Teste de DNA
Teste de DNA
Teste de DNA
e. Na realidade quando falamos de exame de DNA estamos nos referindo a anlise de um gene especfico dentro dos milhares que so responsveis por nossas doenas genticas. O DNA formado por este conjunto de genes. o material gentico que herdamos de nossos pais e que determinam todas as nossas caractersticas. Algumas, como os grupos sangneos ou a cor dos olhos s dependem dos genes. Outras dependem da interao entre os genes e o ambiente (ou outros fatores), em maior ou menor grau. o caso dos genes que causam doenas genticas. Cada indivduo ao ser concebido recebe, para cada caracterstica, duas informaes. Uma que vem da me, atravs do vulo, e outra do pai, atravs do espermatozide. Portanto, cada um dos pais colabora com 50% das informaes do filho, que se combinam uma a uma, como um zper, no momento da fecundao. Estas informaes individuais estaro distribudas em 23 pares de cromossomos que sero copiados em toda nova clula gerada. Os nossos genes so seqncias (pedaos) de DNA que codificam protenas essenciais para o funcionamento do nosso organismo. Se houver um defeito no DNA (uma mutao) a protena correspondente tambm estar alterada (ausente ou defeituosa). O exame de DNA tem sido extremamente importante para confirmar o diagnstico, em um nmero cada vez maior de doenas genticas. Ao contrrio de que muitos imaginam, existem vrios mtodos de investigao de vnculo Gentico por DNA.
Nesta metodologia, utilizam-se de enzimas de restrio que cortam o DNA em inmeros pedaos. Introduzindo-se a seguir sondas que reconhecem diversas regies especficas do DNA (sondas multilocais), formam-se 17 fragmentos variveis em cada indivduo. Como resultados teremos uma srie de bandas que assemelham-se ao sistema de identificao por cdigo de barras. Para anlise, deve-se verificar quais informaes do filho esto presente na me e quais esto presentes no suposto pai, pois metade das informaes so herdadas da me e a outra metade do pai biolgico. A grande falha deste sistema que desconhece-se a qual informao gentica cada uma daquelas bandas refere-se e portanto, qual a freqncia estatstica de cada uma delas na populao estudada; este mtodo informa-nos os fentipos e no gentipos, como nos sistemas clssicos j listados. Este mtodo de percias no mais permitido nas Cortes europias.
2. Exame Sondas Unilocais Em contraste, as sondas unilocais podem oferecer padres de DNA que so loco-especficos, e atravs dos quais poderemos deduzir informaes genotpicas que so de importncia crucial em anlise do vnculo gentico. Minissatlites Neste mtodo, quebra-se o DNA com enzima de restrio, introduz-se as sondas de loco hipervarivel, produzindo um par de alelo especfico para cada indivduo, gerando-se uma ou duas bandas apenas, dependendo se o indivduo for homozigoto ou heterozigoto. Estes fragmentos de DNA so constitudos de seqncia iguais de 9 pares de bases (combinaes de ACGT), variando em tamanho de 1 a 23kb de repeties destas seqncias.
