Chapitre 1

Introduction générale
Actuellement le monde de la chimie est dirigé par de diverses formes de

dosages, de combinaisons, de synthèses. Leur nombre ne cesse d'augmenter de
jour en jour. Ces produits à composant multiple gagnent en intérêt, que ce soit
sur le plan médical qu'environnemental. Il est alors souhaitable que ces
formulations répondent à certaines normes relatives à leur qualité, leur quantité
et leur efficacité. Cela ne peut être possible que si des techniques d'analyses sont
disponibles pour leur détermination.
Cependant l'analyse de ces nouveaux produits à composants multiple représente

encore un défi majeur dans l'analyse moderne, dans des domaines tels que la
chimie analytique, l'analyse des médicaments, le contrôle de la pollution...
Ils existent différentes techniques en spectrophotométrie ultraviolet et visible qui

sont utilisées simultanément pour l'analyse des échantillons à composants
multiples, elles sont basées sur l'enregistrement et le traitement des spectres
d'absorption. Ces techniques permettent de minimiser les techniques de
séparation antérieure car les procèdes classique comme l'extraction (exemple de
la chromatographie) nécessitent une grande consommation de solvant,
accompagnés de risque de perte ou de contamination de l'échantillon.
De ce fait, nous avons jugé utile de comparer quelques méthodes d'analyse

spectrale, notamment la méthode analytique et la méthode de dérivé qui
permettent la détermination des concentrations d'un mélange binaire.
De ce fait, nous avons jugé utile de comparer quelques méthodes d'analyse

spectrale, notamment la méthode analytique et la méthode de dérivé qui
permettent la détermination des concentrations d'un mélange binaire.
L'objectif de travail est d'analyser deux mélanges de colorants par
spectrophotométrie.
Ce manuscrit se compose de deux parties principales:
Dans la partie A, nous présenterons une synthèse bibliographique sur la

spectrophotométrie d'absorption dans l'UV-Visible et les lois qui la régissent; les
généralités sur les colorants et les paramètres des méthodes d'analyse spectrale
moderne dans un mélange binaire.
Dans la partie B, nous présenterons les résultats expérimentaux de l'analyse de

deux mélange de deux colorants: le bleu de méthylène/la safranine et la
rhodamine/la safranine.
Partie I :
Synthèse bibliographéque
I.1. Introduction
La spectrophotométrie d’absorption est une technique basée sur la propriété de

la matière, et plus particulièrement de certaines molécules, à absorber la lumière
à certaines longueurs d'ondes d’un spectre UV-visible.
Elle permet de réaliser des dosages grâce à la loi de Beer-Lambert[1], qui

montre une relation de proportionnalité entre l'absorbance et la concentration et
aussi une étude structurale des complexes par l'étude des spectres d'absorption.
I.2 Principe de fonctionnement
 On parle de spectrophotométrie lorsque les radiations électromagnétiques

rencontrent la matière. Ces interactions sont observées dans le domaine
UV-Visible (UV de 200 à 400 nm et visible de 400 à 800 nm).
 La matière absorbe un photon dont l’énergie correspond à la différence
d’énergie entre le niveau fondamental et le niveau excité. Ceci est due à
une transition énergétique qui correspond à un saut d’un électron d’une
orbitale moléculaire fondamentale occupée à une orbitale moléculaire
excitée vacante. Un électron à l’état fondamental absorbe des radiations
d’une énergie E suffisante pour l’élever à un niveau d’énergie supérieur
(l’état excité) ce qui détermine la longueur d’onde () par la relation[2]
suivante :
h.c (I.1)
E=
❑
Tels que :
h : La constante de Planck
c : La vitesse de la lumière
Mais toutes les transitions énergétiquement possibles ne sont pas permises.
Les transitions permises sont celles qui provoquent une variation du moment
dipolaire électrique.
I.3 La loi de Beer-Lambert
Un rayonnement électromagnétique traversant un milieu subit plusieurs

