascorbato oxidase 7 UI/mL e
N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-3 m-toluidina 0,21 mg/mL.
2. 2 - Reagente 2 - Armazenar entre 2 - 8 C.
Contm tampo pH 7,3, creatinina amidohidrolase 670 UI/mL,
peroxidase 91 UI/mL, 4 aminoantipirina 0,9mg/mL e azida sdica
<0,1%.
Os reagentes devem permanecer fora da temperatura de armazenamento
somente pelo tempo necessrio para se obter o volume a ser utilizado.
Evitar exposio luz solar direta.
Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies
indicadas, so estveis at a data de expirao impressa no rtulo.
Durante o manuseio, os reagentes e o calibrador esto sujeitos a
contaminaes de natureza qumica e microbiana que podem provocar
reduo da estabilidade.

Precaues e cuidados especiais

Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na
manipulao dos reagentes, os quais no devem ser pipetados com a
boca. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingesto e no caso de contato
com os olhos, deve-se lavar imediatamente com grande quantidade de
gua e procurar auxlio mdico.
O Reagente 2 contm azida sdica que txica. No ingerir e, no caso de
contato com os olhos, lavar imediatamente com grande quantidade de
gua e procurar auxlio mdico. A azida pode formar compostos
altamente explosivos com tubulaes de chumbo e cobre. Portanto,
utilizar grandes volumes de gua para descartar os reagentes.

Materiais necessrios e no fornecidos

1. Analisador capaz de medir com exatido a absorbncia em 546 nm
(540 a 550 nm).
2. Calibrador da linha Calibra H - Labtest.
3. Pipetas para medir amostras e reagentes.

Amostra
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padro (POP) para
colheita, preparao e armazenamento da amostra. Enfatizamos que os
erros devidos amostra podem ser muito maiores que os erros ocorridos
durante o procedimento analtico.

Parmetros para realizao do teste . Para a dosagem de

creatinina na urina, diluir a amostra 1:5 (0,2mL de urina + 0,8mL de NaCl
150 mmol/L). Multiplicar o resultado obtido por 5.

Parmetros

Aplicao Birreagente

Tipo de Reao
Direo da Reao
l de Onda primrio
l de Onda secundrio
Temperatura

Ponto final
Crescente
546 nm
800 nm
37 C

Calibrao

2 pontos
Ponto 0: Branco (NaCl 0,85% ou gua
deionizada)
Ponto 1: Calibra H

Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de material

biolgico humano no transmitem infeces, todas elas devem ser
consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao manuselas, devem-se seguir as normas estabelecidas para biossegurana.

Modelo da Calibrao
Volume de Amostra*
Volume de R1*

Linear
6 mL
270 mL

Para descartar os reagentes e o material biolgico sugerimos aplicar as

normas locais, estaduais ou federais de proteo ambiental.

Leitura 1 (Absorbncia 1)

Soro ou plasma (heparina, EDTA, fluoreto, oxalato e citrato). O analito

estvel 7 dias entre 2 - 8 C. O anticoagulante Glistab - Labtest (Ref. 29)
permite a colheita de uma s amostra de sangue para as dosagens de
creatinina, glicose e uria.
Urina de 24 horas deve ser centrifugada. A amostra de urina no deve
receber preservativos ou conservantes e deve ser refrigerada durante o
perodo da colheita e depois de recebida no laboratrio.

Volume de Reagente 2*

90 mL

Leitura 2 (Absorbncia 2)

Aps 300 segundos de incubao a

37 C de R1 + amostra + R2

Interferncias
Concentraes de triglicrides at 1000 mg/dL, bilirrubina (livre e
conjugada) at 16 mg/dL, hemoglobina at 400 mg/dL, cido ascrbico
at 40 mg/dL, creatina at 20 mg/dL, cefpiramida at 100 mg/dL,
cefotaxima at 100 mg/dL e ceftriaxona at 100 mg/dL no interferem
significativamente na reao. Dobutamina e metildopa interferem
negativamente na reao.
Amostras com bilirrubina, hemoglobina e triglicrides em concentraes
maiores que as acima referidas devem ser diludas em NaCl 150 mmol/L
(0,85%) antes de se realizar os ensaios. Multiplicar o resultado obtido
pelo fator de diluio.
Amostras que contm azida podem apresentar resultados inexatos para a
concentrao de creatinina, provocados pela converso insuficiente de
creatina.
Para avaliar a concentrao aproximada de hemoglobina em uma
amostra, proceder do seguinte modo: diluir 0,05 mL da amostra em
2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%) e medir a absorbncia em
405 ou 415 nm, acertando o zero com gua deionizada ou destilada.
Hemoglobina (mg/dL) @ Absorbncia405 x 601
Hemoglobina (mg/dL) @ Absorbncia415 x 467

