UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS UNICAMP

FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE PIRACICABA DEPARTAMENTO DE DIAGNSTICO ORAL Disciplina de Microbiologia e Imunologia

I INTRODUO MICROBIOLOGIA

* ORIGEM E DESENVOLVIMENTO DA MICROBIOLOGIA * ESTUDO SOBRE A IMUNIDADE

1 Origem da Microbiologia 2 Biognese X Abiognese 3 Teoria Microbiana da Fermentao 4 Teoria Microbiana da Doena 5 Desenvolvimento da Microbiologia Oral 6 Primeiros Estudos sobre a Imunidade

1 Origens da Microbiologia
1.1 O que microbiologia A microbiologia o ramo da biologia dedicado ao estudo dos seres microscpicos, geralmente muito pequenos para serem observados a olho desarmado. A palavra microbiologia deriva de trs palavras gregas - mikros pequeno; bios vida; logos cincia. 1.2 Surgimento da microbiologia A microbiologia nasceu da especulao do homem sobre a origem da vida, sobre as fontes das doenas epidmicas e transmissveis, da putrefao da matria e processos de fermentao. O Velho Testamento contm referncias a algumas regras para evitar doenas. O Livro de Leviticus contm descries detalhadas da lepra:
Se os plos presentes se tornarem brancos e a chagas apresenta ser mais profunda de que a pele circundante, trata-se da temvel doena de pele ... [lepra] contudo, se a chagas no parece ser mais profunda do que a pele circundante e os plos no se tornarem brancos, o sacerdote dever isola-lo por sete dias. [conceito de quarentena]

Nas antigas civilizaes, as causas das doenas infecciosas eram atribudas a natureza como o aparecimento de um cometa, ou um desagrado a uma divindade, no entanto preconizava-se alguns mtodos de higiene e a quarentena. Hipcrates, mdico grego, estabeleceu alguns conceitos de doena que influenciaram a prtica at a Idade Mdia e vrios conceitos sobre as doenas infecciosas ainda datavam da era a. C.. Em 1546, Girolano Francastoro, mdico italiano, definiu que o contgio ocorria: 1 pelos contatos; 2 atravs de fmites ou objetos; 3 a distncia (atravs do ar).

1.3 As primeiras observaes ao microscpio J em 1673, Antony van Leeuwenhoek, aps ter inventado o microscpio, comeou a fazer observaes dos primeiros seres invisveis ao olho desarmado, chamando esses seres microscpicos de pequenos animlculos. Entre 1683 a 1695, Leeuwenhoek enviou cartas a Sociedade Real de Londres fornecendo descries claras das bactrias encontradas na cavidade oral.

Esboos

de

bactrias

da

cavidade bucal, observadas por Leeuwenhoek. Tambm mostrou a motilidade de algumas traado C-D. bactrias, no

2 Biognese X Abiognese
Aps essas descobertas realizadas por Leeuwenhoek, surgiram calorosas discusses sobre a origem dos microrganismos. Muitos pesquisadores acreditavam que a vida surgia de objetos inanimados, sendo este processo denominado de abiognese. Por outro lado, outros pesquisadores defendiam que os animlculos de Leeuwenhoek se originariam de outros seres de igual espcie, esse tipo de origem se denominou de biognese. A idia de gerao espontnea ou abiognese se deu origem na Grcia Antiga, onde acreditava-se que as rs e minhocas surgiram espontaneamente de pequenos lagos de lama.

Em 1745, John Needham cozinhou pedaos de carne para destruir os microrganismos preexistentes e colocou em frascos abertos, posteriormente ele observou colnias de microrganismos crescendo na carne e concluindo que, em cada partcula de matria orgnica, havia uma fora vegetativa capaz de levar a matria orgnica a brotar uma vida. Spallanzani (1765-1776) concluiu, corretamente que no bastava fechar hermeticamente os frascos contendo as infuses aquecidas, pois era importante que o ar acumulado acima do lquido no contivesse animlculos ou germes. No havia crescimento de microrganismos na infuses fervidas quando o ar, livre de germes pelo aquecimento, penetrava nos frascos. Seus oponentes replicaram que o aquecimento havia viciado o ar, deixando-o incapaz de vitalizar a matria orgnica. Mas, no sculo XVII, pensadores e crticos foram discordando dessa idia. Aps quase cem anos depois do primeiro experimento de Needham, Franz Schulze (1815-1873), em 1835 e Theodor Schwann (1810-1882), no ano seguinte, tentaram resolver a controvrsia da essencialidade do ar. O primeiro fez passar o ar por uma soluo de cido forte e depois passava por uma infuso de carne previamente fervida em um frasco fechado. O segundo, Schwann, fez o ar passar por um tubo aquecido ao rubro e ento aerizava o caldo, matando assim, nos dois casos, os micrbios do ar e evitando a contaminao dos meios. Porm os defensores da gerao espontnea no ficaram convencidos com tais experimentos. Eles diziam que o cido e o calor alteravam o ar no permitindo o crescimento microbiano. At o ano de 1854, os cientistas no haviam resolvido esse debate sobre a passagem do ar. Para isso colocaram algodo em um tubo e o ar passava livremente at um caldo nutriente estril, no havendo crescimento microbiano, o que forneceu ainda mais os argumentos para os defensores da biognese.

2.2 Demonstrao da Biognese Essa discusso durou at meados de 1860, quando um qumico francs chamado Louis Pasteur realizou seus experimentos clssicos que derrubaram definitivamente a teoria da gerao espontnea. Ele utilizou frascos com um pescoo semelhante a um pescoo de cisne, preenchidos com caldo nutritivo e fervidos. Demostrou com isso, que a poeira do ar continham muitos microrganismos e que os mesmos, contaminavam os meios nutritivos. Essas infuses fervidas permaneciam estreis indefinidamente pois o frasco com o gargalo semelhante a um S evitavam a passagem dos microrganismos, mais no do ar propriamente dito. O fsico John Tyndall, em 1881, contribuiu para a confirmao da teoria da biognese realizando um experimento onde usou uma cmara de cultivo ou caixa, onde demostrou que o ar poderia ficar sem microrganismo simplesmente por permitir que as partculas de poeira se sedimentassem no fundo de uma caixa fechada.

Vrios tipos de frascos utilizados por Pasteur em suas pesquisas. Cmara de Tyndall utilizada para confirmar a teoria da biognese.

3 Teoria Microbiana da Fermentao

A fermentao j era utilizada na Grcia antiga para a fabricao de vinho, na China (2.300 a. C.) uma cerveja chamada de kiu e no Japo o saqu bebida derivada da fermentao microbiana do arroz. Por volta de 1850, Pasteur foi solicitado pela industria do vinho francs para examinar lotes de vinho, encontrando microrganismos diferentes no vinho de qualidade superior e no lote de qualidade inferior. Para resolver o problema ele aqueceu o suco de uva por vrios minutos e depois resfriou. Com isso, eliminou os microrganismos existentes no suco, e em seguida, inoculou no mesmo os microrganismos que estavam presentes nos vinhos de boa qualidade. Observou-se ento que a qualidade dos produtos fermentados no se baseava na tentativa e no erro, mas sim no tipo de microrganismo que realizava a fermentao. O processo utilizado para a eliminao dos microrganismos presentes no suco foi denominado, posteriormente de pasteurizao.

4 Teoria Microbiana da Doena

4.1 Histrico Girolamo Francastoro (1483-1553): sugeriu que as doenas surgiam devido a organismos, pequenos demais para serem vistos, se propagavam de uma pessoa para outra e foram baseadas em fatos narrados por marinheiros sobre a propagao das doenas.

Anton von Plenciz (1705-1786): aps 200 anos, alm de estabelecer que seres vivos eram causadores de doena, como diferentes agentes eram responsveis por diferentes doenas, vivendo um no outro, retirando seus nutrientes (parasitismo).

Louis Pasteur (1822-1895): foi requisitado para investigar a doena do bicho-da-seda e durante seis anos tentou provar que um protozorio causava a doena. Tambm estudou o papel dos microrganismos nas doenas dos seres humanos e dos animais. Em 1880 ele descobriu o que bactrias atenuadas conferiram proteo contra a clera aviria e em 1884, relatou que os vrus atenuados protegiam contra a raiva. Pasteur com a finalidade de matar esporos, iniciou a prtica de esterilizar as infuses empregando o vapor sob presso (15 libras a 121oC), enquanto que materiais estveis eram esterilizados em fornos com calor seco na temperatura de 160oC.

Robert Koch (1843-1910): mdico e rival de Pasteur, provou que as bactrias eram responsveis pela doena do carbnculo. Foi o primeiro a provar que um tipo especfico de micrbio causa um tipo definido de doena. Em 1877 foi o primeiro a utilizar o cristal violeta com sucesso para a colorao do antraz, Paul Ehrlich utilizou o azul de metileno e F Ziehl e F. Neelsen desenvolveram a colorao pelo cido, permitindo que Koch observasse mais tarde o bacilo da tuberculose. Introduziu tambm o meio contendo gar, identificou o bacilo da tuberculose e foi o primeiro a isolar as bactrias causadoras do antraz e da clera asitica. Koch, por volta de 1880, organizou postulados baseado em quatro critrios necessrios para provar que um micrbio especfico causa uma doena particular. Postulados de Koch: 1 - Um microrganismo especfico deve sempre estar associado a uma doena. 2 - O microrganismo deve ser isolado e cultivado em cultura pura, em condies laboratoriais. 3 - A cultura pura do microrganismo produzir a doena quando inoculada em animal susceptvel.

possvel

recuperar

microrganismo

inoculado

do

animal

infectado

experimentalmente. Devaine (1863): utilizando sangue de animais infectados pelo antraz, transmitiu infeces em camundongos, carneiros e gados sadios. A filtrao do sangue infectado em filtros de barro removia os organismos do filtrado e dessa forma no induzia a doena, enquanto os depsitos sobre o filtro produzia a doena.

Oliver W. Holmes (1809-1894): mdico americano, insistiu em 1843 que a febre de parturiente era contagiosa e , portanto, era transmitida de uma mulher para outra pelas mos dos mdicos e das parteiras

Ignaz Philipp Semmelweis (1818-1865) pesquisava uma maneira de manter as incises cirrgicas livre de contaminao pelos microrganismos usando solues cloradas na antisepsia das mos dos mdicos. Aps a descoberta dos vrus, agentes que no crescem em laboratrio, como fazem as bactrias, foram requeridas algumas alteraes dos postulados de Koch. Dentro de um curto perodo de tempo depois do estabelecimento da teoria microbiana, o postulado conduziu descoberta da maioria das bactrias que causam a doena humana.

Dmitri Ivanovski (1864-1920): em 1892, descobriu que o agente do mosaico do tabaco podia ser transmitido por um suco filtrado da planta doente. Esse agente era o vrus, palavra derivada do latim que significa lquido viscoso ou veneno A partir do conhecimento de que os microrganismos causam doenas, os cientistas comearam a dar maior ateno a sua preveno e tratamento, surgindo conceitos

como anti-sepsia, imunizao e quimioterapia. A descoberta do microscpio eletrnico, por volta de 1934, introduziu uma nova era na citologia molecular, estimulando o sucesso a renovao da pesquisa, com aplicao de tcnicas histoqumicas estabelecidas. A era da antibitica deu incio com a descoberta da penicilina por Fleming (1929) que foi desenvolvida durante a segunda Guerra Mundial.

5 O Desenvolvimento da Microbiologia Oral

W. D. Miller, publicou em 1890 um trabalho intitulado Os microrganismos da cavidade oral humana, propondo que os carboidratos da dieta eram degradados pelas bactrias orais e os cidos resultantes causavam a dissoluo do esmalte dental, acreditando que a matriz descalcificada da dentina, em particular, era destruda pela ao peptonizante de microrganismos proteolticos. Assim, foi Miller quem mostrou experimentalmente pela primeira como as bactrias causam a crie dental. Essa conceituao foi chamada de teoria qumico-parasitria. Outro pesquisador que descreveu a flora bucal, especulando os seus efeitos na cavidade foi G. V. Black, que aprendeu odontologia e microbiologia por vontade prpria e menos formal.(1883). Em 1924, J. K. Clark, identificou cocos em leses de crie, no qual chamou de Streptococcus mutans, porm naquele tempo outros cientistas no reproduziram os seus achados. Robert Stephan mediu o pH da placa com eletrodos de antimnio especiais e descobriu que dentro de poucos minutos aps o enxge bucal com uma soluo de glicose o pH da placa caa, porm mais naqueles com experincia anterior de crie, isso foi demonstrado na dcada de 30 e 40. Paul Keys tratou hamsters com penicilina e eritromicina para prevenir a crie, enquanto a prole no tratada desenvolvia a leso na

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dcada de 1960. As descries iniciais das doenas periodontais foram realizadas por Pierre Fauchard em 1745; John Hunter (1773), descreveu a gengivite e a periodontite; H. A. Gins em 1934, foi o primeiro a desvendar a natureza anaerbia de algumas bactrias da cavidade bucal e isoladas de infeces orais. Em 1956 MacDonald e colaboradores estimularam novas pesquisas, quando descreveram infeces mistas bactrias produtoras de pigmentos negros, utilizando mtodos de anaerobiose rotineiramente. Os conhecimentos alcanados com a melhoria das tcnicas de cultivo e com a sofisticao dos mtodos de identificao bioqumica e sorolgica levaram a concluso de que bactrias especficas so responsveis pelo desenvolvimento da periodontite do adulto e da periodontite juvenil.

6 Estudos sobre a Imunidade

O ramo da imunologia desenvolveu-se dos estudos iniciais da bacteriologia. Porm os chineses, persas e brahmins j praticavam a variolizao, tcnica consistida da exposio de um indivduo so s crostas secas de um indivduo que se recuperava da doena. Em 1776, Edward Jenner, introduziu a prtica de imunizao ativa, expondo indivduos a antgenos da varola humana mais branda, protegendo-os da forma mais agressiva. Pasteur, aps 100 anos, estendeu o conceito de imunizao ativa, quando observou que a clera aviria podia ser evitada inoculando cultura velha de bacilos, com a sua virulncia reduzida. Em seguida ele aplicou este princpio de imunizao na preveno do carbnculo, denominando as culturas avirulentas de vacinas (do latim vacca, vaca) e o

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processo de imunizao, com tais culturas, de vacinao. Ele desenvolveu este mtodo atravs da utilizao de organismos atenuados e preparou vacinas protetoras contra o antraz, a erisipela suna e contra a raiva. Koch iniciou estudos sobre as relaes celulares do hospedeiro s infeces, o clssico de imunidade mediada por clulas foi a observao, que o mesmo fez, quando injetou um antgeno derivado do organismo causador da tuberculose, ocasionando reaes inflamatrias tardias em seres humanos e animais quando expostos. Elie Metchnikoff (1884) observou que os leuccitos eram capazes de ingerir bactrias (fagocitose) e destru-las atravs da ingesto intracelular. Porm somente depois dos anos 40 que a imunidade mediada por clulas foi reconhecida totalmente como um mecanismo imune muito importante. Metchnikoff, enquanto trabalhava no instituto Pasteur, formulou a teoria que os fagcitos eram a primeira e mais importante linha de defesa contra a infeco, ganhando o Nobel (1908).

7 - Bibliografia BIER, O. Microbiologia e Imunologia . v. 1, 30 ed., So Paulo Melhoramentos, 1994. NISENGARD, R. J., NEWMAN, M. G. Microbiologia Oral e Imunologia. 2 ed., Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1997. PELCZAR, M. J., et al. Microbiologia: Conceitos e Aplicaes. v. 1, 2 ed., So Paulo: Makron Books, 1997

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8 Objetivos da Aula
Apresentar historicamente a origem e o desenvolvimento da Microbiologia e Imunologia. Mostrar os principais cientistas, suas pesquisas e seus descobrimentos. Apresentar as reas relacionadas com a microbiologia.

9 Responder as Questes 9.1 - Quem inventou o primeiro microscpio? Quais foram as primeiras observaes realizadas? Qual a importncia desse fato? 9.2 Responda: a - O que significa Gerao Espontnea? b - Qual a outra teoria que confrontava diretamente com a gerao espontnea? c Quais foram os principais pesquisadores e suas experincias, as quais refutaram a gerao espontnea? 9.3 Cite os postulados de Koch e explique, sucintamente, o que eles significam. 9.4 Quem foi que criou a teoria qumico-parasitria? E o que ela significa? 9.5 Cite as contribuies dos principais pesquisadores para a Imunologia.

1) MORFOLOGIA BACTERIANA

As clulas bacterianas so caracterizadas morfologicamente pelo seu tamanho, forma e arranjo. 1.1) Tamanho variam de 0,3 por 0,8 m at 10 por 25 m. as espcies de maior interesse mdico medem entre 0,5 a 1,0 m por 2 a 5 m. 1.2) Forma e arranjo 1.2.1) Formas de cocos (esfricas): grupo mais homogneo em relao a tamanho sendo clulas menores (0,8-1,0 m). Os cocos tomam denominaes diferentes de acordo com o seu arranjo: Diplococos: cocos agrupados aos pares. Ex: Neisseria meningitides (meningococo). Ttrades: agrupamentos de quatro cocos. Sarcina: agrupamentos de oito cocos em forma cbica. Ex: espcie Sarcina. Estreptococos: cocos agrupados em cadeias. Ex: Streptococcus salivarius, Streptococcus pneumoniae (pneumococo). Streptococcus mutans.

Estafilococos: cocos em grupos irregulares, lembrando cachos de uva. Ex: Staphylococcus aureus.

Micrococos: cocos que se separam completamente aps a diviso celular.

1.2.2) Forma de bastonete: so clulas cilndricas, em forma de bastonetes que apresentam grande variao na forma e tamanho entre gneros e espcies. Dentro da mesma espcie os bastonetes so relativamente constantes sob condies normais de crescimento, podendo variar em tamanho e espessura (longos e delgados, pequenos e grossos, extremidade reta, convexa ou arredondada). Quanto ao arranjo podem variar em : Diplobacilo: bastonetes agrupados aos pares. Estreptobacilos: bastonetes agrupados em cadeias. Paliada: bastonetes alinhados lado a lado como palitos de fsforo. Ex: bacilo da difteria. Tricomas: similares a cadeias de bastonetes, mas com uma rea de contato muito maior entre as clulas adjacentes Ex: espcies Beggiatoa e Saprospira 1.2.3) Formas helicoidais ou espiraladas: constituem o terceiro grupo morfolgico sendo caracterizada por clulas de forma espiral que se dividem em: Espirilos: possuem corpo rgido e se movem s custas de flagelos externos, dando uma ou mais voltas espirais em torno do prprio eixo. Ex: Aquaspirillium

Espiroquetas: So flexveis e locomovem-se provavelmente s custas de contraes do citoplasma, podendo dar vrias voltas completas em torno do prprio eixo. Ex: Treponema pallidum, Treponema denticola.

Alm desses trs tipos morfolgicos, existem algumas formas de transio. Quando os bacilos so muito curtos, podem se assemelhar aos cocos, sendo ento chamados de cocobacilos (Ex: Brucella melitensis). Quando as formas espiraladas so muito curtas, assumindo a forma de vrgula, eles so chamados de vibrio (Ex: V. cholerae).

2) CITOLOGIA BACTERIANA O tamanho, a forma e o arranjo das bactrias constituem sua morfologia grosseira, sua aparncia externa; a observao interna das estruturas celulares d-nos uma idia de como a bactria funciona no ambiente. Na figura abaixo esto representadas esquematicamente diversas estruturas bacterianas que sero comentadas a seguir:

2.1) Flagelos Flagelos so organelas especiais de locomoo, constitudas por uma estrutura protica denominada flagelina, formando longos filamentos delgados e ondulados de 3-12m que partem do corpo da bactria e se estendem externamente parede celular. Um flagelo tem trs partes: o corpo basal (estrutura composta por vrios anis que ancora o flagelo membrana citoplasmtica), uma estrutura curta em forma de gancho e um longo filamento helicoidal. O flagelo propulsiona a bactria atravs do lquido podendo chegar a 100 m por segundo (o equivalente a 3000 vezes o seu comprimento por minuto). O mtodo exato do movimento desconhecido (contrao das cadeias proticas movimento ondulatrio; movimento rotatrio a partir da extremidade fixa gancho) e aparentemente a energia vem da degradao de ligaes energticas de fosfato. Em geral a motilidade ocorre ao acaso embora as vezes esteja relacionado com quimiotaxia. As bactrias recebem denominaes especiais de acordo com a distribuio dos flagelos: atrquias (sem flagelo); monotrquias (um flagelo em uma das extremidades); anfitrquias (um flagelo em cada extremidade); lofotrquias (tufo de flagelos em uma ou ambas as extremidades); e peritrquias (cercadas de flagelos).

2.2) Fmbrias As fmbrias ou "Pili" so organelas filamentosas mais curtas e delicadas que os flagelos, constitudas por uma protena chamada pilina e presentes em muitas bactrias (especialmente Gram negativas). Elas originam-se de corpsculos basais na membrana citoplasmtica e sua funo parece estar relacionada com a troca de material gentico durante a conjugao bacteriana (fmbria sexual), e tambm com a aderncia s superfcies mucosas. As fmbrias podem ser removidas sem comprometimento da viabilidade celular e regeneram rapidamente.

2.3) Cpsula Muitas bactrias apresentam, externamente parede celular, uma camada viscosa denominada cpsula que constitui uma forma de proteo da bactria contra as condies externas desfavorveis. Tal formao pode ser evidenciada com a ajuda de mtodos especiais de colorao (nanquim). Geralmente as cpsulas so de natureza polissacardea (homopolissacardeas, composta por um nico tipo de acar ou heteropolissacardeas, composta por diferentes acares), embora tambm possam ser constitudas por polipeptdeos. A cpsula est relacionada com a virulncia da bactria pois confere resistncia fagocitose, de modo que, em uma mesma espcie, as amostras capsuladas so mais virulentas que as no capsuladas.
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Nas bactrias desprovidas de cpsula ocorre a formao de um envoltrio viscoso delgado chamado de camada limosa (slime layer) ou por um material limoso mal delimitado (loose slime).

2.4) Parede celular A parede celular bacteriana uma estrutura rgida que recobre a membrana citoplasmtica e confere forma s bactrias. Ela constituda por cido diaminopimrico (DPA), cido murmico e cido teicico alm de aminocidos, carboidratos e lipdeos. Todos esses compostos esto reunidos para formar substncias polimricas complexas que por sua vez estruturam a parede celular. Uma macromolcula complexa denominada peptideoglicana (tambm chamada de mucopeptdeo ou murena) forma a estrutura rgida da parede. Alm disso, a parede celular protege a clula, mantm a presso osmtica intrabacteriana, impedindo o rompimento da clula devido entrada de gua, e funciona como suporte de antgenos somticos bacterianos. A diviso das bactrias Gram-positivas e Gram-negativas, de acordo com sua resposta colorao de Gram decorrente das diferenas na composio e estrutura da parede celular.

Gram Positivas: possuem uma quantidade maior de peptideoglicano em sua parede celular, o que torna a parede dessas bactrias mais espessa e rgida do que a das bactrias Gram negativas. Composta de protedas, lipdeos, peptideoglicano e cidos teicicos (cadeias de polifosfato com resduos de ribitol e glicerol), essas bactrias so sensveis lisozima bsicos para identificao sorolgica. e sua parede constitui o local de ao de alguns antibiticos alm de apresentar elementos

Gram Negativas: a parede celular dessas bactrias menos espessa e elas so mais complexas do que as Gram positivas por apresentarem uma membrana externa cobrindo a fina camada de peptdeoglicano. A membrana externa o que distingue as bactrias Gram negativas, servindo como uma barreira seletiva para a entrada e sada de algumas substncias da clula e podendo ainda causar efeitos txicos srios em animais infectados. A estrutura da membrana externa composta por lipopolissacardeos (LPSs). Os fosfolipdios, lipoprotenas e esto localizados lipopolissacardeos

exclusivamente na camada externa da membrana, enquanto que os fosfolipdeos esto presentes quase completamente na camada interna. Os LPSs so compostos por trs segmentos ligados covalentemente: (1) lipdeo A, firmemente embebido na membrana; (2) cerne do polisssacardeo, localizado na superfcie da membrana; e (3) antgenos O, que so polissacardeos que se estendem como plos a partir da superfcie da membrana em direo ao meio circundante. A poro lipdica do LPSs tambm conhecida como endotoxina e pode atuar como um veneno, causando febre, diarria, destruio das clulas vermelhas do sangue e um choque potencialmente fatal.

2.5) Membrana Citoplasmtica A membrana citoplasmtica tem espessura de aproximadamente 10 nm e separa a parede celular do citoplasma. constituda principalmente de lipdeos e

protenas, desempenhando importante papel na permeabilidade seletiva da clula (funciona como uma barreira osmtica). Ela difere da membrana citoplasmtica das clulas eucariticas por: no apresentar esterides em sua composio; ser sede de numerosas enzimas do metabolismo respiratrio (mesmas funes das cristas mitocondriais); controlar a diviso bacteriana atravs dos mesossomos.

2.6) Mesossomos Os mesossomos so invaginaes da membrana citoplasmtica que podem ser simples dobras ou estruturas tubulares ou vesiculares. Eles podem colocar-se prximos membrana citoplasmtica ou afundar-se no citoplasma. Os mesossomos profundos e centrais parecem estar ligados ao material nuclear da clula estando envolvidos na replicao de DNA e na diviso celular. Os mesossomos perifricos penetram muito pouco no citoplasma, no so restritos localizao central da bactria e no esto associados com o material nuclear. Parecem estar envolvidos na secreo de certas enzimas a partir da clula, tais como as penicilinases que destroem a penicilina. Alguns autores associam ainda aos mesossomos o valor funcional das mitocndrias, atribuindo eles papel na respirao bacteriana.

2.7) Estruturas Celulares Internas 2.7.1) rea Citoplasmtica: - Citoplasma: em qualquer clula, o citoplasma tem em torno de 80% de gua, cido nuclicos, protenas, carboidratos, lipdeos, ons inorgnicos, compostos de baixo peso molecular e partculas com vrias funes. Esse fluido denso o stio de muitas reaes qumicas. - Ribossomos: esto presentes em grande nmero nas clulas bacterianas conferindo ao citoplasma aparncia granular quando observado ao microscpio eletrnico. O conjunto de diversos ribossomos, que durante a sntese protica est ligado a uma molcula de RNAm recebe o nome de polissomo. - Grnulos de reserva: embora as clulas procarioticas no apresentem vacolos, podem acumular substncias sob a forma de grnulos de reserva, constitudos de polmeros insolveis. So comuns polmeros de glicose, fosfato inorgnico e lipdeos.

2.7.2) rea nuclear: - Nucleide: as bactrias apresentam um cromossomo circular constitudo por uma nica molcula de DNA no delimitado por membrana nuclear. O cromossomo bacteriano contm todas as informaes necessrias sobrevivncia da clula e capaz de auto-duplicao.

- Plasmdeo: algumas bactrias possuem molculas menores de DNA, tambm circulares, cujos genes no codificam caractersticas essenciais, porm muitas vezes conferem vantagens seletivas bactria que as possue. Essas molculas chamadas plasmdeos so capazes de auto-duplicao independente da replicao do cromossomo, e podem existir em nmero varivel no citoplasma bacteriano. 2.8) Esporos Os esporos que se formam dentro da clula, chamados endosporos, so exclusivos das bactrias (principalmente as pertencentes ao gnero bacillus e clostridium). Eles possuem parede celular espessa, so altamente refrteis (brilham muito com a luz do microscpio) e altamente resistentes a agentes fsicos (dessecao e aquecimento) e qumicos (antispticos) adversos devido a sua parede ou capa impermevel composta de cido dipicolnico. Os esporos surgem quando a clula bacteriana no se encontra em um meio ideal para o seu desenvolvimento. A bactria produtora pode crescer e multiplicar-se por muitas geraes como clulas vegetativas. Em alguma etapa do desenvolvimento, em ambiente com exausto de fontes de carbono e nitrognio ou completa falta de nutrio, ocorre no interior do citoplasma vegetativo a sntese do esporo (sua formao leva por volta de 6 horas). Ela iniciada pela condensao de uma nucleoprotena no citoplasma que migra para a extremidade da clula enquanto esta e o citoplasma so envolvidos por uma membrana dupla derivada da membrana citoplasmtica. O tegumento formado na membrana dupla e o citoplasma sofre condensao para completar a formao do cerne. Os esporos tm pouca atividade metablica, podendo permanecer latente por longos perodos, representando uma forma de sobrevivncia e no de reproduo.

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3) REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS BIER, O. Morfologia Bacteriana. In: Microbiologia e Imunologia . V. 1, 30 ed, c. 2, p. 17-42. So Paulo, Comp. Melhoramentos de So Paulo, 1994. DE DAVIS, B., et al. Estrutura e classificao das bactrias. In: Microbiologia: fisiologia bacteriana. V. 1, 1 ed., c. 2, p. 21-54. So Paulo, EDART So Paulo, 1973. JAWETS, E., et al. Estrutura da clula. In: Microbiologia Mdica. V. 1, 13 ed., c. 2, p. 5-28. So Paulo, Editora Guanabara Koogan S.A., 1980. TRABULSI, L. R., et al. Morfologia e estrutura de Janeiro, 1991. PELCZAR, M. J., et al. Estrutura das clulas procariticas e eucariticas. In: Microbiologia conceitos e aplicaes. V. 1, 2 ed., c. 4, p. 100-43, So Paulo, Makron Books, 1996. da clula bacteriana. In:

Microbiologia. V. 1, 2 ed., c.1, p. 3-11. Livraria Atheneu Editora, So Paulo - Rio

OBJETIVOS

1) Definir, descrever e interpretar os principais aspectos associados morfologia bacteriana, atravs do estudo da forma fundamental das bactrias, suas variaes e dimenses. 2) Definir, descrever, identificar e classificar os principais aspectos da citologia bacteriana, atravs do estudo da forma fundamental das bactrias, suas variaes e funes.

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QUESTES 1) Como as bactrias so divididas quanto forma e arranjo? 2) Quais so as estruturas que compe um clula bacteriana? Descreva a funo de cada uma delas. 3) O que diferencia as bactrias Gram positivas das Gram negativas? Desenhe a parede celular de cada uma delas. 4) O que compe a membrana citoplasmtica das bactrias? O que a diferencia da membrana citoplasmtica das clulas eucariticas? 5) Descreva e desenhe o ciclo de formao de esporos nas bactrias.

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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE PIRACICABA DEPARTAMENTO DE DIAGNSTICO ORAL Disciplina de Microbiologia e Imunologia

FISIOLOGIA BACTERIANA

- Nutrio Bacteriana - Condies de Cultivo - Meios de Cultura - Influncia de Fatores Ambientais - Curva de Crescimento Bacteriano - Metabolismo Bacteriano / Obteno de Energia

FISIOLOGIA BACTERIANA O crescimento e diviso celulares necessitam de um ambiente propcio com todos os constituintes qumicos e fsicos necessrios para o seu metabolismo. Essas necessidades especficas so dependentes de informaes genticas para cada espcie bacteriana. Algumas espcies com vasta flexibilidade nutricional, como as Pseudomonas, so capazes de sintetizar muitos de seus metablitos a partir de precursores simples, enquanto outras espcies so mais exigentes, como as Porphyromonas e Treponemas, que necessitam de nutrientes complexos para o crescimento e reproduo. NUTRIO A anlise das estruturas bacterianas revela que sua arquitetura formada por diferentes macromolculas, em particular, protenas e cidos nuclicos. Os precursores das macromolculas podem ser retirados do meio ambiente ou ser sintetizados pelas bactrias a partir de compostos mais simples. A alternativa escolhida vai depender da disponibilidade do composto no meio e da capacidade de sntese do microrganismo. As substncias ou elementos retirados do ambiente e usados para construir novos componentes celulares ou para obter energia so chamados nutrientes. Os nutrientes podem ser divididos em duas classes: macronutrientes e micronutrientes. Ambos os tipos so imprescindveis, mas os primeiros so requeridos em grandes quantidades por serem os principais constituintes dos compostos orgnicos celulares e / ou serem utilizados como combustvel. Macronutrientes Carbono: est presente na maioria das substncias que compem as clulas. As bactrias podem utilizar o carbono inorgnico existente no ambiente, na forma de carbonatos ou de CO2 como nica fonte de carbono. So neste caso chamadas de autotrficas. Os microrganismos que obrigatoriamente requerem uma fonte orgnica de carbono so denominados heterotrficos e as principais fontes, so os carboidratos.

Oxignio: requerido na forma molecular como aceptor final na cadeia de transporte de eltrons aerbia. Tambm elemento importante em vrias molculas orgnicas e inorgnicas. Hidrognio: como componente muito freqente da matria orgnica e inorgnica, tambm constitui um elemento comum de todo material celular. Nitrognio: componente de protenas e cidos nuclicos, alm de vitaminas e outros compostos celulares. Est disponvel na natureza sob a forma de gs (N2) ou na forma combinada. Sua utilizao como N2 restrita a um grupo de bactrias cujo principal habitat o solo. Na forma combinada, o nitrognio encontrado como matria inorgnica (NH3 , NO3-, etc.) ou matria orgnica: aminocidos, purinas e pirimidinas. Enxofre: faz parte de aminocidos (cistena e metionina), de vitaminas e grupos prostticos de vrias protenas importantes em reaes de xido-reduo. Da mesma forma que o nitrognio, o enxofre pode ser encontrado no ambiente nas formas elementar, oxidada e reduzida; estas duas ltimas aparecem como compostos orgnicos e inorgnicos. Todas as alternativas citadas podem ser utilizadas pelas bactrias, porm so os sulfatos (SO4-2) inorgnicos ou os aminocidos as formas preferencialmente assimiladas. Na forma oxidada, tambm pode ser aceptor final de eltrons das cadeias de transporte de eltrons anaerbias. Fsforo: encontrado na clula na forma combinada a molculas importantes como os nucleotdeos (ATP, CTP, GTP, UTP, TTP) e como fosfato inorgnico; nesta ltima forma incorporado atravs de poucas reaes metablicas, embora uma delas seja de fundamental importncia: a sntese de ATP a partir de ADP e fosfato. As substncias fosforiladas podem estar envolvidas com o armazenamento de energia ( como o ATP) ou atuar como reguladoras de processos metablicos: muitas enzimas tornam-se ativas ao serem fosforiladas. Micronutrientes Os elementos ferro, magnsio, mangans, clcio, zinco, potssio, sdio, cobre, cloro, cobalto, molibdnio, selnio e outros so encontrados sempre na forma inorgnica,

fazendo parte de minerais. So necessrios ao desenvolvimento microbiano, mas em quantidades variveis, dependendo do elemento e do microrganismo considerados. Os micronutrientes podem atuar de diferentes maneiras, incluindo as seguintes funes principais: componentes de protenas, como o ferro que participa da composio de vrias protenas enzimticas ou no, de citocromos, etc.; cofatores de enzimas, como o magnsio, potssio, molibdnio, etc. Componentes de estruturas, como o clcio, presente em um dos envoltrios dos esporos; Osmorreguladores.

Condies de Cultivo Para se cultivar microrganismos deve-se obedecer a requisitos bsicos obrigatrios, quais sejam incub-los em meios de cultura adequados e incub-los em condies ambientais igualmente adequadas. Um inculo uma amostra de material contendo geralmente uma pequena quantidade de microrganismos; obedecidas as condies citadas, os microrganismos contidos no inculo multiplicam-se, aumentando em nmero e massa e, com isto, atingindo o objetivo desejado. Meios de Cultura Meio de cultura uma mistura de nutrientes necessrios ao crescimento microbiano. Basicamente deve conter a fonte de energia e de todos os elementos imprescindveis vida das clulas. A formulao de um meio de cultura deve levar em conta o tipo nutritivo no qual o microrganismo pertence, considerando-se a fonte de energia (luz ou substncia qumica), o substrato doador de eltrons (orgnico ou inorgnico) e a fonte de carbono (orgnica ou inorgnica). Estabelecidas as condies gerais, o meio de cultura deve ainda atender as necessidades especficas do grupo, da famlia, do gnero ou da espcie que se deseja cultivar. Assim, imprescindvel acrescentar ao meio vitaminas, cofatores, aminocidos, etc., quando estes compostos no so sintetizados pelos microrganismos que se deseja cultivar.

Fatores de crescimento Entre as bactrias heterotrficas h uma imensa variedade de exigncias nutritivas. Algumas so capazes de crescer em meio muito simples, constitudo de uma soluo de glicose, sal de amnio e alguns sais minerais. A partir desses compostos, sintetizam todos os componentes do protoplasma: protenas, polissacardeos, cidos nuclicos, coenzimas, etc. Outras, todavia, so incapazes de sintetizar determinados compostos orgnicos essenciais para o seu metabolismo. Para que estes microrganismos possam crescer, tais compostos devem ser obtidos do meio natural ou artificial em que vivem. Essas substncias so denominadas fatores de crescimento. Muitos desses fatores so componentes de coenzimas, que, para o homem, so vitaminas. Na realidade, certas vitaminas, como o cido flico, foram descobertas por serem necessrias ao crescimento de determinadas bactrias. As composies dos meios de cultura, portanto, podem ser muito variadas. Um meio pode ter uma composio simples, contendo um nico carboidrato como fonte de energia e carbono e alguns sais minerais; em outro extremo esto os meios requeridos por microrganismos mais exigentes, apresentando composio complexa, contendo vrias fontes de carbono e energia, vitaminas e aminocidos, podendo ainda ser acrescidos de sangue ou soro de animais. Alm da composio qualitativa, o meio de cultura deve obedecer aos limites de quantidade de cada componente suportveis pelos microrganismos. Muitas vezes o meio de cultura deve conter substncias para neutralizar a ao de produtos txicos lanados pelos prprios microrganismos, que sofrem os efeitos de seu acmulo. Um exemplo rotineiro adio de tampes para impedir a queda de pH provocada pelos cidos orgnicos produzidos por fermentao bacteriana. Os meios podem ser lquidos, quando so uma soluo aquosa de nutrientes, ou slidos, quando a soluo aquosa gelificada por um polissacardeo extrado de algas, o gar. O meio slido obrigatoriamente usado quando se pretende separar clulas. Cada clula individualizada ou agrupamento isolado d origem, por multiplicao, a um aglomerado que constitui uma colnia. Colnias de diferentes espcies geralmente apresentam caractersticas morfolgicas diferentes. Os meios de cultura podem ser seletivos, quando contm uma substncia que inibe o crescimento de um determinado grupo de microrganismos, mas permite o desenvolvimento de outros.

Influncia de fatores ambientais A tomada de nutrientes e posterior metabolismo so influenciados por fatores fsicos e qumicos do meio ambiente. Os principais fatores so: temperatura, pH, presena de oxignio, presso osmtica e luz. Temperatura Cada tipo de bactria apresenta uma temperatura tima de crescimento, em torno desta temperatura observa-se um intervalo dentro do qual o desenvolvimento tambm ocorre, sem, no entanto, atingir o seu mximo. Ultrapassado o limite superior, rapidamente ocorre desnaturao do material celular e, conseqentemente, a morte da clula. As temperaturas inferiores tima levam a uma desacelerao das reaes metablicas, com diminuio da velocidade de multiplicao celular, que em caso extremo, fica impedida. As variaes quanto ao requerimento trmico permite classificar as bactrias segundo a temperatura tima para o seu crescimento, em: psicrfilas: entre 12 e 17 C mesfilas: entre 28 e 37C termfilas: 57 e 87C

Embora grupos excntricos, que necessitam de altas temperaturas para o seu crescimento, a maioria concentra-se no grupo de mesfilas, principalmente as de interesse mdico, veterinrio e agronmico. pH Os valores de pH em torno da neutralidade so os mais adequados para absoro de alimentos para a grande maioria das bactrias. Existem, no entanto, grupos adaptados a viver em ambientes cidos e alcalinos. Oxignio O oxignio pode ser indispensvel, letal ou incuo para as bactrias, o que permite classific-las em:

aerbias estritas: exigem a presena de oxignio, como as do gnero Acinetobacter. microaerfilas: necessitam de baixos teores de oxignio, como o Campylobacter jejuni. facultativas: apresentam mecanismos que as capacitam a utilizar o oxignio quando disponvel, mas desenvolver-se tambm em sua ausncia. Escherichia coli e vria bactrias entricas tem esta caracterstica.

anaerbias estritas: no toleram o oxignio. Ex.: Clostridium tetani, bactria produtora de potente toxina que s se desenvolve em tecidos necrosados carentes de oxignio.

Exoenzimas A seletividade da membrana citoplasmtica impede que macromolculas como protenas, amido, celulose e lipdeos sejam transportadas para o interior da clula. Para essas molculas serem utilizadas pelos microrganismos, necessrio cindidas, dando origem a compostos menores, aos quais as membranas so permeveis. A quebra das molculas promovida por enzimas hidrolticas, denominadas exoenzimas por atuarem fora da membrana citoplasmtica. As exoenzimas apresentam especificidade pelo substrato, atuando sobre protenas ou amidos, ou determinados lipdeos, e constituem um fator de virulncia, uma vez que podem hidrolisar componentes estruturais de tecidos, conferindo ao microrganismo capacidade invasora e de permanncia em outros organismos vivos. Alm de estarem associadas nutrio dos microrganismos, as exoenzimas podem contribuir para a sua sobrevivncia, uma vez que catalisam a hidrlise de substncias que lhes so txicas ou mesmo letais. Reproduo bacteriana Crescimento: aumento do protoplasma celular pela sntese de cidos nuclicos, protenas, polissacardeos e lipdeos; e, absoro de gua e eletrlitos. Termina na diviso celular. Multiplicao: resposta necessria presso de crescimento.

Modo de reproduo Cissiparidade: formao de um septo equatorial na regio do mesossomo e diviso da clula-me, em duas clulas filhas. Cocos em qualquer direo, bacilos e espirilos, no sentido transversal. Curva de crescimento bacteriano Embora as bactrias desenvolvam-se bem em meios de cultura slidos , os estudos de crescimento so feitos essencialmente em meios lquidos e as consideraes que seguem so vlidas para essas condies. Quando uma determinada bactria semeada num meio lquido de composio apropriada e incubada em temperatura adequada, o seu crescimento segue uma curva definida e caracterstica.

7 6
Log. do n de bactrias

C D B A

5 4 3 2 1 2 4 6 8 10 12 14 16

Tempo (horas) curva de crescimento bacteriano

Fase lag (A): esta fase de crescimento ocorre quando as clulas so transferidas de um meio para outro ou de um ambiente para outro. Esta a fase de ajuste e representa o perodo necessrio para adaptao das clulas ao novo ambiente. As clulas nesta fase aumentam no volume total em quase duas ou quatro vezes, mas no se dividem. Tais

clulas esto sintetizando DNA, novas protenas e enzimas, que so um pr-requisito para diviso. Fase exponencial ou log (B): nesta fase, as clulas esto se dividindo a uma taxa geomtrica constante at atingir um mximo de crescimento. Os componentes celulares como RNA, protenas, peso seco e polmeros da parede celular esto tambm aumentando a uma taxa constante. Como as clulas na fase exponencial esto se dividindo a uma taxa mxima, elas so muito menores em dimetro que as clulas na fase Lag. A fase de crescimento exponencial normalmente chega ao final devido depleo de nutrientes essenciais, diminuio de oxignio em cultura aerbia ou acmulo de produtos txicos. Fase estacionria (C): durante esta fase, h rpido decrscimo na taxa de diviso celular. Eventualmente, o nmero total de clulas em diviso ser igual ao nmero de clulas mortas, resultando na verdadeira populao celular estacionria. A energia necessria para manter as clulas na fase estacionria denominada energia de manuteno e obtida a partir da degradao de produtos de armazenamento celular, ou seja, glicognio, amido e lipdeos. Fase de morte ou declnio (D): quando as condies se tornam fortemente imprprias para o crescimento, as clulas se reproduzem mais lentamente e as clulas mortas aumentam em nmeros elevados. Nesta fase o meio se encontra deficiente em nutrientes e rico em toxinas produzidas pelos prprios microrganismos. Metabolismo Bacteriano Uma vez garantidos pelo ambiente os nutrientes e as condies adequadas para assimil-los, as bactrias vo absorv-los e transform-los para que cumpram suas funes bsicas, quais sejam, o suprimento de energia e de matria prima. Como matria-prima, os nutrientes vo ser transformados em estruturas celulares ou em molculas acessrias sua sntese e funcionamento.

Obteno de energia As substncias com alto valor energtico so sempre aquelas com elevado grau de reduo, e grande parte das bactrias (exceo s fotossintetizantes) vai obter toda energia de que necessita por oxidao desses substratos. As substncias preferencialmente oxidadas por microrganismos so os acares, seguidos de protenas, peptdios e, mais raramente, as gorduras. As bactrias utilizam energia para o transporte de nutrientes, o movimento dos flagelos, mas sobretudo para as biossnteses. WIELAND (1912), reconheceu que a maioria das reaes biolgicas, ocorre na ausncia de oxignio, por desidrogenao. Em biologia, pode-se dizer que a perda de um eltron equivale a perda de um hidrognio. Pode-se, ento, definir oxidao como o ganho de um hidrognio e reduo como a perda de um hidrognio. Fermentao Metabolismo no qual os compostos orgnicos servem como doadores e receptores de eltrons (hidrognio). A fermentao conduz, geralmente, ciso parcial de molculas de glicose (gliclise). Conceito antigo (clssico): decomposio microbiana de carboidratos na ausncia de oxignio. Dentre os vrios tipos de fermentao, pode-se citar: Fermentao homoltica: produo de cido ltico como produto final. Fermentao alcolica: produo de lcool como produto final. Fermentao mista: produo de lcool, cido e gs. Fermentao butileno-gliclica: produo do butileno glicol (no cido) como produto final. Putrefao Decomposio de compostos nitrogenados (protenas), utilizando-se de substncia orgnica como aceptor-doador de eltrons. um tipo de fermentao que produz produtos finais de odor desagradvel: indol, escatol, cido sulfdrico.

Respirao Decomposio microbiana de substratos cujo receptor de hidrognio o oxignio. Na respirao ocorrem as seguintes etapas: a) Ciclo de Krebs; b) Cadeia transportadora de eltrons; c) Fosforilao oxidativa. Respirao anaerbica Quando o oxignio substitudo por outro receptor inorgnico de eltrons.

Referncias Bibliogrficas

BIER, O. Fisiologia bacteriana. In: Microbiologia e Imunologia. 23.ed. So Paulo, Melhoramentos, 1984. Cap.3, p.43-77. BURNETT, G. e cols. Fisiologia. In: Microbiologia oral e doenas infecciosas. 4.ed. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan S.A., 1978. Cap.7, p.74-86. FROBISHER, M. e cols. Cultyvo y crescimento de las bactrias. In: - Microbiologia. 5.ed. Bacelona, Salvat Editores S.A., 1978. Cap. 10, p. 126-149. NISENGARD, R.J. & NEWMAN, M.G. Microbiologia Oral e Imunologia. 2 ed. Guanabara-Koogan, 1997, 395p. TRABULSI, L.R. et al. Microbiologia. 3 ed. Atheneu, 1999, 586p.

Objetivos da aula: Ao concluir esse contedo o aluno dever: - conhecer as principais exigncias fsicas e orgnicas necessrias ao cultivo das bactrias. - descrever o crescimento bacteriano em todas as suas fases - entender as principais formas de obteno de energia pelas bactrias.

