Relatório de Toxicologia - Ácido Hipúrico em Urina - HPLC

INTRODUO:
O tolueno um hidrocarboneto aromtico com origem e produo nas indstrias

petroqumica e siderrgica. Na indstria petroqumica, a produo se d pelos
processos de reforma cataltica, nos quais os hidrocarbonetos naftnicos originados da
frao do petrleo so convertidos em aromticos. Posteriormente, so separados das
fraes residuais por destilao fracionada, obtendo-se ento o tolueno e o xileno. Nesse
processo, inclui-se entre os principais riscos sade a exposio emisso fugitiva de
corrente de produto que contm altas concentraes desses solventes.
Na usina siderrgica, os hidrocarbonetos aromticos so originados como
subproduto do carvo mineral, no processo de produo do coque. A partir da destilao
fracionada da mistura BTX, que contm benzeno, tolueno e xileno, os trs componentes
so separados, obtendo-se assim o tolueno e o xileno de origem carboqumica.
O tolueno um solvente com inmeras aplicaes na indstria e um
constituinte importante na produo de resinas, tintas, tner e cola. Tambm est
presente na gasolina e lanado no meio ambiente como contaminante. Alm disso, o
mais importante constituinte dos vapores de solventes utilizados como inalantes por
usurios de droga de abuso. No setor qumico, o tolueno serve como base para produtos,
entre eles, frmacos, vinil tolueno, tolueno diisocianato, trinitrolueno e antixiodantes.
O cido hiprico o metablito do tolueno eliminado na urina em maior
proporo e pode ser usado na monitorizao biolgica da exposio ocupacional a esse
solvente.
Por ser um lquido voltil de elevada lipossolubilidade facilmente absorvido
pelas vias pulmonar e cutnea. Do ponto de vista ocupacional, a via pulmonar a mais
importante, pois cerca de 40% do tolueno inalado absorvido pelos pulmes. O
processo de absoro ocorre muito rapidamente, em maior quantidade durante os
primeiros minutos de exposio, decrescendo de maneira progressiva at chegar a uma
taxa constante, em um perodo de 15 minutos a 3 horas, em exposio contnua.
A proporo da reteno pulmonar no se altera com a intensidade e a durao
da exposio, mas sim com a ventilao pulmonar, que, dependendo da atividade fsica
exercida pelo indivduo exposto poder estar alterada e consequentemente aumentar a
sua absoro.
Aps a absoro, rapidamente distribudo para os tecidos, alcanando maior
concentrao no tecido adiposo, seguidos pela medula ssea, glndulas adrenais, rins,
fgado e SNC.
A biotransformao o principal processo pelo qual eliminado, sendo rpido
seu metabolismo. A excreo urinria do seu principal metablito, o cido hiprico,
eleva-se no perodo de 30 minutos aps o incio da exposio. O cido hiprico e o orto-
cresol tm um tempo de meia-vida biolgica estimado em 4-7 horas.
Cerca de 20% do tolueno absorvido eliminado na sua forma inalterada atravs
do ar expirado e o restante (em torno de 80%) oxidado no fgado, formando o cido
benzoico, que, conjugado com a glicina, forma o cido hiprico, o qual excretado na
urina. Uma pequena frao (1% ou menos) sofre hidroxilao do anel aromtico para
formar os ismeros orto, meta e para-cresol, os quais so excretados na urina
conjugados com substratos endgenos (sulfatos e glicurnicos). O tolueno no-
metabolizado tambm pode ser encontrado na urina, e tem sido proposto como
biomarcador de exposio, juntamente com cido hiprico e orto-cresol.

FINALIDADE DA ANLISE:
Determinao de cido hiprico, biomarcador de exposio, em urina atravs de
HPLC.

FUNDAMENTOS DO MTODO:
Utilizou-se o mtodo de adio de padres, pois a matriz (urina) no isenta da
substncia de anlise (cido hiprico). Fez-se curva de calibrao, utilizando-se 3
calibradores em triplicata e triplicata do branco da urina, este ltimo descontou-se dos
valores das amostras e dos calibradores. A tcnica consiste na interao maior do cido
hiprico pela fase mvel (gua/metanol/cido actico na proporo 792/200/8) com
vazo de 1,3 mL/min e comprimento de onda de 257 nm.
um mtodo usado frequentemente em bioqumica e em qumica analtica para
separar, identificar e quantificar diferentes compostos. Para tanto, utiliza-se colunas
preenchidas com material especfico que funcionaro como fase estacionria (neste caso
a coluna ser a RP18 -octadecilsilano) e uma bomba que far correr uma mistura de
solventes (fase mvel) atravs desta coluna. Desta forma, a depender da polaridade das
substncias em anlise e de suas interaes com as fases mvel e estacionria, as
mesmas se deslocaro mais rapidamente ou mais lentamente, tendo cada uma seu
prprio tempo de reteno (RT), sendo detectadas por um detector UV-VIS (ultravioleta
visvel) num comprimento de onda especfico.

