M.B 019 1

N° d’ordre :
N° de série :
REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE
SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE ECHAHID HAMMA LAKHDAR D’EL-OUED
FACULTE DES SCIENCES DE LA NATURE ET DE LA VIE
DEPARTEMENT DE BIOLOGIE CELLULAIRE ET
MOLECULAIRE
MEMOIRE DE FIN D’ETUDE

En vue de l’obtention du diplôme de Master Académique
Filière : Sciences biologiques
Spécialité : Biochimie Appliquée
THEME
Etude de l'effet antitoxique de l'éxtrait
méthanolique de l'espèce Cotula cinarea vis à-
vis le pesticide Chlorpyriphos chez les rats wistar
albinos
Présenté par:
DRIDI Naima et SEGUENI Nadjet
Membres du jury : soutenu le 01/06/2015
Président Mr. DEROUICHE Samir M.A.A Université d'El Oued

Promoteur Mr. DJAHRA Ali Boutlelis M.C.B Université d'El Oued
Examinateur Mr. KHELEF Yahya M.A.B Université d'El Oued
Année Universitaire 2014/2015

SOMMAIRE
Résumé français
Résumé arabe
Résumé englais
Liste des figures
Liste des tableaux
Liste des abréviations
INTRODUCTION
PREMIERE PARTIE: SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE
CHAPITRE I : ETUDE DE L’ESPECE VEGETALE
I.1.Famille Astéracées (Composées)………………………….………………………… 04
I.2.Genre Cotula ………………………………………………….……………………. 05
I.3.Etude de l’espece Cotula cinerea ................................................................................ 05
I.3.1. Noms vernaculaires de Cotula cinerea………………………………………….……….. 05
I.3.2.Description de l’espèce …………………………………………………………….. 05
I.3.3.Position systématique ……………………………………………………………… 06
I.4.Répartition géographique …………………………………………………….............. 06
I.5. Composition chimique de la plante ………………………………………………….. 06
I.6.Propriétés et usages thérapeutiques ………………………………………………… 07
CHAPITRE II : RELATION TOXICITÉ- STRESS OXYDATIF
II.1. Effet toxique …………………………………..…………………………………… 08
II.1.1. Toxicité aiguë …………………………………………………………………… 08
II.1.2. Toxicité à terme (subaiguë et chronique) …………………………………………. 08
II.2. Devenir d’un toxique dans l’organisme ……………………………….……………. 09
II.3. Manifestation toxique dans l’organisme …………………………………………….. 09
II.3.1.Le foie ……………………………………………………………………………… 10
II.3.1.1. Structure générale du parenchyme hépatique ………………………….... …….. 10
II.3.1.2.Rôle du foie dans le métabolisme des toxiques ………………………………….. 11
II.3.2.Le rein …………………………………………………………………………….. 11
II.3.2.1.Unité structurale du rein ; le néphron ……………………………………………. 11
II.3.2.2.Rein et l’élimination des toxiques ……………………………………………… 12
II.4.Stress oxydatif ………………………………………………………………………. 12
II.4.1.Définition d’un radical libre ……………………………………………………… 13
II.4.2. Types des radicaux libres ………………………………………………………… 13
II.4.3.Les antioxydants ………………………………………………………………….. 14
II.4.3.1.Définition Un antioxydant …………………………………………………….. 14
II.4.3.2.Classification des antioxidants ………………………………………….............. 14
II.a) les antisoxydants primaries ……………………………………………. ………….. 14
II.b) les antisoxydants secondaires……………………………………………………... 15
DEUXIEME PARTIE: ETUDES EXPERIMENTALE
MATERIELS ET METHODES
1. Matériel Utilisé …………………………………………………………………..…….. 18
1.1. Matériel végétal……………………………………………………………………..... 18
1.1.1. Site de prélèvement ………………………………………………………………. 18
1.1.1. 2. Séchage ……………………………………………..………………………….. 18
1.2. Matériel animal …………..…………………………………………………….……. 19
1.3. Insecticide (Chlorpyriphos) …………………………………………………………. 19
2. Méthode suivies ……………………………………………………………................. 20
2. 1. Préparation de l’éxtrait brut méthanolique ………………………………………… 20
2. 2. Rendement de l’extrait brut méthanolique …………………………………………. 20
2. 3. Dosage des composes phénoliques totaux ……………………………..................... 20
2.4. Evaluation de l’effet antitoxique ……………………………………………………. 21
2.4.1. Détermination de la DL50 de l’insecticide (Chlorpyriphos) ……………………….. 21
2.4.2. Préparation des solutions de l’insecticide (Chlorpyriphos) …………..................... 21
2.4.3. Préparation des solutions à base d’extrait brut méthanolique …………………….. 21
2.5. Protocol expérimentale ……………………………………………………………… 21
2.5.1. Prélèvement de sang…………………………………………………....................... 22
2.5.2. Dosage des paramètresbiochimiquessériques ……………………........................... 22
2.5.3. Prélèvement du foie………………………………………………………………… 22
3. Etude statistique ……………………………………………………………………… 22
RESULTATS
1.Rendement de l’extrait brut méthanolique ……………………………………............ 24
2.Teneur des composes phénoliques totaux dans l’extrait brut méthanolique …............ 24
3.Evaluation de l'activité antitoxiques …………………………………………………… 25
3.1.Effet sur le poids …………………………………………………………………….. 25
3.2.Effet sur les teneurs en enzymes sériques ……………………………………………. 26
3.3.Effet sur les paramètres de bilan hépatique …………………………………............... 26
3.4.Effet sur les paramètres de bilan rénal ………………………………………………. 27
3.5.Effet sur l’ionogramme …………………………………………………………….. 28
3.6.Effet sur les autres paramètres biochimiques ……………………………….……… 28
DISCUSSION 30
CONCLUSION ET PERSPECTIVES 33
REFERENCESBIBLIOGRAPHIQUES 34
ANNEXES
Remerciements
Nous remercions en premier lieu ALLAH le tout puissant pour toute la
volonté et le courage qu’il nous avons donné pour l’achèvement de cette
mémoire.
notre sincères remerciements vont à nos encadreur : Monsieur

