Makalah Fitokimia Flavonoid
Makalah Fitokimia Flavonoid
Makalah Fitokimia Flavonoid
FLAVONOID
Dosen Pembimbing : Choirul Huda S.Farm.,Apt
KELOMPOK I
1.
2.
3.
4.
1413206008
1413206016
1413206020
1413206036
S1- FARMASI
KATA PENGANTAR
Puji syukur kami panjatkan kehadirat Allah S.W.T, karena berkat rahmat dan karuniaNya penyusunan
Makalah yang bejudul Flavonoid ini dapat terselesaikan dengan baik.
1 | Page
Makalah ini disusun dalam rangka memenuhi salah satu tugas dari mata kuliah FITOKIMIA. Penyusunan
Makalah ini tidak terlepas dari bantuan pihak-pihak terkait. Untuk itu kami ingin mengucapkan terima kasih
yang sebesar - besarnya kepada :
1.
Allah S.W.T. atas limpahan rahmat dan karunia-Nya yang tak akan pernah terhitung,
2.
Bapak Choirul Huda S.Farm.,Apt Selaku Dosen Mata Kuliah Fitokimia yang telah meluangkan waktu,
bimbingan, dan pengarahan dalam rangka penyelesaian penyusunan makalah ini.
3.
Kepada teman-teman kelompok yang kompak , baik dan yang telah berusaha untuk membantu
menyelesaikan makalah.
Kami sadari dalam penyusunan Makalah ini masih banyak sekali kekurangannya, untuk itu saran dan kritik
yang sifatnya mendukung sangat kami harapkan dari para pembaca, guna memperbaiki kesempurnaan Makalah
ini agar lebih baik lagi untuk kedepannya.
Akhir kata semoga Makalah ini dapat bermanfaat bagi kita semua dan semoga dorongan dan restu kita semua
mendapatkan balasan dari Allah S.W.T.
Penyusun
DAFTAR PUSTAKA
Halaman Judul...................................................................................................................1
Kata pengantar...................................................................................................................2
Daftar isi..............................................................................................................................3
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang...........................................................................................................4
1.2 Tujuan........................................................................................................................5
1.3 Rumusan Masalah......................................................................................................5
2 | Page
BAB II ISI
2.1 Definisi Flavonoid.....................................................................................................6
22. Karakterisasi dari flavonoid.......................................................................................7
2.3 Klasifikasi Flavonoid.................................................................................................8
2.4 Penyebaran dialam ....................................................................................................14
2.5 Cara Ekstraksi dan Isolasi flavonoid.........................................................................15
2.6 Cara fraksinasi Flavonoid..........................................................................................16
2.7 Cara Mengidentifikasi Senyawa Flavonoid...............................................................17
BAB III PENUTUP
3.1 Kesimpulan...............................................................................................................28
3.2 Saran..........................................................................................................................28
DAFTAR PUSTAKA
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Indonesia merupakan negara kepulauan yang terletak di zona khatulistiwa (tropik) dan terkenal
mempunyai kekayaan alam dengan beranekaragam jenis tumbuhan, tetapi potensi ini belum seluruhnya
dimanfaatkan sebagai bahan industri khususnya tumbuhan berkasiat obat. Masyarakat Indonesia secara turuntemurun telah memanfaatkan berbagai jenis tumbuhan untuk bahan obat tradisional baik sebagai tindakan
pencegahan maupun pengobatan terhadap berbagai jenis penyakit. Pemanfaatan tumbuhan obat tradisional
akan terus berlangsung terutama sebagai obat alternatif, hal ini terlihat pada masyarakat daerah yang sulit
dijangkau oleh fasilitas kesehatan modern. Dalam masa krisis ekonomi seperti saat ini, penggunaan obat
tradisional lebih menguntungkan karena relatif lebih mudah didapat, lebih murah dan dapat diramu sendiri,
selain itu bahan bakunya dapat ditanam di halaman rumah sebagai penghias taman ataupun peneduh halaman
rumah (Sulianti et al, 2005).
Penemuan berbagai senyawa obat baru dari bahan alam semakin memperjelas
peran penting metabolit sekunder tanaman sebagai sumber bahan baku obat. Metabolit sekunder adalah
3 | Page
senyawa hasil biogenesis dari metabolit primer. Umumnya dihasilkan oleh tumbuhan tingkat tinggi, yang
bukan merupakan senyawa penentu kelangsungan hidup secara langsung, tetapi lebih sebagai hasil
mekanisme pertahanan diri organisma. Aktivitas biologi tanaman dipengaruhi oleh jenis metabolit sekunder
yang terkandung didalamnya. Aktivitas biologi ditentukan pula oleh struktur kimia dari senyawa. Unit
struktur atau gugus molekul mempengaruhi aktivitas biologi karena berkaitan dengan mekanisme kerja
senyawa terhadap reseptor di dalam tubuh (Lisdawati et al., 2007). Pada tahun
Tahun terakhir ini fitokimia atau kimia tumbuhan telah berkembang menjadi suatu disiplin ilmu
tersendiri, berada di antara kimia organik bahan alam dan biokimia tumbuhan, serta berkaitan erat dengan
keduanya. Bidang perhatiaanya ialah aneka ragam senyawa organik yang dibentuk dan ditimbun oleh
tumbuhan yaitu mengenai struktur kimianya, biosintesisnya, perubahan serta metabolismenya.
