UJI SITOTOKSIK, TOKSISITAS DAN PREDIKSI SIFAT FISIKOKIMIA

SENYAWA ISOLIQUIRITIGENIN DAN OXYRESVERATROL TERHADAP

RESEPTOR B-CELL LYMPHOMA 2 (4AQ3) DAN VASCULAR
ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR RECEPTOR-2 (2RL5) SEBAGAI
TERAPI KANKER SERVIKS SECARA IN SILICO

SKRIPSI

Oleh:
MUHAMMAD FAWWAZ HARIZ
NIM. 15670015

JURUSAN FARMASI
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI
MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG
2019
UJI SITOTOKSIK, TOKSISITAS DAN PREDIKSI SIFAT FISIKOKIMIA
SENYAWA ISOLIQUIRITIGENIN DAN OXYRESVERATROL TERHADAP
RESEPTOR B-CELL LYMPHOMA 2 (4AQ3) DAN VASCULAR
ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR RECEPTOR-2 (2RL5) SEBAGAI
TERAPI KANKER SERVIKS SECARA IN SILICO

SKRIPSI

Diajukan Kepada:
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang
Untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan dalam
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI
MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG
2019
UJI SITOTOKSIK, TOKSISITAS DAN PREDIKSI SIFAT FISIKOKIMIA
SENYAWA ISOLIQUIRITIGENIN DAN OXYRESVERATROL TERHADAP
RESEPTOR B-CELL LYMPHOMA 2 (4AQ3) DAN VASCULAR
ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR RECEPTOR-2 (2RL5) SEBAGAI
TERAPI KANKER SERVIKS SECARA IN SILICO

SKRIPSI

Oleh:
MUHAMMAD FAWWAZ HARIZ
NIM. 15670015

Telah Diperiksa dan Disetujui untuk diuji:

Tanggal:

Pembimbing I Pembimbing II

Dr. Roihatul Muti’ah, M.Kes., Apt Yen Yen Ari I M.Farm.Klin., Apt
NIP. 19800203 200912 2 003 NIDT. 19930130 20180201 2 203

Mengetahui,
Ketua Program Studi Farmasi

Dr. Roihatul Muti’ah, M.Kes., Apt

NIP. 19800203 200912 2 003
UJI SITOTOKSIK, TOKSISITAS DAN PREDIKSI SIFAT FISIKOKIMIA
SENYAWA ISOLIQUIRITIGENIN DAN OXYRESVERATROL TERHADAP
RESEPTOR B-CELL LYMPHOMA 2 (4AQ3) DAN VASCULAR
ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR RECEPTOR-2 (2RL5) SEBAGAI
TERAPI KANKER SERVIKS SECARA IN SILICO

SKRIPSI

Oleh:
MUHAMMAD FAWWAZ HARIZ
NIM. 15670015

Telah Dipertahankan di Depan Dewan Penguji Skripsi

Dan Dinyatakan Diterima Sebagai Salah Satu Persyaratan
Untuk Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)
Tanggal:

Ketua Penguji : Yen Yen Ari I, M.Farm.Klin., Apt (..................)

NIDT. 19930130 20180201 2 203
Anggota Penguji : 1. Burhan Ma’arif ZA, M.Farm., Apt (..................)
NIP. 19900221 201801 1 001
2. Dr. Roihatul Muti’ah, M.Kes., Apt (..................)
NIP. 19800203 200912 2 003
3. Abdul Hakim, M.P.I, M.Farm., Apt (..................)
NIP. 19761214 200912 1 203

Mengesahkan,
Ketua Program Studi Farmasi

Dr. Roihatul Muti’ah, M.Kes., Apt

NIP. 19800203 200912 2 003
 PERNYATAAN KEASLIAN TULISAN

Saya yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Muhammad Fawwaz Hariz

NIM : 15670015

Program Studi : Farmasi

Fakultas : Kedokteran dan Ilmu Kesehatan

Judul Penelitian : Uji Sitotoksik, Toksisitas dan Prediksi Sifat Fisikokimia

Senyawa Isoliquiritigenin dan Oxyresveratrol terhadap
Reseptor B-Cell Lymphoma 2 (4AQ3) dan Vascular
Endothelial Growth Factor Receptor-2 (2RL5) sebagai
Terapi Kanker Serviks secara In silico

Menyatakan dengan sebenarnya bahwa skripsi yang saya tulis ini benar-banar
merupakan hasil karya saya sendiri, bukan merupakan pengambilalihan data,
tulisan atau pikiran orang lain yang saya akui sebagai hasil tulisan atau pikiran saya
sendiri, kecuali dengan mencantumkan sumber cuplikan pada daftar pustaka.
Apabila dikemudian hari terbukti atau dapat dibuktikan skripsi ini hasil jiplakan,
maka saya bersedia menerima sanksi atas perbuatan tersebut.

Malang, 23 April 2019

Yang membuat pernyataan,

Muhammad Fawwaz Hariz

NIM. 15670015
 MOTTO

Tidak ada yang tidak mungkin jika tetap terus berusaha dan terus berdoa.

Kegagalan adalah alasan untuk bangkit demi sebuah keberhasilan

 LEMBAR PERSEMBAHAN
Alhamdulillahhirobbil’aalamiin
Dengan senantiasa memanjatkan puji syukur ke hadirat Allah SWT beserta Nabi
Muhammad SAW sehingga bisa terselesaikannya skripsi ini.
Dengan rasa syukur yang mendalam, kupersembahkan tulisan karya sederhanaku
ini kepada:
1. Kedua orang tuaku, Ayahanda tercinta Drs. Adib Muchamad dan Ibunda tercinta
Rumiyin Afroni. Terimakasih telah memberi doa, dukungan dalam segala
bentuk, semangat, dan kasih sayang yang tak pernah putus sehingga saya dapat
menempuh sarjana dengan lancar dam selalu memberikan yang terbaik untuk
saya.
2. Kedua kakakku M. Fahruddin Mufari Hata beserta istrinya Evin Dwi Hananing,
dan kakak perempuanku Zifora Nur Baiti beserta suaminya Fachry Khusaini.
terimakasih untuk perhatian, dukungan, doa, dan semangatnya selama ini.
3. Kepada Narastri Wulandari yang telah menemani dari awal hingga akhir,
terimakasih untuk setiap detik yang diberikan, perhatian, dukungan, dorongan,
semangat dan semua yang telah diberikan selama ini
4. Terimakasih kepada Ibu Dr. Roihatul Muti’ah, M.Kes., Yen Yen Ari
Indrawijaya, M.Farm.Klin., Apt, sebagai pembimbing Bapak Burhan Ma’rif.
M.Farm., Apt sebagai penguji dan Bapak Abdul Hakim M.P.I, M.Farm., Apt
sebagai penguji agama
5. Terimakasih tak terhingga kepada sahabat, teman-teman tersayang Farmasi UIN
Maulana Malik Ibrahim Malang 2015 yang telah memberikan semangat dan
warna selama menempuh perkuliahan. Teman-teman tim riset anti kanker,
terimakasih untuk perjuangan, semua motivasi semangat selama ini. Rasa syukur
kuucapkan kepada Allah SWT karena telah mengenal kalian. Semoga kita selalu
dipertemukan dalam kebaikan. Selamat dan sukses selalu buat kalian
6. Kepada semua pihak yang telah membantu terselesainya skripsi ini yang tidak
dapat saya sebutkan satu persatu.
 KATA PENGANTAR

Assalamu’alaikum Wr. Wb.

Syukur alhamdulillah penulis haturkan kehadirat Allah SWT yang telah

melimpahkan Rahmat dan Hidayah-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan
skripsi yang berjudul “Uji Sitotoksik, Toksisitas dan Prediksi Sifat
Fisikokimia Senyawa Isoliquiritigenin dan Oxyresveratrol terhadap Reseptor
B-Cell Lymphoma 2 (4AQ3) dan Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-
2 (2RL5) sebagai Terapi Kanker Serviks secara In silico” dengan baik.
Shawlawat serta salam semoga tetap tercurahkan kepada unjungan kita baginda
Rasulullah Muhammad SAW yang telah membawa ajaran agama islam kepada
ummahnya sehingga kita dapat membedakan yang haq dan yang bathil. Skripsi ini
merupakan salah satu syarat menyelesaikan program Strata-1 (S-1) di Jurusan
Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Islam Negeri (UIN)
Maulana Malik Ibrahim Malang sekaligus menyelesaikan tugas akhir/skripsi ini
dengan baik.
Selanjutnya penulis haturkan ucapan terima kasih seiring do’a dan harapan
jazakumullah ahsanal jaza’ kepada semua pihak yang telah membantu
terselesaikannya skripsi ini. Ucapan terima kasih ini penulis sampaikan kepada:
1. Prof. Dr. H. Abdul Haris, M.Ag, selaku rektor UIN Maulana Malik Ibrahim
Malang, yang telah banyak memberikan pengetahuan dan pengalaman yang
berharga.
2. Prof. Dr. dr. Bambang Pardjianto, Sp. B., Sp. BP-REK (K) selaku Dekan
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Maulana
Malik Ibrahim Malang.
3. Dr. Roihatul Muti’ah, M.Kes., Apt selaku ketua program studi Farmasi
Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Maulana Malik
Ibrahim Malang.
4. Dr. Roihatul Muti’ah, M.Kes., Apt dan Yen Yen Ari Indwawijaya.
M.Farm.Klin., Apt selaku dosen pembimbing skripsi, yang telah banyak
memberikan pengarahan dan pengalaman yang berharga.
5. Segenap sivitas akademik Program studi Farmasi, terutama seluruh dosen,
terima kasih atas segenap ilmu dan bimbingannya.
6. Ayahanda dan Ibunda tercinta yang senantiasa memberikan doa dan restunya
kepada penulis dalam menuntut ilmu.
7. Kakak penulis yang selalu memberikan semangat kepada penulis untuk
menyelesaikan skripsi ini.
8. Semua pihak yang ikut membantu dalam menyelesaikan skripsi ini baik berupa
materiil maupun moril. Penulis menyadari bahwa dalam penyusunan skripsi ini
masih terdapat kekurangan dan penulis berharap semoga skripsi ini bias
memberikan manfaat kepada para pembaca khususnya bagi penulis secara
pribadi. Amin Ya Rabbal Alamin.
Wassalamu’alaikum Wr. Wb.

Malang, 23 April 2019

Penulis
 i

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL
HALAMAN PENGAJUAN
HALAMAN PERSETUJUAN
HALAMAN PENGESAHAN
HALAMAN PERNYATAAN
MOTTO
HALAMAN PERSEMBAHAN
KATA PENGANTAR
DAFTAR ISI ........................................................................................................... i
DAFTAR TABEL ................................................................................................ iv
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. v
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... vii
DAFTAR SINGKATAN .................................................................................... viii
ABSTRAK ............................................................................................................ ix
BAB I PENDAHULUAN ...................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ............................................................................................ 1
1.2 Rumusan Masalah ....................................................................................... 7
1.3 Tujuan.......................................................................................................... 7
1.4 Manfaat Penelitian....................................................................................... 8
1.5 Batasan Masalah .......................................................................................... 8
BAB II TINJAUAN PUSTAKA........................................................................... 9
2.1 Metode In silico (Molecular Docking) dalam Perspektif Islam .................. 9
2.2 Pemodelan Molekul................................................................................... 10
2.3 Molegro Virtual Docker ............................................................................ 12
2.4 B-cell lymphoma 2 ..................................................................................... 12
2.5 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor -2 .................................... 15
2.6 Interaksi Obat-Reseptor ............................................................................. 18
2.6.1 Ikatan Kovalen .................................................................................... 19
2.6.2 Ikatan Ionik ......................................................................................... 19
 ii

2.6.3 Interaksi Ion-dipol dan Dipol-dipol .................................................... 20

2.6.4 Ikatan hidrogen ................................................................................... 20
2.6.5 Ikatan Van der Waal’s ........................................................................ 21
2.6.6 Ikatan hidrofobik................................................................................. 21
2.6.7 Transfer Muatan ................................................................................. 21
2.7 Hukum lima Lipinski ................................................................................ 22
2.8 Toksisitas ................................................................................................... 23
2.9 Kanker ....................................................................................................... 24
2.9.1 Kanker serviks .................................................................................... 25
2.9.2 Patogenesis HPV 16............................................................................ 26
2.10 Tinjauan Senyawa ..................................................................................... 28
2.10.1 Polifenol .............................................................................................. 28
2.10.1.1 Oxyresveratrol ............................................................................. 29
2.10.2 Flavonoid ............................................................................................ 30
2.10.2.1 Isoliquiritigenin ........................................................................... 31
BAB III KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESIS ........................... 33
3.1 Kerangka Konsep ...................................................................................... 33
3.1.1 Bagan Kerangka Konseptual .............................................................. 33
3.1.2 Uraian Kerangka Konseptual .............................................................. 34
3.2 Hipotesis penelitian ................................................................................... 36
BAB IV METODE PENELITIAN .................................................................... 37
4.1 Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................................ 37
4.2 Waktu dan Tempat Penelitian ................................................................... 37
4.3 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional ........................................... 37
4.4 Alat dan Bahan Penelitian ......................................................................... 38
4.4.1 Alat...................................................................................................... 38
4.4.2 Bahan .................................................................................................. 38
4.4.2.1 Struktur Ligan Isoliquiritigenin dan Oxyresveratrol ...................... 38
4.4.2.2 Struktur Tiga Dimensi Reseptor 4AQ3 ........................................... 39
4.4.2.3 Struktur Tiga Dimensi Reseptor 2RL5 ........................................... 40
4.5 Skema Kerja Penelitian dan Prosedur Penelitian ...................................... 41
4.5.1 Skema Kerja Penelitian ....................................................................... 41
 iii

4.5.2 Prosedur Penelitian ............................................................................. 42

4.5.2.1 Preparasi Ligan................................................................................ 42
4.5.2.2 Preparasi Protein Reseptor .............................................................. 42
4.5.2.3 Penambatan Molecular Docking ..................................................... 42
4.5.2.4 Prediksi Sifat Fisikokimia dan Toksisitas Senyawa........................ 44
4.6 Analisis Data ............................................................................................. 45
BAB V HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN .................................... 46
5.1 Pengunduhan Target Protein ..................................................................... 46
5.2 Pembuatan Struktur 2 Dimensi, 3 Dimensi, Code SMILES dan Penentuan
Energi Minimal ......................................................................................... 47
5.3 Prediksi sifat fisikokimia dan ADME ....................................................... 51
5.4 Hasil Docking dan Analisis Asam Amino................................................. 58
5.4.1 Hasil Preparasi Protein 4AQ3 dan 2RL5 ............................................ 58
5.4.2 Hasil Penentuan Lubang (Cavity) ....................................................... 59
5.4.3 Pengaturan Molegro Virtual Docking ................................................. 61
5.4.4 Hasil Validasi Reseptor 4AQ3 dan 2RL5 ........................................... 62
5.4.5 Hasil Perolehan Docking Score .......................................................... 63
5.4.5.1 Hasil Docking Senyawa Isoliquiritigenin, Oxyresveratrol, 2,3-
dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor, dan Phenylacylsulfonamide
inhibitor terhadap Reseptor 4AQ3 (E) dan 2RL5 ............................ 63
5.4.5.2 Hasil Penentuan Energi Ikatan ....................................................... 65
5.4.6 Hasil Interaksi Ligan dengan Asam Amino ........................................ 67
5.4.6.1 Interaksi Residu Asam Amino 4AQ3 (E) ....................................... 68
5.4.6.2 Interaksi Residu Asam Amino 2RL5 .............................................. 73
5.5 Prediksi Toksisitas secara In Silico ........................................................... 77
5.6 Analisis Data Statistik ............................................................................... 79
BAB VI PENUTUP ............................................................................................. 81
6.1 Simpulan.................................................................................................... 81
6.2 Saran .......................................................................................................... 82
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 83
 iv

DAFTAR TABEL

Tabel 5.1 Hasil penentuan energi minimal (kkal/mol) senyawa

oxyresveratrol dan isoliquiritigenin dengan MMFF94 ............... 48

Tabel 5.2 Hasil code SMILES isoliquiritigenin dan oxyresveratrol ........... 50

Tabel 5.3 Hasil penentuan sifat fisikokimia dan penerapan hukum lima
Lipinski terhadap senyawa isoliquiritigenin, oxyresveratrol,
2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor dan
Phenylacylsulfonamide inhibitor................................................. 52

Tabel 5.4 Hasil prediksi ADME senyawa isoliquiritigenin,

oxyresveratrol, 2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor dan
Phenylacylsulfonamide inhibitor Menggunakan PkCSM Online
Tool.............................................................................................. 53

Tabel 5.5 Hasil validasi dan nilai RMSD .................................................... 62

Tabel 5.6 Hasil Docking score ligan Isoliquiritigenin, Oxyresveratrol,

2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor, Phenylacylsulfonamide
inhibitor terhadap reseptor 2RL5 dan 4AQ3............................... 64

Tebel 5.7 Nilai Rerank Score terhadap reseptor 4AQ3 (E) dan 2RL5 ........ 66

Tabel 5.8 Asam amino dan gugus fungsi yang terlibat dalam proses ikatan
hidrogen dan interaksi sterik pada 4AQ3 (E) .............................. 69

Tabel 5.9 Asam amino yang terlibat dalam proses ikatan hidrogen dan
interaksi sterik pada reseptor 4AQ3 (E) ...................................... 69

Tabel 5.10 Asam amino dan gugus fungsi yang terlibat dalam proses ikatan
hidrogen dan interaksi sterik pada reseptor 2RL5 ....................... 74

Tabel 5.11 Asam amino yang terlibat dalam proses ikatan hidrogen dan
interaksi sterik pada reseptor 2RL5 ............................................. 74

Tabel 5.12 Prediksi toksisitas menggunakan Protox II Online tool dan

pkCSM Online tool ...................................................................... 78
Tabel 5.13 Analisis uji banding menggunakan uji statistik ANOVA ........... 80
 v

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Mekanisme apoptosis melalui jalur mitokondria dan

kematian reseptor ................................................................... 13

Gambar 2.2 Ikatan asam amino yang berperan antara 4AQ3 dengan
phenylacylsulfonamide inhibitor ........................................... 15

Gambar 2.3 Mekanisme jalur pensinyalan Vascular endothelial growth

factor receptor-2 .................................................................. 17

Gambar 2.4 Ikatan asam amino yang berperan antara 2RL5 dengan
sorafenib ................................................................................. 18

Gambar 2.5 Alur aplikasi pkCSM tool ...................................................... 23

Gambar 2.6 Siklus sel kanker .................................................................... 24

Gambar 2.7 Wilayah pengkodean HPV 16 ................................................ 27

Gambar 2.8 Peran utama E5, E6, dan E7 dalam mekanisme molekuler
HPV 16 dan 18 pada infeksi kanker serviks .......................... 28

Gambar 2.9 Struktur 2D Oxyresveratrol (4-[(E)-2-(3,5-

Dihydroxyphenyl)vinyl]-1,3-benzenediol) ............................ 30

Gambar 2.10 Struktur 2D Isoliquiritigenin (2E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-

3-(4-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on) .................................... 31

Gambar 3.1 Bagan Kerangka Konsep ....................................................... 33

Gambar 4.1 Struktur tiga dimensi A. Isoliquiritigenin, B. Oxyresveratrol 39

Gambar 4.2 (A) Struktur 3 dimensi B-cell lymphoma 2 (4AQ3)

(B) Struktur 3 dimensi B-cell lymphoma 2 (4AQ3) dengan
cavity ....................................................................................... 39

Gambar 4.3 (A)Struktur 3 dimensi Vascular endothelial growth factor

receptor-2 (2RL5) (B) Struktur 3 dimensi Vascular
endothelial growth factor receptor-2 (2RL5) dengan cavity . 40
Gambar 4.4 Skema kerja penelitian ........................................................... 41
 vi

Gambar 5.1 Struktur dua dimensi isoliquiritigenin (A) Struktur dua

dimensi senyawa oxyresveratrol (B). Struktur tiga dimensi
senyawa isoliquiritigenin (C). Struktur tiga dimensi senyawa
oxyresveratrol (D)................................................................... 47

Gambar 5.2 (A) Reseptor 4AQ3 dan (B) 2RL5 .......................................... 59

Gambar 5.3 Hasil deteksi lubang (cavity) pada (A) reseptor 4AQ3 dan (B)
2RL5 ....................................................................................... 60

Gambar 5.4 Gambar A. Posisi terbaik senyawa isoliquiritigenin (warna

ungu), oxyresveratrol (warna biru) dan
Phenylacylsulfonamide inhibitor (warna kuning) terhadap
4AQ3 (E) dengan residu asam amino ditunjukkan stick style
dan ligan ditunjukkan dengan thick lines with fixed colour.
Gambar B. Posisi terbaik isoliquiritigenin (warna ungu),
oxyresveratrol (warna biru) dan Phenylacylsulfonamide
inhibitor (warna kuning) terhadap 4AQ3 (E) ......................... 60

Gambar 5.5 Bentuk dua dimensi ikatan hidrogen antara

Phenylacylsulfonamide inhibitor (A) isoliquirtigenin (B)
dan oxyresveratrol (C) pada reseptor 4AQ3 (E) dengan garis
biru sebagai ikatan hidrogen dan garis merah sebagai ikatan
sterik........................................................................................ 60

Gambar 5.6 Gambar A. Posisi terbaik Isoliquiritigenin (warna ungu),

Oxyresveratrol (warna biru) dan 2,3-dihydro-1, 4-
benzoxazine inhibitor (warna kuning) terhadap 2RL5
dengan Residu asam amino ditunjukkan stick style dan ligan
dengan thick lines with fixed colour. Gambar B. Posisi
terbaik Isoliquiritigenin (warna ungu), Oxyresveratrol
(warna biru) dan 2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor
(warna kuning) terhadap 2RL5 ............................................... 73

Gambar 5.7 Bentuk 2 Dimensi ikatan Hidrogen antara (A) 2,3-dihydro-

1, 4-benzoxazine inhibitor (B) Isoliquirtigenin dan (C)
Oxyresveratrol dengan reseptor 2RL5 garis biru sebagai
ikatan hidrogen dan garis merah sebagai ikatan sterik. .......... 73
 vii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Hasil Analisis Statistik ANOVA Pada reseptor 4AQ3 (E). .... 99

Lampiran 2 Hasil Analisis Statistik ANOVA Pada reseptor 2RL5.......... 100

 viii

DAFTAR SINGKATAN

BCL-2 : B-cell lymphoma 2

Bax : B-cell lymphoma-2-associated X protein
APAF-1 : apoptotic protease activating factor1
VEGFR-2 : Vascular endothelial growth factor receptor-2
MVD : Molegro Virtual Docker
HPV : Human Papiloma Virus
Ǻ : Amstrong
LD50 : Lethal Dose 50
BM : Berat Molekul
HBA : Hydrogen Bond Acceptors
HBD : Hydrogen Bond Donors
PSA : Polar Surface Activity
RMSD : Root Mean Square Deviation
Log P : logaritma Partisi
Cyt C : Cytochorme C
Torsion : jumlah ikatan antar atom yang dapat berotasi
 ix

ABSTRAK

Hariz, M. F. 2019. Uji Sitotoksik, Toksisitas dan Prediksi Sifat Fisikokimia

Senyawa Isoliquiritigenin dan Oxyresveratrol Terhadap Reseptor B-cell
lymphoma 2 (4AQ3) dan Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2
(2RL5) sebagai Terapi Kanker Serviks Secara In Silico

Pembimbing (I) Dr. Roihatul Muti’ah M.kes., Apt

(II) Yen Yen Ari Indrawijaya M.Farm.Klin., Apt

Isoliquiritigenin dan oxyresveratrol merupakan senyawa yang telah

dilaporkan memiliki aktivitas antikanker. Pertumbuhan sel kanker sering dikaitkan
dengan overekspresi B-cell lymphoma 2 (BCL-2) sehingga akan menyebabkan
kemampuan apoptosis menurun dan akan menimbulkan kanker. Pertumbuhan
kanker juga sering dikaitkan dengan overekspresi Vascular endothelial growth
factor receptor-2 (VEGFR-2) sebagai jalur proangiogenik untuk meningkatkan
tahap angiogenesis. Penelitian ini bertujuan untuk memprediksi sitotoksik,
toksisitas dan sifat fisikokimia dari senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol.

Prediksi sifat fisikokima mengacu pada hukum lima Lipinski serta dilihat
dari hasil absorbsi, distribusi, metabolisme dan ekskresi dengan menggunakan
pkCSM online tool Prediksi toksisitas senyawa dengan menggunakan Protox II
online tool dan prediksi interaksi ligan dengan reseptor menggunakan Molegro
Virtual Docker (MVD). Dilakukan validasi dengan parameter valid jika nilai
RMSD < 2. Protein reseptor kanker yang digunakan adalah BCL-2 (PDB:4AQ3)
dan VEGFR-2 (PDB:2RL5).

Hasil menunjukkan bahwa oxyresveratrol dan isoliquiritigenin memenuhi

hukum lima Lipinski, memiliki LD50 1560mg/kg dan 1048mg/kg. Kedua senyawa
tersebut memilki aktivitas terhadap reseptor 2RL5dan 4AQ3 (E). Reseptor 4AQ3
(E) dan 2RL5 dinyatakan valid dan memiliki nilai RMSD < 2. Senyawa
oxyreveratrol memiliki aktivitas lebih baik dibanding isoliquiritigenin karena
memiliki Rerank Score yang paling rendah. Rerank Score oxyresveratrol pada
2RL5 : -73.0413, 4AQ4: -87.9985). Aktivitas oxyresveratrol juga ditunjukan oleh
ikatan hidrogen pada asam amino yang aktif (2RL5 : Cys 919 pada 4AQ3 : Tyr 67).