DJAHRA Ali Boutlelis ; professeur à l’université d'El-Oeud, nous la
remercions également pour sa disponibilité et son aide tout au long de cette
modeste recherche, qu’elle trouve ici toutes nos gratitudes.
Nous exprimons nos remerciements à Monsieur CHOUIKH Atef pour son
aide.
Monsieur le pharmacien Abdelrraouf LAMAA, directeur du laboratoire des
analyses médicales LAMAA: nous tenons à vous remercier chaleureusement
pour votre soutien scientifique et moral.
Il mes est aussi agréable de remercier vivement Mme SANA.
Responsable du laboratoire de Technicien d'Université d'EL-OEUD pour sa
aide matérielle.
Notre respect et reconnaissance sont adressés à Monsieurs DEROUICHE
Samir et KHELEF Yahya enseignants à l’université d’El-Oued, qui mes fait
l'honneur de présider le jury de soutenance.
En fin, à tous ceux et celles qui ont contribué de près et de loin à la réalisation
de ce travail qu’ils trouvent ici l’expression de notre profonde gratitude
et nos remerciements.
RESUME
Les enquêtes épidémiologiques ont évoqué l’implication des pesticides dans plusieurs
pathologies chez des personnes exposées à ces substances. Les objectifs de ce travail sont
d’étudier l’effet toxique de pesticide Chlorpyriphos couramment utilisés pour le traitement
phytosanitaire et les effets antitoxiques des polyphénols de l’extrait méthanolique de Cotula
cinerea. Pour ce faire, des 25 rats males Wistar albinos ont été d’abord soumis par gavage à
l’action du Chlorpyriphos (9 mg/kg/j) et suivis par trois doses différentes (100, 200 et 400
mg/Kg/j) de l’extrait méthanolique de Cotula cinerea. Après 10 jours de traitement, les rats
ont été sacrifiés. Les échantillons du sang ont été prélevés pour le dosage des paramètres
biochimiques sériques, ils ont été réservés pour évaluer l’activité antitoxique.
Une diminution dans la concentration des paramètres lipidiques (Cholestérol, Triglycérides

et lipides totaux) et des transaminases (TGO et TGP) et les autres enzymes LDH, GGT et
PAL en plus de l’ionogramme et les protéines totaux avec la bilirubine a été notée chez les
rats traités par rapport à celles des témoins non traités. On conclus que les résultats obtenus
ont permis d’affirmer que l’extrait de la plante étudiée présente des propriétés antitoxiques
assez intéressantes.
Mots clés : Activité antitoxique, Polyphénols, Cotula cinaria, Stress Oxydatif,