Responder as questes:
1. Cite as principais substncias de natureza fsica e orgnica necessrias ao cultivo bacteriano. 2. De acordo com a temperatura e as necessidades de oxignio como as bactrias podem ser classificadas? 3. Conceitue e defina a funo das exoenzimas. 4. Descreva a curva de crescimento bacteriano. 5. Quais as principais formas de obteno de energia utilizadas pelas bactrias.

GENTICA BACTERIANA Elementos celulares implicados na Gentica Bacteriana: polissomos

plasmdeo F-pilus

ribossomo mesossomo cromossomo bacteriano Cromossomo bacteriano: nico, cerca de 4,2x103kb (Escherichia coli); apresenta poliaminas; no contm ntrons. Plasmdeo: DNA extra-cromossmico de fita dupla, circular, autoreplicvel, com 1/100 da extenso do genoma F-pili: apndice celular implicado na transferncia de plasmdeos (comum em G-) Ribossomos: cerca de 15.000/clula; 80% dispostos em polissomos; composto pelas sub-unidades 30S (rRNA 16S + 21 protenas) e 50S (rRNA 23S + 5S + 35 protenas) Sntese protica 30S
transcrio

DNA mRNA
traduo

50S

tRNA aa

Variaes fenotpicas

Resultam das adaptaes das bactrias ao ambiente, so reversveis; sem comprometimento gentico. Ex: Serratia marcescens (37C sem pigmentao Bacillus spharericus (2% peptona clulas vegetativas Gram positivos (cultura nova clulas azuis Variaes genotpicas 25C vermelhas) 0,1% peptona esporos) cultura velha clulas vermelhas)

Alteraes na seqncia de nucleotdios; irreversveis; MUTAO mutao puntiforme: envolve um nico par de bases
5 3 5 3 5 3

G T
(His)

G T
(His)

G T
(Gln)

mutao por insero

A G A

A G

C C

(Ser) G

(Asn)

(Gly)

(Ser)

(Gln)

(Try)

mutao por deleo

A G

C C

A G A

(Ser)

(Gln)

(Try)

(Ser)

(Asn)

(Gly)

transposies
328pb 523.098pb

A G A

C C A

G G

328pb

523.098pb

A G A

C C A

G G

REGULAO DA EXPRESSO EM BACTRIAS

OPERON lac Em Escherichia coli a lactose, que um dissacardio composto por galactose e glucose, pode ser empregada como fonte de energia, se for ativado o operon da lactose, denominado operon lac. Esse operon composto por trs genes moduladores: um gene repressor (lacL), um gene promotor (lacP) onde se acopla a mRNA polimerase, e um gene operador (lacO) que libera ou retem a mRNA polimerase. Esse operon composto por trs outros genes funcionais: um gene que codifica a enzima -galactosidase (lacZ) que hidrolisa a molcula de lactose em glucose e galactose, um gene para a enzima lactose-permease (lacY) que favorece a entrada da lactose para o interior da clula, e um gene lacA que codifica a tiogalactosdeo-transacetilase, enzima responsvel pela eliminao dos galactosdeos no hidrolisados.

Caso 1: presena de glucose (pouco cAMP); ausncia de lactose

mRNA pol

lacL

lacP lacO
mRNA

lacZ

lacY

lacA

repressor

Caso 2: presena de glucose (pouco cAMP); presena de lactose

cAMP mRNA pol

lacL

lacP lacO

lacZ

lacY
Baixos nveis de mRNA funcional

lacA

mRNA

lactose

repressor

Caso 3: ausncia de glucose (muito cAMP); presena de lactose

cAMP mRNA pol

lacL

lacP lacO
lactose
mRNA

lacZ

lacY

lacA

repressor

-galactosidase

permease

transacetilase

OPERON sat O Streptococcus mutans a bactria de maior importncia na evoluo do processo carioso. Essa bactria capaz de desmineralizar o esmalte dental atravs da gerao de um ambiente cido localizado, pela rpida gliclise dos acares da dieta em cido lctico. Em adio a essa acidogenicidade, o S. mutans est apto a tolerar a exposio contnua ao choque cido que pode abaixar o pH local, de 7,0 a 4,0 em cerca de 20 minutos aps a ingesto de carboidratos. Essa aciduricidade apresentada pelo S. mutans um fenmeno multifatorial. Um mecanismo muito interessante envolve a disposio de bombas dependentes de ATPase (na membrana citoplasmtica) que eliminam os

prtons H+ do citoplasma, mantendo o pH intracelular prximo de 7,5. A rpida sntese e translocao dessas bombas, que tm natureza protica, durante eventos de queda brusca e continuada de pH, garante a homeostase e adaptao da clula ao ambiente cido que a envolve. A pronta translocao dessas protenas determinada por duas protenas denominadas Ffh e YlxM que esto dispostas num operon chamado de sat (secretion and acid tolerance). A Ffh (fifty-four homologue) apresenta uma massa molecular de 54kDa e homloga das partculas de reconhecimento de sinal (SRP) dependentes de GTP, dos eucariotos, e que tambm esto envolvidas em processos de translocao de protenas na membrana citoplasmtica de E. coli. A YlxM apresenta uma massa molecular de 13,2kDa e sua funo permanece incerta, porem com a forte suposio de que seja uma protena envolvida na secreo de outras macromolculas. Experimentos com mutantes afuncionais (knock-out) para o operon sat mostraram que quando essas clulas so submetidas um choque cido (pH5,0) a transcrio desse operon permanece constante, com os mesmos nveis de satmRNA transcritos a pH7,5. Por outro lado, tipos selvagens de S. mutans elevam em at oito vezes a taxa de transcrio desse operon quando em pH5,0.

Caso 1: cepa selvagem de S. mutans em pH7,5

mRNA pol

satL

satP satO

ylxm

ffh

mRNA

repressor

Caso 2: cepa selvagem de S. mutans em pH5,0

Estmulo cido satL

mRNA pol

satP satO

ylxm

ffh

mRNA

repressor

YlxM

Ffh

Caso 3: cepa mutante (sat :: Tn917) de S. mutans em pH7,5

mRNA pol

satL

satP satO

ylxm

ffh

mRNA

repressor

Caso 4: cepa mutante (sat :: Tn917) de S. mutans em pH5,0

Estmulo cido satL

mRNA pol

satP satO

ylxm

ffh

mRNA

repressor

OBJETIVOS Mostrar ao aluno de Odontologia as principais estruturas celulares que apresentam relevncia na Gentica Bacteriana, princpios de mutao e os mecanismos de controle da expresso gnica em procariotos. PERGUNTAS 1. Quais fatores favorecem o ganho de tempo por parte das bactrias? 2. O que so mutaes? 3. Quais as vantagens que o operon oferece para as bactrias? 4. Qual a importncia do operon sat para o Streptococcus mutans? 5. Na sntese protica, qual a funo dos tRNAs?

TRANSFERNCIA DE GENES EM BACTRIAS

SEXO BACTERIANO Bactrias podem trocar ou transferir DNA entre elas por trs diferentes vias. Em todos os casos, as clulas que fornecem o DNA so chamadas de DOADORAS e as que recebem so denominadas RECEPTORAS. O DNA do doador incorporado ao DNA do receptor por recombinao. Se a recombinao envolver um alelo diferente daquele presente no gene do receptor, o genoma e o fentipo do segundo sero alterados. As trs formas de transferncia de DNA entre bactrias so: (1) TRANSFORMAO, (2) CONJUGAO e (3) TRANSDUO.

TRANSFORMAO O fenmeno da transformao envolve um processo no qual o DNA (de uma clula doadora) livre no meio tomado por uma segunda (receptora), resultando em alteraes genotpicas nessa. Para a clula conseguir captar o DNA necessrio que a mesma encontre-se em estado de competncia clcio-dependente. O DNA adere-se face externa da membrana celular bacteriana, quando ento, DNA binding proteins e endonucleases clivam esse DNA em fragmentos de 6.000 8.000 bp. Algumas exonucleases clivam as pontes de hidrognio estabelecidas entre os pares de base e separam as duas metades da dupla fita, para que somente uma entre na clula. Uma vez no citoplasma, o DNA aliengena ligado s DNA binding proteins (que evitam a digesto pelas DNAses) encontra o cromossomo da clula receptora ou um plasmdeo e ocorre a recombinao em stios de homologia. Esse fenmeno pode ser observado em organismos gram-positivos e em gram-negativos.

Transformao em bactrias

Clula receptora competente

Fragmento de DNA da clula receptora

TRANSDUO O segundo meio de transferir DNA entre organismos envolve a mediao de vrus. Como voc sabe, vrus bacterianos so chamados de bacterifagos, ou simplesmente fagos, pela maioria dos microbiologistas. Dois cientistas, F. Twort e F. d'Herrelle, descobriram os bacterifagos independentemente, em 1915 e 1917. O termo fago significa que come. Os fagos podem ser detectados de duas maneiras:

1. Em gar, formam buracos na camada confluente de bactrias, conhecidos como placas que podem variar de 1 a 3mm em dimetro, dependendo do fago e das condies de cultivo. Em condies padronizadas, o dimetro das placas uma caracterstica definida por cada fago. 2. Em culturas lquidas, a adio de fagos geralmente causa um desaparecimento das formas viveis de bactrias em poucos minutos. Um observador mais atento poderia questionar quanto ao emprego desses fagos na teraputica de infeces bacterianas. Porem, tal procedimento ineficiente, uma vez que a resposta do sistema imune acaba por inativar o fago. Outro fator que inviabiliza tal utilizao a elevada especificidade que eles apresentam em relao as bactrias-alvo que iro atacar e destruir. Tal especificidade fez dos fagos ferramentas teis na identificao de espcies bacterianas que causam infeces, uma vez que a fonte da infeco foi determinada. A capacidade dos fagos de carrear DNA entre bactrias foi descoberta em 1952. Pesquisadores que estudavam a conjugao observaram que mesmo quando interpunham uma membrana que evitava o contato fsico entre elas, ocorria transferncia de genes e como essa transferncia no era evitada por DNAses, tal fenmeno no poderia ser transformao. Foi proposto ento que esse DNA estaria protegido contra a ao da enzima. Mais tarde, foi descoberto que bacterifagos infectando uma das linhagens podia transferir segmentos do cido nucleico para a outra linhagem. O capsdeo protico que envolve o DNA viral (e os segmentos do bacteriano) prevenia a digesto enzimtica. Esse processo de transferncia de DNA mediado por fagos foi ento denominado transduo. A transduo ocorre da seguinte maneira: 1. Um fago infecta uma bactria susceptvel injetando seu DNA. 2. O DNA fgico induz a clula hospedeira a converter todo seu metabolismo para a sntese de novos fagos. 3. Finalmente, ao trmino do ciclo ltico do fago, vrios componentes das partculas virais, no citoplasma, so montados e a clula lisada, liberando novos fagos infectivos. Durante o processo de montagem, alguns erros ocasionais ocorrem e grandes segmentos de DNA bacteriano acabam por se incorporar no genoma do novo fago, em detrimento de pores do DNA do prprio vrus. Esses novos fagos so denominados fagos defectivos.

Transduo em bactrias

abc ...

... xyz

Infeco fgica

incubao

abc ..

... xyz

Replicao viral

(999/1000)

lise

(1/1000)

abc

hij

xyz

Contudo, esses fagos defectivos ainda apresentam a capacidade de injetar seu DNA numa segunda bactria. Uma vez que esses fagos, quase que exclusivamente, apresentam DNA somente da primeira bactria, a infeco propriamente dita no ocorre. A recombinao pode ocorrer entre os segmentos de DNA da primeira clula e o DNA da nova clula, sendo que alguns alelos carreados pelo fago defectivo podem tornar-se incorporados no novo genoma, com alterao do seu gentipo. Pergunta: Se esse evento to raro, como podemos detectar a ocorrncia? Resposta: Isso pode vai depender do nmero de fagos e clulas empregados. Uma suspenso stock de fagos pode conter 1010 partculas fgicas por mililitro e uma cultura bacteriana 2 x 109 clulas por mililitro. Ento, se considerarmos que pode ocorrer 1 transduo a cada 1000 infeces, tem-se que 2 em at 108 infeces podem incorrer numa transduo.

CONJUGAO PLASMDEOS Antes de se discutir o mecanismo de troca de DNA por conjugao, necessria a compreenso do que so plasmdeos. Plasmdeos so melhor entendidos, se os considerarmos como sendo mini-cromossomos que so compostos de DNA disposto em molculas circulares que variam em extenso, mas cuja maioria contm entre 1.000 e 25.000 pares de base, contra os 4.000.000 bp do genoma cromossmico. Esses segmentos replicam-se de forma autnoma, e comumente, so encontradas vrias cpias em uma nica clula. Ainda, uma clula pode albergar diferentes plasmdeos ou conter nenhum. Plasmdeos geralmente carregam genes que no so essenciais para a sobrevivncia da clula, exceto em circunstncias especiais. Por exemplo, muitos plasmdeos carream genes para resistncia antibitico, e quando esses plasmdeos esto presentes em uma clula, essa se torna no afetada por determinados antibiticos, mas se o plasmdeo e seu(s) gene(s) de resistncia so perdidos (cura plasmidial), a clula hospedeira torna-se sensvel a um(s) dado(s) antibitico(s). Alguns plasmdeos carregam genes de resistncia vrios antibiticos, fazendo deles patgenos muito perigosos. Em outro caso, plasmdeos denominados plasmdeos de virulncia, carregam genes de virulncia que aumentam a possibilidade da clula bacteriana em

causar doenas. Isso , uma bactria portando um plasmdeo com genes de virulncia capaz de causar uma determinada doena, mas quando esse plasmdeo perdido, a mesma bactria tornase incapaz de promover aquela patologia. Um bom exemplo de doena provocada por genes de virulncia presentes em plasmdeos a Sndrome Urmico-Hemoltica provocada pela cepa O157:H7 de Escherichia coli que desenvolve-se em alimentos crneos e que quando ingerida induz a um quadro de falncia de mltiplos rgos. Outros plasmdeos carregam genes que protegem a clula bacteriana portadora contra a ao de substncias deletrias como mercrio e cobre, ou ainda, carregam genes que tornam possvel a metabolizao de substratos no usuais como gasolina. Uma questo naturalmente nos advm. Qual o papel desses plasmdeos no esquema evolucionrio? A explicao corrente de que plasmdeos constituem um conjunto adicional de alelos que aumentam efetivamente a diversidade gnica de uma populao bacteriana. Cabe lembrar que o genoma de procariotos carrega somente informao para 1.000 5.000 genes e que uma maior variedade aumentam as chances de sobrevivncia de uma bactria num meio adverso.

operon de transferncia
Tra a Tra b Tra c Tra d transferncia do DNA formao do F pillus

ori

strR

operon lac

ampR

Esquema de um plasmdeo F

operon de transferncia
Tra a Tra b Tra c Tra d transferncia do DNA formao do F pillus

ori

strR

operon lac Regio de integrao ao cromossomo ampR

Esquema de um plasmdeo Hfr

CONJUGAO A descoberta da conjugao, a habilidade das clulas bacterianas em transferir DNA por contato fsico, como forma de troca de material gentico, no incio da dcada de 1950, surpreendeu alguns cientistas devido sua similaridade antropomrfica de troca de genes. Desde sua descoberta, a troca conjugacional de DNA em bactrias tem sido documentada e mostrada como sendo a forma mais comum e promscua. Inicialmente, acreditava-se que a conjugao fosse ocorreria somente entre bactrias de mesma espcie ou entre espcies muito relacionadas, mas a observao mais apurada mostrou que a conjugao ocorre tambm entre espcies no relacionadas. As condies bsicas para a conjugao so: Clulas doadoras devem carrear ao menos um nico plasmdeo que contenha um grupo de genes que possibilite a conjugao. Esses plasmdeos so conhecidos como plasmdeos sexuais ou de fertilidade e clulas que os possuem so chamadas de clulas macho ou F+, ao passo que aquelas que perdem ou no possuem tal

plasmdeo passam a ser chamadas de clulas fmeas ou F-. Os genes contidos nesses plasmdeos so responsveis pela sntese de pili proteicos especiais longos, finos e tubulares, em cujas extremidades livres possuem receptores que ligam-se firmemente ligantes moleculares nas paredes de clulas F-. Aps a unio de duas clulas com reao sexual oposta atravs desses pili, essas tornam-se unidas por meio de uma ponte conjugativa que passa a permitir a continuidade do contedo citoplasmtico nessas duas clulas. Uma enzima especial cliva uma das fitas do DNA do doador F+ em um nico stio e uma recm-sintetizada fita de DNA passa atravs da ponte conjugativa para o interior da clula receptora F-. Essa fita convertida numa forma de fita dupla que esta apta a sofrer permuta com regies de homologia no DNA da clula F-, por recombinao. A forma mais comum de conjugao envolve a transferncia de plasmdeos, de uma clula para outra, e se o plasmdeo transferido for um plasmdeo de fertilidade, a clula F- torna-se uma F+ que imediatamente comea a combinar-se com outras clulas F-. Alguns plasmdeos F+ conseguem incorporar-se no DNA genmico da clula receptora transformando essa numa clula Hfr (high frequency recombination).

SUPERBACTRIAS A transferncia conjugativa de plasmdeos de resistncia a antibiticos entre bactrias um dos maiores problemas encontrados hoje, no que tange a teraputica de infeces. No caso de alguns patgenos, temos atualmente apenas um antibitico eficaz (Vancomicina) reservado ao uso contra eles e contra outros resistentes a quase todos antibiticos existentes. Isso , essas SUPERBACTRIAS contm plasmdeos carreando genes de resistncia contra todos antibiticos disponveis. Alguns dos maiores focos the transferncia desses plasmdeos so os hospitais. Esse um excepcional exemplo de evolution-in-action. Uma vez que pessoas infectadas com patgenos so concentradas em hospitais, e que todas as formas de antibiticos so extensivamente usadas para tratas essas infeces, as chances de que um plasmdeo contendo genes para a resistncia a antibiticos seja selecionado e transferido para outras bactrias so relativamente altas. Mais, a possibilidade de uma bactria receber um desses plasmdeos e j ter outros plasmdeos com genes de resistncia contra outros antibiticos estatisticamente alta.

Outras atividades, como alimentar o gado com antibiticos para aumentar a produo de carne ou para aumentar seu tempo de preservao no comrcio contribuem para a seleo e subsequente disperso desses plasmdeos de resistncia.

Conjugao em bactrias

clula receptora (f -) 5

clula doadora (f +)

conjugao envolvendo clula F+

clula receptora (f -) 5

clula doadora (Hfr) 3

conjugao envolvendo clula Hfr

OBJETIVO DA AULA: Apresentar ao aluno de Odontologia os conceitos bsicos de transferncia de genes entre bactrias e a importncia desse fenmeno, quando o mesmo envolve genes de importncia mdica. QUESTES: 1. Explique, detalhadamente, como as DNA binding proteins, endonucleases e exonucleases participam da transformao bacteriana. 2. O que voc entende por sexo bacteriano? 3. O que um fago defectivo e como o mesmo pode transferir genes bacterianos? 4. Como os tbulos de pilina transferem segmentos de DNA? 5 Explique o que uma clula Hfr, uma clula F+ e uma clula F-, do ponto de vista da recombinao

QUESTO EXTRA: Explique o que voc entende por recombinao recproca e recombinao no-recproca

Aula 06 -VRUS INTRODUO A palavra vrus origina do latim e significa veneno ou fluido venenoso. Os vrus como partculas extracelulares, no tm atividades metablicas independentes e so incapazes de reproduo por cissiparidade, gemulao ou outros processos observados entre as bactrias e outros microrganismos, sendo portanto parasitas intracelulares. HISTRICO A virologia teve seu incio no final do sculo XIX, com o reconhecimento da existncia de agentes infecciosos capazes de passar atravs de filtros que retinham bactrias, sendo portanto menores do que estas. A primeira descrio do vrus devemos a Dmitrii Iwanowski que em 1892, referiu que o agente da doena do mosaico do tabaco, poderia passar livremente atravs dos filtros, pois utilizando-se de filtrados de plantas sofrendo da dessa doena, foram capazes de produzir a doena em uma nova planta hospedeira.

Figura 1: Filtrao de extrato de plantas contaminadas com a doena do mosaico do

tabaco utilizando filtros bacteriolgicos (vermelho), os vrus passam junto com o

filtrado para o frasco.

Iwanowski e colaboradores concluram que tinham descoberto uma nova forma de vida patognica, que eles chamaram de seres inanimados, mas funcionais. Hoje com a evoluo dos conhecimentos tericos e cientficos verificou-se que nem todos os agentes filtrveis podiam ser classificados como vrus, pois sabe-se que as menores bactrias como Chlamydia e Mycoplasma so to pequenas quanto os maiores vrus e portanto podem passar por filtros que retm 99% de outras espcies de bactrias. A virologia expandiu-se consideravelmente nos primeiros 30 anos deste sculo, com a caracterizao de um nmero crescente de doenas humanas, animais e vegetais causadas por vrus. Neste perodo, foram tambm descritos vrus capazes de infectar bactrias, os chamados bacterifagos. Os bacterifagos (comedores de bactrias), foram observados Independentemente nos anos de 1915 (TWORT), na Inglaterra e 1917 (d`HERELLE), no instituto Pasteur de Paris. Os vrus, no entanto, no foram visualisados at o desenvolvimentodo microscpio eletrnico, na dcada de 30

verificando-se que os bacterifagos so considerados os vrus de estrutura mais complexa. Novos vrus esto sendo descobertos o tempo todo. O marco fundamental na histria da virologia corresponde ao momento em que foi descoberto por Stanley (1940) que o vrus do mosaico do tabaco podia ser cristalizado (assim como os sais inorgnicos e protenas moleculares) e que os cristais inanimados, podiam produzir doena em plantas sadias. A controvrsia, de serem os vrus organismos vivos ou no, foi ento novamente reanimada. Essa descoberta teve um grande impacto no campo das cincias biolgicas em geral, da cincia mdica, e dentro do prprio campo da bioqumica, onde os conhecimentos que se acumulam, sobre a estrutura viral, deram origem a uma nova rea do conhecimento, a biologia molecular. Existem diferenas fundamentais entre os vrus e as clulas vivas, que foram enumeradas por Stainer e colaboradores (1969) que so: a) apresentam propriedades muito diferentes da unidade estrutural de um ser vivo, a clula; b) Enquanto o genoma celular constitudo por DNA e RNA, no genoma viral s se encontra um dos dois cidos nuclicos; c) apresentam como constituintes orgnicos apenas cido nuclico e protena; d) podem conter uma ou algumas enzimas, porm seu complemento enzimtico insuficiente para reproduzir outro vrus, ou seja, o vrus no possui portanto, ao contrrio da clula, sistema enzimtico prprio; e) sempre replicado exclusivamente a partir de seu material gentico por uma clula; f) o vrus finaliza seu processo de multiplicao por organizao de seus constituintes sintetizado pela clula. Estas diferenas, e o fato de os vrus poderem ser cristalizados, sem perder o poder infeccioso, permite-nos, numa anlise simplista, considerar os vrus como microrganismos de grande simplicidade ou molculas de grande complexidade.

Alm de seu tamanho reduzido de 20 nm (10-9 metro) a 250 nm, os vrus replicam seu material gentico, que como todas as formas de vida, composto por polmeros de cidos nuclicos. Os vrus tm caractersticas em comum: so entidades parasitas intracelulares obrigatrios, so incapazes de crescer e reproduzir-se fora de uma clula viva, apresentam uma organizao e composio estruturais caractersticas, alm de um processo nico de replicao. Para uma anlise mais cuidadosa da estrutura e natureza dos vrus, necessrio um estudo mais detalhado em relao a caracterizao dos vrus, e morfologia viral. 1. MORFOLOGIA VIRAL Com a descoberta da microscopia eletrnica, tornou-se possvel estudar a morfologia dos vrus. As fotografias das imagens virais em microscopia eletrnica, revelaram suas formas, dimenses e estruturas internas, demonstrando que cada vrus possui caractersticas prprias. Cada partcula viral ou virion constituda por cerne ou ncleo de cido nuclico (DNA ou RNA, mas nunca ambos) recoberto por um invlucro protico denominado cpside ou capsdio; o conjunto cido nuclico/invlucro protico constitui a nucleocpside ou nucleocapsdio. A cpside formada por mltiplas subunidades denominadas capsmeros. Existem ainda nucleoprotenas que envolvem o DNA ou RNA viral, como uma capa. proteo contra ataques das enzimas da clula infectada. Alm delas alguns vrus carregam protenas que ajudam na replicao. Alguns vrus possuem a nucleocpside envolvida por um envoltrio, envelope ou invlucro de glicoprotenas e/ou lipdios. Os vrus sem esse

envelope so denominados vrus nus, e aqueles que possuem esse envelope so denominados encapsulados ou envelopados. As espculas so constitudas de protena, e so essas estruturas presentes nos vrus com envoltrio que se ligam aos receptores expressos na superficie da clula, a forma dessas espculas e dos receptores o que define que partes do corpo o vrus vai infectar. Estes vrus podem ser organizados segundo estruturas icosadricos, helicoidais e de estrutura complexa: Tipos morfolgicos: 1) Vrus Icosadricos: Os capsmeros organizam-se em icosadricos (20 faces triangulares equilteras, 12 vrtices, e 30 arestas), os capsmeros dos vrtices de cada face so chamados pentons e os capsmeros das faces de hexons . Ex. poliemielite, adenovrus, herpesvrus. 2) Vrus Helicoidais ou Tubulares: Os capsmeros organizam-se segundo simetria do tipo helicoidal (vrus do mosaico do tabaco, da batata, vrus da influenza e caxumba), dispondo-se o cido nuclico na parte interna das unidades proticas, associado as mesmas. 3) Vrus Complexos: Possuem envelope e so geralmente pleomrficos, pois o envelope no rgido. Exs. Esfricos (arbovrus; arboencefalites), paraleleppedos (poxvrus; varola), da raiva e os bacterifagos.
QUESTES 1 - Sendo a doena do mosaico do tabaco muito estudada nos ltimos anos, qual as principais descobertas atravs desses estudos. 2 - Voc definiria os vrus como seres vivos ou no? Empregando-se o que voc sabe at agora sobre vrus tente argumentar sua resposta. 3 Quais as caractersticas comuns dos vrus? 4 Cite as morfologias dos vrus. 5 Descreva de uma forma geral, os componentes virais.

Aula 07 VRUS 1 CORPSCULOS DE INCLUSO Antes que fosse possvel estudar a morfologia dos vrus no microscpio tinham por no vrus. eletrnico, os pesquisadores s infeces observado Esses, ou so estruturas partculas de clulas de

intracelulares (corpsculos de incluso) associados arredondadas corpsculos citoplasma ncleo ou

infectadas por vrus. Sabe-se atualmente, que estes representam agregados colnias vrus, contendo subunidades virais imaturas e vrus inteiros. Podem ser: Citoplasmticos: varola (Corpsculo de GUARNIERE), raiva (Corpsculo de NEGRI). Nucleares: varicela, herpes, etc. Podem ser encontradas incluses citoplasmticas e nucleares, na mesma clula, em casos de infeces mltiplas. VIRIDES, VIRUSIDES E PRIONS Mais recentemente foram descobertos outros trs elementos responsveis por doenas em plantas, animais e seres humanos, de constituio ainda mais simples: os virides, compostos apenas por RNA; os virusides, constitudos por uma molcula de RNA envolta por uma estrutura protica; e os prions, que so de natureza protica. Estes elementos tm sido estudados dentro da virologia devido no s a semelhanas de composio e estrutura (virides e virusides), mas tambm

por serem agentes de doenas que, at ento, haviam sido consideradas decorrentes de ao viral (viride, virusides e prions). VIRIDES Foram tentativas de identificao de uma doena da batata, supostamente de natureza viral, que levaram descoberta de que o elemento responsvel por aquela patologia vegetal no era mais do que RNA livre de dimenses muito inferiores s dos menores genomas virais (P.M. +/- 1,3 x105) e que por si s, sem participao de um vrus auxiliar, era capaz de duplicar-se em clulas suscetveis. Os virides so partculas de RNA, destitudas de protenas que, at o presente momento, s foram encontradas em plantas. No entanto considerando-se os princpios unificadores da biologia, muito provvel que venham a ser descobertos tambm no reino animal. Quanto a origem dos virides, h diversas teorias. possvel que os virides tenham surgido (uma das teorias) do material gentico do hospedeiro por circulao de determinadas seqncias do genoma celular, conhecidas por ntrons, que teriam escapado degradao enzimtica e adquirido uma individualidade estvel. So molculas circulares, de fita simples, compostas de 240-370 nucleotdeos e intimamente associadas aos nuclolos das clulas infectadas, formando complexos com determinadas protenas destas estruturas nucleares (histonas). Desconhece-se o mecanismo pelo qual os virides ocasionam, nas plantas infectadas, as alteraes macroscpicas tpicas observadas em certas espcies. A principal caracterstica que distingue os virusides dos vrus a presena de RNA de fita simples como nico componente. A transmisso dos virides semelhante do vrus: inoculao mecnica, propagao atravs de sementes e plen, quanto a transmisso por

insetos e nematides que so da maior importncia na disseminao dos vrus, no foram confirmados na transmisso de virides. VIRUSIDES Existe um segundo grupo de elementos constitudos de RNA de fita simples associado a doenas de plantas, que difere dos virides por duas caractersticas bsicas: sua multiplicao depende da presena de um vrus auxiliar e seu genoma est encapsidado em uma estrutura protica codificada por aquele. Todavia possuem tambm caractersticas comuns aos virides, como o RNA circular com 340-328 nucleotdeos. Estes elementos receberam a denominao de virusides. PRIONS Pequenas partculas infecciosas proticas, resistem a inativao por processos que alteram os cidos nuclicos. Estes parecem no estar presentes, todavia ainda no foi descartada a possibilidade de, no interior do prion, existir um oligonucleotdeo. De qualquer modo, mesmo que tal complexo exista, no h a condies para a codificao da protena, o que certamente um carter que distingue os prions dos vrus. O termo prion deriva das palavras protenico e infeccioso, por ter sido uma protena a primeira macromolcula a ser identificada no agente infeccioso de uma doena que acomete ovinos e caprinos, conhecida pelo nome scrapie. Os prions parecem constituir, assim, uma exceo ao princpio biolgico fundamental de que os cidos nuclicos seriam os elementos mnimos de caracterizao da identidade e vitalidade dos seres. Algumas hipteses foram formuladas para explicar o processo de multiplicao dos prions: uma delas considera que os prions so verdadeiros vrus de genoma RNA ou DNA; outra

considera que a protena dos prions codificada pelo genoma do hospedeiro; finalmente, uma terceira hiptese admite que possvel violar o dogma fundamental da biologia molecular, aceitando-se que a protena de prion (PrP) poderia servir de molde para sua prpria sntese, ou, por traduo reversa, poderia gerar um cido nuclico, usando a seqncia de seus aminocidos. Conhece-se atualmente algumas doenas cuja etiologia est relacionada com prions e que podem ser geneticamente designadas por encefalopatias espongiformes subagudas transmissveis, ou doenas ocasionadas por vrus lentosno-convencionais. Doenas que atingem animais:

Scrapie: ovinos e caprinos Encefalopatia espongiforme bovina (BSE-Bovine

Spongiform Encephalopathy): Doena da vaca louca Doenas que atingem o homem:

Doena de Creutzfeld-Jacob (CJD). Insnia Familiar Fatal (FFI-Fatal familial Insomnia). Kuru - doena que atinge o homem, causada provavelmente por um prion
transmitida por canibalismo ( em tribos Fore da Nova Guin). Todos esses quadros clnicos tm meses at dcadas, e evoluo clnica fatal. caractersticas comuns, como localizao no sistem nervoso, perodo de incubao prolongado, de vrios

CULTIVO DOS VRUS: 1) Inoculao em animal sensvel. Ex. raiva, co. 2) Cultivo em ovos embrionados (galinha ou pata) na cavidade alantide, na cavidade amnitica e no saco vitelnico. Utilizado principalmente para produo de vacina, porque um mtodo barato e bem estabelecido. 3) Cultivo em clulas - tecidos. Culturas de clulas primrias ou de linhagem contnua (carcinoma uterino humano). RECONHECIMENTO MOLECULAR Molculas biolgicas, interagem pelo reconhecimento e ligao com outra clula de uma maneira especfica. Receptores/Stios de ligao (esto presentes na clula) e Ligantes (presentes no vrus). Os vrus, infectam clulas hospedeiras especficas, reproduzem-se e infectam outras clulas (Ex. o bacterifago lamba ataca apenas clulas que contm aucar maltose). O ciclo geral de todos os vrus exemplificado pelo ciclo dos bacterifagos. A base principal da infeco viral de uma dada clula que se uma superfcie celular contiver receptor para que o vrus "ancore", este pode ligar-se. BACTERIFAGO: 1. Cabea: Onde est contido o cerne de cido nuclico (DNA na maioria dos bacterifagos, alguns possuem RNA) e um capsdio proteco.

2. Cauda: Tubular oco, com uma bainha de filamentos espiralados de protena contrtil e uma placa basal a qual se ligam prolongamento (fibras da cauda). 3. Fibras da cauda: Saem da placa basal e nestas fibras, existem regies proticas especficas de ligao (ancoragem) do bacterifago com a clulas hospedeira.

Figura 1: Bacterifago T4. Este um dos vrus mais complexos, sendo um

fago de E. coli e tem sido o tipo de bacterifago mais estudado. MECANISMO DE INFECO DO VRUS: Para fins didticos o mecanismo de infeco dos vrus dividido basicamente em 5 etapas: 1) Adsoro - ligao do vrus com a clula hospedeira. 2) Penetrao e Desnudamento - Injeo do cido nuclico dentro do citoplasma. 3) Perodo de Eclipse: No h qualquer evidncia de multiplicao.

4) Replicao e Biossntese Multiplicao e dos componentes virais. 4.1)Ciclo de vida dos fagos: 4.1.1 - Ciclo Ltico 4.1.2 - Ciclo Lisognico 5) Liberao - do vrus completo da clula hospedeira MECANISMO DE INFECO FGICA (Bacterifago): Adsoro (Ancoragem) e Penetrao. O fago liga-se aos stios dos receptores celulares do hospedeiro via protenas localizadas no final das fibras da cauda. Uma vez ligado clula, uma enzima viral da cauda perfura a parede celular, e a cauda penetra injetando o DNA dentro do citoplasma. No caso do fago o envoltrio protico fica do lado de fora, mas com clulas eucariticas o vrus todo pode penetrar no citoplasma.

Figura 2: Adsoro e injeo do material gentico dentro da bactria

Sntese de Componentes Virais. Uma vez dentro da clula hospedeira, o genoma viral aproveita o metabolismo do hospedeiro, convertendo-o inteiramente para seus prprios

fins. O cido nucleico viral transcrito e tranduzido e as vrias protenas virais, enzimas ou componentes estruturais, tambm so sintetizados para os novos vrus. Em muitos fagos o ciclo do vrus do incio da infeco a lise leva apenas 20 a 40 minutos.

Maturao e liberao do fago Os vrios componentes virais so REUNIDOS formando novos fagos. O processo ORDENADO de forma que cada componente seja adicionado na seqncia correta. Enzimas so produzidas causando lise da clula (ciclo ltico) e liberando novos vrus no ambiente.

Figura 3: Final da multiplicao dos vrus leva a lise celular no ciclo ltico

Ciclo Lisognico No ciclo lisognico no ocorre lise celular. O DNA do vrus se incorpora ao DNA do hospedeiro tornando-se um gene no cromossoma bacteriano como profago. Este transmitido a sucessivas geraes junto com o material gentico da bactria. As vezes, o DNA do profago removido do cromossomo que entra no ciclo ltico.

CICLO DE VIDA DOS VRUS EUCARITICOS Os ciclos de vida dos vrus envelopados, pode ser por fuso do envelope com a membrana citoplasmtica e conseqente infeco da clula. Outros vrus envelopados podem ser endocitados com formao de vescula dentro da clula e esta vescula por sua vez funde-se a carioteca liberando o material gentico do vrus para o ncleo da clula, para que ocorra a multiplicao viral. E a maioria daqueles vrus denominados no envelopados (vrus nus), penetra nas clulas tambm por endocitose com formao de vesculas.

Figura 4: Ligao do vrus e clula via ligantes e receptor, respectivamente com conseqente fuso do envelope com a membrana citoplasmtica

Figura 5: Maturao e liberao do vrus pela membrana citoplasmtica. Esta figura mostra um novo vrus envelopado adquirindo o envelope da hospedeira. Note a incluso de protenas no envelope. membrana da clula

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VRUS E TUMORES possvel demonstrar a ocorrncia de alteraes dos cidos nuclicos, tanto in vivo como in vitro, pela interao de compostos hidrocarbonados policclicos aromticos e vrus no-tumorais (influenza e enterovrus), no entanto estas observaes no nos permitem concluir o possvel papel destes vrus na carcinognese. Cncer o resultado da proliferao de uma clula ou clone de clulas que escapam, por causas mltiplas, ao controle normal. A verdadeira anomalia que ocorre no processo neoplsico no incide na forma de crescer ou de diviso celular da clula, mas na perda dos mecanismos de autoregulao da reproduo celular por modificao qualitativa do DNA celular. A perda dos mecanismos de auto regulao da reproduo celular pode ser desenvolvida, tanto pela ao do vrus DNA, quanto do vrus RNA. No caso do vrus DNA numa infeco celular pode resultar em interao ltica (crescimento vegetativo das partculas virais com lise celular) ou a uma interao latente (incorporao direta do DNA viral ao genoma celular com transformao maligna da clula), predominando um ou outro processo. De um modo geral, os vrus DNA, dificilmente so isolveis dos tumores que ocasionam. A ao dos vrus tumorais RNA podem levar a interao ltica, interao latente (com aparecimento de partculas virais), interao integrativa (crescimento do vrus, sem lise celular e sem evidenciao de partculas virais, mas com expresso dos antgenos da cpside).

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Para que o genoma viral seja integrado ao genoma celular, com transformao maligna, so necessrios dois processos preliminares, um deles desencadeado por uma DNA polimerase RNA-dependente (transcriptase reversa), que transcreve RNA em DNA complementar simples DNAc) e o outro, por uma DNA polimerase DNA-dependente que duplica o DNA complementar (provrus) possibilitando sua incorporao ao genoma celular. Os vrus RNA podem ser obtidos, com facilidade, da maioria dos tumores que ocasionam. No so conhecidos os processos que levam o provrus a operar a transformao maligna da clula. Sabe-se que alguns retrovrus possuem a capacidade de ocasionar em poucas semanas o aparecimento de tumores malignos em animais de laboratrio enquanto que outros retrovrus demoram meses a anos. Os retrovrus possuem trs genes essencais a sua multiplicao: o gene gag, grupo especfico, que codofica as protenas da nucleocpside, o gene pol, que codifica a transcriptase reversa e o gene env, que codifica as protenas do envoltrio viral. Existem retrovrus que alm desses genes possuem um gene com a capacidade de transformao maligna das clulas infectadas, este o oncogene, ou gene V-onc. Os oncogenes so genes com potencial tumorignico e foram inicialmente descritos nos retrovrus, embora no sejam de sua exclusiva propriedade. Conhecem-se 29 -V-onc, a maioria dos quais codifica protena-cinase, ou enzimas de fosforilao.

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gag

pol

env

V-onc

gag

pol

env

V-onc

ds RNA vrus Rous)

(sarcoma de

ga g

pol

e nv

V-onc

sntese de cDNA transcriptase reversa

pela

ga g ga g

pol pol

e nv e nv

V-onc V-onc

DNA fita dupla Integrao da cpia do genoma viral (provrus) ao genoma da clula
Segmentos integrados ao genoma celular

ga g ga g

pol pol

e nv e nv

V-onc V-onc

Figura 6: Mostrando os 3 genes principais de um vrus o oncogene

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QUESTES: 1- Como voc define prion? Diferencie este de vrus, viride e viruside de forma sucinta, dando exemplos de doenas que estes elementos acometem. 2 Enumere as teorias sobre a multiplicao dos prions. 3 - O que diferencia um vrus encapsulado de um no encapsulado. 4 - Descreva um tipo de bacterifago e cite em qual dos grupos anteriores, estes fagos esto englobados? 5- O que faz um vrus ter a capacidade de desenvolver cncer? 6- Descreva os vrus oncognicos. D exemplos de doenas malignas.

CARACTERSTICAS DOS FUNGOS Os fungos (do latim fungus = cogumelo) tem sido tradicionalmente considerados como "semelhantes a plantas". A maioria das espcies cresce por extenso continua e ramificao de estruturas filiformes. Em adio, eles so imveis em sue maioria e suas paredes celulares assemelham-se as de plantas, em espessura e, at certo ponto, em composio qumica e em estrutura ultramicroscopica. Os fungos crescem como clulas nicas, as leveduras, ou como colnias filamentosas multicelulares, os bolores e cogumelos. As formas multicelulares no possuem folhas, caules ou razes e so muito menos diferenciadas do que as plantas superiores, porm so muito mais diferenciadas do que as bactrias. Contudo, os fungos no possuem pigmentos fotossintticos e, assim, eles esto restritos a uma existncia saproftica ou parasita. Uma nica clula uninucleada pode produzir cordes multinucleares filamentosos, leveduras, rgos de frutificao com diversos esporos e clulas que so diferenciadas sexualmente (em muitas espcies). Ainda mais, algumas espcies formam notveis armadilhas para a captura de vrios microrganismos. Os fungos so abundantes no solo, nos vegetais e em massas de gua, onde vivem muito bem em folhas mortas ou em madeira. Seus esporos ubquos, transportados pelo ar, so freqentemente incmodos contaminadores de culturas de bactrias e de clulas de mamferos. De fato, foi um desses contaminadores numa cultura de estafilococos que eventualmente levou a descoberta da penicilina

ESTRUTURA E CRESCIMENTO Bolores. O principal elemento da forma vegetativa ou de crescimento de um bolor a hifa (do grego hyphe= teia), uma estrutura tubular ramificada com cerca de 2 a 10 de dimetro, isto , muito maior do que as bactrias. A medida que uma colnia, ou talo, cresce, suas hifas formam uma massa de filamentos enovelados, chamados miclio (do grego mykes= cogumelo). As hifas crescem pelo alongamento de suas pontas (crescimento apical) e pela produo de ramificaes laterais. As hifas que penetram no meio, onde absorvem nutrientes, so coletivamente conhecidas como o miclio vegetativo, enquanto que aquelas que se projetam acima da superfcie do meio constituem o miclio areo; como esse ltimo via de regra tem clulas reprodutivas ou esporos, tambm chamado miclio reprodutivo. A maioria das colnias cresce na superfcie de meios lquidos ou slidos como lenis irregulares, secos e filamentosos. Devido ao enovelamento das hifas filamentosas, as colnias so mais resistentes do que as de bactrias. No centro das colnias micelianas as hifas so freqentemente necrticas devido a falta de suprimento de nutrientes e de oxignio e talvez ao acmulo de cidos orgnicos.

Na maioria das espcies as hifas so divididas por paredes transversas, chamadas septos (do latim septum = cerca, diviso). Contudo, os septos possuem finos poros centrais; dai mesmo as hifas septadas serem cenocticas, isto , seus mltiplos ncleos estarem includos numa massa contnua de citoplasma. Levedura. As leveduras so fungos unicelulares ovais ou esfricos, geralmente de 3 a 4 de dimetro. As vezes as leveduras e sua prognie aderem entre si e formam cadeias ou "pseudohifas". Citologia. Leveduras e bolores assemelham-se a plantas superiores e a animais na complexidade anatmica de suas clulas. So eucariticos, com vrios cromossomos diferentes e uma membrana nuclear bem definida, possuindo mitocndrias e um retculo endoplasmtico. Ainda mais, suas membranas contm esteris, assemelhando-se, assim, a formas superiores e no a bactrias.

PAREDE CELULAR A parede celular de um fungo, como a de bactrias, fica do lado imediatamente externo da membrana limitante do citoplasma e, em algumas leveduras, est envolvida por um polissacardeo capsular externo. Contudo, ao contrrio das bactrias, cujas paredes celulares freqentemente contm unidades estruturais como se fossem tijolos, as paredes celulares dos fungos parecem ser entrelaadas. Polmeros de hexoses e hexosaminas constituem os elementos estruturais fundamentais da parede dos fungos. Em muitos bolores e leveduras, a principal macromolcula estrutural da parede a quitina, que constituda de resduos de N-acetil-glicosamina. Esses so ligados entre si por ligaes -1,4-glicosdicas, como os resduos de glicose em celulose, o principal material da parede celular de plantas superiores. A quitina tambm o principal material estrutural do esqueleto dos crustceos. Por isso essa substncia representa, em nvel molecular, um exemplo interessante de evoluo convergente, em que organismos pouco relacionados desenvolveram, presumivelmente por uma seqncia evolucionria independente, estruturas semelhantes ou idnticas para servir as necessidades semelhantes. Nas leveduras, a extrao da parede celular com lcalis, a quente, resulta numa glicana insolvel, formada de resduos de D-glicose ligados em -1-6 com ramificaes ligadas em -1,3 surgindo a intervalos freqentes (a glicana assemelha-se a celulose em sua insolubilidade e rigidez). Um polissacardeo solvel adicional a manana, um polmero de D-manose ligado em -1,6, com ramificaes -1,2 e -1,3.