Kata Kunci: Sitotoksik, Toksisitas, isoliquiritigenin, oxyresveratrol, BCL-2,

VEGFR-2, kanker serviks, MVD
 x

ABSTRACT

Hariz, M. F. 2019. In Silico Test of Cytotoxic Activity, Toxicity and Prediction

Physicochemical Properties of Isoliquiritigenin and Oxyresveratrol
Compounds to B-Cell Lymphoma 2 (4AQ3) Receptor and Vascular
Endothelial Growth Factor Receptor-2 (2RL5) as Cervical Cancer Therapy

Advisor (I) Dr. Roihatul Muti’ah M.kes., Apt

(II) Yen Yen Ari Indrawijaya M.Farm.Klin., Apt

Isoliquiritigenin and oxyresveratrol are compounds that have been reported

to have anticancer activities. Cancer cell growth is related with overexpression of
B-cell lymphoma 2 (BCL-2) so that it will cause the ability of apoptosis to decrease
and cause cancer. Cancer growth is also often related with overexpression Vascular
growth factor receptor-2 (VEGFR-2) as a proangiogenic pathway to improve the
angiogenesis stage. This research aimed to predict cytotoxic activity, toxicity and
physicochemical properties of the compounds isoliquiritigenin and oxyresveratrol

Prediction of physicochemical properties referred to Lipinski rules of five

and seen from the results of absorption, distribution, metabolism and excretion
using the pkCSM online tool. Toxicity prediction of compounds using Protox II
online tool and prediction interaction of ligan with receptors using Molegro Virtual
Docker (MVD). Validation is carried out with valid parameters if the value of
RMSD < 2. Proteins of cancer receptor used are BCL-2 (PDB: 4AQ3) and VEGFR-
2 (PDB: 2RL5).

In silico predictive results showed that oxyresveratrol and isoliquiritigenin

complied with Lipinski rules of five, 1560 mg/kg and 1048 mg/kg respectively.
Both of these compounds have activity against 2RL5 and 4AQ3(E) Receptors.
4AQ3 (E) and 2RL5 receptors are valid and have RMSD values <2. Oxyreveratrol
compounds have better activity than isoliquiritigenin because oxyresveratrol have
the lowest Rerank Score. Rerank Score oxyresveratrol on 2RL5: -73.0413, 4AQ4:
-87.9985. Oxyresveratrol activity is also shown by hydrogen bonds in active amino
acids (2RL5: Cys 919 in 4AQ3: Tyr 67).

Keyword: Cytotoxic, Toxicity, isoliquiritigenin, oxyresveratrol, BCL-2, VEGFR-

2, Cervical cancer, MVD
 ‫‪xi‬‬

‫مستخلص البحث‬

‫حارس‪ ،‬حممد فواز‪ .2019 .‬اختبار سمية الخاليا (‪ ،)Sitotoksik‬التأثير السمي (‪ )Toksisitas‬والتنبؤ بخصائص المركبات‬
‫الفيزيائية الكميائية إيسوليقويريتغين (‪ )Isoliquiritigenin‬و اوكسيريسفيراترول (‪ )Oxyresveratrol‬على مستقبل‬
‫خلية سرطان الغدد الليمفاوية )‪ (4AQ3‬ومستقبل عامل نمو بطانة األوعية الدموية‪ (2RL5) 2-‬كعالج لسرطان عنق‬
‫الرحم في السيليكون (‪)In silico‬‬

‫املشرف األول‪ :‬د‪ .‬رائحة املطيعة‪ ،‬املاجسترية‪ .‬املشرف‬

‫الثاني‪ :‬ين ين أري إندراوجيايا‪ ،‬املاجستري‪.‬‬

‫تعترب إيسوليقويريتغني (‪ )Isoliquiritigenin‬و اوكسرييسفرياترول (‪ )Oxyresveratrol‬مركيب كيميائي الذان مت‬

‫إبالغهما بامتالك نشاط السرطان‪ .‬منو اخلاليا السرطانية يف كثري من األحيان مرتبط باإلفراط يف إخراج خلية سرطان الغدد‬
‫الليمفاوية )‪ (Bcl-2‬مما يسبب اخنفاض قدرة االستماتة (‪ )apoptosis‬ومن و السرطان‪ .‬وغالبا ما يرتبط منو السرطان أيضا مع اإلفراط‬
‫يف إخراج عامل منو بطانة األوعية الدموية‪ 2-‬كوسيلة العوامل املؤكدة لألوعية لزيادة مرحله تولد األوعية (‪ .)angiogenesis‬يهدف‬
‫هذا البحث إىل التنبؤ بسمية اخلاليا‪ ،‬التأثري السمي وخصائص املركبات الفيزيائية الكيميائية من مركبة إيسوليقويريتغني‬
‫(‪ )Isoliquiritigenin‬و أوكسرييسفرياترول (‪.)Oxyresveratrol‬‬
‫أشار التنبؤ خبصائص املركبات الفيزيائية الكيميائية إىل القانون اخلمس لليبينسكي (‪ )Lipinski‬وينظر من نتائج‬
‫االستيعاب (‪ ،)absorbsi‬التوزيع (‪ ،)distribusi‬األيض (‪ )metabolisme‬واإلخراج (‪ )ekskresi‬باستخدام أداة التنبؤ‬
‫باجلزئيات الصغرية لألدوية والسمية (‪ )pkCSM online tool‬على اإلنرتنت‪ .‬و ّأما التنبؤ بسمية املركبة فاستخدم الباحث خمترب‬
‫افرتاضي للتنبؤ بسمية اجلزئيات الصغرية على اإلنرتنت (‪ )Protox II online tool‬والتنبؤ بالتفاعل بني الربيطة واملستقبل‬
‫باستخدام )‪ .Molegro Virtual Docker (MVD‬يتم التحقق من صحة النتائج باستخدام معامل صاحلة إذا كانت درجة‬
‫‪ RMSD‬أصغر من ‪ .2‬بروتينات مستقبل السرطان املستخدمة هي خلية سرطان الغدد الليمفاوية (‪ )PDB:4AQ3‬وعامل‬
‫منو بطانة األوعية الدموية‪.)PDB:2RL5( 2-‬‬
‫أظهرت نتائج هذا البحث أن اوكسرييسفرياترول (‪ )Oxyresveratrol‬و إيسوليقويريتغني (‪)Isoliquiritigenin‬‬
‫قد استوفا القانون اخلمس لليبينسكي‪ ،‬وهلما ‪1560 LD50‬ملغ‪/‬كغ و‪ 1048‬ملغ‪/‬كغ‪ .‬هتان املركبتان هلما نشاط على مستقبل‬
‫عامل منو بطانة األوعية الدموية‪ )2RL5( 2-‬وخلية سرطان الغدد الليمفاوية ))‪ .(4AQ3 (E‬وقد أثبتا بصحتهما ومتتلك درجة‬
‫‪ RMSD‬أصغر من ‪ .2‬مركبة أوكسرييفرياترول هلا نشاط أفضل من مركبة إيسوليقويريتغني‪ ،‬ألن هلا درجة الرتتيب أدين‪ .‬درجة الرتتيب‬
‫ألوكسرييسفرياترول على ‪ 2RL5‬هي ‪ ،–73.0413‬وعلى ‪ 4AQ4‬هي ‪ . –87.99985‬وأشارت أيضا إىل نشاط‬
‫أوكسرييسفرياترول من الرتابط اهليدروجيين يف األمحاض األمينية الناشطة (‪ 2RL5 : Cys 919‬على ‪.)4AQ3 : Tyr 67‬‬

‫الكلمات الرئيسية‪ :‬اختبار مسية اخلاليا (‪ ،)Sitotoksik‬التأثري السمي (‪ ،)Toksisitas‬إيسوليقويريتغني‬

‫(‪ ،)Isoliquiritigenin‬اوكسرييسفرياترول (‪ ،)Oxyresveratrol‬سرطان الغدد الليمفاوية )‪ ،(Bcl-2‬عامل منو بطانة‬
‫األوعية الدموية‪ ،2-‬سرطان عنق الرحم و‬
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Kanker serviks adalah tumor ganas yang tumbuh di dalam leher

rahim/serviks. Kanker ini akan mengenai epitel serviks dan akan menggandakan

dan berubah secara patologi anatomi (Prawihardjo, 2010). Kanker serviks dianggap

sebagai salah satu penyakit kanker yang paling mematikan selain kanker payudara

(Bhatla et al., 2018). Biasanya menyerang wanita berusia 35-55 tahun. 90%

penyebab kanker serviks berasal dari sel skuamosa yang melapisi serviks dan 10%

berasal dari sel kelenjar penghasil lendir pada saluran serviks yang menuju ke

dalam rahim (Amalia, 2009).

Kanker serviks didunia diperkirakan terdapat lebih dari 570.000 kasus baru.

Sekitar 90% kematian akibat kanker serviks terjadi dinegara berkembang dan

berpenghasilan menengah (Martel et al., 2017). Jumlah penderita kanker serviks di

Indonesia menempati urutan kedua terbanyak di Asia setelah Mongolia, yaitu

sebanyak 23,4 per 100.000 perempuan per tahun (Bruni et al., 2018). Di indonesia

setiap tahun terdapat lebih dari 15.000 kasus kanker serviks baru dan kurang lebih

8.000 kematian. Setiap hari sekitar 40-45 kasus baru ditemukan dan 20-25

perempuan meninggal dunia akibat penyakit kanker serviks (Ahmad, 2016).

Kanker serviks dapat dicegah dengan mengikuti program skrining sitologi

seperti tes pap smear, dan tes molekul HPV DNA. Pengobatan kanker yang paling

1
 2

banyak digunakan hingga saat ini meliputi kemoterapi, radiasi dan operasi

(Setiawan, 2015). Pengobatan kanker serviks dapat juga dilakukan dengan

kemoradioterapi (Liu, 2018). Salah satu agen kemoterapi yang sering digunakan

dalam penanganan kanker serviks adalah cisplatin (Dipiro et al., 2008). Resistensi

terhadap obat kemoterapi termasuk cisplatin telah menjadi masalah penting dalam

perawatan pasien kanker serviks (Wang et al., 2015).

Selain pengobatan dengan menggunakan kemoterapi terdapat pula

pencarian sumber obat baru yang berasal dari alam. Pemilihan obat dari bahan alam

dikarenakan penggunaan kemoterapi memiliki kelemahan yaitu dapat membunuh

sel normal (Wijaya dan Muchtaridi, 2017). Obat dari bahan alam juga memiliki efek

samping yang rendah dan aman (Katno dan Pramono, 2017). Sumber obat dari

bahan alam dapat diperoleh dengan memanfaatkan tumbuh-tumbuhan yang

terdapat di sekitar kita.

Terdapat banyak ayat di dalam Qur’an yang menjelaskan tentang tumbuhan

salah satunya Surah Al An’am ayat 99 Allah subhanahuwata’ala memerintahkan

hamba-Nya untuk memanfaatkan tanaman, termasuk diantaranya adalah tumbuh-

tumbuhan yang dapat diberdayakan sebagai salah satu tanda kekuasaan-Nya.

ۡ‫ََ َ ُل َ ۡ ََ ۡ َ ۡ َ ۡ ُ َ ٗ خ‬ َ ‫ٱلس َما ٓ ِء َما ٓ ٗء فَأ َ ۡخ َر ۡج‬

‫نز َل م َِن ذ‬ َ َ ‫ِي أ‬
ٓ ‫َو ُه َو ذٱَّل‬
‫ِضا ُّن ِر ُج‬ ِ ‫ك َش ٖء فأخرجنا مِنه خ‬ ِ ‫ات‬ ‫ب‬ ‫ن‬ ‫ِۦ‬ ‫ه‬ِ ‫ب‬ ‫ا‬ ‫ن‬
َ ‫َ ذ‬
‫ٱلز ۡي ُتون‬ ‫اب و‬ َ ‫ َو َج ذنَّٰت لم ِۡن أ َ ۡع‬ٞ‫ان َدان َِية‬
‫ن‬
ٞ َۡ َ ۡ َ ۡ
‫َتاك ِٗبا َوم َِن ٱنلذخ ِل مِن طلعِها ق ِنو‬ َ َ ‫م ِۡن ُه َح ٗلبا خم‬
ٖ ٖ
َّٰ َ ۡ ُ َّٰ َ ‫ُ ُ ٓ ْ َ َّٰ َ َ ٓ َ ٓ َ ۡ َ َ َ َ ۡ ٓ ذ‬ َ ۡ ‫ان ُم ۡشتَب ٗها َو َغ‬
َّٰ َ َ‫ۡي ُمت‬ َ ‫َ خذ‬
‫ت‬ ٖ ‫ٓأَلي‬ ‫م‬ ‫ِك‬ ‫ل‬ ‫ذ‬ ‫ِف‬ ِ ِ ‫شبِهٍۗ ٱنظروا إَِل ثم ِره ِۦ إِذا أثمر وينعِهِۚٓۦ إ‬
‫ن‬ ِ ‫وٱلرم‬
َ ۡ َ‫ل‬
٩٩ ‫ل ِق ۡو ٖم يُؤم ُِنون‬
 3

“Dan Dia-lah yang menurunkan air hujan dari langit lalu Kami tumbuhkan dari
air itu segala macam tumbuh-tumbuhan maka kami keluarkan dari tumbuh-
tumbuhan itu tanaman yang menghijau. Kami keluarkan dari tanaman yang
menghijau itu butir yang banyak; dan dari mayang kurma mengurai tangkai
tangkai yang menjulai, dan kebun-kebun anggur, dan (Kami kelurakan pula) zaitun
dan delima yang serupa dan yang tidak serupa. Perhatikanlah buahnya di waktu
pohonnya berbuah dan (perhatikan pula) kematangannya. Sesungguhnya pada
yang demikian itu terdapat tanda-tanda (Kekuasaan Allah) bagi orang-orang yang
beriman” (QS. AL-An’am : 99)

Berdasarkan ayat di atas bahwa Allah telah menumbuhkan tumbuh-

tumbuhan dengan air hujan tersebut pepohonan, seperti zaitun, kurma, anggur, dan

semua jenis pepohonan lainnya, juga buah-buahan dan sayuran (Aidh, 2008).

Menurut pada mufasir tumbuhan, tumbuh melalui beberapa fase hingga buah

tersebut matang. Pada fase kematangan, buah ataupun bagian tanaman yang lain

akan mengandung berbagai senyawa yang dihasilkan. Sehingga tanaman tersebut

dapat dimanfaatkan oleh makhluk hidup lainya (Shihab, 2002).

Bawang dayak (Eleutherine palmifolia (L.) Merr) merupakan salah satu

tanaman/bahan alam yang telah diuji efektivitasnya. Hasil penelitian sebelumnya

menunjukkan fraksi etil asetat Bawang dayak memiliki potensi sebagai anti kanker

terhadap sel hela dengan nilai IC50 sebesar 44.335 µg/ml. Senyawa mayor yang

ditemukan pada penelitian tersebut adalah senyawa isoliquiritigenin dari golongan

flavonoid dan senyawa oxyresveratrol dari golongan polifenol (Minggarwati.,

2017).

Isoliquiritigenin diketahui mampu dalam menghambat kanker serviks

dengan cara menginduksi Caspase-Depentent Apoptosis melalui penurunan

regulasi dari ekspresi HPV16 E6 dengan jalur penghambatan melalui p53 dan Bcl-

2. Penelitian Hirchaud (2013) menunjukkan efek sitotoksik ini berlangsung pada

 4

fase G2/M namun pada konsentrasi yang berbeda efek sitotoksik ditunjukkan pada

fase G0/G1. Pengaruh isoliquiritigenin pada ekspresi protein ditunjukkan pada

ekspresi apoptosis protein B-cell lymphoma-2-associated X protein (Bax) yang

meningkat sedangkan BCL-2 menurun. Selain itu isoliquiritigenin juga memiliki

aktivitas induksi pada kerusakan DNA (Botta et al., 2005).

Penelitian tentang senyawa oxyresveratrol terhadap kanker serviks hingga

saat ini belum ditemukan. Tetapi penelitian andrabi et al (2004) telah menunjukan

efek anti-apoptosis senyawa oxyresveratrol dalam pencegahan cytochrome-c (cyt-

c) dari mitocondria, berkurangnya caspase-3 dan mengurangi fragmentasi DNA

apoptosis.

Pemilihan reseptor B-cell lymphoma 2 karena reseptor Bcl-2 dalam proses

apoptosis adalah sebagai anti apoptosis. Ketika jumlah protein Bcl-2 berlebih akan

menyebabkan kemampuan apoptosis menurun dan akan menimbulkan kanker

melalui jalur mitokondria. Pemilihan reseptor dengan jalur Vascular endothelial

growth factor receptor-2 karena VEGF/VEGFR2 dianggap sebagai jalur

proangiogenik paling penting untuk meningkatkan semua tahap angiogenesis

termasuk permeabilitas vaskular, kelangsungan hidup sel endotelial, proliferasi,

migrasi atau invasi ke jaringan sekitar, dan pembentukan pembuluh darah kapiler

(Hoi et al., 2014). Apabila jalur VEGFR-2 dihambat tidak akan terbentuk pembuluh

darah baru yang berfungsi pada kelangsungan hidup sel kanker. Kode PDB protein

dari B-cell lymphoma 2 adalah 4AQ3 dengan ligan phenylacylsulfonamide inhibitor

dan kode PDB Vascular endothelial growth factor receptor-2 adalah 2RL5 dengan

ligan 2,3-dihydro-1,4-benzoxazine inhibitor

 5

Kemajuan teknologi komputer pada saat ini dapat menjadi salah satu cara

untuk dilakukan penelitian dan penemuan obat baru. Penemuan obat baru dengan

metode komputer atau in silico merupakan metode yang baru dan tidak ada

dizaman nabi namun Allah subhanahuwata’ala memerintahkan untuk selalu

bepikir dan berilmu sehingga dapat memahami ilmu pengetahuan baru. Salah

satunya pada Qur’an Surah Al Ankabut ayat 43:

َ ُ َّٰ َ ۡ ‫َ َ َ ۡ ُ َ ٓ ذ‬ ‫ذ‬ َ ُ ۡ َ ُ َّٰ َ ۡ َ ۡ َ ۡ َ

ِۖ ِ ‫ِضبها ل ِلن‬
٤٣ ‫اس وما يعقِلها إَِّل ٱلعل ِمون‬ ِ ‫وت ِلك ٱۡلمثل ن‬
“Dan perumpamaan-perumpamaan ini Kami buatkan untuk manusia; dan tiada
yang memahaminya kecuali orang-orang yang berilmu.” (QS. Al Ankabut : 43)
Makna dari ayat ini menurut Tafsir al-Jalalain adalah (Dan perumpamaan-

perumpamaan ini) yang ada dalam Alquran (Kami buatkan) Kami jadikan (untuk

manusia; dan tiada yang memahaminya) yang mengerti akan perumpamaan-

perumpamaan ini (kecuali orang-orang yang berilmu) yakni, orang-orang yang

berpikir. Ilmu pengetahuan dan teknologi dalam islam dipandang sebagai

kebutuhan manusia dan sebagai bagian pelaksanaan kewajiban manusia sebagai

makhluk yang berakal (Muslimin, 2014)

Ilmu pengetahuan dan teknologi komputasi yang semakin maju dan

berkembang merupakan peluang untuk mengembangkan simulasi dan kalkulasi

dalam merancang obat. Metode yang digunakan pada suatu kondisi ke dalam

simulasi komputer dengan menggunakan program tertentu disebut metode in silico.

Metode in silico dapat digunakan dalam memprediksi toksisitas, sifat fisikokimia,

sifat farmakokinetik dan molecular docking (Hardjono, 2016).

Molecular docking adalah metode dalam struktur biologi molekuler dan

penemuan obat berdasarkan struktur. Molecular docking dapat digunakan untuk

 6

mengetahui interaksi antara suatu ligan (senyawa) dengan molekul target yaitu

reseptor, enzim dan protein. Interaksi ligan (senyawa) dengan reseptor dapat

divisualisasikan dengan metode komputasi dan dapat digunakan untuk mengetahui

farmakofor dari suatu senyawa (Ekins et al., 2007). Untuk melakukan simulasi

molecular docking dibutuhkan aplikasi docking. Molegro Virtual Docker (MVD)

digunakan karena memiliki kemampuan yang terintegrasi dalam memperlajari,

memprediksi dan menampilkan interaksi ligand dengan makromolekul (Manual

Molegro Virtual Docker, 2013). Tujuan docking protein-ligan adalah untuk

memahami dan memprediksi kemungkinan ikatan molekul yang ada dan

memprediksi afinitas suatu ikatan (Kartasasmita et al., 2010).

Penelitian ini penting untuk dilakukan karena dalam pengembangan obat

kanker diperlukan untuk memprediksi aktivitas sitotoksik, toksisitas dan sifat

fisikokimia. Obat berdasarkan bahan alam diharapkan dapat menjadi salah satu

solusi dalam pemilihan obat kanker. Pengembangan obat kanker berdasarkan bahan

alam dikarenakan bahan alam tidak memiliki efek samping seperti obat kemoterapi

yang dapat membunuh sel normal. Uji yang dilakukan pada penelitian ini adalah uji

sitotoksik, uji toksisitas dan prediksi sifat fisikokimia senyawa isoliquiritigenin dan

oxyresveratrol. Uji aktivitas sitotoksik ditunjukkan dengan ikatan protein-ligan

yang terjadi, serta afinitas dan interaksi dengan asam amino antara senyawa dengan

reseptor 4AQ3 dan 2RL5. Keamanan dari suatu senyawa yang masuk di dalam

tubuh akan ditunjukkan dengan LD50, skin sensitization, Ames toxicity dan

Hepatotoxicity secara in silico. Kemudahan senyawa untuk di absorbsi dan

permeabilitasnya ditunjukkan dengan terpenuhinya hukum lima Lipinski.

 7

1.2 Rumusan Masalah

Berdasaran latar belakang di atas maka rumusan masalah dalam penelitian

ini adalah:

1. Bagaimana sifat fisikokimia senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol

secara in silico?

2. Bagaimana aktivitas sitotoksik senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol

yang ditunjukkan dengan ikatan dengan reseptor B-cell lymphoma 2 (4AQ3)

dan Vascular endothelial growth factor receptor-2 (2RL5) secara in silico?

3. Berapa toksisitas senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol secara in silico?

1.3 Tujuan

Berdasarkan rumusan masalah di atas, maka tujuan dari penelitian ini

adalah:

1. Menguji bagaimana sifat fisikokimia senyawa isoliquiritigenin dan

oxyresveratrol secara in silico.

2. Menguji aktivitas sitotoksik senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol

sebagai obat kanker serviks terhadap reseptor B-cell lymphoma 2 (4AQ3) dan

Vascular endothelial growth factor receptor-2 (2RL5) secara in silico.

3. Menguji berapa toksisitas senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol secara

in silico.
 8

1.4 Manfaat Penelitian

Manfaat penelitian ini adalah memberikan informasi dan ilmu tentang

aktivitas sitotoksik, toksisitas dan sifat fisiokimia senyawa isoliquiritigenin dan

oxyresveratrol sebagai anti kanker melalui B-cell lymphoma 2 (4AQ3) dan Vascular

endothelial growth factor receptor-2 (2RL5).

1.5 Batasan Masalah

Batasan Masalah pada penelitian ini adalah

1. Ligan (senyawa) yang digunakan adalah isoliquiritigenin dan oxyresveratrol.

2. Protein target yang digunakan adalah B-cell lymphoma 2 (4AQ3) dan Vascular

endothelial growth factor receptor-2 (2RL5).

3. Uji in silico antara ligan (senyawa) isoliquiritigenin dan oxyresveratrol dengan

reseptor target menggunakan aplikasi Molegro Virtual Docker 6.0.

4. Parameter molecular docking berupa Rerank Score, nilai RMSD, ikatan

hidrogen, ikatan sterik, jarak ikatan.

5. Parameter kelas toksisitas berdasarkan LD50, skin sensitization, Ames toxicity

dan Hepatotoxicity menggunakan Protox online tool secara in silico

6. Parameter prediksi sifat fisikokimia berupa berat molekul (BM), logaritma

koefisien partisi oktanol/air (Log P), jumlah ikatan antar atom yang dapat

berotasi (Torsion), Hydrogen Bond Acceptors (HBA), Hydrogen Bond Donors

(HBD) dan Polar Surface Activity (PSA) menggunakan aplikasi pkCMS online

tool.
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Metode In silico (Molecular Docking) dalam Perspektif Islam

Metode in silico merupakan metode yang sekarang sering digunakan

sebagai penemuan dan pengembangan suatu obat. Metode ini termasuk cara untuk

mengidentifikasi senyawa baru dengan cepat dan murah (GoLDenhuys, 2006).

Informasi kimia pada metode in silico dapat dengan mudah diintegrasikan ke dalam

proses penemuan obat yang modern (Bleicher et al., 2003).

Kemajuan teknologi komputer pada saat ini dapat menjadi salah satu cara

untuk dilakukan penelitian dan penemuan obat baru. Penemuan obat baru dengan

metode komputer atau in silico merupakan metode yang tidak ada dizaman nabi

namun Allah subhanahuwata’ala memerintahkan untuk selalu bepikir dan berilmu

sehingga dapat memahami ilmu pengetahuan baru. Salah satunya pada Qur’an

Surah Al Ankabut ayat 43:

َ ُ َّٰ َ ۡ ‫َ َ َ ۡ ُ َ ٓ ذ‬ ‫ذ‬ َ ُ ۡ َ ُ َّٰ َ ۡ َ ۡ َ ۡ َ

ِۖ ِ ‫ِضبها ل ِلن‬
٤٣ ‫اس وما يعقِلها إَِّل ٱلعل ِمون‬ ِ ‫وت ِلك ٱۡلمثل ن‬
“Dan perumpamaan-perumpamaan ini Kami buatkan untuk manusia; dan tiada
yang memahaminya kecuali orang-orang yang berilmu.” (QS. Al Ankabut : 43)

Makna dari ayat ini menurut Tafsir al-Jalalain adalah (Dan perumpamaan-

perumpamaan ini) yang ada dalam Alquran (Kami buatkan) Kami jadikan (untuk

manusia; dan tiada yang memahaminya) yang mengerti akan perumpamaan-

perumpamaan ini (kecuali orang-orang yang berilmu) yakni, orang-orang yang

berpikir. Ilmu pengetahuan dan teknologi dalam islam dipandang sebagai

9
 10

kebutuhan manusia dan sebagai bagian pelaksanaan kewajiban manusia sebagai

makhluk yang berakal (Muslimin, 2014)

Metode yang digunakan pada suatu kondisi ke dalam simulasi komputer

dengan menggunakan program tertentu disebut metode in silico. (Hardjono, 2016).