02 Portugus - Ref.: 127

*Os volumes de amostra e reagentes podem ser modificados

proporcionalmente sem prejuzo para o desempenho do teste. Em caso
de reduo dos volumes fundamental que se observe o volume mnimo
necessrio para a medio fotomtrica.

Calibrao
Sistema automtico
Calibrao de 2 pontos
Ponto 0: Branco de reagentes - gua deionizada ou soluo de cloreto de
sdio 150 mmol/L (0,85%);
Ponto 1: Calibrador - usar calibrador da linha Calibra H - Labtest;
A concentrao de creatinina no Calibra H rastrevel ao Standard
Reference Material (SRM) 914 do National Institute of Standards and
Technology (NIST).
Intervalos de calibrao
Quando o controle interno da qualidade indicar.
Quando utilizar novo lote de reagente;
Quando utilizar novos frascos de reagente de um mesmo lote, caso uma
nova calibrao tenha sido realizada durante a utilizao do frasco
anterior.

Clculos . Segundo recomendaes do NKDEP

os resultados devem
ser reportados com duas casas decimais para evitar erros sistemticos
provocados por arredondamentos, que podem chegar a 6%.
DAbs doTeste ou Calibrador = Abs 2 - Abs 1
DAbs do Teste
Creatinina (mg/dL) =
x Concentrao do Calibrador mg/dL
DAbs do Calibrador
Creatinina urinria
Creatinina urinria (mg/dL)
Creatinina Urinria =
(mg/24 h)

100

x Volume de urina
(mL/24 h)

mg/kg peso = mg/24 horas dividido pelo peso corporal.

Depurao da creatinina endgena . Instruir o paciente para

que faa corretamente a coleta da urina de 24 horas.
Dosar a creatinina no soro e na urina. O soro pode ser obtido em qualquer
momento durante o perodo de coleta da urina.

U
x VM (mL/minuto)
S
U: creatinina na urina (mg/dL)
S: creatinina no soro (mg/dL)
VM: volume minuto (Volume urinrio de 24 horas, em mL, dividido por
1440).
OBS.: A depurao dever ser corrigida para a superfcie corporal do
paciente, que obtida atravs do nomograma correlacionando peso e
altura, ou usando a equao abaixo:
A=P

0,425

xH

0,725

x 0,007184
2

A = superfcie corporal (m )
P = peso (kg)
H = altura (cm)
Multiplicar o valor da depurao por 1,73 e dividir pela superfcie corporal
do paciente.
2

Ritmo de filtrao glomerular . O NKDEP recomenda

fortemente que os laboratrios reportem a estimativa do ritmo de
filtrao glomerular (eRFG) em todos os laudos contendo resultados
de creatinina (ver Significado Clnico).
Quando os resultados da creatinina plasmtica so rastreveis ao mtodo
IDMS, utilizam-se as seguintes equaes que aplicam creatinina (CREA),
idade (18 a 70 anos) e sexo.
Mulheres
eRFG (mL/min/1,73m2) = 175 * (CREA)-1,1154 * (Idade)-0,203 * 0,742
Homens
eRFG (mL/min/1,73m2) = 175 * (CREA)-1,1154 * (Idade)-0,203