Do mesmo modo que nas bactrias, os polissacardeos da parede celular dos fungos so sintetizados de vrios nucleotdeos de acares (UDP-N-acetil-glicosamina, GDP-manose, etc.). A quitina-sintetase est ligada a membrana celular. In vitro, ela necessita de um iniciador, que deve conter pelo menos seis ou sete resduos conectados, como acontece na quitina. Um antibitico nucleotdico a poloxina D, um inibidor seletivo da quitina-sintetase. Ele inibe a incorporao de acetil-glicosamina. As paredes de vrias leveduras contm complexos de polissacardeos com protenas ricas em resduos de cistina e a reduo reversvel de ligaes SS tem sido implicada na formao de brotos. Em algumas leveduras, lipdeos contendo fsforo e nitrognio tambm so abundantes na parede (at 10% do peso seco). As paredes celulares dos fungos podem ser digeridas por enzimas contidas nos sucos digestivos do caracol Helix pomatia. Esses sucos contm mais de 30 atividades enzimticas conhecidas, incluindo glucanase, quitanase e mananase. Foram tambm isoladas, de amostras de solo, bactrias que produzem enzimas lticas para essas paredes pela aplicao da tcnica de enriquecimento com paredes celulares purificadas, como fonte de carbono. Como nas bactrias, a digesto das paredes das leveduras e dos bolores em soluo hipertnica produz protoplastos viveis. Tambm se produzem protoplastos pelo crescimento em meios que inibem a sntese da parede celular. Os protoblastos de leveduras so deficientes em algumas das hidrolases das clulas intatas, como invertase e -fructosidase. Essas observaes sugerem que, assim como nas bactrias, as enzimas secretadas esto localizadas no espao periplasmtico.
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C-glicosamina na

parede celular de Neurospora crassa, o que resulta num aumento do acmulo de uridina-difosfato-N-

REPRODUO Alm de crescerem por extenso apical e por ramificao, os fungos reproduzem-se por meio de ciclos sexuais e assexuais e tambm por urn processo parassexual. A grande maioria dos fungos patognicos para o homem no possui sexualidade. REPRODUO ASSEXUADA O crescimento vegetativo de um miclio cenoctico envolve diviso nuclear sem diviso celular, sendo que o processo clssico de mitose assegura a transmisso de um complemento total de cromossomos para cada ncleo resultante. O passo seguinte da diviso celular leva a reproduo assexuada (vegetativa), isto , a formao de um novo clone sem envolvimento de gametas e sem fuso nuclear. So conhecidos trs mecanismos: 1 ) esporulao, seguida da germinao dos esporos; 2) brotamento e 3) fragmentao das hifas. Os esporos assexuados so as vezes chamados condios; mais freqentemente, contudo, esse termo e reservado para os esporos assexuados que se formam nos terminais ou nos lados das hifas. Outros esporos assexuados (clamidosporos e artrosporos) desenvolvem-se dentro das hifas. Os esporos germinam quando plantados num meio congenial, isto , eles se tornam alargados e, se destinados a formar um bolor, emitem um ou mais tubos gerrninativos. Os tubos alongam-se em hifas dando surgimento a uma nova colnia. Os clamidosporos, que podem ser formados por muitos fungos, apresentam parede espessa e so excepcionalmente resistentes ao calor e a dessecao; eles so provavelmente formados da mesma forma que os esporos bacterianos, por endosporulao verdadeira e, de modo semelhante, promovem a sobrevida em ambientes desfavorveis. Em contraposio, os artrosporos, que se formam pela fragmentao das hifas, e os condios, que se formam por um processo semelhante a gemulao, no so excepcionalmente resistentes; provvel que eles ajam para promover a disseminao area. Os esporos, que contm um ou vrios ncleos, variam bastante em cor, tamanho e forma. Sua morfologia e modo de origem constituem a principal base para a classificao dos fungos que no possuem sexualidade. Algumas espcies produzem somente uma espcie de esporos e outras produzem at quatro tipos diferentes. Brotamento o processo de reproduo assexuada prevalente nas leveduras, apesar de algumas espcies dividirem-se por fisso (leveduras de fisso). Enquanto que nesta (o processo reprodutivo comum em quase todas as bactrias) um antecessor se divide em duas clulas-filhas de tamanho essencialmente igual, no brotamento a clula-filha a principio muito menor do que a clula primitiva. A medida que o broto sai da clula primitiva o ncleo desta se divide e um deles passa para o broto; o material da parede celular ento se interpe entre o broto e a clula primitiva e eventualmente

aquele se desliga. Pela micrografia eletrnica podemos ver uma cicatriz de nascirnento na parede da clula-filha e uma cicatriz de brotamento na parede da clula primitiva. Como resultado de repetidos brotamentos, velhas clulas de levedura apresentam muitas cicatrizes de brotamento mas tem apenas uma cicatriz de nascimento. Fragmentos de hifas (p. ex., formados pela ruptura de um miclio) so tambm capazes de formar novas colnias. Essa capacidade freqentemente explorada no cultivo dos fungos, mas provvel que no seja importante na natureza.

REPRODUO SEXUADA Os fungos que apresentam reproduo sexuada seguem os seguintes passos. 1) Um ncleo haplide de uma clula doadora (macho) penetra no citoplasma de uma clula receptora (fmea). 2) Os ncleos macho e fmea fundem-se para formar um ncleo zigoto, diplide. 3) Atravs de meiose o ncleo diplide da surgimento a quatro ncleos haplides, sendo que alguns deles podem ser recombinantes genticos. Na maioria das espcies a condio haplide a que esta associada a um crescimento vegetativo prolongado e o estado diplide transitrio, mas em outras espcies, como nos animais superiores, o inverso verdadeiro. DIMORFISMO Algumas espcies de fungos crescem somente como bolores e outras apenas como leveduras. Muitas espcies, contudo, podem crescer em ambas as formas, dependendo do meio ambiente. Essa capacidade e conhecida como dimorfismo. Ela clinicamente importante pois a maioria dos fungos mais patognicos (para o homem) dimrfica; eles via de regra aparecem nos tecidos infectados como leveduras, mas quando cultivados in vitro, em condies convencionais, aparecem como bolores tpicos. O dimorfismo pode ser experimentalmente controlado pela modificao das condies culturais, sendo decisivo, s vezes, um nico fator. Por exemplo, o patgeno humano Blastomyces dermatitidis cresce como miclio a 25C, mas como levedura a 37C. Alguns fungos produzem formas micelianas ao crescerem na superfcie de meios lquidos de cultura, e formas de levedura quando o crescimento se da na profundidade desses meios.

Nutrio e Metabolismo Fontes de C e N Para o seu desenvolvimento, os fungos exigem sempre uma fonte orgnica de C, que ser utilizada como material plstico ou energtico. A fonte de N pode ser inorgnica (por exemplo: NO3- e NH4+ ) ou orgnica. Por exigirem C orgnico exgeno para as reaes oxidativas na produo de energia necessria ao seu desenvolvimento, os fungos so classificados como hetero e quimiorganotrficos. Os fungos podem ser saprobiticos (ou saprfitas) e parasitas (facultativos ou obrigatrios ), conforme vivam de fontes de alimento existentes livres ou em hospedeiros. As fontes orgnicas podem ser bastante simples, como os lcoois, cetonas, aldedos, gorduras, cidos, etc., ou complexas como protenas, polissacardeos, polipeptdeos, etc. De modo geral, essas substncias de molculas grandes so digeridas por enzimas at formas mais simples, num processo semelhante a digesto estomacal do homem, sendo o processo, porm, sempre externo, isto , no prprio meio circundante, o que permite a assimilao fcil do alimento. Algumas vezes certas substncias, como os aminocidos, podem funcionar como fontes de C e N. podendo ser utilizadas como substncias energticas ou plsticas. Fatores de crescimento Segundo SNELL, em opinio acompanhada por VILLELA & CURY (1956), o fator de crescimento "qualquer composto orgnico que no pode ser sintetizado por um dado organismo e que deve ser fornecido ao mesmo, intacto". Muitas espcies de fungos, para o seu desenvolvimento, podem exigir os chamados fatores de crescimento, ou os chamados "bios de WILDIERS, os quais, geralmente, devem ser fornecidos em pequenssimas quantidades. Esses fatores podem ser classificados, segundo VILLELA & CURY (1956), em essenciais, estimulantes e condicionais. Uma determinada espcie pode no exigir um fator de crescimento, porm algumas amostras podem sofrer mutaes e perder a capacidade de sintetiz-lo, passando assim, a depender do mesmo. As exigncias podem ser quanto molcula inteira de um fator qualquer, ou parte dela, como observado com a tiamina em: a) Aspergillus niger, que a sintetiza. b) Mucor ramannianus exige a frao tiazol e sintetiza a pirimidina. c) Rhodotorula rubra sintetiza o tiazol e exige a pirimidina. d) Phycomyces blakesleeanus exige os dois.

Microelementos minerais Os fungos exigem certos microelementos, isto , elementos qumicos inorgnicos em pequenas quantidades, como o Fe, Zn, Mn, Cu, Mb, Ca, K. Esses elementos podem ser adicionados ao meio, enquanto outros, como o de SABOURAUD, os contm em proporo adequada. De modo geral, os ons metlicos agem favoravelmente em pequenas concentraes, tornando-se porm, quando adicionados alm de determinado limite, prejudiciais ao crescimento. Os ons Fe, Cu e Mn podem agir como elementos catalizadores do crescimento, em baixos nveis. Outros metais, como o Zn e o Hg, so tambm estimulantes em pequenas doses. Algumas substncias, como o sulfato de zinco (em diluio de 1:1.000 e 1:2.000) e o sulfato de cobre (em 1:500 a 1:1.500), podem provocar mutaes nos Aspergillus niger. Em doses maiores, vrios compostos so txicos, sendo inclusive utilizados em combate aos bolores, como e o caso com sulfato de cobre, bicloreto de mercrio, cloreto de zinco, carbonato de cobre, xido de zinco, etc. Alm da forma de produtos inorgnicos, esses metais podem ser ligados a grupos orgnicos e serem utilizados como antifngicos, como acontece com timerozal, nitrofenolato de sdio, etc. Os microelementos podem ser essenciais por participarem de molculas importantes no metabolismo, como ocorre com Fe, que constituinte de varias enzimas, como os citocromos, catalase, etc.; com o zinco, constituinte de enzimas, a exemplo do lcool-deidrogenase, o cobre da tirosinase e nitrito-redutase, o Mn, da hidroxilamino-redutase e o Mb, da nitrato-redutase. Metabolismo Os fungos tem sido instrumentos interessantes no estudo dos processos metablicos, tanto plsticos como energticos, pois so de fcil manejo, crescimento rpido e utilizam-se de meios bem caracterizados quimicamente. A via glicoltica ou da fermentao alco1ica, ou via de EMBDEMMEYERHOFF-PARNAS, um dos exemplos de via metab1ica conhecida em profundidade e que serve de padro para as pesquisas em outros mecanismos metab1icos. Ela apresenta interesse, ainda, porque o organismo animal pode utilizar uma via semelhante para a degradao do acar. Na fermentao alcolica, h produo de energia que pode ser acumulada em molculas de ATP, responsveis por importantes reaes de xido-reduo. Alis, os carboidratos representam as principais fontes de energia e C para os microrganismos, de modo geral. Observa-se, nessa via, a formao de inmeros produtos intermedirios, com a interveno de muitas enzimas que catalizam reaes de quinase, mutase, aldolase, isomerase, etc.

A via glicoltica, porm, no a nica via de degradao de carboidratos, havendo outras, como o ciclo oxidativo das fosfopentoses, o ciclo de KREBS, etc. Os mecanismos de xido-reduo, sistemas reversveis de transferncia de energia por meio de hidrognio ou de transporte eletrnico, so exercidos nas clulas dos fungos pelo mitocndrio.

Questes 1. Descreva a reproduo assexuada dos fungos. 2. Descreva as principais estruturas citolgicas dos fungos e suas funes. 3. Descreva todos os tipos de micoses e os principais rgos afetados. 4. Descreva dimorfismo em fungos.

ISOLAMENTO E CARACTERIZAO DE MICRORGANISMOS Na natureza encontramos vrias espcies de microrganismos (bactrias, fungos, algas e protozorios) convivendo no mesmo ambiente. Para estudar as propriedades de um determinado microrganismo em particular, deve-se primeiramente isol-lo em cultura pura, ou seja, uma cultura isenta de todos os demais tipos de organismos, onde todas as clulas na populao sejam idnticas (originrias de uma mesma clula parental). CULTIVO DE CULTURAS PURAS
MEIOS DE CULTURA

Os ingredientes necessrios para o crescimento de microrganismos podem ser supridos por um sistema vivo, como um hospedeiro animal ou vegetal, uma cultura de clulas, ou por uma mistura de todos os nutrientes requeridos juntos em um sistema artificial, denominado meio de cultura. Os meios de cultura contm os materiais nutrientes para o cultivos dos diferentes microrganismos. Estes meios podem ser preparados no prprio laboratrio com ps desidratados, ou adquiridos prontos no comrcio em placas de Petri ou tubos de ensaio. Estes meios podem ser em caldo (lquido) ou gar (slido). Os meios lquidos so teis para a obteno de relativa grande biomassa de microrganismos e revelao de provas bioqumicas, mas no permitem a separao de dois ou mais microrganismos de espcies diferentes em uma populao mista, no possibilitando a observao de algumas caractersticas especficas dos microrganismos, como a morfologia de suas colnias. Para se determinar as necessidades nutricionais de um microrganismo so utilizados meios quimicamente definidos, ou seja, se conhece a composio exata de

tais meios. Meios de cultura mnimos ou basais so meios onde somente so fornecidos elementos qumicos necessrios ao microrganismo, na forma de molculas ou frmulas inicas simples. Nesses meios somente so encontrados uma nica fonte de carbono (geralmente glucose), de nitrognio (sais de amnio ou nitratos), de fsforo, etc. e no so detectados fatores de crescimento, aminocidos ou cidos nuclicos. Meios com finalidades especiais so meios que fornecem informaes especiais sobre os microrganismos: Meios seletivos so desenvolvidos para promover o crescimento de determinados microrganismos em detrimento de outros, que tambm se encontram na amostra em questo. A prtica mais comum a incorporao de substncias tais como antibiticos ou inibidores que propiciam tal seleo. Ex.: Agar de Thayer-Martin seletivo para Neisseria gonorrhoeae e N. meningitidis onde os organismos contaminantes so inbidos pela colistina, nistatina, vancomicina e trimetroprim e MSB (sacarose e bacitracina) seletivos para Streptococcus mutans. Meios diferenciais so desenvolvidos para facilitar a separao presuntiva de espcies de microrganismos que porventura estejam colonizando um mesmo ecossistema. Esses meios, via de regra, permitem a obteno de colnias com caractersticas fenotpicas diferenciadas (morfologia, colorao, etc), de acordo com o processamento de agentes cromognicos ou acares e indicadores incorporados ao meio. Ex.: gar-sangue (Porphyromonas e Prevotellas). Meios de enriquecimento so variaes dos meios seletivos empregados para se estimular o crescimento de certos microrganismos exigentes e que encontram-se particularmente presentes em pequeno nmero numa amostra que inclui grande nmero de outros da microbiota normal.

Meios para anaerbios so meios pr-reduzidos empregados na coleta e manuteno de bactrias anaerbias, onde so adicionadas substncias redutoras (cido ascrbico 0,1%, cistena 0,1%, tioglicolato de sdio 0,1%) que se combinam com o oxignio e indicadores de oxi-reduo (azul de metileno, resazurina). Meios para o cultivo de bactrias simulam o habitat natural das bactrias. Pode ser adicionado sangue, soro animal, glicose, etc. Ex.: Brain Heart Infusion Agar BHI agar. Meios para o cultivo de fungos os fungos podem crescer em uma mistura simples contendo glicose, uma fonte de nitrognio inorgnico ou orgnico e alguns minerais. Em geral esses meios tm uma concentrao maior de acar (4%) e um pH menor (3,8 a 5,6) que o meio para cultivo bacteriano (pH 6,5 a 7,5). Ex.: Sabouraud Agar. FATORES QUE INFLUENCIAM A ESCOLHA DO MEIO A origem do material a ser analisado A espcie que se imagina estar presente na amostra As necessidades nutricionais dos organismos. MTODOS DE CULTIVO Inoculao Quando o inculo (material colocado no meio de cultura), obtido de uma suspenso original da amostra, colocado dentro ou sobre um meio geleificado (gar), as clulas so imobilizadas e cada uma ir se multiplicar produzindo uma colnia isolada. Cada colnia nada mais do que clulas individuais agrupadas, com ancestral nico, visvel a olho nu.

Tcnica de esgotamento por estrias: atravs de uma ala ou agulha de semeadura esgota-se o material por meio de estrias na superfcie do meio.

Colnias

estrias Aparncia das

Tcnica da semeadura em superfcie: o inculo espalhado na superfcie do gar com o auxlio de uma ala de vidro (ala de Digralsky). Mtodo de pour-plate: uma suspenso de clulas misturada com gar fundido a 45C, que se verte em uma placa de Petri. Quando o gar se solidifica, as clulas so nele imobilizadas e crescem, formando colnias. Se a suspenso de clulas que ser inoculada foi previamente diluda, as colnias formadas estaro bem separadas, com alta probabilidade de ser derivada de uma nica clula. Mas para se ter certeza disso necessrio repicar uma colnia do tipo desejado, suspend-la em soluo apropriada e replaque-la. Este procedimento dever ser repetido quantas vezes for necessrio, o que ir assegurar a obteno de uma cultura pura.

Um outro mtodo de obteno de cultura pura o de diluio com extino. A suspenso original da amostra diluda seriadamente e semeiam-se amostras de cada diluio. Se apenas algumas amostras de uma diluio particular exibirem crescimento, presume-se que essas culturas se originaram a partir de clulas isoladas. Este mtodo utilizado somente quando no possvel o cultivo em placa por algum motivo e deve ser empregado apenas para se isolar o tipo de organismo predominante em uma populao mista. MANIPULAO DO CRESCIMENTO DOS MICRORGANISMOS Por vezes, extremamente difcil reproduzir o crescimento microbiano em meios artificiais, assim como este ocorre em ambiente natural. Para contornar este problema reproduz-se em laboratrio as condies ideais para o crescimento do microrganismo que se deseja isolar, tais como: diferentes meios de cultura que contenham os nutrientes exigidos pelo microrganismo temperatura de incubao aerao pH Quando se deseja identificar a maior parte das espcies presente em uma amostra de uma populao mista de microrganismos deve ser realizada a semeadura em tantos meios e condies de incubao diferentes quantos sejam necessrios para se obter o crescimento da maioria das espcies presentes na amostra. Para o isolamento de um tipo particular de microrganismo presente em uma populao mista, alguns recursos podem ser empregados de acordo com as caractersticas do microrganismo desejado, tais como meios diferenciais, meios seletivos, meios enriquecidos, o aquecimento do material, ao de lcalis ou cidos fortes, e inoculao em animal sensvel.

ISOLAMENTO DE AERBIOS Estes microrganismos requerem oxignio para sua sobrevivncia. Aps a semeadura em placas ou tubos com meio de cultura, estes so mantidos em estufa a 37C em presena de oxignio do ar atmosfrico. Existem grupos de microrganismos, como a Neisseria gonorrohoeae, que necessitam nveis elevados de dixido de carbono (CO2), neste caso pode ser utilizado o mtodo da jarra microaerfila. Aps semeados, os meio so colocados dentro da jarra juntamente com uma vela acesa que ento fechada hermeticamente. Aps a vela se apagar ser obtida uma quantidade reduzida de oxignio livre e um teor de dixido de carbono de aproximadamente 10%. ISOLAMENTO DE ANAERBIOS Durante a preparao dos meios, estes so fervidos para que a maior parte do oxignio dissolvido seja retirada. O gs nitrognio livre de oxignio colocado nos tubos contendo o meio, e ento um agente redutor deve ser adicionado (normalmente cistena), o qual remove os ltimos traos de oxignio. Os meio so esterilizados em autoclave na completa ausncia de oxignio. Cmara de anaerobiose: a manipulao dos microrganismos realizada dentro da cmara que contm luvas especiais acopladas parede da cmara. A atmosfera dentro da cmara uma mistura de hidrognio, dixido de carbono e nitrognio. O material introduzido ou removido da cmara por meio de um sistema fechado para o ar. Qualquer resduo de oxignio na cmara removido pela reao com o hidrognio, na presena do catalisador paldio. Jarras de anaerobiose: os meios inoculados so colocados em uma jarra juntamente com um envelope que contm substncias qumicas que geram

hidrognio e dixido de carbono. Este sistema inadeqado para o cultivo de anaerbios estritos. Mtodo de Veillon: o microrganismo inoculado em meio slido em coluna alta, crescendo no fundo do tubo de ensaio. Para os anaerbios so utilizados meios reduzidos, que so meios de cultura com a adio de um agente redutor (ex.: tioglicolato de sdio), que so capazes de absorver o oxignio ou gerar H2 e CO2. MEDIDA DO CRESCIMENTO DA POPULAO MICROBIANA Existe uma variedade de tcnicas para quantificar o crescimento bacteriano. Os dois mtodos quantitativos mais comuns so aqueles que avaliam o nmero de clulas UFC/mL Unidade Formadora de Colnias por mL ex.: Contagem celular microscpica ou eletrnica, contagem em placa ou atravs de membrana filtrante e aqueles que medem o peso celular ou ainda atravs da estimativa de unidades de absorbncia da massa de clulas em caldo ou outras suspenses (turbidez).

IDENTIFICAO DOS MICRORGANISMOS Atravs das tcnicas laboratoriais empregadas para caracterizar os microrganismos, que podem variar desde uma microscopia relativamente simples anlise do material gentico encontrado na clula, procura-se enquadrar o microrganismo numa espcie. Uma coleo de dados utilizada para caracterizar espcies diferentes: Caractersticas Culturais O primeiro passo para a identificao de uma colnia isolada a observao da natureza do meio em que o organismo est crescendo.

O estudo da morfologia das colnias crescidas em meio slido (forma, dimenses, estrutura, brilho, etc) ir possibilitar uma identificao preliminar, mas no definitiva do organismo estudado, j que muitas espcies podem produzir colnias que no diferem entre si. (ex.: algumas colnias de E. coli so indistingveis das de Shigella quando cultivadas em gar- Hektoen). Morfologia Colonial

Caractersticas Morfolgicas Os microrganismos podem ser observados ao microscpio ptico utilizando-se preparaes fixadas e coradas. Preparaes a fresco (em gota pendente ou preparaes entre lmina e lamnula), so teis quando a estrutura do microrganismo pode ser distorcida pelo calor ou agentes qumicos utilizados na preparao do material seco e corado, podendo ser utilizadas tambm quando o microrganismo no se cora facilmente ou para observar motilidade ou ingesto de alimentos particulados.

As tcnicas de colorao servem para mostrar as vrias estruturas dos microrganismos (flagelos, membranas, cpsulas), identificar suas estruturas internas e ajudar a identificar e separar microrganismos similares. As coloraes podem ser feitas com um ou mais corantes. Colorao simples: realizada com uma nica soluo corante. As clulas coram-se uniformemente com esta tcnica. (ex.: Violeta de genciana) Colorao diferencial: envolve mais de uma soluo corante. Evidencia diferenas entre as clulas microbianas ou parte das clulas. (ex.: Colorao de Gram, Colorao de Zihel-Nielsen) Colorao de Gram O microbiologista pode utilizar a colorao de Gram do material obtido de colnias isoladas para obter, atravs de observao ao microscpio ptico, maiores informaes sobre a morfologia celular. A maioria das bactrias pode ser dividida em dois grupos distintos de acordo com os resultados apresentados pelo Gram: Bactrias Gram-positivas coram-se em violeta escuro Bactrias Gram-negativas coram-se em vermelho Essa diferena na colorao est relacionada com a espessura e estrutura das paredes celulares das bactrias. Microscopia ptica Os microscpios de luz conseguem uma ampliao mxima til de cerca de 1000x o tamanho original do espcime. Com algumas modificaes, incluindo oculares de alta potncia a ampliao mxima do microscpio luminoso pode chegar a aproximadamente 2000x. A imagem formada pelas objetivas tambm ampliada pelas lentes oculares. Assim, a combinao do sistema de lentes da objetiva e o sistema de lentes oculares produz a ampliao. Existem diversos tipos de microscpio de luz: Microscpio de campo claro, de campo escuro, de fluorescncia, de contraste de fase.

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O microscpio eletrnico produz uma ampliao mxima til de cerca de 200.000 400.000x o tamanho original do espcime, devido ao alto poder de resoluo proporcionado pelo comprimento de onda muito curto dos feixes de eltrons utilizados, em vez da luz. Este microscpio permite o exame de vrus e das ultra estruturas das clulas microbianas. Existem avanos mais recentes na microscopia, como aquelas que utilizam computadores, outras fontes de iluminao, ou novas tcnicas de colorao Caractersticas Metablicas Existem vrios testes laboratoriais que podem determinar a atividade metablica (metabolismo oxidativo, metabolismo fermentativo, catabolismo protico) de um organismo. O registro das reaes realizadas por uma espcie microbiana til e muitas vezes essencial para sua identificao Caractersticas Fisiolgicas Condies fsicas como a atmosfera gasosa, a temperatura, o pH, a luminosidade e os fatores de crescimento prprios de cada microrganismo tambm fornecem parmetros para a identificao. Por exemplo, os microrganismos do corpo humano crescem a 35C e os do oceano a temperaturas entre 4 e 20C. Caractersticas Antignicas Uma clula microbiana apresenta estruturas fsicas em sua superfcie que podem agir como antgeno e induzir, desta forma, a produo de anticorpos. Os anticorpos produzidos em animais de laboratrio podem ser usados para detectar a presena de antgenos nicos em culturas bacterianas e so usados para caracterizar microrganismos.

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Caractersticas patognicas A inoculao do microrganismo em hospedeiro sensvel (animal, plantas ou micrbios), com a finalidade de reproduzir a doena, poder determinar se este ou no um patgeno. Caractersticas genticas Atravs dos avanos na biologia molecular surgiram tcnicas que permitem realizar anlises genticas para classificar ou identificar os microrganismos ou compreender a sua atividade, atravs de mtodos mais sensveis e precisos. CONSERVAO DE CULTURAS PURAS Aps a obteno de uma cultura pura dever ser adotado um mtodo de conservao destas culturas vivas por um perodo de tempo de acordo com o objetivo do estudo a ser realizado. Conservao por um curto perodo (dias a meses): Armazenagem temperatura de refrigeradores (4C a 10C) Repiques freqentes Conservao por longos perodos: Nitrognio lquido a -196C Freezers a -70C/ -120C Liofilizao congelamento a seco - as amostras so congeladas, desidratadas e fechadas vcuo, o que possibilita a viabilidade das culturas por muitos anos. Esta tcnica permite a obteno de uma coleo de microrganismos como referncia, por exemplo. Para o isolamento dos microrganismos em laboratrio deve ser observada a atmosfera gasosa ideal para o crescimento de cada clula microbiana em particular:

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CULTIVO DE VRUS Para isolar vrus em laboratrio, necessrio fornecer clulas hospedeiras vivas, j que so parasitas intracelulares estritos. Vrus bacterianos bacterifagos so facilmente isolados e cultivados em cultura de bactrias jovens em crescimento ativo em caldo ou meio solidificado em placa. Vrus animais: Cultivo em animais vivos: seu uso limitado, devido ao alto custo. Alguns vrus animais como o vrus da hepatite B podem ser cultivados somente em animais vivos. Em laboratrio so utilizados normalmente camundongos, coelhos e cobaias. So utilizados em estudo sobre a resposta imune do hospedeiro frente a uma infeco viral ou para determinar se um vrus capaz de causar uma infeco. Cultivo em ovos embrionados (de galinha ou pato): Ovos embrionados (embries de 6-12 dias) podem ser inoculados assepticamente com vrus, utilizando-se uma agulha e seringa, por meio de um orifcio aberto na casca. A abertura selada com parafina e os ovos so incubados a 36C por 2 a 3 dias para permitir a multiplicao dos vrus. Diferentes tecidos do embrio so inoculados, dependendo do tipo de vrus. Cultura em tecidos: uma vez obtida uma cultura de clulas, esta pode ser utilizada como um hospedeiro in vitro para um determinado vrus. Podem ser utilizadas clulas de cultura primria ou clulas de linhagem contnua. Identificao de vrus depende do ECP (efeito citoptico): os vrus invadem as clulas, geralmente causando algum tipo de alterao visvel. O ECP pode ter diferentes aspectos, dependendo do vrus e do tipo de clulas na cultura. Um tipo de ECP o corpsculo de incluso, que uma estrutura intracelular anormal. Sua presena pode

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ajudar a identificar o vrus que esteja causando uma infeco, por exemplo, os corpsculos de Guarnieri so caractersticos em clulas infectadas com o vrus da varola. Vrus de Plantas Podem ser cultivados pela inoculao de uma suspenso viral em plantas por meio de uma agulha hipodrmica ou de escarificaes provocadas nas folhas da planta. QUESTIONRIO 1. Defina o termo cultura pura. 2. Descreva as principais caractersticas dos microrganismos usadas na identificao das espcies. 3. Cite os passos para o isolamento de um microrganismo anaerbio. 4. Quais as tcnicas para conservao de culturas? 5. Explique a finalidade dos principais meios de cultura. BIBLIOGRAFIA Baron, E.J., Peterson, L.R., Finegold, S.M. Methods for identification of etiological agents of infectious disease. In: Bailey & Scotts Diagnostic Microbiology. 9. ed. St. Louis: Mosby, 1994. Cap. 4. p. 474-504. Bier, O. Mtodos gerais de estudo das bactrias. In: Microbiologia e Imunologia. 23. ed. So Paulo: Melhoramentos, 1984. Cap. 25, p.477-499. Pelczar, M.J., Chan, E.C.S. & Krieg, N.R. Caracterizao dos

Microrganismos. In: Microbiologia: Conceitos e Aplicaes. 2.ed. vol.1. So Paulo: Mc Graw Hill do Brasil. 1996. Cap.3. p. 75-99.

REGULAO E CONTROLE DE MICRORGANISMOS

1. INTRODUO Os profissionais da rea de sade bucal, incluindo dentistas, higienistas, auxiliares e tcnicos de prtese dentria, esto freqentemente expostos a microrganismos com potencial para transmisso de infeces. De um modo geral, os microrganismos so capazes de sobreviver em ambientes de diversas condies fsicas. Entretanto, existe uma limitao da capacidade de sobrevivncia de determinado microrganismo, em um meio ambiente desfavorvel. Este recurso foi aproveitado pelo homem para o controle de microrganismos. Os meios pelos quais as infeces so transmitidas foram descritos sculos antes que o homem descobrisse a existncia dos microrganismos. Com o advento dos antibiticos e vacinas, aps a II Guerra Mundial, o homem teve uma falsa impresso de segurana, imaginando que as infeces no representariam mais problemas. Este fato, associado ao uso de anticoncepcionais no incio dos anos 60, levou a um comportamento sexual mais liberal, sem proteo, subestimando as doenas sexualmente transmissveis. Nas ltimas dcadas, ocorreram grandes mudanas que atuaram na relao do homem com a natureza e os microrganismos: O crescimento demogrfico de forma desordenada criou problemas de saneamento bsico e de meio ambiente que favoreceram a disperso dos microrganismos; O desenvolvimento da Medicina, que pode interferir na seleo natural, possibilitando maior sobrevida, porm superlotou hospitais de pacientes debilitados, invadidos por sondas e cateteres, sob ventilao mecnica e imunossuprimidos; Com o surgimento da AIDS, dos transplantes, da radioterapia e da quimioterapia, os microrganismos passaram a ser favorecidos, resultando nas infeces ditas oportunistas; Uso indiscriminado de antibiticos, permitindo o aparecimento de microrganismos resistentes; Responsabilidade no controle de infeco (CI) O conhecimento cientfico sobre Controle de Infeces (CI) avanou muito, mas muitos profissionais ainda resistem em implement-lo integralmente sob variados pretextos (ignorncia, aumento de custos, irresponsabilidade, etc..). A mesma falta de nfase pode ser observada nos cursos de Odontologia do pas. O controle de infeco constitudo por recursos materiais e protocolos que agrupam as recomendaes para preveno, vigilncia, diagnstico e tratamento de infeces, visando segurana da equipe de sade e dos pacientes. Deter as contaminaes nos consultrios odontolgicos tem sido um grande desafio. Na maior parte das vezes, os microrganismos tm vencido as medidas de segurana adotadas, colocando em risco profissionais e pacientes. Durante

sculos os profissionais de Odontologia realizaram seu trabalho inconscientes dos riscos reais de contaminao inerentes sua prtica, at que se compreendeu que as infeces poderiam ser transmitidas e adquiridas no consultrio. A biossegurana no completa quando profissionais da Sade atendem a um paciente e manipulam instrumentos, material biolgico e superfcies contaminadas. Porm, o fato de sempre haver um risco deve ser um estmulo nossa dedicao, e no o inverso, ou seja, uma justificativa s nossas falhas. A realizao de controle de infeces envolve muito mais conhecimento, responsabilidade, determinao, organizao e disciplina do que raciocnios complexos e tcnicas difceis de serem aprendidas ou executadas. 2. INFECO CRUZADA Chamamos de infeco cruzada a passagem de um agente etiolgico da doena, de um indivduo para outro susceptvel. Atravs do controle da infeco, podemos evitar as infeces srias, e at mesmo a morte. Vrias fontes com potenciais de infeco esto presentes nos consultrios dentrios, como mos, saliva, secrees nasais, sangue, roupas e cabelo, assim como instrumentais e equipamentos. Tais fontes, necessitam portanto serem avaliadas para minimizar o risco da doena. No consultrio odontolgico, podemos detectar quatro vias possveis de infeco cruzada: Do paciente para o pessoal odontolgico; Do pessoal odontolgico para paciente; De paciente para paciente via pessoal odontolgico; De paciente para paciente por intermdio de instrumentos, equipamentos e pisos. Em uma pesquisa realizada nos EUA (JACKSON & CRAWFORD, 1980), verificou-se que numa determinada amostra, 45% do pessoal odontolgico havia se contaminado no trabalho. A maior porcentagem havia adquirido infeces respiratrias, 14% infeces nos dedos e mos e, 9% infeces oculares. Para se compreender o mecanismo da infeco cruzada, basta que atentemos para o que se passa dentro do consultrio, vamos sugerir uma situao hipottica. O paciente sentou-se na cadeira odontolgica, o instrumental esterilizado foi disposto adequadamente e o profissional lavou criteriosamente as mos. Porm, num dado momento o refletor precisa ser melhor posicionado, a cadeira abaixada, novo instrumento precisa ser retirado da gaveta, as seringas de ar e gua so manipuladas, as peas de alta e baixa rotao so tocadas. Tudo o que for tocado pelo profissional, torna-se teoricamente contaminado. Alm disso, todas as superfcies da sala ficam contaminadas por aerossis produzidos pela pea de mo, seringas de ar e gua. Existem trs nichos ou reservatrios que favorecem a infeco cruzada no consultrio: 1) instrumental; 2) mos do pessoal odontolgico; 3) superfcies contaminadas do equipamento ou outros itens do consultrio.

2.1. Hepatite B O cirurgio dentista (CD) realiza com freqncia intervenes que, mesmo quando no invasivas podem promover infeco. Um prova dessa afirmao o fato de os praticantes da Ortodontia apresentarem a segunda maior incidncia de marcadores de infeco pelo vrus da hepatite B (VHB) no sangue. Est comprovado que o VHB um dos agentes infecciosos mais resistentes, permanecendo vivel num instrumento contaminado e seco, por mais de duas semanas, alm disso, a grande maioria dos agentes desinfetantes no exerce ao sobre tal vrus. O vrus da hepatite B produz uma das mais graves doenas transmitidas por patgenos na prtica odontolgica. A incidncia da hepatite B aps a exposio acidental, atravs de leses por instrumentos cortantes ou perfuraes por agulhas utilizados em pacientes que possuem o antgeno HbsAg circulante, de aproximadamente 20%. Nas mesmas circunstncias, o risco de transmisso do HIV apresenta uma incidncia estimada entre 0 a 0,5%. A prevalncia de anticorpos para hepatite B entre cirurgies-dentistas aumentou de 12,9% em 1976, para 30% em 1984. O vrus da hepatite pode estar presente no sangue em concentraes muito elevadas, assim quantidades insignificantes de sangue, como 0,000025 ml, podem transmitir o vrus. Foram relatados pelo menos nove casos de hepatite B envolvendo 3 a 53 pacientes que foram infectados por CDs portadores da doena. A imunizao para hepatite B requer uma srie de trs injees intramusculares nos tempos 0, 30 e 180 dias. Foi comprovado que a vacina segura e tem aproximadamente 96% de eficcia. 2.2. Herpes Os vrus do herpes simples do tipo I e II esto freqentemente presentes na cavidade oral de pacientes e podem causar infeces srias em CDs e auxiliares. A infeco mais sria, o herpes oftlmico, pode causar cegueira. Uma outra manifestao problemtica do vrus o herpes nos dedos, que causa dor aguda palpao e a impossibilidade de exercer a prtica odontolgica durante um certo tempo. Em um relato, 20 pacientes desenvolveram gengivoestomatite herptica aps a interveno de uma higienista com infeco pelo herpes do tipo I nos dedos. 2.3. AIDS A infeco pelo vrus da imonudeficincia humana (HIV) extremamente sria, e a doena possui um curso fatal nos indivduos que apresentam os sintomas. A epidemia da AIDS acelerou a pesquisa e o interesse na assepsia odontolgica. A partir de 1985, os dentistas refletiram e atualizaram seus programas de assepsia para proteo pessoal, proteo de auxiliares, tcnicos e pacientes durante a prtica odontolgica. At mesmo os profissionais mais informados e conscientes enfrentam um desafio, devido ao fato da hepatite e da AIDS possurem perodos de incubao bem prolongados e na maioria dos indivduos no ser identificada. Grande parte dos indivduos que apresentam a AIDS possui manifestaes orais da doena, tais como ulceraes, lquen-plano e herpes simples. Embora o

nmero de partculas virais do HIV por mililitro de sangue infectado seja entre 10.000 a um milho de vezes menor que o do vrus da hepatite B, h uma grande aflio entre os dentistas quando ocorre um ferimento durante um procedimento com um portador da doena, ou entre aqueles dentistas que se recusam a usar luvas e vm a descobrir mais tarde que trataram de paciente portador do HIV. A percepo da equipe de sade H profissionais que no adotam um programa de CI, alegando que nenhum paciente ou profissional da Sade contraiu uma infeco grave ou fatal em seu ambiente de trabalho. Outros profissionais afirmam que no atendem a pacientes portadores de infeces contagiosas, como AIDS, hepatites virais, herpes e outras. Levando-se em considerao que no se consegue identificar todos os pacientes infectados com base na histria clnica, no exame fsico e nos testes laboratoriais, o Center for Disease Control and Prevention (CDC) EUA recomenda que se tomem precaues contra a contaminao por sangue ou outros fludos corporais de forma consistente no atendimento de TODOS OS PACIENTES, o que ficou conhecido como precaues universais. Muitas vezes, nem o paciente sabe de sua condio de portador. Submeter todos os pacientes a exames laboratoriais no tico, legal, vivel nem suficiente; portanto todo paciente deve ser atendido como se fosse portador de uma doena contagiosa. Realizar CI uma necessidade moral e legal, que torna a razo do trabalho verdadeira e valoriza o profissional da Sade e a profisso, perante o paciente e a sociedade. Embora a realizao do CI tenha um certo custo, vidas no tm preo. 3. ESTRUTURAO DO CONHECIMENTO PARA A REALIZAO DO CI Todos os integrantes da equipe de Sade devem ter em mente, as variveis em jogo que levam contaminao e infeco: a presena de fontes de microrganismos, as formas de contaminao e a patogenicidade. 3.1. Fonte de microrganismos A maior concentrao de microrganismos no consultrio dentrio encontrase na boca do paciente. Quanto maior a manipulao de sangue, visvel ou no, maior sua chance de contrair doena infecciosa. Ao utilizarmos instrumentos rotatrios, jatos de ar, ar/gua, ar/gua/bicarbonato e ultra-som, a contaminao gerada em at 1,5 m de distncia muito grande. Peas de mo e borrachas contaminadas, a gua que supre o abastecimento de Sade, o sabonete em barra, a toalha de pano, a torneira noautomtica, as solues de limpeza, podem ser fortes veculos de microrganismos. Nossas mos, uma vez contaminadas de saliva e/ou sangue, so os maiores veculos de contaminao de superfcies. 3.2. Formas de contaminao Direta: ocorre pelo contato direto entre o portador e o hospedeiro. Ex: doenas sexualmente transmissveis, hepatites virais, HIV.

 3.3.

Indireta: ocorre quando o hospedeiro entra em contato com uma superfcie ou substncia contaminada. Ex: hepatite B, herpes simples. A distncia: atravs do ar, o hospedeiro entra em contato com o microrganismo. Ex: tuberculose, sarampo e varicela.

Patogenicidade A patogenicidade expressa a possibilidade de uma contaminao gerar uma infeco.

Patogenicidade = no de microrganismos X virulncia resistncia ao hospedeiro Ou seja, uma vez ocorrida a contaminao, a possibilidade de ocorrer a infeco diretamente proporcional ao nmero de microrganismos contaminantes vezes a virulncia deles, e inversamente proporcional resistncia local, humoral e celular do hospedeiro. A virulncia definida como o conjunto de recursos que os microrganismos possuem para causar dano ao hospedeiro, instalando-se, sobrevivendo e, finalmente multiplicando-se. Resumindo, para que ocorra uma infeco necessrio que haja uma fonte de microrganismos, um contgio atravs de uma das trs formas, por um microrganismo de determinada virulncia, em determinado nmero, em um hospedeiro com maior ou menor resistncia. 4. IMPLANTANDO O PROGRAMA DE CI Conhecidas as variveis sobre as quais temos que atuar para a realizao do CI, devemos estabelecer quais devem ser os meios e a seqncia lgica de implantao. Primeiramente, responsabilidade do CD assegurar-se de que toda a sua equipe tenha conhecimentos mnimos para que possa atuar de forma responsvel. Os aspectos do controle de infeco que devem ser analisados nas formulaes de um programa de controle de infeco efetivo so: (1) tcnicas de assepsia; (2) avaliao dos pacientes; (3) proteo pessoal; (4) esterilizao do instrumental; (5) desinfeco de superfcies; (6) assepsia dos equipamentos e (7) assepsia laboratorial. Vacinas: Aumentando a resistncia dos profissionais da Sade e pacientes e diminuindo a virulncia de microrganismos Profissionais da Sade esto sob risco constante de aquisio de doenas previnveis por vacinas, assim como podem transmitir tais doenas aos pacientes. A imunizao de profissionais da Sade bucal constitui parte essencial dos programas de CI. Recomenda-se a esses profissionais as seguintes vacinas: contra hepatite B, influenza, sarampo, caxumba, rubola, difteria, varicela e ttano. Antibiticos com finalidade profiltica e teraputica A antibioticoterapia profiltica est indicada aos pacientes de risco: possuidores de implantes em geral, transplantados, portadores de sndrome de Down, leucemia, diabetes mellitus, AIDS, e aqueles submetidos radioterapia ou hemodilise. A antibioticoterapia profiltica deve ser de curta durao. O

uso de antibiticos profilticos em cirurgia leva com certeza a uma diminuio na incidncia de infeces ps-cirrgicas. Na vigncia da infeco instalada, o uso do antibitico deve ser teraputico, e no profiltico, sendo prescrito habitualmente por 7 a 10 dias. 4.3.) Interferindo no nmero de microrganismos Conceitos Esterilizao: a destruio de todas as formas de vida, animal ou vegetal, macroscpicas ou microscpicas de um material. Esse um termo que no deve ser usado com sentido relativo: um objeto ou substncia esto ou no esterilizados; jamais podero estar meio estreis ou quase estreis. A esterilizao denota o uso de agentes fsicos, qumicos ou fsico-qumicos. Desinfeco: a destruio dos microrganismos patognicos, sem que haja necessariamente a destruio de todos os microrganismos, pela aplicao direta de meios fsicos ou qumicos. Esse termo empregado para objetos inanimados. Antissepsia: a utilizao de substncias (agentes qumicos) para inibio da proliferao ou a destruio de microrganismos presentes na superfcie da pele e mucosas, esse termo refere-se portanto a ao in vivo. Assepsia: o contrrio de spsis (presena de patgenos no sangue ou outros tecidos), ausncia de infeco. O termo assepsia tambm usado para designar a preveno do contato com patgenos, bem como o conjunto de meios empregados para impedir a penetrao dos microrganismos em local que no os contenha. Em Odontologia, isto inclui as tcnicas de proteo com invlucros, esterilizao e desinfeco. Cadeia assptica: toda tcnica cirrgica desenvolvida com a preocupao da manuteno da cadeia assptica. Todas as manobras como esterilizao de material, antissepsia do campo operatrio, colocao de luvas e mscaras, etc, fazem parte da cadeia assptica mantida para o controle das infeces. 5. ESTERILIZAO 5.1. Mtodos fsicos: autoclavao, estufa e radiao

Calor seco estufa: 170 -180o C por 60 minutos, ou 160o C por 120 minutos. A estufa utilizada para materiais que no devem ser molhados, tais como bolas de algodo, gases, pontas de papel e instrumentos metlicos. Dentre as vantagens da utilizao deste mtodo esto: maior capacidade de volume, os equipamentos necessrio so de baixo custo e operao, e o calor seco no produz corroso. Empacotamento: papel ou folha de alumnio

Calor mido autoclave: 123oC por 20 -30 minutos 15 Ib/pol2 . A esterilizao por autoclaves a opo preferencial em relao aos meios qumicos e ao calor seco. A autoclave permite a esterilizao das pontas de alta rotao, das peas de mo, dos contra-ngulos, etc. Dentre as vantagens de sua utilizao esto: a esterilizao mais eficiente e confivel, simplicidade de operao e custo relativamente baixo. Uma desvantagem a oxidao de instrumentos metlicos, prejudicando o corte e promovendo a ferrugem dos instrumentos. 5.2. Mtodos qumicos de Esterilizao e Desinfeco 5.2.1.) Normas para desinfeco de material contaminado colocar em desinfetante (glutaraldedo ou hipoclorito), deixar agir por 30 60 minutos; lavar e enxaguar abundantemente o material com escova, gua e detergente lquido. O manipulador do material deve usar luvas grossas de borracha, de uso domstico; enxugar o material em pano limpo; esterilizao: colocar o material no desinfetante de sua opo e deix-lo agir pelo tempo necessrio atingir o resultado esperado; enxaguar abundantemente em gua, para retirar os resduos do desinfetante; enxugar em pano limpo, guard-lo em recipiente esterilizado; 5.2.2.) Tipos de desinfetantes/ esterilizantes: A) Fenis sintticos: indicados para desinfeco de artigos no-crticos pelo perodo de 60 minutos. Pisos e paredes pelo tempo de 30 minutos. B) Hipoclorito de sdio: indicado para desinfeco em soluo aquosa a 1% (10.000 ppm), para artigos semi-crticos pelo tempo de 60 minutos (ativos contra o vrus da AIDS e hepatite). Para desinfeco de pisos, paredes e superfcies lisas, tempo de 30 minutos. Obs: possui ao corrosiva em instrumento metlicos. C) Glutaradedo: Desinfeco: tempo de 30 minutos Esterilizao: tempo de 10 horas D)Outros: Produtos a base de compostos quaternrios de amnio (Germikil): No so aceitos pela ADA, pois no so efetivos contra o bacilo da tuberculose, esporos e vrus da hepatite B, e por serem facilmente inativos por matria orgnica e algodo. Alm disso, as bactrias podem crescer em solues velhas e diludas (Buckthal e cols., 1986). Indicados como

desinfetantes de artigos semi-crticos pelo tempo recomendado pelo fabricante. lcool etlico: utilizado como antissptico e desinfetante na concentrao de 77o GL p/v . No atua contra todos os microrganismos Gram-negativos, bacilo da tuberculose e vrus (hepatite). O lcool a 77o v/v obtido a partir de lcool a 96o GL, na seguinte diluio: 4 partes de lcool e uma parte de gua filtrada ou destilada. Perde parcialmente seu efeito antimicrobiano em material contendo pus, saliva, sangue, etc. 5.2.3.) Limitaes das solues qumicas desinfetantes: So sensveis a alteraes de suas concentraes ideais; Perdem suas propriedades na presena de material biolgico; A temperatura uma varivel muito importante para que ajam no tempo indicado pelo fabricante; No so disponveis indicadores biolgicos para avaliao da efetividade das solues; Obs: a radiao ultravioleta jamais dever ser utilizada para desinfeco e esterilizao de objetos e instrumentos. 5.3.) Outros mtodos de esterilizao/desinfeco Flambagem: colocar o material diretamente na chama de um bico de Bunsen ou lamparina lcool. Recurso utilizado no laboratrio de Microbiologia e excepcionalmente em outras reas da Odontologia. A flambagem ao rubro, geralmente danifica os instrumentos. Pasteurizao: processo que consiste em aquecer o material a temperatura relativamente baixa por tempo relativamente longo. um mtodo de desinfeco utilizado geralmente para grandes quantidades de lquidos que no podem ser fervidos (leite, cerveja, vinho, etc.). Para o leite, geralmente utiliza-se 63oC/ 30 minutos. No elimina bactrias esporuladas e alguns vrus. Aps a pasteurizao, os materiais devem ser resfriados bruscamente, afim de evitar a manuteno prolongada de temperaturas propcias (30-40oC) proliferao das bactrias no destrudas e germinao de esporos. Tyndalizao: ou esterilizao fracionada, consiste no aquecimento repetido, por 2-3 dias consecutivos. Utilizada em Microbiologia, para determinadas substncias que no podem ser autoclavadas. Filtrao: passagem de gases ou lquidos atravs de substncias (velas, discos filtrantes) capazes de reter os microrganismos.
testes com esporos, verifica o funcionamento adequado dos aparelhos e dos ciclos de esterilizao. Os esporos utilizados so: Bacillus stearothermophilus para autoclaves e Bacillus subtilis para calor seco, xido de etileno e gs- plasma perxido de hidrognio.