1.2 Rumusan Masalah
1. Apa yang dimaksud dengan flavonoid?
2. Bagaimana karakterisasi dan Klasifikasi dari flavonoid beserta penyebara flavonoid di alam?
3. Bagaimana proses ekstraksi, isolasi dan fraksinasi dalam pengambilan senyawa flavonoid ?
1.3 Tujuan
1. Untuk mengetahui definisi dari flavonoid beserta karakteristik dari flavonoid
2. Untuk mengetahui Kalsififikasi serta penyebaran flavonoid di alam .
3. Untuk mengetahui ekstraksi , serta fraksinasi flavonoid
BAB II
ISI
2.1 Definisi Flavonoid
4 | Page
Flavonoid merupakan pigmen tumbuhankelompok fenol yang terdiri dari 15 atom karbon yang dengan
warna kuning dan merah yang dapat ditemukan pada tumbuhan seperti buah, sayuran, kacang, biji, batang,
bunga, herbal, rempah-rempah, serta produk pangan dan obat dari tumbuhan seperti minyak zaitun, teh,
cokelat, anggur merah, dan obat herbal. Senyawa ini berperan penting dalam menentukan warna, rasa, bau,
serta kualitas nutrisi makanan.Tumbuhan umumnya hanya menghasilkan senyawa flavonoid tertentu.
Keberadaan flavonoid pada tingkat spesies, genus atau familia menunjukkan proses evolusi yang terjadi
sepanjang sejarah hidupnya. Bagi tumbuhan, senyawa flavonoid berperan dalam pertahanan diri terhadap
hama, penyakit, kompetisi, interaksi dengan mikrobia, pelindung terhadap radiasi sinar UV, molekul sinyal
pada berbagai jalur transduksi, serta molekul sinyal pada polinasi dan fertilitas jantan.
Flavanoid mempunyai kerangka dasar karbon yang terdiri dari 15 atom karbon, dimana
dua cincin
benzene (C6) terikat pada suatu rantai propane (C3) sehingga membentuk suatu susunan C6-C3-C6.Flavonoid
merupakan golongan filifenol sehingga memiliki sifat kimia senyawa fenol, yaitu
1. Bersifat asam sehingga dapat larut dalam basa.
2. Merupakan senyawa polar karena memiliki sejumlah gugus hidroksil.
3. Sebagai antibakteri karena flavonoid sebagai derivat dari fenol dapat menyebabkan rusaknya susunan
dan perubahan mekanisme permeabilitas dari dinding sel bakteri.
4. Sebagai antioksidan yaitu kemampuan flavonoid untuk menjalankan fungsi antioksidan, bergantung
pada struktur molekkulnya, posisi gugus hidroksil memiliki peranan dalam fungsi antioksidan dan
aktivitas menyingkirkan radikal bebas.
2.2 Karakterisasi Flavonoid
Flavonoid merupakan senyawa polifenol sehingga bersifat kimia senyawa fenol yaitu agak asam dan
dapat larut dalam basa, dan karena merupakan senyawa polihidroksi (gugus hidroksil) maka juga bersifat
polar sehingga dapat larut dalan pelarut polar seperti metanol, etanol, aseton, air, butanol, dimetil sulfoksida,
dimetil formamida. Disamping itu dengan adanya gugus glikosida yang terikat pada gugus flavonoid sehingga
cenderung menyebabkan flavonoid mudah larut dalam air. Senyawa-senyawa ini merupakan zat warna merah,
ungu, biru, dan sebagai zat berwarna kuning yang ditemukan dalam tumbuh-tumbuhan. Flavonoid memiliki
titik didih pada suhu 60oC. Perkembangan pengetahuan menunjukkan bahwa flavonoid termasuk salah satu
kelompok senyawa aromatik yang termasuk polifenol dan mengandung antioksidan.
Aglikon flavonoid adalah polifenol dan karena itu mempunyai sifat kimia senyawa fenol, yaitu
bersifat agak asam sehingga dapat larut dalam basa. Karena mempunyai sejumlah gugus hidroksil yang tak
tersulih, atau suatu gula, flavonoid merupakan senyawa polar dan seperti kata pepatah lama suatu golongan
akan melarutkan golongannya sendiri, maka umumnya flavonoid larut cukupan dalam 11 pelarut polar seperti
etanol (EtOH), metanol (MeOH), butanol (BuOH), aseton, dimetilsulfoksida (DMSO), dimetilformamida
(DMF), air, dan lain-lain. Sebaliknya, aglikon yang kurang polar seperti isoflavon, flavanon, dan flavon serta
5 | Page
flavonol yang termetoksilasi cenderung lebih mudah larut dalam pelarut seperti eter dan kloroform
(Markham, 1988).
Flavonoid juga memiliki beberapa sifat seperti hepatoprotektif, antitrombotik, antiinflamasi, dan
antivirus (Stavric dan Matula, 1992). Sifat antiradikal flavonoid terutama terhadap radikal hidroksil,
anionsuperoksida, radikal peroksil, dan alkoksil (Huguet, et al., 1990; Sichel,et al.,1991). Senyawa flavonoid
ini memiliki afinitas yang sangat kuat terhadap ion Fe (Fe diketahui dapat mengkatalisis beberapa proses yang
menyebabkan terbentuknya radikal bebas). Aktivitas antiperoksidatif flavonoid ditunjukkan melalui potensinya
sebagai pengkelat Fe (Afanasav,et al., 1989 ; Morel,et al.,1993).
Flavonoid terutama berupa senyawa yang larut dalam air. Mereka dapat diekstraksi dengan etanol 70
% dan tetap ada dalam lapisan air setelah ekstrak ini dikocok dengan eter minyak bumi. Flavonoid berupa
senyawa fenol, karena itu warnanya berubah bila ditambah basa atau amonia, jadi mereka mudah dideteksi
pada kromatogram atau dalam larutan (Harborne, 1987 : 70).