Chlorpyriphos.
‫الملخص‬
‫إن التقارير الوبائية تستدعي اختبار المبيدات الحشرية كمصدر للكثير من األمراض عند‬
‫األشخاص المعرضين لهذه‪ .‬الهدف من هذا العمل هو دراسة األثر السام للمبيد‬
‫‪ Chlorpyriphos‬الذي يستخدم كثيرا في عالج النباتات و الفعالية ضد السميّة للمواد الفينولية‬
‫للمستخلص الميثانولي لـ ‪ ,Cotula cinerea‬لهذا الغرض تم إخضاع ‪ 25‬جرذ ذكور من‬
‫نوع ‪ Wistar Albinos‬إلى جرعات عن طريق البلع لـ ‪ Chlorpyriphos‬بتركيز ‪9‬‬
‫مغ‪/‬كغ‪/‬يوم و يليها ذلك ثالث تراكيز مختلفة من المستخلص الميثانولي (‪400 ,200 ,100‬‬
‫مغ‪/‬كغ‪/‬يوم)‪ .‬بعد عشرة أيام تم الذبح و أخذت عيّنات الدم من أجل تحديد المعايير البيوكيميائية‬
‫لتقدير النشاط ضد السميّة‪.‬‬
‫سمحت النتائج المحصل عليها بتأكيد أن المستخلص للنبتة المدروسة يحتوي على خصائص‬
‫مهمة ضد السميّة‪ ,‬حيث ساهمت في انخفاض تراكيز المعايير الدهنية (كوليسترول‪ ,‬ثالثي‬
‫الغليسيريد والدهون االجمالية ) و اإلنزيمات (‪ )LDH, GGT , PAL TGO, TGP‬اضافة الى‬
‫المخطط االيوني والبروتينات االجمالية و البيليريبين عند الجرذان المعالجة بالمستخلص مقارنة‬
‫بتلك غير المعالجة‪.‬‬
‫‪Cotula‬‬ ‫الكلمات المفتاحية‪ :‬الفعالية ضد السميّة‪ ,‬متعدد الفينوالت‪ ,‬اإلجهاد التأكسدي‪,‬‬

‫‪.Chlorpyriphos ,cinerea‬‬
ABSTRACT
The epidemiological inquiries evoked the implication of pesticides in several pathologies at

people exposed to these substances. The objectives of this work are to study the toxic effect of
pesticide Chlorpyrifos usually used for the phytosanitary treatment and the antitoxic effects of
the polyphenols of the méthanolique extract of. To do it, 25 male rats Wistar albino was
subjectedat first by way force-feeding to the action of the Chlorpyrifos (9 mg / kg / day) and
followed by three different doses (100, 200 and 400 mg / kg / day) by the méthanolique
extract of Cotula cinerea. After 10 days of treatment, rats were sacrificed. The samples of the
blood were taken for the dosage of the serum biochemical parameters, they werere served for
estimating the antitoxic activity.
A decrease in the concentration of the lipid parameters (Cholesterol, Triglycerides and total lipids) and
transaminases (TGO and TGP) and the other enzymes LDH, GGT and the PAL besides the
ionogramme and the total proteins with the bilirubine was noted at rats treated compared with those of
the witnesses untreated. One end that the obtained results allowed to assert that the extract of the
studied plant presents rather interesting antitoxic properties.
Keywords: activity antitoxin, Polyphenols, Cotula cinaria, Oxidative Stress, Chlorpyrifos.