Gases esterilizantes: So utilizados misturas gasosas em esterilizadores especiais, que produzem presso de vapor qumico no saturado (126oC/ 30 minutos). Difcil utilizao por necessitar de aparelhagem adequada, e alguns gases deixarem resduos materiais; Gs xido de etileno: utilizado industrialmente, bastante efetivo contra vrus e esporos. Difcil utilizao em consultrios por necessitar de aparelhagem especial e por deixar resduos nos materiais. muito txico e alergizante. Meios transmissores de calor: esterilizadores contendo prolas de vidro, cermica ou sal, no qual utilizam-se temperaturas de 218 a 246o C por 10 segundos. Utilizado excepcionalmente para alguns instrumentais endodnticos, no podem ser utilizado para instrumentos calibrosos, e o cabo do instrumento no esterilizado. Luz ultravioleta: mtodo utilizado para desinfeco de ar em centros cirrgicos e salas asspticas. No efetivo para instrumentais pois alguns vrus e bactrias esporuladas so resistentes. Alm disso, a luz ultravioleta s tem ao quando da exposio direta do microrganismo ela, possuindo muito pouco poder de penetrao, devendo o instrumental portanto, ser exposto em todas as suas faces e no podendo ser acondicionado, o que torna invivel sua utilizao em consultrio. 6. PRTICA DA ASSEPSIA O risco de contaminao tem um significado especial onde um grande nmero de profissionais e pacientes encontram-se envolvidos com trabalhos clnicos simultaneamente, como o que ocorre em escolas de Odontologia. Cabe, portanto aos acadmicos seguir risca os mtodos de esterilizao, desinfeco e assepsia, alm de utilizar paramentao adequada, evitando a contaminao cruzada e dessa forma, preservando a integridade fsica do paciente. 6.1. Assepsia pessoal lavagem das mos A principal rota de transmisso de microrganismos orais e respiratrios ocorre pelas mos. A lavagem das mos considerada a medida isolada mais importante para se reduzir o risco de transmisso de microrganismos. As mos devem ser lavadas imediatamente antes e aps o tratamento de cada paciente, antes da colocao de luvas e depois de sua remoo, e aps tocar sem luvas objetos provavelmente contaminados. A lavagem simples das mos pela tcnica correta e utilizando gua, sabo e escova retira a microbiota transitria adquirida pelo contato direto ou indireto com o paciente. 6.2. Limpeza dos ambientes dos estabelecimentos de Sade Na ausncia de material biolgico visvel, pisos e paredes devem ser limpos com gua e sabo, em uma seqncia lgica: das reas menos sujas para as

mais sujas, e de cima para baixo. Na presena de material orgnico visvel, procede-se a desinfeco localizada. Nas salas clnicas, as superfcies tocadas que no puderem ser cobertas com barreira durante o atendimento devero ser limpas e desinfetadas entre cada atendimento, com um desinfetante de ao intermediria, como por exemplo, soluo de cloro a 1% (soluo de Milton). O lixo contaminado do consultrio deve ser separado e acondicionado em sacos plsticos brancos e recolhido por servio pblico especializado, que o encaminhar incinerao. 6.3. Limpeza dos instrumentos: Antes da esterilizao ou desinfeco de alto nvel, os instrumentos devem ser limpos vigorosamente para a retirada da sujeira e do material orgnico. O profissional deve decidir os objetos a serem utilizados durante o atendimento e determinar aqueles que podem (1) ser apenas cobertos por invlucros, (2) esterilizados e aqueles que podem ser (3) desinfetados. No Manual de Controle de Infeco Hospitalar do Ministrio da Sade (1985), os artigos hospitalares so classificados segundo o risco potencial de transmisso de infeco que apresenta. Como no consultrio odontolgico o contato entre o instrumental e o paciente constante, consideramos que a classificao proposta pelo Ministrio da Sade para artigos hospitalares pode ser aplicada na Odontologia. A classificao a seguinte: Artigos crticos: so todos aqueles que penetram nos tecidos subepiteliais, no sistema vascular e em outros rgos isentos de microbiota prpria, bem como todos que estejam diretamente conectados com eles. Estes artigos devem estar obrigatoriamente estreis ao serem utilizados. Exs: instrumentos, agulhas, brocas, bisturis, seringas, etc. Artigos semi-crticos: so todos aqueles que entram apenas em contato com mucosa ntegra. Estes artigos tambm devem estar estreis ou o mais possvel livre de microrganismos (desinfeco). Artigos no-crticos: so todos os que entram em contato apenas com pele ntegra e ainda os que no entram em contato direto com o paciente. Estes artigos devem estar isentos de agentes de doenas infecciosas transmissveis (desinfeco). Exs: mobilirio, cadeira, telefone, sanitrios, etc. 7. ANTISSEPSIA Para a profilaxia das infeces, utilizamos os antisspticos sempre antes de qualquer procedimento como incises, injees, punes, raspagens, polimentos, moldagens. A importncia da antissepsia bucal antes da realizao de procedimentos operatrios ilustrada por trs fatos bem comprovados: mesmo procedimentos aparentemente no invasivos (como profilaxia ou raspagem) provocam bacteremias de magnitude semelhante a procedimentos mais invasivos;

quando se usam peas de mo, grande a contaminao at 1,5 m de distncia; nmero de microrganismos viveis da cavidade bucal aps a antissepsia diminudo em 99% na regio cervical dos dentes e, em 96% nos aerossis e gotculas decorrentes da utilizao de pontas. Os antisspticos bucais so utilizados atravs de bochechos e/ou aplicao tpica, e no devem ser irritantes, txicos, alergizantes, produzir leses celulares, interferir na defesa do organismo ou prejudicar reparao ou cicatrizao, alm de ter rpido incio de ao, boa penetrao nos tecidos e ao residual. So considerados antisspticos bucais: os iodforos, a clorexidina, o cloreto de cetilpiridnio. 8. RECURSOS MATERIAIS E PROTOCOLOS PARA SE MANTER A CADEIA ASSPTICA A preveno da infeco cruzada feita pelo emprego dos processos de esterilizao e de todos os procedimentos destinados a manter a cadeia assptica. 8.1. Equipamentos de proteo individual So eles: avental, gorro, mscara, culos de proteo e luvas. O uso desses equipamentos indicado para a higiene e proteo da equipe de Sade e dos pacientes durante os atendimentos. 8.2. Gerenciamento de superfcies As partculas produzidas pelo uso de equipamentos rotatrios pemanecem viveis no ambiente. Alm disso, h relatos a respeito da sobrevivncia de microrganismos sobre superfcies, mostrando que uma grande variedade deles consegue sobreviver durante um tempo prolongado em diversos materiais de uso rotineiro em Odontologia, tais como fichas clnicas, peas de mo, papel e descartveis como gases e luvas, e ainda sobre a pele. Antes de cada atendimento deve-se: desinfetar as peas de mo, as seringas de ar/gua, o refletor e os comandos, as bandejas de instrumentos e superfcies, os suportes das peas de mo e seringas, os braos e alavancas da cadeira, o suporte da cabea, as torneiras do lavatrio, as superfcies dos armrios e puxadores das gavetas, a cuspideira, etc. Papel impermevel, folha de alumnio ou plstico devem ser usados para proteger itens e superfcies que so difceis de limpar ou desinfetar e, que podem ser contaminados com sangue ou saliva durante o uso. No intervalo entre o atendimento de dois pacientes, essas coberturas de proteo devem ser removidas (com o profissional ainda enluvado), descartadas, e novas coberturas devem ser colocadas. As barreiras garantem-nos segurana, mais economia de tempo e dinheiro.

8.3. Instrumentos e acessrios Procedimento com o material: coloc-lo aps uso em cuba com desinfetante durante 30 minutos, aps o que lavar e acondicionar para esterilizao, utilizando-se preferencialmente uma luva grossa de borracha. Utilizar sempre instrumental esterilizado. 8.4. Contaminaes Contaminao de pele com saliva ou sangue: lavar imediata e abundantemente a regio com gua e sabo lquido, promover a antissepsia com cool-iodado 0,3% ou similar; Ferimentos com instrumental cortante ou perfurante: lavagem imediata e abundante com gua e sabo lquido, seguido de lcool-iodado a 0,3% ou similar; Contaminao dos olhos com sangue ou saliva; deve-se usar colrio a base de nitrato de prata a 1%.

BIBLIOGRAFIA 1. 2. Calmes Jr., R.B. & Lillich, T. Desinfeco e esterilizao na prtica odontolgica. Trad.: Jos Bonifcio Fonseca. So Paulo, McGraw Hill do Brasil, 1979. Center for Disease Control (CDC). Immunization of health-care workers. Recommendations of the Advisory Commitee on Immunization Practices (ACIP) and the Hospital Infecction Control Practices (HICPAC). MMWR, v.46, n. RR-18, p.1- 44, 1997. Crawford, J.J. Sterilization, desinfection, and asepsis in dentistry. In: MC GHEE, J.R. et al. Dental Microbiology. Washington, Harper e Row, 1982, p.189-208. Guandalini, S.L. Biossegurana em Odontologia. Curitiba: Dental Books/Odontex, 1998. Nisengard, R.J. & Newman, M.G. Oral microbiology and imunology, 2o edition, Philadelphia, 1994. Secretaria de Estado da Sade. Resoluo SS-186, de 19/7/1995. Dirio Oficial do Estado. So Paulo, 2 agosto 1995, p.14. Teixeira, M. & Santos, m.v. Responsabilidade no controle de infeco. Revista da APCD, v.53, n.3, p.177-189, Mai/Jun, 1999. Wistreich, G.A. & LECHTMAN, M.D. Mtodos fsicos de controle microbiano. In: Microbiologia das doenas humanas. 2o ed. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, 1980, p.262-273.

3. 4. 5. 6. 7. 8.

QUESTES 1. Qual o conceito de infeco cruzada e contaminao cruzada? 2. Como esto classificados os artigos hospitalares (aplicveis em Odontologia) no Manual de Controle de Infeco Hospitalar do Ministrio da Sade (1985)? 3. Quais os processos e procedimentos destinados a manter a cadeia assptica? 4. Conceitue esterilizao e descreva os mtodos de esterilizao utilizados. 5. Descreva um programa de controle de infeco a ser realizado em seu consultrio.

ANTIBITICOS E QUIMIOTERPICOS Mesmo antes do estabelecimento das bases microbianas das doenas infecciosas, o homem j empregava determinadas substncias qumicas na tentativa de regredir quadros de malria pelo quinino, e amebases pela emetina. Contudo, foi somente no final dos sculo IXX e incio do sculo XX que os pesquisadores comearam a estabelecer possveis relaes entre molculas especficas e controle de microrganismos. Os primeiros sucessos em teraputica antimicrobiana com substncias de estrutura qumica conhecida so atribuveis a Paul Ehrlich que props a administrao de uma droga experimental a base de arsenato - o Salvarsan - no controle da sfilis. Em 1929, Alexander Fleming, um dedicado bacteriologista, observou que quando colnias do fungo filamentoso Penicillium notatun apareciam como contaminantes na superfcie de seus meios de cultura, ocorria uma inibio no desenvolvimento de colnias de Staphylococcus aureus isolado de leses. Essa observao cuidadosa levou Fleming a supor que o fungo eliminava para o ambiente alguma substncia que se mostrava txica para a bactria. Desde ento, a pesquisa de antimicrobianos centrou-se principalmente na busca de novas biomolculas e na possibilidade de se alterar tais molculas, tornando-as mais eficazes. Antes de iniciarmos o estudo mais aprofundado das drogas antimicrobianas, e mais propiamente das antibacterianas, devemos retornar aos conceitos que permitem a construo das curvas de crescimento. de se esperar que a administrao de qualquer antimicrobiano seja feita na fase lag (fase de demora) ou na fase de acelerao que precede a fase de crescimento exponencial, visto que nesses dois momentos a populao celular relativamente menos numerosa e as propabilidades de sucesso so maiores, sem contarmos com o menor risco de aparecimento de estirpes resistentes. O objetivo maior da teraputica antimicrobiana a destruio total do nmero de clulas infectivas sem comprometimento tissular para o hospedeiro. essa propriedade, damos o nome de toxicidade seletiva. Contudo, nem todos antimicrobianos levam efetivamente morte do microrganismo em questo, e sua ao restringe-se a coibir os mecanismos de reproduo, sem contudo induzir a morte imediata, e sim por senescncia. Para uma clula microbiana, a morte significa a perda irreversvel da capacidade de reproduo (crescimento e reproduo). Contudo, esse conceito deve ser

melhor avaliado posteriormente quando discutirmos caractersticas microbicidas e microbiostticas. Molculas com potencial inibitrio podem ser classificadas de diferentes maneiras, de acordo com sua natureza, espectro de ao, efeito biocida/biosttico, etc.: QUANTO NATUREZA: Naturais: So molculas produzidas a partir do metabolismo secundrio de organismos vivos (na maioria microrganismos) como forma de inibir o crescimento ou mesmo de destruir outros organismos concorrentes, mesmo em baixas concentraes. So mais conhecidos como ANTIBITICOS, e so sintetizados principalmente por fungos filamentosos (p.ex. penicilina), bactrias (p.ex. bacitracina) ou actinimicetos (p.ex. estreptomicina). Semi-sintticos: So produtos derivados da manipulao molecular de antibiticos naturais com vistas ao aumento da capacidade inibitria ou reduo da toxicidade ao paciente. Os melhores exemplos so as cefalosporinas de segunda, terceira e quarta gerao. Sintticos: So molculas produzidas exclusivamente por sntese qumica, no ocorrendo similares na natureza. So mais conhecidas como QUIMIOTERPICOS e como exemplo podemos citar as sulfonamidas (sulfas) e o metronidazol. Quanto a sua natureza qumica, podemos ainda classificar as molculas segundo sua biossntese, sendo os principais: Derivados de aminocidos: bacitracina, penicilinas, cefalosporinas, cloranfenicol, ciclosserina, colistina, e polimixina. Derivados de carboidratos: canamicina, estreptomicina, gentamicina, neomicina, e lincomicina. Derivados do acetato e propionato: antibiticos macroldicos, cido fusdico, antibiticos polinicos, griseofulvina, e teraciclinas. QUANTO AO ESPECTRO DE AO: Antimicrobianos de amplo espectro: So aquelas molculas que inibem o crescimento populacional de microrganismos (nesse caso, bactrias) indistintamente. Os principais so: cloranfenicol, tetraciclinas, canamicina, gentamicina, macroldicos, e ampicilina.

Antimicrobianos com atividade predominante sobre Gram positivos: So molculas que posuem maior seletividade por bactrias que apresentam parede celular rica em peptidioglicanos que por bactrias que no possuam tais estruturas-alvo. Exemplos: penicilinas, cefalosporinas, eritromicina, bacitracina, cido fusdico, lincomicina, e vancomicina. Antimicrobianos com atividade predominante sobre Gram negativos: So molculas como a colistina e a polimixina. Antimicrobianos com atividade predominante sobre micobactrias: So molculas que podem infiltrar-se nas clulas de mamferos e controlar o crescimento de micobactrias. Como exemplo temos a rifampicina, a ciclosserina e a estreptomicina. Antimicrobianos com atividade antifngica: So molculas que possuem atividade seletiva contra clulas de fungos micelianos e leveduras. Exemplos: actidina, griseofulvina, imidazlicos (cetoconazol, imidazol, miconazol) e antibiticos polinicos (anfotericina B e nistatina). Antimicrobianos com atividade antiamebiana: So molculas eficazes contra protozorios intestinais como a fumagilina, paromomicina e puromicina. De maneira quase que generalizada, podemos observar que antibiticos de amplo espectro embora eficientes contra uma grande gama de microrganismos, apresentam atividade biosttica, ao passo que antibiticos de espectros mais restritos passam a apresentar maior caracterstica biocida. QUANTO AO EFEITO BIOCIDA/BIOSTTICO: Para que uma droga seja considerada biocida, necessrio que a mesma tenha acesso a clula alvo e que provoque alteraes irreversivelmente letais nessa. Os antimicrobianos de ao biocida tendem a exercer seu efeito atravs da inibio da formao de membrana citoplasmtica ou da parede celular em organismos sensveis. Como exemplo podemos citar as penicilinas e cefalosporinas que inibem a formao de parede celular em bactrias Gram-positivas levando-as a ruptura, ou os inibidores de formao do lanosterol de parede, em fungos. Drogas biostticas, por sua vez, modulam negativamente a atividade de sntese de protenas ou de cidos nucleicos, o que mantm a clula infectiva retida (arrested) numa dada fase do ciclo celular com o impedimento de que a mesma prossiga a diviso celular e seja conduzida senescncia. Contudo, a reteno dessas clulas dependente

da susceptibilidade celular para essas drogas biostticas bem como da manuteno dos nveis de concentrao da droga at a senescncia celular. Em alguns casos especficos, molculas biostticas podem apresentar caractersticas biocidas, dependendo da concentrao utilizada. Com base nas informaes acima, podemos inferir que um antibitico/quimioterpico ideal deve ser aquele que apresente alta toxicidade seletiva; que seja eficiente em baixas concentraes; que apresente um espectro de ao que permita a conteno da proliferao celular daquele microrganismo em particular e no de comensais avirulentos; que apresente boa substantividade (poder residual); e que esteja disponvel a baixos custos. Seleo de drogas To logo os antibiticos passaram a ser empregados na teraputica antimicrobiana, foram relatados os primeiros casos de resistncia aos mesmos. O clnico passou a ter ento dois problemas fundamentais na escolha da droga mais eficiente: a eleio daquela com maior toxicidade seletiva, em de seu funo do espectro de ao, e a eleio daquela que no estivesse relacionada com resistncia por parte do microrganismo em questo. O recurso de escolha para atender o segundo problema o teste de susceptibilidade denominado antibiograma, muito embora o termo resistograma seja melhor empregado. Uma vez determinado o gnero ou a espcie do patgeno, pode-se eleger uma lista de antibiticos mais efetivos, em funo do espectro. Num segundo momento, atravs do antibiograma, pode-se selecionar qual a droga de melhor escolha dentre aquelas apontadas previamente, em funo da susceptibilidade daquela estirpe microbiana em particular. Testes de difuso de antibiticos em gar permitem reconhecer a susceptibilidade nominal do agente etiolgico e testes de crescimento frente a diferentes concentraes da droga eleita permitem a determinao das concentraes mnimas dessa droga que inibem desenvolvimento microbiano in vitro. Questes: 1. O que diferencia um microbicida de um microsttico, do ponto de vista da interao com o microrganismo?

2. Explique detalhadamente cada uma das caractersticas que um antimicrobiano ideal deve apresentar. 3. Quando devemos lanar mo do uso do antibiograma? 4. O que voc entende por efeito biocida concentrao-dependente? 5. O que concentrao inibitria mnima?

PRINCIPAIS CLASSES DE ANTIBITICOS E QUIMIOTERPICOS

1. ANTIBACTERIANOS
1.1. PENICILINAS origem Penicillium notatun, Aspergillus niger caractersticas das molculas anel tiazolidnico e beta-lactmico mecanismo de ao inibio da transpeptidao, na formao do peptioglicano da parede celular (efeito bactericida) principais drogas e espectro de atividade penicilina G: Streptococcus spp., Neisseria spp., penicilina V: Streptococcus spp., Neisseria spp., anaerbios ampicilina: Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Neisseria spp. meticilina: Staphylococcus aureus 1.2. CEFALOSPORINAS origem Cephalosporium acremonium caractersticas das molculas anel diidrotiaznico e beta-lactmico mecanismo de ao inibio da transpeptidao, na formao do peptioglicano da parede celular (efeito bactericida) principais drogas e espectro de atividade cefalexina (1 gerao): estafilococos, estreptococos, clostrdios cefoxitina (2gerao): Proteus (indol -), Serratia marcescens, Bacteroides fragilis cefotaxima (3 gerao): estafilococos, estreptococos, Pseudomonas aeruginosa 1.3. TETRACICLINAS origem Streptomyces aureofaciens, Streptomyces rimosus caractersticas das molculas derivados da naftacenecarboxiamida policclica mecanismo de ao impedimento do acesso tRNA ao stio aminoacil (A) para reconhecimento pelo complexo 30S ribossomo-mRNA (efeito bacteriosttico, em baixas concentraes e bactericida, em altas concentraes) principais drogas e espectro de atividade tetraciclina: bastonetes e cocos Gram-positivos, bastonetes e cocos Gramnegativos, anaerbios, actinomicetos, clamdias, riqutsias oxitetraciclina: idem tetraciclina

1.4. CLORANFENICOL origem Streptomyces venezuelae caractersticas da molcula derivado da cido dicloroactico com radical nitrobenzeno mecanismo de ao impedimento da formao da ligao dipeptdica, no stio peptidil (P) da subunidade 50S dos ribossomos (efeito bacteriosttico ou bactericida, dependendo da espcie) espectro de atividade bacteriosttico: bastonetes e cocos Gram-positivos, bastonetes e cocos Gramnegativos, anaerbios, clamdias, micoplasmas eriqutsias bactericida: Haemophilus influenza 1.5. AMINOGLICOSDIOS origem Streptomyces griseus, Streptomyces kanamycetycus, etc. caractersticas das molculas dois ou mais aminoacares unidos a um ncleo de hexose (aminociclitol) por ligao glicosdica mecanismo de ao induo de uma leitura defeituosa da do mRNA no stio peptidil (P) do ribossomo com sntese de protenas anmalas afuncionais (efeito bactericida devido a alta afinidade dos aminoglicosdios pelas protenas da sub-unidade 30S) principais drogas e espectro de atividade estreptomicina, gentamicina, canamicina amicacina: bastonetes Gram-negativos aerbios 1.6. RIFAMPICINA origem Streptomyces mediterranei caractersticas da molcula macroldio complexo com caractersticas de zwitterion (on com igual nmero de cargas positivas e negativas mecanismo de ao inibio da frao da RNApol DNA-dependente que responsvel pelo incio da formao da fita de mRNA (possvel atividade bactericida) espectro de atividade Staphyloccocus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus spp., Neisseria meningitidis, Mycobacterium tuberculosis 1.7. ERITROMICINA origem Streptomyces erythreus caractersticas da molcula macroldio com anel lactnico grande ligado a desoxiaccares mecanismo de ao

ligao reversvel com a sub-unidade 50S ribossmica e impedimento de acesso dos tRNAs (atividade bacteriosttica) espectro de atividade bastonetes e cocos Gram-negativos aerbios, bastonetes e cocos Gram-positivos, clamdias, treponemas e riqutsias clulas Gram-positivas acumulam at 100 vezes mais eritromicina que Gramnegativas 1.8. METRONIDAZOL origem sntese qumica caractersticas da molcula 1-(-hidroxietil)-2-metil-5-nitroimidazol mecanismo de ao protenas transportadoras de eltrons reduzem a poro nitroso da molcula, que passa a desestruturar a dupla hlice de DNA causando perdas de segmentos espectro de atividade parasiticida: Trichomonas vaginalis, Giardia lamblia, Entamoeba histolytica bactericida: Particularmente eficaz contra anaerbios (Bacteroides spp., Clostridium spp., Peptococcus spp., Peptostreptococcus spp.) 1.9. POLIMIXINA B origem Bacillus polimyxa caractersticas da molcula polipeptdios ligados ao cido , -diaminobutrico formando compostos cclicos mecanismo de ao a polimixina B age como um detergente catinico que liga-se fortemente aos fosfolipdios da membrana citoplasmtica bacteriana provocando sua ruptura (atividade bactericida) espectro de atividade Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella spp., Salmonella spp., Bordetella spp., Shigella spp., Enterobacter spp. 1.10. QUINOLONAS origem sntese qumica caractersticas das molculas derivados do cido 4-etil-1,4-diidro-7-metil-4-oxo-1,8-naftiridino-3-carboxlico mecanismo de ao bloqueio da ao da girase e da topoisomerase IV, o que impede a replicao bacteriana (atividade bactericida) principais drogas e espectro de atividade cido nalidxico (1 gerao), norfloxacino (2 gerao): bastonetes Gramnegativos no trato urinrio (Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp.,

Proteus indol-positivo e negativo), cocos Gram-negativos,, Nocardia spp., actinomicetos 1.11. SULFONAMIDAS origem sntese qumica caractersticas das molculas anel benznico ligado ao grupamento -SO2NH2 e ao radical -NH2, simetricamente dispostos em posio para mecanismo de ao as sulfonamidas so anlogos estruturais e antagonistas competitivos do cido para-aminobenzico, um precursor do cido flico (atividade bacteriosttica) espectro de atividade Sulfanilamida, sulfometoxazol: Streptococcus pyogenes, S.pneumoniae, Bacillus anthracis, Corynebacterium diphtheriae, Haemophilus influenzae, H. ducreii, Vibrio cholerae, Chlamydia trachomalis, Nocardia spp., Actinomyces spp. 1.12. LINCOMICINAS origem Streptomyces lincolnensis caractersticas das molculas derivado do cido trans-L-4-n-propiligrnico mecanismo de ao ligao reversvel com a sub-unidade 50S ribossmica e impedimento de acesso dos tRNAs (atividade bacteriosttica) principais drogas e espectro de atividade lincomicina, clindamicina: Streptococcus pyogenes, Streptococcus grupo viridans, Staphylococcus aureus, Prevotella melaninogenica, Fusobacterium spp., Bacteroides fragilis, Actinomyces israelli, Toxoplasma gondii 1.13. ISONIAZIDA origem sntese qumica caractersticas da molcula isopropil iproniazida (1-isonicotil-2-isoprropil-hidrazida) mecanismo de ao possvel ao sobre a sntese de lipdios, cidos nucleicos, cido miclico (parede de micobactrias) e interferncia na gliclise (atividade bacteriosttica/bactericida) espectro de atividade Mycobacterium tuberculosis - atividade tuberculosttica (clulas dividem-se 1 ou 2 vezes antes da parada da multiplicao); atividade tuberculicida (somente sobre clulas em fase de crescimento ativo).

2. ANTIFNGICOS
2.1. GRISEOFULVINA origem Penicillium griseofulvum caractersticas da molcula 7-cloro-2,4,6-trimetoxi-6-metilspiro[benzofuran-2(3H),-1-(2)ciclohexeno]3,4-diona mecanismo de ao inibio da mitose fngica por interao com microtbulos (atividade fungisttica) espectro de atividade Microsporum spp., Trichophyton spp., Epidermophyton floccosum 2.2. IMIDAZIS origem sntese qumica caractersticas das molculas derivados imidazolinilmetil do ter bis-(2,4-diclorobenzil) mecanismo de ao inibio das enzimas do sistema do citocromo P-450 que catalisam a 14-alfadesmetilao do lanosterol para a sntese de ergosterol de membrana (atividade fungicida) espectro de atividade Microsporum spp., Trichophyton spp., Epidermophyton floccosum, Candida spp., Paracoccidioides braziliensis, Histoplasma spp., Cryptococcus neoformans, Phialophora spp., Madurella spp. 2.3. ANTIFNGICOS POLINICOS origem Streptomyces noursei , Streptomyces nodosus caractersticas das molculas compostos cclicos de hidrocarboneto hidroxilado ligados seqncias de 4 a 7 duplas ligaes e aminodesoxi-hexose mecanismo de ao formao de poros na poro ergosterol da membrana citoplasmtica de fungos sensveis (atividade fungicida) espectro de atividade Nistatina: Microsporum spp., Trichophyton spp., Candida spp., Epidermophyton spp., Histoplasma spp. Anfotericina B: os mesmos da nistatina, mais Coccidioides immitis, Blastomyces dermatitides, Sporothrix schenckii

Questes
1. Quais as diferenas bsicas, quanto ao mecanismo de ao, entre os bactericidas e bacteriostticos? 2. Quais as diferenas entre penicilina G e penicilina V? 3. De que formas os ribossomos bacterianos podem ser comprometidos pelo uso de antibiticos? 4. Explique o mecanismo de ao das sulfas. 5. Quais as classes de antibiticos so mais indicadas no tratamento das tinhas?

RESISTNCIA A ANTIMICROBIANOS Aps a descoberta das molculas antimicrobianas, sejam antibiticos, sejam quimioterpicos, seu uso tornou-se muito disseminado e doenas que anteriormente eram tidas como de mau prognstico, passaram a ser controladas com sucesso. Contudo, juntamente desse boom dos antiinfecciosos, os clnicos comearam a observar o surgimento de determinadas linhagens microbianas que eram resistentes a tais drogas. Uma das primeiras drogas a serem amplamente utilizadas na clnica mdica a penicilina tambm foi a primeira a apresentar problemas de insucesso teraputico devido a resistncia bacteriana, principalmente por Staphylococcus aureus, um organismo extremamente difundido e responsvel por grande nmero de casos de feridas infectadas. Esforos internacionais foram dispensados, na tentativa de se compreender os mecanismos de aparecimento e disseminao desse fenmeno, bem como formas de evitlo. Os primeiros levantamentos mostraram que muitos casos de resistncia tinham ligao com o fato de que a mesma indstria farmacutica que produzia os antibiticos por fermentao, vendia a biomassa excedente de miclio de actinomicetos (lembre-se de que a maior parte dos antibiticos de uso humano e veterinrio produzida por actinomicetos) como complemento alimentar para o gado bovino e ovino. Contudo, dentro das clulas do miclio o DNA microbiano continua ntegro. Um leitor mais perspicaz atentaria para o fato de que esses microrganismos produtores de antibiticos tambm so naturalmente resistentes a ele. Retornemos ao miclio vendido como alimento. No interior do rmen do animal, bem como em seu estmago e intestinos, essas clulas mortas de actinomicetos liberam grandes segmentos de DNA que, por transformao (veja aula de gentica bacteriana II), podem ser capturados por outras clulas bacterianas que habitam tais cavidades. Pois bem, no demore muito e esse mesmo leitor deduzir que, por conjugao, essas bactrias transformadas podero agora transferir para outras bactrias inclusive aquelas com potencial patognico - essa caracterstica de resistncia, se a mesma encontrar-se codificada em um operon de transferncia (veja clulas F+, F- e Hfr). Outro mecanismo pelo qual uma clula pode se tornar resistente espontaneamente, pode ser explicado atravs da ocorrncia de mutaes menores que so comumente induzidas por agentes mutagnicos de uso disseminado. Nesses casos, a mutao induz a

sntese de molculas-alvo alteradas, sobre as quais os antibiticos no conseguem atuar, ou reduz significantemente a capacidade de carreamento da molcula antibitica para o meio intracelular. Uma vez vistos os mecanismos de surgimento primrio da resistncia bacteriana, voltamos ao ambiente clnico, onde o uso indiscriminado dos antibiticos (empregados at mesmo no tratamento equivocado das gripes comuns) alm de favorecer o surgimento primrio de resistentes, ainda colabora na seleo desses resistentes eliminando a maioria populacional que se mostra susceptvel. Esse apontamento apresenta profundas implicaes quando da hospitalizao de um indivduo, pois um dos ambientes mais seletivos para cepas resistentes justamente aquele onde o paciente deveria ser curado. Infeces hospitalares tendem, em sua maioria, a serem provocadas por linhagens resistentes a vrios antibiticos. Tais bactrias so comumente denominadas SUPERBACTRIAS. MECANISMOS DE RESISTNCIA ESPECFICOS PARA CADA CLASSE DE ANTIMICROBIANOS: Sulfonamidas: Foi observado que alguns plasmdeos conferem maior resistncia contra essa classe de quimioterpico. Quatro mecanismos foram propostos: 1. Alterao nas enzimas que processam o PABA, que passariam a no ligar-se s sulfonamidas; 2. Produo de enzimas que hidrolizariam as molculas das sulfonamidas; 3. Alterao na via metablica principal de sntese do PABA; 4. Aumento acentuado na produo do PABA, que competiria mais eficientemente com o quimioterpico. Foi observado que clulas resistentes s sulfonamidas podem produzir at setenta vezes mais PABA que suas clulas-me sensveis. Penicilinas e cefalosporinas: Clulas resistentes penicilinas e cefalosporinas podem apresentar dois mecanismos bsicos de desenvolvimento da resistncia. O primeiro deles envolve o bloqueio do acesso desses antibiticos sua molcula-alvo - a transpeptidase em bactrias Gram-negativas uma vez que a composio das camadas de revestimento externos dessas bactrias mais complexo que as das Gram-positivas. O segundo, e mais

comum em organismos Gram-positivos, envolve a secreo de enzimas sintetizadas a partir de genes contidos em plasmdeos transduzveis e que apresentam a capacidade de hidrolizar o anel beta-lactmico (lactamases) constante nas molculas dos antibiticos, inativando-os. Aminoglicosdios: Trs mecanismos bsicos so atribuveis resistncia por parte das bactrias frente aos antibiticos aminoglicosdicos: 1. A difuso transmembrnica desses antibiticos um processo ativo e oxigniodependente. Frente a essa premissa, podemos concluir que bactrias anaerbias e microaerfilas so naturalmente resistentes a aminoglicosdios; 2. Alteraes constitucionais (derivadas de mutaes) nas protenas ribossomais alteram os stios de ligao do antibitico; 3. Na membrana citoplasmtica pode ocorrer a inativao da molcula do antibitico atravs de mecanismos enzimticos de acetilao, adenilao ou fosforilao. Tetraciclinas: Mecanismos de resistncia esto relacionados com enzimas Tet (Tet A, B, C, e D) que afetam o transporte dessas drogas atravs da membrana citoplasmtica, e que parecem estar codificadas em plasmdeos. Cloranfenicol: Foi observado que organismos Gram-negativos apresentam um fator de resistncia (fator R) que pode ser disseminado por conjugao. Esse fator R codifica uma enzima (acetil-transferase) que promove a acetilao do cloranfenicol. O cloranfenicol acetilado no pode ligar-se s protenas ribossomais para exercer seu efeito. Rifampicina: A resistncia rifampicina parece estar associada a mutaes nos genes da poro beta da RNA polimerase DNA-dependente que levariam a uma no ligao dessa com o antibitico. QUESTES: 1. COMO UMA BACTRIA PODE SER NATURALMENTE RESISTENTES A UM DADO ANTI-INFECCIOSO?

2. COMO

UMA

BACTRIA AS

PODE-SE

TORNAR

RESISTENTE OS

ESTREPTOMICINA (RESISTNCIA ADQUIRIDA)? 3. EXPLIQUE COMO LACTAMASES HIDROLIZAM ANEIS LACTMICOS DE PENICILINAS E CEFALOSPORINAS. 4. POR QUE O AMBIENTE CLNICO TIDO COMO DE ALTO RISCO PARA A SELEO DE CEPAS RESISTENTES? 5. COMO O USO INDEVIDO DE ANTIMICROBIANOS PODE INDUZIR A REISTNCIA?

INTRODUO A MICROBIOLOGIA MDICA Questes referente a aula do dia 27/04/2000 1 Qual a diferena entre infestao, infeco e doena infecciosa ? 2 Conceitue: a microbiota indgena ou residente b parasitismo facultativo e estrito c patogenicidade d patgenos e virulncia f - dose letal (DL50) 3 Explique o significado de contaminaco, desinfeco, anti-sepsia e assepsia. 4 Relacione a resistncia, a vulnerabilidade e a dureza do dente. 5 Defina o significado de: a portador assintomtico b imunidade e seus tipos c resistncia d transmissibilidade e epidemiologia f epidemia g endemia h pandemia i morbidade j perodo de incubao l perodo de transmisso m profilaxia n meios de propagao da doena transmissvel o adesividade bacteriana adesinas e lectinas

MICROBIOLOGIA MDICA
ESTAFILOCOCOS

Famlia: Micrococcaceae Definio do Gnero:

Gnero: Staphylococcus

Estafilococos (gr. staphyle, uva) so cocos Gram-positivos, imveis, agrupados em massas irregulares ou em cachos de uva. Aerbios ou anaerbios facultativos, catalase positivos. Fermentam a glicose com produo de cido, tanto em aerobiose, como em anaerobiose, e nisso se diferenciam dos microrganismos do gnero Micrococcus, que s fermentam em aerobiose.

Morfologia
Clulas esfricas de cerca de 1um de dimetro para os estafilococos patognicos, maiores e desiguais em se tratando de estafilococos ou micrococos saprfitas. As culturas jovens de certas cepas podem exibir cpsula, porm de um modo geral, consideram-se os estafilococos como acapsulados. Gram-positivos nas culturas recentes, tendem a perder essa propriedade nas culturas velhas.

Cultura
Crescem bem nos meios de culturas mais comuns, como o caldo simples ou gar simples, pH 7, temperatura tima de 37oC. Em placa de gar simples, aps 24 horas na estufa a 37oC, produzem colnias de cerca de 1-3mm de dimetro,

convexas, da superfcie livre e bordos circulares, opacas e brilhantes. Deixando as placas um ou dois dias temperatura ambiente, as culturas de estafilococos patognicos, recm isoladas, geralmente desenvolvem um pigmento amarelo, ao passo que os estafilococos saprfitas formam colnias brancas.

Principais Espcies de Estafilococos

Atualmente o gnero Staphylococcus composto por cerca de 27 espcies, sendo algumas freqentemente associadas a uma ampla variedade de infeces de carter oportunista, em seres humanos e animais. As principais espcies de estafilococos encontrados em seres humanos so os Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus saprophyticus. O S. epidermidis encontrada primariamente como residente da pele, tendo um baixo potencial patognico, assim como o S. saprophyticus, que faz parte da microbiota normal da regio periuretral do homem e da mulher e da pele. Ao contrrio, o S. aureus um patgeno em potencial e pode ser encontrado na regio da nasofaringe e tambm nas fossas nasais (quadro 1). QUADRO 1 Comparao dos Estafilococos de Seres Humanos

Staphylococcus aureus
Coagulase positivo Fermentador de manitol DNAse-positivo Encontrado na nasofaringe superior Patognico

Staphylococcus epidermidis
Coagulase negativo No fermentador de manitol DNAse-negativo Encontrado na pele No patognico

Staphylococcus aureus Caractersticas Principais

O Staphylococcus aureus o agente mais comum em infeces piognicas. Estas infeces podem se localizar na pele ou em regies mais profundas. Quando na pele recebem diferentes designaes, tais como foliculite, furunculose, carbnculo e impetigo, de acordo com a localizao e outras caractersticas. A foliculite a inflamao de um folculo piloso, que surge em decorrncia de sua obstruo. O furnculo, ou abscesso, a infeco dos folculos pilosos e das glndulas sebceas obstrudas, com envolvimento do tecido celular subcutneo. Quando o furnculo apresenta vrios tipos de drenagem, recebem a designao de carbnculo estafiloccico, particularmente quando localizado na nuca e parte superior das costas. O hordolo, ou terol, a infeco de uma glndula sebcea marginal das plpebras. Em indivduos debilitados por doenas crnicas, traumas fsicos, queimaduras ou imunossupresso, esse microrganismo pode causar infeces de carter mais grave. Entre as infeces profundas destacam-se a osteomielite, a bacteremia (freqentemente associada a abcessos metastticos), a endocardite, a pneumonia e, ocasionalmente, a meningite e a artrite bacteriana. A osteomielite pode ser primria, ou hematognica, e secundria. No primeiro caso, a doena surge em conseqncia da disseminao do Staphylococcus aureus a partir do foco de infeco, geralmente localizada na pele. A osteomielite secundria decorrncia de traumas penetrantes, processos cirrgicos ou da presena de um foco de infeco contguo. A bacteremia pode ter origem de qualquer infeco estafiloccica localizada, tais como abscesso, pneumonia e outros. De modo geral, a doena progride lentamente com febre alta e a formao de abscessos metastticos ao nvel de vrios rgos. Bacteremias protradas podem

determinar o aparecimento de endocardites, com o envolvimento das vlvulas cardacas, particularmente a artica. As endocardites tambm podem surgir em conseqncia de prteses e processos cirrgicos. A pneumonia mais freqente no primeiro ano de vida, sendo as viroses fatores predisponentes pneumonia por esse microrganismo. Muitos pacientes com pneumonia estafiloccica referem histria de infeces cutneas pelo Staphylococcus aureus. Alm dessas infeces, o Staphylococcus aureus pode causar vrios tipos de intoxicaes, seja na vigncia de um processo infeccioso ou no. A primeira possibilidade pode ser exemplificada pela sndrome da pele escaldada ou doena de Ritter e caracterizada pelo deslocamento de extensas reas de epiderme, sendo determinado por uma toxina, denominada esfoliatina, produzida na rea da infeco e levada para reas distantes pela corrente sangnea. As intoxicaes que ocorrem na ausncia de processos infecciosos so de dois tipos: intoxicao alimentar e sndrome do choque txico. A primeira provocada pela ingesto de toxinas previamente formadas no alimento contaminado pelos Staphylococcus aureus. Essas toxinas so chamadas enterotoxinas, conhecendo-se, atualmente, cinco, imunologicamente distintas (A, B, C, D, E). Algumas evidncias sugerem que essas enterotoxinas so superantgenos, elas so termoestveis e , assim, a intoxicao alimentar pode ser veiculada por alimentos cozidos. Na sndrome do choque txico o paciente, geralmente mulher no perodo menstrual, apresenta febre alta, diminuio da presso sistlica, eritema com descamao da pele, insuficincia renal, diarria e outras manifestaes. As manifestaes so atribudas a toxina TSST-1 produzida ao nvel da vagina. Embora a grande maioria dos doentes seja constituda por mulheres em perodo menstrual, sem sinais de infeco estafiloccica, a doena tem sido registrada em pacientes com infeces de pele, ossos e pulmes.

Fatores de Virulncia
As clulas de Staphylococcus aureus apresentam alguns componentes de superfcies assim como produzem vrias substncias extracelulares, que contribuem para a sua virulncia. Cpsula algumas amostras de Staphylococcus aureus possuem cpsula, de natureza polisscardica, proporcionando maior resistncia a fagocitose. Peptideoglicano ativa a via alternativa do complemento provocando uma reao inflamatria do hospedeiro. cidos teicicos (ribitol e glicerolfosfato) so componentes da parede celular e parecem estar envolvidos na ativao do complemento e na aderncia. Protena A uma protena de superfcie, sendo encontrada na maioria das amostras de S. aureus. composta por uma cadeia polipeptdica com um peso molecular em torno de 58 mil Daltons, sendo responsveis pela interao com a poro Fc da molcula de IgG. Tem sido demostrado que esta reao, direta e indiretamente, provoca efeitos quimiotticos, anticomplementar, antifagocitrio, liberao de histamina, reaes de hipersensibilidade e leso plaquetria. Adesinas torna os microrganismos capazes de se ligar s fibronectinas (glicoprotenas da membrana celular, plasma, saliva) e laminina (glicoprotena da membrana celular). Enzimas e toxinas extracelulares a mais conhecida a coagulase, caracterstica da espcie, e provoca a coagulao do plasma. Outras enzimas incluem a catalase, desoxirribosenucleases, hialuronidase, lipase, proteases, betalactamase e a estafiloquinase. Hemolisinas hemolisina alfa e beta, sendo txica para animais e plaquetas humanas.

Leucocidina uma toxina que possui a capacidade de desgranular os neutrfilos e macrfagos humanos e de coelhos

Resposta Imunolgica
As infeces causadas por esses microrganismos podem determinar o aparecimento de anticorpos sricos e a imunidade celular contra as enzimas, toxinas e outros antgenos da bactria. O papel das reaes imunolgicas ainda no est bem esclarecido, mas a opsonizao desse microrganismo mediada pelo complemento e no por anticorpos. Acredita-se que a deteco de anticorpos circulantes, dirigidos para os cidos teicicos da parede celular, possa ser til para a monitorao do curso de infeces estafiloccicas e para diferenciar as infeces profundas e de curso prolongado.

Diagnstico Laboratorial
O diagnstico das infeces estafiloccicas feito pelo isolamento e caracterizao. O isolamento realizado nos meios de culturas comuns, como por exemplo, o gar sangue e por meios seletivos, como o gar manitol salgado. A caracterizao pode ser feita atravs de testes bioqumicos como o da catalase e coagulase entre outros. O diagnstico da intoxicao alimentar realizado pela pesquisa das enterotoxinas nos alimentos ingeridos e no vmito do paciente, sendo encontrado em grande quantidade (105 bacterias/g) no alimento que contm as enterotoxinas responsveis pelas manifestaes clnicas.

Epidemiologia
A transmisso do S. aureus ocorre por contato direto e por contato indireto. As infeces estafiloccicas superficiais, podem ser consideradas graves se acometerem recm-nascidos, pacientes cirrgicos e portadores de doenas debilitantes como o cncer e a diabete. Esta uma das razes pelas quais as infeces estafiloccicas severas so mais freqentemente adquiridas em hospitais. Em vrias situaes e, particularmente, no caso de surtos epidmicos de infeco hospitalar, ou de intoxicao alimentar, pode ser necessrio subdividir a espcie a fim de se identificar o foco da infeco, ou outro elo da cadeia epidemiolgica. Com o propsito de evidenciar diferenas ou similaridade entre as linhagens, vrios mtodos de tipagem foram desenvolvidos. Entre estes esto a biotipagem, a sorotipagem (baseada no antgeno polissacardico capsular e a resistotipagem (baseada no perfil de suscetibilidade a antimicrobianos).

Tratamento
Embora o Staphylococcus aureus possa ser suscetvel ao de vrias drogas ativas contra bactrias Gram-positivas (tais como penicilinas, cesfalosporinas, eritromicina, aminoglicosdios, tetraciclina e clorafenicol), tambm conhecido pela sua elevada capacidade de desenvolver resistncia a diversas delas. Portanto, a antibioticoterapia adequada das infeces estafiloccicas deve ser precedida da escolha da droga com base nos resultados de testes de suscetibilidade. A penicilina a droga de escolha se a linhagem for sensvel. As linhagens resistentes so produtoras de beta-lactamase (peniciliniase), uma enzima que inibe

a ao da droga, e so codificadas por genes plasmidiais. O emprego de meticilina e outras penicilinas semi-sintticas (tais como a oxacilina, nafcilina e cloxacilina), resistentes ao das peniciliniases, iniciada em 1959, representou uma etapa significativa na terapia antiestafiloccica. Porm a resistncia a esses antibiticos foi detectada dois anos aps o incio da sua utilizao. A resistncia meticilina relacionada a alteraes das protenas ligadoras de penicilinase (penicillin-binding proteins). Essas linhagens resistentes a meticilina (MRSA - Staphylococcus aureus meticilina-resistentes) , muitas vezes so resistentes a outros tipos de antibiticos. Para essas linhagens a droga de escolha a gentamicina e em caso de tratamento de infeces estafiloccicas de carter grave recomendado o uso da vancomicina.