Sifat-sifat kimia dari senyawa fenol adalah sama, akan tetapi dari segi biogenetic senyawa senyawa ini
dapat dibedakan atas dua jenis utama, yaitu:
1.Senyawa fenol yang berasal dari asam shikimat atau jalur shikimat.
2.Senyawa fenol yang berasal dari jalur asetat-malonat.
Ada juga senyawa-senyawa fenol yang berasal dari kombinasi antara kedua jalur biosintesa ini yaitu
senyawa-senyawa flanonoida. Tidak ada benda yang begitu menyolok seperti flavonoida yang memberikan
kontribusi keindahan dan kesemarakan pada bunga dan buah-buahan di alam. Flavin memberikan warna
kuning atau jingga, antodianin memberikan warna merah, ungu atau biru, yaitu semua warna yang terdapat
pada pelangi kecuali warna hijau. Secara biologis flavonoida memainkan peranan penting dalam kaitan
penyerbukan tanaman oleh serangga. Sejumlah flavonoida mempunyai rasa pahit sehingga dapat bersifat
menolak sejenis ulat tertentu.
2.3 Klasifikasi Senyawa Flavonoid
Harborne ; Marby dkk; Markham (1967; 1970; 1982 dalam Harborne 1987: 72) memberikan penjelasan
bahwa Penggolongan jenis flavonoid dalam jaringan tumbuhan mula-mula didasarkan kepada sifat kelarutan
dan reaksi warna. Kemudian diikuti dengan pemeriksaan ekstrak tumbuhan yang telah dihidrolisis secara
kromatografi satu arah. Akhirnya, flavonoid dapat dipisahkan dengan cara kromatografi. Komponen masinhmasing diidentifikasi dengan membandingkan kromatografi dengan spektrum, dengn memakai senyawa
pembanding yang sudah dikenal. Senyawa baru yang ditemukan sewaktu menelaah memerlukan pemeriksaan
kimia dan spektrum yang lebih terperinci.
Flavonoid dapat dikelompokkan berdasarkan keragaman pada rantai C3 yaitu :
6 | Page
1. Flavonol
Flafonol tersebar luas dalam tumbuhan, baik sebagai kopigmen antosianin dalam daum bunga maupun
dalam daun tumbuhan tinggi. Seperti antosianin, mereka paling sering terdapat sebagai glosida (Harborne :
1987 )
Robinson (1995 dalam Doloksaribu 2009) menyatakan bahwa Flavonol paling sering terdapat sebagai
glikosida, biasanya 3-glikosida dan aglikon flavonol yang umum yaitu kamferol, kuersetin, dan mirisetin
yang berkhasiat sebagai antioksidan dan antiimflamasi. Flavonol lain yang terdapat di alam bebas
kebanyakan merupakan variasi struktur sederhana dari flavonol. Larutan flavonol dalam suasana basa
dioksidasi oleh udara tetapi tidak begitu cepat sehingga penggunaan basa pada pengerjaannya masih dapat
dilakukan.
ifat
Struktur Flavonol
2. Flavon
Flavon berbeda dengan flavonol karena flavon tak terdapat penyulihan 3-hidroksi. Hal tersebut
berpengaruh pada serapan UV-nya, gerakan kromatografi dan reaksi warnanya. Hanya ada dua aglikon
flavon umum yaitu apigenin dan luteolin, pola hidroksilasinya serupa dengan kemferol dan kuersetin.
Flavon terdapat juga sebagai glikosida tetapi jenis glikosidanya lebih sedikit daripada jenis glikosida
pada flavonol. Glikosida itu sendiri merupakan senyawa yang menghasilkan satu atau lebih gula di antara
hasil hidrolisisnya. Untuk flavon jenis yang paling umum ialah 7-glikosida, contohnya luteoin 7-glukosida.
Terdapat juga flavon yang terikat pada gula
melalui ikatan karbon-karbon. Contohnya luteolin 8-C-glikosida.Flavon dianggap sebagai induk dalam
nomenklatur kelompok senyawa flavonoid.
7 | Page
Struktur Flavon
3. Isoflavon
Isoflavon merupakan isomer flavon, tetapi jumlahnya sangat sedikit. Isoflavonoid dapat dibedakan
dalam tiga kelas berdasarkan sifat fisiologinya yaitu 7-4-dihidrroksiisoflavon (daidzein) dan 5,7,4trihidroksiisoflavon (genistein) merupakan estrogen alam lemah, terdapat dalam seamanggi, Trifolium
pratense. Isoflavon ini merupakan insektisida alam yang kuat sehingga berfungsi sebagai pertahanan
terhadap serangan penyakit.
Isoflavon sukar dicirikan karena reaksinya tidak khas dengan pereaksi warna manapun.Kebanyakan
isoflavon bila disinari dengan sinar UV akan menunjukan warna merah senduduk tua dan bila diuapi
dengan amonia warnanya akan berubah menjadi coklat, sedangkan beberapa isoflavon misalnya
daidzeinmemberikan warna biru kuat dengan sinar UV bila diuapi ammonia.
4. Khalkon
Khalkon merupakan antoklor, yaitu pigmen fenol kuning. Hal tersebut dapat dibuktikan dengan bila
daun bunga berwarna kuning akan berubah menjadi merah atau jingga bila diuapi oleh asap basa atau asap
amonia. Bila dalam kromatografi kertas, khalkon akan berwarna coklat kuat dibawah sinar UV. Aglikon
flavon dapat dibedakan dari glikosidanya, karena hanya pigmen dalam bentuk glikosida yang dapat
bergerak pada kromatografi kertas dalam pengembang air.