‫الملخص‬
‫إن التقارير الوبائية تستدعي اختبار المبيدات الحشرية كمصدر للكثير من األمراض عند األشخاص‬
‫المعرضين لهذه المواد ال سيما السرطانية‪ ,‬العصبية‪ ,‬اضطرابات التكاثر‪ ....‬الهدف من هذا العمل هو‬
‫دراسة األثر السام للمبيد ‪ Chlorpyriphos‬الذي يستخدم كثيرا في عالج النباتات و الفعالية ضد السميّة‬
‫للمواد الفينولية للمستخلص الميثانولي لـ ‪ ,Cotula cinerea‬لهذا الغرض تم إخضاع جرذان ذكور من‬
‫نوع ‪ Wistar Albinos‬إلى جرعات عن طريق البلع لـ ‪ Chlorpyriphos‬بتركيز ‪ 9‬مغ‪/‬كغ‪/‬يوم و يليها‬
‫ذلك ثالث تراكيز مختلفة من المستخلص الميثانولي (‪ 400 ,200 ,100‬مغ‪/‬كغ‪/‬يوم)‪ .‬بعد عشرة أيام تم‬
‫الذبح و أخذت عيّنات الدم من أجل تحديد المعايير البيوكيميائية لتقدير النشاط ضد السميّة‪.‬‬
‫سمحت الن تائج المحصل عليها بتأكيد أن المستخلص للنبتة المدروسة يحتوي على خصائص مهمة ضد‬
‫السميّة‪ ,‬حيث ساهمت في انخفاض تراكيز المعايير الدهنية (كوليسترول‪ ,‬ثالثي الغليسيريد) و اإلنزيمات‬
‫(‪ )TGO, TGP‬عند الجرذان المعالجة بالمستخلص مقارنة بتلك غير المعالجة‪.‬‬
‫الكلمات المفتاحية‪ :‬الفعالية ضد السميّة‪ ,‬متعدد الفينوالت‪ ,‬اإلجهاد التأكسدي‪,Cotula cinerea ,‬‬
‫‪.Chlorpyriphos‬‬
Liste des figures
Numéro Titre Page
Figure 01 Vue générale des parties d’une plante des Astéracées 05
Figure 02 vue générale de l’espèce Cotula cinerea 06
Figure 03 Cheminement d’un toxique dans l’organisme 09
Figure 04 Organisation structurale du lobule hépatique 11
Figure 05 Organisation structurale du néphron rénal 12
Figure 06 principale source des ROS 14
Figure 07 Structure des tocopherols 15
Figure 08 Structure de l’acide ascorbique 16
Figure 09 Structure de beta caroténe 16
Figure 10 les polyphenoles 16
Localisation géographique de la zone d’étude (Ben Guecha,

Figure 11 18
wilaya d’El Oued).
Figure 12 Courbe d’étalonnage de l’acide gallique. 25
Effet de l’extrait brut méthanolique sur les paramètres

Figure 13 26
enzymatique chez les rats soumises à l’effet de l’insecticide.
Variation des ions Ca, Mg, K, Na sous effet de pesticide et la
Figure 14 28
plante chez les rats de Wistar
Liste des tableaux
Tableau Titre Page

Tableau 01 Caractéristiques de la chlorpyriphos-éthyl 19
Tableau 02 Caractères physico-chimiques de la chlorpyriphos-éthyl 20
Tableau 03 Concentrations des substances testées 22
Pourcentage de l’extrait brut méthanolique des feuilles de
Tableau 04 24
Cotula cinerea.
Résultats de la teneur en composés phénoliques totaux de
Tableau 05 25
l’extrait brut méthanolique de Cotula cinerea
Poids corporel, poids du foie et poids relatif du foie des
Tableau 06 25
différents lots de rats.
Effet de l’extrait brut sur les paramètres de bilan hépatique
Tableau 07 26
chez les rats traités par l’insecticide
Effet de l’extrait brut sur les paramètres de bilan rénal chez
Tableau 08 27
les rats traités par l’insecticide
Effet de l’extrait brut sur les autres paramètres biochimiques
Tableau 09 29
lipidiques chez les rats traités par l’insecticide
Liste des abréviations
Ac uriq: Acide Urique