Salah satu metode in silico adalah Simulasi Docking yang menunjukkan suatu

proses yang terjadi oleh dua molekul secara bersamaan dalam ruang tiga dimensi.

Moleculer docking telah memberikan kontribusi yang sangat penting dalam proses

penemuan obat. Merancang dan mengembangkan obat baru baik yang berasal dari

bahan alam maupun hasil sintesis, memerlukan teknik untuk menentukan dan

memprediksi sifat fisika kimia molekul obat dan mengetahui gambaran senyawa

dalam berinteraksi dengan reseptor (schlick, 2010).

2.2 Pemodelan Molekul

Pemodelan molekul (Molecular docking) merupakan suatu cabang ilmu

kimia untuk mengetahui dan evaluasi sifat sifat molekul dan struktur menggunakan

kimia komputasi modern dan grafik molekul dengan teknik visualisasi tiga dimensi

(Siswandono, 2016). Molecular docking banyak digunakan dalam bidang kimia dan

biologi komputasional untuk mempelajari sifat molekul dari sistem yang kecil

(obat) hingga molekul biologis yang besar (reseptor), serta proses interaksi aksi

obat pada tingkat molekul dan atom melalui simulasi proses interaksi obat-reseptor

(docking) dengan bantuan komputer (Hinchliffe, 2008). dan untuk memprediksikan

konformasi protein atau molekul asam nukleat (DNA atau RNA), dan ligan. Dengan

kata lain, molekuler docking digunakan untuk memprediksikan struktur

 11

antarmolekul yang kompleks terbentuk antara dua atau lebih konstituen molekul

(Dias, 2008).

Pengaplikasian pemodelan molekul dapat dilakukan menggunakan

perangkat lunak berupa aplikasi. Aplikasi yang sering digunakan pada basis

windows antara lain: Autodock, ArgusLab, LeadIt, Molegro Virtual Docker,

ChemOffice Ultra, Hyperchem, Accelrys Discovery Studio, Molecular Operating

Environment (MOE), Maestro Schordinger, SYBYL, dll. (Chikhi & bensegueni,

2008). Pemodelan molekul ini membutuhkan biaya yang lebih ringan dan waktu

yang lebih efisien dibandingkan dengan menggunakan metode secara farmakologi

(Tang & Marshall, 2011).

Metode ini memiliki dua cara dalam menganalisis aktivitas biologi

molekuler dalam perancangan obat, yaitu adalah rancangan obat berbasis ligan

apabila telah diketahui struktur molekul aktif beserta reseptornya (ligand based

drug design) yang dapat disebut rancangan obat secara tidak langsung, dan yang

kedua adalah rancangan berbasis struktur apabila belum diketahui struktur molekul

aktifnya dan telah didapatkan reseptor target yang di inginkan (structure based drug

design) atau rancangan obat secara langsung (Siswandono, 2016)

Ligand based drug design merupakan prediksi ikatan pada protein target

dengan menggunakan metode komputasi yang struktur 3 dimensi target yang telah

diketahui. Tujuan utama dari ligand based drug design adalah mencari gugus gugus

yang bertanggung jawab terhadap aktivitas (farmakofor). Gugus yang bertanggung

jawab terhadap aktivitas dapat menurunkan aktivitas, serta memiliki sifat-sifat

lipofilik, elektronik, dan sterik/geometrik dari gugus (Siswandono, 2016).

 12

Structure based drug design dilakukan apabila struktur tiga dimensi dari

protein target tidak ada ataupun apabila diharuskan untuk mencari kesimpulan

hubungan struktur aktivitas. Methode ini menggunakan model farmakofor untuk

menemukan kandidat obat. Pada prinsipnya metode ini adalah merancang molekul-

molekul yang dapat masuk dalam lubang (cavity) pada sisi reseptor dan dapat

berinteraksi dengan reseptor (target biologis) secara serasi (docking) (Siswandono,

2016).

2.3 Molegro Virtual Docker

Molegro Virtual Docker (MVD) adalah aplikasi yang terintegrasi untuk

mempelajari dan memprediksi interaksi ligand dengan makromolekul. Identifikasi

ikatan ligand dilakukan dengan evaluasi secara berulang ulang dan memperkirakan

energi ikatanya dengan suatu makromolekul. (Manual Molegro Virtual Docker,

2013).

Program Molegro Virtual Docker (MVD) ini digunakan karena ketepatan

akurasi docking MVD terbukti lebih baik dari program docking yang sejenisnya

dengan presentase MVD 87%, Glide 82%, Surflex 75%, Flex 58% (Thomson and

Christensen, 2006).

2.4 B-cell lymphoma 2

B-cell lymphoma 2 adalah salah satu agen anti-apoptosis yang berperan

dalam apoptosis sel kanker serviks. Peran dari Bcl-2 pada pembentukan sel kanker

serviks adalah ketika jumlah protein Bcl-2 berlebih akan menyebabkan kemampuan

apoptosis menurun dan akan menimbulkan kanker. Overekspresi Bcl-2 dapat

 13

menghambat pelepasan sitokrom-c dari mitokondria. Sitokrom-c tidak akan

mengikat apoptotic protease activating factor 1 (Apaf-1), kemudian tidak terbentuk

komplek teraktivasi dari (d)ATP, sehingga caspase-3 tidak teraktivasi dan akan

menyebabkan penghambatan apoptosis dan menimbulkan kanker (Weyhenmayer,

dkk., 2012).

Mekanisme Bcl-2 dalam proses apoptosis adalah sebagai anti apoptosis

yang mengontrol keluarnya cytochrome-c dari mitokondria. Bcl-2 memiliki 2

keluarga protein yaitu B-cell lymphoma 2 antagonist/ killer (BAK) dan B-cell

lymphoma 2-associated X protein (BAX) yang bertanggung jawab langsung dalam

melewati membran terluar mitokondria. Setelah itu terbentuk cytochrome-c (cyt-c),

smac dan protein intramembran mitokondria lainya yang kemudian dilepas dan

diaktivasi oleh downstream caspases sehingga terjadi apoptosis (Gambar 2.1) (Dai

et al., 2016).

Gambar.2.1 Mekanisme apoptosis melalui jalur mitokondria dan kematian

reseptor (Dai et al., 2016).
 14

Kode protein dari reseptor B-cell lymphoma 2 pada protein data bank

(PDB) yaitu 4AQ3. Penelitain Mala et al (2015) telah menggunakan reseptor B-

cell lymphoma 2 sebagai agen anti-apoptosis dengan kode protein 4AQ3. 4AQ3

digunakan karena memilki ligand asli phenylacylsulfonamide inhibitor dengan

nama IUPAC N,N-dibutyl-4-chloranyl-1-[2-(3,4-dihydro-1H isoquinolin-2-

ylcarbonyl) 4 - [ (7-iodanylnaphthalen-2yl) sulfonylcarbamoyl] phenyl]-5-methyl-

pyrazole-3 carboxamide. phenylacylsulfonamide inhibitor pada penelitian Perez et

al (2012) merupakan senyawa yang telah dilakukan penelitian dan memiliki ikatan

afinitas terhadap reseptor BCL-2/BCL-XL ganda. Selain itu senyawa

phenylacylsulfonamide inhibitor terbukti menginduksi penanda marker dari dari

apoptosis (seperti Pelepasan cytocrome C, dan oligomerisasi BAK) di mitokondria.

Asam amino yang berperan pada 4AQ3 adalah Arg 105, Leu 96, Phe 157, Tyr161,

Val 92, Tyr 67, Asp 70, Met 74, Arg 66, Phe 71 and Phe 63 (Gambar 2.2) (Mala et

al., 2015).
 15

Gambar 2.2 Ikatan asam amino yang berperan antara 4AQ3 dengan
phenylacylsulfonamide inhibitor (perez et al., 2012).

2.5 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor -2

Vascular endothelial growth factor receptor-2 (VEGFR-2) merupakan

salah satu reseptor yang berikatan antara Vascular endothelial growth factor

(VEGF) dengan reseptor thyrosin-kinase. VEGF memiliki peran penting yaitu

menstimulasi endotelial cell survival pada pembuluh darah yang baru terbentuk.

VEGF juga merupakan stimulator kuat untuk proliferasi sel endotel, serta produksi

dan migrasi aktivator plasminogen yang dibutuhkan untuk degradasi matriks

ekstraselular. (Keman, 2014)

Perkembangan kanker sering dikaitkan dengan ekspresi VEGF, dan jalur

sinyal VEGF/VEGFR-2 yang pada umumnya dianggap sebagai mediator utama

tumor angiogenesis, sehingga VEGF/VEGFR-2 merupakan sistem target untuk

 16

pengobatan pada kanker. VEGFR telah divalidasi secara klinis dan banyak

digunakan untuk terapi kanker. VEGF/VEGFR2 dianggap sebagai jalur

proangiogenik paling penting untuk meningkatkan semua tahap angiogenesis

termasuk permeabilitas vaskular, kelangsungan hidup sel endotelial, proliferasi,

migrasi atau invasi ke jaringan sekitar, dan pembentukan pembuluh darah kapiler.

(Hoi et al., 2014).

VEGFR-2 memiliki peran penting dalam perkembangan kanker serviks.

Pada epitel serviks normal VEGFR-2 tidak terdeteksi, tetapi positif pada neoplasia

serviks intraepitel dan kanker serviks sel skuamosa (Jach et al. 2010). Hal ini

didukung dengan adanya penelitian dari Longatto-Filho et al (2009) yang

menunjukkan bahwa pada kasus kanker serviks pengamatan VEGFR-2

menunjukan hasil positif dalam 22 kasus dari 30 kasus (73.3%).

Mekanisme molekular dari VEGFR-2 yaitu dengan mengendalikan

ekspresinya pada proses angiogenesis dan karsinogenis. Regulasi dari ekpresi

VEGFR-2 melibatkan serangkaian mekanisme yang kompleks diantaranya

perubahan epigenik, regulasi transkripsi, cellular localizaiton dan trafficking,

pengikatan ligan, aktivitas co-aktivator, ekspresi molekul adhesi, jalur turunan

pensinyalan constitutive-embryonic dan regulasi cytokine growth factor (Gambar

2.3) (Guo et al., 2012).

 17

Gambar 2.3 Mekanisme jalur pensinyalan Vascular endothelial growth factor

receptor-2 (Guo et al., 2012).

Senyawa isoliquiritigenin pada penelitian Wang et al (2013) telah berhasil

dalam menghambat sel kanker payudara dengan melalui VEGFR-2. Penghambatan

senyawa isoliquiritigenin dilaporkan melalui jalur pensinyalan cascade pada sel

endothel. Hasil penelitian menunjukkan bahwa isoliquiritigenin secara signifikan

dapat menghambat aktivitas kinase VEGFR-2, dengan dosis IC50 100 nM.

Kode protein dari VEGFR-2 pada protein data bank (PDB) yaitu 2RL5.

2RL5 dipilih dan digunakan karena memilki native ligan 2,3-dihydro-1,4-

benzoxazine dengan nama IUPAC n-(4-chlorophenyl)-7-[(6,7-dimethoxyquinolin-

4-yl)oxy]-2,3-dihydro-1,4-benzoxazine-4-carboxamide. Pada penelitian La et al

(2008) melaporkan 2,3-dihydro-1,4-benzoxazine telah terbukti menjadi inhibitor

yang efektif dari angiogenesis. Penelitian Meng (2013) telah menggunakan protein

2RL5 dengan menggunakan ligan sorafenib. Sorafenib merupakan salah satu

molekul yang dapat menghambat berbagai reseptor tyrosin kinase salah satunya
 18

adalah VEGFR-2 (Seno, dkk., 2011). Keseluruhan asam amino yang berperan

adalah Asp1046, Cys919, Glu885, Lys868, Leu840, Val848, Ala866, Ile888,

Leu889, Val899, Phe918, Tyr916, and Leu1035. Namun asam amino yang

berikatan pada ligan sorafenib hanya Asp1046, Cys919 dan Glu885. (gambar 2.4)

(Meng, 2013).

Gambar 2.4 Ikatan asam amino yang berperan antara 2RL5 dengan
sorafenib (Meng, 2013).

2.6 Interaksi Obat-Reseptor

Interaksi obat-reseptor sangat tergantung pada sifat-sifat geometri,

informasi dan elektronik dari molekul obat dan reseptor. Perkembangan teori kimia

dan metode komputasional modern yang dipadukan dengan teknologi komputer

yang canggih, mampu mensimulasikan proses interaksi obat-reseptor. Prinsip

dasarnya adalah mengekspresikan sifat sifat geometri, konformasi dan elektronik

dari molekul obat dan reseptor menjadi fungsi energi, dan dengan meminimalkan

fungsi energi akan didapat dalam bentuk geometri yang optimal dan paling stabil,
 19

yang mencerminkan kekuatan ikatan obat-reseptor. Kekuatan ikatan obat-reseptor

inilah yang dapat menunjukan aktivitas biologis obat, yang dinyatakan dengan

Rerank Score (RS).

Nilai Root Mean Square Deviation (RMSD) adalah metode validasi yang

dapat digunakan dalam proses docking (Marcou dan Rognan, 2007). Nilai RMSD

<2Å menunjukan keakuratan perhitungan dan kemiripan dua buah struktur

(Ferwadi dkk, 2017). Kemiripan tersebut diukur bedasarkan perbedaan jarak atom

sejenis (Ruswanto, 2015). Struktur yang memiliki energi paling rendah merupakan

strutur yang sangat mirip dengan struktur hasil docking (Prasojo et al, 2010).

Interaksi ligan-reseptor melibatkan ikatan-ikatan kimia, seperti: Ikata-ikatan

kovalen, hidrogen, van der waals, hidrofobik, ionik(elektrostatik), dipol-dipol dan

transfer muatan (Young, 2009).

2.6.1 Ikatan Kovalen

Ikatan kovalen terbentuk bila ada dua atom saling menggunakan sepasang

elektron secara bersama-sama. Ikatan kovalen merupakan ikatan kimia yang paling

kuat. Dengan ikatan yang kuat ini pada suhu normal ikatan bersifat ireversibel dan

hanya dapat dipecah bila ada pengaruh katalisator enzim tertentu. Interaksi obat-

reseptor melalui ikatan kovalen menghasilkan kompleks yang cukup stabil, dan

sifat ini dapat digunakan untuk tujuan pengobatan tertentu. (Siswandono, 2016).

2.6.2 Ikatan Ionik

Ikatan ionik adalah ikatan yang dihasilkan oleh daya tarik menarik

elektrostatik antara ion-ion yang muatanya berlawanan. Kekuatan tarik menarik

 20

akan makin berkurang bila jarak antar ion makin jauh dan pengurangan tersebut

berbanding terbalik dengan jaraknya (Siswandono, 2016).

2.6.3 Interaksi Ion-dipol dan Dipol-dipol

Adanya perbedaan keelektronegatifan atom C dengan atom yang lain,

seperti O dan N, akan membentuk distribusi elektron tidak simetrik atau dipol, yang

mampu membentuk ikatan dengan ion atau dipol yang lain, baik yang mempunyai

daerah kerapatan elektron tinggi maupun yang rendah. Gugus karbonil, ester,

amida, eter, dan nitril merupakan gugus-gugus yang memiliki fungsi dipolar

(Siswandono, 2016).

2.6.4 Ikatan hidrogen

Ikatan hidrogen adalah ikatan yang terjadi antara hidrogen (atom H) dengan

atom yang bersifat elektronegatif dan mempunyai sepasang elektron bebas dengan

oktet lengkap, seperti F,O,N (Bruice, 2003). Ikatan hidrogen yang kekurangan

elektron pada umumnya akan terikat melalui ikatan kovalen dengan atom yang

bersifat elektronegatif, seperti nitrogen dan oksigen (Siswandono, 2016). Ikatan

hidrogen paling kuat ketika molekul berada dalam orientasi interaksi elektrostatik

yang maksimum. Keadaan ini terjadi ketika atom hidrogen dan dua atom lain yang

berikatan berada dalam satu garis, dimana atom akseptor berada segaris dengan

ikatan kovalen antara atom donor dan atom H (Nelson & Cox, 2001). Dalam sistem

biologis, baik donor maupun akseptor biasanya merupakan atom nitrogen atau

oksigen, khususnya atom dalam gugus amina (-NH2) dan hidroksil (-OH). Karena

ikatan antara N-H dan O-H bersifat polar, atom H-nya dapat berikatan hidrogen

dengan atom akseptor (Lodish et al., 2000).

 21

2.6.5 Ikatan Van der Waal’s

Ikatan Van der Waal’s merupakan kekuatan tarik menarik antar molekul

atau atom yang tidak bermuatan, dan letaknya berdekatan. Ikatan ini terjadi karena

sifat kepolaran molekul atom (siswandono, 2016). Ketika dua atom mendekat satu

sama lain, kedua atom ini membentuk gaya tarik yang lemah dan nonspesifik yang

menyebabkan interaksi van der Waals. Kekuatan interaksi van der Waals berkurang

drastis ketika jarak molekul meningkat sehingga interaksi ini hanya terbentuk

ketika atom-atom terletak dekat. Jika atom terletak terlalu dekat, maka atom-atom

tersebut saling tolak menolak karena adanya muatan negatif pada kulit elektron

terluar (Lodish et al., 2000).

2.6.6 Ikatan hidrofobik

Ikatan hidrofobik adalah Molekul nonpolar tidak mengandung ion,

memiliki momen dipol atau terhidrasi. Karena molekul tersebut tak larut atau

hampir tak larut dalam air (Lodish, et al., 2000). Ikatan ini merupakan salah satu

kekuatan penting pada proses penggabungan daerah non polar molekul obat dengan

daerah nonpolar reseptor biologis. Daerah non polar molekul obat yang tidak larut

dalam air dan molekul-molekul air disekelilingnya, akan bergabung melalui ikatan

hidrogen membentuk struktur quasi-crystaline (icebergs) (Siswandono, 2016).

2.6.7 Transfer Muatan

Kompleks yang terbentuk antara dua molekul melalui ikatan hidrogen

merupakan kasus khusus dari fenomena umum kompleks donor-aseptor, yang

distabilkan melalui daya tarik menarik elektrostatik antara molekul donor elektron

dan molekul aseptor elektron. Kompleks transfer muatan dikelompokkan menjadi

 22

dua yaitu senyawa yang berfungsi sebagai donor elektron dan sebagai aseptor

elektron. Makromolekul sistem biologis yang bekerja sebagai komponen reseptor

mempunyai gugus protein atau asam amino yang dapat membentu omplek melalui

transfer muatan yaitu a. Sebagai donor elektron, b. Sebagai aseptor eletron c.

Sebagai donor dan aseptor elektron (Siswandono, 2016).

2.7 Hukum lima Lipinski

Lipinski et al.(1997) telah menganalisis 2.245 obat dari data dasar WorLD

Drugs Index. Hasil analisis menyimpulkan bahwa senyawa akan sulit diabsorpsi

dan permeabilitasnya rendah apabila mempunyai: berat molekulnya lebih besar

500, nilai log koefisien partisi oktanol/air (log P) lebih besar +5; ikatan-H donor

(HBD), yang dinyatakan dengan jumlah gugus O-H dan N-H, lebih besar 5; dan

ikatan-H aseptor (HBA), yang dinyatakan dengan jumlah atom O dan N, lebih besar

10. Analisis tersebut dikenal sebagai hukum lima Lipinski karena semua nilai

merupakan kelipatan dari angka lima. Analisa dengan menggunakan hukum lima

Lipinski dapat digunakan untuk membuktikan bahwa senyawa yang diuji mudah

diabsorbsi dan mempunyai permeabilitas yang baik. Prediksi sifat fisikokimia

seperti: berat molekul (BM), logaritma koefisien partisi oktanol/air (Log P), jumlah

ikatan antar atom yang dapat berotasi (Torsion); Hydrogen Bond Acceptors (HBA),

Hydrogen Bond Donors (HBD), dan Polar Surface Activity (PSA) dilakukan

dengan menggunakan pkCSM online tool (Gambar 2.5) (Kesuma dkk., 2018).
 23

Gambar 2.5 Alur aplikasi pkCSM tool (Pires et al., 2015)

2.8 Toksisitas

Uji toksisitas dilakukan untuk mendapatkan informasi atau data tentang

toksisitas suatu bahan (kimia) pada hewan uji. Secara umum uji toksisitas dapat

dikelompokkan menjadi uji toksisitas jangka pendek/akut, dan uji toksisitas jangka

panjang (Donatus, 2005). Uji Ames Toxicity adalah metode yang digunakan secara

luas untuk menilai potensi mutagenik senyawa dengan menggunakan bakteri.

(Kesuma et al., 2018). LD50 digunakan untuk menilai potensi toksisitas jangka

pendek suatu bahan. LD50 ditetapkan sebagai tanda statistik

pada pemberian suatu bahan sebagai dosis tunggal yang dapat menyebabkan

kematian 50% hewan uji (Priyanto, 2010). Uji toksisitas secara eksperimental

laboratorium membutuhkan tenaga, fasilitas, waktu dan biaya mahal. Sebaliknya

prediksi toksisitas dari model Hubungan Kuantitatif Struktur-Aktivitas (HKSA)

telah digunakan untuk mendukung hipotesis dan memprioritaskan studi

eksperimental lebih lanjut (Djalil dkk, 2012)

 24

Klasifikasi kelas toksisitas senyawa didasarkan pada Globally Harmonized

System (GHS), kelas toksisitas antara lain adalah kelas I: fatal jika tertelan (LD50 ≤

5 mg/kg), kelas II : fatal jika tertelan (5 <LD50 ≤ 50 mg/kg), kelas III: beracun jika

tertelan (50 <LD50 ≤ 300 mg/kg), kelas IV: berbahaya jika tertelan (300 <LD50 ≤

2000 mg/kg), kelas V: bisa berbahaya jika tertelan (2000 <LD50 ≤ 5000 mg/kg),

kelas VI: tidak beracun (LD50> 5000 mg/kg) (El-din et al., 2016)

2.9 Kanker

Kanker adalah suatu penyakit yang terjadi akibat pertumbuhan sel pada

jaringan tubuh secara terus-menerus dan tidak terkendali (Dipiro et al., 2008).

Kanker merupakan penyakit yang heterogen dan kompleks yang disebabkan oleh

akumulasi lesi genetik, yang meningkatkan aktivitas gen pengatur sehingga

mendorong proliferasi sel dan menurunkan aktivitas protein yang biasanya

menghambat. (Loddo et al., 2009).

Gambar 2.6 Siklus sel kanker (Mycek et al., 2001).

Siklus sel memiliki empat fase berurutan. Fase yang paling penting adalah

fase S, ketika terjadi replikasi DNA, dan fase M ketika sel membelah menjadi dua.
 25

Interfase terdiri dari fese S, G1 dan G2. G1 memiliki fungsi yaitu memproduksi

enzim yang diperlukan untuk DNA. G2 adalah fase setelah fase S ketika sel

mempersiapkan untuk masuk pada fase mitosis (Murray dan Hunt, 1993). G0

adalah fase istirahat, Sel pada fase G0 masih potensial untuk berproliferasi yang

disebut sel klonogenik atau sel induk (steam sel). Jadi yang dapat menambah jumlah

sel kanker adalah sel yang dalam siklus proliferasi dan dalam fase G0 (Gambar 2.6)

(Williams dan Stoeber, 2012).

2.9.1 Kanker serviks

Kanker leher rahim (kanker serviks) adalah tumor ganas yang tumbuh

didalam leher rahim/serviks, bagian terendah dari rahim yang menempel pada

puncak vagina, kanker serviks biasanya menyerang wanita berusia 35-55 tahun.

90% dari kanker serviks berasal dari sel skuamosa yang melapisi serviks dan 10%

sisanya berasal dari sel kelenjar penghasil lendir pada saluran servikal yang menuju

ke dalam rahim (Amalia ,2009). Kanker serviks timbul dari leher rahim, di mana

sel-sel serviks menjadi tidak normal mulai tumbuh tidak terkendali, dan membentuk

tumor. Sekitar 90% dari neoplasia intraepitel dapat dikaitkan dengan infeksi human

papillomavirus (HPV). Hanya HPV tipe tertentu yang menyebabkan lesi intraepitel

tingkat tinggi dan kanker. HPV yang paling umum adalah HPV-16, HPV-18, HPV-

31, HPV-33, HPV-35, HPV-39, HPV-45, HPV-51, HPV-52, HPV-56, dan HPV-

58. Tipe 16 adalah bentuk paling umum dari HPV yang ditemukan dalam

peningkatan kanker (Haliemariam et al., 2017). Kanker serviks biasanya

membutuhkan waktu 10 hingga 15 tahun, untuk berubah dari keadaan pra-kanker

ke kanker (Sulaiman et al., 2015).

 26

2.9.2 Patogenesis HPV 16

HPV 16 mengandung DNA (double helix) sebagai materi genetiknya,

Genomnya memiliki tujuh area pengkodean fungsional yaitu; E1 / E2: kode protein

yang mengontrol fungsi E6 dan E7 gen, E4: fungsi gen pengkode protein ini

sebagian besar tidak diketahui tetapi dapat mengontrol pelepasan virus dari sel, E5:

kode untuk protein hidrofobik yang meningkatkan kekebalan sel, E6: gen pengkode

protein yang menghambat regulator negatif dari siklus sel dan lebih lanjut

menghambat p53 yang merupakan faktor transkripsi untuk apoptosis, E7: kode

untuk protein virus yang mengikat ke protein retinoblastoma tumor suppressor yang

berperan dalam supressor poliferasi sel, L1 / L2: kode protein struktural yang

memiliki fungsi pada pembentukan virus yang terlambat, LCR (Long Control

Region) adalah tempat yang terletak diantara E dan L yang diperlukan untuk

replikasi virus normal dan kontrol ekpresi gen. (Faridi et al., 2011). Replikasi HPV

16 dimulai dengan replikasi DNA virus yang berbeda dengan kromosom seluler. Di

proses pembagian ini, satu sel anak bergerak terpisah dari lamina basal untuk

melakukan proses diferensiasi. Wilayah pengkodean E1 dan E2 menjadi faktor

pengenalan dan regulator untuk transkripsi awal virus (Gambar 2.7) ( Levinson,

2008).
 27

Gambar 2.7 Wilayah pengkodean HPV 16 (Chung et al., 2010).