Struktur Khalkon
5. Auron
8 | Page
Aron sama halnya dengan Khalkon yang merupakan antoklor. Auron berupa pigmen kuning emas
yang terdapat dalam bunga tertentu dan briofita.Dalam larutan basa senyawa ini berwarna merah ros dan
tampak pada kromatografi kertas berupa bercak kuning, dengan sinar ultraviolet warna kuning kuat
berubah menjadi merah jingga bila diberi uap amonia.
Struktur Auron
6. Flavanon
Flavanon merupakan isomer khalkon. Flavanon terdistribusi luas di alam seperti terdapat di dalam
kayu, daun dan bunga.Flavanon glikosida merupakan konstituen utama dari tanaman genus prenus dan
buah jeruk; dua glikosida yang paling lazim adalah neringenin dan hesperitin, terdapat dalam buah anggur
dan jeruk.Flavanon ini merupakan senyawa tak berwarna yang tidak dapat diditeksi dalam kromatografi
kecuali apabila dilakukan penyemprotan kromogen.
Struktur Flavanon
7. Flavanonol
Senyawa ini berkhasiat sebagai antioksidan dan hanya terdapat sedikit sekali jika dibandingkan dengan
flavonoid lain. Sebagian besar senyawa ini diabaikan karena konsentrasinya rendah dan tidak berwarna.
(Doloksaribu, 2009)
Struktur Flavanonol
8. Katekin
9 | Page
Katekin terdapat pada seluruh dunia tumbuhan, terutama pada tumbuhan berkayu.Senyawa ini mudah
diperoleh dalam jumlah besar dari ekstrak kental Uncaria gambir dan daun teh kering yang mengandung
kira-kira 30% senyawa ini.Katekin berkhasiat sebagai antioksidan. (Doloksaribu, 2009)
Struktur Katekin
9. Flavolan
Flavolan atau yang dulu disebut Leukoantosianidin merupakan senyawa tanwarna, terutama terdapat
pada tumbuhan berkayu. Senyawa ini jarang terdapat sebagai glikosida, contohnya melaksidin, apiferol.
Struktur Flavolan
10. Antosianin
Antosianin merupakan penting dan paling tersebar luas dalam tumbuhan. Pigmen berwarna kuat dan
larut dalan air ini, adalah penyebab hampir semua warna merah jambu, merah marak, merah, merah
seduduk, ungu, dan biru dalam daun bunga, daun dan buah pada tumbuhan tinggi. (Harborne : 1987)
Antosianidin memiliki 6 aglikon yang umum. Antosianidin merupakan aglikon antosianin yang akan
terbentuk bila antosianin dihidrolisis dengan asam. Sianidin adalah aglikon yang paling umum yang
berwarna merah lembayung. Pelargon merupakan aglikon yang gugus hidroksilnya kurang satu
dibandingkan sianiding, sedangkan Defilnidin yang gugus hidroksilnya lebih satu dari sianidin. Terdapat
pula tiga jenis eter metil antosianidin yang umum yaitu peonidin yang merupakan turunan sianidin.; serta
petunidin dan malvidin yang merupakan turunan dari delfinidin.
Struktur Antosianin
10 | P a g e
11 | P a g e
kali dengan jumlah pelarut yanglebih kecil dari pada bila jumlah pelarutnya banyak tapi ekstraknyahanya
sekali (Markham, 1988).
Metode ekstraksi terdiri atas dua jenis yakni ekstraksi panas dan ekstraksi dingin. Ekstraksi panas
menggunakan cara refluks dan destilasi uap sedangkan ekstraksi secara dingin menggunakan cara
maserasi,perkolasi dan soxhletasi.
Flavonoid terutama berupa senyawa yang larut dalam air. Mereka dapat diekstraksi dengan etanol 70 %
dan tetap ada dalam lapisan air setelah ekstrak ini dikocok dengan eter minyak bumi. Flavonoid berupa
senyawa fenol, karena itu warnanya berubah bila ditambah basa atau amonia, jadi mereka mudah
dideteksipada kromatogram atau dalam larutan (Harborne, 1987 : 70).
Cara Isolasi Flavonoid Secara Umum
1. Isolasi Dengan metanol
Terhadap bahan yang telah dihaluskan, ekstraksi dilakukan dalam dua tahap. Pertama dengan
metanol:air (9:1) dilanjutkan dengan metanol:air (1:1) lalu dibiarkan 6-12 jam. Penyaringan dengan
corong buchner, lalu kedua ekstrak disatukan dan diuapkan hingga 1/3 volume mula-muIa, atau sampai
semua metanol menguap dengan ekstraksi menggunakan pelarut heksan atau kloroform (daIam corong
pisah) dapat dibebaskan dari senyawa yang kepolarannya rendah, seperti lemak, terpen, klorofil,
santifil dan lain-lain
2. Isolasi Dengan Charaux Paris
Serbuk tanaman diekstraksi dengan metanol, lalu diuapkan sampai kental dan ekstrak kental
ditambah air panas dalam volume yang sama, Ekstrak air encer lalu ditambah eter, lakukan ekstraksi
kocok, pisahkan fase eter lalu uapkan sampai kering yang kemungkinan didapat bentuk bebas. Fase air
dari hasil pemisahan ditambah lagi pelarut etil. asetat diuapkan sampai kering yang kemungkinan
didapat Flavonoid O Glikosida. Fase air ditambah lagi pelarut n - butanol, setelah dilakukan ekstraksi,
lakukan pemisahan dari kedua fase tersebut. Fase n-butanol diuapkan maka akan didapatkan ekstrak n butanol yang kering, mengandung flavonoid dalam bentuk C-glikosida dan leukoantosianin. Dari
ketiga fase yang didapat itu langsung dilakukan pemisahan dari komponen yang ada dalam setiap
fasenya dengan mempergunakan kromatografi koLom. Metode ini sangat baik dipakai dalam
mengisolasi flavonoid dalam tanaman karena dapat dilakukan pemisahan flavonoid berdasarkan sifat
kepolarannya.