BD: Bilirubine Direct
BT: Bilirubine Totale
Ca: Calcium
CG: Chromatographie en phase Gazeuse
Chol: Cholestérol
CPF: Chlorpyrifos.
Créat: Créatinine
ERA: Espèces Réactives de l'Azote
ERO: D’espèces Réactives Oxygénées
ɤ-GT: Gamma-Glutamyl Transféras
Gly: Glycémie
H3PMO12O4: Acide phosphomolybdique :
H3PW12O40: Acide phosphotungestique :
HPLC: Chromatographie Liquide Haute Performance
K: Potassium
LDH: Lactate Déshydrogénase
Lip T: Lipides Totaux
Mg: Magnésium
MO8O3 : Molybdène
Na2CO3 : Carbonate de Sodium
PAL: Phosphatase Alcaline
PCB: PolyChloroBiphényls
PEB : Poids de L’Extrait Brut.
PMV : Poids de Matière Végétale.
POPs: Les Polluants Organiques Persistants
PrT: Protéines Totaux
R : Rendement.
RMN: Résonance Magnétique Nucléaire
SM: Spectromètre de Masse.
SO: Stress Oxydant
TG: Triglycerides
TGO: Glutamooxaloacétate Transférase
TGP: Glutamopyruvate Transférase
UV: Ultra Violet
W8O23: Tungstène
INTRODUCTION
Cotula cinerea Introduction
INTRODUCTION
D epuis la nuit des temps, les humains apprécient les vertus apaisantes et analgésiques
des plantes. A travers les siècles, les traditions humaines ont su développer la
connaissance et l’utilisation des plantes médicinales. Si certaines pratiques médicales
paraissent étranges et relèvent de la magie, d’autre au contraire semble plus fondée, plus
efficaces. Pourtant, toutes ont pour objectif de vaincre la souffrance et d'améliorer la santé des
humains (LAROUSSE, 2001 et VERDRAGER, 1978).
N’oublions pas que de tout temps, à l'exception de ces dernières années, les hommes n'ont eu
que les plantes pour se soigner, qu'il s’agisse de maladies bénignes, rhume ou toux, ou plus
sérieuses, telles que la tuberculose ou la malaria.
La phytothérapie, qui propose des remèdes naturels, est bien acceptée par l’organisme et
souvent associée aux traitements classiques. Elle connaît de nos jours un renouveau
exceptionnel en occident, spécialement dans le traitement des maladies chroniques, comme
l’asthme ou l’arthrite. De plus, les effets secondaires induits par les médicaments inquiètent
les utilisateurs, qui se tournent vers des soins moins agressifs pour l’organisme. On estime
que 10 à 20% des hospitalisations sont dues aux effets secondaires des médicaments
chimiques.
En dépit des résultats spectaculaires obtenus par l'allopathie, la médecine classique connaît
aussi des échecs, l'affaire de la thalidomide en est un exemple dramatique. En 1962, en
Allemagne et en Grande-Bretagne, 3000 enfants, dont les mères avaient pris des sédatifs
durant leur grossesse, naissent avec des difformités. En effet, on se rend compte,
brusquement, qu'un traitement à base de médicaments sophistiques peut engendrer des effets
secondaires catastrophiques. Ceci s'applique aussi aux plantes, car si ces dernières sont faciles
à utiliser, certaines d’entre elles provoquent également des effets secondaires. Comme tous les
médicaments, les plantes médicinales doivent être employées avec précaution. Il est
recommandé de n'utiliser une plante que sur les conseils d'un spécialiste : mal dosée, l'éphédra
(Ephedra sinica) est très toxique et la consoude (Symphytum officinale), une plante qui a
connu, jadis, son heure de gloire, peut avoir des effets fatals dans certaines circonstances.
Toutefois, lorsqu'un traitement à base de plantes est suivi correctement, les risques d’effets
secondaires sont fort limités. (VERDRAGER, 1978 et FERNANDEZ, 2003).
L'action de la phytothérapie sur l'organisme dépend de la composition des plantes. Depuis le

