Aula 2 - Cultivo de Microrganismos

Cultivo de Microrganismos
Importância:
 Cultivo do microrganismos requer meios de cultura adequados

e condições físicas apropriadas.
Meios de cultura:
→ Meio sintético: Constituído por compostos químicos conhecidos.
→ Meio complexo: Constituído por matérias-primas complexas → extrato de

carne, extrato de leveduras, etc.
→ Meio de enriquecimento: Utilizado para isolar um microrganismo de um

meio em que está presente em pequena quantidade.
→ Meios diferenciais: Permitem visualizar diferenças fisiológicas entre as

espécies de microrganismos através de alterações na coloração do meio
(mudança de pH), na coloração das colônias ou ainda produção de gás.
→ Meios seletivos: promovem e/ou inibem o crescimento de um determinado

microrganismo ou grupo de microrganismos.
→ Meios diferenciais e seletivos: meios complexos com as propriedades

dos meios seletivos e diferencias.
→ Meios para anaeróbios: Adição de um agente redutor ao meio.

Componentes do meio de cultura:
→ Água: Principal solvente dos nutrientes necessários à célula.
→ Fonte de carbono: Pode ser proveniente de dióxido de carbono ou de

nutrientes orgânicos variados (carboidratos e também lipídeos e proteínas).
→ Fonte de energia: Carboidratos como amido, glicogênio, pentoses,

monossacarídeos e hexoses.
→ Fonte de nitrogênio: Aminoácidos, nucleotídeos, peptídeos e proteínas

complexas.
→ Fontes de hidrogênio, oxigênio, enxofre e fósforo : os dois primeiros

são encontrados na composição gasosa do ambiente, enxofre a principal
fonte são os sulfatos, fósforo a principal fonte, os fosfatos.
→ Elementos traços: outros elementos minerais → Ferro, Sódio, Manganês,

Cobalto, Cobre, Molibdênio, Zinco, etc.
→ Vitaminas: importantes fatores de crescimento, principalmente complexo B,

biotina e ácido pantotênico.
Classificação nutricional dos microrganismos:
Tabela 1 – Classificação nutricional das bactérias e de outros

organismos.
Condições físicas para o cultivo de microrganismos:
→ Temperatura:
Figura 1 – Respostas
típicas de crescimento
de um microrganismo às
temperaturas de
incubação, mostrando
as temperaturas
mínima, ótima e
máxima.
Os microrganismos podem ser classificados em 3 grupos:
• Psicrotróficos → 0 a 7°C.
• Psicrófilos → 0 a 20°C.
• Mesófilos → 20 a 45°C.
• Termófilos → 45 a 90°C.
Termófilos extremos
Figura 2 - Curva de crescimento característica de diferentes microrganismos.

Área de Alimentos
Psicrófilos: Temperatura ótima: 15°C;
Encontrados em oceanos e regiões da Ártica;
Não causam problemas na preservação de alimentos;
Psicrotróficos: Temperatura ótima: 20 a 30°C;

crescem em temperatura de refrigeradores (4°C);
Encontrados em alimentos estragados;
Mesófilos: Temperatura ótima: 25 a 40°C (mais encontrados);

Corpo de animais (temperatura da pele);
Bactérias patogênicas: temp. ótima 37°C;
Degradam alimentos e são patogênicos;
Termófilos:Temperatura ótima: 50 a 60 °C
Ambiente de águas termais (não crescem em temp.
<45°C); Material estocado (altas temp.)=
compostagem.
→ Atmosfera gasosa:
- Microrganismos aeróbios → 21% de oxigênio → fungos
filamentosos e bactérias do gênero Mycobacterium e Legionella;
- Jarra microaerófila →para microrganismos que apresentam

necessidade de CO2.
- Microrganismos facultativos → presença do ar ou anaerobiose →

Enterobacteriaceae e leveduras.
- Microrganismos anaeróbios → podem ser mortos pelo oxigênio,

não crescem em presença do ar e não utilizam oxigênio para reações de
produção de energia;
- Câmara de anaerobiose ou jarra de anaerobiose.
- Microrganismos microaerófilos → não resistem a níveis normais

de oxigênio (1 a 15%).
AERÓBI ANAERÓBIO AERÓBIO MICRO ANAERÓBIO
O ESTRITO FACULTATIVO AERÓFILOAEROTOLERANTES
ESTRITO
S
Alta [O2] Sem O2 alta e baixa baixa [O2] alta e baixa

[O2] [O2]
Figura 3 - Efeito do oxigênio sobre o crescimento de vários tipos de bactérias.

→ Acidez ou Alcalinidade (pH):
Diferentes gêneros de microrganismos têm tolerâncias

diferentes de pH:
- Bactérias: 4 a 9;
- Bolores e leveduras: ótimo de 5 a 6;
- Protozoários: 6,7 a 7,7;
- Algas: 4 a 8,5.
Figura 4 - Distribuição de alguns microrganismos de acordo com o pH.
(Adaptado de Madigan et al., Brock Biology of Microorganisms, 2003)
→ Pressão Osmótica
[A] Células em meio isotônico. [B] Células em meio hipertônico.
[C] Células em meio hipotônico.
Figura 5 – O efeito da pressão osmótica em uma célula microbiana.

