La coproculture 01

La coproculture
La coproculture est un terme utilisé en bactériologie, consistant à mettre les selles en culture
pour étudier le développement des germes. En parasitologie, la culture en milieu favorable
permet d’une part une éclosion des œufs d’ankylostome et une évolution des larves
correspondantes et d’autre part, une maturation et une multiplication des larves
d’anguillules.
D’autre part la culture des selles à deux buts : la prolifération des amibes et l’éclosion des
œufs permettant l’identification des larves.
I- la coproculture en helminthologie :
Elle à essentiellement pour but le diagnostic présomptif de l’anguillulose et le diagnostic

différentiel de cette helminthiase avec l’ankylostome ou les souillures accidentelles des
selles par des Nématodes libres « en particuliers les rhabditis » .
a) méthode de HO-THi-Sang :
Elle introduit quelques modifications qui rendent bien plus facile la recherche des larves.
A-technique :
- dans un verre à pied, triturer à parties égales (20g) les selles et de la poudre de charbon
végétale pas trop fine en ajoutant de l’eau stérile (pour éviter d’introduire dans la culture des
œufs de Nématodes libres) jusqu'à l’obtention d’une pâte molle.
- verser cette pâte au milieu du fond de la boite pétri et la repartir de façon à ce que toute la
périphérie de ce fond demeure libre et qu’au centre il reste une petite éminence qui viendra
en contact (sur 1cm² environ) avec le couvercle de la boite lorsqu’on l’aura mis en place.
- les boites de pétri sont maintenues à l’étuve à 25°C. D’où la lecture se fait à partir de la
48éme heure après l’ensemencement jusqu'à 15jours.
NB : la manipulation doit se faire avec précaution puisque la contamination par voie

transcutanée par les larves « strongyloides » est possible.
B- lecture :
Si la culture est positive ; il suffit de retourner le couvercle de la boite de pétri et de

l’examiner sous la loupe binoculaire, les larves se sont rassemblées dans les gouttelettes
d’eau de condensation et au point ou le milieu de culture touche le couvercle.
b) méthode de Harada et Mori :
Cette méthode peut être appliquée selon deux techniques :

1- culture sur papier buvard en boite de pétri :
a- technique :
- découper dans une feuille de papier buvard un rectangle de 7/15cm de long.
- enroulé de façon serrée ce papier buvard de 3 lames microscopiques porte-objet.
- étaler la face large de ce paquet environ un gramme de la selle à étudier.
- déposer le tout au fond d’une boite de pétri dans laquelle seront ensuite versés 10ml d’eau
stérile.
NB : veillez pendant toute la durée du temps de culture à ce qu’il reste une couche d’eau au
fond de la boite.
b- lecture :
- après incubation de 48heures jusqu’à 15 jours à une température de 25°C.
- la recherche des larves se fait dans l’eau de condensation si le dispositif c’est déshydraté
rajouter quelques gouttes d’eau distillée stérile et faire la recherche des larves qui
apparaissent à la loupe binoculaire dans l’eau claire qui entoure la culture.
2- culture sur papier buvard tube :
a- technique :
- découper dans du papier buvard épais et rigide un rectangle d’environ 12cm de long pour
une largeur légèrement inférieur à celle d’un gros tube à assai.
- Placer 15ml d’eau stérile au fond du tube.
- étaler sur la surface du buvard environ un gramme de selle tout en évitant de recouvrir les
02 cm inférieur de la lame de papier.
- introduire le buvard ainsi chargé dans le tube, l’extrémité inférieure propre trempant dans
l’eau mais en évitant que les selles ne soient en contact avec le liquide.
- fermer le tube par un bouchon de coton cardé.
- incuber le tube à l’étuve à 25°C.