Tiga protein utama pada HPV 16 yang berhubungan dengan penyebab

kanker servis adalah protein HPV 16 E5, E6, E7, (Narisawa-Saito dan Kiyono,

2007). Protein E6 dan E7 penting untuk penghambatan gen supresor tumor yaitu

p53 dan pRb (Tsai dan Chen, 2003). Protein E5 diketahui memiliki sifat onkogenik

lemah yang mengakibatkan peningkatan aktivitas epidermal growth factor receptor

(EGFR) dan menghambat ekspresi major histocompatibility complex (MHC)

(Gambar 2.8) (Faridi et al., 2011).

 28

Gambar 2.8 Peran utama E5, E6, dan E7 dalam mekanisme

molekuler HPV 16 dan 18 pada infeksi kanker serviks (Ramakrisnan et al.,2015).

Infeksi HPV pada sel kanker serviks Hela akan berikatan dengan tumor

suppressor protein p53, dimana p53 ini akan tertekan expresinya. (Goodwin dan

Dimaio, 2000). Penekanan ini akan menginduksi protein anti-apoptosis B-cell

lymphoma 2 yang menyebabkan timbulnya kanker karena jumlah protein Bcl-2

yang berlebih dan menyebabkan kemampuann untuk apoptosis menurun (Liana,

2017).

2.10 Tinjauan Senyawa

2.10.1 Polifenol

Polifenol adalah kelompok zat kimia yang ditemukan pada tumbuhan. Zat

ini memiliki ciri khas yaitu memiliki banyak gugus fenol dalam molekulnya.

Polifenol memiliki spektrum luas dengan sifat kelarutan berbeda akibat jumlah dan

posisi gugus OH yang berbeda. Antioksidan dari senyawa turunan polifenol dapat
 29

menstabilkan radikal bebas dengan melengkapi kekurangan elektron yang dimiliki

radikal bebas dan menghambat terjadinya reaksi berantai dari pembentukan radikal

bebas. Polifenol merupakan komponen yang bertanggung jawab terhadap aktivitas

antioksidan pada tumbuhan (Hattenschwiler dan Vitousek, 2000). Polifenol dapat

dibagi menjadi 2 yaitu flavonoid dan nonflavonoid. Flavonoid dibagi menjadi tujuh

subkelompok: flavanol, flavanon, flavonol, flavon, isoflavon, antosianidin,

proantisianidin, sedangkan kelompok non-flavonoid diantaranya adalah stilbene,

asam fenolik, lignan dan polifenol lainnya (Moga et al., 2016).

2.10.1.1 Oxyresveratrol

Oxyresveratrol memiliki rumus kimia inti C14H12O4 (4-[(E)-2-(3,5-

Dihydroxyphenyl)vinyl]-1,3-benzenediol) yang merupakan senyawa Polifenol

turunan dari resveratrol (Gambar 2.9) (Sangsen et al., 2018). Oxyresveratrol

banyak ditemukan pada akar, daun, batang dan buah yang banyak tersebar termasuk

pada tanaman famili moraceae, liliaceae dan gnetaceae (Xu et al., 2014).

Oxyresveratrol memiliki efek sebagai neuroprotektif dan antioksidan yang kuat.

Penelitian Chuanasa et al (2008) menunjukan bahwa oxyresveratrol memiliki

aktifitas biologi sebagai anti-virus herpes simplek (herpes Simplex Virus atau HSV-

1), penelitian Chung et al (2003) menunjukan bahwa oxyresveratrol memiliki

aktifitas antiinflamasi, penelitain Lorenz et al (2003) menunjukan efek sebagai

antioksidan, penelitian Likhitwitayawuid et al (2006) menunjukan efek sebagai

antiherpetic and anti-HIV dan pada penelitia Andrabi et al (2004) memiliki efek

anti-apoptosis and neuroprotektif.

 30

Penelitian yang dilakukan Andrabi et al (2004) menunjukan efek anti-

apoptosis senyawa oxyresveratrol berperan dalam pencegahan cyt c dari

mitocondria. Pencegahan ini ditunjukkan dengan positif pengurangan cyt c pada 4

jam dan 24 jam setelah treatment. Oxyresveratrol juga dapat mencegah aktivasi

caspase-3. Ditunjukkan dengan berkurangnya caspase-3 setelah treatment.

Oxyresveratrol dapat juga mengurangi fragmentasi DNA apoptosis yang

ditunjukkan dengan hasil positif berkurangnya sel apostain setelah treatment.

Gambar 2.9 Struktur 2D Oxyresveratrol (4-[(E)-2-(3,5-Dihydroxyphenyl)vinyl]-

1,3-benzenediol). (Minggarwati, 2017)

2.10.2 Flavonoid

Flavonoid adalah sekelompok senyawa alami dengan variabel struktur

fenolik dan ditemukan pada tumbuhan. Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan

virgili et al (2004) senyawa flavonoid dapat menghambat pertumbuhan sel kanker

serviks dengan aktivitas antiestrogenik. Senyawa flavonoid mempunya mekanisme

antiproliferatif. kemampuan flavonoid dalam menghambat poliferasi sel

dipengaruhi oleh kemampuan flavonoid dalam memodulasi Esterogen Reseptor-α

(ER-α). Esterogen Reseptor-α (ER-α) adalah salah satu anggota reseptor inti yang

memperantarai aksi hormon esterogen (17B-estradiol) didalam tubuh, seperti

 31

pertumbuhan, perkembangan, dan homeostasis dari berbagai organ dan jaringan

(nilsson et al., 2001).

2.10.2.1 Isoliquiritigenin

Isoliquiritigenin yang memiliki struktur ((2E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-

(4-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on) (Gambar 2.10). Isoliquiritigenin merupakan

flavonoid alami golongan khalkon yang ditemukan pada fraksi etil acetat umbi

bawang dayak (Eleutherine palmifolia (L.) Merr), akar kayumanis atau Licorice

(Glycyrrhiza uralensis), Sinofranchetia chinensis, Dalbergia odorifera dan kedelai

(Glycine max). (Mutiah dkk, 2017; Cao et al., 2004; Pan et al., 2000; Chan et al.,

1998; Kape et al., 1992). Isoliquiritigenin memiliki aktivitas pencegahan kanker

seperti antiinflamasi, antioksidan, agregasi antiplatelet, ateroprotektif, dan efek

estrogenik. Isoliquiritigenin memberikan efek antitumor dengan mengubah

beberapa target molekuler dan mengatur aktivitas apoptosis dan autophagic (Wang

et al., 2014). Selain itu juga memediasi aktivitas kemopreventif yang signifikan.

(Cuendet, et al., 2010).

Gambar 2.10 Struktur Isoliquiritigenin ((2E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(4-

hydroxyphenyl)-2-propen-1-on) (Mutiah dkk., 2017)

Penelitian Iwashita et al (2000) menunjukan isoliquiritigenin mampu

menghambat sel pertumbuhan dan menginduksi apoptosis pada sel B16 melanoma

4A5 melalui penghambatan transportasi transmembran glukosa dan meningkatkan

 32

ekspresi Bax. Penelitian Ma et al (2001) Menunjukan isoliquiritigenin dapat

menginduksi apoptosis dari sel MGC-803 kanker lambung. Penelitian Hsu et al

(2004) juga menunjukan isoliquiritigenin menghambat proliferasi and menginduksi

apoptosis dari kanker paru paru pada sel a549. Isoliquiritigenin memiliki efek

sitotoksik yang sangat sedikit pada jaringan normal in vitro dan in vivo (Wu et al.,

2016).

Isoliquiritigenin diketahui mampu dalam menghambat kanker serviks

dengan cara menginduksi Caspase-Depentent Apoptosis melalui penurunan

regulasi dari ekpresi HPV16 E6. Penelitian Hirchaud (2013) menunjukan bahwa

efek sitotoksik pada 4 sel line yaitu Ca Ski, SiHa, Hela dan C-33A berlangsung pada

fase G2/M namun pada konsentrasi yang berbeda efek sitotoksik ditunjukan pada

fase G0/G1. Pengaruh isoliquiritigenin pada ekspresi protein ditunjukkan pada

ekspresi apoptosis protein B-cell lymphoma 2-associated X protein (Bax) yang

meningkat sedangkan protein B-cell lymphoma 2 menurun.

 BAB III

KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESIS

3.1 Kerangka Konsep

3.1.1 Bagan Kerangka Konseptual

Kerangka konseptual dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:

Fraksi Bawang dayak
Eleutherine palmifolia Kanker serviks hela
(L.) Merr

IC50 44,335 μg/ml

(Mingarwati, 2017)

Sifat Isoliquiritigenin dan Toksisitas

Fisikokimi oxyresveratrol
a

B-cell lymphoma Vascular endothelial growth

2 (4AQ3) factor receptor-2 (2RL5)

Docking

Interaksi dan afinitas

Terdapat perbedaan
Memiliki sifat fisikokimia interaksi dan Tidak memiliki
yang baik afinitas toksisitas

Gambar 3.1. Bagan Kerangka Konsep

33
 34

Keterangan :

: Tidak diteliti

: Diteliti

: Memicu

: Menghambat

3.1.2 Uraian Kerangka Konseptual

Penelitian yang telah dilakukan minggarwati (2017) menunjukan bawang

dayak (Eleutherine palmifolia (L.) Merr) memiliki aktifitas sebagai antikanker pada

kanker serviks. Dengan adanya penelitian tersebut maka diperlukan adanya

penelitian mengenai aktivitas sitotoksik, toksisitas dan sifat fisikokimia. Senyawa

mayor yang ditemukan pada penelitian tersebut adalah (2E)-1-(2,4

Dihydroxyphenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on) yang disebut Senyawa

isoliquiritigenin dan trans-2,3,4,5-tetrahydroxystilbene yang disebut

oxyresveratrol. Hasil penelitian minggarwati (2017) menunjukkan fraksi etil asetat

Bawang dayak (Eleutherine palmifolia (L.) Merr) memiliki potensi sebagai

antikanker terhadap sel hela dengan nilai IC50 sebesar 44.335 µg/ml.

Senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol pada uji sitotoksik digunakan

sebagai ligan dari reseptor B-cell lymphoma 2 yang memiliki code protein 4AQ3

dan Vascular endothelial growth factor receptor-2 yang memiliki kode protein

2RL5. Penyiapan ligan dilaukan dengan aplikasi menggunakan Chem Bio Draw

Ultra versi 12 dan Chem Bio 3D Ultra versi 12. Selanjutnya dilakukan docking dari

ligan terhadap reseptor tersebut. Perbedaan tempat reseptor akan menimbulan

 35

interaksi dan afinitas yang berbeda yang ditandai dengan ikatan hidrogen, interaksi

dengan asam amino pada reseptor dan ikatan sterik serta energi ikatan yang

digambarkan dengan nilai Rerank Score (RS).

Senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol pada uji toksisitas dan

prediksi fisikokimia digunakan *SMILES untuk diketahui code senyawa sehingga

dapat dilakan uji fisikokimia dengan mengetahui berat molekul (BM), logaritma

koefisien partisi oktanol/air (Log P), jumlah ikatan antar atom yang dapat berotasi

(Torsion); Hydrogen Bond Acceptors (HBA), Hydrogen Bond Donors (HBD), dan

Polar Surface Activity (PSA) sehingga akan terpenuhinya hukum lima lipinski.

Untuk mengetahui toksisitas senyawa akan dikategorikan berdasarkan kelas

toksistas dengan mengetahui nilai LD50, skin sensitization, Ames toxicity dan

Hepatotoxycity. Klasifikasi toksisitas senyawa berdasarkan Globally Harmonized

System (GHS). kelas I: fatal jika tertelan (LD50 ≤ 5 mg/kg), kelas II : fatal jika

tertelan (5 <LD50 ≤ 50 mg/kg), kelas III: beracun jika tertelan (50 <LD50 ≤ 300

mg/kg), kelas IV: berbahaya jika tertelan (300 <LD50 ≤ 2000 mg/kg), kelas V: bisa

berbahaya jika tertelan (2000 <LD50 ≤ 5000 mg/kg), kelas VI: tidak beracun (LD50>

5000 mg/kg).
 36

3.2 Hipotesis penelitian

Berdasarkan kerangka konsep diatas dapat dirumuskan hipotesis sebagai

berikut:

1. Senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol memiliki sifat fisikokimia yang

baik ditunjukkan dengan terpenuhinya hukum lima lipinski secara in silico.

2. Terdapat perbedaan interaksi dan afinitas senyawa isoliquiritigenin dan

oxyresveratrol dengan B-cell lymphoma 2 (4AQ3) dan Vascular endothelial

growth factor receptor-2 (2RL5) secara in silico

3. Senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol tidak memiliki toksisitas

ditunjukkan dengan nilai LD50 >2000 mg/kg dan ≤ 5000 mg/kg secara in silico.
 BAB IV

METODE PENELITIAN

4.1 Jenis dan Rancangan Penelitian

Jenis penelitian yang digunakan yaitu penelitian eksperimental laboratoris

secara in silico dari senyawa Isoliquiritigenin dan oxyresveratrol terhadap reseptor

B-cell lymphoma 2 (PDB:4AQ3) dan Vascular endothelial growth factor receptor-

2 (PDB:2RL5) menggunakan aplikasi Chem Bio Draw Ultra Versi 12

(CambridgeSoft), Chem Bio 3D Ultra Versi 12 (CambridgeSoft), Molegro Virtual

Docker 6.0 (Molegro ApS), SMILES Translator, pkCSM online tool, Protox online

tool.

4.2 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian dilakukan pada bulan Juni sampai November 2018 di Jurusan

Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN)

Maulana Malik Ibrahim Malang.

4.3 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional

a. Variabel Bebas

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah senyawa isoliquiritigenin dan

oxyresveratrol

37
 38

b. Variabel Terikat

Variabel terikat dalam penelitian ini adalah nilai RMSD, Rerank Score,

ikatan hidrogen, ikatan sterik, jarak ikatan, berat molekul (BM), logaritma

koefisien partisi oktanol/air (Log P), jumlah ikatan antar atom yang dap berotasi

(Torsion); Hydrogen Bond Acceptors (HBA), Hydrogen Bond Donors (HBD),

Polar Surface Activity (PSA), LD50, skin sensitization, Ames toxicity,

Hepatotoxycity

c. Variabel Kontrol

Variabel kontrol dalam penelitian ini adalah B-cell lymphoma 2 (4AQ3) dan

Vascular endothelial growth factor receptor-2 (2RL5)

4.4 Alat dan Bahan Penelitian

4.4.1 Alat

Alat yang perangkat keras berupa satu set laptop dengan spesifikasi:

Processor tipe Intel® CoreTM i3 InsideTM, RAM 4 GB, dan harddisk 500 GB serta

perangkat lunak sistem operasi WindowsTM Seven Ultimate, Chem Bio Draw Ultra

Versi 12 (CambridgeSoft), Chem Bio 3D Ultra Versi 12 (CambridgeSoft), Molegro

Virtual Docker 6.0 (Molegro ApS), pkCSM, Protox online tool.

4.4.2 Bahan

4.4.2.1 Struktur Ligan Isoliquiritigenin dan Oxyresveratrol

Ligan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu struktur dari

Isoliquiritigenin dan oxyresveratrol. digambar strukturnya dengan aplikasi Chem

 39

Bio Draw Ultra Versi 12 (CambridgeSoft), Chem Bio 3D Ultra Versi 12

(CambridgeSoft).

A B
Gambar 4.1 Struktur tiga dimensi A. Isoliquiritigenin, B. Oxyresveratrol

4.4.2.2 Struktur Tiga Dimensi Reseptor 4AQ3

Struktur tiga Dimensi B-cell lymphoma 2 dengan kode protein (4AQ3)

sebagai protein reseptor antikanker serviks yang dapat diuduh dari situs protein

data bank (PDB) https://www.rcsb.org/structure/4aq3 (Mala, 2015)

A B

Gambar 4.2 (A) Struktur 3 dimensi B-cell lymphoma 2 (4AQ3)

(B) Struktur 3 dimensi B-cell lymphoma 2 (4AQ3) dengan cavity
 40

4.4.2.3 Struktur Tiga Dimensi Reseptor 2RL5

Struktur tiga dimensi Vascular endothelial growth factor receptor-2

dengan kode protein (2RL5) sebagai protein reseptor antikanker serviks yang dapat

diuduh dari situs protein data bank (PDB) https://www.rcsb.org/structure/2rl5

A B

Gambar 4.3 (A)Struktur 3 dimensi Vascular endothelial growth factor receptor-2

(2RL5) (B) Struktur 3 dimensi Vascular endothelial growth factor receptor-2
(2RL5) dengan cavitiy
 41

4.5 Skema Kerja Penelitian dan Prosedur Penelitian

4.5.1 Skema Kerja Penelitian

Studi In silico

Penyiapan senyawa Penyiapan senyawa

Isoliquiritigenin dan
Isoliquiritigenin dan Isoliquiritigenin dan
oxyresveratrol
oxyresveratrol oxyresveratrol

Penyiapan ligan Penyiapan Protein Target B-cell

Isoliquiritigenin dan lymphoma 2 (4AQ3) dan Vascular
oxyresveratrol Menggunakan endothelial growth factor receptor-
Chem Bio Draw Ultra dan 2 (2RL5) menggunakan Molegro
Chem Bio 3D Ultra versi 12 Virtual Docker 6.0

Docking dengan Molegro

Virtual Docker 6.0

Perbedaan nilai RMSD, Rerank Score (RS),

ikatan hidrogen, ikatan sterik dan jarak ikatan

Prediksi Sifat fisikokimia dengan berat Prediksi toksisitas dengan

molekul (BM), logaritma koefisien partisi nilai LD50, skin
oktanol/air (Log P), jumlah ikatan antar sensitization, Ames
atom yang dapat berotasi (Torsion); toxicity, Hepatotoxycity
Hydrogen Bond Acceptors (HBA), dan kelas toksisitas
Hydrogen Bond Donors (HBD), dan Polar menggunakan aplikasi
Surface Activity (PSA) dilakukan dengan Protox online tool
menggunakan pkCSM online tool

Gambar 4.4 Skema kerja penelitian

 42

4.5.2 Prosedur Penelitian

4.5.2.1 Preparasi Ligan

Ligan dipreparasi dengan digambar struktur molekul 2-D dengan program

Chem Bio Draw Ultra versi 12, kemudian dikopi pada program Chem Bio 3D Ultra

versi 12 untuk membuat struktur 3-D. Program ini dapat digunakan untuk melihat

bentuk stereokimia senyawa dan mengatur bentuk yang paling stabil dari senyawa

dengan cara meminimalkan energi, seperti MM2, MM3, MMFF94, OPLS dll.

Tetapi yang sering digunakan adalah metode MMFF94. Setelah itu dilakukan

minimalisasi energi untuk melihat bentuk stereokimia senyawa dan bentuk yang

paling stabil dengan menekan Calculations → MMFF94 → Perform MMFF94

Minimization. kemudian disimpan dalam bentuk mol2 {SYBYL2(*.mol2)}.

Setelah disimpan kemudian dilakukan proses docking terhadap target reseptor.

4.5.2.2 Preparasi Protein Reseptor

Preparasi protein reseptor dilakukan menggunakan software Molegro

Virtual Docker 6.0. Pada tahap ini dilakukan eliminasi molekul air dan ligan

referens serta penambahan atom hidrogen.

4.5.2.3 Penambatan Molecular Docking

Penambatan Molecular Docking dilakukan dengan menggunakan software

Molegro Virtual Docker 6.0 (Molegro ApS). Terdapat beberapa langkah dalam

proses docking, yaitu:

1. Mengunduh reseptor dari situs Protein Data Bank. Reseptor yang diunduh

adalah B-cell lymphoma 2 (4AQ3) harus mengandung ligan

phenylacylsulfonamide inhibitor dengan nama IUPAC N,N-dibutyl-4-

 43

chloranyl-1-[2-(3,4-dihydro-1H isoquinolin-2-ylcarbonyl) 4 - [ (7-

iodanylnaphthalen-2yl) sulfonylcarbamoyl] phenyl]-5-methyl-pyrazole-3

carboxamide dan Vascular endothelial growth factor receptor-2 (2RL5) harus

menggandung ligan 2,3-dihydro-1,4-benzoxazine inhibitor dengan nama

IUPAC n-(4-chlorophenyl)-7-[(6,7-dimethoxyquinolin-4-yl)oxy]-2,3-dihydro-

1,4-benzoxazine-4-carboxamide

2. Menambahkan atom H pada reseptor (karena reseptor yang diunduh

dihilangkan atom H-nya) dan memperbaiki protein reseptor yang diunduh. Hal

ini biasanya dilakukan secara otomatis oleh program komputer.

3. Deteksi tempat pada reseptor dimana obat akan terikat (berinteraksi). Tempat

tersebut berupa lubang-lubang (cavities) pada struktur reseptor.

4. Meletakkan struktur 3D senyawa kedalam lubang terpilih. Ada beberapa cara

untuk meletakkan struktur senyawa dalam lubang, dalam program Molegro

Virtual Docker dilakukan dengan cara “allign” yaitu menempelkan tiga atom

senyawa ke tiga atom yang sama pada ligan yang ada pada reseptor. Atom yang

terpilih umumnya adalah atom-atom pada gugus farmakofor.

5. Melihat gambaran (view) letak senyawa dalam lubang reseptor (cavities). Ada

beberapa gambaran untuk melihat keadaan lingkungan senyawa, antara lain :

gambaran hidrofobik, untuk melihat lingkungan hidrofobik senyawa, gambaran

elektronik, untuk melihat lingkungan elektronik senyawa, dan gambaran ikatan

H senyawa dan reseptor. Asam-asam amino yang terlibat pada proses interaksi

obat-reseptor dan gugus-gugus farmakofor dapat dilihat dari gambaran ikatan

H senyawa dan reseptor.

 44

6. Melakukan docking senyawa pada reseptor, yang dilakukan secara otomatis

oleh program Molegro Virtual Docker. Hal yang perlu diperhatikan dalam

proses ini adalah pemilihan senyawa yang di docking dan cavity dimana obat

akan berinteraksi. Parameter yang diukur dalam proses docking adalah nilai

energi yang terlibat, berupa MolDock Score, Rerank Score, dan Hbond. Untuk

mengukur kekuatan ikatan obat-reseptor, parameter yang sering digunakan

adalah nilai Rerank Score (Manual Molegro Virtual Docker, 2013)

4.5.2.4 Prediksi Sifat Fisikokimia dan Toksisitas Senyawa

Prediksi sifat fisikokimia dan toksisitas senyawa dengan digambar struktur

molekul 2-D dengan program Chem Bio Draw Ultra Versi 12, kemudian dikopi

pada program Chem Bio 3D Ultra Versi 12 untuk membuat struktur 3-D,

selanjutnya disimpan dalam bentuk file *.sdf atau *.pdb. Berikutnya,

isoliquiritigenin dan oxyresveratrol dicari code SMILES dengan bantuan situs

Pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov). Dalam bentuk format SMILES inilah

senyawa diproses menggunakan pkCSM online tool (http://biosig.unimelb.edu.au/

pkcsm/prediction) untuk memprediksi sifar fisikokimia senyawa dan mendapatkan

parameter untuk dikasifikasikan kedalam Hukum Lima Lipinski . Untuk

memprediksi toksisitas (LD50) per oral pada rodent, klasifikasi toksisitas senyawa

berdasarkan Globally Harmonized System (GHS) digunakan Protox online tool

(http://tox.charite.de/protox_II/) dan toksisitas senyawa berdasarkan skin

sensitization, Ames toxicity, Hepatotoxycity didapatkan melalui pkCSM online tool

(Ruswanto dkk., 2017).

 45

4.6 Analisis Data

Analisis data dari hasil docking dengan diketahui nilai Root Mean Square

Deviation (RMSD), Rerank Score (RS), ikatan hidrogen, ikatan sterik, jarak ikatan,

interaksi dengan asam amino dan dibandingan aktivitas antara reseptor B-cell

lymphoma 2 (4AQ3) dan jumlah ikatan antar atom yang dapat berotasi (Torsion),

Hydrogen Bond Acceptors (HBA), Hydrogen Bond Donors (HBD), dan Polar

Surface Activity (PSA). Sehingga dapat memprediksi sifat fisikokimia dengan

senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol dengan terpenuhi hukum lima

Vascular endothelial growth factor receptor-2 (2RL5) dengan senyawa

isoliquiritigenin dan oxyresveratrol. Analisis data prediksi sifat fisikoimia dengan

mengetahui berat molekul (BM), logaritma koefisien partisi oktanol/air (Log P),

lipinski. Analisis data toksisitas senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol

dengan dikategorikan berdasarkan nilai LD50 dan ditentukan kelas toksisitasnya,

menggunakan Protox II online tool. Hasil akan dipaparkan dalam bentuk tabel.