3. Isolasi dengan beberapa pelarut.
12 | P a g e
Serbuk kering diekstraksi dengan kloroform dan etanol, kemudian ekstrak yang diperoleh
dipekatkan dibawah tekanan rendah. Ekstrak etanol pekat dilarutkan dalam air lalu diekstraksi gojog
dengan dietil eter dan n-butanol, sehingga dengan demikian didapat tiga fraksi yaitu fraksi kloroform,
butanol dan dietil eter.
4. Identifikasi Dengan Reaksi warna
a. Uji WILSTATER
Uji ini untuk mengetahui senyawa yang mempunyai inti benzopiron. Warna-warna yang dihasilkan
dengan reaksi Wilstater adalah sebagai berikut:
a. Jingga Daerah untuk golongan flavon.
b. Merah krimson untuk golongan fLavonol.
c. Merah tua untuk golongan flavonon.
b. Uji BATE SMITH MATECALVE
Reaksi warna ini digunakan untuk menuniukkan adanya senyawa leukoantosianin, reaksi positif
jika terjadi warna merah yang intensif atau warna ungu.
2.6 Fraksinasi Flavonoid
a. Ekstraksi
Ekstraksi artinya mengambil atau menarik suatu senyawa yang terdapat dalam suatu bahan dengan
pelarut yang sesuai. Proses yang terjadi dalam ekstraksi adalah terlarutnya senyawa yang dapat larut dari sel
melalui difusi, tergantung dari letak senyawa dalam sel dan juga permeabilitas dinding sel dari bahan yang
akan di ekstraksi.
Ekstraksi adalah suatu proses atau metode pemisahan dua atau lebih komponendengan menambahkan
suatu pelarut yang hanya dapat melarutkan salahsatu komponennya saja. Dalam prosedur ekstraksi, larutan
berair biasanya dikocok dengan pelarutorganik yang tak dapat larut dalam sebuah corong pemisah. Zat
zatyang dapt larut akan terdistribusi diantara lapisan air dan lapisanorganik sesuai dengan (perbedaan)
kelarutannya. Padaekstraksi senyawa senyawa organik dari larutan berair, selain airatau eter, biasanya
digunakan pula etil asetat, benzena, kloroform dan sebagainya. Ekstraksi lebih efisien bila dilakukan berulang
kali dengan jumlah pelarut yanglebih kecil dari pada bila jumlah pelarutnya banyak tapi ekstraknyahanya
sekali (Markham, 1988).
Metode ekstraksi terdiri atas dua jenis yakni ekstraksi panas dan ekstraksi dingin. Ekstraksi panas
menggunakan cara refluks dan destilasi uap sedangkan ekstraksi secara dingin menggunakan cara
maserasi,perkolasi dan soxhletasi.
1) Ekstraksi Secara Panas
(a) Ekstraksi Secara Refluks.
Ekstraksi secara refluks adalah cara berkesinambungan dimana cairan penyari secara kontinyu menyari zat
aktif dalam sampel.
13 | P a g e
b. Kromatografi
Kromatografi adalah suatu nama yang diberikan untuk teknik pemisahan tertentu. Pada dasarnya
semua cara kromatografi menggunakan dua fase yaitu fasa tetap (stationary) dan fasa gerak (mobile),
pemisahan tergantung pada gerakan relatif dari dua fasa tersebut. Kromatografi secara garis besar dapat
dibedakan menjadi kromatografi kolom dankromatografi planar. Kromatografi kolom terdiri atas
kromatografi gas dan kromatografi cair, sedangkan kromatografi planar terdiri ataskromatografi lapis tipis
dan kromatografi kertas (Anwar, 1994).
Cara-cara kromatografi dapat digolongkan sesuai dengan sifat-sifat dari fasa tetap, yang dapat berupa
zat padat atau zat cair. Jika fasa tetap berupa zat padat maka cara tersebut dikenal sebagai kromatografi
serapan, jika zat cair dikenal sebagai kromatografi partisi. Karena fasa bergerak dapat berupa zat cair atau gas
14 | P a g e
maka semua ada empat macam sistem kromatografi yaitu kromatografi serapan yang terdiri dari kromatografi
lapis tipis dan kromatografi penukar ion, kromatografi padat, kromatografi partisi dan kromatografi gas-cair
serta kromatografi kolom kapiler .
Kromatografi digunakan untuk memisahkan substansi campuran menjadi komponen-komponennya.
Seluruh bentuk kromatografi berkerja berdasarkan prinsip ini. Semua kromatografi memiliki fase diam (dapat
berupa padatan, atau kombinasi cairan-padatan) dan fase gerak (berupa cairan atau gas). Fase gerak mengalir
melalui fase diam dan membawa komponen-komponen yang terdapat dalam campuran. Komponenkomponen yang berbeda bergerak pada laju yang berbeda (Harborne, 1987).
Ketika pelarut mulai membasahi lempengan, pelarut pertama akan melarutkan senyawa-senyawa
dalam bercak yang telah ditempatkan pada garis dasar. Senyawa-senyawa akan cenderung bergerak pada
lempengan kromatografi sebagaimana halnya pergerakan pelarut. Kecepatan senyawa-senyawa dibawa
bergerak ke atas pada lempengan, tergantung pada kelarutan senyawa dalam pelarut. Hal ini bergantung pada
besar atraksi antara molekul-molekul senyawa dengan pelarut (Harborne, 1987).