b- lecture :
La lecture se fait à l’aide d’un dispositif spéciale qui permet en éclairant le fond du tube, de
trouver des larves dans l’eau sous la loupe binoculaire.
A défaut de cet appareillage on peut prélever le liquide à la pipette, le déposer dans un verre
montre et chercher les larves à la loupe binoculaire, on peut aussi centrifuger ce culot.
c- inconvénient :
Ce procédé à pour inconvénient majeur l’impossibilité de surveiller quotidiennement les

cultures si bien que l’on risque, si l’on attend trop de perdre une certaines proportion des
larves ou au contraire si l’on intervient trop tôt, de trouver des larves trop jeunes pour être
facilement déterminées.
II) coproculture en protozoologie :
Le diagnostic des protozooses intestinales et singulièrement de l’amibiase par culture est

très souvent demandé par les praticiens mais l’inconvénient fait que la culture des
protozoaires ne réussit bien que lorsqu’elle est faite par des techniciens qui ont une bonne
pratique de ce genre de travail.
Si les examens microscopiques successifs, après activation correcte du transit, se sont

montrés négatifs et que cliniquement l’amibiase est le diagnostic le plus vraisemblable on
fait la culture protozoaires sur presque les mêmes milieux (sauf Giardia qui nécessite des
milieux spécifique).
A- les différents milieux utilisés pour la culture des protozoaires intestinaux.
Ø milieu diphasiques de Dobell et Laidlaw
Ce milieu est livré en deux parties :
- un support constitué par un tube de sérum de cheval coagulé en plan incliné.
- Une ampoule contenant 5ml d’une phase liquide composée de 6 parties de liquide de
ringer, 1 partie de sérum de cheval liquide, de l’amidon de riz.
préparation :
Agiter pour remettre l’amidon en suspension, en opérant aseptiquement, prélever le liquide à
l’aide une pipette pasteur et le vider dans un tube de sérum coagulé, placer ce tube ainsi
préparé dans l’étuve à 37°C pour réchauffer et permettre à l’amidon de se déposer.
Ø milieu LMS
Pour 500ml.
solution tamponnée :
KH2 PO4 anhydre 0.12g
Na2 HPO4 anhydre 0.45g
Na cl 2.18g
Eau distillée Qsp 300 ml
PH 7.2 ajuster avec NAOH/N
extrait de foie :
- extrait de foie (livrer infusion oxoid) 1.5g
- bacte peptone difco 0.5g.
- Na cl 0.5g
- Eau distillée Qsp 100ml
- PH ajuster avec NAOH/N 30 gouttes.
milieu LMS
- solution tamponnée 300ml.
- extrait de foie 100ml.
- extrait de levure difco 0.53g.

Filtrer et stériliser à l’autoclave 20mn à 120°C.
Au moment de l’emploi ajouter 25% de sérum de cheval décomplémenté stérile et 3g

d’amidon de riz, stérilisé au four pasteur une heure à 160°C. On répartit stérilement en tube
de 12mm de diamètre à raison d’environ 5 ml/tube.
a- ensemencement :
- ensemencer au moins deux tubes préalablement chauffés à 37°C.
- délayer par frottement contre les parois du tube le volume d’un petit pois de selles
(selles fermes ou pâteuses) si la selle est liquide ou muqueuse prélever à la pipette pasteur
stérile 1ml du liquide fécal.
- Piquer en plusieurs endroits de la surface du sérum coagulé et déposer le reste dans

le liquide en agitant pour bien diluer.
- Porter à l’étuve à 37°C.
b – lecture :
- Faire la lecture au bout de 24 heures de séjour à l’étuve, puis une seconde lecture après
48 heures plus tard.
- Prélever à l’aide d’une pipette un peut de liquide au contact du sédiment d’amidon de riz et
du plan de sérum coagulé.
- Les amibes retrouvées seront identifiées de la même façon que les amibes des selles.
- L’identification des flagellés et des ciliés intestinaux est le plus souvent facile. On peut
ralentir leurs mouvement à l’aide d’une solution de gomme arabique ou d’alginate de sodium
et les identifiées comme les flagellés des selles.
2- milieu spécifique pour la culture de T. Vaginalis :
Milieu commercialisés par l’institut Pasteur production : il comprend un tube de milieu