Analisis statistik menggunakan aplikasi SPSS 24.0 for windows dengan metode

analisis ANOVA Uji ini dapat mengetahui senyawa uji lebih baik dibandingkan

senyawa pembanding dengan melihat perbedaan nilai rata rata Rerank Score.
 BAB V

HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

Pada penelitian ini dilakukan studi in silico terhadap senyawa

isoliquiritigenin dan oxyresveratrol yang telah berhasil di temukan dari Eleutherine

palmifolia (L.) Merr, Glycyrrhiza uralensis, sinofranchetia chinensis, Dalbergia

odorifera dan Glycine max. Kedua senyawa tersebut telah dilaporkan memiliki

aktivitas anti kanker secara in vitro (Minggarwati, 2018, Cao et al., 2004; Pan et al,

2000 ; Chan et al, 1998; kape et al., 1992). Isoliquiritigenin merupakan senyawa

flavonoid turunan khalkon sedangkan oxyresveratrol merupakan senyawa polifenol

turunan resveratrol (Oldoni et al., 2011 dan sangsen et al., 2018)

Studi In silico yang dilakukan antara lain prediksi absorbsi dengan melihat

sifat fisikokimia, prediksi aktivitas dengan dilakukan docking molecular, dan juga

prediksi toksisitas.

5.1 Pengunduhan Target Protein

Target protein reseptor VEGFR-2 dan reseptor Bcl-2 diunduh melalui situs

(https://www.rcsb.org/) dengan format *pdb. Pencarian dan pengunduhan reseptor

VEGFR-2 dan BCL-2 berdasarkan protein reseptor yang sudah memiliki ligan.

Protein reseptor VEGFR-2 dengan code pdb: 2RL5 dan protein reseptor Bcl-2

dengan code pdb : 4AQ3

46
 47

5.2 Pembuatan Struktur 2 Dimensi, 3 Dimensi, Code SMILES dan

Penentuan Energi Minimal

Sebelum dilakukan uji in silico, senyawa isoliquiritigenin dengan nama

IUPAC ((2E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on) dan

oxyresveratrol dengan nama IUPAC (4-[(E)-2-(3,5-Dihydroxyphenyl)vinyl]-1,3-

benzenediol) digambar terlebih dahulu menggunakan program ChemBioDraw

Ultra 12.0. Setelah itu gambar dua dimensi digunakan untuk membuat struktur

senyawa secara tiga dimensi hal ini dikarenakan pada semua tahap docking harus

menggunakan model struktur tiga dimensi. Untuk menggambar struktur tiga

dimensi digunakan program ChemBio 3D ultra 12.00. Hasil struktur dua dimensi

dan tiga dimensi ditunjukkan pada gambar 5.1

A B

C D

Gambar 5.1 Struktur dua dimensi isoliquiritigenin (A). Struktur dua dimensi
senyawa oxyresveratrol (B). Struktur tiga dimensi senyawa isoliquiritigenin (C).
Struktur tiga dimensi senyawa oxyresveratrol (D).
 48

Dari gambar 5.1 A dam B didapatkan struktur dua dimensi dari

isoliquiritigenin dan juga oxyresveratrol. Lalu didapatkan struktur dalam bentuk

tiga dimensi dari isoliquiritigenin dan oxyresveratrol (C dan D). Struktur tiga

dimensi selanjutnya akan dilakukan minimalisasi energi.

Penentuan energi minimal menggunakan program ChemBio3D ultra 12.00

dilakukan tiga kali replikasi dengan metode MMFF94. Dengan dilakukan

minimalisasi energi menggunakan metode MMFF94 akan dihasilkan bentuk

stereokimia yang paling stabil dan disimpan dalam bentuk *mol2. Penentuan energi

minimal digunakan untuk menentukan energi seminimal mungkin pada bentuk

stereokimia dan bentuk yang paling stabil untuk dilakukan docking dengan reseptor

target. Hasil penentuan energi minal ditunjukkan pada tebel 5.1.

Tabel 5.1 Hasil penentuan energi minimal (kkal/mol) senyawa oxyresveratrol dan
isoliquiritigenin dengan MMFF94
Energi Minimal (Kkal/mol)
Rerata
Senyawa Replikasi Replikasi Replikasi
(kkal/mol)
I II III

43.7544 43.7543 43.7542 43.7543

Isoliquiritigenin

6.93964 6.93928 6.939 6.93930

Oxyresveratrol
Keterangan nama senyawa (IUPAC):
Isoliquiritigenin :((2E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-
propen-1-on)
Oxyresveratrol :(4-[(E)-2-(3,5-Dihydroxyphenyl)vinyl]-1,3-benzenediol)
 49

Rerata energi minimal yang didapatkan pada senyawa isoliquiritigenin

adalah sebesar 43,7543 kkal/mol dan pada oxyresveratrol adalah sebesar 6,93930

kkal/mol. Energi tersebut merupakan rerata energi seminimal mungkin pada bentuk

stereokimia dan bentuk yang paling stabil untuk dilakukan docking.

Sebelum dilakukan prediksi sifat fisikokimia dan toksisitas dilakukan

pembuatan Code SMILES. Pembuatan Code SMILES yang digunakan didapatkan

dari situs PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov). Code SMILES dari

senyawa uji didapatkan dengan mencari database dari situs PubChem setelah

didapatkan disimpan code SMILES untuk dilakukan uji selanjutnya. Code SMILES

dari Senyawa pembanding didapatkan dari senyawa yang berperan sebagai inhibitor

pada reseptor VEGFR-2 (2RL5) dan BCL-2 (4AQ3). Senyawa pembanding dari

kedua reseptor tersebut adalah 2,3-dihydro-1,4-benzoxazine inhibitor dengan nama

IUPAC N-(4-Chlorophenyl)-7-[(6,7 –Dimethoxyquinolin – 4–Yl)oxy]-2,3-

Dihydro-1,4-Benzoxazine-4-Carboxamide dan Phenylacylsulfonamide inhibitor

dengan nama IUPAC N,N-dibutyl-4-chloro-1-[2-(3,4-dihydro-1H-isoquinoline-2-

carbonyl)-4-[(7-iodonaphthalen-2-yl) sulfonylcar bamoyl]phenyl]-5-

methylpyrazole-3-carboxamide. Hasil Code SMILES ditunjukkan pada tebel 5.2

 50

Tebel 5.2 Hasil code SMILES isoliquiritigenin, oxyresveratrol, 2,3-dihydro-1, 4-

benzoxazine inhibitor dan Phenylacylsulfonamide inhibitor

Nama Senyawa Code SMILES

C1=CC(=CC=C1/C=C/C(=O)C2=C(C=C(C=C2)O)O)O

Isoliquiritigenin

C1=CC(=C(C=C1O)O)/C=C/C2=CC(=CC(=C2)O)O

Oxyresveratrol

COC1=CC2=C(C=CN=C2C=C1OC)OC3=CC4=C(C=C3)N
(CCO4)C(=O)NC5=CC=C(C=C5)Cl

2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor

CCCCN(CCCC)C(=O)C1=NN(C(=C1Cl)C)C2=C(C=C(C=C2)
C(=O)NS(=O)(=O)C3=CC4=C(C=C3)C=CC(=C4)I)C(=O)N5
CCC6=CC=CC=C6C5

Phenylacylsulfonamide inhibitor
Keterangan: Nama Senyawa (IUPAC)
Isoliquiritigenin :((2E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)-
2-propen-1-on)
Oxyresveratrol :(4-[(E)-2-(3,5-Dihydroxyphenyl)vinyl]-1,3-
benzenediol)
2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor :N-(4-Chlorophenyl)-7-[(6,7-Dimethoxyquinolin-4-
Yl)oxy]-2,3-Dihydro-1,4-Benzoxazine-4-Carboxamide
Phenylacylsulfonamide inhibitor :N,N-dibutyl-4-chloro-1-[2-(3,4-dihydro-1H-
isoquinoline-2-carbonyl)-4-[(7-iodonaphthalen-2-yl)
sulfonylcarbamoyl]phenyl]-5-methylpyrazole-3-
carboxamide

Dari tabel 5.2 diatas didapatkan Code SMILES yang akan digunakan untuk

prediksi fisikokimia dan toksisitas. Code SMILES tersebut yang selanjutnya akan

digunakan pada aplikasi Protox Online tool dan pkCSM online tool.
 51

5.3 Prediksi sifat fisikokimia dan ADME

Prediksi absorbsi dan permeabilitas ini didasarkan dengan hukum lima

Lipinski dan membutuhkan beberapa parameter fisikokimia. Parameter fisikokimia

yang dibutuh adalah Log P, Berat Molekul, jumlah ikatan antar atom yang dapat

berotasi (Torsion), Hydrogen Bond Acceptors (HBA), Hydrogen Bond Donors

(HBD) dan Polar Surface Activity (PSA) dengan memasukkan code SMILES pada

aplikasi pkCSM Online tool. Hasil prediksi sifat fisikokimia ditunjukkan pada tabel

5.3.

Tabel 5.3 Hasil penentuan sifat fisikokimia dan penerapan hukum lima Lipinski
terhadap senyawa isoliquiritigenin, oxyresveratrol, 2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine
inhibitor dan Phenylacylsulfonamide inhibitor
Parameter Hukum Lima Lipinski Penerapan
Senyawa Hukum Lima
BM LogP Torsion HBD HBA PSA (A2)
Lipinski

256.257 2.6995 3 3 4 109.438 Ya

Isoliquiritigenin

244.246 2.6794 2 4 4 103.706 Ya

Oxyresveratrol

491,931 6,1286 5 1 6 206,494 Tidak

2,3-dihydro-1, 4-
benzoxazine inhibitor

866,222 7,9515 12 1 7 328,240 Tidak

Phenylacylsulfonamide
inhibitor
Keterangan:
BM : Berat Molekul <500 Σ HBD : Jumlah atom OH dan NH <5
Log P : Koefisien Partisi <5 Σ HBO : Jumlah atom O dan N <10
Torsion : Ikatan H yang dapat berotasi PSA : Polar Surface Activity
 52

Menurut Lipinski et al (1997) senyawa akan sulit diabsorpsi dan

permeabilitasnya rendah apabila mempunyai: berat molekulnya lebih besar dari

500, nilai log koefisien partisi oktanol/air (log P) lebih besar dari +5; Hydrogen

Bond Donors (HBD), yang dinyatakan dengan jumlah gugus O-H dan N-H, lebih

besar dari 5; dan Hydrogen Bond Acceptors (HBA), yang dinyatakan dengan

jumlah atom O dan N, lebih besar dari 10.

Dari tabel 5.3 diatas senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol memiliki

berat molekul kurang dari 500, log P kurang dari 5, Jumlah ikatan H donor kurang

dari 5 dan ikatan H aseptor kurang dari 10. Sehingga senyawa isoliquiritigenin dan

oxyresveratrol memenuhi hukum lima Lipinski dan dapat diprediksi bawah

senyawa tersebut mudah untuk diabsorbsi dan memiliki permeabilitas yang baik.

Dilakukan juga prediksi sifat fisikokimia terhadap senyawa pada reseptor asli yaitu

2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor dan Phenylacylsulfonamide inhibitor

didapatkan kedua ligan tersebut tidak dapat memenuhi Hukum Lima Lipinski.

Sehingga tidak dapat diabsorbsi dengan baik dan memiliki permeabilitas yang tidak

baik

Langkah selanjutnya adalah prediksi absorbsi, distribusi, metabolisme dan

ekskresi dengan memasukkan code SMILES dari Senyawa isoliquiritigenin,

oxyresveratrol, 2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor dan Phenylacylsulfonamide

inhibitor pada aplikasi pkCSM online tool. Hasil prediksi absobsi, distribusi,

metaolisme dan eksresi ditunjukkan pada tebel 5.4.

 53

Tabel 5.4 Hasil prediksi ADME senyawa isoliquiritigenin, oxyresveratrol, 2,3-

dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor dan Phenylacylsulfonamide inhibitor
Menggunakan PkCSM Online Tool
Hasil

Kategori Prediksi
2,3-dihydro-1, 4- Phenylacyl
Isoliquiritigenin benzoxazine
Oxyresveratrol sulfonamide
inhibitor inhibitor
Absobsi pada usus
91,096 87,586 92,086 96,021
(%)
Permeabilitas pada
-2,752 -2,783 -2,736 -2,735
kulit (Log Kp)
Permeabilitas Caco-2
(Log Ppap in 10-6 0,955 1,005 0,992 1,082
Absorbsi cm/s)
P-glycoprotein
Iya Iya Tidak Tidak
substrate
P-glycoprotein I
Tidak Tidak Iya Iya
inhibitor
P-glycoprotein II
Tidak Tidak Iya Iya
inhibitor
Vdss (Log L/kg) 0,485 -0,024 -0,433 -1,158
Permeabilitas BBB
-0,717 -0,899 -1,093 -1,567
Distribusi (Log BB)
Permeabilitas CNS
-2,205 -2,304 -2,789 -2,961
(Log PS)
CYP2D6 substrate Tidak Tidak Tidak Tidak
CYP3A4 substrate Tidak Iya Iya Iya
CYP1A2 inhibitior Iya Iya Tidak Tidak
Metabolisme CYP2C19 inhibitior Iya Iya Iya Iya
CYP2C9 inhibitior Tidak Tidak Iya Iya
CYP2D6 inhibitior Tidak Tidak Tidak Tidak
CYP3A4 inhibitior Tidak Tidak Iya Iya
Total Clearance (Log
0,087 0,195 0,36 -0,381
mg/kg/hari)
Eksresi
Renal OCT2
Tidak Tidak Tidak Iya
substrate
Keterangan :
Vdss : (Volume of Distribution at Steady State)
BBB : (Blood Brain Barier)
CNS : (Central Nervous System)
CYP2D6 : Sitokrom P2D
CYP3A4 : Sitokrom 3A4
CYP1A2 : Sitokrom 1A2
CYP2C19 : Sitokrom 2C19
CYP2C9 : Sitokrom 2C9
Renal OCT2 : Renal Organic Cation Transporter 2
 54

Pada tabel 5.4 yaitu prediksi ADME menggunakan pkCSM online tool

didapat bahwa absorbsi dari kedua senyawa uji dan kedua senyawa pembanding

memiliki nilai % absorbsi pada usus antara 87,586 hingga 96,021 sehingga dapat

diprediksi memiliki absorbsi yang baik. Absobsi yang baik menurut Chander et al

(2017) apabila memiliki nilai absorbsi > 80% dan absorbsinya kurang baik jika <

30%.

Parameter Permeabilitas kulit sangat penting dalam penghantaran obat.

Menurut Pires et al (2015) senyawa memiliki permeabilitas yang rendah jika

mempunyai nilai Log Kp> -2.5. Dari keempat senyawa yang terdapat pada

penelitian ini memiliki nilai Log Kp antara -2,735 hingga -2,783.

Permeabilitas sel lapis tunggal Caco2 (Caco2 cell monolayer permeability)

biasanya sering digunakan sebagai model invitro dari mukosa usus sehingga dapat

memprediksi penyerapan obat yang diberikan secara oral. Menurut Pires et al

(2015) senyawa dianggap memiliki permeabilitas Caco-2 yang tinggi jika Papp > 8

x 106 cm / s. Namun pada prediksi menggunakna pkCSM tool permeabilitas akan

diterjemahkan kedalam nilai log Papp dengan dinyatakan tinggi bila memilki nilai >

0.90 Pada peneltiain ini kesemua senyawa dapat diprediksi memilki permeabilitas

Caco-2 yang tinggi. P-glikoprotein (P-gp) merupakan protein yang membentuk

membran, berfungsi untuk memompa transmembran efluks (Mealey et al, 2010).

P-gp akan menangkap obat lipofilik saat obat tersebut akan melakukan perjalanan

melalui lipid bilayer dan membalik molekul dari dalam ke luar dan akhirnya sampai

ke matriks ekstraselular. (Chakraborty and Ramakrishnan, 2016).

 55

Pada tabel 5.4 senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol menyatakan iya

yang artinya senyawa tersebut akan melewati diabsorbsi melalui P-glikoprotein

namun tidak pada P-glikoprotein I dan II inhibitor. Pada kedua senyawa

pembanding berkebalikan yaitu tidak diabsorbsi melalui P-glikoprotein namun

diabsobsi pada P-glikoprotein I dan II inhibitor

Prediksi Distribusi menggunakan pkCSM tool diprediksi Vdss, BBB, dan

CNS. Volume Distribusi at Steady State (VDSS) adalah volume teoritis bahwa

dosis total obat perlu didistribusikan secara merata untuk memberikan konsentrasi

yang sama seperti pada plasma darah. Semakin tinggi nilai VDSS, semakin banyak

kandungan obat yang didistribusikan ke di jaringan dari pada plasma. Pires et al

(2015) menyatakan senyawa dikatakan mempunyai Volume Distribusi rendah bila

nilai Log VDSS < -0,15, dan tinggi bila > 0,45. Dari tabel 5.4 nilai Log VDSS yang

didapat adalah antara -0,024 hingga 0,485. Yang memiliki VDSS rendah adalah

kedua senyawa pembanding sedangkan senyawa uji dapat didistribusikan secara

merata untuk memberikan konsentrasi yang sama seperti pada plasma darah.

BBB (Blood Brain Barier) merupakan kemampuan suatu obat untuk

menembus sawar darah otak. Hal ini dapat membantu untuk mengurangi efek

samping dan toksisitas ataupun dapat meningkatkan khasiat obat yang memilki

tujuan pengobatan didalam otak. Menurut Pires et al (2015) senyawa dikatakan

mampu menembus sawar otak jika memilki logBB > 0,3 dan tidak terdistribusi

dengan baik bila logBB < -1. Pada tabel 5.4 didapatkan nilai LogBB antara -1,567

hingga -0,899. Keempat senyawa tidak memilki kemampuan yang baik dalam

menembus sawar otak karena LoggBB tidak ada yang > 0,3.
 56

Permeabilitas Central Nervous System (CNS) merupakan kemampuan

suatu obat untu menembus sistem saraf pusat. Hal ini juga penting untuk

mengurangi efek samping dan toksisitas ataupun dapat meningkatkan khasiat obat

yang memilki tujuan pengobatan pada sistem saraf pusat. Menurut Pires et al (2015)

senyawa dikatakan LogPS >-2 dianggap dapat menembus CNS sedangkan logPS

<-3 dianggap tidak dapat menembus CNS. Pada tabel 5.4 didapatkan nilai LogPS

antara -2,961 hingga -2,205. Keempat senyawa memliki LogPS < -3 sehingga tidak

dapat menembus CNS.

Proses metabolisme adalah suatu proses kimiawi dimana obat akan diubah

didalam tubuh membentuk suatu metabolitnya. Organ yang bertanggung jawab

adalah hati. Sitokrom P450 merupaakan enzim detosifikasi yang banyak ditemukan

didalam hati. Enzim CYP2D6 merupakan salah satu enzim yang berperan dalam

metabolisme beberapa obat. Substrat CYP3A4 adalah Sitokrom P450 3A4

(disingkat CYP3A4), yang berartisitokrom P450, famili 3, subfamili A, polipeptida

4. Enzim yang penting setelah obat beredar. Sedangkan inihibitor CYP1A2

merupakan inhibitor dari CYP1A2. CYP2C19 bertanggung jawab untuk

metabolisme berbagai obat, termasuk inhibitor pompa proton (PPI), Sehingga

CYP2C19 inhibitor merupakan inhibitor dari enzime CYP2C19. Enzim CYP2C9

terlibat dalam metabolisme 10 % obat, sedangkan enzim CYP2C19 terlibat dalam

metabolisme 20% obat, CYP2C9 inhibitor merupakan inhibitor dari enzim

CYP2C9. CYP2D6 inhibitor juga merupakan inhibitor dari enzim CYP2D6 dan

inhibitor CYP3A4 merupakan inhibitor dari enzim CYP3A4.

 57

Pada tabel 5.4 didapatkan bahwa senyawa Isoliquiritigenin hanya akan

dimetabolisme pada CYP1A2 inhibitior dan CYP2C19 inhibitior. Sedangkan

Oxyresveratrol akan dimetabolisme pda CYP1A2 inhibitior, CYP2C19 inhibitior

dan CYP3A4 substrate. Lalu kedua senyawa 2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine

inhibitor dan Phenylacylsulfonamide inhibitor akan dimetabolisme oleh CYP3A4

substrate, CYP2C19 inhibitior, CYP2C9 inhibitior dan CYP3A4 inhibitior.

Untuk memprediksi proses ekskresi senyawa dapat dilakukan dengan

mengukur tetapan Total Clearance (CLTOT) dan Renal Organic Cation

Transporter 2 (OCT2) substrate. CLTOT merupakan kombinasi dari hepatic

clearance (metabolisme di hati dan empedu) dan renal clearance (ekskresi melalui

ginjal). Hal ini berkaitan dengan bioavailabilitas, dan penting untuk menentukan

tingkat dosis untuk mencapai konsentrasi steady-state. Dari tabel 5.4 didapat nilai -

0,381 hingga 0,36 log mg/kg/hari.

Organic Cation Transporter 2 adalah transporter pada ginjal yang

memegang peran penting dalam disposisi dan clearance obat-obatan dan senyawa

endogen. interaksi sampingan bila diberikan bersama-sama dengan inhibitor OCT2

interaksi sampingan bila diberikan bersama-sama dengan inhibitor OCT2. Hasil

yang didapatkan hanya terdapat pada senyawa Phenylacylsulfonamide inhibitor

yang berikatan pada substrat renal OCT-2.

 58

5.4 Hasil Docking dan Analisis Asam Amino

Studi In silico selanjutnya adalah docking molecular yaitu mengetahui

interaksi senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol dengan protein reseptor.

Interaksi ligan (senyawa) dengan reseptor dapat divisualisasikan dengan metode

komputasi dan dapat digunakan untuk mengetahui farmakofor dari suatu senyawa

(Ekins et al., 2007).

Reseptor yang digunakan adalah reseptor yang dapat mempengaruhi

pertumbuhan sel kanker melalui jalur anti-apotosis yaitu protein reseptor 4AQ3 dan

jalur pensinyalan sebagai jalur proangiogenik pada tahap angiogenesis yaitu protein

reseptor 2RL5. Dilakukan simulai Docking menggunakan program Molegro Virtual

Docker (MVD) 6.0. Sebelum dilakukan simulasi Docking dilakukan terlebih dahulu

preparasi Protein target dari 2

5.4.1 Hasil Preparasi Protein 4AQ3 dan 2RL5

Preparasi protein mula mula diunduh dari data file PDB (Protein Data Bank)

melalui (www.rcsb.org). Protein yang diunduh adalah protein BCL-2 dengan kode:

4AQ3 dan VEGFR-2 dengan kode: 2RL5 dengan masing masing protein memiliki

native ligan inhibitornya yaitu pada 4AQ3 memilki native ligan 2,3-dihydro-1,4-

benzoxazine inhibitor dan pada 2RL5 memilki native ligan Phenylacylsulfonamide

inhibitor. Protein tersebut ditinjau menggunakan program Molegro Virtual Docker

(MVD) (Gambar 5.2).

 59

A B
Gambar 5.2 (A) Reseptor 4AQ3 dan (B) reseptor 2RL5

Program MVD akan secara otomatis mengkoreksi protein yang telah ada

dan secara langsung melakukan penambahan atom H dan mengkoreksi apabila ada

beberapa asam amino residu yang salah baik valensi maupun muatannya

5.4.2 Hasil Penentuan Lubang (Cavity)

Hasil penentuan lubang (cavity) digunakan untuk mendeteksi tempat

berinteraksi antara ligan dan reseptor (cavity) pada reseptor 4AQ3 dan 2RL5.

Cavity yang terdapat pada reseptor ditunjukkan dengan warna hijau. Hasil

penentuan cavity ditunjukkan pada gambar 5.3.

 60

A B
Gambar 5.3 Hasil deteksi lubang (cavity) pada (A) reseptor 4AQ3 dan (B)
(2RL5)
Keterangan :
(A) (B)
Cavity 1 Vol=936,448 Surface 2732.8 Cavity 1 Vol=107,52 Surface 304,64
Cavity 2 Vol= 416.256 Surface 1436.15 Cavity yang digunakan
Cavity yang digunakan Cavity 2 Vol= 95.744 Surface 290,56
Cavity 3 Vol= 394.726 Surface 1338.88 Cavity 3 Vol= 34,304 Surface 122,88
Cavity 4 Vol= 297.472 Surface 995.84 Cavity 4 Vol= 32,256 Surface 122.88
Cavity 5 Vol=99.328 surface 250.73 Cavity 5 Vol=31,232 surfaace 134,3

Lubang yang digunakan pada gambar 5.3 (A) adalah lubang yang

dimungkinkan memilki interaksi pada reseptor 4AQ3. Lubang yang digunakan

adalah lubang pada volume 416.256 dengan luas permukaan 1436.15 (Cavity 2).

Lubang tersebut digunakan karena merupakan lubang dengan area dimana native

ligan reseptor 4AQ3 berinteraksi dengan asam amino residu spesifik. Tempat native

ligan yang berikatan memiliki potensial sebagai lubang aktif reseptor. Lubang yang

digunakan pada gambar 5.3 (B) adalah lubang yang dimungkinkan memiliki

interaksi pada reseptor 2RL5. Lubang yang digunakan adalah lubang pada volume

107,52 dan luas permukaan 304,64 (Cavity 1). Lubang tersebut digunakan karena

merupakan lubang dengan area dimana native ligan reseptor 2RL5 berinteraksi

dengan asam amino residu spesifik. Tempat native ligan yang berikatan memiliki
 61

potensial sebagai lubang aktif reseptor. Setelah dilakukan pemilihan lubang (cavity)

yang digunakan kemudian dilakukan validasi pada reseptor.

5.4.3 Pengaturan Molegro Virtual Docking

Sebelum dilakukan validasi dan juga docking menggunakan program

Molegro Virtual Docker (MVD), terlebih dahulu dilakukan pengaturan parameter

– parameter pada program. Berikut pengaturan dari program Molegro Virtual

Docker:

• Scoring Function

Score : MolDock Score [GRID]

Grid resolution (Å) : 0.30

Ligand evaluation : Internal ES, Internal Hbond, Sp2-Sp2 Torsion

• Search Alogarithm

Alogarithm : MolDock SE

Number of runs : 10

After docking : Energy minimization, Optimize hydrogen bonds

• Parameter Setting

Max iterations : 1500

Max population size : 50

Max steps : 300

 62

5.4.4 Hasil Validasi Reseptor 4AQ3 dan 2RL5

Validasi dilakukan dengan mendockingkan ulang native ligan pada lubang

reseptor. Hasil validasi ditunjukkan dengan nilai Root Mean Square Deviation

(RMSD). Reseptor dinyatakan valid dan dapat dilakukan simulasi docking

selanjutnya jika memiliki nilai RMSD ≤ 2 (Hevener et al., 2009). Hasil validasi

reseptor ditunjukkan pada tabel 5.5.