Kemampuan senyawa melekat pada fase diam, misalnya gel silika tergantung pada besar atraksi antara
senyawa dengan gel silika. Senyawa yang dapat membentuk ikatan hidrogen akan melekat pada gel silika
lebih kuat dibanding senyawa lainnya karena senyawa ini terjerap lebih kuat dari senyawa yang lainnya.
Penjerapan merupakan pembentukan suatu ikatan dari satu substansi pada permukaan (Harborne, 1987).
Penyerapan bersifat tidak permanen, terdapat pergerakan yang tetap dari molekul antara yang terjerap pada
permukaan gel silika dan yang kembali pada larutan dalam pelarut. Dengan jelas senyawa hanya dapat
bergerak ke atas pada lempengan selama waktu terlarut dalam pelarut. Ketika senyawa dijerap pada gel silika
-untuk sementara waktu proses penjerapan berhenti- dimana pelarut bergerak tanpa senyawa. Itu berarti
bahwa semakin kuat senyawa dijerap, semakin kurang jarak yang ditempuh ke atas lempengan (Harborne,
1987). Dalam hal ini, senyawa yang dapat membentuk ikatan hidrogen akan menjerap lebih kuat daripada
yang tergantung hanya pada interaksi van der Waals, dan karenanya bergerak lebih jauh pada lempengan.
Jika komponen-komponen dalam campuran dapat membentuk ikatan-ikatan hydrogen, terdapat
perbedaan bahwa ikatan hidrogen pada tingkatan yang sama dan dapat larut dalam pelarut pada tingkatan
yang sama pula. Ini tidak hanya merupakan atraksi antara senyawa dengan gel silika. Atraksi antara senyawa
dan pelarut juga merupakan hal yang penting dimana hal ini akan mempengaruhi mudahnya proses senyawa
ditarik pada larutan keluar dari permukaan silika. Ini memungkinkan senyawa-senyawa tidak terpisahkan
dengan baik ketika membuat kromatogram. Dalam kasus itu, perubahan pelarut dapat membantu dengan baik,
termasuk memungkinkan perubahan pH pelarut. Ini merupakan tingkatan uji coba, jika satu pelarut atau
campuran pelarut tidak berkerja dengan baik, maka dapat mencoba dengan pelarut lainnya (Harborne, 1987).
Flavonoid terutama berupa senyawa yang larut dalam air. Mereka dapat diekstraksi dengan etanol 70 % dan
tetap ada dalam lapisan air setelah ekstrak ini dikocok dengan eter minyak bumi. Flavonoid berupa senyawa
fenol, karena itu warnanya berubah bila ditambah basa atau amonia, jadi mereka mudah dideteksipada
kromatogram atau dalam larutan (Harborne, 1987 : 70).
1. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
15 | P a g e
Kromatografi lapis tipis adalah suatu metode pemisahan yang menggunakan plat atau lempeng kaca yang
sudah dilapiskan adsorben yang bertindak sebagaifasa diam. Fase bergerak ke atas sepanjang fase diam
danterbentuklah kromatogram. Metode ini sederhana, cepat dalam pemisahandan sensitif (Khopkar, 1990).
Kromatografi lapis tipis adalah metode pemisahan fitokimia. Lapisan yang memisahkan terdiri atas bahan
berbutir-butir (fase diam), ditempatkan pada penyangga berupa pelat gelas, logam, atau lapisan yang cocok.
Campuran yang akan dipisah, berupa larutan, ditotolkan berupa bercak atau pita (awal), kemudian pelat
dimasukkan di dalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang cocok (fase gerak).
Pemisahan terjadi selama perambatan kapiler (pengembangan) dan selanjutnya senyawa yang tidak berwarna
harus ditampakkan (Stahl, 1985).
Pada prinsipnya KLT dilakukan berdasarkan pada penggunaan fasa diam untuk menghasilkan
pemisahan yang lebih baik. Fasa diam yang biasadigunakan dalam KLT adalah serbuk silika gel, alumina,
tanah diatomedan selulosa (Harborne, 1987). Adapun carakerja dari KLT yakni larutan cuplikan sekitar 1%
diteteskan denganpipet mikro pada jarak 1-2 cm dari batas plat. Setelah eluen ataupelarut dari noda cuplikan
menguap, plat siap untuk dikembangkandengan fasa gerak (eluen) yang sesuai hingga jarak eluen dari
batasplat mencapai 10-15 cm. Mengeringkan sisa eluen dalam plat dengandidiamkan pada suhu kamar. Noda
pada plat dapat diamati langsung dengan menggunakan lampu UV atau dengan menggunakan pereaksi
semprot penampak warna. Setelah noda dikembangkan dan divisualisasikan,identitas noda dinyatakan dengan
harga Rf (retardation factor)(Anwar, 1994).
Tujuan mendapatkan identitas noda dengan harga Rf untuk mencari pelarut untuk kromatografi
kolom, analisis fraksi yang diperoleh darikromatografi kolom, menyigi arah atau perkembangan reaksi seperti
hidrolisis atau metilasi, identifikasi flavonoid secarako-kromatografi dan isolasi flavonoid murni skala kecil
(Markham,1988).
KLT dapat dipakai dengan dua tujuan. Pertama, dipakai selayaknya sebagai metode untuk mencapai
hasil kualitatif, kuantitatif, atau preparatif. Kedua, dipakai untuk menjajaki sistem pelarut dan sistem
penyangga yang akan dipakai dalam kromatografi kolom atau kromatografi cair kinerja tinggi (Roy, et. all,
1991). Beberapa keuntungan dari kromatografi planar ini menurut Ibnu Gholib Gandjar dan Abdul Rohman
(2007) adalah :
Kromatografi lapis tipis banyak digunakan untuk tujuan analisis.
Identifikasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan pereaksi warna, fluorisensi atau dengan radiasi
menggunakan sinar ultraviolet.