3. Exame da Amplificao por PCR Esta tecnologia consiste em amplificar ou copiar inmeras vezes uma determinada regio do DNA. PCR uma abreviao de Reao em Cadeia de Polimerase e significa dizer que em condies especficas, a enzima Polimerase vai copiar uma regio desejada de DNA. Esta reao acontece in vitro, mas segue o mesmo princpio da multiplicao celular, onde a Polimerase tambm atua. Esta metodologia tambm opera com regies loco-especficas (unilocais), mas merecem um destaque a parte. Suas vantagens so: a) No trabalhar com enzimas em restrio;
b) Necessitar de quantidades mnimas de DNA (teoricamente 1 nica clula); c) Poder aplicar a metodologia em casos forenses de DNA cadavrico ou de amostras biolgicas muito pequenas (uma gota de sangue, mancha de sangue em tecidos, saliva em uma carta, esperma fruto de estupro, bulbo capilar etc). A PCR pode ser aplicada a dois sistemas diferentes:
1) Minissatlites Como j explicados acima, neste mtodo tambm ser detectado 2 alelos por indivduo, em cada loco especfico. Para encontrar os fragmentos de DNA que se deseja estudar, em vez de cort-los com enzima de restrio, vamos usar pequenas sequncias j conhecidas de DNA sinttico, que so chamadas de primer. Estas sequncias funcionam como o "fio de meada" ou a informao inicial para que a PCR opere. 2) Microssatlites Tambm conhecidos como repeties de sequncias simples ou repeties curtas em tandem, so sequncias genmicas formadas por repeties de 1, 2, 3 ou 4 nucleotdeos apenas (A, C, T, G). Na Genomc utilizamos de tetra-nucleotdeos (repeties de GATA/GACA). Da mesma forma, necessrio amplificar pela PCR as regies do DNA onde sabe-se que esto os microssatlites e ento, os 2 alelos ou informaes genticas dos indivduos estudados, sero marcadas por unidades fluorescentes e visualisadas por raios lasers de um aparelho de sequenciameto automtico de DNA. No Genoma Humano h aproximadamente 50-100 mil cpias de repeties de tetra-nucleotdeos o que possibilita muitos estudos desses locos especficos, que so comuns em todas populaes ma altamente polimrficos. Tipar as regies de microssatlites, tem um alto potencial de utilidade para exames de vnculo gentico, porque eles combinam alelos curtos com simplicidade analtica.
AMA-ABA (American Medical Association-American Bar Association) orientava para o uso de 7 sitemas de investigao (ABO, Rh, MNSs, Kell, Duffy, Kidd e HLA) e mais sistemas adicionais de enzimas eritrocitrias e protenas sricas. Somente na segunda metade da dcada de 80 que surgiram os primeiros trabalhos com DNA (cido Desoxirribonucleico) para estudo de vnculo gentico.
ligado quantidade de regies do DNA estudadas e ao percentual de confiabilidade do resultado. "O beb muito novinho e ter de crescer mais para fazer o teste de DNA.- FALSO - No existe idade mnima nem mxima' para o teste de paternidade pelo DNA. "Cortei o cabelo dele para fazer o teste de DNA.- FALSO - Cabelo cortado no contm DNA suficiente para os testes. O DNA usado para determinao de paternidade est na raiz (bulbo) do cabelo arrancado ou retirado de escovas, pentes, ralos de banheiro etc. "Ele j morreu h muitos anos, sem nenhum outro parente vivo. Nunca poderei provar que ele era o pai de meu filho. - FALSO - O teste de paternidade pode ser feito em DNA extrado de material exumado, independente do tempo e local de sepultamento, ou da causa da morte. "Sou primo da me e estou com medo do resultado ser positivo, mesmo que eu no seja o verdadeiro pai .- FALSO - Toda pessoa geneticamente diferente da outra, exceto os gmeos homozigticos (idnticos). Um teste de paternidade robusto e mais completo (com anlise de maior nmero de locos de DNA pela PCR) pode definir a paternidade mesmo havendo parentesco entre a me e o possvel pai ou se houver dvida entre dois supostos pais que so irmos ou meio-irmos, primos ou mesmo pai e filho, tio e sobrinho, av e neto. "Tomei medicamentos, me alimentei bem e bebi bastante antes da coleta para o teste de DNA. O resultado no ser o verdadeiro". - FALSO Medicamentos, alimentos ou bebidas no alteram o DNA da pessoa. Nenhum preparo especial necessrio antes da coleta de sangue e/ou clulas bucais para os teste de paternidade pelo DNA. "Terei de esperar o beb nascer para provar quem o pai dele.- FALSO No necessrio esperar o nascimento do bebe. O teste de paternidade pelo DNA pode ser feito durante a gestao, a partir da 10 semana. "A me no precisa participar do exame porque j sabemos que ela me mesmo. FALSO - Se ela j tiver falecido, o exame pode ser feito, mas mais dispendioso e mais difcil. Se a me for viva, o ideal test-la tambm. Metade do DNA vem da me e a outra metade do pai biolgico. O teste sem a me, na falta de 50% das informaes herdadas dela, que so muito importantes, ter de compensar isto com o estudo de um nmero muito maior de locos (regies) do DNA s do suposto pai e do filho. Clculos matemticos e estatsticos mais complexos sero necessrios. Havendo de parentesco entre a me que no ser testada e o suposto pai ou se houver dvida entre dois possveis pais,
parentes entre si (irmos, meio-irmos, primos, pai e filho, av e neto, tio e sobrinho) a anlise mais complexa ainda. "O DNA arquivado no Banco de DNA do GENE' pode ser usado aps a morte, caso apaream pessoas pleiteando a paternidade .- VERDADEIRO - Pessoas prevenidas que temem que aps o falecimento apaream pessoas reclamando participao na herana tomam esta providncia.