SINTOMALOGIA:
Sua principal ao txica no SNC e representa o maior risco sade dos
trabalhadores. Na exposio ocupacional a longo prazo, podem ocorrer alteraes
neurocomportamentais e neurofisiolgicas, no manifestadas clinicamente. A narcose
a manifestao aguda mais importante da exposio a altas concentraes de tolueno,
alm de nuseas, dor de cabea, anorexia e palpitao.

FLUXOGRAMA:
Tratamento das amostras 1 e 2:

Padro de cido hiprico:
Soluo 1 50 mg/mL:

Soluo 2 5mg/mL:

1 mL de urina+1 mL
de etanol em tubo
de centrfuga
Homogeneizar e
centrifugar 2000
rpm por 15 minutos
Transferir 500 L do
sobrenadante para
frasco adequado
Injetar 20 L do
sobrenadante no
HPLC
Dissolver 0,2525g de
AH (Sigma 99%) em
5 mL de metanol.
Sonicar 10 min e
deixar a 4C.
Diluir 1:10 mL (balo de 10
mL) da soluo 1.
Calibrao:
Fazer triplicata dos calibradores e do branco da urina (s urina).
Em balo volumtrico preparar os seguintes calibradores:
C1: 0,1mg/mL:

C2: 0,5mg/mL :

C3: 1,0mg/mL :

ORDEM DE INJEO NO HPLC: BRANCO C1 C2 C3 AMOSTRA 1
AMOSTRA 2

Adicionar 100 L
do padro 2 a 5
mL de urina
Homogeneizar
no sonicador
por 10 min.
Adicionar 50 L
do padro 1 a 5
mL de urina
Homogeneizar
no sonicador
por 10 min.
Adicionar 100 L
do padro 1 a 5
mL de urina
Homogeneizar
no sonicador
por 10 min.
RESULTADOS:
reas obtidas no HPLC

Branco
Calibrador
0,1mg/mL
Calibrador
0,5mg/mL
Calibrador
1mg/mL Amostra 1 Amostra 2
rea 1 1710106

1952249

2816882

4930664

4815609

2640195

rea 2 1803443

2220124

3913191

5788322

5479781

3113220

rea 3 1936226

2222734

3870111

5699035

5339123

3218463

Mdia 1816592

2131702

3533395

5472674

5211504

2990626

Branco

315111

1716803

3656082

3394913

1174034

Desvio
padro 113631,99 155416,6245 620891,9171 471512,3553 349994,292 308010,449

Amostra 1: rea mdia - branco = 3394913
y = 4x10
6
x + 87472
x=0,827 mg/mL = 827mg/L de urina
1000 mL de urina - 1,6 g de creatinina
827 mg - 1,6 g creatinina
x - 1g creatinina
y = 4x10
6
x - 87472
R = 0,9992
0
500000
1000000
1500000
2000000
2500000
3000000
3500000
4000000
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2
r
e
a

Concentrao (mg/mL)
Curva Analtica
x = 516,88 mg/g de creatinina
Resultado: 0,517 g/g de creatinina

Amostra 2: rea mdia - branco = 1174034
y = 4x106x + 87472
x=0,272 mg/mL = 272 mg/L de urina

1000 mL de urina: 1,6 g de creatinina
272 mg - 1,6 g creatinina
x -1g creatinina
x = 170 mg/g de creatinina
Resultado: 0,17 g/g de creatinina

VR= 1,5 g de cido hiprico/g de creatinina
IBMP= 2,5 g de cido hiprico/g de creatinina

INTERPRETAO DOS RESULTADOS:
Ambas as amostras encontram-se abaixo dos valores de referncia e do IBMP,
estando, portanto, dentro dos parmetros aceitos.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:
MOREAU, R. L. M.; SIQUEIRA, M. E. P. B. Toxicologia Analtica. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 2010.

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