03 Portugus - Ref.: 127

Intervalo operacional . A reao linear entre 0,0 mg/dL e

150 mg/dL. Para valores maiores diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L
(0,85%) e repetir a determinao. Multiplicar o resultado obtido pelo fator
de diluio.
Controle interno da qualidade . O laboratrio deve manter um
programa de controle interno da qualidade que defina claramente os
regulamentos aplicveis, objetivos, procedimentos, critrios para
especificaes da qualidade e limites de tolerncia, aes corretivas e
registro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para
monitorizar a impreciso da medio e desvios da calibrao.
Recomenda-se utilizar os produtos da linha Qualitrol H - Labtest para
controle interno da qualidade em ensaios de qumica clnica. Sugere-se
2
procurar atender as especificaes propostas pelo NKDEP para o
coeficiente de variao 4% e erro sistemtico (bias) 5%.
Intervalos de referncia . Os intervalos devem ser usados
1,3,4
apenas como orientao . Recomenda-se que cada laboratrio
estabelea na populao atendida seu prprio intervalo de referncia.
* Intervalos estabelecidos para resultados rastreveis ao mtodo IDMS.

Aplicar os resultados obtidos na equao abaixo:

Depurao =

Segundo recomendaes do NKDEP , o eRFG deve ser reportado

como valor calculado quando o resultado for igual ou menor
2
que 60 mL/min/1,73m . Quando o valor calculado for maior que 60,
2
deve ser reportado da seguinte forma: Maior que 60 mL/min/1,73m ou
2
>60 mL/min/1,73m .

Soro/Plasma (mg/dL)*
Recm-nascido
2 semanas - 1 ano
1 - <3 anos
3 - <5 anos
5 - <7 anos
7 - <9 anos
9 - <11 anos
11 - <13 anos
13 - <15 anos
Adultos (mulheres) 18 - 74 anos
Adultos (homens) 18 - 74 anos

0,31 - 0,92
0,16 - 0,39
0,17 - 0,35
0,26 - 0,42
0,29 - 0,48
0,34 - 0,55
0,32 - 0,64
0,42 - 0,71
0,46 - 0,81
0,53 - 1,00
0,70 - 1,20

No existem intervalos estabelecidos para faixa etria 15 - <18 anos.

Sugere-se utilizar os intervalos de mulheres e homens adultos.
Converso de mg/dL para Unidades SI: mmol/L = mg/dL x 88,4

Urina (mg/Kg/24 horas)

2 - 3 anos
> 3 anos
Adulto (mulheres)
Adulto (homens)

6 - 22
12 - 30
16 - 22
21 - 26

Para amostras de urina:

Depurao da Creatinina (mL/min/1,73m 2 )**

Crianas
70 - 140
Adulto (mulheres)
88 - 128
Adulto (homens)
97 - 137

Mtodo
comparativo

** Intervalos estabelecidos para resultados no rastreveis ao mtodo

IDMS.
2

O NKDEP recomenda calcular o ritmo de filtrao glomerular (eRFG) em

substituio Depurao da Creatinina, utilizando o resultado da
creatinina rastrevel ao mtodo IDMS.

Estudos de recuperao .

Em duas amostras com

concentraes de creatinina iguais a 20,32 mg/dL e 40,64 mg/dL foram
adicionadas 20,32 mg/dL do analito, obtendo-se recuperaes entre
99,5 e 100,3%. O erro sistemtico proporcional mdio estimado no nvel
de deciso (1,0 mg/dL) igual a 0,001 mg/dL ou 0,1%.

Estudos de comparao de mtodos . O mtodo Creatinina

Enzimtica foi comparado com outro mtodo enzimtico, sendo obtidos
os seguintes resultados:
Para amostras de soro:

Mtodo
comparativo

Creatinina
Enzimtica

Urina
50

50

Intervalo de
concentraes (mg/dL)

11,73 - 146,6

11,79 - 146,2

Mdia das estimativas

(mg/dL)

134,87

134,41

Equao da regresso

Caractersticas do desempenho

Natureza da amostra
Nmero de amostras

Natureza da amostra
Nmero de amostras

Creatinina
Enzimtica

Creatinina Enzimtica = 0,9956*

Comparativo + 0,1070

Coeficiente de
correlao

0,9998

Utilizando a equao da regresso foram encontrados os seguintes erros

sistemticos para o mtodo Creatinina Enzimtica:
Nveis de deciso
para avaliao da
creatinina

