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    Isolement - Milieu Selectif Et Différentiel - Milieu Chapman

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    Ce résumé décrit un protocole expérimental visant à isoler des bactéries à l'aide d'un milieu sélectif et différentiel, le milieu de Chapman. Le milieu permet de sélectionner Staphylococcus aureus grâce à sa tolérance au NaCl et de distinguer les colonies par leur couleur suite à la fermentation du mannitol.

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    Filière Science de la Vie (SVI – S3)

    https://ecampus-fssm.uca.ma

    Module de Microbiologie générale

    TP de Microbiologie

    Isolement bactérien en utilisant un milieu sélectif et différentiel


    Isolement bactérien en utilisant un milieu sélectif et différentiel

    Objectifs

    * Réaliser un isolement par l’utilisation d’un milieu sélectif et


    différentiel :

    Exemple : Milieu de Chapman

    * Apprendre à faire la lecture de milieux sélectifs et


    différentiels
    Isolement sur milieu sélectif et différentiel « Milieu Chapman »

    Aspect du Mode Sélectivité / Caractères


    milieu avant d’ensemen- composition recherchés
    utilisation cement

    L'ensemencement Ce milieu contient un On peut étudier


    doit être massif, en inhibiteur : forte la fermentation
    stries serrées : concentration en du mannitol par
    chlorure de sodium virage au jaune
    (NaCl : 75 g.l-1), de l’indicateur
    coloré, le rouge
    ce qui permet un de phénol
    isolement sélectif
    de Staphylococcus
    tolérant les fortes
    concentrations en
    NaCl
    Protocole expérimental :
    - Divisez chaque boite de Pétri en 3 secteurs.

    - Ensemencer chaque section par à l’aide d’une anse de platine par l’une des
    colonies (A, B et M : mélange) striation
    Gélose nutritive
    Chapman
    (Témoin)

    A B A B

    M M

    A : Staphylococcus aureus, B : Escherichia coli, M : Mélange des 2 souches A et B.


    Protocole expérimental :

    Gélose nutritive
    Chapman
    (Témoin)

    A C A C

    M M

    A : Staphylococcus aureus, C : Bacillus subtilis, M : Mélange des 2 souches A et C.


    Composition des milieux de culture
    Milieu de Chapman (g/l) Gélose nutritive (g/l)

    - Peptone (source de C et N) 10 - Peptone 20

    - Mannitol (Sucre: Source de C) 10 - Extrait de viande 2

    - NaCl 75 - NaCl 5

    - Rouge de phénol 0,025 - Agar-agar 15

    - Extrait de viande 1 - Eau distillée qsp 1 litre

    - Agar-agar 15

    - Eau distillée q.s.p. 1 litre

    Milieu Chapman :
    Agent sélectif : NaCl à 75 g/l
    Agents différentiels : Mannitol : Sucre
    Rouge de phénol : Indicateur de pH
    Virage du rouge de Phénol en fonction du pH

    Dégradation du Mannitol : Mannitol +  production d’acides  Virage du rouge de phénol en jaune


    (Colonies jaunes)
    Lecture des résultats : Milieu Chapman
    Lecture des résultats : Milieu Chapman

    A : Staphylococcus aureus, B : Escherichia coli, M : Mélange des 2 souches A et B.

    A : Staphylococcus aureus, C : Bacillus subtilis, M : Mélange des 2 souches A et C.

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