Staphylococcus epidermidis Caractersticas gerais

O Staphylococcus epidermidis o habitante normal da pele e mucosas, sendo considerado a espcie de estafilococos coagulase negativos de maior prevalncia e persistncia na pele humana. Sendo assim, o seu isolamento a partir do processo infeccioso, deve ser interpretado com cautela, pois o espcime clnico pode ter sido contaminado no momento da coleta. Por outro lado, essa parece ser a espcie de estafilococos coagulase negativos com potencial de patogenicidade mais elevados, sendo, hoje, apontado como importante agente de bacteremia, de origem hospitalar, em servios de oncologia e neonatologia. tambm reconhecida a sua crescente freqncia em infeces associadas implantao de prteses cardacas, articulares e vasculares e de cateteres intravenosos e peritoniais. Alm disso, tem sido relatados casos de endocardite, associados com o isolamento dessa espcie de estafilococo.

Staphylococcus saprophyticus Caractersticas gerais

Vrios estudos mostram que esse estafilococo pode ser um patgeno oportunista em infeces do trato urinrio, especialmente em mulheres jovens, sexualmente ativas. considerado, depois da Escherichia coli, o agente mais freqentes de infeces urinrias, tais como a cistite e pielonefrite agudas, nessas pacientes. Esse microrganismo pode tambm causar infeco urinria no homem, particularmente em idosos com afeces predisponentes do trata urinrio. Sua patogenicidade deve estar relacionada a capacidade de aderir s clulas do epitlio do trato urinrio. Ocasionalmente, o Staphylococcus saprophyticus pode ser isolado de infeces de feridas e de casos de septicemia.

Questes:
1 Qual a morfologia e como podem ser cultivados os estafilococos? 2 Quais as principais doenas causadas pelos trs tipos de Staphylococcus nos seres humanos? 3 Quais os fatores de virulncia que apresentado pelo S. aureus? 4 Qual o tipo de tratamento freqentemente utilizado em infeces causadas pelo S. aureus?

ESTREPTOCOCOS

Introduo

Os estreptococos so bactrias Gram-positivas em forma de cocos que se dividem em apenas um plano. Como as bactrias no se separam facilmente aps o plano de diviso, elas tendem a formar cadeias e, assim, podem diferenciar-se dos estafilococos que comumente se dividem em diferentes planos formando grupamentos semelhantes a cachos de uva. So catalase-negativos, o que tambm os diferencia dos estafilococos que so catalase positivos. Constituem a principal populao de microrganismos da cavidade oral (Streptococcus sanguis, Streptococcus mutans), alm de

estarem envolvidos em diversas doenas. Entre os sistemas de nomeclatura desenvolvidos para os estreptococos destacam-se aqueles baseados caractersticas hemolticas (de acordo com o tipo de hemlise observado quando estreptococos so colocados em meios de cultura contendo gar sangue) e antignicas (de acordo com a composio antignica, que a base da classificao em grupos sorolgicos de Lancefield).

Hemlise e estreptococos Estudos mostraram que estreptococos isolados de doenas infecciosas de garganta e de pele freqentemente provocam lise completa das clulas vermelhas do sangue (hemlise). Este fenmeno era identificado em meio gar sangue como uma zona clara ao redor das colnias. Outros estreptococos provocavam um tipo de lise incompleta, na qual as clulas vermelhas se

retraem e se tornam esverdeadas (ocorre somente na presena de oxignio devido reduo da hemoglobina). A hemlise incompleta denominada alfa hemlise (-hemlise) e os estreptococos que a produzem foram denominados Streptococcus viridans, enquanto que a lise completa das clulas vermelhas foi denominada beta hemlise (-hemlise) e os organismos que a provocam

foram denominados Streptococcus hemolyticus. Atualmente sabemos que esses nomes so inadequados e que existem muitas espcies que causam hemlise alfa, outras causam hemlise beta e algumas espcies produzem os dois tipos de hemlise dependendo da cepa e das condies de crescimento. Existem tambm muitos estreptococos que no so hemolticos, os chamados de estreptococos gama ().

Esquema Sorolgico de Grupagem de Lancefield Como a hemlise no era suficiente para distinguir estreptococos causadores de doena, a Dra. Rebecca Lancefield desenvolveu um mtodo sorolgico para a distino dos estreptococos beta hemolticos. A classificao dos estreptococos em grupos sorolgicos baseia-se nas caractersticas antignicas de um polissacardeo de composio varivel chamado carboidrato C, localizado na parede da clula, que pode ser detectado por diferentes tcnicas imunolgicas como a precipitao em tubo capilar. Tomando por base esse polissacardeo, os estreptococos foram divididos em 20 grupos sorolgicos (grupos de Lancefield) designados por letras maisculas do alfabeto ( A, B, C, D, E, F, G, H, K, L, M, N, O, P, Q, R, S, T, U e V). Esse mtodo de identificao amplamente aceito para a identificao dos estreptococos beta hemolticos. Entretanto, salvo raras excees, no se

mostrou de utilidade prtica para a identificao de estreptococos no beta hemolticos. Os estreptococos de importncia mdica so divididos em : estreptococos beta-hemolticos ( ou estreptococos piognicos), pneumococos, estreptococos do grupo D e estreptococs viridans.

STREPTOCOCCUS PYOGENES
O Streptococcus pyogenes caracterizado pela presena do

polissacardeo do grupo A de Lancefield que um polmero de Nacetilglicosamina e ramnose. Ele pode ser dividido em grupos sorolgicos graas presena de duas protenas na sua parede celular, a protena M e a protena T.

Fatores de virulncia Entre os fatores de virulncia relacionados aos Streptococcus pyogenes temos: fmbria: possibilita a fixao da bactria mucosa faringoamigdalina; toxina eritrognica: responsvel pelo eritema da escarlatina; cpsula: confere resistncia a fagocitose; protena M: interfere com a fagocitose de modo que amostras ricas nesta protena so resistentes, tornando-se sensveis na presena de anticorpos anti-M; cidos lipoteicicos: importantes componentes da superfcie dos

estreptococos do grupo A, formando fmbrias juntamente com a protena M; peptideoglicano: txico para clulas animais in vitro e in situ;

estreptolisina S: a responsvel pelo halo de hemlise. Estudos recentes sugerem que ela responsvel pela morte de uma parte dos leuccitos que fagocitam o S. pyogenes;

estreptolisina O: tambm uma hemolisina, mas s ativa na ausncia de oxignio. Parece contribuir com a virulncia do S. pyegenes porque pode lesar outras clulas alm das hemcias.

estreptoquinase,

desoxirribonuclease

hialuronidase:

so

enzimas

produzidas pela maioria dos S. pyogenes estando provavelmente envolvidas na patognese das infeces estreptoccicas.

Tipos de infeces a) Faringite Estreptoccica: O Streptococcus pyogenes responsvel por mais de 90% das faringoamigdalites bacterianas. A doena caracterizada por um curto perodo de incubao (2 a 3 dias), febre alta (39 a 40C), calafrio, dor de cabea e, frequentemente, vmitos. As tonsilas ficam avermelhadas podendo apresentar exudado supurativo e os ndulos linfticos cervicais aumentam de tamanho tornando-se doloridos. Sugere-se que cerca de 20% dos casos so assintomticos (infeco subclnica). Duas fases caracterizam o estabelecimento da infeco. Na primeira ocorre a aderncia dos microrganismos mediada pelo cido lipoteicico, o qual se liga superfcie das clulas epiteliais via seus lipdios terminais. Existem evidncias de que a protena M e talvez o polissacardeo C estejam envolvidos na aderncia. A seguir, a bactria tem acesso aos tecidos conjuntivos adjacentes, provavelmente via rompimento microscpico do

epitlio, promovendo uma resposta inflamatria imediata e vigorosa desencadeada pelo hospedeiro para eliminar a bactria. Essa resposta caracterizada por um exudato fluido (edema) e principalmente, por um infiltrado celular de leuccitos polimorfonucleares (PMN). Na segunda fase da infeco ocorre o espalhamento, onde os estreptococos se multiplicam rapidamente no tecido conjuntivo. A viscosidade do exudado supurativo mantm a infeco localizada, porm, o S. pyogenes produz DNAses, proteases e estreptoquinases que hidrolizam esses componentes e permitem o espalhamento dos microrganismos. Se a infeco no for controlada pela administrao de antibiticos apropriados ou atravs da produo de quantidades suficientes de anticorpos para a protena M, os microrganismos podem penetrar os ndulos linfticos cervicais ou nos seios paranasais, chegando a causar septicemia, ou seja, circulao de bactrias virulentas no sangue.

b) Piodermites Fazem parte do grupo das piodermites estreptoccicas a erisipela, o impetigo e a ectima. impetigo: a mais caracterstica o impetigo, que se inicia como uma vescula que progride rapidamente para uma leso recoberta por crosta espessa. Aparentemente o S. pyogenes penetra pela pele atravs de leses determinadas por trauma, mordedura de insetos ou por dermatoses. O impetigo no costuma deixar cicatrizes por ser uma

infeco superficial e no atingir o tecido subepitelial. O impetigo ocorre com muita freqncia em crianas no vero, sendo de localizao

preferencialmente

facial,

embora

muitas

vezes

predomine

nas

extremidades, espalhando-se para outras reas do corpo por auto contaminao. Mesmo nas formas extensas raramente o impetigo acompanhado de manifestaes gerais. erisipela: uma infeco estreptoccica aguda de pele envolvendo a mucosas adjacentes algumas vezes. Os locais mais freqentemente comprometidos so a perna e a face. A leso dolorosa, de colorao vermelha intensa, aparncia lisa e brilhante e forma e extenso variveis. Muitas vezes a epiderme se descola, formando bolhas volumosas e tensas com contedo amarelo-citrino no-purulento podendo evoluir para ulcerao superficial. O mecanismo de

transmisso no conhecido mas a bactria parece originar-se das vias areas superiores do prprio paciente. A durao natural do processo de alguns dias, raramente atingindo uma semana, quando ento comea o perodo de regresso da doena at o retorno da pele ao aspecto normal. Em indivduos idosos, a erisipela pode ser acompanhada de bacteremia.

Seqelas Febre Reumtica: caracteriza-se por leses inflamatrias no supurativas envolvendo corao, articulaes, tecido celular subcutneo e sistema nervoso central. Os indivduos que sofrem um episdio de febre reumtica so particularmente predispostos a outros episdios, em conseqncia de infeces estreptoccicas subsequentes das vias areas superiores. Evidncias sugerem que a febre reumtica uma doena imunolgica

sendo que infeces estreptoccicas no tratadas so seguidas de febre reumtica em at 3% dos casos. Glomerulonefrite: pode aparecer depois da faringoamigdalite e das piodermites. Trata-se tambm de uma doena de natureza imunolgica. A freqncia de aparecimento bastante varivel, dependendo muito do sorotipo M do estreptococo causador da infeo prvia. Quando a infeo cutnea causada por um tipo altamente nefritognico, a freqncia pode ser superior a 20%. Tratamento Vrios antibiticos apresentam boa atividade contra o Streptococcus pyogenes, mas o de escolha a penicilina G. Um aspecto importante da teraputica pela penicilina o fato de que, at agora, no ocorreu seleo de amostras resistentes a esse antibitico, pelo menos em escala significante. Dessa maneira, infeces causadas pelo microrganismo podem ser tratadas sem a necessidade de antibiograma para verificar se a amostra resistente. Recomenda-se o uso de eritromicina para pacientes alrgicos penicilina.

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE
Essa espcie composta por cocos Gram-positivos com forma de chama de vela, agrupados aos pares. Os pneumococos, em geral, possuem cpsula composta de polissacardeos, cujas diferenas antignicas permitem caracterizar 84 tipos sorolgicos distintos. A tipagem sorolgica contribui para o rastreamento epidemiolgico das infeces pneumoccicas, evidenciando variaes geogrficas e/ou temporais na prevalncia de diferentes sorotipos. O conhecimento da prevalncia dos vrios sorotipos

em uma determinada regio serve de base para o desenvolvimento de vacinas.

Fatores de Virulncia cpsula: representa o principal fator de virulncia conhecido dos pneumococos em virtude de sua capacidade antifagocitria; substncia C: no um fator de virulncia mas tem interesse mdico; adesina: os pneumococos produzem uma adesina que fixa a bactria a receptores glicoproticos existentes nas clulas epiteliais dos aparelhos respiratrio e auditivo; pneumolisina: trata-se de uma hemolisina semelhante estreptolisina O do S. pyogenes cujo papel ainda no foi esclarecido; IgA1 Protease: enzima produzida pelos pneumococos capaz de degradar imunoglobulinas que fazem parte de um importante mecanismo de defesa do hospedeiro; neuraminidase: so substncias com papel no definido na patognese das pneumococcias.

Tipos de infeces O Streptococcus pneumoniae um dos agentes bacterianos mais frequentemente associados a infees graves como pneumonia, meningite, septicemia e otite mdia. Os pneumococos tambm tm sido relacionados a infees oculares e, ocasionalmente, isolados de fluido peritoneal, urina, secreo vaginal, exsudatos de feridas entre outros espcimes clnicos.

a) Pneumonia: Os pneumococos podem ser normalmente encontrados no trato respiratrio superior de seres humanos. A partir da, eles podem ser aspirados para os alvolos onde a bactria prolifera e determina a reao inflamatria caracterstica da pneumonia. Isso s ocorre se a bactria for capaz de escapar da fagocitose. Nos paciente no-tratados e que sobrevivem infeco, a pneumonia segue curso tpico que termina em cura uma semana aps o seu incio. A cura coincide com o aparecimento de opsoninas sricas especficas que promovem fagocitose do microrganismo envolvido no processo. Cerca de 30% dos pacientes com pneumonia apresentam bacteremia e, em alguns casos, a pneumonia pode causar complicaes como artrite, endocardite e meningite. O indivduo normal geralmente bastante resistente infeo pulmonar pelo pneumococo devido a mecanismos de defesa que incluem o reflexo epiglotal, movimento ciliar, reflexo da tosse, drenagem linftica e os macrfagos que patrulham os alvolos. Assim, os indivduos que adquirem pneumonia esto com os mecanismos de defesa comprometidos. A meningite, alm de surgir a partir de uma pneumonia bacteriana pode ser complicao de otites, sinusites e endocardites.

b) Otites e sinusites pneumoccicas So geralmente infees secundrias a alteraes funcionais no ouvido mdio e seios, sendo causados por pneumococos normalmente presentes nas vias areas superiores.

Tratamento A penicilina ainda o antibitico de escolha, em pacientes alrgicos penicilina usa-se a eritromicina. Nos ltimos anos houve relatos de que muitas cepa tornaram-se resistentes a mltiplos antibiticos, sugerindo transferncia mediada por plasmdeos. Devido ao surgimento de tais cepas e incapacidade de controle da doena em alguns pacientes, uma vacina foi desenvolvida.

ESTREPTOCOCOS DO GRUPO D
Os estreptococos possuidores de antgeno do grupo D eram, antigamente, divididos em duas categorias: os enterococos e os noenterococos. Com a alocao dos enterococos em uma novo gnero, os estreptococos do grupo D so, atualmente, em termos de importncia mdica, representados pelo Streptococcus bovis. Esses microrganismos so positivos para o teste de bile-esculina, para os testes de crescimento na presena de 6,5% de NaCl e produo de PYRase. Apresentam suceptibilidade antimicrobianos , sendo encontrados normalmente no trato gastro intestinal. Existe uma tendncia de se encontrar o S. bovis associado ao cncer de intestino grosso embora no haja evidncia de qualquer relao etiopatognica.

STREPTOCOCCUS VIRIDANS
Os Streptococcus viridans constituem um conjunto de microrganismos de caracterizao menos definida e padronizada que os demais estreptococos. Entre suas principais caractersticas destaca-se: em geral so alfa-hemolticos, no possuem antgenos dos grupos B ou D, no so solveis em bile e a maioria no cresce em caldo contendo altas concentraes de sal. Entre as principais espcies temos: Streptococcus mutans, Streptococcus salivarius, Streptococcus sanguis, Streptococcus mitis e Streptococcus anginosus. A maioria dessas espcies faz parte da flora normal das vias areas superiores, em particular, dos diferentes nichos ecolgicos da cavidade oral. Como agentes etiolgicos so associados bacteremia, endocardite subaguda , abscessos, infees do trato

genitourinrio e infees de feridas. As espcies Streptococcus sanguis e especialmente Streptococcus mutans tem papel importante na formao de placa dental devido a sua capacidade de sintetizar glicanas a partir de carboidratos.

QUESTES 1) Quais so os sistemas de nomeclatura desenvolvidos para os

estreptococos? Explique. 2) Quais os fatores de virulncia do Streptococcus pyogenes? 3) Quais os tipos de piodermites estreptoccicas? Explique. 4) Qual a principal doena provocada pelo Streptococcus pneumoniae? Qual o tratamento indicado?

5) Quais as principais espcies que constituem os Streptococcus viridans? Qual sua importncia para a odontologia?

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS NISENGAND & NEWMAN. Microbiologia Oral e Imunologia, 2 ed, Editora Guanabara Koogan S. A. Rio de Janeiro,395p, 1997. TRABULSI et a.l. Microbiologia, 3 ed, Editora Atheneu. So Paulo, Rio de Janeiro, Belo horizonte, 586p, 1999.

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE PIRACICABA

DISCIPLINA DE MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA

ANAERBIOS E CLOSTRDIOS

ANAERBIOS I - INTRODUO Bactrias anaerbias so organismos que requerem um meio ambiente livre de oxignio para o crescimento normal. Anaerbios estritos podem ser mortos na presena de oxignio e no utilizam oxignio para produo de energia. Existe uma grande variedade de nveis de tolerncia ao oxignio entre os microrganismos anaerbios. A toxicidade do oxignio para anaerbios estritos deve-se a certas molculas produzidas durante as reaes envolvendo oxignio, uma delas formando o radical superxido que pode causar dano s clulas e que do origem ao perxido de hidrognio H2O2 e aos radicais hidroxilas, OH, que podem destruir os componentes vitais da clula, inclusive o material gentico DNA. Os microrganismos aerbios produzem a enzima superxido dismutase que elimina os radicais superxido convertendo-os rapidamente em perxido de hidrognio, que pode ser metabolizado por duas outras enzimas: a catalase, que converte perxido de hidrognio em oxignio molecular e gua e a peroxidase, que converte perxido de hidrognio em gua. Anaerbios representam de 5 a 10% de todas as infeces clnicas. reas do corpo humano que apresentam uma microbiota normal anaerbica geralmente so mais susceptveis s infeces anaerbias. Infeces anaerbias geralmente tm as seguintes caractersticas: 1. Supurao com odor ftido 2. Localizao da infeco na proximidade da superfcie mucosa 3. Tecido necrtico, gangrena; formao de pseudomembrana 4. Gs nos tecidos ou supuraes

Entre os anaerbios de improtncia mdica destacamos: BACILOS ESPOROS) CLOSTRIDIUM BACILOS GRAM-POSITIVOS (NO FORMADORES DE ESPOROS) EUBACTERIUM PROPIONIBACTERIUM ACTINOMYCES COCOS GRAM-POSITIVOS PEPTOESTREPTOCOCCUS BACILOS GRAM-NEGATIVOS BACTEROIDES FUSOBACTERIUM COCOS GRAM-NEGATIVOS VEILLONELLA Clostridium O gnero compreende 85 espcies, algumas relacionadas com doenas especficas e outras com infeco de diferentes rgos e tecidos. So bacilos formadores de esporos, gram-positivos, embora existam espcies que se corem negativamente no momento da esporulao (Clostridium tetani) ou em culturas muito jovens (Clostridium ramosum e Clostridium GRAM-POSITIVOS BACILLI (FORMADORES DE

clostridiiforme). A maioria das espcies anaerbia estrita, embora existam espcies aerotolerantes (Clostridium tertium, Clostridium histolyticum e Clostridium carnis). A maioria das espcies saprfita, vivendo sobre substratos variados (gua, plantas, alimentos e solo); outras vivem como comensais no trato gastrintestinal e, s vezes, respiratrio do homem e dos animais. Os clostrdios patognicos so produtores de doenas de origem exgena clinicamente importantes como ttano, botulismo, gangrena gasosa associada a feridas traumticas e intoxicao alimentar por Clostridium perfringens, alm de infeces endgenas mais comuns que envolvem espcies da microbiota indgena. 1. Ttano Agente etiolgico: Clostridium tetani, do grego, "tetanua", contrao. Morfologicamente se apresentam como bastonetes medindo 3-4 m de comprimento por 0,5 a 1 m de largura. Gram-positivos com esporos terminais localizados na extremidade do bastonete (forma de plectrdeo), o que lhes confere aspecto de "raquete de tnis" ou "baqueta de tambor". Sua mobilidade assegurada por flagelos peritrqueos (30, 50 ou mais). 1.1 Patogenicidade: As manifestaes clnicas do ttano so o ttano generalizado, forma mais comum, e o ttano localizado, mais raro. Estas manifestaes so devidas ao de uma potente neurotoxina cuja dose letal para o homem acredita-se que seja menor que 0,0001 mg, a tetanospasmina, protena protoplasmtica, termolbil (65C - 10 min.), produzida na fase estacionria de

crescimento e liberada quando da autlise do clostrdio. O ttano uma doena infecciosa, no contagiosa, de importncia, pois ocorrem aproximadamente 300.000 casos da doena em todo mundo por ano. A bactria encontrada no solo e em fezes de herbvoros sob a forma de esporos. Seu perodo de incubao de 1-2 semanas. O bacilo tetnico s se multiplica na presena de um potencial de xido-reduo muito mais baixo do que o existente nos tecidos normais. A queda desse potencial ocorre devido a alteraes locais que normalmente ocorrem aps laceraes, fraturas expostas, feridas por armas de fogo, lceras varicosas, extraes dentrias, queimaduras e etc. Uma vez iniciada a multiplicao do bacilo na ferida, ele no tem capacidade invasora e produz a doena pela elaborao da tetanospasmina. Produz tambm outra toxina a tetanolisina, que possui ao ltica sobre hemcias in vitro e de ao clnica desconhecida. O trajeto que a toxina percorre da leso ao sistema nervoso central objeto de discusso. Admite-se que a toxina penetraria nas placas neuromusculares, caminhando em sentido centrpeto pelos axnios dos nervos motores da medula e se espalhariam pelo sistema nervoso. Esta seria a patogenia do ttano localizado. No caso do ttano generalizado mais provavelmente a toxina seria levada ao sistema nervoso por via sangnea. No sistema nervoso central a toxina, fixando-se aos gangliosdeos, bloqueia os impulsos dos neurnios transmissores, resultando em atividade excitatria no regulada (paralisia-espsmica), que se manifesta por espasmos prolongados dos msculos flexores e extensores. Os primeiros msculos a entrarem em espasmo so o masseter e outros da mastigao causando o chamado trismo, sintoma caracterstico do ttano. A fixao da toxina ao sistema nervoso

irreversvel e, uma vez fixada, no mais neutralizada e a morte resulta da incapacidade de respirar. 1.2 Resposta Imunolgica Um episdio de ttano no desperta imunidade. Embora a toxina seja antignica, no parece ocorrer estmulo para a formao de anticorpos durante a doena. Talvez a toxina no seja produzida em quantidade suficiente para isto ou que seja amplamente seqestrada pelo sistema nervoso, no entrando em contato com as clulas formadoras de anticorpos. 1.3 Diagnstico O exame bacteriolgico no solicitao comum, tendo pouca importncia, pois o diagnstico clnico relativamente fcil, permitindo o tratamento rpido, dispensando a anlise que demorada. Alm de a deteco microscpica ou o isolamento serem freqentemente mal-sucedidos, sendo isolado o agente em 70% dos pacientes com leses evidentes. 1.4 Tratamento O tratamento feito pela administrao de soro antitetnico ou de imunoglobulina antitetnica humana, desbridamento e remoo cirrgica do tecido necrosado e administrao de penicilina e clorofenicol. A primeira medida visa neutralizar a toxina no-fixada ao sistema nervoso e as outras, eliminar a sua fonte de produo. 1.5 Epidemiologia

O controle do ttano feito pela vacinao com o toxide tetnico, sendo recomendada a administrao de doses de reforo de dez em dez anos. A vacinao tambm deve ser feita em pacientes com ferimentos contaminados, particularmente se a ltima vacina foi administrada a mais de cinco anos. Pacientes com este tipo de ferimento, sem histria de imunizao, devero receber srie total de imunizao (trs doses de toxide), alm do tratamento com soro ou imunoglobulinas anitetnicas.

2. Gangrena Gasosa A Gangrena Gasosa causada por uma associao de bactrias do gnero Clostridium, cujas principais espcies so: a) agentes de infeco mista: C. perfringens (isolada em mais de 80% dos casos), C. novyi e C. septicum; b) agentes de infeco secundria: C. histolyticum, C. hastiforme, C. sphenoides, C. sporogenes, C. sordelli e outros (mais de 20 espcies de Clostridium); alm disso, outras bactrias tambm podem causar infeco secundria, como enterococos, enterobactrias, estafilococos e estreptococos. 2.1 Morfologia So bastonetes gram-positivos com esporos ovais subterminais com dimetro maior do que a clula vegetativa. 2.2 Cultura

Crescem numa variedade de meios slidos comuns, se o potencial de xido-reduo for suficientemente baixo. Ex.: gar glicosado em coluna alta e gar sangue glicosado, meio de Tarozzi. 2.3 Patogenia A infeco em geral resulta da introduo do Clostridium ou de seus esporos, atravs da contaminao das feridas com o solo. Tecidos gravemente traumatizados favorecem o crescimento bacteriano e tornam-se gradualmente favorveis para o Clostridium. A infeco caracteriza-se por necrose progressiva dos msculos, edema e formao de gs. Geralmente acompanhada de infeco secundria por enterococos, enterobactrias e cocos piognicos. As bactrias produzem enzimas lticas (colagenase, proteinases, hialuronidases, DNAse) e toxinas com propriedades necrosantes e hemolticas. A ao combinada das toxinas e enzimas resulta na dissoluo e fragmentao dos tecidos e na ruptura dos vasos sangneos. rapidamente destrutiva e apresenta odor desagradvel, se espcies proteolticas estiverem presentes. 2.4 Diagnstico Laboratorial Este exame dificultado por ser uma infeco mista. O isolamento pode ser realizado atravs do exame de exudatos de leses corados pelo Gram, cultivo em meio de cultura Tioglicolato ou meio de cultura garsangue em anaerobiose e aerobiose, sendo posteriormente, feita a diferenciao das espcies por provas bioqumicas. 2.5 Tratamento

Desbridamento cirrgico, completa remoo de tecido muscular infectado, aplicao local de sulfas. Antitoxina polivalente e penicilina sistmica para evitar bacteremia. 3. Botulismo O agente etiolgico o Clostridium botulinum, do latim, "botulus", salcicha. Atualmente so identificados 7 tipos (A at G) de acordo com a toxina produzida e caractersticas bioqumicas. O homem geralmente acometido pelo tipo A e B, mais raramente E; os outros tipos ocorrem esporadicamente. 3.1 Morfologia So bastonetes grandes (4 - 6 m de comprimento), grampositivos, apresentam flagelos peritrqueos e esporos subterminais produzindo deformao no corpo bacilar. 3.2 Cultura So cultivados em gar glicosado em camada alta, meio de Tarozzi, gar-sangue e gar-sangue glicosado em anaerobiose. 3.3 Patogenia O botulismo geralmente no uma doena infecciosa, mas sim uma toxicose aguda que se mantm por algumas horas (2-48 horas) aps a ingesto de certos alimentos, principalmente de conserva, incompletamente esterilizados. O perodo de incubao geralmente varia de 12-36 horas.

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O microrganismo encontrado no solo onde ganha acesso frutas, vegetais e legumes. Encontrado tambm em intestino de herbvoros e peixes. A ingesto da toxina leva a paralisias digestivas e oculomotores. Nuseas e vmitos acompanhados de constipao ou diarria. A morte ocorre em 30% dos casos em 3-7 dias, conseqente da insuficincia respiratria e parada cardaca. 3.4 Ao da toxina Age na juno mioneural nas clulas do sistema nervoso central, por bloqueio dos receptores pr-sinpticos da acetilcolina, associada a uma inibio sobre a colinesterase. 3.5 Diagnstico laboratorial - Deteco do bacilo no trato intestinal do paciente ou da comida por ele ingerida. - Injeo intraperitoneal das amostras em camundongos. - Semear em meio contendo 0,2% de amido solvel em anaerobiose. 3.6 Profilaxia Controle na esterilizao dos alimentos em conserva. A toxina botulnica inativada a 100C, durante 10 minutos. 3.7 Tratamento Realizado com o uso de antitoxina botulnica polivalente (geralmente dos tipos A, B e C).

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. INFECES POR ANAERBIOS NO-ESPORULANTES As bactrias anaerbias no formadoras de esporos constituem os organismos comensais mais freqentes do trato gastrointestinal (99,9%), genitlia feminina, boca e pele. Estes organismos incluem bacilos gramnegativos (Bacteroides, Prevotella e Fusobacterium), bacilos Gram-positivos (Actinomyces Propionibacterium acnes) e cocos gram-positivos (Peptoestreptococcus). Ao contrrio dos anaerbios formadores de esporos (a espcie Clostridium) os anaerbios no formadores de esporos no secretam toxinas. Estes organimos so em sua maioria, patgenos oportunistas, causando acne nos poros oleosos dos adolescentes (Propionibacterium), abscessos intra-abdominais secundrios a cirurgia e perfurao (Bacteroides fragilis e outros), aborto sptico e salpingite (Prevotella) e abscessos periodontais (Porphyromonas e Prevotella). O Bacteroides fragilis tipicamente um causador ou participante de sepse intra-abdominal e retroperitoneal, alm de peritonite plvica nas mulheres maiores de 20 anos; algumas vezes infecta feridas cirrgicas abdominais. Pode tambm estar presente nos abscessos pulmonares. Em todas essas leses, o pus em geral plido e ftido, especialmente nos abscessos pulmonares, e a supurao pouco delimitada. Em relao aos outros aspectos, estas leses assemelham-se patologicamente s produzidas pela infeces piognicas comuns.

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Espcies de Propionibacterium so os microrgansimso grampositivos anaerbios mais facilmente isolados em laboratrios. Estes microrganimos tm sido relacionados com casos de endocardite bacteriana e abscessos. Peptostreptococcus so geralmente encontrados como parte da microbiota indgena da pele, uretra e trato urogenital, sendo considerados patgenos oportunistas. Das espcies pertencentes ao gnero Fusobacterium, F. nucleatum o microrganismo de maior importncia clnica, sendo associados com infeces pleruropulmonares e infeces na cavidade bucal ( gengivite e periodontite). Espcies de Veillonella so cocos gram-negativos anaerobicos, pertencentes microbiota indgena da cavidade bucal, isoladas freqentemente em stios de infeco mista. A espcie mais comuns isoladas em humanos V. parvula. ESPIROQUETAS So bactrias anaerbias, Gram-negativas, espiraladas, longas e finas. Espiroquetas orais: Treponema denticola, T. vicentii, T. socranskii, T. pectinovorum, T. oralis, T. macrodentium. BACILOS PIGMENTO GRAM-NEGATIVOS PRODUTORES DE

NEGRO

Estes microrganismos so encontrados com freqencia como parte da microbiota indgena nas vrias superfcies mucosas, particularmente na cavidade bucal. Como em quase todas as outras infeces anaerbias ou mistas, as que atingem a cavidade bucal so provocadas por microrganismos

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pertencentes microbiota indgena do corpo sendo que estes variam siginificantemente em suas caractersitcas de virulncia. Entre os fatores de virulncia apresentados pelos anaerbios produtores de pigmento negro se destacam cpsula, lipopolissacardeo, fatores de adeso, proteases, colagenases, neuraminidase e fosfolipase A. Eles podem apresentar tambm atividade fibrinoltica e antifagoctica podendo ainda degradar fatores do complemento, IgG e IgM. Essas espcies bacterianas podem ser encontradas em quase todos os tipos de processos infecciosos, incluindo bacteremias, endocardites, abscessos intracranianos, pneumonias e fascites necrotizantes, geralmente como parte da microbiota mista infectante. Elas dominam ou so proeminetes em infeces envolvendo bactrias originrias da orofaringe, como nas infeces dentais, pleuropulmonares, do sistema nervoso central, da cabea e do pescoo. Os dados na literatura relatam que algumas espcies deste grupo esto fortemente associadas com infeces orais, principalmente com doena periodontal, infeces endodnticas e abscessos agudos, enquanto outras espcies no tm papel destacado nesses processos. Algumas dessas espcies so: Porphyromonas gingivalis considerada um dos mais importantes periodontopatgenos. Sua presena est fortemente associada com bolsas periodontais profundas, sendo isoladas em nmero crescente durante a evoluo do processo inflamatrio, assim como no aumento de profundidade de bolsas periodontais. Tambm so freqentemente isoladas de abscessos periodontais e de canais radiculares.

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Prevotella intermedia est associada a inflamao gengival moderada ou grave, gengivite ulcerativa necrozante aguda e periodontite crnica do adulto. Nomenclatura dos Bacilos produtores de pigmento negro Gnero Porphyromonas -P. asaccharolytica -P. endodontalis -P. gingivalis Gnero Provotella -P. denticola -P. disiens -P. intermedia -P. loescheii -P. melaninogenica

QUESTES 1. Qual os microrganismos anaerbios de importncia nas doenas periodontais destrutivas? 2. Cite as formas de infeco por Clostridium tetani. 3. Cite as principais caractersticas das leses causadas por infeces por microrganismos anaerbios esporulados. 4. Cite as caracterticas das infeces por anaerbios. 5. Comente sobre as principais toxinas liberadas pelas espcies do gnero Clostridium.

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BIBLIOGRAFIA 1. BIER, O. Bacilos esporulados Gram-positivos. In: Microbiologia e Imunologia. 23 ed. So Paulo, Melhoramentos, 1984. Cap. 33, p. 665-91. 2. BURNETT, G. et al. Clostidium. In: Microbiologia Oral e Doenas Infecciosas. 4 ed. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, 1978. Cap. 34, p. 528-42. 3. MC CARTY, M. Bacilos esporulados anaerbios. In: DE DAVIS, B. et al. Microbiologia: Infeces bacterianas e micticas. 2 ed. So Paulo, Harper e How do Brasil Ltda, 1979. Cap. 34, p. 989-1004. 4. 5. 6. Nisengard, R.J. Microbiologia oral e Imunologia. 2 ed., Editora Gauanbara-Koogan, 1997. Pelczar, M. J. Microbiologia. Vol. 1. Editora McGraw-Hill do Brasil, 1981. TRABULSI, L.R. et al. Microbiologia. 3 ed., Rio de Janeiro, Atheneu, 1999, pag. 295.

CORINEBACTRIAS As corinebactrias (gnero Corynebcterium) so bastonetes Gram-positivos, anaerbios facultativos, imveis, no esporulados, patognicos ou saprfitas. Algumas espcies fazem parte da microbiota normal da pele, nariz, nasofaringe, orofaringe, mucosa conjuntiva e trato geniturinrio. O nome Corynebacterium deriva do grego koryne, que significa clava. DIFTERIA Agente Etilgico O Corynebacterium diphtheriae a espcie mais importante do gnero Corynebacterium e o agente etiolgico da difteria (do grego diphthera, que significa pele ou membrana). Essa uma doena infecto-contagiosa aguda que atinge de preferncia crianas at 10 anos de idade e caracterizada por febre, inflamao de garganta (angina) e manifestaes toxmicas, com produo de uma pseudomembrana acinzentada composta de fibrina, bactrias, hemcias e leuccitos agrupados comumente sobre as amgdalas, faringe e laringe. Caractersticas Morfolgicas do Microrganismo O C. diphtheriae apresenta-se sob a forma de bastonetes imveis, de 1 a 6 m de comprimento por 0,3 a 0,8 m de largura, no possui cpsula ou esporo, e Gram-positivo. Caracteriza-se por possuir um corpo bacteriano reto ou ligeiramente curvo, com dilataes irregulares em uma das extremidades, com acentuada tendncia pleomrfica (forma em clava, em pra, em fuso ou em halter) e, usando mtodos especiais de colorao (corantes derivados da anilina), evidenciam-se grnulos denominados granulaes metacromticas ou corpsculos de Babes-Ernst. Outra caracterstica dos bacilos diftricos a sua forma de agrupamento, paralelamente (em paliada), ou formando ngulos retos uns aos outros (formas em V, em H, em Y, etc.), o que lhes d, em conjunto, a aparncia de letras chinesas decorrente da separao incompleta da clula durante a diviso celular. Caractersticas Culturais do Microrganismo Meio completo como o meio de Leffler (com soro coagulado) o mais comumente usado para a cultura do bacilo diftrico. Neste meio, aps 8 a 10 horas comeam a surgir colnias pequenas, granulosas, com bordas irregulares, na cor creme ou cinza-claro, enquanto

que outras bactrias (estreptococos, estafilococos, neissrias, etc.) no se desenvolvem com a mesma rapidez. Outros meios de cultura como gar-sangue ou gar-chocolate acrescido de telurito de potssio so tambm indicados para isolamento de C. diphtheriae que apresenta colnias cinza-escuro ou pretas, resultado da reduo intracelular do telurito pelo microrganismo, e o telurito nas concentraes empregadas inibe outras bactrias sem afetar o crescimento do bacilo diftrico. Trs tipos morfologicamente distintos de colnias so descritos nestes meios: gravis com clulas bacterianas em formato de basto, pequenas e irregulares formando colnias no-hemolticas, grandes, acinzentadas, irregulares e estriadas associado a formas graves da doena; mitis com clulas compridas, encurvadas, em forma de basto, formando colnias hemolticas, pequenas, pretas, brilhantes e convexas com umas superfcie espessa associado a formas leves da doena; intermedius com clulas longas, em forma de basto, que formam pequenas colnias no-hemolticas apresentando caractersticas situadas entre os dois extremos, colnias cremosas e transparentes associado a formas intermedirias da doena. Caractersticas Patolgicas A difteria causada por uma exotoxina produzida por cepas de C. diphtheriae que foram infectadas com um prfago beta. A toxina codificada por genes (tox) que fazem parte do genoma de certos bacterifagos e que so capazes de lisogenizar os bacilos diftricos. A perda do bacterifago, que contm o gene tox, torna-o incapaz de produzir a exotoxina, enquanto outros podem variar na sua capacidade de produo de exotoxinas e outros fagos. A toxina uma protena termolbil, letal em concentraes de 0,1 g/Kg de peso e sua produo inibida na presena de fatores ambientais como o ferro, o que explica a maior produo do txico bacteriano, na fase de declnio, quando a concentrao de ferro intracelular cai em nveis baixos. O bacilo diftrico pode causar infeces na faringe, laringe, nas fossas nasais, no ouvido, na pele e nos rgos genitais. A forma clnica mais freqente e grave a farngea, quando recebe a denominao angina diftrica. A difteria dissemina-se por contato direto, por meio de perdigotos e de veiculadores (injeo, utenslios de mesa, etc.). A doena em seres humanos comea com uma infeco do trato respiratrio superior na qual o C. diphtheriae se multiplica e produz a exotoxina com tropismo para o miocrdio, sistema nervoso, rins e supra-renais. Quando a faringe atacada, o processo evolui pelas amgdalas (tonsilas) e pelos pilares do vu palatino, que cria pequenas

placas amarelo-cinzentas que, rapidamente, se unem para formar uma membrana difcil de ser destacada, e ao ser destacada, deixa uma superfcie sangrante. Os gnglios cervicais e submaxilares geralmente so palpveis. Da faringe pode estender-se laringe e traquia causando difteria larngea, associada com insuficincia respiratria aguda por obstruo alta (crupe), ou espalhar-se para os seios nasais causando difteria nasofarngea, associada a complicaes cardacas e neurolgicas devido circulao da toxina. A miocardite demonstra edema intersticial, infiltrado linfocitrio intersticial e perivascular, degenerao hialina e necrose celular. A neurite devida a desmielinizao, manifestando-se primariamente por alteraes motoras. O comprometimento renal decorrente de uma nefrite intersticial causada provavelmente pela ao direta da toxina e necrose tubular aguda, geralmente associada com miocardite, devido ao baixo dbito sangneo renal. Diagnstico O diagnstico bacteriolgico realizado atravs da identificao do C. diphtheriae toxignico a partir do material retirado das leses (ulceraes), exsudatos de orofaringe e de nasofaringe, ou de outros stios, dependendo do caso, por meio de swab, antes da administrao de qualquer teraputica antimicrobiana. Estes testes servem para confirmar a impresso clnica e tm importncia epidemiolgica. Exame Bacterioscpico - Esfregaos corados pelo mtodo de Gram, ou por azul de metileno so observados microscopicamente para deteco de granulaes metacromticas em grupamentos caractersticos. Esse teste apresenta resultado rpido porm as manifestaes clnicas so mais teis para o diagnstico etiolgico do que a bacterioscopia direta, que pode fornecer resultados falso-positivos ou falso-negativos. Cultura - o meio usado na prtica e que fornece uma orientao segura. A cultura deve ser feita por semeadura da secreo nos meios de Loeffler inclinado, placas de gar sangue e de gar telurito. O meio de Loeffler preserva as caractersticas morfotintoriais do bacilo diftrico teis para sua identificao. A presena de colnias no meio de gar sangue e ausncia de crescimento no meio com telurito usada para excluir infeces por Corynebacterium. Colnias suspeitas crescidas em gar telurito fornecem inculo para o teste de produo de toxinas. Amostras atoxignicas fluorescentes necessitam de provas bioqumicas adicionais porque produzem respostas clnicas discretas e localizadas.

Tabela 1 - Caractersticas diferenciais das espcies de Corynebacterium regularmente associadas ao homem. Fermentao de Espcies C. diphtheriae C. xerosis C. hofmannii Urease + Maltose + - /+ Sacarose - /+ + Glicose + + -

- Teste de produo de toxinas - Todo microrganismo que apresente caractersticas morfolgicas semelhantes aos difterides deve ser submetido ao teste de virulncia, que verifica a toxicidade deste. A produo da toxina diftrica pode de pesquisada in vivo e in vitro. O teste in vivo consiste na inoculao de uma suspenso bacteriana em animal experimental. Aps quatro horas, injeta-se a antitoxina diftrica e, aps 30 minutos, reinjeta-se uma amostra adicional da suspenso em novo local. Se a cepa for toxignica o local injetado antes da antitoxina tornar-se- necrosado em 48 - 72 horas, enquanto o local injetado aps administrao de antitoxina revelar apenas uma inflamao no especfica. O teste de difuso em gel (Teste de Elek) in vitro um mtodo onde se coloca uma fita de papel de filtro impregnada com antitoxina sobre a superfcie do meio de cultura e as amostras de microrganismos so semeadas perpendicularmente fita (A). A linha de precipitao antgeno-anticorpo (D) indica que a cepa de C. diphtheriae produz toxina.

(A) Bacilo diftrico toxignico (B) Bacilo diftrico no-toxignico (C) Papel de filtro impregnado com antitoxina (D) Linhas de precipitao
D

A D

C D D D

Tratamento A toxina diftrica pode entrar em clulas sensveis dentro de um curto perodo de tempo, portanto o tratamento de casos suspeitos de difteria com antitoxina deve ser iniciado mesmo antes da comprovao bacteriolgica. Uma vez que a toxina penetra na clula alvo, a antitoxina no mais efetiva para neutraliz-la. O C. diphtheriae sensvel a vrios antibiticos, incluindo penicilinas, eritromicina e tetraciclina. A terapia, contudo, deve ser feita primeiramente direcionada para a neutralizao da toxina diftrica. A terapia com antibiticos pode ento, ser til para a eliminao da infeco primria pelo C. diphtheriae.

NEISSRIAS O gnero Neisseria compreende vrias espcies de cocos Gram-negativos aerbios, que geralmente se apresentam aos pares com os bordos internos achatados ou cncavos, lembrando gros de feijo. Algumas espcies deste grupo so colonizadores normais da mucosa da nasofaringe, so de ocorrncia extracelular e raramente podem causar infeco em determinados rgos, como a Neisseria (agora Branhamella) catarrhalis e a N. sicca, presentes na microbiota da nasofaringe e que no produzem doena e as neissrias pigmentadas (N. subflava, N. flavescens, N. lactamica) que embora no patognicas podem, em raras ocasies, provocar meningite ou endocartite. Duas espcies de neissrias so patognicas para o homem de maneira significante: a Neisseria gonorrhoeae (ou gonococo) e a Neisseria meningitidis (ou meningococo), que so de ocorrncia intracelular e so os agentes etiolgicos da gonorria e da meningite, respectivamente. MENINGITE Agente Etiolgico Reconhecida desde o incio do sculo XIX como uma doena contagiosa descrita por Vieusseux em 1805, foi somente em 1887 que Weichselbaum isolou a Neisseria meningitidis de um caso de meningite purulenta, sendo esta reconhecida como causa da meningite meningoccica. Este diplococo pode comprometer diversos rgos do corpo humano como o trato respiratrio superior, as articulaes, o sangue (na forma de meningococcemia aguda, subaguda ou crnica), o pericrdio, a pele, os olhos, a uretra, o reto e, particularmente, o sistema nervoso central. Caractersticas Morfolgicas do Microrganismo A Neisseria meningitidis (ou meningococo) assemelha-se muito ao gonococo. Os meningococos so cocos ou diplococos, Gram-negativos, com um dimetro de aproximadamente 0,8 m, aerbios estritos, imveis, no esporulados. Ao microscpio ptico, como os gonococos, diferencia-se de outras neissrias saprfitas localizando-se tanto intra como extracelularmente, com as superfcies adjacentes de suas clulas achatadas originando uma forma tpica de biscoito(ou rins).