Creatinina
estimada com
equao

mg/dL
30
100
500

mg/dL
30
100
498

Erros sistemticos
estimados nos nveis de
deciso da creatinina
mg/dL
0,025
0,333
2,093

%
0,083
0,333
0,419

Soro

Intervalo de
concentraes (mg/dL)

50

50

0,47 - 4,4

0,46 - 4,4

Mdia das estimativas

(mg/dL)

1,02

1,02

Repetitividade - Impreciso intra-ensaio

Amostra 1
Amostra 2

N
20
20

Mdia
1,10
4,66

DP
0,0144
0,0397

CV (%)
1,31
0,85

Creatinina Enzimtica = 0,9974*

Comparativo + 0,0055

Equao da regresso
Coeficiente de
correlao

Reprodutibilidade - Impreciso total

0,9996

Utilizando a equao da regresso foram encontrados os seguintes erros

sistemticos para o mtodo Creatinina Enzimtica:

Nveis de deciso
para avaliao da
creatinina

Creatinina
estimada com
equao

mg/dL
1,00
1,20
2,00

mg/dL
1,00
1,20
2,00

Erros sistemticos
estimados nos nveis de
deciso da creatinina
mg/dL
0,0029
0,0024
0,0003

%
0,29
0,20
0,015

Amostra 1
Amostra 2
Amostra 3

N
21
21
21

Mdia
0,56
1,19
5,66

DP
0,0053
0,0146
0,0339

CV (%)
0,96
1,23
0,60

Sensibilidade metodolgica .

Uma amostra no contendo

creatinina foi utilizada para calcular o limite de deteco do ensaio, tendo
sido encontrado um valor igual a 0,19 mg/dL, equivalente mdia de 09
ensaios mais dois desvios padro. Utilizando-se a absorbncia do padro
como parmetro verificou-se que o limite de deteco fotomtrica foi
0,04 mg/dL, correspondendo a uma diferena de absorbncia igual a
0,001.

Efeitos da diluio da matriz . Uma amostra com valor igual a

101,60 mg/dL foi utilizada para avaliar a resposta do sistema nas
diluies da matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85%). Utilizando fatores de
diluio que variaram de 1,25 a 5 foram encontradas recuperaes entre
99,5 e 100,7%.

04 Portugus - Ref.: 127

Significado clnico2 . A constncia na formao e excreo faz da

creatinina um marcador muito til de funo renal, principalmente da
filtrao glomerular, em virtude da sua relativa independncia de fatores
como dieta, grau de hidratao e metabolismo protico. Assim, a
determinao da creatinina plasmtica um teste de funo renal mais
seguro do que a uria.
A creatinina no deve ser usada isoladamente para avaliar o ritmo de
filtrao glomerular ou detectar a presena de doena renal crnica
porque ela afetada pela taxa de filtrao glomerular e por fatores
independentes como idade, sexo, raa, dieta, massa muscular, drogas e
mtodos analticos laboratoriais.
Estimativas mais precisas e exatas do eRFG podem ser obtidas com
equaes que combinam empiricamente todos os efeitos mdios de
fatores que afetam a creatinina com exceo da prpria filtrao
glomerular.
A equao atualmente recomendada foi desenvolvida a partir do estudo
Modification of Diet Renal Disease (MDRD) utilizando o clearance do
iotalamato como mtodo de referncia, e fornece resultados
2
normalizados para a superfcie corporal padro 1,73m (ver Ritmo de
Filtrao Glomerular).
A equao MDRD deve ser usada somente em indivduos maiores de 18
anos e no foi avaliada nas seguintes situaes: indivduos com idade
superior a 70 anos, mulheres grvidas, portadores de morbidades
graves, indivduos com extremos de massa corporal ou massa muscular
ou com estado nutricional fortemente comprometido.
O NKDEP desenvolveu um documento que proporciona informaes que
podem ajudar os laboratrios nos seguintes pontos
(<www.nkdep.nih.gov/labprofessionals>, acesso em 20/09/2011):

1. Reportar

resultados exatos da estimativa da filtrao glomerular

baseados na medio da creatinina srica;