NOVIDADE 2005: Para atender pacientes insatisfeitos com percias incompletas, inconclusivas ou de resultado duvidoso e para atender CONFIDENCIALMENTE laboratrios que esto com dificuldades de completar as anlises de paternidade complexas, o GENE criou o Departamento de Clculos Bayesianos, com equipe composta por geneticistas, matemticos e analistas de sistema. Este trabalho pode ser contratado para auxiliar nas situaes de dvida ou crise. Para mais detalhes clicar aqui . OPES DE PERCIAS EM DNA NO GENE, SEM O SUPOSTO PAI: 1) Percia DNA TOTAL: Pela PCR sem DNA do possvel pai (com estudo de DNA de parentes): confiabilidade superior a 99,9999% na incluso (paternidade positiva) e 100% de certeza na excluso (paternidade negativa). 2) Percia Padro pela PCR: Anlise de um nmero suficiente de locos de microssatlites pela PCR para uma confiabilidade de 99,99%. NOTA : Para percias com pai falecido sempre recomendada Percia DNA TOTAL pela PCR , mais completa porque o GENE tem disposio uma bateria de mais de 50 locos diferentes de DNA para estudar pela PCR. Alm disso, se necessrio, o GENE faz uso de exames moleculares especiais de hapltipos do cromossomo X ou hapltipos do cromossomo Y , uma metodologia desenvolvida pela equipe de pesquisa do Prof. Dr. Srgio Pena na Universidade Federal de Minas Gerais.
ossadas e seus mtodos laboratoriais publicados em revistas cientficas internacionais. A complexidade dos estudos em DNA exumado no pode ser subestimada e o valor cobrado pelo GENE compatvel com a expertise tcnica, a experincia cientfica e a responsabilidade profissional necessrias para levar a termo a percia. Por isso, importante alertar que alguns materiais exumados estudados com sucesso pelo GENE j haviam sido enviados anteriormente a laboratrios menos experientes, que cobravam honorrios menores, ilusoriamente atraentes, se aventuravam a fazer a percia sem dispor (e desconhecendo) as condies tcnicas essenciais para elucidar os casos. A exumao deve ser realizada por um mdico legista, devidamente autorizado e acompanhado de representantes legais que atestaro ter presenciado a exumao no referido cemitrio, da referida sepultura, etc. O material selecionado (dentes, mandbula, costelas, esterno, clavcula, ilaco e/ou fmur) dever ser entregue diretamente na sede do GENE - Ncleo de Gentica Mdica, em Belo Horizonte, acondicionado adequadamente e lacrado. recomendado fornecer fotocpia do atestado de bito e do comprovante oficial da exumao. O prazo para a entrega do laudo final de aproximadamente 120 (cento e vinte) dias. Aps a etapa inicial que a extrao do DNA no material exumado no Laboratrio GENE iniciada a segunda etapa da percia, que consiste no estudo comparativo entre o DNA obtido do(a) falecido(a) e o DNA extrado de amostras de sangue e/ou clulas bucais do(a) suposto(a) filho(a) e de sua me (se viva). O GENE recomenda que seja feita a validao do DNA da ossada atravs do estudo comparativo do DNA de um parente do falecido (pai, me, irmo, filho legtimo e outros). Este teste adicional do maior interesse para os familiares do falecido e pode ser realizado sem custo adicional durante o decorrer dos exames laboratoriais. Esta validao importante e beneficia tanto a parte requerente quanto a parte requerida. Destaque-se que, se a validao no ocorrer durante a percia e vier a ser pedida posteriormente, incidiro honorrios de reativao da percia. O Laboratrio GENE, em Belo Horizonte, deve ser contactado antes da tomada de qualquer iniciativa com relao exumao pelo (31) 3284 8000. Em casos judiciais, recomendamos a nomeao do Prof. Dr. Srgio Pena como perito oficial ou sua contratao como assistente tcnico antes que ele assuma compromissos que inviabilizem esta atuao.
dias. Desejada a Percia Express Pr-Natal: com resultado mais rpido, favor consultar sobre taxa de urgncia . B) Percia Pr-Natal Modalidade DNA TOTAL : Anlise de um nmero suficiente de locos de microssatlites para fornecer uma confiabilidade de na incluso (Paternidade Positiva) de 99,999999% e 100% de certeza na excluso (Paternidade Negativa). Prova e contraprova em todos os casos. Resultado em 7 dias.