modifications.
Une partie du faisceau est réfléchie, une autre est absorbée et transformée en
chaleur par interaction avec la matière, le reste passe à travers le milieu soumis
au rayonnement mis en jeu et à l’élément chimique soumis au rayonnement.
On définit la transmittance (T) comme étant le rapport de l’intensité de la

lumière transmise (I) sur l’intensité de la lumière incident (I0) :
I
T=
I0
(I.2)
Tandis que l’absorbance mesure la capacité d’un milieu à absorber la lumière

qui la traverse, c’est le logarithme décimal du rapport de l’intensité de la lumière
incident (I0) et l’intensité de la lumière transmise (I), l’inverse de la
transmittance est :
A=log
( II )=−log (T )
0
(I.3)
La relation de Beer-Lambert fait état d’une relation linéaire entre l’absorbance

et la concentration du soluté à une longueur d’onde précise :
A=log ( II )=ε . L .C
0
(I.4)
Tels que :
ε : L’absorptivité d’extinction molaire (l/ mol.cm).
L : Longueur du trajet optique dans l’échantillon (cm).
C : Concentration molaire du soluté (mol /l).
Il est important de noter que (ε) est une fonction de la longueur d’onde et donc
que la loi de Beer-Lambert est seulement vraie en lumière monochromatique.
Les intensités I et I0 sont mesurées simultanément ou successivement selon le

matériel employé (spectrophotomètre à simple ou à double faisceau).
La mesure de I0 se fait à l’aide d’un blanc qui permet de tenir compte de la

fraction du rayonnement absorbé et/ou réfléchi par la cuve et le solvant [2].
La loi de Beer-Lambert ne s’applique en temps normal que pour un seul

constituant en solution. Le constituant absorbera une quantité de la lumière à
plusieurs longueurs d’onde. Ces valeurs sont représentées par un graphique que
l’on nomme spectre (figure I.1), donnant l’absorbance en fonction des longueurs
d’onde.
I.3.1 Validité de la loi de Beer-Lambert
De nombreux paramètres peuvent provoquer une déviation de la loi Beer-

Lambert. Celle-ci n’est plus vraie quand la concentration devient trop élevée
(C≈ 10-2 mol/l), quand une réaction modifie la composition ou le pH ou quand il
reste des impuretés.
En outre elle doit être adaptée en cas de liaisons hydrogène avec le solvant de
solvatation d’interactions molécule-molécule aux fortes concentrations ou de
fluorescence [1].
Le calibrage doit alors faire appel à des méthodes non linéaires.
La solution doit être limpide (pas de précipité ou de trouble qui entraineraient

une diffusion de la lumière).
Il faut travailler en lumière monochromatique car ε est une fonction de la

nature du corps absorbant de la température et de la longueur d’onde.
Pour avoir une bonne sensibilité, il faut déterminer la longueur d’onde où la

solution absorbe le plus, c’est-à-dire la longueur d’onde la teinte est
complémentaire à celle de la solution.
I.3.2 Loi d’additivité des absorbances
Considérons une cuve de longueur l contenant une solution renfermant n

substances colorées, chacune ayant une concentration Ci et un coefficient
d’absorption molaire εi(λ) à la longueur d’onde et à la température considérées.
Chaque substance a une absorbance [3] :
Ai=ε i ( λ ) .l . Ci (I.5)
Dans le cas de mélanges homogènes dilués, les densités optiques des

différentes espèces contenues sans le mélange sont additives. Si deux solutions
absorbent (A1 et A2) à la même longueur d’onde, l’absorbance du mélange (Am)
est égale à la somme de leurs absorbances :
Am =A 1 + A 2 (I.6)
L’expérience montre que pour les solutions diluées, l’absorbance totale A(λ)
de la solution est additive.
A ( λ )=1 ∑ ε i ( λ ) .C i (I.7)
i
I.4 Spectre UV-Visible
Un spectre UV-Visible décrit la variation de l’absorbance (A) en fonction de la