penché solidifie et une ampoule à agiter et à ajouter dans le tube au moment d’emploi.
Ø Milieu Diamond :
a-Reactif :
- Extrait de Liebig 3g
- Na cl 2.5g.
- Peptone bactériologique 20g
- Asparagine 1g
- Maltose 5g.
- Extrait de foie choay 2g.
- Na2Hpo4 cristaux 2g.
- Acide ascorbique 1g.
- Bleu de méthylène 1% 10gouttes.
- H2o 1000ml.
- pH 6 à 6.5 répartir en ballon, stériliser 15 minutes à 115°C à l’autoclave. Dans les

quinze jours qui précèdent l’emploi ajouter stérilement pour un ballon de 200ml.
- Pénicilline G 200 000 UI
- Streptomycine 200mg
- Sérum ou plasma stérile de chevale 25 à 30ml.
- Répartir en tube à vis à raison de 10ml par tube et conserver à 4C°.
b- ensemencement :
le tube sera réchauffé par un séjour de 15 minutes à 37C° et le milieu sera directement
ensemencé au moyen de la spatule de bois qui permet de laisser une partie de l’exsudat
vaginale dans le milieu ou, si non en laissant dans le tube l’écouvillon monté sur bois, le
tube sera déposé à l’étuve à 37°C.
c- lecture :
Après 48 heures d’étuve, prélever une goutte du milieu et l’examiner entre lame et lamelle,
si ce premier examen est négatif, le renouveler 03 jours plus tard.
Les formes de trichomonas Vaginalis seront identifiées comme celle retrouvé directement
dans un prélèvement vaginal.

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Elle à essentiellement pour but le diagnostic présomptif de l’anguillulose et le diagnostic

NB : la manipulation doit se faire avec précaution puisque la contamination par voie

Si la culture est positive ; il suffit de retourner le couvercle de la boite de pétri et de

b) méthode de Harada et Mori :

Cette méthode peut être appliquée selon deux techniques :

- découper dans une feuille de papier buvard un rectangle de 7/15cm de long.

- enroulé de façon serrée ce papier buvard de 3 lames microscopiques porte-objet.

- étaler la face large de ce paquet environ un gramme de la selle à étudier.

- après incubation de 48heures jusqu’à 15 jours à une température de 25°C.

2- culture sur papier buvard tube :

- Placer 15ml d’eau stérile au fond du tube.

- fermer le tube par un bouchon de coton cardé.

- incuber le tube à l’étuve à 25°C.

Ce procédé à pour inconvénient majeur l’impossibilité de surveiller quotidiennement les

II) coproculture en protozoologie :

Le diagnostic des protozooses intestinales et singulièrement de l’amibiase par culture est

Si les examens microscopiques successifs, après activation correcte du transit, se sont

A- les différents milieux utilisés pour la culture des protozoaires intestinaux.

Ø milieu diphasiques de Dobell et Laidlaw

Ce milieu est livré en deux parties :

- un support constitué par un tube de sérum de cheval coagulé en plan incliné.

Na2 HPO4 anhydre 0.45g

Eau distillée Qsp 300 ml

PH 7.2 ajuster avec NAOH/N

- bacte peptone difco 0.5g.

- Eau distillée Qsp 100ml

- PH ajuster avec NAOH/N 30 gouttes.

- extrait de foie 100ml.

- extrait de levure difco 0.53g.

Au moment de l’emploi ajouter 25% de sérum de cheval décomplémenté stérile et 3g

- ensemencer au moins deux tubes préalablement chauffés à 37°C.

- Piquer en plusieurs endroits de la surface du sérum coagulé et déposer le reste dans

- Porter à l’étuve à 37°C.

Milieu commercialisés par l’institut Pasteur production : il comprend un tube de milieu

- Peptone bactériologique 20g

- Extrait de foie choay 2g.

- Na2Hpo4 cristaux 2g.

- Acide ascorbique 1g.

- Bleu de méthylène 1% 10gouttes.

- pH 6 à 6.5 répartir en ballon, stériliser 15 minutes à 115°C à l’autoclave. Dans les

- Pénicilline G 200 000 UI

- Sérum ou plasma stérile de chevale 25 à 30ml.

- Répartir en tube à vis à raison de 10ml par tube et conserver à 4C°.

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