Caractersticas Culturais do Microrganismo A N. meningitidis no cresce com facilidade, necessitando de meios de cultura e condies apropriadas. As condies de crescimento timas so obtidas em ambiente mido, a temperatura entre 35 e 37oC e sob atmosfera de 5 a 10% de dixido de carbono. Apresenta bom crescimento em meios especficos como o meio de Mueller-Hinton e o de Thayer-Martin, sendo este ltimo especialmente usado em estudos epidemiolgicos. Nos meios slidos, os meningococos originam colnias transparentes, no pigmentadas, no-hemolticas e medindo em torno de 1 a 5 mm de dimetro. Em culturas mais velhas podem ser observadas variaes considerveis na sua forma e tamanho. Caractersticas Patolgicas A nasofaringe a porta de entrada dos meningococos, onde na maioria das vezes a infeco assintomtica, mas ocasionalmente apresenta manifestaes clnicas discretas ou podem provocar uma faringite exsudativa. Da nasofaringe (nasofaringite) os microrganismos podem ganhar a corrente sangnea, produzindo uma bacteremia (meningococcemia) com febre alta e leses vasculares, provavelmente determinadas pelas endotoxinas bacterianas. Nas formas fulminantes, h hemorragia bilateral nas supra-renais, constituindo a sndrome de WaterhouseFriderichsen. A meningite a complicao mais comum da meningococcemia. Inicia de forma sbita, com cefalia intensa devido ao aumento da presso intracraniana, vmito em jatos, rigidez da nuca e progride para o coma em pouco tempo. O meningococo a nica bactria cuja infeco pode matar o paciente em algumas horas, pois cerca de 20 a 40% dos pacientes no apresentam sintomas de meningococcemia. Diagnstico O meningococo pode ser facilmente isolado do sangue e do lquor em meios de cultura especficos para este microrganismo. Exame Bacterioscpico Esfregaos preparados com o sedimento do lquor ou de material aspirado de petquias de grande utilidade para o diagnstico. A presena de neissrias tpicas, diplococos Gram-negativos em forma de rins, no interior de leuccitos polimorfonucleares ou no espao extracelular, praticamente garante o diagnstico de meningite meningoccica. Cultura O material coletado deve ser semeado imediatamente em meio de gar-sangue aquecido ou meio de Thayer-Martin modificado com antibiticos (VCN: vancomicina,

colistina e nistatina), que favorece o crescimento de neissrias e inibe o de muitas outras bactrias. Sorologia Os anticorpos contra os polissacardeos meningoccicos podem ser dosados pelas reaes de aglutinao do latx, de hemaglutinao ou por sua atividade bacteriana. Tratamento As penicilinas so as drogas de escolha para o tratamento da meningite meningoccica. Quando as meninges esto inflamadas, estes antibiticos atravessam facilmente a barreira hematoliqurica. No foram encontrados meningococos portadores de plasmdios de resistncia. O cloranfenicol um substituto efetivo para o uso em pacientes alrgicos. A terapia antimicrobiana ir variar de acordo com a apresentao e apresentao da doena e da resposta do paciente, sendo o tratamento de 10 a 14 dias normalmente eficiente. GONORRIA Agente Etiolgico A gonorria (do grego gonos, que significa esperma e rhoia, corrimento = espermatorria) definida como uma inflamao do trato urogenital causada pela Neissria gonorrhoeae, de transmisso predominante sexual, exceto conjuntivites e vaginites infantis. So destrudos rapidamente pelo ressecamento, luz solar, calor mido e muitos desinfetantes, mas resistem ao congelamento. parasita estrito e, por este motivo, no tem possibilidade de sobrevivncia fora do corpo, por perodo prolongado. O perodo de incubao varivel, sendo comum de 3 a 5 dias podendo chegar a 30 dias. Caractersticas Morfolgicas do Microrganismos O gonococo um diplococo Gram-negativo de aproximadamente 0,6 m a 1,0 m, imvel, no flagelado nem hemoltico, no esporulados e ao exame de secrees apresenta-se, no interior de fagcitos aos pares com formato oval aproximados nas extremidades, com aspecto de feijo ou gro de caf. Possue cpsula que pode ser evidenciada pela colorao negativa. Caractersticas Culturais do Microrganismo Aerbio ou anaerbio facultativo, cresce melhor a 35-360C, e exigente nas culturas, necessitando de enriquecimento apropriado e atmosfera com 2 a 10% de dixido de carbono.

O uso do meio de cultura de ThayerMartin (gar-chocolate acrescido de antimicrobianos vancomicina, colistina e nistatina), devido a sua seletividade, melhora a capacidade de isolamento de meningococos e gonococos de stios diversos. Aps 48 horas de incubao, as colnias de gonococos so pequenas e brilhantes, mas aps alguns dias tornam-se brancoacinzentadas e apresentam margens lobuladas. Amostras submetidas a subculturas repetidas formam colnias grandes e avirulentas. Caractersticas Patolgicas A infeco gonoccica encontrada apenas em seres humanos e dissemina-se atravs do ato sexual. Infees de mucosa, particularmente do trato genital, pelo gonococo seguem as seguintes etapas: - Aderncia e colonizao: A aderncia mediada por fmbrias, sendo somente os gonococos fimbriados capazes de provocar infeces. A colonizao da mucosa facilitada por proteases que clivam a IgA secretora, que poderia bloquear a aderncia do gonococo mucosa; - Invaso da mucosa: Aps a adeso do microrganismo mucosa, ocorre a penetrao na clula epitelial. No interior da clula o microrganismo transportado para o interior de vacolos passando para o tecido subepitelial; - Proliferao da bactria no tecido subepitelial: Uma vez que atingiu o tecido subepitelial, com contnua proliferao, ocorre reao inflamatria intensa com abundncia de leuccitos polimorfonucleares. No homem, a uretrite a principal forma clnica da infeco gonoccica com disria e exudato purulento. A partir da uretra, a infeco pode se estender para a prstata, epiddimo e vescula seminal. Em mulheres, as mudanas no odor e na cor da secreo vaginal e dor abdominal so os principais sintomas da infeco cervical (cervicite). Em at 75% da mulheres infectadas, a doena pode permanecer assintomtica por longos perodos de tempo. A infeco ascende para as trompas de Falpio (salpingite), podendo atingir o peritnio. Essa uma conseqncia sria da infeco gonoccica em mulheres (doena inflamatria plvica). A infeco gonoccica disseminada caracterizada por febre, artralgia, artrite, tenossinovite, erupes na pele, endocardite e meningite e ocorre entre 1:300 a 1:600 casos de gonorria genital, sendo que esta forma de doena seis vezes mais prevalente na mulher. Casos de esterilidade decorrentes da doena e tambm infeco farngea gonoccica so relatados. Em crianas, a infeco mais comum a conjuntivite neonatal adquirida durante a passagem pelo

canal de parto infectado, que acomete rapidamente as estruturas do olho e leva perda da viso, que pode ser prevenida com a instilao de nitrato de prata no saco conjuntival do neonato. Diagnstico Atravs das secrees colhidas da uretra, colo uterino, prstata, mucosa retal ou farngea, realiza-se exame bacteriolgico, isolamento e identificao de N. gonorrhoeae para diagnstico da doena. Exame Bacterioscpico A colorao de Gram dos esfregaos podem revelar um quadro microscpico bastante caracterstico nos casos agudos masculinos, com presena de diplococos Gram-negativos de morfologia tpica intra e extra-celulares. Nos casos masculinos duvidosos e em infeco gonoccica na mulher, a bacterioscopia apresenta valor bastante limitado, sendo necessrio isolamento e identificao do gonococo para estabelecer o diagnstico de gonorria. Cultura A cultura deve ser feita imediatamente aps a coleta, semeando-se a amostra em meio enriquecido (como o meio de Thayer-Martin com vancomicina, colistina e nistatina) seletivo para gonococos e meningococos, nas condies exigidas pelo microrganismo. A identificao do gonococo feita atravs de provas bioqumicas (ver Tabela 2), como as reaes de oxidao e fermentao. A demostrao dos resultados em cultura demorada e as vezes difcil, sendo justificado o uso dos resultados bacterioscpicos, sintomas clnicos, inqurito epidemiolgico para o rpido incio do tratamento de casos suspeitos. A presena de DNA gonoccico em secrees uretrais de pacientes com gonorria, pode ser detectada por meio de sonda gentica, preparada com plasmdeo crptico que transportado pela maioria das amostras de bactrias. Tratamento As drogas de escolha para o tratamento das infeces gonoccicas continuam sendo as penicilinas, quando o microrganismo sensvel a estes antibiticos. Devido ao aumento da freqncia de cepas de N. gonorrhoeae produtoras de penicilinases, o cotrimoxazol, a espectinomicina e algumas cefalosporinas de terceira gerao (ceftriaxone) so utilizados para o tratamento destas infeces. Para o tratamento das gonorrias extravaginais necessrio perodos longos de terapia e, algumas vezes, a hospitalizao do paciente.

QUESTES: 1 sabido que Staphylococcus epidermitis pode infectar o trato urinrio masculino e provocar a formao de pus, semelhana da Neisseria gonorrhoeae. Como voc diferencia uma infeco da outra? 2 Explique como a meningite leva ao aumento da presso intracraniana? 3 Descreva a profilaxia da difteria na criana.

Micobactrias
O gnero Mycobacterium contm grande nmero de espcies, microrganismos saprfitas que no causam tuberculose micobacteriana e microrganismos parasitas, incluindo os dois principais patgenos humanos, Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium leprae. As micobactrias so bacilos finos, diferentes das demais bactrias em uma srie de propriedades, muitas das quais esto relacionadas com a quantidade e tipos de lipdeos complexos que estes germes contm na parede celular. So germes aerbios estritos. Vrias evidncias sugerem que a predileo do Mycobacterium tuberculosis pelos pulmes est relacionada com a tenso de CO2 neste rgo. As clulas bacterianas so de crescimento lento, imveis, no esporuladas. A lentido do crescimento parece tambm estar relacionada absoro mais demorada de nutrientes, provavelmente devido a grande quantidade de lipdeos da parede. Alm do interesse diagnstico, o crescimento lento est relacionado com o quadro clnico da tuberculose. A temperatura tima de crescimento das micobactrias varivel. As que crescem melhor em temperatura inferior a 37oC, como Mycobacterium marium e M. ulcerans, geralmente causam somente uma infeco cutnea, uma vez que a temperatura da pele mais baixa que a das regies mais profundas do organismo. Presume-se tambm que a localizao preferencial da lepra nas extremidades do corpo (dedos, nariz, lbulos da orelha) esteja relacionada por sua preferncia a temperaturas baixas. As micobactrias so cido-lcool resistentes (BAAR), o que significa que durante os procedimentos de colorao pela fucsina, no se deixam descorar por uma mistura de lcool e cido clordrico. Esta propriedade parece descorrer da firme fixao da fucsina a certos lipdeos da parede. O mtodo para se verificar se uma bactria BAAR, o de Ziehl-Neelsen. Este mtodo consiste em se tratar o esfregao por fucsina e, em seguida por uma mistura de lcool (97%) e cido clordrico (3%). Depois de lavado com gua, o esfregao corado com azul de metileno. As bactrias que retm a fucsina (BAAR) adquirem a cor deste corante (vermelho), e as que no retm, se coram pelo azul de metileno. Provavelmente devido riqueza em lipdeos, as micobactrias tambm so mais resistentes do que as outras bactrias ao hidrxido de sdio, cido sulfrico e a certos antispticos. Esta propriedade explorada no diagnstico laboratorial, pois permite destruir a

microbiota normal, presentes nos espcimes clnicos, sem afetar a viabilidade das micobactrias. Os lipdeos podem explicar a maior resistncia das micobactrias a muitos antibiticos, bem como o mecanismo de ao da isoniazida (usada no tratamento), que interfere na sntese de cidos graxos. So germes intracelulares facultativos, que proliferam no interior de macrfagos. As clulas so adjuvantes, uma vez que, quando injetadas com um antgeno, estimulam a produo de anticorpos contra estes antgenos. As micobactrias no produzem fatores de virulncia que possam explicar as manifestaes clnicas de suas infeces. Estas so predominantemente decorrentes da resposta do hospedeiro infeco e aos antgenos das micobactrias. De modo geral, as infeces causadas por micobactrias acompanham um quadro de hipersensibilidade tardia e de imunidade celular. Os dois fenmenos tm sido mais estudados na tuberculose, onde aparecem ao mesmo tempo e esto sempre associados. A pesquisa de hipersensibilidade tardia e de imunidade celular pode ser feita com injeo intradrmica de tuberculina. Esta substncia na realidade, uma mistura de protenas de baixo peso molecular, produzidas pelo Mycobacterium tuberculosis. Quando parcialmente purificada, recebe a designao PPD (purified protein derivate). Mycobacterium tuberculosi Patogenicidade: O microrganismo geralmente transmitido por gotculas de secrees (como de tosse) provenientes de uma pessoa com tuberculose ativa. muito estvel em tais gotculas e no escarro, podendo permanecer vivel mesmo no escarro seco por at seis semanas. O M. tuberculosis das gotculas ento, inalado e atinge uma ambiente altamente aerbio do pulmo, onde produz uma pneumonite no-especfica. Histologicamente, a resposta inicial exsudativa, seguida por uma resposta granulomatosa, durante o qual o paciente desenvolve a hipersensibilidade tardia que caracterstica da doena. A infeco pelo Mycobacterium tuberculosi geralmente se inicia no parnquima dos lobos pulmonares inferiores, passando em seguida para os ndulos linfticos da regio hilar, de onde levada para vrios rgos e tecidos, pela corrente sangnea. A infeo do parnquima

pulmonar e dos ndulos linfticos da regio hilar chamada complexo primrio e este, juntamente com os focos infecciosos que se formam nos diferentes rgos e tecidos, infeco primria. Estes focos so encontrados principalmente nos rgos e tecidos onde uma tenso apropriada de O2 favorece a proliferao do Mycobacterium tuberculosi, isto , pices pulmonares, rins, extremidades dos ossos longos, ndulos linfticos e etc. Embora a bactria esteja viva nestes focos, ela se encontra em estado de latncia, uma vez que no se multiplica ou o faz de maneira insignificante e irregular. Este estado infeccioso denominado de tuberculose-infeco, para contrastar com o estado oposto, que denominado de tuberculose doena. Na grande maioria das vezes, o nico sinal de existncia de tuberculose-infeco a presena de hipersensibilidade tardia, que pode ser demostrada pela injeo intradrmica de tuberculina ou PPD. Alguns indivduos, entretanto, podem tambm apresentar o complexo primrio calcificado, chamado complexo de Gonh, que s pode ser demonstrado pelo exame radiolgico dos pulmes. O tempo necessrio para a reativao de um foco de infeco latente bastante varivel, podendo ser meses ou anos. Em muitos indivduos ele permanece latente por toda vida. Existem na literatura diversos estudos sobre a provvel influncia da idade, sexo, fatores tnicos e constituio gentica. De qualquer modo, os fatores que realmente predominam no processo de reativao no so bem conhecidos, mas esto intimamente ligados a uma diminuio das defesas orgnicas. A doena geralmente associada com falta de higiene e condies de moradia em locais aglomerados. Diagnstico: O diagnstico pode ser feito pelo exame microscpio de esfregaos corados pelo mtodo de Ziehl-Neelsen e pela cultura. O material clnico selecionado para exame depende da localizao da doena. Nas infeces pulmonares, colhe-se o escarro; nas urinrias, a urina. A cultura o mtodo de escolha para o diagnstico das infeces por micobactrias, porque alm de permitir o diagnstico especfico, possibilita o isolamento da bactria para a realizao de testes de sensibilidade aos antibiticos. Tambm tida como bastante til no diagnstico laboratorial da tuberculose, a inoculao de cobaias com espcimes clnicos, apresenta hoje algumas desvantagens:

contaminao de pessoas que manipulam estes animais, a doena experimental demora de 4 a 6 semanas para se desenvolver, geralmente a inoculao por via intramuscular, e no dispensa o cultivo e identificao da bactria a partir das leses encontradas nestes animais. Recentemente foram preparadas sondas genticas que permitem a rpida identificao das espcies M. tuberculosis, M. avium, entre outras. A pesquisa de hipersensibilidade tardia tambm um recurso de diagnstico bastante til. Esta pesquisa geralmente feita pelo teste de Mantoux, que consiste na injeo intradrmica, na face anterior do antebrao, de 0,1 mL de tuberculina ou PPD. Considera-se o teste positivo, quando aparece, em 48 horas, no local da injeo, uma rea endurecida de pelo menos 5mm de dimetro. O teste de Mantoux positivo no indica doena, mas apenas hipersensibilidade tardia, que pode ter se originado de uma infeco primria (assintomtica) ou de uma tuberculose curada. O teste negativo indica que o indivduo no deve ter tido contato com o bacilo da tuberculose, ou teve contato e nunca desenvolveu a doena. Tratamento: As drogas mais usadas no tratamento das infeces causadas pelo M. tuberculosis costumam ser divididas em drogas de primeira e segunda linha. As de primeira linha so as preferidas, por serem mais ativas e menos txicas, e as de segunda linha so menos ativas e mais txicas. As drogas de primeira linha so: isoniazida, pirazinamida, estreptomicina e etambutol. So consideradas de segunda linha o cido para-amino-saliclico (PAS), etionamida (derivado do cido miclico), tiocetozona, e os seguintes antibiticos: canamicina, viomicina, capreomicina e amicacina. Imunidade: No Brasil, a vacina usada a BCG (bacilo de Calmette-Gurin), que uma mutante atenuada do Mycobacterium bovis. Embora cause infeco no homem, esta mutante no provoca doena. A proteo conferida pela vacinao no total, mas bastante satisfatria. Os indivduos vacinados adquirem hipersensibilidade tardia, passando a reagir positivamente ao teste de Mantoux.

Mycobacterium leprae Este microrganismo tambm conhecido como bacilo de Hansen, o agente etiolgico da lepra, uma doena degenerativa capaz de causar deformaes nos pacientes. A lepra continua sendo uma doena bastante freqente. Calcula-se que existam 12 milhes de leprosos no mundo. Como as demais micobactrias, o bacilo da lepra BAAR. At o presente momento esta bactria no foi cultivada in vitro, mas prolifera formando granulomas, quando inoculadas nas patas de camundongos. O tatu (Dasypus novecintus) tambm susceptvel ao Mycobacterium leprae, desenvolvendo manifestaes semelhantes s da lepra lepromatosa humana. Patogenicidade: O M. leprae aparentemente transmitido de leses cutneas infectadas atravs de ferimentos de pele onde ele pode permanecer latente por vrios meses ou dcadas. Forma-se uma leso granulomatosa crnica semelhante quela da tuberculose, com clulas epiteliides gigantes, porm sem necrose caseosa. O M. leprae afeta principalmente a pele e o tecido nervoso. As formas cutneas de lepra resultam na produo de numerosos ndulos endurecidos. As formas neurais resultam em paralisia e anestesia do nervos perifricos. Pacientes com esta forma de lepra so passveis de ferimentos nas extremidades com o desenvolvimento de infeco secundria e danos estticos graves. So reconhecidas duas formas polares de lepra e vrias intermedirias. As formas polares so a lepra lepromatosa (LL) e a lepra tuberculide (LT). Uma diferena entre LL e LT, refere-se a reao do paciente ao teste de Mitsuda. Os primeiros so Mitsuda negativo, e os segundos, positivos. O teste de Mitsuda realizado inoculado-se na pele do brao do paciente 0,1 mL de lepromina e verificando-se aps 30 dias, a reao desenvolvida. A lepromina uma suspenso de bacilos da lepra, obtidos de leproma (granuloma da lepra), mortos pelo calor. Quando o teste positivo, h a formao de um ndulo no local da injeo, com dimetro superior a 5mm, apresentam tambm uma rea de endurecimento, aps 24 e 48 horas da injeo. Os indivduos Mitsuda positivo so mais difceis de adquirir infeco, e caso desenvolvam ser a forma mais benigna (tuberculide). Os indivduos Mitsuda negativos apresentam risco de desenvolver a forma mais grave (lepromatosa).

Diagnstico: O diagnstico bacteriolgico da lepra feito pelo exame de esfregaos corados pelo mtodo de Ziehl-Neesen. Tratamento: Atualmente as drogas mais usadas no tratamento da lepra so a dapsona, rifampicina e clofazimina. Imunoterapia da lepra com injeo intradrmica de M. vaccae, uma micobactria ambiental no-patognica, e antgenos proticos de M. tuberculosis juntamente com quimioterapia tem levado a resposta em testes de pele em pacientes com lepra lepromatosa e retirada do bacilo do tecido. Ainda no h concluso definitiva sobre o valor da BCG na profilaxia da lepra. Os resultados obtidos em estudos so conflitantes. Mycobacterium bovis O Mycobacterium bovis causa tuberculose no gado bovino, sendo tambm bastante virulento para o homem. A grande maioria dos casos de tuberculose humana por esta bactria transmitida pelo leite no-pasteurizado, proveniente de vacas tuberculosas. Os bacilos ingeridos penetram pela mucosa da orofaringe e do trato digestivo, invadindo respectivamente, os ndulos mesentricos. A partir destes focos, a doena pode se disseminar para outros tecidos ou rgos. Quando o Mycobacterium bovis inalado, pode provocar tuberculose idntica causada pelo M. tuberculosis. Mycobacterium avium Os organismos do complexo M. avium so biquos no ambiente e so adquiridos por pacientes, em geral, aidticos atravs da alimentao, gua, solo e poeira, levando colonizao do trato gastro-intestinal (GI), ou pulmes aps disseminao hematognica. A relao entre GI e colonizao pulmonar e subsequente disseminao, ainda no clara. O M. avium fagocitado por macrfagos e carreado aos rgos do sistema moncito-fagocitrio. Os

sintomas mais prevalentes da infeco causada so: febre, sudorese, anorexia, fraqueza e s vezes diarria. O diagnstico da infeco por M. avium feito atravs de cultura de sangue perifrico e de tecido. O organismo tambm pode ser observado histologicamente em ndulos linfticos, medula ssea e bipsia de material de fgado. A resistncia do complexo M. avium um desafio para o tratamento. Com base em teste de sensibilidade e dados clnicos, um regime de tratamento ideal deve incluir clofazimina, etambutol, rifampicina, ciprofloxacina e amicacina.

Perguntas:
1) Qual a caracterstica morfolgica mais marcante das micobactrias, e quais as suas conseqncias? 2) Descreva caractersticas da patogenicidade do Mycobacterium tuberculosis. 3) O que o teste de Mantoux? 4) Descreva o Complexo de Gonh. 5) Descreva as principais manifestaes clnicas da infeco causada pelo Mycobacterium leprae. 6) Descreva o teste de Mitsuda

CANDIDASES
Caractersticas biolgicas gerais de Candida O gnero Candida compreende aproximadamente 200 espcies de leveduras, as quais reproduzem-se assexuadamente por brotamento. Algumas dessas espcies tambm apresenta a forma teleomrfica (sexual), na maioria das vezes ascosporogeneas. Apresentam capacidades assimilatrias oxidativas e fermentativas, por meio das quais tornam-se aptas a utilizarem uma variedade de substncias orgnicas. Em adio a forma unicelular blastosporica (levedura), grande parte das espcies de Candida podem apresentar um estgio micelial com produo de miclio verdadeiro ou pseudomiclio. Em condies especiais in vitro algumas espcies, tais como, C. albicans e C. stellatoidea podem produzir clamidosporos. A maioria das espcies de Candida encontram-se em uma ampla variedade de nichos ecolgicos, geralmente como saprofticos. Algumas espcies so utilizadas industrialmente, por exemplo, C. utilis ou C. lipolytica. Outras esto associadas a diferentes condies patolgicas humanas, por exemplo, C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. guilliermondii, C. pseudotropicalis, C. krusei, C. lusitaniae e C. rugosa. Dessas, C. albicans representa o principal patgeno, sendo freqentemente isolado em associao com diferentes doenas humanas. C. albicans uma levedura diplide com forma teleomrfica desconhecida. Sua morfologia, bem como de outras espcies do gnero, caracterizada pela natureza dimrfica, incluindo a forma micelial e levedura. Essa mudana morfolgica, o qual ocorre tanto in vivo quanto in vitro, uma caracterstica significante com implicaes na patognese e no diagnstico das infeces causadas por esses fungos. Em condies in vitro, o blastosporo ou levedura pode ser obtido a partir de seu crescimento em meios de cultura slido ou lquido. A obteno da forma micelial ou pseudomiclio, bem como clamidosporo, influenciada por vrios fatores ambientais, tais como, alteraes na composio de meios, adio de soro, crescimento sob condies semi-anaerbico ou baixa tenso de CO2, pH baixo, e outros. O clamidosporo uma estrutura de resistncia formada por uma parede celular grossa e citoplasma condensado. Geralmente produzido quando a levedura encontra-se em condies de crescimento desfavorvel. Como critrio de identificao de C. albicans so utilizados testes de formao de clamidosporo e tubo germinativo. Ambas as estruturas morfolgicas, miclio e levedura, podem ser encontrados in vivo. Normalmente As leveduras predominam como comensais nos hospedeiros clinicamente saudveis, porm sua associao com a evoluo dos estados patolgicos favorece o surgimento das formas miceliais. Estudos experimentais mostraram que linhagens de C. albicans com baixa capacidade de germinar so menos virulentas. Em adio, as formas miceliais so mais resistentes aos mecanismos de defesa do hospedeiro, enquanto que as leveduras ou blastosporos esto sujeitos a ao de fagcitos. Embora exista algumas opinies divergentes, amplamente aceito que as leveduras iniciam os processos infecciosos, enquanto que as formas micliais filamentosos possuem habilidades de causarem doenas invasivas. A composio da parede celular de leveduras e miclios apresenta diferenas quantitativas. A forma micelial apresenta maior quantidade de quitina, cerca de 2,7 a 21%, ao passo que a levedura contm 0,7 a 9% dessa substncia, porm esse ltimo mais rico em protenas. Alguns autores tambm demonstraram que o componente lipdico nas leveduras so encontrados em menores quantidades quando comparado com a forma micelial. Acreditam-se que os fatores ambientais possam afetar o poder fisiolgico da levedura comensal, por exemplo, afetar uma atividade enzimtica particular que conduz mudanas quantitativas na composio da parede celular, dessa forma induzindo a alteraes morfogenticas que resulta na formao de miclio o qual associa-se infeco progressiva. Fatores de virulncia Poucas espcies de Candida esto implicadas em doenas humanas. Essas espcies apresentam diferentes habilidades patognicas e baixa virulncia, as quais podem ser isoladas a

partir de vrias formas clnicas, incluindo infeces sistmicas graves. Muitos pesquisadores acreditam que os fatores de virulncia incluem: (1) habilidade de aderir em tecidos hospedeiros, (2) potencial para produzir enzimas, principalmente, proteases e fosfolipases, e (3) capacidade de transformao morfolgica, ou seja, uma forma que confere maior resistncia contra o sistema de defesa do hospedeiro. Acredita-se que a adeso dos microrganismos em tecidos hospedeiros um pr-requisito para o desenvolvimento da infeco, como parte de um processo que protege os mesmos da remoo natural conferido pelo sistema de limpeza e defesa do hospedeiro. A adeso de Candida em clulas hospedeiras, semelhante com que ocorre com outros microrganismos, pode ser facilmente demonstrado in vitro pela exposio de clulas animais e leveduras. A presena de regies especficas na parede celular da clula fngica (adesinas manoprotenas) e receptores correspondentes na clula hospedeira garante a adeso entre os mesmos. O processo de adeso em diferentes superfcies tambm foi demonstrado in vitro, como por exemplo, em clulas epiteliais descamadas humanas (bucal, vaginal, urogenital ou corneocytes epitlio dermal), HeLa (carcinoma uterino humano), CCL-6, ou clulas endoteliais, segmentos de tecidos (discos teciduais gastrointestial de ratos), sistemas especficos (cogulo de sangue fibrina). A aderncia de Candida em superfcies de tecidos gastrointestinal ou endotelial pode ter um papel relevante na infeco sistmica. Em certas condies, essa levedura pode atravessar a mucosa e atingir a corrente sangnea, podendo infectar outros rgos. Tambm foi demonstrado in vitro que leveduras do gnero Candida so capazes de se ligarem em vrias superfcies inertes, como por exemplo, metacrilato (resina de dentadura), e outras resinas e polmeros, ou cano de Teflon empregados em vrios materiais mdicos. Tais superfcies, uma vez contaminada, podem atuar como uma importante fonte de candidases sistmicas. A capacidade de produo de enzimas hidrolticas por Candida, tais como, proteases, lipases ou fosfolipases, tambm considerada como fator de virulncia. Alguns investigadores demonstraram que proteases cidas produzidas por leveduras do gnero Candida podem estar envolvidas no processo de invaso tecidual, bem como associadas com a aderncia. O dimorfismo em Candida (levedura e miclio) tambm foi observado em infeces ativas, com predominncia da forma blastosprica (leveduras) em indivduos sadios portadores de Candida. De modo geral, a forma micelial encontra-se associada com a invaso do fungo, ao passo que as leveduras esto associadas com a colonizao inicial podendo iniciar a infeco. Desta forma, a capacidade de morfognese contribui para o aumento do potencial patognico do fungo, uma vez que, a forma micelial apresenta maior resistncia a fagocitose do que as leveduras. Epidemiologia Espcies de Candida, especialmente C. albicans, so microrganismos cosmopolita, podendo ser encontradas fazendo parte da microbiota normal de cavidades humana que se comunicam com o exterior (retal, oral, vaginal, uretral, nasal, aural) e sobre a pele. Candidases: Aspectos de interesse odontolgico Os estados patolgicos decorrentes da ao patognica de fungos do gnero Candida so denominados candidases ou monilases, ou ainda candidoses, sendo a espcie Candida albicans a mais freqentemente envolvida nessas doenas micticas. Na boca, Candida albicans integra-se a outros microrganismos a constantemente existentes, como vrus, bactrias, fungos e protozorios. A compatibilidade da coexistncia dessa populao microbiana com a sade bucal e individual decorre do desenvolvimento, desde o nascimento, atravs de mecanismos imulolgicos, de processos de adaptao e readaptao, contnuos, merc dos quais se estabelece vnculo bio1gico entre o organismo e os microrganismos que ele abriga. Tal vnculo garante a condio saproftica desses germes, pelo estabelecimento de um estado de equilbrio ecolgico denominado por ROSEBURY (1962) de "anfibiose" e que caracteriza uma situao dinmica, intermediria entre a simbiose e a antibiose.

Modificaes desse estado de equilbrio podero favorecer o desenvolvimento de ao patognica por parte de microrganismos integrantes da microbiota bucal, entre eles Candida albicans. Desta forma, este fungo deixa sua condio de saprfita e pode passar a exercer ao parasitria, a qual se manifestar atravs de quadros clnicos diversos. Surgem, ento, as aspectos semiolgicos cuja explorao, anlise e interpretao iro favorecer o estabelecimento do diagnstico de candidase e a adoo de conduta teraputica adequada. O desenvolvimento de ao patognica desencadeada por fungos do gnero Candida, principalmente de Candida albicans, ocorre com maior freqncia quando fatores predisponentes gerais se associam a condies locais desfavorveis manuteno da "anfibiose" referida. Assim, no complexo etiopatognico do qual decorre o parasitisrno ocasional desenvolvido por Candida, incluem-se fatores de ordem sistmica e de ordem local, bem como associaes de ambos, desde que capazes de promover modificaes no hospedeiro ou que venham a induzir a modificaes na composio e caractersticas da microbiota bucal, ficando, destarte, prejudicada a condio de comensalismo e favorecida a ecloso de candidase a partir de infeco dita endgena. Etiopatogenia. No complexo etiopatognico das candidases bucais, deve ser considerada, em especial, a importncia das condies orgnicas e reacionais gerais do indivduo, bem como sua influncia sobre a resistncia da mucosa bucal aos agentes patognicos ambientais, tais como microrganismos, agentes qumicos e traumatismos. A boca, ao contrrio de outras cavidades naturais, esto constantemente exposta a fortes estmulos mecnicos, trmicos e qumicos, em decorrncia dos atos fisio1gicos a ela inerentes, destacando-se a mastigao. Desta forma, est a boca propensa a apresentar, com aprecivel precocidade, freqncia e expressividade, alteraes decorrentes de modificaes sistmicas, sejam elas de fundo carencial, metab1ico, ou de outra natureza, as quais podero concorrer para o rompimento do equilbrio biolgico entre populao microbiana e hospedeiro. GRINSPAN (1973) cita os seguintes fatores de ordem geral como predisponentes s candidases: idade, sendo o perodo neonatal de especial importncia, em decorrncia de infeces pr-existentes no canal do parto ou devido ao uso de chupeta. A gravidez apontada pelo referido autor como sendo condio predisponente ao desenvolvimento de candidases. Da mesma forma, doenas como diabetes, obesidade, carncias nutricionais, hipocloridrias, processos endcrinos (hipoparatireoidismo, hipotireoidismo), leucemias, em especial as agudas, linfomas, alteraes da imunidade, tais como timomas e agamaglobulinemia, urernia, trombose cerebral, enfarte do miocrdio, abdome agudo, caquexia, atrepsia, alcoolismo e toxicomanias. O constante e cada vez mais acelerado desenvolvimento da teraputica mdica e cirrgica, atravs do qual se tem verificado a incorporao de poderosos frmacos ao arsenal mdico; a crescente utilizao de radiaes como recurso teraputico, bem como o avano da tcnica cirrgica, notadamente no campo dos transplantes e no da cirurgia oncolgica, trouxeram consigo aprecivel incrementos na ocorrncia de candidases, motivando maior interesse pelo conhecimento dessas doenas micticas, as quais passam a constituir-se em entidades patolgicas relacionadas prpria teraputica, podendo existir como manifestaes iatrognicas a esta associadas. Assim, podem constituir-se em fatores predisponentes s candidases, a antibioticoterapia, os corticosterides e drogas imunossupressoras, as radiaes e estados ps-operatrios. Os antibiticos, especialmente os de amplo espectro, podem constituir-se em fator capaz de romper o equilbrio ecolgico que, entre os diferentes microrganismos componentes da microbiota bucal, se desenvolve atravs de relaes de competio quanto a nutrientes e de controle recproco da multiplicao. Dessa forma, aquelas drogas podem agir eliminando ou reduzindo numericamente microrganismos suscetveis, favorecendo a multiplicao de outros, no sensveis a elas. O meio pelo qual os corticosterides predispem ao desenvolvimento de candidases mal conhecido. Conforme assinala JRGENSEN (1974), esses agentes parecem favorecer a capacidade de invaso dos tecidos por Candida albicans, mais do que promover a proliferao desse fungo. Experimentalmente, verificou-se que a terapia por corticosterides compromete a destruio de Candida albicans por fagocitose, seja deprimindo a resposta leucocitria, seja interferindo na destruio de microrganismo fagocitado. Por outro lado, quando usados topicamente, para o

tratamento de leses da mucosa bucal, tais como aftas e lquen plano, os corticosterides parecem ter ao local favorecedora do desenvolvimento de candidase, uma vez que as manifestaes da micose ocorrem nos locais onde a droga aplicada, sem que tenha sido possvel demonstrar nveis elevados de cortisona no plasma dos indivduos tratados, antes e aps o aparecimento da candidase. A1m disso, nveis semelhantes foram encontrados em pacientes sem candidase. Estudando aspectos estomatolgicos em doentes de pnfigo foliceo, MARCUCCI (1972) procurou verificar a presena de leveduras na cavidade bucal desses doentes, os quais estavam sujeitos a antibioticoterapia, a terapia corticosteridica, ou submetidos a ambas. Os resultados das culturas obtidas a partir de material colhido no vestbulo bucal ou de reas sob placas protticas, avaliados cornparativamente com as provenientes de grupo controle, revelaram, naqueles doentes, maior freqncia de culturas positivas de leveduras, principalmente Candida albicans. A complicao mais freqente verificada em pacientes submetidos a drogas imunodepressoras a infeco. Conforme assinalam GREENBERG & COHEN (1977), a maioria dessas infeces causada por microrganismos que apresentam pouca patogenicidade em pessoas normais, mas que podem causar infeces fatais em paciente com resposta imunolgica bloqueada. A maioria dos microrganismos demonstrados nesses pacientes pode ser encontrada na cavidade bucal, entre eles Candida albicans. Este aspecto tem sido observado em pacientes submetidos a transplantes renais, devendo-se referir que RIFKIND & cols. (1967) verificaram ser, nessas eventualidades, Candida albicans o microrganismo responsvel pela maioria dos casos de xito letal. Alta incidncia de infeces por fungos tem sido relacionada utilizao de agentes citotxicos, tais como a azatioprina, a ciclofosfamida, a 6-mercaptopurina, o 5-fluoruracil e o metotrexato. Candida, Aspergillus, Criptococcus e Nocardia, bem como vrus do herpes simples e citomegalovrus so os microrganismos mais freqentemente relacionados a essa forma de teraputica imunodepressora. Conforme assinala LEHNER (1967), quatro aspectos motivam renovado interesse pelo conhecimento das candidases: 1) O aumento na freqncia devido a fatores iatrognicos; 2) A propagao direta faringe, laringe e esfago, que no muito raramente ocorre; 3) A disseminao vascular de Candida albicans, a qual se pode verificar particularmente no curso de cirurgia, disso resultando candidase disseminada e, conseqentemente, desenvolvimento de processos graves de endocardite, meningite e complicaes renais; 4) Nos estgios terminais, com a queda das pseudomembranas, a doena pode persistir, assumindo as caractersticas das formas atrficas. CAWSON (1966) registra vrios casos em que a forma pseudomembranosa relacionava-se ao uso sistmico e, com mais freqncia, ao uso tpico de corticosterides, bem como ao emprego de antibiticos de largo espectro, especialmente tetraciclinas. Na maioria dos casos a micose vincula-se instalao e uso de prtese total, apresentando, freqentemente, queilite angular. O desenvolvimento de candidase bucal como intercorrncia no curso de antibioticoterapia verifica-se especialmente em pacientes cujas condies gerais constituem fator predisponente (indivduos idosos, diabticos, etc.). Quando a isso se sobrepem condies locais desfavorveis (processos inflamatrios crnicos, feridas traumticas ou cirrgicas, etc.), grandemente favorecida a ecloso de superinfeco. Temos tido oportunidade de verificar o aparecimento de candidase bucal (forma pseudomembranosa) em pacientes submetidos a exodontia mltipla ou total, seguida de instalao de prtese imediata, aos quais foi profilaticamente estabelecida antibioticoterapia (tetraciclina, cloranfenicol) no pr e ps-operatrio, confirmando os achados de REITHER (1960). O fato observado com maior freqncia em pacientes idosos, cujo organismo ainda espoliado pela perda sangnea e dificuldades de ingesto de alimentos, ficando a1m disso, diminuda a resistncia dos tecidos bucais em conseqncia do trauma cirrgico e do contato da prtese. Tem sido constatado com freqncia o desenvolvimento de candidase ao se incorporar tetraciclina ou oxitetraciclina ao cimento cirrgico de KIRKLAND-KAISER, aps cirurgia

periodontal. No se observou essa estomatite, ao se usar bacitracina. Alis, este e outros inconvenientes do uso tpico de antibiticos como complemento cirurgia periodontal so assinalados por PEDREIRA (1959), em tima reviso sobre o uso dessas drogas em periodontia. GIUNCHI (1958) refere-se ao aparecimento da forma eritematosa difusa de estomatite, a qual se enquadra na modalidade atrfica aguda da classificao de LEHNER, em conseqncia de antibioticoterapia. ZEGARELLI & KUTSCHER (1964) registraram vrios casos de candidase pseudomembranosa relacionados ao uso tpico somente, bem como ao uso local e sistmico de corticosterides. Referem-se ao pnfigo como fator predisponente ao desenvolvimento dessa micose. Conforme assinala LEHNER (1967), tem sido registrados casos fatais de candidase sistmica, relacionada exodontia; em tais eventualidades ocorreu endocardite, meningite ou pneumonia, em virtude de disseminao hematognica de C. albicans ou C. pseudotropicalis. KOBAYAKAWA & col. (1964) referem-se localizao sinusal de Candida atravs de alvolos dentrios. A propsito, cumpre assinalar que leveduras do gnero Candida tem sido freqentemente isoladas de canais radiculares, por numerosos autores. TOMMASI (1968), estudando a freqncia com que tal contaminao ocorre nos canais radiculares, encontrou C. albicans em 86,4% dos casos. Em dentes parassinusais, no , portanto, de se desconsiderar a possibilidade de eventual propagao sinusal dessa infeco endodntica. Entre os fatores locais predisponentes ao desenvolvimento de candidases na cavidade bucal, devem ser destacados, ainda, de acordo com GRINSPAN (1973), os seguintes: - prteses, em especial as removveis - xerostomia - bruxismo - perda da dimenso vertical (distncia maxilo-mandibular anterior) - uso de chupeta - eroses e ceratinizao - falta de cuidados higinicos - fatores microtraumatizantes (arestas de dentes cariados, mordiscamento, etc.) - uso abusivo de fumo - fstulas congnitas comissurais - lngua escrotal. Entre os fatores predisponentes locais, merecern destaque os traumatismos de baixa intensidade e de longa durao, em especial os causados por prteses mal-adaptadas, mormente as que recobrem extensas reas da mucosa bucal (mucosa-suportadas), como as dentaduras. Neste particular, GRINSPAN (1973) enfatiza a importncia das leses decorrentes da ao mecnica de prteses com apoio sobre a mucosa, grupando-as da seguinte forma: - leses no palato, palatite subplaca, hiperplasia fibromatosa do palato duro (cmara de suco) - leses nos sulcos vestibulares, linguais e zonas adjacentes, ulceraes traumticas, hiperplasias fibromatosas - leses da mucosa bucal ao comear o uso da prtese - boca dolorosa em portadores de prtese - leses por aparelhos ortodnticos A essas leses decorrentes de ao mecnica sobre a mucosa bucal, JRGENSEN (1974) acrescenta, como aspecto importante, a ocluso de ductos das glndulas salivares menores disseminadas na rea recoberta pela placa prottica. Todos esses fatores condicionam a perda de continuidade do epitlio de revestimento bucal, favorecendo a invaso por Candida, a induo de estado de hipersensibilidade no hospedeiro, bem como a ao de toxinas elaboradas pelo fungo. Nessas eventualidades o epitlio se apresenta atrfico, manifestando-se clinicamente tal condio, em aspectos de hiperemia simples localizada, de hiperemia simples difusa ou de hiperemia com aspecto granuloso (hiperplasia papilar inflamatria). Em relao sua etiopatogenia, tais aspectos clnicos evolutivos podem ser assim esquematizados:

FATORES LOCAIS Prtese mal-adaptada Terreno modificado SISTMICOS Higiene deficiente crnico

Processo inflamatrio agudo ou sub-agudo

Hiperemia simples localizada ou difusa Eroso geralmente sem sangramento Fissuras Ulceraes Hiperplasia papilar Comumente com candidase associada

Ao considerar os mecanismos de defesa do hospedeiro frente ao potencial patognico de microrganismos participantes da ecologia bucal, JORGENSEN (1974) refere-se a duas linhas de defesa, sendo a primeira delas representada pela mucosa bucal, pelo fluxo salivar e por substncias existentes na saliva, bem como pela movimentao lingual e das paredes musculares da boca. No que se refere Candida, importantes enzimas existentes na saliva, tais como lactoferrina, lisozima e outras, exercem ao inibidora sobre o crescimento. Verificou-se que a lactoferrina existente na saliva parotdica capaz de inibir o crescimento de Candida albicans in vitro, por exercer ao quelante sobre o ferro, nutriente essencial quele crescimento. A1m de enzimas, tem sido demonstrada a presena de anticorpos anti-Candida, especialmente IgA na saliva, destacando-se os trabalhos de LEHNER (1967). Este autor verificou ttulos elevados de lgA em pacientes com rnanifestaes bucais de canddiase, sugerindo que esses anticorpos possam limitar a infeco mucosa bucal. H que se considerar, ainda, a atividade anti-Candida de leuccitos existentes na saliva, como mais um elemento de defesa de primeira linha. JRGENSEN (1974) atribui particular importncia atividade leucocitria sobre a mucosa bucal, exercida por polimorfonucleares migratrios. A presena de placa prottica, a1m de interferir com a ao antifngica da saliva, exerceria um bloqueio ao candidicida dos leuccitos, sobre a mucosa bucal. Uma segunda linha de defesa ativada, quando o epitIio bucal invadido, com a participao de leuccitos polimorfonucleares, de moncitos e de macrfagos, atravs de fagocitose. A estes elementos de defesa somam-se os anticorpos teciduais, os anticorpos sricos e o desenvolvimento de mecanismos de imunidade celular. A xerostomia assume, assim, entre os fatores locais predisponentes s candidases, particular importncia, uma vez que os mecanismos de defesa de primeira linha ficam, nessa eventualidade, bloqueados. Reduo drstica do fluxo salivar pode ocorrer relacionada a fatores locais, como a perda da dimenso vertical (distncia maxilo-mandibular anterior), nas disfunes da articulao tmporo-mandibular, bem como associada a condies sistmicas, como na sndrome de Sjgren. Estudando alteraes da pele e da mucosa bucal de pacientes geritricos, BAIKIE (1975) verificou que no tegumento cutneo ocorrem perda de resistncia, perda de gordura, decrscimo de gua e perda de elasticidade. A perda do contedo de gua acarreta sequido dos lbios e tendncia queilite angular. Afirma que as modificaes da mucosa bucal so semelhantes s da pele, referindo-se, ainda, falta da camada protetora de clulas ceratinizadas na mucosa mastigatria e reduo no fluxo salivar, mormente da saliva parotdica.