Dapat dilakukan elusi secara menaik (ascending), menurun (descending), atau dengan cara elusi 2 dimensi.
Ketepatan penentuan kadar akan lebih baik karena komponen yang akan ditentukan merupakan bercak yang
tidak bergerak.
Pelaksaanan kromatografi lapis tipis menggunakan sebuah lapis tipis silika atau alumina yang seragam pada
sebuah lempeng gelas atau logam atau plastik yang keras. Gel silika (atau alumina) merupakan fase diam.
Fase diam untuk kromatografi lapis tipis seringkali juga mengandung substansi yang mana dapat
16 | P a g e
berpendarflour dalam sinar ultra violet. Fase gerak merupakan pelarut atau campuran pelarut yang sesuai
(Harborne, 1987).
Keuntungan kromatografi lapis tipis adalah dapat memisahkan senyawa yang sangat berbeda seperti
senyawa organik alam dan senyawa organik sintesis, kompleks organik dan anorganik serta ion anorganik
dalam waktu singkat menggunakan alat yang tidak terlalu mahal. Metode ini kepekaannya cukup tinggi
dengan jumlah cuplikan beberapa mikrogram. Kelebihan metode ini jika dibandingkan dengan kromatografi
kertas adalah dapat digunakan pereaksi asam sulfat pekat yang bersifat korosif, kelemahannya adalah harga
RF yang tidak tetap (Gritten, et. al., 1991).
a) KLT Preparatif
Kromatografi Lapis Tipis Preparatif merupakan proses isolasi yang terjadi berdasarkan perbedaan
daya serap dan daya partisi serta kelarutan dari komponen-komponen kimia yang akan bergerak mengikuti
kepolaran eluen oleh karena daya serap adsorben terhadap komponen kimia tidak sama, maka komponen
bergerak dengan kecepatan yang berbeda sehingga hal inilah yang menyebabkan pemisahan.
b) KLT 2 Dimensi
KLT 2 arah atau 2 dimensi bertujuan untuk meningkatkan resolusi sampel ketika komponenkomponen solute mempunyai karakteristik kimia yang hampir sama, karenanya nilai Rf juga hampir sama
sebagaimana dalam asam-asam amino. Selain itu, 2 sistem fase gerak yang sangat berbeda dapat digunakan
secara berurutan sehingga memungkinkan untuk melakukan pemisahan analit yang mempunyai tingkat
polaritas yang berbeda .
Sampel ditotolkan pada lempeng lalu dikembangkan dengan satu sistem fase gerak sehingga
campuran terpisah menurut jalur yang sejajar dengan salah satu sisi. Lempeng diangkat, dikeringkan dan
diputar 90 dan diletakkan dalam bejana kromatografi yang berisi fase gerak kedua sehingga bercak yang
terpisah pada pengembangan pertama terletak dibagian bawah sepanjang lempeng, lalu dikromatografi lagi .
Deteksi dengan KLT dapat dilakukan dengan cara:
1.
2.
3.
Sinar tampak
Sinar UV
Pereaksi warna
2. Kromatografi Kolom
Kromatografi kolom adalah suatu metode pemisahan dan pemurnian senyawa dalam
skalapreparative. Kromatografi kolom dapat dilakukan pada tekanan atmosferatau dengan tekanan lebih
besar dengan menggunakan bantuan tekananluar (Khopkar, 1990). Kromatografikolom prinsipnya mudah
memilih ukuran, kemasan (packing), dan isikolom sesuai jenis serta jumlah cuplikan yang akan
dipisahkan. Kolomyang digunakan dan kromatografi ini dapat berupa gelas, plastik ataunilom. Ukuran
kolom yang lazim digunakan mempunyai diameter 2 cm danpanjang 45 cm. Untuk memilih kemasan
17 | P a g e
(Packing) yang akan digunakandalam kolom biasanya menggunakan selulosa, silika gel, alumina,
arang(charcoal) (Anwar, 1994).
Adapun cara kerja dari kromatografi kolom yakni langkah pertama mengemas kolom(packing)
dilakukan dengan hati-hati agar dihasilkan kolom kemas yangserba sama. Selanjutnya kemasan kolom
dijadikan bubur dalam gelaspiala memakai pelarut yang sama, lalu dituangkan hati-hati ke dalamkolom.
Kemasan dibiarkan turun dan pelarut yang berlebihandikeluarkan melalui keran. Selanjutnya langkah
kedua menempatkanlarutan cuplikan pada (bagian atas) kolom sehingga terbentuk pitayang siap untuk
dielusi lebih lanjut. Cuplikan harus dilarutkan dalampelarut yang volumenya sedikit. Pelarut yang dipakai
harus samadengan pelarut untuk mengelusi (Markham, 1988).
3. High Pressure Liquid Chromatography (HPLC)
High Pressure Liquid Chromatography (HPLC) atau Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
merupakan salah satu metode kimia dan fisikokimia. KCKT termasuk metode analisis terbaru yaitu suatu
teknik kromatografi dengan fasa gerak cairan dan fasa diam cairan atau padat. Banyak kelebihan metode
ini jika dibandingkan dengan metode lainnya (Done dkk, 1974; Snyder dan Kirkland, 1979; Hamilton dan
Sewell, 1982; Johnson dan Stevenson, 1978).