2. Compreender as iniciativas do NKDEP para padronizar as medies da

creatinina srica;
3. Comunicar apropriadamente aos provedores de servios de sade
sobre as implicaes nas mudanas dos resultados da creatinina srica
que sero resultantes das iniciativas de padronizao na medio da
creatinina.
Observaes
1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado so fatores
fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados
corretos.
2. O laboratrio clnico tem como objetivo fornecer resultados exatos e
precisos. A utilizao de gua de qualidade inadequada uma causa
potencial de erros analticos. A gua utilizada no laboratrio deve ter a
qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes,
usar nas medies e para uso no enxge final da vidraria, a gua deve ter
resistividade 1 megaohm.cm ou condutividade 1 microsiemens/cm e
concentrao de silicatos <0,1 mg/L. Quando a coluna deionizadora est
com sua capacidade saturada ocorre liberao de vrios ons, silicatos e
substncias com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram
os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados
de modo imprevisvel.

05 Portugus - Ref.: 127

Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade

da gua.

Referncias
1. JUNGE, W. et. al. Determination of reference intervals for serum
creatinine, creatinine excretion and creatinine clearance with an
enzymatic and a modified Jaff method. Clinica Chimica Acta, v. 344,
n. 1-2, p. 137-48, 2004.
2. MYERS. G. L. et al. Recommendations for Improving Serum Creatinine
Measurement: A Report from the Laboratory Working Group of the
National Kidney Disease Education Program. Clinical Chemistry, v. 52,
n. 1, p. 5-18, 2006.
3. MARTENSSON, A. et. al. Creatininium reference intervals for corrected
methods. Scandinavian Journal of Clinical and Laboratory
Investigation, v. 64, p. 439-442, 2004.
4. CERIOTTI, F. et. al. Reference Intervals for serum Creatinine
Concentrations: Assessment of Available Data for Global Application.
Clinical Chemistry, v.54, n. 3, p. 559-566, 2008.
5. Labtest: Dados de Arquivo.

Apresentao
Produto
Creatinina
Enzimtica

Referncia
127-1/216

1
2

Contedo
1 X 162 mL
1 X 54 mL

Esto disponveis aplicaes para sistemas automticos e semiautomticos.

Informaes ao consumidor
[Termos e Condies de Garantia]
A Labtest Diagnstica garante o desempenho deste produto dentro das
especificaes at a data de expirao indicada nos rtulos, desde que os
cuidados de utilizao e armazenamento indicados nos rtulos e nestas
instrues sejam seguidos corretamente.

Labtest Diagnstica S.A.

CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
Servio de Apoio ao Cliente
e-mail: [email protected]

Edio: Dezembro, 2011

Ref.: 180512

0800 031 34 11 (Ligao Gratuita)

Copyright by Labtest Diagnstica S.A.

Reproduo sob prvia autorizao

Smbolos utilizados com produtos diagnsticos in vitro

Smbolos usados con productos diagnsticos in vitro
Symbols used with ivd devices

Contedo suficiente para < n > testes

Contenido suficiente para < n > tests
Contains sufficient for < n > tests

Risco biolgico
Riesgo biolgico
Biological risk

Data limite de utilizao (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa)

Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa)
Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy)

Marca CE
Marcado CE
CE Mark

Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material

Txico
Txico
Poison

Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material

Reagente
Reactivo
Reagent

Limite de temperatura (conservar a)

Temperatura limite (conservar a)
Temperature limitation (store at)

Fabricado por
Elaborado por
Manufactured by

Representante Autorizado na Comunidade Europeia

Representante autorizado en la Comunidad Europea
Authorized Representative in the European Community

Nmero do lote
Denominacin de lote
Batch code

Consultar instrues de uso

Consultar instrucciones de uso
Consult instructions for use

Controle
Control
Control

Nmero do catlogo
Nmero de catlogo
Catalog Number

Controle negativo
Control negativo
Negative control

Adies ou alteraes significativas

Cambios o suplementos significativos
Significant additions or changes

Controle positivo
Control positivo
Positive control

Produto diagnstico in vitro

Dispositivo de diagnstico in vitro
In vitro diagnostic device

Controle
Control
Control

Liofilizado
Liofilizado
Lyophilized

Corrosivo
Corrosivo
Corrosive

Ref.: 170309

06 Portugus - Ref.: 127