Com o crescente aumento da mdia de durao da vida humana, os problemas geritricos passam a assumir cada vez maior importncia, neles incluindo-se as candidases bucais, as quais apresentam aumento nesse grupo etrio em conseqncia dos fatos referidos e de outros. Assim, RADKE (1975) verificou que, em um grupo de 2.890 indivduos com idade acima de 65 anos, 75% eram desprovidos de dentes, sendo que dois teros deles usavam dentaduras defeituosas. As modificaes anatmicas supervenientes, bem como o dficit funcional resultante acarretavam problemas mdico-odontolgico, tais como queilite angular, lngua fissurada, anemia e xerostomia. Conforme assinala WEST (1975), a odontologia geritrica defronta-se com problemas de atrofia, de degenerao, de desidratao dos tecidos, de perda de tono muscular e com outros fatores sobre os quais no temos controle. Tais assertivas encontram confirmao de ANNEROTH & WICTORIN (1975), os quais, estudando a mucosa alveolar de pacientes acometidos de grave estomatite subplacas protticas, atravs de microrradiografia e de mtodos histolgicos, verificaram a no ceratinizao da mucosa alveolar em conseqncia de alteraes inflamatrias e degenerativas desencadeadas por efeito de trauma mecnico e de ao de microrganismos. O aumento na ocorrncia de Candida albicans em portadores de prteses fixas e removveis e, proporcionalmente ao tempo de uso das mesmas, foi verificado por SABET & col. (1975); o crescimento do fungo se d especialmente em relao s reas de compresso das prteses totais e s partes construdas em resina acrlica de prteses fixas. Em pacientes apresentando condies patolgicas da mucosa, houve esfregaos positivos para Candida albicans em at 100% dos casos. De acordo tambm com JRGENSEN (1974), freqente a presena de Candida albicans em esfregaos obtidos de dentaduras, o que torna o cuidado higinico deficiente, com as mesmas, significante como condio predisponente candidase. O hbito de ranger os dentes (bruxismo) provoca constante atrito de reas da mucosa bucal contra as superfcies dentrias a elas contguas, representando aprecivel fator mecnico predisponente ao desenvolvimento de candidases. A perda da dimenso vertical leva formao de dobras na pele adjacente s comissuras labiais, favorecendo a ao patognica de leveduras do gnero Candida. Leses preexistentes, tais como leucoplasia e carcinomas, favorecem nitidamente a ocorrncia de candidase, estando esta freqentemente associada s referidas condies patolgicas. BNCZY (1977) estudou 670 pacientes com leucoplasia durante um perodo de trinta anos, tendo verificado o desenvolvimento de cncer em 6% dos casos. Alta incidncia de candidases foi registrada nos pacientes com cncer (63%), enquanto que, entre os pacientes com formas erosivas de leucoplasia, a incidncia foi de 61% e, no total do grupo, ocorreu em 13,5% dos casos. A lngua escrotal ou lngua plicata e, em especial, a lngua fissurada, em que o epitIio de revestimento se encontra descontnuo no fundo das fissuras linguais, merecem destaque como fatores locais predisponentes s candidates. No que se refere lngua pilosa ou lngua vilosa, FARMAN (1977) estudou cerca de dois mil indivduos e verificou a ausncia de correlao entre tal condio e infeco por Candida. J a glossite mediana rmbica mais freqente em pacientes com candidase associada prtese total, conforme assinala JRGENSEN (1974). Em resumo, no que se refere etiopatogenia das candidases bucais, podemos dizer que os fungos do gnero Candida, especialmente, Candida albicans, podem assumir patogenicidade em decorrncia de alteraes locais, de condies sistmicas, ou de ambas, associadas. Leses preexistentes, traumatismos, fatores de ordem geral (endcrinos, metab1icos, doenas consuptivas e caquetizantes), agentes teraputicos (antibiticos, corticosterides, drogas citotxicas, radiaes), agindo isoladamente ou associados, podem interferir com a anfibiose, promovendo o desencadeamento de candidases. Estas so, portanto, doenas decorrentes de infeco endgena, provocadas por parasitismo ocasional desenvolvido por fungos do gnero Candida. Formas clnicas Ao tratar das formas clnicas de candidase, de interesse estomatolgico, vamos nos fundamentar na descrio que, de seus aspectos, fazem FONSECA & TOMMASI (1977). De

acordo com esses autores, grande o polimorfismo clnico decorrente da ao patognica de Candida albicans. Pode a doena assumir, desde formas clnicas localizadas, tais como estomatite, at formas graves, de doena generalizada, existindo entre esses extremos toda uma gama de configuraes clnicas. As candidases interessam, pois, a profissionais que militam no mbito de diversas especialidades. Cumpre salientar que, a1m de apresentar outras localizaes, as leses de candidase podem instalar-se em qualquer regido do tegumento cutneo ou das superfcies mucosas, assim envolvendo, notadamente, aspectos dermatolgicos e estomatolgicos. De especial interesse estomatolgico a classificao das formas clinicas de candidase, proposta por LEHNER (1967). De acordo com esse autor, podemos classificar as manifestaes clnicas de candidases da seguinte maneira: - Formas agudas: - Candidase pseudomembranosa - Candidase atrfica aguda - Formas crnicas: - Atrficas: - estomatite ulcerosa relacionada pr6tese total - queilite angular - Hiperplsicas: - candidase bucal crnica - candidase leucoplsica - candidase associada a disfunes endcrinas - candidase cutneo-mucosa localizada - candidase crnica difusa Na prtica, as formas localizadas de candidase, aguda ou crnica, so aquelas com que, mais freqentemente, nos defrontamos, constituindo-se em estomatite, glossite e queilite angular. A candidase pseudomembranosa aguda, vulgarmente conhecida como sapinho, tem ocorrncia mais freqente em crianas e em adultos debilitados; no entanto, vem sendo notado aumento progressivo de sua incidncia em outros indivduos, especialmente devido a fatores iatrognicos. CAWSON (1966) registra vrios casos em que a candidase pseudomembranosa pode ser relacionada ao uso de antibiticos de largo espectro, especialmente tetraciclinas, bem como a corticosterides de uso sistmico ou aplicados topicamente na mucosa bucal. A sua ocorrncia tem sido verificada ainda em pacientes submetidos a trauma cirrgico exodntico, seguido de instalao de prtese imediata, aos quais foi administrada profilaticamente antibioticoterapia no pr e no psoperatrio, conforme assinalam REITHER (1960) e FONSECA (1970). O fato observado com maior freqncia em pacientes idosos, cujo organismo , ainda, espoliado pela perda sangnea e restries na ingesto de substncias alimentares. As leses pseudomembranosas podem propagar-se diretamente faringe, laringe e esfago, bem como pode haver disseminao hematognica de Candida, propiciando o desenvolvimento de processos graves de pneumonia, endocardite, meningite e complicaes renais. Nas formas agudas de candidase, a mucosa se apresenta hipermica, seca, brilhante e, s vezes, os lbios esto parcialmente cobertos por crostas amareladas. As comissuras labiais podem apresentar fissuras recobertas por pseudomembranas. Os aspectos descritos para a mucosa bucal podem estender-se para as gengivas. Quando predomina a modalidade pseudomembranosa, observam-se placas pequenas, em algumas reas; em outras, podem ser observadas grandes extenses recobertas por placas confluentes. Estas placas so lisas, cremosas, branco-amareladas, fracamente aderentes, com distribuio varivel, podendo atingir todas as regies da boca e se estenderem faringe. Consistem de epitlio descamado, fibrina, restos necrticos, resduos alimentares, leuccitos e bactrias, entremeados pelas hifas dos fungos. Ao exame histopatgico, verifica-se que as hifas penetram no epitlio subjacente. Algumas vezes,

observam-se edema e microabscessos na camada espinhosa da mucosa. O conjuntivo subjacente apresenta intenso infiltrado inflamatrio. A queda das pseudomembranas pode levar ao aspecto eritematoso que caracteriza as formas agudas atrficas de candidase, o que particularmente visvel no dorso da lngua. Alm de surgir, dessa forma, secundariamente estomatite pseudomembranosa, pode a candidase atrfica aguda instalar-se primariamente na mucosa bucal. De acordo com LEHNER (1967), esta forma clnica est particularmente relacionada ao uso de antibiticos de largo espectro. dolorosa, podendo estender-se s comissuras labiais e faringe. A xerostomia pode estar presente, mormente quando a candidase ocorre em relao instalao de prtese total. A candidase atrfica aguda pode apresentar sintomatologia progressivamente atenuada, evoluindo para um estado crnico, no qual podem ser observadas inflamao e ulceraes na rea recoberta pela prtese total superior. Tal forma evolutiva mais freqente nas mulheres e no se relaciona idade do paciente. Corresponde dentadura. A queilite angular por Candida ocorre em indivduos que apresentam perda de dimenso vertical, melhor chamada distncia maxilo-mandibular. Tal situao acarreta a formao de uma dobra da pele, a qual se mantm mida junto comissura labial, favorecendo a ao patognica do fungo. Assim, a queilite comissural uma forma intertriginosa, a qual assume carter recidivante, s se conseguindo a consolidao da cura pelo restabelecimento da distncia maxilo-mandibular, conforme assinalam SLUTLEWORTH & GIBBS (1960). O diagnstico diferencial com leses de fundo carencial (arriboflavinose) e com leses de sfilis deve ser feito (siflides comissurais). FOX & AINSWORTH (1958) encontraram etiologia fngica em 21 de 24 casos de queilite angular estudados; nesse material predominava C. albicans, tendo sido identificadas, ainda, as espcies krusei e parapsilosis. MARCUCCI (1972), cultivando material obtido de 18 pacientes, com leses de queilite angular, obteve 61,11% de resultados positivos para leveduras, as quais, aps identificadas, revelaram ser C. albicans na quase totalidade, constatando-se, apenas uma vez, tratarse de C. tropicalis. Desses 18 pacientes, 14 apresentavam acentuada perda de dimenso vertical (77,7%). LEHNER (1964) descreve formas crnicas hiperplsicas de candidase bucal, salientando que as mesmas podem simular leucoplasia. Caracterizam-se por placas brancas, firmes e persistentes, as quais se localizam de preferncia nos lbios, bochechas e lngua. So resistentes ao tratamento, sendo difcil o diagnstico diferencial com leucoplasia. Por outro lado, esta favorece o desenvolvimento de candidase. PEJRONE (1967) refere-se forma papilomatosa ou hiperceratsica de candidase bucal, em adultos. As leses tem sede preferencial na lngua e nas comissuras labiais. Quando se instalam na lngua, esta revela profundos sulcos, os quais separam as formaes hiperplsicas, localizadas mormente nas bordas e na ponta. Nas comissuras labiais, as leses apresentam-se ragadiformes, de colorao rseo-acinzentada. A pele circunvizinha mostra leses hemorrgicas, escamo-crostosas. Quando existem ulceraes, as mesmas tem aspecto granuloso ou esto recobertas de induto cremo-caseoso. Diagnstico diferencial deve ser feito com leucoplasia e com carcinoma lcero-vegetante. Algumas disfunes endcrinas, notadamente hipoparatireoidismo e doena de Addison, ocorrendo isolada ou simultaneamente, bem como alteraes do timo, sndromes que envolvem deficincias imunolgica, podem relacionar-se a formas crnicas de candidase. Ocorrem predominantemente em crianas, sendo mais freqentes em meninas. Tem como manifestao prodrmica leses bucais e ungueais, as quais podem preceder de vrios anos os aspectos clnicos sugestivos da endocrinopatia (LEHNER, 1967). A crato-conjuntivite, como aspecto associado, tem sido registrada (HERMANS & COIS., 1969). A candidase cutneo-mucosa crnica localizada apresenta aspectos dermatolgicos importantes, com o desenvolvimento de leses na face e no crnio, granulosas ou ppulo-crostosas, dando origem a massas ceratsicas que assumem aspecto crneo. H envolvimento das unhas e, na boca, aparecem placas brancas, com o aspecto hiperplsico j descrito a propsito das formas crnicas hiperplsicas de candidiase bucal.

Critrios para o diagnstico de candidase bucal O diagnstico de candidase bucal fundamenta-se nos sinais presentes ao exame fsico, bem como em dados anamnsticos, os quais variam de acordo com a forma clnica da doena. Conforme assinalam FONSECA & TOMMASI (1977), a presena de placas brancas pseudomembranosas, generalizadas, na mucosa bucal, podendo estender-se faringe; a constatao da existncia de extensas reas eritematosas, dolorosas, evidenciando-se, especialmente na lngua, aspectos atrficos; o mesmo aspecto eritematoso, com atenuao dos sintomas dolorosos e inflamatrios, porm, entremeado de leses ulcerativas, localizadas sob a base de prtese total superior; a verificao da presena de leses comissurais, intertriginosas, estendendo-se pele e apresentando aspecto ulcerativo e com tendncia a sangramento, relacionadas a perda de dimenso vertical; a presena de leses brancas, de aspecto hiperplsico, com localizao preferencial nos lbios, bochechas e lngua, anteriormente assinaladas; a presena destas leses em lngua, apresentando sulcos profundos; a coexistncia de leses cutneas com o aspecto j descrito e outros, tais como o envolvimento ungueal e periungueal, lembram a candidase. Tambm devem ser pesquisados dados anamnsticos que fundamentam a suspeita clnica de estarem esses sinais e sintomas relacionados a alteraes sistmicas de ordem endcrina, metab1ica, carencial, tais como hipoparatireoidismo, tireoidopatias, doena de Addison, diabetes melito, tumor maligno, problemas de ordem imunolgica, bem como a referncia ao uso tpico ou sistmico de antibiticos, de corticosterides ou de drogas citotxicas. Face aos dados clnicos referidos, justifica-se a formulao da hiptese de tratar-se de candidase. Assim, os aspectos de ordem geral devero merecer investigao mdica, para melhor esclarecimento. Por outro lado, exames complementares, tais como exame micolgico de material obtido das leses, citologia esfoliativa e bipsia iro contribuir para o diagnstico etiolgico das leses presentes. A presena de filamentos micelianos, ao exame direto de material colhido das leses; os cortes histolgicos revelando as hifas penetrando no epitlio, microabscessos intraepiteliais, infiltrado inflamatrio no crio subjacente, nos casos de formas agudas atrficas; a comprovao histolgica de paraceratose, acantose e hiperplasia pseudo-epitelionatosa, nas formas hiperplsicas, fundamentaro o diagnstico. A colorao pelo mtodo de Mac Mannus (PAS) favorece a identificao do fungo nos tecidos. De acordo com JENKINS & cols. (1977), nas formas atrficas de candidase bucal verificase ruptura da camada crnea, provavelmente por ao enzimtica, verificando-se crescimento do fungo sobre a mucosa, sem que haja invaso. Ao contrrio, nas formas hiperplsicas, a invaso do epitlio pelas hifas de constatao freqente. Esses autores verificaram que grande proporo de pacientes com candidase crnica hiperplsica apresenta deficincias de ferro ou de folato, embora no sejam necessariamente anmicos. Tendo em conta a freqente correlao entre esta forma da doena e o carcinoma da mucosa bucal, salientam a importncia de se investigar, nos casos de formas hiperplsicas, a participao de fatores sistmicos no complexo etiopatognico da candidase, visando sua mais rpida erradicao. Relativamente aos aspectos imunolgicos das leveduras em questo, cumpre destacar os trabalhos de LEHNER (1965). Esse autor atribui importncia clnica ao exame imunolgico, tendo verificado, atravs da imunofluorescncia, diferenas entre os ttulos de anticorpos sricos e salivares em indivduos portadores sadios e em carentes. Os doentes que apresentavam formas crnicas e. especialmente hiperplsicas, tinham ttulos sricos e salivares particularmente elevados. Tratamento No tratamento das leveduroses mucosas ou cutneo-mucosas, fundamental procurar identificar e corrigir os fatores predisponentes ao parasitismo desses microrganismos oportunistas, conforme assinala FONSECA (1970). Uma vez detectados fatores locais que possam estar envolvidos no complexo etiopatognico da micose, os mesmos devero ser eliminados. Ateno especial merecero os aparelhos protticos, mormente as prteses mucosa-suportadas, as quais devero ser apreciadas tanto no que se refere aos seus contornos e relevo, como quanto sua

adaptao e estabilidade. O paciente ser orientado quanto aos cuidados higinicos relativos ao aparelho prottico, o qual dever ser cuidadosamente escovado nas superfcies de contato com a mucosa. Nas formas de queilite angular, a correo da dimenso vertical essencial consolidao da cura das leses. Nos casos em que, frente aos dados anamnsticos aos sinais presentes e aos resultados de exames complementares, os fatores estritamente locais no fundamentam o juzo clnico de serem os nicos relacionados s leses presentes, ou, quando a sua supresso, somada ao tratamento especfico de candidase, no promove cura ou melhora clnica aprecivel, o encaminhamento do paciente para investigao e tratamento, em mbito mdico, de doenas correlacionadas, sejam elas endcrinas, metab1icas, carenciais ou outras, medida que se impe, conforme assinalam LACAZ (1967) e BRIAN & COSLEY (1967). Como foi salientado, as candidases decorrem, freqentemente, de efeitos iatrofarmacognicos; em tais casos, a suspenso, sempre que possvel, da administrao da droga, aspecto a ser considerado cuidadosamente. O tratamento especfico das candidases se far mediante esquemas teraputicos subordinados forma clnica, no que respeita ao carter localizado, bucal, ou sistmico com que a doena se apresente. Quando a mesma de carter local, o uso tpico de corantes, como a violeta de genciana e o azul de metileno em solues aquosas, em concentraes de 1 a 5%, apresenta resultados efetivos. Da mesma forma, bochechos com solues alcalinas, utilizando-se o bicarbonato de sdio, bem como o borato de sdio, favorecem a reparao das leses. GRINSPAN (1973) refere-se utilidade dessas substncias em solues a 25%, aplicadas em embrocaes visando eliminao das pseudomembranas, nos casos de candidase pseudomembranosa aguda. Relativamente s formas de localizao bucal, agudas, subagudas ou crnicas, a fungicidiva constitui poderoso agente teraputico, devendo ser aplicada localmente pela utilizao de suspenso ou de comprimidos. Estes devem ser colocados na boca, a fim de se dissolverem lentamente, favorecendo-se, assim, sua ao local; a dose ser de um comprimido de 500.000 U, quatro vezes ao dia. Nos casos de leses no palato, dispositivos protticos podero ser confeccionados para favorecer o contato do frmaco com a mucosa lesada, durante tempo mais longo. A anfotericina B em pomada veiculada por orobase poder tambm ser til em tratamento local. O uso sistmico dessa droga dever ficar restrito s formas graves, generalizadas, com disseminao cutnea, vaginal, visceral, etc., geralmente decorrentes de fatores sistmicos e que passam ao mbito mdico. GRINSPAN (1973) refere-se a resultados promissores com a utilizao da 5-fluorocitosina no tratamento de leveduroses, ministrada por via oral ou parenteral. O referido autor aponta, ainda, a primaricina ou a natamicina como medicamento til para o tratamento tpico de leses de pele e de mucosas. No esquecer o ketoconazol, por via oral, nas formas graves de candidase (200 mg, 2 vezes ao dia). 1. DESCREVA AS FORMAS CLNICAS DE CANDIDASES ORAL. 2. QUAIS SO OS CRITRIOS PARA O DIAGNSTICO DE CANDIDASE BUCAL? 3. DESCREVA OS FATORES DE VIRULNCIA DAS LEVEDURAS.

Espiroquetas
So denominadas espiroquetas as bactrias que se apresentam sob a forma de espiral. Alm desta caracterstica so relativamente longas, finas, flexveis e se movimentam por rotao e flexo. As espiroquetas so bactrias anaerbias Gram-negativas. Entre as muitas espcies bacterianas que vivem na placa dental, os microrganismos mais facilmente reconhecveis so as espiroquetas. Devido sua motilidade e morfologia caracterstica, so rapidamente discernveis em exames de placas subgengivais por microscopia de campo escuro e/ou de contraste de fase. Espiroquetas so as nicas bactrias a apresentar uma estrutura interna tipo flagelo chamada filamento axial, que se localiza entre o envelope externo osmoticamente lbil e um rgido cilindro protoplasmtico interno, ou seja, os flagelos nascem em cada extremidade do germe, e caminha em direo parte mdia do corpo, sempre internamente membrana externa. Nas demais bactrias, os flagelos se projetam para o exterior. Alguns desses espiroquetas foram cultivados e divididos em trs gneros bastante diferentes: Treponema, Leptospira e Borrelia. Treponema O gnero Treponema compreende vrias espcies, algumas sendo patognicas, outras no. As patognicas so T. pallidum, T. pertunue e T. carateum, agentes da sfilis, bouba e pinta, respectivamente. provvel que uma variante do T. pallidum seja o agente do bejel, infeco conhecida como sfilis endmica. A sfilis comum uma doena venrea, enquanto que as

demais treponematoses no o so. Dos treponemas patognicos, o T. pallidum o maior significado clnico, tanto pela freqncia quanto pela gravidade da doena. Treponema pallidum uma bactria espiralada no cultivvel em meios de cultura, mas pode causar infeco experimental no coelho e no macaco. O estudo da estrutura antignica do T. pallidum tem sido prejudicado pela impossibilidade de cultiv-lo in vitro. Sabemos entretanto, que possui vrios antgenos, os quais so idnticos aos de outras espcies de treponemas patognicos. Patogenicidade: A sfilis pode ser dividida em trs formas clnicas: primria, secundria e terciria. A primria se caracteriza pela presena do cancro duro, que se localiza mais freqentemente nos rgos genitais, aparecendo dez a vinte dias aps o contato sexual. O aspecto do cancro duro pode variar desde uma pequena eroso at uma lcera profunda, sendo a leso quase nica e muitas vezes oculta, sobretudo em mulheres. bastante rica em treponemas e cicatriza, mesmo sem tratamento, em quatro a seis semanas. As manifestaes da sfilis secundria aparecem duas a dez semanas aps o surgimento do cancro. A sfilis terciria surge oito a 25 anos depois da infeco inicial. Mas freqentemente, estas leses aparecem na poro ascendente, sistema nervoso central e esqueleto. De modo geral, so leses destrutivas, e portanto graves. A evoluo da sfilis, com perodos curtos de sintomas e longos de remisso, um reflexo da luta que se trava entre o T. pallidum e as defesas do organismo. Os fatores de virulncia da bactria no so bem conhecidos, mas algumas evidncias sugerem:
- que a bactria se fixa, por uma das extremidades, a receptores existentes nos mucopolissacardeos do tecido conjuntivo

Aula 22- Doenas sexualmente transmissveis (DSTs) - 1 Sfilis (cancro duro) Herpes Simples Herpes Zoster Sndrome da imunodeficincia adquirida (AIDS ou SIDA) Infeco Clamidial Gonorria (Blenorragia) Tricomonase Hepatite Papilomavrus Cancro mole (cancride) Linfogranuloma Venreo Granuloma inguinal Candidase genital Escabiose (sarna) Pediculose Pbica Molusco Contagioso Salmonelose Giardase Amebase Shiguelose Campilobacterose Citomegalovirose Clera

As 5 doenas sexualmente transmissveis (DST) historicamente definidas como doenas venreas so: sfilis, gonorria, cancro mole, linfogranuloma venreo e granuloma inguinal. Hoje, provavelmente, estas so menos prevalentes que doenas tais com uretrites no especficas, tricomonases, infeco clamidial, candidase genital, herpes genital e anoretal, verrugas, vulvovaginites, protites, escabiose, pediculose pbica, molusco contagioso. Outras infeces ainda como salmonelose, giardase, amebase, shiguelose, campilobacterioses, hepatite B, e citomegaloviroses, algumas vezes so sexualmente transmissveis. Elevada associao entre cncer cervical e herpesviroses ou papilomaviroses tm sido descobertas e relacionadas as DSTs, e, finalmente a AIDS a mais recente doena sexual conhecida tem-se espalhado rapidamente no mundo.

Definio: As DSTs so doenas adquiridas durante o contato genital heterossexual ou homossexual, contato corporal, sexo oral e beijo ntimo. Sfilis A origem da sfilis desconhecida, mas ela tornou-se praticamente epidmica na Europa por volta de 1945. No sculo seguinte, disseminou-se rapidamente como uma doena aguda, que era freqentemente fatal no estgio secundrio. Fracastorius (1530) denominou a doena de sfilis, palavra derivada do grego siphos que significa mutilado. O agente etiolgico da sfilis foi identificado por Hoffman e Schaudinn em 1905, quando encontraram um microrganismo espiralado no exudato de uma leso secundria. O Treponema pallidum um espiroqueta microaerfilo que causa a sfilis, uma doena venrea sistmica com mltiplas apresentaes clnicas. Esse microrganismo apresenta uma bainha externa e um flagelo periplasmtico axial em torno de um protoplasma helicoidal; no so cultivveis porm coram-se pela prata (mtodo de Fontana Tribondeau), podem ser examinados em campo escuro e tcnicas de imunofluorescncia. Esses microrganismos podem ser observados tambm por esfregaos corados com tinta da China: conhecido como mtodo de BURRI ou da colorao negativa, ou pela colorao pelo mtodo de GIEMSA os T. pallidum coram-se tenuamente. A transmisso transplacentria do T. pallidum pode ocorrer da me infectada ao feto, aps o quarto ms de gestao, ocasionando a sfilis congnita. A transmisso do T. pallidum atravs dos rgos genitais responsvel por 95% dos casos de sfilis. Uma grande proporo de infeces extragenitais ocorre nas proximidades da boca ou como resultado da disseminao dos microrganismos pela cavidade bucal durante o beijo. A sfilis raramente transmitida por via indireta, atravs de fmites, porm pode ser transmitida tambm por transfuso sangnea ou aerossis. Aspectos clnicos A sfilis possui trs estgios: - Estgio primrio ocorre aps um perodo de incubao de 10 dias a trs semanas aps o contato com o microrganismo, e caracteriza-se por

surgimento de leso (ppula) com base dura e avermelhada, nica, firme, levemente elevada e no-dolorosa (cancro), localizada no local da invaso no pnis (geralmente na glande) ou escroto (70% dos homens), crvix ou parede vaginal (50% das mulheres), nus e as vezes na boca ou lngua (sexo oral). Essa ppula sofre eroso e posterior formao de uma lcera com base limpa. A endurao contgua cria uma massa semelhante a um boto diretamente subjacente pele erudida, que constitui a base da designao de cancro duro. Embora os espiroquetas sejam semeados no organismo por via hematognica, o cancro desaparece em algumas semanas com ou sem tratamento, sem deixar cicatrizes. Os treponemas podem ser geralmente encontrados em tais leses, que permanecem por 10 a 14 dias antes da cura espontnea. Nesta fase a doena extremamente contagiosa. - Estgio secundrio ocorre duas a dez semanas aps o cancro primrio, caracteriza-se por um rash (manchas vermelho-acastanhadas) difuso nas palmas da mo e plantas dos ps que pode ser acompanhado por leses mucocutneas orais esbranquiadas, febre, linfadenopatia (o indivduo apresenta um aumento dos linfonodos em todo o corpo), mal estar, cefalia e artrite. Manchas mucosas avermelhadas na boca e na vagina contm a maior parte dos microrganismos e so as mais infecciosas porm mais difcil de demonstr-los neste estgio, mesmo depois de repetidos exames. Estas leses resolvem-se espontaneamente levando o indivduo cura.. - Estgio tercirio ou tardio ocorre anos aps a leso primria (5 a 30 anos), caracteriza-se ainda por leses inflamatrias ativas da aorta (com maior freqncia-85% dos casos), corao e sistema nervoso central (10% dos casos) ou por leses quiescentes (gomas branco-acinzentadas e com consistncia de borracha) envolvendo fgado, ossos e pele. Na sfilis congnita, a criana ao nascer pode apresentar sintomas da sfilis primria, secundria ou terciria, mais mais grave quando a infeco da me recente. A sfilis provoca aborto tardio, morte fetal intrauterina, ou mal latente, tornando-se aparente apenas durante a infncia ou a vida adulta. Com referncia a cavidade bucal, a criana pode apresentar dentio retardada e desenvolvimento anormal de incisivos (dentes de Hutchinson pequenos e afiados como uma chave de fenda, em geral com entalhes no esmalte) e molares (dentes em amora). Essas crianas apresentam tambm alteraes oculares com ceratite intersticial e coroidite com produo anormal de pigmento provocando manchas na retina e surdez.

Sorodiagnstico da sfilis - Teste VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) - por anticorpos anti-cardiolipina: so reaes sorolgicas nas quais se emprega como antgeno a cardiolipina, extrada do corao bovino. As reaes baseiam-se em pesquisa de anticorpos produzidos contra o T. pallidum que sofrem reao cruzada com a cardiolipina. Incluem-se neste grupo principalmente: a) reao de fixao de complemento: reao de Wassermann, reao com o antgeno protico de Reiter; b) reaes de floculao ( ou precipitao): reao de Kahn. - por antgenos preparados com T. pallidum e outros treponemas. a) teste de fixao do complemento com T. pallidum (CPCF); b) teste de aglutinao do T. pallidum (TPA); c) teste de imobilizao do T. pallidum (TPI); d) teste de imunoaderncia do T. pallidum (TPIA); e) prova de anticorpos fluorescentes anti-T. pallidum (FTA- Fluorescent Treponemal Antibody Absorption), sendo este ltimo teste, considerado o mais especfico para T. pallidum. Diagnstico Clnico Diagnstico laboratorial - Sfilis primria: faz-se observao do material de raspado do cancro, onde encontra-se os T. pallidum que podem ser observados em campo escuro e tcnicas de imunofluorescncia. - Sfilis secundria: utilizam-se reaes sorolgicas. Imunidade No existem mtodos conhecidos para imunizao contra infeco induzida pelo T. Pallidum. Indivduos que se recuperam da infeco so suceptveis reinfeco, desde que novamente expostos ao contgio. Tratamento Antibiticos, sendo a droga de escolha a penicilina (Benzetacil). A dosagem administrada no paciente depende do estadiamento da doena. E no caso de alergia pela penicilina administrado eritromicina ou tetraciclina.

Herpes Simples Os vrus da Herpes simplex, VHS-1 e VHS-2 so geneticamente similares e causam um padro semelhante de infeces primrias e recorrentes, so vrus grandes e encapsulados com um genoma DNA de fita dupla. Replicam-se na pele e membranas mucosas no stio de entrada viral (orofaringe ou genitais), onde causam leses vesiculares da epiderme com posterior ulceraes e, infectam os neurnios que inervam estes locais. As ulceraes podem ser dolorosas, e a infeco viral pode ser sria mas raramente fatal. Dentro do ncleo das clulas epiteliais do hospedeiro, as protenas codificadas pelo VHS formam um compartimento de replicao onde o DNA viral formado e as protenas do capsdio ligadas. O envelope une-se ao nucleocapsdio no citoplasma. Nos hospedeiros imunocompetentes, a infeco primria pelo VHS resolve-se em algumas semanas, embora os herpes vrus permaneam latentes nas clulas nervosas. A latncia operacionalmente definida como incapacidade de recuperar partculas infecciosas a partir das clulas rompidas que abrigam o vrus, embora o DNA e algum mRNA viral possam ser identificados por mtodos moleculares. A reativao do HSV-1 e HSV-2, ocasionando o herpes recorrente, pode ocorrer repetidamente com ou sem sintomas e resulta na disseminao do vrus a partir dos neurnios para a pele ou membranas mucosas. O Herpes genital caracteriza-se por vesculas nas membranas mucosas genitais, bem como na genitlia externa, que se convertem rapidamente em ulceraes superficiais, circundadas por infiltrado inflamatrio. O VHS-2 (que ocorre mais freqentemente na regio genital) transmitido aos recmnascidos durante a passagem atravs do canal do parto a partir de mes infectadas. Estudos mostram que muitas pessoas tm o tipo 1 (97% da populao adulta) e este pode afetar principalmente a regio labial (porm pode manifestar-se na regio genital). Afeta os lbios, boca, nariz, queixo ou face durante a infncia ou adolescncia . Na maioria das vezes a manifestao da infeco primria ocorre em crianas na forma na gengivo-estomatite herptica num perodo mximo de 7 dias, com sintomas de febre, dor ( apesar da grande maioria das infeces primrias serem assintomticas), mucosa vermelha com formao de vesculas, em seguida bolhas que se rompem ocasionando ulceraes junto com uma inflamao e edema. Esta ulcerao

seca e sara. A fase de ulcerao uma fase extremamente contagiosa, devendo-se evitar contato direto com a leso ou aerossis, pois o HSV-1 pode provocar tambm o herpes ocular, e causar cegueira virtica. A estomatite herptica no adulto manifesta-se de uma maneira mais agravante, tendo sintomas exacerbados da doena. Algumas fatores podem reativar o vrus, tais como: - traumas - febre - luz UV - alteraes hormonais - corticosterides - estresse (Ex. frio intenso) Caso o vrus seja reativado, este volta a regio onde ocorreu a infeco primria e causa novamente a leso. Tratamento Medicamento - Aciclovir (Zovirax) Herpes Zoster (vulgarmente conhecido como cobreiro) O vrus da Herpes Zoster, a primeira vez que se manifesta desenvolve a catapora ou varicela, que altamente contagiosa por secrees da saliva, nariz, etc. As leses neste caso formam regies avermelhadas, vesculas (bolhas com lquido claro), em seguida pstulas (bolhas com lquido amarelo), crosta e cicatriz. O vrus permanece alojado no gnglio sensitivo, e quando cai a resistncia do indivduo que j teve a catapora, o vrus percorre o caminho do nervo, e normalmente causa uma leso unilateral que vai desde a regio dorsal at a regio medial do corpo. O principal sintoma da doena a dor, que leva de 3-4 dias, com leses que duram aproximadamente 3 semanas para se curar. Na Herpes Zoster, em geral, deixa cicatriz diferentemente da Herpes Simplex que normalmente no deixa cicatriz. QUESTES 1-Defina doenas sexualmente transmissveis. 2-Qual o microrganismo responsvel pelo desenvolvimento da sfilis? Descreva os diferentes estgios da doena. 3- Quando ocorre a herpes recorrente e que fatores podem reativ-lo?

Aula 22- Doenas sexualmente transmissveis (DSTs) - 1 Sfilis (cancro duro) Herpes Simples Herpes Zoster Sndrome da imunodeficincia adquirida (AIDS ou SIDA) Infeco Clamidial Gonorria (Blenorragia) Tricomonase Hepatite Papilomavrus Cancro mole (cancride) Linfogranuloma Venreo Granuloma inguinal Candidase genital Escabiose (sarna) Pediculose Pbica Molusco Contagioso Salmonelose Giardase Amebase Shiguelose Campilobacterose Citomegalovirose Clera

As 5 doenas sexualmente transmissveis (DST) historicamente definidas como doenas venreas so: sfilis, gonorria, cancro mole, linfogranuloma venreo e granuloma inguinal. Hoje, provavelmente, estas so menos prevalentes que doenas tais com uretrites no especficas, tricomonases, infeco clamidial, candidase genital, herpes genital e anoretal, verrugas, vulvovaginites, protites, escabiose, pediculose pbica, molusco contagioso. Outras infeces ainda como salmonelose, giardase, amebase, shiguelose, campilobacterioses, hepatite B, e citomegaloviroses, algumas vezes so sexualmente transmissveis. Elevada associao entre cncer cervical e herpesviroses ou papilomaviroses tm sido descobertas e relacionadas as DSTs, e, finalmente a AIDS a mais recente doena sexual conhecida tem-se espalhado rapidamente no mundo.

Definio: As DSTs so doenas adquiridas durante o contato genital heterossexual ou homossexual, contato corporal, sexo oral e beijo ntimo. Sfilis A origem da sfilis desconhecida, mas ela tornou-se praticamente epidmica na Europa por volta de 1945. No sculo seguinte, disseminou-se rapidamente como uma doena aguda, que era freqentemente fatal no estgio secundrio. Fracastorius (1530) denominou a doena de sfilis, palavra derivada do grego siphos que significa mutilado. O agente etiolgico da sfilis foi identificado por Hoffman e Schaudinn em 1905, quando encontraram um microrganismo espiralado no exudato de uma leso secundria. O Treponema pallidum um espiroqueta microaerfilo que causa a sfilis, uma doena venrea sistmica com mltiplas apresentaes clnicas. Esse microrganismo apresenta uma bainha externa e um flagelo periplasmtico axial em torno de um protoplasma helicoidal; no so cultivveis porm coram-se pela prata (mtodo de Fontana Tribondeau), podem ser examinados em campo escuro e tcnicas de imunofluorescncia. Esses microrganismos podem ser observados tambm por esfregaos corados com tinta da China: conhecido como mtodo de BURRI ou da colorao negativa, ou pela colorao pelo mtodo de GIEMSA os T. pallidum coram-se tenuamente. A transmisso transplacentria do T. pallidum pode ocorrer da me infectada ao feto, aps o quarto ms de gestao, ocasionando a sfilis congnita. A transmisso do T. pallidum atravs dos rgos genitais responsvel por 95% dos casos de sfilis. Uma grande proporo de infeces extragenitais ocorre nas proximidades da boca ou como resultado da disseminao dos microrganismos pela cavidade bucal durante o beijo. A sfilis raramente transmitida por via indireta, atravs de fmites, porm pode ser transmitida tambm por transfuso sangnea ou aerossis. Aspectos clnicos A sfilis possui trs estgios: - Estgio primrio ocorre aps um perodo de incubao de 10 dias a trs semanas aps o contato com o microrganismo, e caracteriza-se por

surgimento de leso (ppula) com base dura e avermelhada, nica, firme, levemente elevada e no-dolorosa (cancro), localizada no local da invaso no pnis (geralmente na glande) ou escroto (70% dos homens), crvix ou parede vaginal (50% das mulheres), nus e as vezes na boca ou lngua (sexo oral). Essa ppula sofre eroso e posterior formao de uma lcera com base limpa. A endurao contgua cria uma massa semelhante a um boto diretamente subjacente pele erudida, que constitui a base da designao de cancro duro. Embora os espiroquetas sejam semeados no organismo por via hematognica, o cancro desaparece em algumas semanas com ou sem tratamento, sem deixar cicatrizes. Os treponemas podem ser geralmente encontrados em tais leses, que permanecem por 10 a 14 dias antes da cura espontnea. Nesta fase a doena extremamente contagiosa. - Estgio secundrio ocorre duas a dez semanas aps o cancro primrio, caracteriza-se por um rash (manchas vermelho-acastanhadas) difuso nas palmas da mo e plantas dos ps que pode ser acompanhado por leses mucocutneas orais esbranquiadas, febre, linfadenopatia (o indivduo apresenta um aumento dos linfonodos em todo o corpo), mal estar, cefalia e artrite. Manchas mucosas avermelhadas na boca e na vagina contm a maior parte dos microrganismos e so as mais infecciosas porm mais difcil de demonstr-los neste estgio, mesmo depois de repetidos exames. Estas leses resolvem-se espontaneamente levando o indivduo cura.. - Estgio tercirio ou tardio ocorre anos aps a leso primria (5 a 30 anos), caracteriza-se ainda por leses inflamatrias ativas da aorta (com maior freqncia-85% dos casos), corao e sistema nervoso central (10% dos casos) ou por leses quiescentes (gomas branco-acinzentadas e com consistncia de borracha) envolvendo fgado, ossos e pele. Na sfilis congnita, a criana ao nascer pode apresentar sintomas da sfilis primria, secundria ou terciria, mais mais grave quando a infeco da me recente. A sfilis provoca aborto tardio, morte fetal intrauterina, ou mal latente, tornando-se aparente apenas durante a infncia ou a vida adulta. Com referncia a cavidade bucal, a criana pode apresentar dentio retardada e desenvolvimento anormal de incisivos (dentes de Hutchinson pequenos e afiados como uma chave de fenda, em geral com entalhes no esmalte) e molares (dentes em amora). Essas crianas apresentam tambm alteraes oculares com ceratite intersticial e coroidite com produo anormal de pigmento provocando manchas na retina e surdez.

Sorodiagnstico da sfilis - Teste VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) - por anticorpos anti-cardiolipina: so reaes sorolgicas nas quais se emprega como antgeno a cardiolipina, extrada do corao bovino. As reaes baseiam-se em pesquisa de anticorpos produzidos contra o T. pallidum que sofrem reao cruzada com a cardiolipina. Incluem-se neste grupo principalmente: a) reao de fixao de complemento: reao de Wassermann, reao com o antgeno protico de Reiter; b) reaes de floculao ( ou precipitao): reao de Kahn. - por antgenos preparados com T. pallidum e outros treponemas. a) teste de fixao do complemento com T. pallidum (CPCF); b) teste de aglutinao do T. pallidum (TPA); c) teste de imobilizao do T. pallidum (TPI); d) teste de imunoaderncia do T. pallidum (TPIA); e) prova de anticorpos fluorescentes anti-T. pallidum (FTA- Fluorescent Treponemal Antibody Absorption), sendo este ltimo teste, considerado o mais especfico para T. pallidum. Diagnstico Clnico Diagnstico laboratorial - Sfilis primria: faz-se observao do material de raspado do cancro, onde encontra-se os T. pallidum que podem ser observados em campo escuro e tcnicas de imunofluorescncia. - Sfilis secundria: utilizam-se reaes sorolgicas. Imunidade No existem mtodos conhecidos para imunizao contra infeco induzida pelo T. Pallidum. Indivduos que se recuperam da infeco so suceptveis reinfeco, desde que novamente expostos ao contgio. Tratamento Antibiticos, sendo a droga de escolha a penicilina (Benzetacil). A dosagem administrada no paciente depende do estadiamento da doena. E no caso de alergia pela penicilina administrado eritromicina ou tetraciclina.

Herpes Simples Os vrus da Herpes simplex, VHS-1 e VHS-2 so geneticamente similares e causam um padro semelhante de infeces primrias e recorrentes, so vrus grandes e encapsulados com um genoma DNA de fita dupla. Replicam-se na pele e membranas mucosas no stio de entrada viral (orofaringe ou genitais), onde causam leses vesiculares da epiderme com posterior ulceraes e, infectam os neurnios que inervam estes locais. As ulceraes podem ser dolorosas, e a infeco viral pode ser sria mas raramente fatal. Dentro do ncleo das clulas epiteliais do hospedeiro, as protenas codificadas pelo VHS formam um compartimento de replicao onde o DNA viral formado e as protenas do capsdio ligadas. O envelope une-se ao nucleocapsdio no citoplasma. Nos hospedeiros imunocompetentes, a infeco primria pelo VHS resolve-se em algumas semanas, embora os herpes vrus permaneam latentes nas clulas nervosas. A latncia operacionalmente definida como incapacidade de recuperar partculas infecciosas a partir das clulas rompidas que abrigam o vrus, embora o DNA e algum mRNA viral possam ser identificados por mtodos moleculares. A reativao do HSV-1 e HSV-2, ocasionando o herpes recorrente, pode ocorrer repetidamente com ou sem sintomas e resulta na disseminao do vrus a partir dos neurnios para a pele ou membranas mucosas. O Herpes genital caracteriza-se por vesculas nas membranas mucosas genitais, bem como na genitlia externa, que se convertem rapidamente em ulceraes superficiais, circundadas por infiltrado inflamatrio. O VHS-2 (que ocorre mais freqentemente na regio genital) transmitido aos recmnascidos durante a passagem atravs do canal do parto a partir de mes infectadas. Estudos mostram que muitas pessoas tm o tipo 1 (97% da populao adulta) e este pode afetar principalmente a regio labial (porm pode manifestar-se na regio genital). Afeta os lbios, boca, nariz, queixo ou face durante a infncia ou adolescncia . Na maioria das vezes a manifestao da infeco primria ocorre em crianas na forma na gengivo-estomatite herptica num perodo mximo de 7 dias, com sintomas de febre, dor ( apesar da grande maioria das infeces primrias serem assintomticas), mucosa vermelha com formao de vesculas, em seguida bolhas que se rompem ocasionando ulceraes junto com uma inflamao e edema. Esta ulcerao

seca e sara. A fase de ulcerao uma fase extremamente contagiosa, devendo-se evitar contato direto com a leso ou aerossis, pois o HSV-1 pode provocar tambm o herpes ocular, e causar cegueira virtica. A estomatite herptica no adulto manifesta-se de uma maneira mais agravante, tendo sintomas exacerbados da doena. Algumas fatores podem reativar o vrus, tais como: - traumas - febre - luz UV - alteraes hormonais - corticosterides - estresse (Ex. frio intenso) Caso o vrus seja reativado, este volta a regio onde ocorreu a infeco primria e causa novamente a leso. Tratamento Medicamento - Aciclovir (Zovirax) Herpes Zoster (vulgarmente conhecido como cobreiro) O vrus da Herpes Zoster, a primeira vez que se manifesta desenvolve a catapora ou varicela, que altamente contagiosa por secrees da saliva, nariz, etc. As leses neste caso formam regies avermelhadas, vesculas (bolhas com lquido claro), em seguida pstulas (bolhas com lquido amarelo), crosta e cicatriz. O vrus permanece alojado no gnglio sensitivo, e quando cai a resistncia do indivduo que j teve a catapora, o vrus percorre o caminho do nervo, e normalmente causa uma leso unilateral que vai desde a regio dorsal at a regio medial do corpo. O principal sintoma da doena a dor, que leva de 3-4 dias, com leses que duram aproximadamente 3 semanas para se curar. Na Herpes Zoster, em geral, deixa cicatriz diferentemente da Herpes Simplex que normalmente no deixa cicatriz. QUESTES 1-Defina doenas sexualmente transmissveis. 2-Qual o microrganismo responsvel pelo desenvolvimento da sfilis? Descreva os diferentes estgios da doena. 3- Quando ocorre a herpes recorrente e que fatores podem reativ-lo?