Tabel 5.5 Hasil validasi dan nilai RMSD

4AQ3 4AQ3 4AQ3 4AQ3 4AQ3 4AQ3
Reseptor 2RL5
(A) B C (D) (E) (F)
Nilai
1.18875 4.43089 11.3424 2.76257 10.8581 0.780526 3.42542
RMSD

Berdasarkan tabel 5.5 Reseptor 2RL5 memiliki nilai RMSD 1.18875 yang

menunjukkan valid untuk dilakukan simulasi docking. Reseptor 4AQ3 memiliki 6

protein yang berbeda diantaranya yaitu 4AQ3 (A), 4AQ3 (B), 4AQ3 (C), 4AQ3

(D), 4AQ3 (E), 4AQ3 (F). Nilai RMSD yang didapatkan secara berurut-urut yaitu

4.43089, 11.3424, 2.76257, 10.8581, 0.780526, 3.42542. Protein 4AQ3 (E)

merupakan protein yang digunakan untuk proses docking karena memiliki nilai

RMSD paling rendah yaitu 0.780526.

 63

5.4.5 Hasil Perolehan Docking Score

Hasil Simulasi Docking dapat dilihat dari rerata nilai Scoring yang

didapatkan. Digunakan tiga paramater yaitu MolDock Score. Rerank Score, dan

Ikatan H nya. Nilai MolDock Score. Rerank Score, dan Ikatan H merupakan score

yang dapat mengukur kekuatan ikatan obat-reseptor (CLCbio, 2013). Energi ikatan

juga dapat digunakan sebagai prediksi aktivitas senyawa. Energi ikatan antara ligan

dan reseptor dapat dilihat melalui Rerank Score. Rerank Score atau energi ikatan

merupakan perhitungan total dari semua ikatan yang ada. Energi ikatan menyatakan

jumlah energi yang diperlukan untuk mengadakan interaksi antara ligan dengan

reseptor (Nugroho, 2014).

5.4.5.1 Hasil Docking Senyawa Isoliquiritigenin, Oxyresveratrol, 2,3-dihydro-1,

4-benzoxazine inhibitor, dan Phenylacylsulfonamide inhibitor terhadap

Reseptor 4AQ3 (E) dan 2RL5

Hasil docking score yang diperoleh dari simulasi docking pada ligan

isoliquiritigenin dan oxyresveratrol terhadap reseptor 4AQ3 dan reseptor 2RL5

menggunakan program Molegro Virtual Docker ditunjukkan pada tabel 5.6

 64

Tabel 5.6 Hasil Docking score ligan Isoliquiritigenin, Oxyresveratrol, 2,3-dihydro-

1, 4-benzoxazine inhibitor, Phenylacylsulfonamide inhibitor terhadap reseptor
2RL5 dan 4AQ3
Replikasi
Parameter Rerata
Reseptor Senyawa Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3
Score (Kkal/mol)
(Kkal/mol) (Kkal/mol) (Kkal/mol)
4AQ3 (E) MolDock
-96.6959 -106.417 -100.42 -101,1776
Score
Rerank
-79.7617 -77.0265 -78.7242 -78,5041
Score
Isoliquiritigenin
H-Bond -8.30801 -8.29205 -10.5209 -9,0403
MolDock
-107.964 -107.939 -107.917 -107,9400
Score
Rerank
-87.9563 -88.0106 -88.0286 -87,9985
Score
Oxyresveratrol H-Bond -8.25896 -8.22368 -8.21736 -8,2333
MolDock
-200.355 -171.693 -165.115 -179.054
Score
Rerank
-135.892 -115.139 -118.493 -123.174
Score
Phenylacylsulfonamid H-Bond -5.26117 -4.08316 0 -3.11478
e inhibitor
2RL5 MolDock
-91.1539 -88.2189 -92.0561 -90,4763
Score
Rerank
-70.7507 -64.1086 -69.2253 -68,0282
Score
Isoliquiritigenin
H-Bond -3.80325 -457504 -375228 -4,04352
MolDock
-94.3106 -90.8578 -94.3028 -93,1571
Score
Rerank
-73.0513 -73.0345 -73.0381 -73,0413
Score
Oxyresveratrol H-Bond -7.05411 -7.5 -7.07712 -7,21041
MolDock
-154.291 -153.804 -154.621 -154,239
Score
Rerank
-121.293 -125.501 -125.2 -123,998
Score
2,3-dihydro-1, 4-
benzoxazine inhibitor H-Bond -3.01498 -3.2121 -3.31987 -3,18232
Keterangan :
MolDock Score :turunan dari fungsi scoring PLP dengan ikatan hidrogen dan
skema yang baru. (Kkal/mol)
Rerank Score :kombinasi linier dari E-inter (Van der Waals, steric, ikatan
hidrogen, elektrostatik) dengan ligan dan protein dari E-intra
(Van der Waals, ikatan hidrogen, torison, sp2-sp2, elektrostatik)
dari ligan yang telah ditentukan (Kkal/mol)
H-bond :energi ikatan hidrogen (Kkal/mol)
 65

Dari tabel 5.6 rerata nilai yang digunakan yaitu MolDock Score, Rerank

Score, dan Ikatan H. Pada reseptor BCL-2 (4AQ3) nilai MolDock Score, Rerank

Score dan ikatan H untuk senyawa isoliquiritigenin adalah -101,1776, -78,5041, -

9,0403. Nilai MolDock Score, Rerank Score dan ikatan H untuk senyawa

oxyresveratrol adalah -107,9400, -87,9985 -8,2333 Kkal/mol. Nilai MolDock

Score, Rerank Score dan ikatan H untuk senyawa Phenylacylsulfonamide inhibitor

adalah sebesar -179.054, -123.174, -3.11478 Kkal/mol. Pada reseptor VEGFR-2

(2RL5) nilai MolDock Score, Rerank Score dan ikatan H untuk senyawa

isoliquiritigenin secara berturut-turut: -90,4763, -68,0282 -4,04352 Kkal/mol.

Nilai MolDock Score, Rerank Score dan ikatan H untuk senyawa oxyresveratrol

secara berturut-turut: -93,1571, -73,0413, -7,21041 Kkal/mol. Nilai MolDock

Score, Rerank Score dan ikatan H untuk 2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor

adalah sebesar -154,239, -123,998, -3,18232 Kkal/mol.

5.4.5.2 Hasil Penentuan Energi Ikatan

Energi ikatan antara ligan dan reseptor ditunjukkan dengan nilai Rerank

Score yang telah didapat dari simulasi docking yang telah dilakukan. Nilai Rerank

Score yang dipatkan dapat digunakan untuk mengevaluasi kualitas docking,

mencari konformasi ligan yang relevan dengan melihat nilai terendah, dapat juga

digunakan untuk menggolongkan ligan aktif dan tidak aktif (Virtual Screening) dan

juga memprediksikan afinitasnya (Guedes et al., 2014). Energi ikatan (Rerank

Score) dari simulasi docking ditunjukkan pada tabel 5.7.

 66

Tebel 5.7 Nilai Rerank Score terhadap reseptor 4AQ3 (E) dan 2RL5
Rerank Score
Reseptor Senyawa
(Kkal/mol)
Isoliquiritigenin -78.5041
4AQ3 (E) Oxyresveratrol -87.9985
Phenylacylsulfonamide inhibitor -123.174
Isoliquiritigenin -68.0282
2RL5 Oxyresveratrol -73.0413
2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor -123.998
Keterangan : Nama Senyawa (UIPAC)
Isoliquiritigenin :((2E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(4-
hydroxyphenyl)-2-propen-1-on)
Oxyresveratrol :(4-[(E)-2-(3,5-Dihydroxyphenyl)vinyl]-
1,3-benzenediol)
2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor :N-(4-Chlorophenyl)-7-[(6,7-
Dimethoxyquinolin-4-Yl)oxy]-2,3-
Dihydro-1,4-Benzoxazine-4-
Carboxamide
Phenylacylsulfonamide inhibitor :N,N-dibutyl-4-chloro-1-[2-(3,4-
dihydro-1H-isoquinoline-2-carbonyl)-4-
[(7-iodonaphthalen-2-
yl)sulfonylcarbamoyl]phenyl]-5-
methylpyrazole-3-carboxamide

Pada tebel 5.7 hasil Rerank Score pada reseptor BCL-2 sebesar sebesar -

78.5041 Kkal/mol pada isoliquiritigenin dan -87.9985 Kkal/mol pada

oxyresveratrol. Rerank Score oxyresveratrol lebih besar dibandingkan dengan

isoliquiritigenin. Rerank Score kedua senyawa tersebut lebih besar dibandingkan

dengan nilai Rerank Score dari native ligan Phenylacylsulfonamide inhibitor pada

reseptor BCL-2. Rerank Score dari native ligan tersebut adalah sebesar -123.174

Kkal/mol yang artinya memiliki energi lebih rendah dari kedua senyawa tersebut.

Pada tabel 5.7 hasil Rerank Score pada reseptor VEGFR-2 sebesar -68.0282

Kkal/mol pada isoliquiritigenin dan -73.0413 Kkal/mol pada Oxyresveratol.

Senyawa oxyresveratrol memiliki nilai Rerank Score yang lebih rendah

 67

dibandingkan isoliquiritigenin. Rerank Score kedua senyawa tersebut lebih tinggi

jika dibandingkan dengan Rerank Score dari native ligan 2,3-dihydro-1, 4-

benzoxazine inhibitor reseptor VEGFR-2. Rerank Score dari ligan tersebut adalah

sebesar -123.998 Kkal/mol yang artinya memiliki energi yang lebih rendah dari

kedua senyawa tersebut.

Rerank Score yang semakin kecil menunjukkan bahwa semakin stabilnya

ikatan, Semakin stabil ikatan ligan dengan reseptor maka dapat di prediksikan

semakin besar pula aktivitasnya (Thomsen et al., 2006, Hincliffe, 2008,

Kusumaningrum et al 2014).

5.4.6 Hasil Interaksi Ligan dengan Asam Amino

Terdapat interaksi ligan dengan beberapa asam amino yang aktif dari

reseptor 4AQ3 (E) dan 2RL5. Salah satu sifat dari reseptor adalah terdiri dari asam

amino yang akan berinteraksi dengan ligan sehingga dapat menentukan interaksi

yang terjadi pada ikatan ligan dengan asam amino (Yahalom et al., 2011.,

Khazanov dan karlson 2013). Ikatan hidrogen merupakan ikatan yang spesifik jarak

dekat dan berinteraksi langsung. Ikatannya terjadi antara atom hidrogen terikat

secara kovalen dan atom elektronegatif (biasanya F,N,S atau O), dan sebuah atom

elektronegatif tambahan. (Muchtaridi, 2018).

 68

5.4.6.1 Interaksi Residu Asam Amino 4AQ3 (E)

Posisi terbaik hasil docking native ligan Phenylacylsulfonamide inhibitor,

ligan uji isoliquiritigenin dan oxyresveratrol ditunjukkan pada gambar 5.4 dan

ikatan dengan asam amino ditunjukkan pada gambar 5.5, tabel 5.8 dan tabel 5.9.

A B
Gambar 5.4 Gambar A. Posisi terbaik Isoliquiritigenin (warna ungu),
Oxyresveratrol (warna biru) dan Phenylacylsulfonamide inhibitor (warna kuning)
terhadap reseptor 4AQ3 (E) dengan Residu asam amino ditunjukkan stick style dan
ligan dengan thick lines with fixed colour. Gambar B. Posisi terbaik
Isoliquiritigenin (warna ungu), Oxyresveratrol (warna biru) dan
Phenylacylsulfonamide inhibitor (warna kuning) terhadap reseptor 4AQ3 (E).

A B C
Gambar 5.5 Bentuk 2 Dimensi ikatan Hidrogen antara (A) Phenylacylsulfonamide
inhibitor (B) Isoliquirtigenin dan (C) Oxyresveratrol dengan reseptor 4AQ3 (E)
garis biru sebagai ikatan hidrogen dan garis merah sebagai ikatan sterik.
 69

Tabel 5.8 Asam amino dan gugus fungsi yang terlibat dalam ikatan hidrogen dan
interaksi sterik pada reseptor 4AQ3 (E)
Ikatan hidrogen antara Interasi sterik
Jarak
Senyawa Asam Gugus asam Gugus ligan dan jarak (Ǻ)
(Ǻ)
amino
Phenylacylsulfonamide Gly 162 (A) N-H Atom O Nomor 40 3,11 Phe 63(E) (3,15)
inhibitor Gln 58 (A) N-H Atom O Nomor 41 2,81 Leu 96(E) (3,07)
Tyr 67 (E) O-H Atom N Nomor 38 3,10 Glu 95(E) (3,14)
O-H Atom O Nomor 41 3,19
Isoliquiritigenin Arg 66 (E) N-H Atom O Nomor 10 3,04 Gly 104(E) (2,98)
Asp 62 (A) C=O Atom O Nomor 10 2,74 Arg 66 (E) (3,06)
Arg 105 (E) N-H Atom O Nomor 17 2,63
Tyr 67 (E) O-H Atom O Nomor18 3,05
Oxyresveratrol Leu 160 (A) C=O Atom O Nomor 16 3,06
Ala 59 (E) C=O Atom O Nomor 17 2,58
Gln 58 (A) N-H Atom O Nomor 7 3,09
Tyr 67 (E) O-H Atom O Nomor7 3,12

Keterangan: Nama Senyawa (IUPAC)

Isoliquiritigenin :((2E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(4-
hydroxyphenyl)-2-propen-1-on)
Oxyresveratrol :(4-[(E)-2-(3,5-Dihydroxyphenyl)vinyl]-1,3-
benzenediol)
Phenylacylsulfonamide inhibitor :N,N-dibutyl-4-chloro-1-[2-(3,4-dihydro-1H-
isoquinoline-2-carbonyl)-4-[(7-iodonaphthalen-2-yl)
sulfonylcarbamoyl]phenyl]-5-methylpyrazole-3-
carboxamide.
Tabel 5.9 Residu asam amino yang telibat dalam proses ikatan hidrogen dan
interaksi sterik pada reseptor 4AQ3 (E)
Ikatan hidrogen Interaksi sterik
Arg Tyr Arg Asp Leu Ala Gln Gly Phe Leu Glu Gly Arg
Senyawa
105 67 66 62 160 59 58 162 63 96 95 104 66
(E) (E) (E) (A) (A) (E) (A) (A) (E) (E) (E) (E) (E)
Isoliquiritigenin + + + + - - - - - - - + +
Oxyresveratrol - + - - + + + - - - - - -
Phenylacylsulfonamide - - - - + + + + + - -
- ++
inhibitor
Keterangan: Nama Senyawa (IUPAC)
+ : Satu gugus asam amino yang terlibat
++ : Dua gugus asam amino yang terlibat
Isoliquiritigenin :((2E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(4-
hydroxyphenyl)-2-propen-1-on)
Oxyresveratrol :(4-[(E)-2-(3,5-Dihydroxyphenyl)vinyl]-1,3-
benzenediol)
Phenylacylsulfonamide inhibitor :N,N-dibutyl-4-chloro-1-[2-(3,4-dihydro-1H-
isoquinoline-2-carbonyl)-4-[(7-iodonaphthalen-2-yl)
sulfonylcarbamoyl]phenyl]-5-methylpyrazole-3-
carboxamide
 70

Pada gambar 5.4 menunjukkan posisi terbaik dari native ligan

Phenylacylsulfonamide inhibitor, ligan uji isoliquiritigenin dan oxyresveratrol.

Pada gambar 5.5 menunjukkan ikatan hidrogen dan juga ikatan sterik. Ikatan

hidrogen ditandai dengan garis putus putus berwarna biru dan pada ikatan sterik

ditunjukkan dengan gari putus putus berwarna merah. Pada tabel 5.8 dan 5.9

menunjukkan ikatan hasil docking menggunakan reseptor 4AQ3 (E). Pada native

ligan Phenylacylsulfonamide inhibitor, didapatkan ikatan asam amino yang diikat

yaitu Gly 162 (A), Gln 58 (A) Tyr 67 (E). Pada ligan isoliquiritigenin yaitu Arg 66

(E), Asp 62 (A), Arg 105 (E), Tyr 67 (E). Pada ligan oxyresveratrol berikatan

dengan asam amino Leu 160 (A), Ala 59 (E), Gln 58 (A), dan Tyr 67 (E).

Senyawa isoliquiritigenin memiliki ikatan hidrogen yang sama dengan

native ligan Phenylacylsulfonamide inhibitor yaitu asam amino Tyr 67 (E). Jika

dibandingkan dengan asam amino yang aktif, Isoliquiritigenin menunjukkan ikatan

dengan asam amino Arg 105 namun tidak dengan Arg 66 (E) dan Asp 62 (A).

Berdasarkan tabel 5.8 dan 5.9 Interaksi yang terlibat dalam ikatan hidrogen

ditunjukkan pada atom O pada gugus OH pada O nomor 18 dengan jarak ikatan

sebesar 3.05 Ǻ dengan mengikat gugus O-H pada gugus asam amino Tyr 67 (E),

dan atom N pada gugus N-H pada O nomor 17 dengan jarak ikatan sebesar 2.63 Ǻ

dengan mengikat gugus N-H pada gugus asam amino Arg 105 (E).

Senyawa oxyresveratrol memiliki ikatan yang sama dengan native ligan

yaitu asam amino yang sama yaitu Tyr 67 (E). Ikatannya dengan asam amino yang

aktif hanya pada Tyr 67 namun tidak dengan Leu 160 (A), Ala 59 (E), Gln 58 (A).

Berdasarkan tebel 5.8 dan 5.9 Interaksi yang terlibat dalam ikatan hidrogen
 71

ditunjukkan pada atom O pada O-H pada O nomor 7 dengan jarak ikatan 3,12 Ǻ

dengan mengikat gugus O-H pada gugus asam amino Tyr 67 (E).

Asam amino Gly 162 (A), Gln 58 (A), Asp 62 (A), Leu 160 (A) tidak

memiliki peran apapun karena memang asam amino tersebut merupakan asam

amino pada protein reseptor 4AQ3 (A) yang ikut terikat di dalam melakukan

docking.

Adanya kesamaan asam amino Tirosin (Tyr) 67 (E) pada kedua ligan uji dan

native ligan didapatkan bahwa asam amino Tyr 67 (E) merupakan sisi aktif pada

reseptor 4AQ3(E). Residu asam amino Tyr 67 (E) ini terdapat pada domain BH3

dari Bcl-2. Ikatan ini akan mengaktifkan BH-3 sehingga akan menjadi Pro-

Apoptosis. Pro-apoptosis ini akan bersaing dengan anti apoptosis. Sehingga ketika

pro-apotosis lebih banyak akan me-mediasi pelepasan sitokrom-C dari

mitokondria. Setelah sitokrom-C keluar dari mitokondria sitokrom-C akan diikat

oleh Apaf-1 (Apoptosis Activating Factor), Lalu akan diikat dan membentuk CARD

domain (Caspase Recruitment Domain) dan membentuk Apoptosome.

Apoptosome ini lah yang akan mengaktivasi caspase 9. Sehingga caspase 9 akan

mengaktivasi caspase 3. Caspase 3 merupakan mediator kematian sel (apoptosis)

(Chipuk et al, 2010).

Ikatan Tyr 67 (E) pada native ligan dapat dikatakan lebih baik dari senyawa

uji karena pada native ligan terdapat gugus ligan atom N nomor 38 dan atom O

nomor 41. Ikatan hidrogen pada atom O nomor 41 memiliki ikatan hidrogen yang

sangat kuat dibanding ikatan atom N (Muchtaridi et al, 2018). Sedangkan pada
 72

ligan isoliquiritigenin dan oxyresveratrol hanya memiliki ikatan pada atom O

sehingga kekuatan ikatanya dibawah dari native ligan.

Asam amino Arginin (Arg) 105 (E) yang berikatan pada senyawa

isoliquiritigenin merupakan sisi aktif dari reseptor Bcl-2 (Mala et al, 2015).

Sehingga ikatanya untuk mengaktivasi BH3 meningkat. Namun pada residu asam

amino Arg 66 (E) dan Ala 59 (E) bukan merupakan sisi aktif dari resepror. Ikatan

terhadap sisi yang tidak aktif yang dapat memungkinkan untuk mengurangi efek

dari senyawa tersebut (Clemente at al, 2004). Untuk menjadikan sisi tidak aktif

menjadi aktif dapat dilakukan Penambahan gugus fosfat (Yamamoto et al, 1999).

Ikatan sterik yang terdapat pada uji kali ini pada native ligan terdapat asam

amino Phe 63(E), Leu 96(E) dan Glu 95(E). Lalu pada ligan Isoliquiritigenin

terdapat asam amino Gly 104(E) dan Arg 66 (E). Namun pada ligan Oxyresveratol

tidak terdapat ikatan sterik yang terjadi. Asam amino tersebut dapat lebih

menstabilkan suatu ikatan, Karena ikatan sterik (Van der Waals) ketika terdapat dua

atom yang saling berdekatan akan membentuk gaya tarik yang lemah dan non

spesifik. Interaksi sterik (Van der Waals) ini kekuatanya akan berkurang derastis

ketika jarak molekul meningkat. Ikatan sterik dapat memberikan tempat bagi

interaksi hidrogen dengan asam amino yang aktif. Suatu ikatan sterik sangat

mempengaruhi ikatan hidrogen yang terjadi (Muchtaridi et al, 2018)

 73

5.4.6.2 Interaksi Residu Asam Amino 2RL5

Posisi terbaik hasil docking antara native ligan 2,3-dihydro-1, 4-

benzoxazine inhibitor, senyawa uji isoliquiritigenin dan oxyresveratol ditunjukkan

pada gambar 5.6 dan ikatan dengan asam amino ditunjukkan pada gambar 5.7, tabel

5.10 dan tabel 5.11.

A B
Gambar 5.6 Gambar A. Posisi terbaik senyawa isoliquiritigenin (warna ungu),
oxyresveratrol (warna biru) dan 2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor (warna
kuning) terhadap reseptor 2RL5 dengan Residu asam amino ditunjukkan stick style
dan ligan ditunjukkan dengan thick lines with fixed colour. Gambar B Posisi terbaik
isoliquiritigenin (warna ungu), oxyresveratrol (warna biru) dan 2,3-dihydro-1, 4-
benzoxazine inhibitor (warna kuning) terhadap reseptor 2RL5.

A B C
Gambar 5.7 Bentuk dua dimensi ikatan hidrogen antara 2,3-dihydro-1, 4-
benzoxazine inhibitor (A) isoliquirtigenin (B) dan oxyresveratrol (C) pada reseptor
 74

2RL5 dengan garis biru sebagai ikatan hidrogen dan garis merah sebagai ikatan
sterik
Tabel 5.10 Asam Amino dan gugus fungsi yang terlibat dalam ikatan hidrogen
dan interaksi sterik pada reseptor 2RL5
Senyawa Asam Ikatan hidrogen antara Interaksi sterik
Jarak
amino Gugus asam Gugus ligan dan jarak (Ǻ)
(Ǻ)
amino
2,3-dihydro-1,4- Cys 919 N-H Atom N nomor 11 2,86 Asp 1046 (3,15)
benzoxazine inhibitor Asp 1046 N-H Atom N nomor 25 3,43
Isoliquiritigenin Thr 916 C-H Atom O nomor 3 3,16 Cys 919 (3,04)
Cys 919 C=O Atom O nomor 17 3,06 Val 848 (3,02)
Lys 868 N-H Atom O nomor 10 2,93 Val 914 (2,99)
Val 914 C=O Atom O nomor 10 2,18
Oxyresveratrol Glu 917 C=O Atom O nomer 6 3,01 Ala 866 (3,07)
Cys 919 N-H Atom O nomer 6 2,94
Lys 868 N-H Atom O nomer 16 3,14
Val 914 C=O Atom O nomer 16 3,14
Keterangan :Nama Senyawa (UIPAC)
Isoliquiritigenin :((2E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(4-
hydroxyphenyl)-2-propen-1-on)
Oxyresveratrol :(4-[(E)-2-(3,5-Dihydroxyphenyl)vinyl]-1,3-
benzenediol)
2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor :N-(4-Chlorophenyl)-7-[(6,7-
Dimethoxyquinolin-4-Yl)oxy]-2,3-Dihydro-1,4-
Benzoxazine-4-Carboxamide

Tabel 5.11 Residu asam amino yang telibat dalam proses ikatan hidrogen dan
interaksi sterik pada reseptor 2RL5
Ikatan Hidrogen Interaksi sterik
Senyawa Asp Cys Lys Tyr Val Glu Asp Cys Val Val Ala
1046 919 868 916 914 917 1046 919 848 914 966
Isoliquiritigenin - + + + + - - + + + -
Oxyresveratrol - + + - + + - - - - +
2,3-dihydro-1,4- + + - - - - + - - -
benzoxazine
inhibitor
Keterangan: Nama Senyawa (IUPAC)
+ : Satu gugus asam amino yang terlibat
Isoliquiritigenin :((2E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(4-
hydroxyphenyl)-2-propen-1-on)
Oxyresveratrol :(4-[(E)-2-(3,5-Dihydroxyphenyl)vinyl]-1,3-
benzenediol)
2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor :N-(4-Chlorophenyl)-7-[(6,7-
Dimethoxyquinolin-4-Yl)oxy]-2,3-Dihydro-1,4-
Benzoxazine-4-Carboxamide
 75

Gambar 5.6 menunjukkan posisi terbaik dari isoliquiritigenin (warna ungu),

oxyresveratrol (warna biru) dan 2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor (warna

kuning) terhadap reseptor 2RL5 dengan residu asam amino ditunjukkan stick style

dan ligan ditunjukkan dengan thick lines with fixed colour. Pada gambar 5.7

menunjukkan ikatan hidrogen dan ikatan sterik dengan garis biru sebagai ikatan

hidrogen dan garis merah sebagai ikatan sterik. Pada tabel 5.10 dan tabel 5.11

menunjukkan ikatan hasil docking menggunakan reseptor 2RL5. Pada native ligan

2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor didapatkan beberapa residu asam amino

yang diikat yaitu Cys 919 dan Asp 1046. Pada ligan isoliquiritigenin yaitu Thr 916,

Cys 919, Lys 868, Val 914. Pada ligan oxyresveratrol yaitu Glu 917, Cys 919, Lys

868, Val 914.