longueur d’onde (λ). La bande d’absorption est caractérisée par sa position en
longueur d’onde λ max (nm) et par son intensité reliée au coefficient d’extinction
molaire εmax (A = εlC). La position du maximum d’absorption correspond à la
longueur d’onde de la radiation qui provoque la transition électronique.
Absorbance
λ (nm)
Figure I.1 : Schéma d’un spectre
I.5. Appareillage et fonctions
Le spectrophotomètre est l’appareil qui permet de visualiser les bandes

d’absorption d’un spectre, il permet de mesurer l'absorbance d'une solution à
une longueur d'onde donnée ou sur une région donnée du spectre.
Selon la loi de Beer-Lambert, l'absorbance d'une solution est proportionnelle

à la concentration des substances en solution à condition de se placer à la
longueur d'onde à laquelle substance absorbe les rayons lumineux. C'est
pourquoi la longueur d'onde est réglée en fonction de la substance dont on veut
connaitre la concentration.
Les spectrophotomètres comprennent en général :

 une source
 un porte-échantillon
 un monochromateur
 un détecteur et
un appareil de
lecture [1-5].
Figure I.2 : Schéma d’un spectrophotomètre

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Introduction générale

Actuellement le monde de la chimie est dirigé par de diverses formes de

Cependant l'analyse de ces nouveaux produits à composants multiple représente

Ils existent différentes techniques en spectrophotométrie ultraviolet et visible qui

De ce fait, nous avons jugé utile de comparer quelques méthodes d'analyse

De ce fait, nous avons jugé utile de comparer quelques méthodes d'analyse

Ce manuscrit se compose de deux parties principales:

Dans la partie A, nous présenterons une synthèse bibliographique sur la

Dans la partie B, nous présenterons les résultats expérimentaux de l'analyse de

La spectrophotométrie d’absorption est une technique basée sur la propriété de

Elle permet de réaliser des dosages grâce à la loi de Beer-Lambert[1], qui

I.2 Principe de fonctionnement

 On parle de spectrophotométrie lorsque les radiations électromagnétiques

I.3 La loi de Beer-Lambert

Un rayonnement électromagnétique traversant un milieu subit plusieurs

On définit la transmittance (T) comme étant le rapport de l’intensité de la

Tandis que l’absorbance mesure la capacité d’un milieu à absorber la lumière

La relation de Beer-Lambert fait état d’une relation linéaire entre l’absorbance

ε : L’absorptivité d’extinction molaire (l/ mol.cm).

L : Longueur du trajet optique dans l’échantillon (cm).

C : Concentration molaire du soluté (mol /l).

Les intensités I et I0 sont mesurées simultanément ou successivement selon le

La mesure de I0 se fait à l’aide d’un blanc qui permet de tenir compte de la

La loi de Beer-Lambert ne s’applique en temps normal que pour un seul

I.3.1 Validité de la loi de Beer-Lambert

De nombreux paramètres peuvent provoquer une déviation de la loi Beer-

La solution doit être limpide (pas de précipité ou de trouble qui entraineraient

Il faut travailler en lumière monochromatique car ε est une fonction de la

Pour avoir une bonne sensibilité, il faut déterminer la longueur d’onde où la

I.3.2 Loi d’additivité des absorbances

Considérons une cuve de longueur l contenant une solution renfermant n

Dans le cas de mélanges homogènes dilués, les densités optiques des

Un spectre UV-Visible décrit la variation de l’absorbance (A) en fonction de la

Figure I.1 : Schéma d’un spectre

I.5. Appareillage et fonctions

Le spectrophotomètre est l’appareil qui permet de visualiser les bandes

Selon la loi de Beer-Lambert, l'absorbance d'une solution est proportionnelle

Les spectrophotomètres comprennent en général :

Figure I.2 : Schéma d’un spectrophotomètre

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