Esta modalidade de exame frequentemente realizada para atender s seguradoras e s famlias de pessoas desaparecidas.
Banco de DNA
No raro que aps a morte de um indivduo, principalmente no caso de pessoas de posses ou famosas, apaream pretensos filhos que movem ou ameaam mover aes judiciais de paternidade contra os herdeiros, embargando a diviso do esplio para tentar participar da partilha de bens. Alguns desses casos so legtimos, outros so tentativas de explorao e fraudulentos. Embora seja possvel a investigao da paternidade mesmo aps a morte do suposto pai pela reconstituio parcial de seu perfil gentico pelo estudo do DNA de seus familiares (ou atravs do estudo direto do DNA extrado de material exumado) as investigaes so mais complexas e dispendiosas do que quando se tem acesso ao DNA da prpria pessoa. O GENE criou e administra um Banco de DNA desde 1988, guardando DNA e/ou amostras biolgicas para ajudar na preveno e/ou soluo de processos de paternidade aps a morte. Indivduos cautelosos, idosos ou doentes, assim como familiares que vislumbram a possibilidade de uma ao de paternidade no futuro, fazem o armazenamento de DNA no Laboratrio GENE. O Banco de DNA tambm importante para pessoas que praticam esportes perigosos ou tem profisses de alto risco, que envolvem constantes viagens etc. Para armazenar o DNA no GENE so obtidas amostras de sangue e/ou clulas bucais, feitas as preparaes de DNA que so armazenados de quatro maneiras diferentes , em lugares distintos , para evitar perdas acidentais. fornecido um documento especfico comprovando este armazenamento de DNA. As identidades das pessoas que armazenam o material biolgico no Banco de DNA do GENE so mantidas em estrita confidencialidade. A utilizao futura do material armazenado s pode ser feita com a autorizao expressa das pessoas credenciadas para tal, nomeadas por ocasio da contratao do servio (depsito do DNA). O material fica guardado por 20 anos.
Determinao de Paternidade com Autocoleta Domiciliar de Clulas Bucais (feita pelos prprios envolvidos)
Para os casos no-judiciais (particulares) os envolvidos podem ter a opo da comodidade de realizar a coleta de suas clulas bucais (saliva) no prprio domiclio, em carter estritamente sigiloso. Esta vantagem muito valorizada em cidades, menores, onde todos se conhecem e a privacidade ou anonimato so difceis. A coleta das clulas bucais um procedimento simples, higinico e totalmente indolor. O kit para coleta domiciliar, com as instrues, pode ser solicitado pelo (31) 3284 8000. Veja a seguir como simples colher estas amostras no domiclio para posterior envio ao laboratrio central do GENE, em Belo Horizonte, no endereo constante no rodap desta pgina, via correio, avio ou portador. O endereo postal GENE Av. Afonso Pena 3111, 9 andar Belo Horizonte MG Cep: 30130-909. Instrues de coleta (clique aqui para ver um filme mostrando a coleta veiculado pelo Fantstico eaqui para ver instrues detalhadas de coleta):
Usar os tubos pequenos fornecidos pelo GENE. Ateno: usar a cor rosa para a me, amarela para o(a) filho(a) e verde para o suposto pai. Usar as pequenas etiquetas, tambm fornecidas pelo GENE, para rotular os tubos com o nome completo de cada envolvido. Escrever nas etiquetas antes de coloc-las nos tubos. Caso deseje sigilo, preencher os rtulos apenas como me, filho(a), possvel pai. Usar as escovinhas para obter as clulas da mucosa bucal de cada pessoa separadamente , seguindo o procedimento indicado abaixo: Abrir a prpria boca (ou pedir criana para abrir a boca) Passar, com certo vigor, a escovinha na parte interna da boca (bochecha) em movimentos para cima e para baixo, rodando a escovinha. Repetir estes movimentos pelo menos 10 (dez) vezes com certo rigor mas sem machucar.