Senyawa isoliquiritigenin hanya mengikat residu asam amino yang sama

dengan native ligan yaitu Cys 919. Jika dibandingkan dengan residu asam amino

yang aktif isoliquiritigenin juga menunjukkan ikatanya pada Thr 916, Lys 868, Val

914. Berdasarkan tabel 5.10 dan 5.11 Interaksi ikatan hidrogen senyawa

isoliquiritigenin dengan resisdu asam amino ditunjukkan dengan terlibatnya atom

O gugus OH pada O nomor 17 dengan jarak ikatan sebesar 3.05 Ǻ dengan gugus

C=O pada gugus asam amino Cys 919, atom C gugus C-H pada O nomor 3 dengan

jarak ikatan sebesar 3.14 Ǻ dengan gugus C-H pada gugus asam amino Thr 916,

dan atom N gugus N-H pada O nomor 10 dengan jarak ikatan sebesar 2.18 Ǻ dengan

gugus N-H pada gugus asam amino Lys 868.

Senyawa oxyresveratrol hanya mengikat residu asam amino yang sama

dengan kontrol pada asam amino Cys 919. Jika dibandingkan dengan residu asam
 76

amino yang aktif, Oxyresveratrol juga menunjukkan ikatannya dengan asam amino

Lys 868 namun tidak dengan Glu 917 dan Val 914. Berdasarkan tebel 5.8 Interaksi

ikatan hidrogen senyawa dengan residu asam amino ditunjukkan dengan terlibatnya

atom O gugus OH pada O nomor 6 dengan jarak ikatan sebesar 2.94 Ǻ dengan

gugus N-H pada gugus asam amino Cys 919 dan atom N gugus N-H pada O nomor

16 dengan jarak ikatan sebesar 3.14 Ǻ dengan gugus N-H pada gugus asam amino

Lys 868.

Adanya kesamaan residu sistein (Cys) 919 yang terlibat dalam proses

pengikatan dari reseptor 2RL5 akan menyebabkan senyawa dapat menghambat

aktivitas dari reseptor VEGFR-2 dengan berkompetisi secara (competitive

inhibitor). Menurut penelitian La et al (2018) menyatakan bahwa ikatan ligan

dengan asam amino Cys 919 sebagai sisi aktif akan meningkatkan ikatan dengan

terlibatnya ikatan amida NH atau aryl C-H dari asam amino sistein. Pada asam

amino Lys 868 pada penelitian Ebadi et al (2012) dapat bertanggung jawab dan

meningkatkan ikatan pada sisi aktif reseptor. Penelitian ini juga menyatakan bahwa

asam amino Valin (Val) memiliki ikatan namun ikatan tersebut tidak sesuai pada

sisi aktif reseptor. Asam Glutamat (Glu) 917 bukan merupakan asam amino aktif

dari reseptor. Asam amino Glu yang aktif pada reseptor 2RL5 yaitu Glu 885 (La et

al, 2008, Ugale et al, 2017). Peran dari Asam Glutamat (Glu) telah dilaporkan pada

penelitian Baek et al (2017) yang memiliki peran dalam menghambat

perkembangan tumor dengan menekan proses angiogenesis dan permeabilitas

melalui jalur VEGFR-2. Pada ikatan Thr 916 pada reseptor 2RL5 merupakan ikatan

yang stabil (Meng, 2013).

 77

Interaksi sterik (Van der Waals) pada tabel 5.10 dan 5.11 menunjukkan

ikatan sterik dengan asam amino Asp 1046, Cys 919, Val 848, Val 914 dan Ala866.

Asam amino tersebut dapat lebih menstabilkan suatu ikatan. Karena ikatan sterik

(Van der Waals) ketika terdapat dua atom yang saling berdekatan akan membentuk

gaya tarik yang lemah dan non spesifik. Interaksi sterik (Van der Waals) ini

kekuatanya akan berkurang derastis ketika jarak molekul meningkat. Suatu ikatan

sterik sangat mempengaruhi ikatan hidrogen yang terjadi (muchtaridi et al, 2018).

Ikatan sterik dapat memberikan tempat bagi ikatan hidrogen dengan asam amino

yang aktif sehingga akan menstabilkan suatu ikatan

5.5 Prediksi Toksisitas secara In Silico

Studi In silico selanjutnya adalah untuk memprediksi toksisitas senyawa

Isoliquiritigenin dan Oxyresveratrol. Prediksi toksisitas ini berdasarkan nilai LD50.

Selain itu berdasarkan Globally Harmonized System (GHS) kelas toksisitas dapat

dibagi menjadi kelas tosisitas 1 hingga 6. Keenam kelas toksisitas tersebut

menggunakan ambang batas LD50 dari 5, 50, 300, 2000 dan 5000 mg/kg berat badan

(Drwal., et al, 2014). Prediksi toksisitas menggunakan parameter LD 50, Uji

Mutagenin AMES, Hepatotoxicity, Skin Sensitization dan kelas toksisitas dengan

aplikasi Protox II online tool dan pkCSM online tool hasil ditunjukkan pada tabel

5.11
 78

Tabel 5.12 Prediksi toksisitas menggunakan Protox II Online tool dan pkCSM
Online tool
Nama Senyawa Toksisitas
LD50 Uji Toksik Sensitivitas Kelas
(mg/kg)* Mutagenik terhadap kulit** toksisitas*
AMES** hepar**
Isoliquiritigenin 1048 Tidak Tidak Tidak 4
Oxyresveratrol 1560 Iya Tidak Tidak 4
2,3-dihydro-1,4-
5000 Tidak Iya Tidak 5
benzoxazine inhibitor
Phenylacylsulfonamide
370 Tidak Iya Tidak 4
inhibitor
Keterangan :
* Menggunakan Protox II Online Tool
** Menggunakan pkCSM Online Tool
LD50 : Letal Dose 50
Nama UIPAC
Isoliquiritigenin :((2E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(4-
hydroxyphenyl)-2-propen-1-on)
Oxyresveratrol :(4-[(E)-2-(3,5-Dihydroxyphenyl)vinyl]-1,3-
benzenediol)
2,3-dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor :N-(4-Chlorophenyl)-7-[(6,7-
Dimethoxyquinolin-4-Yl)oxy]-2,3-Dihydro-
1,4-Benzoxazine-4-Carboxamide
Phenylacylsulfonamide inhibitor :N,N-dibutyl-4-chloro-1-[2-(3,4-dihydro-
1H-isoquinoline-2-carbonyl)-4-[(7-
iodonaphthalen-2-
yl)sulfonylcarbamoyl]phenyl]-5-
methylpyrazole-3-carboxamide

Berdasarkan tabel 5.12 Hasil yang didapatkan Senyawa Isoliquiritigenin

memiliki nilai LD50 pada hewan coba (rodent) sebesar 1048 mg/kg dan dapat

dikalsifikasikan pada kelas toksisitas 4, selain itu Isoliquiritigenin tidak

menimbulkan toksisitas pada bakteri (Uji mutagenik AMES), Hepatotoxicicy dan

skin sensitization. Senyawa Oxyresveratrol memiliki nilai LD50 pada hewan coba

(rodent) sebesar 1560 mg/kg dan dapat diklasifikasikan dalam class toxicity class

4 senyawa Oxyresveratrol ini menimbulkan toksisitas pada bakteri (Uji Mutagenik

AMES) namun tidak menimbulkan hepatotoxicity dan skin sensitization. Pada

kedua senyawa pembanding dapat diprediksi toksik terhadap hepar namun tidak
 79

menimbulkan mutagenik dan juga sensitif pada kulit. Nilai LD50 dari senyawa 2,3-

dihydro-1, 4-benzoxazine inhibitor cukup tinggi yaitu 5000mg/kg hal ini dapat

dikategorika pada kelas toksisitas kelas 5. Namun pada senyawa

Phenylacylsulfonamide inhibitor dapat diprediksi memiliki LD50 sebesar 370

mg/kg yang termasuk dalam kelas toksisitas kelas 4. Berdasarkan hasil diatas nilai

LD50 antara 500-2000 mg/kg dan toksisitas kelas 5 dan 4 menunjukkan toksisitas

yang relatif rendah. Semakin tinggi nilai LD50 maka semakin rendah toksisitasnya

(Supandi et al., 2018).

5.6 Analisis Data Statistik

Hasil Rerank Score dianalisis secara statistik dengan menggunakan program

SPSS 24,0 for windows. Untuk menentukan suatu senyawa aktif atau inaktif dapat

dilakukan dengan cara uji banding antar dan inter kelompok menggunakan uji

statistik ANOVA. Dengan menggunakan nilai Rerank Score yang telah dilakukan

replikasi tiga kali sehingga dapat dilakuan uji statistika ANOVA. Uji ini dapat

untuk mengetahui ligan uji lebih baik dibandingkan native ligan. Hasil analisis dara

statistik ditunjukkan pada tabel 5.13.

 80

Tabel 5.13 Analisis uji banding menggunakan uji statistik ANOVA

(I) (J) Kelompok Mean Std. Sig. 95% Confidence

Kelompok Difference Erro ( p-value) Interval
(I-J) r Lower Upper
Bound Bound
Pembading Isoliquiritigenin -44,670333* 5,291 ,000 -57,61910 -31,72157
BCL-2 BCL-2 879
(4AQ3(E) Oxyresveratrol -35,176000* 5,291 ,001 -48,12476 -22,22724
BCL-2 879
Pembanding Isoliquiritigenin -55,969667* 1,978 ,000 -60,81067 -51,12866
VEGFR-2 VEGFR-2 414
(2RL5) Oxyresveratrol -50,956667* 1,978 ,000 -55,79767 -46,11566
VEGFR-2 414
Sumber : Lampiran 1 dan lampiran 2

Berdasarkan tabel 5.13 menunjukkan hasil analisis uji beda dengan masing

masing ligan uji terhadap native ligan. Hasil pengolahan data statistik ANOVA

yang didapat nilai p-value pada reseptor 4AQ3 (E) pada masing masing ligan uji

terhadap native ligan menunjukkan nilai signifikan kurang dari 0,005 dan Hasil

pengolahan data statistik ANOVA nilai p-value pada reseptor 2RL5 pada masing

masing ligan uji terhadap native ligan menunjukkan nilai signifikan kurang dari

0,005. Hasil yang didapatkan pada reseptor 4AQ3 (E) dan 2RL5 ligan uji terdapat

perbedaan yang signifikan terhadap native ligan. Dengan nilai p-value kurang dari

0,005 yang berarti ligan uji pada masing masing reseptor berbeda aktivitasnya

dengan native ligan atau dapat dinyatakan tidak memiliki efek yang sama dengan

native ligan. Sedangkan apabila didapatkan p-value lebih dari 0,005 maka dapat

dinyatakan skor ligan uji tidak berbeda dengan native ligan atau dapat dinyatakan

memilki efek yang sama (Mumpuni et al, 2015).

 BAB VI

PENUTUP

6.1 Simpulan

Penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan :

1. Senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol telah memenuhi hukum lima

Lipinski dan diprediksi senyawa tersebut mudah untuk diabsorbsi dan

memiliki permeabilitas yang tinggi.

2. Senyawa oxyresveratrol memilki aktivitas lebih baik dibanding

isoliquiritigenin pada reseptor 4AQ3 (E) dan 2RL5. Tetapi tidak lebih baik

dibanding senyawa pembanding inhibitor reseptornya dengan ditunjukkan

dengan ikatannya pada ligan aktif Tyr 67 pada resepror 4AQ3(E) dan Cys

919 pada reseptor 2RL5.

3. Senyawa isoliquiritigenin dan oxyresveratrol menurut Globally

Harmonized System (GHS) dapat disimpulkan memiliki toksisitas yang

relatif rendah.

81
 82

6.2 Saran

Bagi peneliti selanjutnya yaitu analisis dinamika molekular untuk

mengetahui ikatan asam amino yang lebih lengkap, dilakukan perubahan struktur

dan modifikasi turunan senyawa, dan juga dilakukan uji sitotoksik terhadap kultur

sel hela dari senyawa Isoliquiritigenin dan Oxyresveratrol

 DAFTAR PUSTAKA

Aidh, Al-Qarni. 2008. Tafsir Muyassar. Jakarta: Qisthi pres

Ahmad, M. 2016. Karakteristik Ibu yang Melakukan PemeriksaanPap Smear di

RSPAD Gatot Soebroto, Jakarta. Jurnal Ilmu Kesehatan Masyarakat. Vol.
05, No. 01

Amalia, L. 2009. Kanker Serviks & 32 Jenis Kanker Lainnya. Yogyakarta:

Landscape.

Andrabi, S.A., Spina, M.G., Lorenz, P., Ebmeyer, U., Wolf, G and Horn, T.F.,
2004. Oxyresveratrol (trans-2,3,4,5-tetrahydroxystilbene) is
neuroprotective and inhibits the apoptotic cell death in transient
cerebral ischemia. Brain Res., 1017: 98-107

Arung, E. T., Wicaksono, D. B., Sandra F., 2009. Prenylated Flavonoid sebagai
Senyawa Anti Kanker yang Berpotensi. CDK 167. Vol 36 No 1

Baek, Y.Y., Lee, D.K., Kim, J., Kim, J.H., Park, W., Kim, T., Han, S., Jeoung,
D., You, J.C., Lee, H., Won, M.H., Ha, K.S., Kwon, Y.G., Kim, Y.M.,
2017. Arg-Leu-Tyr-Glu Tetrapeptide Inhibits Tumor Progression By
Suppressing Angiogenesis And Vascular Permeability Via Vegf Receptor-
2 Antagonism. Oncotarget, 2017, Vol. 8, (No. 7), Pp: 11763-11777

Becker, C. A., and Van den Brink, R. C. B., 1968. Flora of Jawa
(Spermatophytesonly) vol II. Groningan-The Netherlands: Wolters-
Noordhoff.

Bhatla, N., Aoki D., Sharma D, N., Sankaranarayanan R, 2018. Cancer of the cervix
uteri. Int J Gynecol Obstet 143 (Suppl. 2): 22–36.

Bleicher, K. Fl., H.-J. Böhm, K. Müller, and A. l. Alanine. 2003. A guide to drug
discovery: Hit and lead generation: Beyond high-throughput screening. Nat.
Rev. Drug Disco-a. 2(5): 369-378.

83
 84

Botta, B., Vitali, A., Menendez, P., Misiti, D., and Monache, G.D., 2015. Prenylated
flavonoids : Pharmacology and biotechnology. Curr Med Chem. Volume
12: 713-739

Bruice, P, 2003. Organic Chemistry. Ed ke-4. New Jersey (US): Prentice Hall

Bruni, L., Albero, G., Serrano, B., Mena, M., Gómez, D., Muñoz, J., Bosch, F.X.,
de Sanjosé, S.. ICO/IARC. 2018. Information Centre on HPV and Cancer
(HPV Information Centre). Human Papillomavirus and Related Diseases in
Asia. Summary Report 10 December 2018

Burk, R. D., Chen, Z., and Van Doorslaer, K., 2009. Human papillomaviruses:
genetic basis of carcinogenicity. Public Health Genomics, 12(5-6), 281-290

Cao, Y., Wang, Y., Ji, C., and Ye, J., 2004. Determination Of Liquiritigenin And
Isoliquiritigenin In Glycyrrhiza Uralensis And Its Medicinal Preparations
By Capillary Electrophoresis With Electrochemical Detection. J
Chromatogr A ;1042:203–209. [Pubmed: 15296407]

Chakraborty, P and Ramakrishnan, M., 2016. Role of P-glycoprotein in

Chemotherapeutic Drug Resistance and Mechanisms of Pump Deactivation
to Overcome MDR in Cancer Cells – A Critical Review. 1(2), pp. 31–38.

Chan, SC., Chang, YS., Wang, JP., Chen, SC., and Kuo, SC., 1998. Three new
flavonoids and antiallergic, anti-inflammatory constituents from the
heartwood of Dalbergia odorifera. Planta Med 64:153–158.

Chander, S., Tang, C.R., Al-Maqtari, H.M., Jamalis, J., Penta, A., Hadda, T.B.,
Sirat, H.M., Zheng, Y.T., Sankaranarayanan, M., 2017. Synthesis and study
of anti-HIV-1 RT activity of 5-benzoyl-4-methyl-1,3,4,5-tetrahydro-2h-
1,5-benzodiazepin-2-one derivatives. Bioorg Chem. 72:74–79.
doi:10.1016/j.bioorg.2017.03.013.
 85

Chen, H.Y., Huang, T.C., Shieh, T.M., Wu, C.H., Lin, L.C., and Hsia, S.H., 2017.
Isoliquiritigenin Induces Autophagy And Inhibits Ovarian Cancer Cell
Growth. International Journal Of Molecular Sciences. 18. 2025

Chikhi, A and Bensegueni, A., 2008. Comparative Study of the Efficiency of Three
Protein-Ligand Docking Programs. Journal of Proteomics &
Bioinformatics, Volume 1(3) :161-165

Chipuk, J.E., MoLDoveanu, T., Llambi, F., Parsons, M.J., Green, D.R., The BCL-
2 family reunion. Molecular cell. 2010;37:299–310

Chuanasa, T., Phromjai, J., Lipipun, V., Likhitwitayawuid K., Suzuki, M.,
Pramyothin, P., Hattori, M., Shiraki, K.., 2008. Anti-herpes simplex virus
(HSV-1) activity of Oxyresveratrol derived from Thai medicinal plant:
Mechanism of action and therapeutic efficacy on cutaneous HSV-1
infection in mice. Antiviral research. Vol 80 Hal :62-70

Chung, KO., Kim, BY., Lee, MH., Kim, YR., Chung, HY., Park, JH., Moon, JO.,
2003. In-vitro and in-vivo anti-inflammatory effect of Oxyresveratrol from
Morus alba L.J Pharm Pharmacol. Vol 55(12):1695-700

Chung, S.H., and Lambert P.F., 2009. Prevention And Treatment Of Cervical
Cancer In Mice Using Estrogen Receptor Antagonists. Usa; Proc Natl Acad
Sci.

Chung, S.H., Franceschi, S., Lambert, P.F., 2010. Estrogen and ERa: Culprits in
cervical cancer?. Trends in Endocrinology and Metabolism. Hal 504–51

Chung, S.H., Shin, M.K., Korach, K.S., Lambert, P.F. 2013. Requirement For
Stromal Estrogen Receptor Alpha In Cervical Neoplasia. Horm Cancer.
4(1). 50–59

Chung, SH., Shin, MK., Korach, KS., and Lambert, PF.. Requirement for
stromal estrogen receptor alpha in cervical neoplasia. Horm Cancer.
2013;4:50–9

CLCbio, 2013, Molegro Virtual Docker User Manual, MVD 2013.6.0 for Windows,
Linux, and Mac OS X, Molegro A CLC bio company
 86

Clemente, J.C., Moose, R.E.,Hemrajani, R., Whitford, L.R.S., Govindasamy, L.,

Reutzel, R., Mckenna, R., Agbandje-Mckenna, M., Goodenow, M,M., And
Dunn, B.M., 2004. Comparing The Accumulation Of Active- And
Nonactive-Site Mutations In The Hiv-1 Protease. Biochemistry, Vol. 43, No.
38,

Cronquist, A. 1981. An Intergrated System of Clasification of Flowering Plants.

New York: Columbia University Press.

Cuendet, M., Guo, J., Luo, Y., Chen, S., Oteham, C.P., Moon, R.C., Breemen, R.B.
Van., Marler, L.E., And Pezzuto, J.M., 2010. Cancer Chemopreventive
Activity And Metabolism Of Isoliquiritigenin, A Compound Found In
Licorice. Cancer Prev Res (Phila) 3(2)

Dai, H., Meng, X.W., Kaufmann, S. H., 2016. BCL2 Family, Mitochondrial
Apoptosis, and Beyond. Cancer Translational Medicine 2(1):7–20

Dias, R., de Azevedo, W.F., 2008. Molecular Docking Algorithms. Current Drug
Targets 9:1040-1047.

Dipiro.J.T, Talbert R.I. and Yee G.C., 2009, Pharmacoterapy Handbook 7th
edition,. New York. Mc Graw Hill

Djalil, A.D., Kartasasmita, R.E. Surantaatmaja, S.I., and D.H.,Tjahjono, 2012 :

Toxicity Prediction of Photosensitizer Bearing Carboxylic Acid Groups by
ECOSAR and TOXTREE, Journal of Pharmacology and Toxicology .7 (5),
219-230

Donatus, I.A. 2005. Toksikologi Dasar. Laboratorium Farmakologi dan

Toksikologi. Fakultas Farmasi. UGM. Yogyakarta

Drwal, M. N., Banerjee, P., Dunkel, M., Wettig, M. R., & Preissner, R. 2014.
ProTox: a web server for the in silico prediction of rodent oral toxicity.
Nucleic Acids Research, 42(W1), W53–W58.
http://doi.org/10.1093/nar/gku401
 87

Ebadi, A., Razzaghi-Aslc,N., Shahabipour, S., And Miri, R., 2014. Ab-Initio And
Conformational Analysis Of A Potent Vegfr-2 Inhibitor: A Case Study On
Motesanib. Iranian Journal Of Pharmaceutical Research, 13 (2): 405-415

Ekins, S., Mestres, J and Testa, B., 2007. In Silico Pharmacology For Drug
Discovery: Methods Fo Virtual Ligand Screening And Profiling. British
Journal Of Pharmacology, 152, 9-20.

El-Din, H. M. A., Loutfy, S. A., Fathy, N., Elberry, M.H, Mayla, A.M., Kassem,
S., Naqvi, A., 2016. Molecular docking based screening of compounds
against VP40 from Ebola virus. Bioinformation. 12(3): 192-196

Fang, S.C., C.L. Hsu and G.C. Yen, 2008. Anti-inflammatory effects of
phenolic compounds isolated from the fruits of Artocarpus
heterophyllus. J. Agric. Food Chem. 56: 4463-4468.

Faridi, R., Zahra, A., Khan, K., and Idrees, M., 2011. Oncogenic Potential Of
Human Papillomavirus (Hpv) And Its Relation With Cervical Cancer.
Virology Journal. 8:269

Ferwadi, S., Gunawan, R., Astuti, W., 2017. Studi Docking Molekular Senyawa
Asam Sinamat Dan Derivatnya Sebagai Inhibitor Protein 1J4X Pada Sel
Kanker Serviks. Jurnal Kimia Mulawarman. Volume 14 Nomor 2.

GeLDenhuys, W,J., Gaasch Kevin E., Watson M., Allen David D., and Van der
Schyf Cornelis J. 2006 . Optimizing the use of open-source software
applications in drug discovery. DDT, 11 (3/4), 127-132

Guedes, I.A., & Magalhães, C.S.D., Dardenne, L.E., 2014. Review : Receptor–
Ligand Molecular Docking. Biophys Rev 6:75–87

Guo, S., Colbert L.s, McGlothen, T.Z and Gonzalez-Perez R. R., 2012. Regulation
of Angiogenesis in Human Cancer via Vascular Endothelial Growth Factor
Receptor-2 Tumor Angiogenesis, Sophia Ran, IntechOpen, DOI:
10.5772/27370.
 88

Haliemariam, T., Yohannes, B., Aschenaki, H., Mamaye, E., Orkaido, G., and Seta,
M., 2017. Prevalence Of Cervical Cancer And Associated Risk Factors
Among Women Attending Cervical Cancer Screening And Diagnosis
Center At Yirgalem General Hospital, Southern Ethiopia. Journal Cancer
Science & Therapy. Volume 9 (11) 730-735

Hamzah, N., Najib, A., Dan S, Fatmawati., 2014. Studi Farmakofor Reseptor
Estrogen. Jf Fik Uinam Vol.2 No.4

Hardjono, S., 2016. Prediksi Sifat Farmakokinetik, Toksisitas dan Aktivitas

Sitotoksik Turunan N-Benzoil-N’-(4-fluorofenil)tiourea sebagai Calon Obat
Antikanker melalui Pemodelan Molekul. Jurnal Ilmu Kefarmasian
Indonesia, Vol. 14, No.2 hlm. 246-255

Hattenschwiller, S and Vitousek, P. M. 2000. The Role of Polyphenols

Interrestrial Ecosystem Nutrient Cycling. Review PII: S0169-
5347(00)01861-9 TREE vol. 15

Hevener KE, Zhao W, Ball DM, Babaoglu K, Qi J, White SW, et al. Validation of
molecular docking programs for virtual screening against dihydropteroate
synthase. J Chem Inf Model. 2009;49(2):444-60.

Hewitt SC, Harrell JC, Korach KS. 2005. Lessons in estrogen biology from
knockout and transgenic animals. Annual review of physiology.Volume
67:285–308.

Hinchliffe, A., 2008. Molecular Modeling for Beginners. 2nd ed., Chichester : John
Wiley and Sons Ltd.