Não Halófilos: não necessitam de sal e
não toleram a presença no meio.
Halotolerantes: não necessitam de sal
mas toleram a presença no meio.
Halófilos: necessitam de sal em uma
concentração moderada
Halófilos extremos: necessitam de sal
em altas concentrações.
Figura 6 - Taxa de crescimento de alguns microrganismos vs. a

concentração de sal.
Crescimento de uma cultura microbiana:
- Aumento no número da população na cultura: 1 → 2 → 4 → 8

→ 16 → 32 → ...
Progressão Geométrica
1 → 21 → 22 → 23 → 24 → 25 → ... 2n
n → se refere ao número de gerações.

2n → representa o número total de células em uma cultura.
- Tempo de geração: tempo para que cada microrganismo se divida ou para
que a população em uma cultura duplique em número.
- Expressões Matemáticas do Crescimento
- População total final N:
N= N0 x 2n
log N = logN0 + n log2
n = 3,3 (log N – logN0)
g = n/t (tempo de geração)
R = t/n = 1/g (taxa de crescimento)

Figura 7 – Curva de crescimento bacteriano hipotética, admitindo-se que
uma célula bacteriana é semeada em um meio e que as divisões ocorrem
regularmente em intervalos de 30 min (tempo de geração).
- Curva de crescimento de microrganismos unicelulares em sistema fechado:
cada espécie de microrganismo → tempo de geração particular → curva de
crescimento típica.
Figura 8 – Curva de crescimento bacteriano típico.

- Medida do crescimento da população: técnicas para quantificar o
crescimento microbiano.
Tabela 2 – Resumo de alguns métodos para medida do crescimento

microbiano.
-Cultura contínua:
- População microbiana
crescendo continuamente na
fase logarítmica;
- Indústrias: volume máximo de

produtos desejados.
Figura 9 – Princípio de uma

cultura contínua de
microrganismos.
Manutenção de microrganismos:
Conservação:
- Curto período → 4 a 10°C;
- Longo período → Nitrogênio líquido (-196°C);
→ Freezers (-70 a -120°C);
→ Liofilização (congelamento a seco).

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Cultivo de Microrganismos

 Cultivo do microrganismos requer meios de cultura adequados

→ Meio complexo: Constituído por matérias-primas complexas → extrato de

→ Meio de enriquecimento: Utilizado para isolar um microrganismo de um

→ Meios diferenciais: Permitem visualizar diferenças fisiológicas entre as

→ Meios seletivos: promovem e/ou inibem o crescimento de um determinado

→ Meios diferenciais e seletivos: meios complexos com as propriedades

→ Meios para anaeróbios: Adição de um agente redutor ao meio.

→ Fonte de carbono: Pode ser proveniente de dióxido de carbono ou de

→ Fonte de energia: Carboidratos como amido, glicogênio, pentoses,

→ Fonte de nitrogênio: Aminoácidos, nucleotídeos, peptídeos e proteínas

→ Fontes de hidrogênio, oxigênio, enxofre e fósforo : os dois primeiros

→ Elementos traços: outros elementos minerais → Ferro, Sódio, Manganês,

→ Vitaminas: importantes fatores de crescimento, principalmente complexo B,

Tabela 1 – Classificação nutricional das bactérias e de outros

Figura 2 - Curva de crescimento característica de diferentes microrganismos.

Psicrotróficos: Temperatura ótima: 20 a 30°C;

Mesófilos: Temperatura ótima: 25 a 40°C (mais encontrados);

- Jarra microaerófila →para microrganismos que apresentam

- Microrganismos facultativos → presença do ar ou anaerobiose →

- Microrganismos anaeróbios → podem ser mortos pelo oxigênio,

- Câmara de anaerobiose ou jarra de anaerobiose.

- Microrganismos microaerófilos → não resistem a níveis normais

Alta [O2] Sem O2 alta e baixa baixa [O2] alta e baixa

Figura 3 - Efeito do oxigênio sobre o crescimento de vários tipos de bactérias.

Diferentes gêneros de microrganismos têm tolerâncias

- Bolores e leveduras: ótimo de 5 a 6;

- Protozoários: 6,7 a 7,7;

[A] Células em meio isotônico. [B] Células em meio hipertônico.

[C] Células em meio hipotônico.

Figura 5 – O efeito da pressão osmótica em uma célula microbiana.

Figura 6 - Taxa de crescimento de alguns microrganismos vs. a

- Aumento no número da população na cultura: 1 → 2 → 4 → 8

n → se refere ao número de gerações.

- Expressões Matemáticas do Crescimento

- População total final N:

log N = logN0 + n log2

n = 3,3 (log N – logN0)

g = n/t (tempo de geração)

R = t/n = 1/g (taxa de crescimento)

Figura 8 – Curva de crescimento bacteriano típico.

Tabela 2 – Resumo de alguns métodos para medida do crescimento

- Indústrias: volume máximo de

Figura 9 – Princípio de uma

- Curto período → 4 a 10°C;

- Longo período → Nitrogênio líquido (-196°C);

→ Freezers (-70 a -120°C);

→ Liofilização (congelamento a seco).

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