DOENAS CAUSADAS POR PROTOZORIOS

Doena de Chagas A doena de Chagas uma infeco generalizada, de natureza endmica e evoluo essencialmente crnica, causada por um protozorio o Trypanosoma cruzi (Chagas, 1909), famlia Mastigophora e transmitida ao homem e a outros animais habitualmente atravs de triatomneos. Possui ampla distribuio geogrfica por todo o continente americano, desde o Sul dos Estados Unidos at a Argentina. Fora das Amricas nenhum caso de infeco humana pelo T. cruzi. Devido a sua grande difuso e pela gravidade das manifestaes que pode acarretar, por no ter tratamento especfico definido, e ainda, pela complexidade de sua profilaxia, a doena de Chagas representa grave e alarmante problema sanitrio. Ocupa lugar primordial entre as endemias rurais, ponderadas sua prevalncia e sua patogenicidade, inutilizando muitas vidas em idade produtiva. Embora eminentemente rural, representa problema tambm para centros urbanos, dada a corrente migratria de rurcolas em busca de melhores condies de vida; haja vista a prevalncia das infeco pelo T. cruzi em candidatos doao de sangue, s vezes bastante elevada em vrias cidades, com a conseqente possibilidade de transmisso da doena por transfuso. O transmissor um inseto da ordem Hemiptera, famlia Reduviidae, subfamlia Triatominae. J foram descritas cerca de 100 espcies de triatomneos silvestres e domiciliares (Amrica do Sul: Triatoma infestans, Rhodnius prolixus, Panstrongylus megistus Amrica Central: Triatoma protacta, Triatoma pallidipennis, Triatoma phyllosoma Cosmopolita: Triatoma rubrofasciata) encontrado em todos os pases do continente americano, desde o sul dos Estados Unidos at o sul da Argentina; fora das Amricas foram assinaladas cerca de 10 espcies, porm nenhum triatomneo naturalmente infectado. Vulgarmente so chamados de barbeiro (pelo hbito de sugarem o indivduo no rosto, que a parte mais comumente descoberta durante o sono), chupana, chupo, finco, bicudo e procot no Brasil; vinchuca e chinche nos pases de lngua espanhola; e Kissing bug e cone nosed bug nos Estados Unidos. O ciclo evolutivo do T. cruzi nos triatomneos constitudo de trs fases, as quais sofrem modificaes ao longo do tubo digestivo: estomacal (fase de regresso), intestinal ou duodenal (fase de multiplicao)e intestinal posterior ou retal (fase de evoluo). No perodo inicial da infeco o parasita j foi encontrado em quase todos os rgos e tecidos; entretanto a musculatura (cardaca, lisa e estriada) que constitui o tecido preferencial para sua nidao. No tratamento da insuficincia cardaca assinalam-se, como particularidade, a resposta menos satisfatria aos preparados digitlicos e o grande benefcio proporcionado pelo uso de

diurticos; uma vez interrompida a administrao destes, prontamente aparecem as manifestaes de congesto passiva, mesmo na observncia dos demais cuidados. Quanto ao tratamento da extrasistolia ventricular, vale dizer que medicamentos como quinidina, procainamida, hidantona, bloqueadores beta-adrenrgicos, per-hexilene, disopiramida e verapamil, so destitudos de expressiva atividade na cardiopatia chagsica crnica; a introduo da amiodarona no arsenal teraputico, entretanto, tornou bem mais alentador o tratamento da citada arritmia. Nas bradiarritimias o tratamento de eleio e feito atravs do implante do marcapasso cardaco artificial. A profilaxia baseia-se principalmente no combate direto ao inseto transmissor, substituio ou melhora das habitaes, educao sanitria, rejeio do sangue de doadores com sorologia positiva. Tripanossomase Africana Sinonmia: Tripanossomase humana africana doena do sono. Os tripanossomas agentes da doena humana so do grupo Salivaria, gnero Trypanosoma, subgnero Trypanosoon, atualmente designados Trypanosoma gambiense e T. rhodesiense (mais virulento para o homem), morfologicamente indistinguveis um do outro e do Trypanosoma brucei, um dos agentes das tripanossomases animais, sendo sugestivo que todos derivam de uma estirpe ancestral comum. Estes so polimrficos, exibindo 3 tipos morfolgicos: curtos e grossos, longos e delgados, e intermdios. A doena est confinada ao continente africano estendendo-se ao norte, at ao paralelo 15o atravs do Senegal (ao sul de Dakar), sul do Mali, Alto Volta, Niger (regio de Niamey), Chade, Sudeste do Sudo e Etipia (sem extenso Somlia) e ao sul at Angola, Botswana (delta do Okavango e bacia do Linyanty), Zimbabwe e Moambique (sul do Rovuma). Depois da picada das glossinas, a invaso do sangue por tripanossomas imediata. Os perodos clssicos da doena seguem, o hemolinftico seguido do nervoso, resultado em sintomas neurolgicos, neuroendcrinos e psquicos. Pode-se considerar trs tipos clnicos fundamentais: 1. Formas latentes. So incaractersticas, confundindo-se com outras afeces febris prevalente nos trpicos, com sintomatologia discreta, s vezes com deteno espontnea. 2. Formas evolutivas lentas. So prprias da doena por T. gambiense e caracterizam-se pela sua tenacidade e evoluo mortal em anos. A parasitemia pode ser escassa, mas as alteraes do lquido cefalorraquidiano traduzem a evoluo neuropsquica da afeco. 3. Formas septicmicas de evoluo aguda. So caractersticas da afeco por T. rhodesiense. Tem incio sbito e evoluo rpida, com predomnio de toxemia, apresentando dois tipos evolutivos: a) incio brutal e evoluo hiperaguda, levando morte por toxemia em 2 a 3 meses (esta pode

ocorrer antes do aparecimento de perturbaes neuropsquicas); b) comeo brusco com invaso precoce do sistema nervoso central. Nos ltimos 50 anos a teraputica da tripanossomase humana africana, embora no consiga resolver integralmente todos os casos, teve um progresso substancial que permite obter uma maior capacidade funcional dos doentes a uma sensvel reduo da mortalidade, com esterilizao de mais de 90% dos doentes tratados no perodo hemolinftico, e, no perodo nervoso, um sucesso em 50 a 70%, o que depende da antiguidade da infeco e gravidade da sintomatologia. No perodo precoce, sem evidncia de leso do SNC usam-se os tripanocidas; suramina, pentamidina ou arsenicais (em cura nica), e no perodo nervoso os arsenicais (em vrias sries). A profilaxia da tripanossomase humana africana exige um planejamento de normas multidisciplinares e tem estado a cargo de servios especializados autnomos com departamentos definidos: medico, veterinrio, entomolgico e agronmico, agindo segundo um programa harmonioso de tarefas. Seu objetivo a interrupo dos elos da cadeia de transmisso. Leishmaniose Visceral (Calazar) uma protozoose (Leishmania donovani) largamente espalhada pela regies tropicais e subtropicais do globo terrestre. Caracteriza-se clinicamente por febre irregular de longa durao, hepatosplenomegalia, emagrecimento, queda dos plos, anemia, leucopenia, hiperglobulinemia, epistaxe e hematmese. Epidemiologicamente, caracteriza-se por ser uma zoonose de candeos e roedores, transmitindo-se ao homem por intermdio de flebtomos. Tratada por antimoniais pentavalentes, geralmente cura. Se no, evolui para o bito dentro de 1 a 2 anos. Na ndia conhecida como kala-azar (febre negra) ou febre Dum-Dum. No mediterrneo intitula-se leishmaniose visceral ou leishmaniose infantil. No Brasil chamam-se leishmaniose visceral ou calazar. conhecida ainda como esplenomegalia tropical. O agente etiolgico um protozorio da famlia Trypanosomatida, a Leishmania donavani (Laveran e Mesnil, 1903). uma das diversas espcies do gnero Leishmania. As demais espcies (L. brasiliensis, L mexicana, L. tropica) so agentes etiolgicos da leishmaniose tegumentar americana e do boto-do-oriente. A infeco pela Leishmania donovani numa regio endmica determina 3 tipos de resposta do organismo humano: destruio do parasito pelos meios normais de defesa do homem, fagocitose por histicitos sem destruio, infeco oligossintomtica e infeces de longa durao e sintomatologia, varivel de acordo com o perodo ou a durao da molstia. Muitos casos tem sido descritos apenas com a referncia de manifestaes ganglionares. O calazar uma doena que se caracteriza por produzir hiperplasia progressiva do sistema fagocitrio mononuclear, para fazer face ao parasitria, diferenciando-se os hemocitobastos

cada vez menos para formar sangue e mais no sentido do setor monocitrio. A hipoplasia homolinfopotica, com o avano da doena, leva progressivamente a uma aplasia, que se traduz no sangue por granulocitopenia e diminuio progressiva das plaquetas. Outros fatores so apontados para a interpretao da anemia: a falto do fator de manuteno das clulas sanguneas e o hiperesplenismo, o que explica tambm a maior hemlise existente na doena. Paralelamente, observa-se ainda uma hiperplasia plasmocitria, que determinaria, como sempre acontece, extraordinrio aumento das gamaglobulinas. O emagrecimento corre por conta do grave comprometimento do SFM, de uma diminuio progressiva da sntese de albumina e conseqente baixa das protenas plasmticas, em parte por causa de defeitos de absoro ou por perda decorrente dos fenmenos inflamatrios catarrais dos intestinos. A hiperplasia do SFM, a hiperproduo de fibras do retculo e a dilatao dos seios venosos, com o conseqente ingurgitamento de sangue, determinam aumento do volume do bao, fgado e gnglios. Como as leishmnias no tem ao floggena direta enquanto vivas, ou de corpo estranho, no determinam sensibilizao local. Essa ao decorre das substncias liberadas quando se rompem os fagcitos abarrotados de parasitos. Para o tratamento utiliza-se antimonais pentavalentes (glutamato de antimnio sdico, neostibosan, ureastibamina, antimoniato de N-metilglucamina) ou diaminas aromticas (estilbamidina, pentamidina, isetionato de pentamidina, anfotericina B). Leishmaniose Tegumentar Americana (Leishmaniose Cutneo-Mucosa) A leishmaniose tegumentar americana ou cutneo-mucosa uma molstia infecciosa crnica, no-contagiosa, caracterizada pelo comprometimento cutneo constante, mucoso em grande proporo dos casos, e ganglionar mais raramente. causada pela Leishmania brasiliensis (Gaspar Vianna, 1911) e por algumas outras espcies e subespcies, e transmitida por insetos da famlia Phlebotominae. Lindenberg, Carini e Paranhos identificaram o agente etiolgico da leishmaniose cutneomucosa no Brasil, e consideraram-no idntico Leishmania tropica (Wright, 1903) responsvel pela leishmaniose cutneo do Oriente. Gaspar Vianna, em 1911, baseado em diferenas morfolgicas que julgou existir, criou uma espcie distinta, a Leishmania brasiliensis (G. Vianna, 1911). O agente patognico, o reservatrio animal e o inseto vetor constituem ntima associao que se instala em determinada rea geogrfica designada pelo nome de nicho natural. claro que esta associao natural entre esses diversos elementos que a compem s poder ser constituda se

inmeros fatores, tal como o clima, a vegetao, e outros, forem adequados a cada um deles isoladamente. No estado de So Paulo tem sido detectados casos isolados, autctones, em regies onde h muitos anos a doena no era assinalada. Assim que, por volta de 1960, foram registrados casos em Cotia, Itapecerica, Osasco, isto , locais nas cercanias da cidade de So Paulo. Mais recentemente, foram diagnosticados casos isolados em algumas cidades do interior do Estado de So Paulo, tais como Itu, Capivari e outras, onde h muitos no era assinalada. Uma das caractersticas peculiares leishmaniose tegumentar americana a grande diversidade de seus aspectos clnicos-morfolgicos. Por esse motivo, tem surgido inmeros trabalhos com intuito de classificar estes diferentes quadros lesionais. Rabelo estudou o assunto nas primeiras dcadas desse sculo, considerando as formas: a) cutneas ulcerosas e no-ulcerosas; b) mucosas; e, c) cutneo-mucosa. Pupo, em 1946, publicou detalhado estudo clnico sobre a leishmaniose tegumentar americana, classificando as diversas formas nos seguintes grupos: Formas cutneas (primitivas) Formas mucosas (secundrias s leses cutneas) Formas linfticas (secundrias s leses cutneas) Formas mistas (de associao) Seqelas e complicaes A descoberta, por Vianna, do uso de antimoniais nesta doena ainda de valor fundamental, e um antimonial pentavalente, GlucantineR (antimoniato de N-methyl glucamina) ainda o tratamento inicial indicado. Malria A malria ou impaludismo uma doena infecciosa, no contagiosa, de evoluo crnica, com manifestaes episdicas de carter agudo e perodos de latncia que podem simular a cura. a mais antiga, a mais distribuda, e a mais conhecida das doenas produzidas por parazitas animais. Seus agentes etiolgicos so protozorios do gnero Plasmdium, que pertencem a quatro espcies: Plasmodium vivax, P. falciparum, P. malariaea e P. ovale. As infeces do homem e dos mamferos so transmitidas por mosquitos do gnero Anopheles e as das aves, por culicneos. A patologia da malria est dominada por quatro fatos fundamentais, todos eles conseqncia da evoluo do parasita dentro das hemcias: 1. A ruptura do glbulo vermelho parasitado e a consecutiva deposio, na circulao de novos parasitas jovens, pigmento malrico, hemoglobina, estroma globular e toxinas de natureza indeterminada.

2. Outros acidentes intravasculares, como a hemlise de glbulos no parasitados, diminuio da velocidade circulatria, anomalias na coagulao com trombose capilar e micropoliembolias parasitrias. 3. A hiperplasia dos tecidos de defesa encarregados da destruio dos parasitas e da metabolizao de seus resduos (bao, fgado, medula ssea e clulas fixas e mveis do sistema retculoendotelial). 4. dficit hemoglobnico e a fixao e metabolizao de 3 pigmentos, um especfico (malrico) e dois derivados da hemoglobina (hemossiderina ocre), cuja combinao confere a clssica tintura amarelo-terrosa de mscara paldica. Toxoplasmose Infeco, algumas vezes doena, causada pelo Toxoplasma gondii (Nicolle e Manceaux, 1908). O gato o hospedeiro definitivo, enquanto o homem, outros mamferos e as aves so hospedeiros incompletos ou intermedirios. O toxoplasma gondii o nico membro conhecido do gnero. Existem 3 estgios principais de desenvolvimento: 1. Taquizotos (organismos de rpida multiplicao da infeco aguda, tambm chamados formas proliferativas e trofozotos); 2. Bradizotos (organismos de multiplicao lenta ou de repouso nos cistos do toxoplasma e se desenvolvem durante a infeco crnica no crebro, retina, msculo esqueltico e cardaco e em qualquer outra parte; 3. Esporozotos (desenvolvem-se nos esporocistos, dentro de oocistos que so eliminados pelas fezes dos gatos). A infeco toxoplsmica ocorre em todo o mundo, segundo os resultados dos inquritos sorolgicos. A maior parte das infeces assintomtica, sendo a doena uma exceo no homem. Assim, de 70 a 100% dos adultos podem ter sido infectados. Do ponto de vista prtico, importante fazer uma distino entre as manifestaes da doena, como sejam a toxoplasmose febril aguda, linfadenopatia, toxoplasmose ocular, doena em pacientes sob imunossupresso, toxoplasmose neonatal, e toxoplasmose na gravidez. Na maioria dos animais e no homem a toxoplasmose uma infeco assintomtica. A doena resulta de um grande nmero de clulas destrudas seja pelo microrganismo, seja pela hipersensibilidade, seja por ambos. As manifestaes da doena no homem esto geralmente relacionadas a uma vulnerabilidade tissular especial associada a regenerao lenta ou ausente. A infeco materna, embora inaparente, pode determinar leses destrutivas no feto. Basicamente podemos distinguir as seguintes leses e suas causas: a) destruio de clulas parasitadas, principalmente por taquizotos; b) tecidos necrosados por ruptura de cistos; c) infarto necrosado devido a comprometimento vascular pelos mecanismos a e b; e, d) leses de crebro de

crianas com toxoplasmose neonatal mostrando vascularites periaquedutais e periventriculares com necrose. Para o tratamento, a sulfadiazina e pirimetamina (Daraprim) sinergicamente inibem as etapas seqenciais da biossntese do equivalente do cido flico exigido pelo toxoplasma. As recomendaes preventivas podem ser esquematizadas da seguinte maneira: 1. Alimentar o gato somente com carne seca, cozida ou enlatada. 2. Evitar que o gato se alimente fora de casa. 3. Trocar os panos que servem de cama ao animais; desinfete-os com gua fervente. 4. Durante a gravidez, usar luvas plsticas ou pedir a outra pessoa que cuide do gato. 5. Cobrir os tanques de areia das crianas quando no estiverem em uso. 6. Manter controle sobre os gatos de rua. 7. Manter controle sobre as moscas e baratas. 8. No comer carne crua; cozinhar bem toda carne a pelo menos 66C. 9. Lavar as mos antes das refeies e antes de com elas tocar o rosto. Amebase As amebas so protozorios que, de acordo com a moderna classificao, estabelecida em 1964 por uma comisso de estudos sobre Problemas de Taxinomia, da Sociedade de Protozoologistas, devem ser includas na superclasse Sarcodina. Caracterizam-se os sarcodinos pelo fato de, quando na forma vegetativa, apresentarem movimentao por meio de uma organela especial chamada pseudpode. Os Sarcodina de interesse mdico esto includos em quatro famlias: Entamoebidae, Hartmannelidae, Amoebidae e Naegleriidae. A famlia Entamoebidae, cujos representantes se compem quase s de parasitos, abrange todas as amebas parasitos, patognicas ou no, do homem e dos animais. As demais famlias mencionadas, contendo espcies quase exclusivamente de vida livre, tem tambm importncia mdica porque alguns dos seus representantes podem desenvolver atividade patognica no homem. Embora o intestino do homem possa ser parasitado por diferentes espcies de amebas, a palavra amebase reservada apenas para designar o parasitismo por uma dessas espcies, a Entamoeba histolytica, nica, de acordo com o consenso geral dos pesquisadores, capaz de desenvolver atividade patognica. As demais amebas podem ser encontradas no intestino, a Entamoeba hartmanni, a Entamoeba coli, a Endolimax nana, a Entadamoeba btschlii e a Dientamoeba fragilis, so destitudas de atividade patognica. Seu conhecimento, porm, muito importante, pela possibilidade de serem confundidas com a E. histolytica em exames de fezes; o

diagnstico diferencial entre as amebas intestinais do homem se impe, e necessrio ressaltar que esse diagnstico s pode ser feito por um analista credenciado e consciencioso. A E. histolytica apresenta duas fases no seu ciclo evolutivo: 1. Fase trofozotica ou vegetativa (vive no intestino grosso ou nas ltimas pores do leo, movimentando-se, fagocitando e digerindo seu alimento e multiplicando-se por diviso binria); 2. Fase cstica (ela se imobiliza, deixa de fagocitar, rodeia-se de uma membrana resistente membrana cstica e vive custas de substncias de reserva acumulada durante a fase anterior, sobretudo substncias proticas e hidrocarbonadas). As leses produzidas pela E. histolytica localizam-se na mucosa e submucosa do intestino grosso. Sua distribuio relaciona-se com a estase do contedo clico e ocorre na seguinte ordem, decrescente: ceco, clon ascendente, reto, sigmide e apndice. Constituem-se em pequenas reas edematosas, hipermicas, do tamanho de uma cabea de alfinete ou de pequenas ppulas amareladas. O espectro infeccioso na amebase varia desde a infeco assintomtica do portador sadio at os casos abruptos e graves de abdome agudo. So numerosos os medicamentos atualmente disponveis para o tratamento da amebase. De conformidade com a sede do seu efeito teraputico mximo e com o modo de ao sobre a E. histolytica, eles podem ser resumidos conforme os pontos ou modos de ao: 1. Amebicidas de ao direta, no-absorvveis e eficazes na luz intestinal: derivados da 8hidroxiquinolena, derivados arsenicais, haloacetaminas. 2. Amebicidas de ao indireta, eficazes na luz e na parede do intestino: antibiticos. 3. Amebicidas de ao tissular, eficazes no s na parede do intestino como tambm no fgado: emetina, desidroemetina, tetra-amino-quilonenas (cloroquina). 4. Amebicidas eficazes em todas as localizaes: derivados imidazlicos. A profilaxia da amebase comporta medidas gerais e individuais. As gerais objetivam o saneamento do meio e incluem providncias como a adequada remoo de dejetos humanos e fornecimento de gua no-contaminada populao; uso de instalaes sanitrias para remoo das fezes; proibio de fezes humanas como adubo; educao sanitria da populao; inquritos epidemiolgicos para descoberta das fontes de infeco; tratamento dos indivduos parasitados, doentes ou portadores sos, mormente se forem manipuladores de alimentos. As medidas individuais so representada pela filtrao ou fervura da gua usada na alimentao; lavagem dos vegetais com gua no-contaminada ou gua fervida; no ingesto de vegetais crus, procedentes de focos de infeco; proteo dos alimentos contra moscas e baratas; lavagem cuidadosa das mos aps a defecao e antes das refeies.

Giardase A Giardia lamblia foi observada pela primeira vez por Leeuwenhoek, em 1681, em suas prprias fezes. Durante muitos anos esse protozorio teve denominaes diversas, at que, em 1915, Stiles criou a designao Giardia lamblia em homenagem ao Prof. A. Giard, de Paris e Dr. Lambl, de Praga. Atualmente, muitos parasitologistas, principalmente os europeus, preferem a denominao Giardia intestinalis. Giardase ou lamblase a infeco causada por Giardia lamblia, cujos sintomas se caracterizam por perturbaes intestinais com a eliminao de fezes pastosas ou diarricas e dores abdominais discretas. Segundo Coutinho, a disseminao da giardase deve estar condicionada, em linhas gerais, aos fatores epidemiolgicos a seguir citados: 1. gua de bebida ou de uso domstico. 2. Alimentos vegetais comidos crus, tais como saladas, verduras e frutas, ou alimentos servidos frios, como leite, refrescos, cremes, etc. 3. Contato direto por manipuladores de alimentos. 4. Contato direto de pessoa a pessoa ou como conseqncia de fezes expostas. 5. Contato indireto, atravs de artrpodes domsticos (moscas, baratas). A baixa prevalncia de sintomas atribudos a este protozorios tem sido a causa pela qual muitos autores duvidam da sua patogenicidade. No entanto, a ao patogncia da Giardia lamblia tem sido confirmada por outros pesquisadores, que obtiveram o desaparecimento de sintomas grastrointestinais aps tratamento especfico. Para que os sintomas observados possam ser realmente atribudos parasitose preciso no s encontrar o parasito, mas tambm que o tratamento adequado faa desaparecer a sintomatologia ao mesmo tampo que erradique a parasitose. Assim, podemos resumir os seguintes itens relacionados com o quadro clnico de giardase: 1. As condies so pouco comprometidas. 2. apetite conservado. 3. sintoma mais freqente uma diarria crnica, persistindo por meses e refratria ao tratamento sintomtico usual. 4. As fezes so amolecidas e, de regra, expelidas sem dor ou clica; geralmente so fezes sem sangue ou muco. Outras vezes existe constipao crnica. So tambm descritas distenso e dores abdominais. Com a finalidade de curar essa parasitose, diversas drogas tem sido utilizadas: atebrina, cloroquina, camoquim, acranil, violeta-de-genciana e a furazolidona. Resultados variveis so obtidos, gozando a atebrina e a furazolidona de maior prestgio. No entanto, esses compostos no

chegam a proporcionar razoveis percentagens de cura, sendo algumas muitas vezes insatisfatoriamente tolerados. Por isso foram substitudos na prtica mdica pelos derivados imidazlicos, ou seja, o metronidazol, a nitrimidazina e o tinidazol. A profilaxia da giardase de difcil execuo, uma vez que depende no s do tratamento da matria fecal e do lixo, mas tambm do combate aos insetos responsabilizados pela transmisso. Outro cuidado necessrio, a fim de ser impedida a disseminao da parasitose, diz respeito proteo da gua potvel e dos alimentos, evitando a contaminao dos mesmos com os cistos dos protozorios. Medida profiltica importante tambm a observao dos postulados da educao sanitria e da higiene pessoal. Balantidase Denomina-se balantidase a infeco do homem e de animais pelo Balantidium coli (cosmopolita). A infeco humana quase sempre est ligada atividade do indivduo, no contato com porcos, criadores, trabalhadores em matadouros, aougueiros, etc., que tem maior possibilidade de ingerir os cistos do protozorios, em bebidas ou alimentos contaminados. O homem muito resistente a infeco e o nmero de casos descritos na literatura alcana umas poucas centenas, se bem que o nmero de portadores assintomticos pode atingir alguns milhares. No homem o Balantidium coli pode viver no intestino grosso sem causar dano algum, mas algumas vezes, o ciliado penetra pela mucosa, coloniza-se na submucosa que se mostra espessada e com infiltrado linfoplasmocitrio. Com a necrose da mucosa, formam-se pequenas lceras que confluindo do ao conjunto o mesmo aspecto visto na amebase. Ao exame microscpico dos tecidos muito fcil identificar-se o parasita, no s pelo tamanho, mas tambm pela cor escura do macroncleo, em forma de rim. A sintomatologia pouco significativa. Outras vezes alcana intensidade dramtica, com enterorragia, prolapso do reto e morte. Comumente, porm, existe diarria, com 5 ou 6 evacuaes dirias, dores abdominais, cefalia, astenia, tenesmo, meteorismo; este quadro clnico superpe-se quela da amebase, devendo o clnico incluir sempre a balantidase no diagnstico diferencial com a amebase. Vrios antibiticos tem sido usados com sucesso: aureomicina, terramicina e bacitracina. O metronidazol, dado oralmente na dose de 600 a 1200 mg, diariamente, durante 10 dias, curou 94% dos doentes, Nuti e col. (1980). Na profilaxia recomenda-se os mesmos processos em amebases, pois so os mesmos mecanismos de transmisso, lembrando porm que os sunos, como hospedeiro natural, so as principais fontes de infeco da coletividade.

Pneumocistose As infeces por Pneumocystis carinii determinam uma pneumonite bilateral difusa, que causa freqentemente a morte quando no institudo tratamento especfico. Atingem, com raras excees, o hospedeiro imunocomprometido, ocorrendo em crianas com deficincias imunolgicas primrias, pacientes com terapia imunosupressiva por cncer, transplantes ou outras condies, e em estados de m-nutrio protico-calrica graves. Apresenta distribuio geogrfica ampla pelos cinco contintentes. O habitat natural do P. carinii desconhecido; tem sido identificado nos pulmes do homem e vrio mamferos inferiores. H evidncias de que a infeco por P. carinii no homem ocorre precocemente na vida, sob a forma assintomtica ou latente. A hiptese mais aceita atualmente a de que a pneumonia ocorre por ativao e replicao de organismos latentes, em decorrncia do estado imunodeficiente. Ao exame macroscpicos, os pulmes se revelam aumentados de volume e consistncia, com zonas marginais de enfisema, principalmente subpleural. O parnquima pulmonar apresenta-se hepatizado e de cor cinza-avermelhado, surgindo um exsudato acinzentado sua espremedura. Os brnquios mostram-se congestos e com exsudato catarral em sua superfcie mucosa. A doena classificada em 2 formas clnicas: Forma infantil, endmica, ocorre em crianas prematuras ou malnutridas, entre 2 a 6 meses de idade. A sndrome respiratria pode ser precedida em alguns dias por diarria, vmitos, anorexia. Forma espordica, encontrada em crianas e adultos imunossuprimidos, o incio dos sintomas usualmente abrupto, com febre, taquipnia progressiva, tiragem, cianose. At 1958 no havia terapia especfica para pneumonites por P. carinii. Nessa data, foram reportados os primeiros sucessos com a administrao de diamidinas aromticas. Com a introduo da pentamidina houve uma reduo de 50% para 3% na taxa de mortalidade por pneumocitose infantil e, na forma adulta, a reduo foi de 100% a 25%. Na profilaxia deve-se isolar os pacientes; desinfeco e esterilizao na ocorrncia de epidemias em berrios. QUESTO NICA Defina todas as doenas causadas por protozorios.

INFECES INTESTINAIS Os principais agentes das infeces intestinais so encontrados na famlia Enterobacteriaceae e nos gneros Campylobacter, Vibrio e H. pylori As enterobacteriaceae so: Escherichia coli enteropatognica clssica (EPEC), E. coli enterotoxignica (ETEC), E. coli enteroinvasora (EIEC), E. coli enterohemorrgica (EHEC), E. coli enteroagregativa (EaggEC), ), E. coli que adere difusamente (DAEC), Shigella, Salmonella e Y. enteroltica. Tanto C. jejuni com o C. coli causam infeco, porm entre estes dois, C. jejuni responsvel por 90% das infeces. Alm dessa espcies duas novas tm sido descritas com novos agentes da diarria: C. upsaliensis e Arcobacter butzleri. Vibrio colerae O gnero Vibrio constitudo de bacilos Gram-negativos curvos. O Vibrio cholerae compreende vrios grupos sorolgicos, caracterizados por antgenos O, ou somticos. A espcie mais importante a Vibrio cholerae, uma bactria enterotoxignica causadora da clera, doena endmica na ndia e em Bangladesh muito tempo. A stima pandemia da clera, que teve incio em 1961, atingindo a sia, frica, austrlia, Europa, Canad, Estados Unidos e amrica do Sul, com o vibrio sorotipo O1. Entretanto, em 1993, apareceram dados sobre uma epidemia causada por um novo sorogrupo, o sorogrupo O139 ou Bengal, biotipo El Tor, que vem sendo considerado o sorogrupo causador de uma possvel oitava pandemia de clera. O biotipo El Tor difere do clssico por ser mais tolerante ao meio ambiente (maior capacidade de sobreviver na gua e produzir menor porcentagem de quadros severos). A via principal de transmisso da clera a gua, porm alguns alimentos podem veicular o vibrio. O nico hospedeiro dessas bactria o homem, e a infeco limita-se superfcie da mucosa intestinal, onde a bactria adere e produz uma potente toxina, denominada toxina colrica (CT), semelhante a enterotoxina LT de E. coli; o Vibrio produz tambm a toxina da Zonulla occludens (ZOT) e a toxina colrica acessria (Ace) que contribuem para o desenvolvimento de diarria. Segue-se a infeco colrica, imunidade de curta durao, o paciente apresentando aumento de anticorpos sricos e intestinais contra a bactria e toxina. Diagnstico Atravs do isolamento do Vbrio cholerae das fezes, determinao do sorogrupo e a produo da toxina, determinada por ELISA, sondas moleculares ou PCR.

Tratamento Reposio de lquidos e antibiticos. A vacina mais eficaz contra clera, recentemente patenteada, apresenta proteo total e, a longo prazo, pouco reatognica, e administrada por uma dose oral. Esta vacina composta da bactria viva do biotipo clssico com mutao no gene que codifica uma subunidade da toxina CT. Vibrio parahaemolyticus O Vibrio parahaemolyticus vem sendo reconhecido na etiologia das toxinfeces alimentares. Encontrado na gua do mar e em animais marinhos, em todos os continentes. As demais espcies so encontradas mais raramente em associao com diarria e outras infeces. Diagnstico Isolamento das fezes ou alimento. Campylobacter Campylobacter (do grego: Kampylos, encurvado; bacter: bactria), bacilo Gram negativo curvo ou espiralado e quando aos pares adquirem o aspecto de asa de guia, microaerfilo estritos, mveis flagelados monopolar ou bipolar monotrquia.. Perodo de incubao de 2-4 dias, no mximo 10 dias. Produzem diarria no homem. Campylobacter jejuni spp. doylei Apresentam um nico flagelo em uma ou nas duas extremidades, desenvolvem-se lentamente entre 35-370 C-temperatura tima de crescimento. Isolada da regio do antro do epitlio gstrico em pacientes com lcera gstrica e gastrite crnica ativa, como tambm nas fezes de crianas com diarria. Campylobacter jejuni spp. Jejuni Por apresentar maior freqncia de isolamento dentro das espcies do gnero, a bactria identificada facilmente pela forma, caractersticas da colnias, capacidade de crescer a 42o C. A capacidade de crescimento a 42o C tambm ocorre com Campylobacter coli e Campylobacter lari. Patogenicidade O Campylobacter jejuni um enteropatgeno que eventualmente invade a circulao, causando infeco em diferentes rgos. A infeco intestinal

localiza-se nos intestinos delgado e grosso. Esse microrganismo no possui fmbrias, porm os flagelos e o LPS atuam como adesinas. O mecanismo da diarria no esclarecido completamente, em alguns pacientes no h dvida que a bactria invade a mucosa intestinal, determinando ulcerao e diarria mucossanginolenta. Entretanto, em alguns pacientes, a manifestao principal diarria aquosa, semelhante causada por bactrias enterotoxignicas, por produzir uma enterotoxina semelhante enterotoxina termolbil (LT) de Escherichia coli. Resposta imunolgica Aumento dos nveis sricos de IgA, IgG e IgM. As primeiras a aparecer, so IgA e IgM (no sexto dia) e IgG aparece aps 12 dias. No se sabe se esses anticorpos promovem a eliminao desses microrganismos, mas h evidncias que pode impedir o aparecimento de manifestaes clnicas em muitos portadores da bactria. Diagnstico O diagnstico feito pelo isolamento e identificao do germe. O isolamento feito em gar-sangue e a identificao do Campylobacter jejuni tem por base sua morfologia, caractersticas culturais e propriedades bioqumicas. Foi demonstrado recentemente que a espcie pode ser identificada por meio de aglutinao em lmina, utilizando-se partculas de ltex, sensibilizadas com anticorpos contra os tipos sorolgicos mais freqentes. Tratamento As infeces intestinais por Campylobacter geralmente curam espontaneamente, entretanto quando a teraputica for indicada, utiliza-se a eritromicina. Porm, como existem amostras resistentes conveniente determinar a sensibilidade da amostra. Epidemiologia Encontrado na gua, alimentos e intestinos do homem e maioria dos animais domsticos e de vida livre. Nos pases desenvolvidos, o Campylobacter jejuni uma das principais causas de diarria. A infeco predominante nos primeiros cinco anos de vida. Nos pases de clima temperado, a infeco predomina no vero. Outras espcies

Campylobacter coli (praticamente idntica a Campylobacter jejuni), Campylobacter lari (menos freqente que Campylobacter coli, est envolvida em surtos de diarria produzidos pela ingesto de gua contaminada) Campylobacter fetus spp. fetus (produz aborto espordico no gado ovino e bovino, mais importante em infeces sistmicas, cultivada a 37o C ou 26o C), Campylobacter hyointestinalis (no homem tem sido encontrada em associao com diarria tanto em crianas como em adultos, associado a diarria e proctite em homossexuais), Campylobacter upsaliensis (ainda no tem reconhecimento vlido na taxonomia do gnero), Campylobacter concisus (em pacientes com gengivite, enfermidade periodontal e gastroenterite), Campylobacter mucosalis (em clnica humana tem sido isolada como agente de septicemia em um paciente que apresentava severo comprometimento imunolgico). Arcobacter Inicialmente eram consideradas pertencentes ao gnero Campylobacter. So bacilos curvos, em forma de S ou helicoidais, no esporulados, flagelados monotrquios ou anfitrquios. Podem proliferar normalmente entre 5 a 37o C, isolamento inicial pode ser em microaerofilia e depois em aerobiose. A espcie tipo Arcobacter nitrofrigilis, isolada em associao com razes de plantas originrias de pntanos salinos e fixadora de nitrognio, porm no se registraram casos de infeco humana por essa bactria. Outras espcies Arcobacter cryaerophilus, Arcobacter butzlei, Arcobacter skirrowii (todos relacionados com diarria em animais ou humanos). Helicobacter O gnero Helicobacter - Helix (grego): helicoidal; Bacter (grego): bactria- constitudo de bacilos Gram-negativos curvos ou helicoidais, medindo 0,3-1mm de largura e 1,5-5 mm de comprimento. No formam esporos e, em culturas velhas podem transformar-se em corpos esfricos ou cocides. So mveis por flagelao polar monotrquia ou lofotrquia. Os flagelos encontram-se envelopados ou revestidos, podendo algumas espcies, apresentam um bulbo terminal nestes apndices. So microaerfilos, no utilizam os hidratos de carbono, e a temperatura tima de crescimento de 370 C. Em 1982, Marshall e Warren, dois pesquisadores australianos, conseguiram isolar pela primeira vez da mucosa gstrica do ser humano um o bacilo inicialmente denominado GCLO (gastric Campylobacter like

organism), posteriomente recebendo outras denominaes, finalmente em 1989, o nome foi definido Helicobacter pylori. Patognese e patogenicidade Desde os primeiros isolamentos correlacionou-se a presena destas bactrias na mucosa gstrica com a produo de gastrite e lcera gstrica e duodenal. Porm, sua associao com estas patologias tem sido motivo de controvrsias e pesquisas clnicas, epidemiolgicas e microbiolgicas, proporcionando evidncias suficientes da capacidade patognica do Helicobacter pylori. Esta bactria coloniza preferencialmente a superfcie epitelial e as criptas gstricas, atravessando a camada mucosa que recobre o estmago e produzindo a gastrite crnica ativa (gastrite tipo B), caracterizada por mudanas histopatolgicas no epitlio, com aumento de clulas mononucleares e presena de infiltrado neutroflico comprometendo as clulas secretrias de muco; pode ser sintomtica ou assintomtica. Geralmente o H. pilori no est associado com a gastrite crnica auto-imune tipo A, a qual compromete o corpo gstrico. Tendo sido demonstrado que a infeco por H. pilori persiste ao longo do tempo produzindo gastrite crnica, muitos pesquisadores tentam mostrar a participao deste com fator de risco no desenvolvimento do cncer gstrico. Trabalhos experimentais demonstraram a capacidade de H. pilori produzir substncias extracelulares que podem atuar como fatores de virulncia ou coadjuvantes na instalao da infeco. Por serem microrganismos flagelados a bactria consegue atravessar rapidamente a camada de muco que recobre o estmago, para atingir a superfcie epitelial e as criptas, evitando desta forma o efeito destrutivo do suco gstrico. Uma vez em contato com o epitlio, adere-se camada celular unindo-se ao receptor fosfadinolamina, presente no antro gstrico. H. pilori tem preferncia a mucosa gstrica por aderir intimamente em clulas epiteliais de origem gstrica do que com clulas epiteliais esofgicas ou fibroblastos gstricos. A catalase e superxido dismutase extracelular so grandemente produzidas por essas bactrias considerando-se portanto essas enzimas fatores de resistncia aos mecanismos lticos oxidativos dos fagcitos polimorfonucleares. A protease (mucinase) apresenta atividade endopeptidsica e capacidade de degradar mucina gstrica. A degradao do muco gstrico pode ser um mecanismo que favorece a doena permitindo a degradao cido pepsnica da mucosa.

Resposta Imunolgica Ocorre uma resposta sistmica humoral especficas, onde os ttulos de anticorpos IgG e IgA especficas encontram-se elevados. No suco gstrico encontra-se anticorpos especficos IgG e IgM. Diagnstico Realizado a partir de bipsias gstricas ou duodenais obtidas por endoscopias; colorao de Gram revelando bacilos Gram-negativos ou colorao alaranjado de acridina e brometo de etdio, ou colorao com prata (mtodo de Warthin-Starry). O meio de cultivo utilizado o gar-sangue podendo-se acrescentar antimicrobianos, a incubao de 37o C, em microaerofilia estrita, e devido ao crescimento lento a incubao deve ser de 7 dias. So citocromooxidase, catalase e urease positivas (na prtica clnica uma prova rpida e presuntiva a prtica da urease em bipsia). Tcnica do bafo (urea breath test) atravs da qual os pacientes ingerem uma quantidade conhecida de uria marcada com carbono (C), trinta minutos depois medida a relao C/C no ar exalado pelos pacientes. Nas pessoas infectadas detecta-se aumento significativo de CO2 com carbono marcado. Tcnica de ELISA empregando diversos antgenos somticos tambm utilizada. Tratamento A utilizao monoterpica no recomendada. A maioria das vezes utilizada amoxicilina, metronidazol e subcitrato de bismuto com uma taxa de erradicao de 72%. H. pylori de distribuio mundial que tem sido isolada somente no ser humano, postula-se que a transmisso poderia ser de pessoa para pessoa e a rota de infeco, a via oral. Uma vez adquirida pode persistir por anos e at mesmo durante toda a vida. Infeces iatrognicas, derivadas do emprego de instrumental contaminado, tm sido, descritas. Nos pases desenvolvidos 50% da populao acima dos 60 anos apresenta a infeco, nos pases em desenvolvimento a ocorre precocemente e com freqncias mais altas. Outras espcies H. cinaedi (inicialmente Campylobacter cinaedi envolvida em enterite, proctolite, bacteremia e infeco assintomtica em homossexuais e pacientes com Aids, tambm isolada em sangue e fezes de crianas e mulheres

imunocompetentes). H. fennelliae (inicialmente Campylobacter fennelliae isolada de proctite, proctolite e bacteremia em pacientes homossexuais, bissexuais e com Aids), H. mustelae (isolado do epitlio gstrico do furo e produz gastrite e ulcerao), H. felis (isolado da mucosa gstrica de gatos, tambm tem sido isolado do epitlio gstrico de ces), H. nemestrinae (mucosa gstrica de primatas-Macacca nemestrina sem evidncia patolgica nesses animais), H. muridarum (epitlio gstrico de ratos e camundongos e leo de ratas). Salmonella Esse gnero possui duas espcies, Salmonella enterica e Salmonella bongori, e diferente sorotipos com base na composio antignica com relao aos antgenos O (somticos), Vi (capsular) e H (flagelar). Algumas salmonelas no possuem flagelo, outras possuem flagelo, bacilos Gram negativos aerbios, so invasivas e embora no provoquem ulceraes extensas na mucosa intestinal. A patogenicidade das salmonelas varia de acordo com o tipo sorolgico, idade e condies de sade do hospedeiro. A Salmonella Typhi o agente da febre tifide, que caracterizada por febre, dor de cabea, diarria, dor abdominal podendo produzir, ainda, danos respiratrios, hepticos, esplnicos e/ou neurolgicos. As salmonelas paratficas causam uma infeco bastante semelhante febre tifide. De modo geral, os demais sorotipos de Salmonella, no adulto normal, apenas uma enterocolite que evolui sem complicaes e desaparece dentro de uma semana ou menos. Como estas salmonelas so geralmente veiculadas por alimentos (principalmente leite e produtos avcolas), a infeco tambm denominada toxinfeco de origem alimentar. Existem 2.324 sorotipos de salmonelas, entre os quais 1.367 pertencem a subespcie enterica. Dentro desta subespcie esto contidos cerca de 99,5% dos sorotipos isolados. Na nova nomenclatura desses bacilos, os nomes dos sorotipos de Salmonella da subespcie enterica no so mais escritos em itlico e aparecem com a primeira letra maiscula (Ex. Salmonella Typhi). Os sorotipos das outras subespcies de Salmonella enterica e aqueles da de Salmonella bongori so designadas apenas por sua frmula antignica . Resistncia ao soro Resistem ao do sistema complemento. Diagnstico Isolamento e identificao. O material clnico depende do local de infeco. Nas infeces intestinais utiliza-se o gar verde brilhante, SS e McConkey.

Escherichia coli O gnero Escherichia compreende as espcies Escherichia coli, Escherichia blattae, Escherichia fergusonii, Escherichia hermannii e Escherichia vulneris. Entretanto, a nica de maior importncia prtica a Escherichia coli que compreende um grande nmero de grupos e tipos sorolgicos. Existem algumas dessas bactrias que so mveis e outras imveis (desprovidas de flagelos), e podem pertencer ao mesmo sorotipo, o que confirma que amostras imveis so derivadas de mveis por perda mutacional do flagelo. E de modo geral, estes sorotipos ou clones possuem caractersticas de virulncia distintas, o que sugere que a espcie E. coli, constituda por uma variedade relativamente grande de bactrias patognicas. Provavelmente nenhuma espcie bacteriana to verstil em sua patogenicidade como a Escherichia coli. Com relao as infeces intestinais, pelo menos seis categorias de E. coli so conhecidas: - Escherichia coli enteropatognica clssica (EPEC) causam diarria em crianas com menos de 1 ano de idade. A razo da grande prevalncia dessas EPEC nas crianas ainda permanece desconhecida, entretanto, a infeco mais freqente e mais grave naquelas que no se alimentam de leite materno. O reservatrio parece ser o prprio homem, e o mecanismo de transmisso da infeco, na comunidade, ainda no foi estabelecido. Em hospitais e berrios, a bactria transmitida por contato pessoal. Essas bactrias tm a caracterstica de adeso ntima localizada formando microcolnias na superfcie das clulas epiteliais intestinais provocando leso nas microvilosidades. A antibioticoterapia quase sempre desnecessria, porm quando necessria deve-se primeiro fazer antibiograma. - E. coli enterotoxignica (ETEC) produzem as chamadas enterotoxinas LT (termolbil) e ST (tremoestvel). Algumas amostras produzem as duas toxinas. A termoestabilidade definida pela reteno da atividade txica aps incubao a 100 oC, durante 30 minutos, enquanto a termolabilidade significa que a atividade da toxina perdida nestas condies. A LT-1 produzida por amostras de ETEC associadas ao homem e a LT-II tem sido encontrada em amostras de ETEC isoladas de alimentos e certos animais. As ETEC aderem s clulas da mucosa do intestino delgado sem provocar qualquer alterao nas microvilosidades no penetrando no epitlio intestinal. Por esta razo as fezes dos pacientes afetados no apresentam leuccitos, sangue ou muco. Neste caso dispensa-se antibioticoterapia na maioria das vezes. - E. coli enteroinvasora (EIEC) - correspondem a biossorotipos bem definidos, caracterizados pelos seus antgenos O, geralmente so imveis e

que no descarboxilam a lisina. Atualmente so conhecidos 14 sorotipos de EIEC, so estreitamente relacionadas a Shigella, apresentando em comum muitas caractersticas bioqumicas, antignicas, genticas e de patogenicidade. So mais freqentes em crianas maiores de dois anos de idade e no adulto. A transmisso se faz pela ingesto de gua e alimentos contaminados e contato pessoal. As infeces por EIEC costumam curar espontaneamente. E quando necessria a administrao de antibitico indica-se ampicilina. - E. coli enterohemorrgica (EHEC) produzem a citotoxina SLT-I e STLII, e esto associadas em casos de colite hemorrgica. Existem atualmente mais de 50 tipos de sorotipos de EHEC, mas a E. coli O157:H7 o prottipo desta categoria, produzindo um nmero relativamente grande de surtos de intoxicao alimentar decorrentes da ingesto de hambrgeres contaminados. A transmisso pessoa-pessoa tambm pode ocorrer. Podem causar uma diarria branda, sanginolenta (colite hemorrgica) e sndrome hemoltica urmica (HUS) em crianas e adultos. A HUS- sendo a maior complicao das infeces caracterizada por anemia hemoltica, trombocitopenia e falha renal aguda que pode se estender a outros rgos. A taxa de mortalidade de 310%. O papel das citotoxinas na induo da diarria ainda no est comprovado. - E. coli enteroagregativa (EaggEC)- Formam um padro agregativo de adeso, quando se associam com clulas Hep-2 ou Hela. So bastante freqentes nas fezes de crianas normais e com diarria aguda, no entanto trabalhos tm mostrado uma associao das EaggEC com diarria de durao de 7 a 14 dias. - E. coli que adere difusamente (DAEC) seu papel na diarria controvertido, ainda no est totalmente comprovado. Yersinia O gnero compreende vrias espcies, sendo a Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica e Yersinia pseudotuberculosis, as principais espcies que causam infeces no homem. Yersinia enterocolitica e Yersinia pseudotuberculosis podem causar diferentes tipos de infeces no homem; principalmente infeco intestinal adquirida por ingesto de alimentos contaminados (leite, carne suna). Os sintomas da Yersinia enterocolitica podem ser de brandos a severos com diarria, febre e dor abdominal, alguns pacientes apresentam quadro de apendicite aguda. Em alguns casos, pode-se desenvolver uma artrite (entre outras doenas) de duas a seis semanas aps cura da infeco intestinal. Por

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fim a Yersinia pseudotuberculosis produz infeco intestinal semelhante a Yersinia enterocolitica exceto pela ausncia de diarria. Os microrganismos resides normalmente em hospedeiros vertebrados inferiores e so transmitidos aos seres humanos. Tratamento e preveno No h exigncia de tratamento antimicrobiano, pois as infeces causadas por esses microrganismos so autolimitadas. Utilizao de gua tratada, tanto para consumo como para lavagem de alimentos e cuidados de higiene pessoal. shiguella constitudo de 4 espcies: shiguella dysenteriae (grupo a- 13 sorotipos), shiguella flexneri (grupo b- 6 sorotipos e dividido em subtipos), shiguella boydii (grupo c- 18 sorotipos), shiguella sonnei (grupo d- que aparece em duas formas, I(lisa) e II (rugosa)). os sorotipos de shiguella so caracterizados somente pelos antgenos o. patogenicidade causa a shigelose ou disenteria bacilar, sendo todos os sorotipos patognicos. a shigelose localiza-se no leo terminal e clon, caracterizando-se por invaso e destruio da camada epitelial da mucosa, com intensa reao inflamatria., presena de leuccitos, muco e sangue nas fezes. raramente a shiguella invade a circulao do paciente. a shiguella prolifera nas clulas epiteliais infectadas levando essas clulas morte. alguns estudos sugerem que a morte celular decorre da interferncia das shigelas no metabolismo respiratrio da clula. as shigelas so plenamente virulentas se crescerem a 37 oC em meio com alta osmolaridade (10-15% de sacarose). shiguella dysenteriae tipo i (bacilo de shiga) esta difere das demais por produzir uma cototoxina que provoca morte celular. Outra caracterstica do bacilo de Shiga, sua capacidade de causar extensas epidemias (Ex. Amrica Central e sul do Mxico 19609 e 1970). Diagnstico Em semeadura feita em meio de cultura MacCkonkey ou SS entre outras tcnicas. Epidemiologia A freqncia da infeco aumenta com a idade da criana e condies de higiene. Adquiri-se a infeco pelo contato com gua contaminada ou

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contato pessoal, acredita-se que 100 bactrias so necessrias para causar a doena. Para todas as infeces intestinais existe portanto Diagnstico geral Coprocultura o diagnstico das infeces intestinais feita pela cultura de fezes que devem ser coletadas no nicio da diarria (isso importante porque o nmero de bactrias excretadas diminui com o passar do tempo, o que reduz a possibilidade da cultura ser positiva. Uma vez colhida, as fezes devem ser encaminhadas ao laboratrio no mximo no perodo de 3 horas. Este fator deve ser considerado pois algumas bactrias se tornam inviveis para o cultivo aps esse tempo, por exemplo Shigella. As fezes devem ser semeadas em meios apropriados para o isolamento, com os meios McConkey, gar Salmonella-Shigella, gar desoxicolatocitrato, meio Y (Y. enterocolitica). A coprocultura deve sempre ser acompanhada com um exame bacterioscpio de esfregao de fezes corado pelo Gram. A quantidade de leuccitos aumentadas, sugere a infeco por germes invasores. Interpretao dos resultados O resultado negativo no indica necessariamente que o paciente no seja portador de enteropatgenos e o resultado positivo geralmente indica que o enteropatgeno isolado a causa da diarria, uma vez que o nmero de portadores assintomticos no elevado. Teste que podem dar positivo, refere-se ao isolamento de enterobactrias da microbiota normal no associadas a diarria, tais como E. coli no-enteropatognica, Citrobacter, Klebisiella, Morganella morganii, Proteus mirabilis, Enterobacter e Providentia. Mtodos alternativos para o diagnstico Vrios testes imunolgicos esto sendo propostos na tentativa de se pesquisarem antgenos diretamente do material clnico, tais como imunofluorescncia, ELISA, Dot-ELISA, co-aglutinao e aglutinao, entretanto ainda no so aplicados nos laboratrios de rotina. Sondas genticas foram desenvolvidas para deteco de genes que codificam os fatores de virulncia, sendo utilizadas para diagnstico. De uma maneira geral, na pesquisa do agente diretamente das fezes essas sondas tm

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sido menos sensveis que quando aplicadas microrganismos de cultura. O PCR o mtodo mais sensvel para a pesquisa do agente diretamente do material clnico, porm este mtodo tambm no utilizado no Brasil. Questes 1- Defina diarria aguda. 2- Pelo que voc viu em todas essas infeces intestinais, qual o tratamento bsico que se deve realizar nos pacientes doentes? 3- Entre as bactrias E. coli, qual grupo parece ser a forma mais agressiva de infeco intestinal? 4- Como se preconiza a forma de tratamento para H. pylori?

Observao: Adquirir o texto sobre diarria aguda, sexta-feira tarde, na Secretaria da Disciplina de Microbiologia e Imunologia com Anderson.