Hirchaud, F., Hermetet, F., Ablise, M., Fauconnet, S., Vuitton, D. A., Prétet, J.,
Mougin, C., 2013. Isoliquiritigenin induces caspase-dependent apoptosis
via downregulation of HPV16 E6 expression in cervical cancer Ca Ski cells.
Planta Med. 79(17):1628-35
 89

Hoi, P.M.,Li, S., Vong, C.T., Tseng, H.H.L., Kwan, Y.W., Lee, S.M-Y., 2015.
Recent Advances In Structure-Based Drug Design And Virtual Screening
Of Vegfr Tyrosine Kinase Inhibitors. Methods,71, Pp. 85-91

Hsu, Y.L., Kuo, P.L., Chiang, L.C ., and Lin, C.C., 2004 , Isoliquiritigenin Inhibits
The Proliferation And Induces The Apoptosis Of Human Non-Small Cell
Lung Cancer A549 Cells. Clinical And Experimental Pharmacology And
Physiology. 31, 414–418

Iwashita, K., Kobori, M., Yamaki, K., Tsushida, T., 2000. Flavonoids Inhibit Cell
Growth And Induce Apoptosis In B16 Melanoma 4a5 Cells. Bioscience
Biotechnology And Biochemistry. 64: 1813

Jach, R., Dulinska-Litewka, J., Laidler, P., Szczudrawa, A., Kopera, A., Szczudlik,
L., Pawlik, M., Zajac, K., Mak, M., Basta, A., 2010. Expression of VEGF,
VEGF-C and VEGFR-2 in in situ and invasive SCC of cervix. Frontiers in
Bioscience. E2, 411-423

Kape, R., Parniske, M., Brandt, S., Werner, D., 1992. Isoliquiritigenin, A Strong
Nod Gene- And Glyceollin Resistance-inducing Flavonoid From Soybean
Root Exudate. Appl Environ Microbiol .;58:1705–1710. [Pubmed:
1622242]

Kartasasmita, R.E., Herowati, R., and Gusdinar, T., 2010. Docking Study Of
Quercetin Derivatives On Inducible Nitric Oxide Synthase And Prediction
Of Their Absorption And Distribution Properties. Journal Of Applied
Sciences 10(23): 3098-3104.

Katno, S dan Pramono, 2002, Tingkat Manfaat dan Keamanan Tanaman Obat
dan Obat Tradisional, Fakultas Farmasi UGM, Yogyakarta.

Keman, Kusnandar. 2014. Patomekanisme Preeklamsia Terkini : Mengungkap

teori teori terbaru tentang patomekanisme preeklamsia dilengkapi dengan
deskripsi biomolekular. Malang. UB Press

Kesuma, D., Siswandon., Purwanto, B.T dan Hardjon S., 2018. Uji In silico
Aktivitas Sitotoksik dan Toksisitas Senyawa Turunan N-(Benzoil)-N’-
 90

Feniltiourea Sebagai Calon Obat Antikanker. Journal Of Pharmaceutical

Science And Clinical Research. Volume 1

Khazanov, N.A and Carlson, H.A., 2013 Exploring the Composition of Protein-
Ligand Binding Sites on a Large Scale. PLoS Comput Biol 9(11): e1003321.
https://doi.org/10.1371/journal.pcbi.1003321

Kong L, Zhang Y, Pan X, Tan R, Cheng C, 2000. Inhibition Of Xanthine Oxidase

By Liquiritigenin And Isoliquiritigenin Isolated From Sinofranchetia
Chinensis. Cell Mol Life Sci;57:500–505. [Pubmed: 10823249]

Kotadiya, R., and Georrge, J.J., 2015. In silico Approach To Identify Putative Drugs
From Natural Products For Human Papillomavirus (Hpv) Which Cause
Cervical Cancer. Life Science Leaflets. Volume 25., Hal 1-13

Kumar, M.M., Davuluri, S., Poojar, S., Mukherjee, G., Bajpai, A.K., Bafna, U.D.,
Devi, U.K.., Kallur, P. P. R., Kshitish, A. K., Jayshree, R. S., 2015.
Role Of Estrogen Receptor Alpha In Human Cervical Cancer-Associated
Fibroblasts: A Transcriptomic Study. International Society Of Oncology
And Biomarkers (Isobm)

Kurnia Y., 2014, Farmakoterapi Mutakhir Keganasan. J. Kedokteran Meditek Vol.

20 No. 53.

Kusumaningrum, S., Budianto, E., Kosela, S., Sumaryono, W., Juniarti, F., 2014.
The molecular docking of 1,4-naphthoquinone derivatives as inhibitors of
Polo-like kinase 1 using Molegro Virtual Docker. Journal of Applied
Pharmaceutical Science. Vol. 4 (11), pp. 047-053

La, DS., Belzile, J., Bready, JV., Coxon, A., DeMelfi, T., Doerr, N., Estrada,
J., Flynn, JC., Flynn, SR., Graceffa, RF., Harriman, SP., Larrow, JF., Long,
AM., Martin, MW., Morrison, MJ., Patel, VF., Roveto, PM., Wang,
L., Weiss, MM., Whittington, DA., Teffera, Y., Zhao, Z., Polverino,
AJ., Harmange, JC., 2008. Novel 2,3-dihydro-1,4-benzoxazines as potent
and orally bioavailable inhibitors of tumor-driven angiogenesis. J Med
Chem. 51(6):1695-705.
 91

Levinson, W.E. 2008. Review of Medical Microbiology and Immunology Ten

edition. San Fransisco. McGraw-Hill Education.

Liana, L.F.A, 2017. Ektrak Metanolik Daun Rosemary (rosmarinus officinalis L.)
sebagai Agen Kemopreventif Terhadap Sel Kanker Serviks (hela) Melalui
regulasi Bcl-2. [SKIRPSI]. Yogyakarta. Universitas Sanata Dharma

Likhitwitayawuid, K., Sornsute, A., Sritularak, B and Ploypradith P.,

2006. Chemical transformations of Oxyresveratrol (trans-2,4,3,5
tetrahydroxystilbene) into a potent tyrosinase inhibitor and a strong
cytotoxic agent. Bioorganic Med. Chem. 16: 5650-5653.

Lipinski, CA., Lombardo, F., Dominy, BW and Feeney, FJ., 1997. Experimental
and computational approaches to estimate solubility and permeability in
drug discovery and development settings. Advanced Drug Delivery
Reviews. 23: 3-25.

Loddo, M., Kingsbury, Sr., Rashid, M., Proctor, I., Holt, C, Young, J., El-Sheikh,
S., Falzon, M., Eward, Kl., Prevost, T., Sainsbury, R., Stoeber, K and
Williams, Gh., 2009. Cell-Cycle-Phase Progression Analysis Identifies
Unique Phenotypes Of Major Prognostic And Predictive Significance In
Breast Cancer. British Journal Of Cancer .Vol 100, 959 – 970.

Lodish, H., Berk, A., Zipursky, S., Matsudaira, P., Baltimore, D and Darnell, J.,
2000. Molecular Cell Biology 4th Edition. New York: W.H. Freeman
Company.

Longatto-Filho A, Pinheiro C, Martinho O, Moreira MA, Ribeiro LF, Queiroz

GS, Schmitt FC, Baltazar F, Reis RM. 2009. Molecular characterization of
EGFR, PDGFRA and VEGFR2 in cervical adenosquamous carcinoma.
BMC Cancer 9:212

Lorenz, P., Roychowdhury, S., Engelmann, M., Wolf, G., Horn, T.F.W., 2003.
Oxyresveratrol and resveratrol are potent antioxidants and free radical
scavengers: Effect on nitrosative and oxidative stress derived from
microglial cells. NitricOxide. Volume 9, Issue 2. Hal 64-76
 92

Ma, J., Fu, N.Y., Pang, D.B., Wu, W.Y. and Xu, A.L., 2001. Apoptosis Induced By
Isoliquiritigenin In Human Gastric Cancer Mgc-803 Cells. Planta Med. Vol
67

Mahalingam, S., Gao, L., Eisner, J., Helferich, W., Flaws and Jodi, A., 2016. Effects
of Isoliquiritigenin on ovarian antral follicle growth and steroidogenesis.
Reproductive Toxicology.Vol 66 Hal 107–114

Mala, S.K., Priya, A.P., Bincy B And Nazeem P.A.,2014. Bioactive Compounds
To Target Anti Apoptotic Proteins- Bcl 2 And Bcl Xl An In silico Approach.
Ijpsr (2015), Vol. 6, Issue 7

Marcou G and Rognan D., 2007. Optimizing fragment and scaffoLD docking by
use of molecular interaction fngerprints. Journal of Chemical Information
and Modeling. 47(1):195-207.

Martel, C.D., Plummer, M., Vignat, J and Franceschi, S., 2017. WorLDwide
burden of cancer attributable to HPV by site, country and HPV type.
international Journal of Cancer :141, 664–670

Mealey, K. L., Waiting, D., Raunig, D. L., Schmidt, K. R., Nelson, F. R. Oral
bioavailability of P-glycoprotein substrate drugs do not differ between
ABCB1- 1∆ and ABCB1 wiLD type dogs. J. vet. Pharmacol. Therap. 33,
453–460.

Meng, F. 2013. Molecular Dynamics Simulation of VEGFR2 with Sorafenib and

Other Urea-Substituted Aryloxy Compounds. Journal of Teoretical
Chemistry.

Minggarwati, 2017. Uji Aktivitas Antikanker dan Identifikasi Senyawa Aktif dari
Fraksi Umbi Bawang Sabrang (Eluetherine palmifolia (L.) Merr.) Terhadap
Sel Kanker Hela. [SKRIPSI]. Malang. Universitas Islam Negeri Maulana
Malik Ibrahim Malang

Moga, M.A., Dimienescu, O.G., Arvatescu, C.A .,Mironescu, A., Dracea, L., Ples
L., 2016. The role of natural polyphenolsin the preventiions and treatmen of
cervical cancer-an overview. Moleculs. Volume 21. Nomor 1055:1-22
 93

Muchtaridi., Yannuar, A., Megantara, S., Purnomo, H., 2018. Dasar-dasar dalam
perancangan obat edisi pertama. Jakarta. Prenadamedia Group

Mumpuni, E., Nurrochmad, A., Jenie, U.A., Pranowo, H.D., 2015. Penapisan
Virtual Dan Elusidasi Moda Ikatan Analog Kurkumin Pada Enzim
Siklooksigenase-2 Menggunakan Protokol Ee_Cox2_V.1.0. Jurnal Ilmu
Kefarmasian Indonesia. Vol. 13, No.2. Hlm. 235-241

Murray and Hunt. 1993. The cell cycle, an introduction. New York: Oxford
University Press

Muslimin, 2014. Pendidikan Agama Islam, Yogyakarta: Deepublish

Mutiah, R., Griana, T.P., Ma’arif, B., 2017. Chemoprevention Of Bawang

Dayak/Sabrang (Eleutherine Palmifolia (L.) Merr.) Extracts To Colitis-
Associated Colon Cancer Model As The Application Of Al Qur’an Surah
Al-Baqoroh Verse 61. Seminar Proposal Bantuan Penelitan Riset
Kolaboratif Internasional

Mycek, M. J, Harvey, R.A. and Champe, P.C., 2001, Farmakologi Ulasan

Bergambar 2nd ed. H. Hartanto, ed., Jakarta, Widya Medika.

Narisawa‐Saito, Mako and Kiyono, Tohru., 2007. Basic mechanisms of high‐risk

human papillomavirus‐induced carcinogenesis: Roles of E6 and E7
proteins. Cancer Sci. Vol 98: 1505–1511

Nelson, D., and Cox, M., 2001. Lehninger Principles of Biochemistry 4th Edition
(86-117). Wisconsin: W.H.Freeman Company.

Ng, H.W., Zhang, W., Shu, M., Luo, H., Ge, W., Perkins, R., Tong, W., Hong, H.,
2014. Competitive molecular docking approach for predicting estrogen
receptor subtype a agonists and antagonists. BMC Bioinformatics.
Vol.15(Suppl 11)

Nilsson S, Makela S, Treuter E, Tujague M, Thomsen J, Andersson G, 2001.

Mechanisms of estrogen action. Physiol Rev. ;81:1535–1565
 94

Nilsson, S., Kela, S.M., Treuter, E., Tujague, M., Thomsen, J., Andersson, G. R.,
Enmark, E, Pettersson, K., Warner, M., and Gustafsson, J.Å, 2001.
Mechanisms of esterogen action. Physol. American Psycological society
.Volume 81 : 1535-1565

OLDoni, T.L.C., Cabral, I.S.R., d’Arce, M.A.B. Regitano., Rosalen, P.L., Ikegaki,
M., Nascimento, A.M., Alencar, S.M., 2011. Isolation And Analysis Of
Bioactive Isoflavonoids And Chalcone From A New Type Of Brazilian
Propolis. Separation And Purification Technology. 77. 208-213.

Pan, X., Kong, L., Zhang, Y., Cheng, C., and Tan, R.. 2000. In Vitro Inhibition Of
Rat Monoamine Oxidase By Liquiritigenin And Isoliquiritigenin Isolated
From Sinofranchetia Chinensis. Acta Pharmacol Sin. Vol 21:949–953.
[Pubmed: 11501051]

Pandian, S., P, Senthilraja and S, Kalavathy., 2012. In-Silico Docking Analysis Of

Calotropis Gigantea (L.) R.Br Derived Compound Against Anti-Cervical
Cancer Activity. Journal of Computer-Aided Drug Design Volume 1, Issue
1

Perez, H. L., Banfi, P., Bertrand, J. A., Cai, Z.-W., Grebinski, J. W., Kim, K., Lippy,
J., Modugno, M., Naglich, J., Schmidt, R. J., Tebben, A., Vianello, P., Wei,
D. D., Zhang, L., Galvani, A., Lombardo, L. J., Borzilleri, R. M., 2012.
Identification of a phenylacylsulfonamide series of dual Bcl-2/Bcl-xL
antagonists. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 22:3946–3950.

Pires, D.E.V., Blundell, T.L., and Ascher, D.B., 2015. pkCSM: Predicting Small-
Molecule Pharmacokinetic and Toxicity Properties Using Graph-Based
Signatures. Journal of Medical Chemistry. Vol 58. Hal. 4066-4072

Prasojo, SL., Hartanto, FA., Yuniarti, N., Ikawati, Z., Istyastono, EP., 2010.
Docking of 1-Phenylsulfonamide- 3Trifluoromethyl-5-parabromophenyl-
pyrazole to cyclooxygenase-2 using PLANTS. Indonesian Journal of
Chemistry. 10(3):348-51.

Pratama, M.R.F., 2016. Studi Docking Molekular Senyawa Turunan Kuinolin

Terhadap Reseptor Estrogen-Α. Jurnal Surya Medika Volume 2 No. 1

Prawirohardjo, S. 2010. Buku Acuan Nasional Onkologi 10. 11. 12. 13.Ginekologi.
Jakarta, Indonesia: YBP-SP.
 95

Priyanto, 2007, Toksisitas radikal bebas, Dalam: Sunaryo H.ED, Toksisitas Obat,
Zat kimia dan terapi antidotum. Edisi ke 1. Depok, Leskonfi, 43-54.

Ramadan M, Kamel M, Ohtani K, Kasai R, Yamasaki K. 2000. Minor Phenolics

From Crinum Bulbispermum Bulbs. Phytochemistry;54:891–896. [Pubmed:
11014284]

Ramakrisnan, S., Partricia, S., Mathan, G., 2015. Overview of high-risk HPV’s 16
and 18 infected cervical cancer: Pathogenesis to prevention. Biomedicine &
Pharmacotherapy .Volume 70 Hal 103–110

ReisfeLD, B. and Mayeno, A. N. 2012. Computational Toxicology. Volume I. New

York. Humana Press.

Rizzo, D.C. 2016. Fundamentals of anatomy and physiologi, fourth edition. Boston.
Cengage Learning

Ruswanto, 2015. Molecular Docking Empat Turunan Isonicotinohydrazide Pada

Mycobacterium Tuberculosis Enoyl-Acyl Carrier Protein Reductase
(InhA). Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada .Volume 13 Nomor 1

Ruswanto, S., Richa,M., Tita, N., Tresna, L.,2017. Molecular Docking of 1-

Benzoyl-3-methylthiourea as Anti Cancer Candidate and Its Absorption,
Distribution, and Toxicity Prediction, Journal of Pharmaceutical Science
and Research, Vol. 9(5), Hal 680-684.

Sak, K. 2014. Characteristic Features of Cytotoxic Activity of Flavonoids on

Human Cervical Cancer Cells. Asian Pacifc Journal of Cancer Prevention,
Vol 15. :8007-8018

Sangsen, Y., Sooksawate, T., Likhitwitayawuid, K., Sritularak, B.,

Wiwattanapatapee, R,. 2018. A Self-Microemulsifying Formulation of
Oxyresveratrol Prevents Amyloid Beta Protein-Induced Neurodegeneration
in Mice. Planta med.
 96

Sasaki, Y., Iwanari, O., Arakawa, I., Moriya, T., Mikami, Y., Iihara, K., and K,
Ryo., 2017. Cervical Cancer Screening With Human Papillomavirus Dna
And Cytology In Japan. International Journal Of Gynecological Cancer.
Volume 27, Number 3

Schlick, T., 2010. Molecular Modeling and Simulation, A InterdisciplinaryGuide.

2nd ed., New York: Springer Science+Business Media

Seno, D.W.H, Mochtar, C.A., Umbas, R., 2011. Terapi Sistemik Terkini pada
Karsinoma Sel Ginjal Metastatik. Terapi Sistemik Terkini pada Karsinoma
Sel Ginjal Metastatik. Indonesian Journal of Cancer Vol. 5, No. 3

Setiawan, F. F., Istyastono, E P., 2015. Uji In silico Senyawa 2,6-

Dihidroksiantraquinon Sebagai Ligan Pada Reseptor Estrogen Alfa.
Jurnal Farmasi Sains Dan Komunitas. Vol. 12 No. 2. Hlm. 77-80

Setiawan, S.D., 2015. The Effect Of Chemotherapy In Cancer Patient To Anxiety.

J Majority. Volume 4 Nomor 4. Hal. 94-99

Shai, A., Brake, T., Somoza, C. and Lambert, P.F., 2007. The Human
Papillomavirus E6 Oncogene Dysregulates the Cell
Cycle and Contributes to Cervical Carcinogenesis through
Two Independent Activities. Cancer Res. Volume 67 (4). Hal 1626- 1635

Shibuya, M., 2011. Vascular Endothelial Growth Factor (Vegf) And Its Receptor
(Vegfr) Signaling In Angiogenesis: A Crucial Target For Anti- And Pro-
Angiogenic Therapies. Mongraph Genes & Cancer . Vol 2 No 12

Shihab, Q. 2002. Tafsir Al-misbah pesan, kesan, dan keserasian Al-Quran Volume
II. Jakarta:Lentera Hati

Siswandono, 2016. Kimia Medisinal 1: Edisi kedua. Surabaya. Airlangga

University Press
 97

Sulaiman, S.N., Mat-Isa, N.A., Othman, N.H., Ahmad, F., 2015. Improvement of
Features Extraction Process and Classification of Cervical Cancer for the
NeuralPap System. Procedia Computer Science .Volume 60: hal 750 – 759

Supandi., Yeni., Merdekawati F., 2018. In Silico Study of

Pyrazolylaminoquinazoline Toxicity by Lazar, Protox, and Admet
Predictor. Journal of Applied Pharmaceutical Science .Vol. 8(09), pp 119-
129

Sur, T, 2014. The Role of HPV 16 E5 Protein and Its Interacting Partners inCervical
Cancer Cases. Journal of Tumor. 2(7): 179-186

Tang, Y.& Marshall, G., 2011. Drug Design and Discovery: Virtual Screening for
Lead Discovery (1-5). New York. Humana Press

Thomsen., R and Christensen, MH., 2006. MolDock: A New Technique for High-
Accuracy Molecular Docking. J Med Chem. 49(11): 3315-3321.

Tsai, T.-C and Chen, S.-L, 2003. The biochemical and biological functions of
human papillomavirus type 16 E5 protein. Archieves Virology, Volume
148:1445-1453

Ugale, V.G., Patel, H.M., Surana, S.J., 2017. Molecular modeling studies of
quinoline derivatives as VEGFR-2 tyrosine kinase inhibitors using
pharmacophore based 3D QSAR and docking approach. Arabian Journal of
Chemistry. 10, S1980–S2003

Virgili et al., 2004. Nutritional flavonoids modulate estrogen reseptor α signaling.

IUBMB Life. Volume 56, Nomor 3: 145-151

Wang, J.Y., Yeh, C.L., Chou, H.C., Yang, C.H., Fu, Y.N., Chen, Y.T., Cheng,
H.W., Huang, C.Y.F., Liu, H.P., Huang, S.F., and Chen, Y.R. 2011.
Vaccinia H1-related Phosphatase Is a Phosphatase of ErbB Receptors and
Is Down-regulated in Non-small Cell Lung Cancer. The Journal Of
Biological Chemistry Vol. 286, No. 12, hal 10177–10184
 98

Wang, Z., Wang, N., Liu, P., Chen, Q., Situ, H., Xie, T., Zhang, J., Peng, C., Lin,
Y., Chen, J., 2014. MicroRNA-25 regulates chemoresistance-associated
autophagy in breast cancer cells, a process modulated by the natural
autophagy inducer isoliquiritigenin. Oncotarget. ;5:7013–7026

Wang, Z.,, Wang, N., Han, S., Wang, D., Mo, S., Yu, L., Huang, H., Tsui, K., Shen,
J., Chen, J., 2013. Dietary Compound Isoliquiritigenin Inhibits Breast
Cancer Neoangiogenesis via VEGF/VEGFR-2 Signaling Pathway. PLOS
ONE.Volume 8. Issue 7

Weyhenmeyer, B., Murphy, A.C., Prehn, J.H.M., & Murpphy, B.M., 2012.
Targeting the anti-apoptotic Bcl-2 Family Members for the Treatment of
cancer. Exprimental Oncology. 34(3) 192-199

Wijaya C. A Dan Muchtaridi M, 2017. Pengobatan Kanker Melalui Metode Gen

Terapi. Jurnal Farmaka. Volume 15 Nomor 1.

Williams G H and Stoeber K, 2012. The cell cycle and cancer. Journal of Pathology
Volume. 226: 352–364

Wu S.., Vossius, S.., Rahmouni, S., Miletic, A.V., Vang, T., Vazquez R.J.,
Cerignoli, F., Arimura, Y., Williams, S., Hayes, T, Moutschen, M., Vasile,
S., Pellecchia, M., Mustelin, T., and Tautz, L., (2009). Multidentate Small-
Molecule Inhibitors of Vaccinia H1-Related (VHR) Phosphatase Decrease
Proliferation of Cervix Cancer Cells. . Medical Chem. Vol 52, 6716–6723

Wu, C.H., Chen, H.Y., Wang, C.W., Shieh, T.M., Huang, S., Lin, L.C., Wang, K.L.,
Hsia, S.M., 2016. Isoliquiritigenin Induces Apoptosis And Autophagy And
Inhibits Endometrial Cancer Growth In Mice. Oncotarget, Vol. 7, No. 45

Xiong, Y., D.A. Guo and H.L. Huang, 2008. Chemical constituents from
tubers of Smilax china L. Modern Chinese Med., 10: 20-22.

Xu, L., liu, C., Xiang, W., Chen, H., Xin, Q., Huan, X., 2014. Advances in the study
of Oxyresveratrol. International of journal pharcology. 10(1): 44-54
 99

Yahalom. R., Reshef, D., Wiener, A., Frankel, S., Kalisman, N., Lerner, B., Keasar,
C., 2011. Structure-based identification of catalytic residues. Proteins 79:
1952–1963.

Yamamoto, K., Ichijo H Korsmeyer A.S.J., 1999. Bcl-2 Is Phosphorylated And

Inactivated By An Ask1/Jun N-Terminal Protein Kinase Pathway Normally
Activated At G2/M. Molecular And Cellular Biology. Vol. 19, No. 12

Young, D.C., 2009. Computational Drug Design, A Guide for Computational and
Medicinal Chemists. New York. Ohn Wiley and Sons.

Zulies, I., 2008. Pengantar Farmakologi Molekuler. Yogyakarta. UGM Press

 100

LAMPIRAN

LAMPIRAN 1. Hasil Analisis Statistik ANOVA Pada reseptor 4AQ3 (E)

ANOVA
RerankScore
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 3322,932 2 1661,466 39,553 ,000
Within Groups 252,036 6 42,006
Total 3574,968 8
Multiple Comparisons
Dependent Variable: RerankScore
LSD
Mean 95% Confidence Interval
Difference
(I) Kelompok (J) Kelompok (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound
*
Pembading BCL-2 Isoliquiritigenin BCL-2 -44,670333 5,291879 ,000 -57,61910 -31,72157
*
Oxyresveratrol BCL-2 -35,176000 5,291879 ,001 -48,12476 -22,22724
Isoliquiritigenin BCL-2 Pembading BCL-2 44,670333* 5,291879 ,000 31,72157 57,61910
Oxyresveratrol BCL-2 9,494333 5,291879 ,123 -3,45443 22,44310
*
Oxyresveratrol BCL-2 Pembading BCL-2 35,176000 5,291879 ,001 22,22724 48,12476
Isoliquiritigenin BCL-2 -9,494333 5,291879 ,123 -22,44310 3,45443
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
 101

LAMPIRAN 2. Hasil Analisis Statistik ANOVA Pada reseptor 2RL5

ANOVA
RerankScore
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 5754,316 2 2877,158 490,048 ,000
Within Groups 35,227 6 5,871
Total 5789,543 8
Multiple Comparisons
Dependent Variable: RerankScore
LSD
Mean Std. 95% Confidence Interval
(I) Kelompok (J) Kelompok Difference (I-J) Error Sig. Lower Bound Upper Bound
Pembanding VEGFR-2 Isoliquiritigeinin -55,969667* 1,978414 ,000 -60,81067 -51,12866
VEGFR-2
Oxyresveratrol VEGFR- -50,956667* 1,978414 ,000 -55,79767 -46,11566
2
Isoliquiritigeinin Pembanding VEGFR-2 55,969667* 1,978414 ,000 51,12866 60,81067
VEGFR-2 Oxyresveratrol VEGFR- 5,013000* 1,978414 ,044 ,17200 9,85400
2
Oxyresveratrol VEGFR- Pembanding VEGFR-2 50,956667* 1,978414 ,000 46,11566 55,79767
2 Isoliquiritigeinin -5,013000* 1,978414 ,044 -9,85400 -,17200
VEGFR-2
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
102