Retirar a escovinha de dentro da boca, abrir o tubo identificado como sendo daquela pessoa, mergulh-la dentro do lcool, fazendo movimentos rotativos para desprender as clulas presas na escovinha. O lcool deve ficar turvo. A seguir, fechar o tubo com cuidado para no vazar. Descartar a escovinha usada. Repetir a mesma coisa para a mesma pessoa com a segunda escovinha do lado oposto da bochecha interna. O DNA ser extrado das clulas da mucosa da boca que esto flutuando no lcool. Enviar o material coletado para o laboratrio GENE pelo correio (SEDEX) temperatura ambiente dentro do envelope de segurana fornecido pelo GENE. Ou entregar pessoalmente em nosso laboratrio central. (Endereo: GENE, Av. Afonso Pena, 3111/9 andar - Belo Horizonte MG Cep: 30130-909).
NOTA BENE: A auto-coleta domiciliar pelos prprios envolvidos resolve as dvidas familiares em total sigilo. Para disputas judiciais esta coleta domiciliar s vlida se for coordenada e presenciada por um representante do GENE. A presena de um profissional do GENE envolve despesas adicionais. Favor consultar.
determinao de paternidade est na raiz (bulbo) do cabelo arrancado ou retirado de escovas, pentes, ralos de banheiro etc. " Ele j morreu h muitos anos, sem nenhum outro parente vivo. Nunca poderei provar que ele era o pai de meu filho .- FALSO - O teste de paternidade pode ser feito em DNA extrado de material exumado, independente do tempo e local de sepultamento, ou da causa da morte. Para acessar mais informaes sobre Percia sem a Presena do Suposto Pai (Exumao) neste site, clique aqui . " Sou primo da me e estou com medo do resultado ser positivo, mesmo que eu no seja o verdadeiro pai .- FALSO - Toda pessoa geneticamente diferente da outra, exceto os gmeos homozigticos (idnticos). Um teste de paternidade robusto e mais completo (com anlise de maior nmero de locos de DNA pela PCR) pode definir a paternidade mesmo havendo parentesco entre a me e o possvel pai ou se houver dvida entre dois supostos pais que so irmos ou meioirmos, primos ou mesmo pai e filho, tio e sobrinho, av e neto. " Tomei medicamentos, me alimentei bem e bebi bastante antes da coleta para o teste de DNA. O resultado no ser o verdadeiro" . FALSO - Medicamentos, alimentos ou bebidas no alteram o DNA da pessoa. Nenhum preparo especial necessrio antes da coleta de sangue e/ou clulas bucais para os teste de paternidade pelo DNA. " Terei de esperar o beb nascer para provar quem o pai dele .FALSO - No necessrio esperar o nascimento do bebe. O teste de paternidade pelo DNA pode ser feito durante a gestao, a partir da 10 semana. Para acessar informaes sobre Paternidade Pr-Natal neste site, clicar aqui . " A me no precisa participar do exame porque j sabemos que ela me mesmo FALSO - Se ela j tiver falecido, o exame pode ser feito, mas mais dispendioso e mais difcil. Se a me for viva, o ideal test-la tambm. Metade do DNA vem da me e a outra metade do pai biolgico. O teste sem a me, na falta de 50% das informaes herdadas dela, que so muito importantes, ter de compensar isto com o estudo de um nmero muito maior de locos (regies) do DNA s do suposto pai e do filho. Clculos matemticos e estatsticos mais complexos sero necessrios. Havendo de parentesco entre a me que no ser testada e o suposto pai ou se houver dvida entre dois possveis pais, parentes entre si (irmos, meio-irmos, primos, pai e filho, av e neto, tio e sobrinho) a anlise mais complexa ainda.
" O DNA arquivado no Banco de DNA do GENE' pode ser usado aps a morte, caso apaream pessoas pleiteando a paternidade .VERDADEIRO - Pessoas prevenidas que temem que aps o falecimento apaream pessoas reclamando participao na herana tomam esta providncia. Para obter mais informaes sobre Banco de DNA neste site, clicar aqui .