Informasi seperti kelarutan, gugus fungsi yang ada, besarnya berat molekul (BM) dapat diperoleh
dari pembuat informasi, pemberi sampel, atau data spektroskopik seperti Nucleic Magnetic Resonance
Spectrosphotometer (NMR), Infrared spectrophotometer, ultra violet spectrumeter, dan mass
Spectrophotometer. Semua data-data ini dapat digunakan sebagai petunjuk bagi analis memilih tipe HPLC
yang
tepat
untuk
digunakan
(Johnson
dan
Stevenson,
1978)
Berdasarkan Hukum Dasar "like dissolves like" maka sangat mudah untuk memutuskan tipe KCKT
yang akan dipilih. Seleksi tipe KCKT, dengan cepat kita dapat melihat bahwa Berat Molekul (BM) lebih
besar dari 2000, maka kita dapat menggunakan kromatografi eksklusi. Fasa geraknya adalah air jika
sampelnya larut dalam air; bila dapat larut dalam pelarut organik maka digunakan pelarut- pelarut organik
sebagai rasa gerak. Fasa diamnya adalah Sephadex atau Bondagel Seri E untuk rasa gerak air dan Styragel
atau MicroPak TSK gel untuk rasa gerak organik. Bila BM lebih rendah dari 2000, pertama yang harus
ditentukan adalah apakah sampel dapat larut dalam air. Bila sampel dapat larut dalam air, maka
kromatografi partisi rasa terbalik atau kromatografi penukar ion dapat digunakan. Bila kelarutan
dipengaruhi oleh penambahan asam atau basa atau bila pH larutan bervariasi lebih dari 2 (dua) satuan pH
dari pH 7, maka kromatografi penukar ion adalah pilihan utama. Bila kelambatan tidak dipengaruhi oleh
asam dan basa dan larutan sampel adalah netral, maka kromatografi partisi rasa terbalik adalah pilihan
terbaik. Tipe Eksklusi menggunakan ukuran poros yang kecil dan rasa air dapat juga dicoba.
2.7 Cara Mengidentifikasi Senyawa Flavonoid
Spektroskopi UV-Vis
18 | P a g e
Spektrum flavonoid biasanya diukur dalam larutan dengan pelarut methanol atau etanol, meskipun
perlu diingat bahwa spectrum yang dihasilkan dalam etanol kurang memuaskan.
Spektrum khas flavonoid terdiri atas dua panjang gelombang maksimum yang berada pada rentang
antara 240-285 nm ( pita II ) dan 300 550 ( pita I ). Kedudukan yang tepat dan intensitas panjang
gelombang maksimum memberikan informasi yang berhargai mengenai sifat flavonoid dan pola
oksigenasinya.
Jenis Flavonoid
Pita II ( nm )
250-280
Pita I ( nm )
310-350
250-280
330-360
250-280
350-385
Isoflavon
245-275
310-330 sh
Flavon
Isoflavonb (5-deoksi-6,7-dioksigenasi)
320
275-295
Chalcon
230-270
( intensitas rendah )
340-390
Auron
230-270
(Intensitas rendah )
380-430
270-280
19 | P a g e
300-330
465-560
BAB III
PENUTUP
3.1.Kesimpulan
Flavonoid merupakan pigmen tumbuhankelompok fenol yang terdiri dari 15 atom karbon yang
dengan warna kuning dan merah yang dapat ditemukan pada tumbuhan seperti buah, sayuran, kacang, biji,
batang, bunga, herbal, rempah-rempah, serta produk pangan dan obat dari tumbuhan seperti minyak zaitun,
teh, cokelat, anggur merah, dan obat herbal. Flavonoid merupakan senyawa polifenol sehingga bersifat kimia
senyawa fenol yaitu agak asam dan dapat larut dalam basa. . Flavonoid memiliki titik didih pada
suhu60oC.KlasifikasiFlavonoiddiantaranya Flavonol, Flavon, Isoflavon, Khalkon, Auron, Flavanon,
Flavanonol, Katekin, Flavolan,dan Antosianin.
Cara ekstraksi dan isolasi Flavonoid Isolasi Dengan methanol,isolasi Dengan Charaux Paris,
isolasi dengan beberapa pelarut, identifikasi Dengan Reaksi warna,Ekstraksi Secara Panas, Ekstraksi Secara
Dingin, Kromatografi Lapis Tipis (KLT), Kromatografi Kolom, High Pressure Liquid Chromatography
(HPLC), Spektroskopi UV-Vis
3.2.Saran
Pada isolasi maupun identifikasi senyawa kimia hendaknya metode yang digunakan
disesuaikan dengan karakteristik dari senyawa yang akan diambil.Hal ini bertujuan untuk menghindari
terjadinya kerusakan pada senyawa yang akan diambil.
Daftar Pustaka
20 | P a g e
Alfinda,dkk.(2006). Buku Ajar Fitokimia. Laboratorium Kimia organik fakultas MIPA: Universitas Airlangga
Fessenden, R.J, Fessenden, J.S. (1986),Organic Chemistry, 3th edition, Brooks/Cole Publishing Company,
California.
Harborne, J.B., (1987),Metode Fitokimia , Edisi ke dua, ITB, Bandung.
Lisdawati,Vivi., Sumali Wiryowidagdo., L dan Broto S. Kardono Isolasi Dan Elusidasi Struktur Senyawa
Lignan Dan Asam Lemak Dari Ekstrak Daging Buah Phaleria Macrocarpa. Jurnal dan Buletin
Penelitian Kesehatan; Puslitbang Biomedis dan Farmasi Badan Litbangkes. Vol. 35.
Markham, K.R., (1988), Cara Mengidentifikasi Flavonoid, ITB, Bandung.
Sulianti, Sri Budi , Emma Sri Kuncari dan Sofnie M. Chairul, Pemeriksaan Farmakognosi Dan Penapisan
Fitokimia Dari Daun Dan Kulit Batang Calophyllum inophyllum dan Calophyllum soulatri, B i o d i v e r
s i t a s ISSN: 1412-033x Volume 7.
21 | P a g e