XVIIIe siècle, au cours duquel des savants ont commencé à extraire et à isoler les substances
chimiques des plantes, on considère les plantes et leurs effets en fonction de leurs principes
actifs. La recherche des principes actifs extraits des plantes est d'une importance capitale car
elle a permis la mise au point de médicaments essentiels.
S'il est capital de maîtriser l'action des différents principes actifs pris isolément, la
phytothérapie, à la différence de la médecine classique, recommande d'utiliser la plante
entière, appelée aussi « totum » plutôt que des extraits obtenus en laboratoire. Etudier les
pièces d’une montre et réussir à en identifier les parties essentielles ne permet pas de
comprendre comment elle fonctionne, de même que disséquer une plante médicinale pour
isoler ses principes actifs ne suffit pas pour expliquer comment elle agit. Une plante entière
est plus efficace que la somme de ses composants. Ainsi, des chercheurs ont démontré que les
principes actifs de nombreux végétaux, tels ceux du ginkgo (Ginkgo biloba), agissent de
manière complexe et combinée pour produire un effet thérapeutique global.
Les plantes contiennent des centaines, voire des milliers de substances chimiques actives.
Souvent, déterminer en détail l’action d’une plante est très difficile, sinon impossible, même
si son effet médicinal est, en revanche, bien connu. L'étude pharmacologique des plantes
entières indique qu'elles fonctionnent comme un puzzle incomplet. (FERNANDEZ, 2003 et
BRUNETON, 1999).
La phytothérapie continuera-t-elle à être appréciée à sa juste valeur, c'est comme un large

éventail de traitements équilibrés, sains, économiques et écologiques, ou ne sera-t-elle qu'une
nouvelle activité économique devant impérativement générer des bénéfices immédiats ?
Pour notre part, nous nous sommes intéressés à une espèce végétale utilisée en phytothérapie.
Il s’agit de Cotula cinerea.
Notre objectif était de vérifier la spécificité de cette plante aussi bien du point de vue
biochimique (Teneur en polyphénols) que sur le plan antitoxique de ses composants majeurs.
- L’utilisation massive de cette plante par les populations est-elle justifiée ?
- Est-elle riche en substances naturelles phytothérapiques protectrice contre l’intoxicité causé
par le chlorpyrophos ?
- C’est ce que nous efforcerons de démontrer à travers cette étude dans le cadre de ce
mémoire. Notre travail s’articule en deux parties.
- Dans une première partie, nous dresserons une aperçu bibliographique sur l’espèce
végétale Cotula cinerea (leur classification, leurs principales substances naturelles…) et la
relation toxicité-stress oxydatifs (effet toxique, manifestation toxique dans l'organisme…).
- La seconde partie, nous essayerons de démontrer le pouvoir antitoxique de l’extrait brut de
la plante Cotula cinerea et nous terminerons enfin par la discussion, conclusion et les
perspectives.
SYNTHESE
BIBLIOGRAPHIQUE
CHAPITRE I : ETUDE DE
L’ESPECE VEGETALE
Cotula cinerea Synthèse bibliographique
Généralité
L’étude de l’espèce végétale Cotula cinerea nécessite en premier lieu la détermination

de son emplacement dans les diverses catégories de la classification systématique botanique.
D’ailleurs, elle fait partie de l’embranchement des spermaphytes, sous embranchement des
angiospermes et la classe des dicotylédones.
Cette classe taxonomique constitue une importante partie dans la totalité des espèces
végétales répandues dans le monde entier. Cela est confirmé par son énorme distribution et
ses nombreuses familles. Parmi lesquels on cite la famille des Astéracées dont l’espèce à
étudier fait partie.
1. Famille Astéracées (Composées)

La famille des composées (Compositae = Asterceae) est une des plus vastes dans le règne
végétale (BOUZIANE, 2002), Famille de loin la plils importante de notre territoire puisqu'elle
renferme 408 espèces réparties en 109 genres (QUEZEL et SANTA, 1962). Les deux
caractéristiques essentielles de la famille sont groupement des fleurs en capitules et soudure
des étamines par leurs anthères. Le capitule est entouré par des pièces appelées bractées dont
l'ensemble forme l'involucre, ces bractées sont généralement sur plusieurs rangs et étroitement
imbriquées. A l'intérieur de l'involucre, les fleures sont insérées côte à côte sur un réceptacle
généralement plan ou un peu bombé, parfois convexe, chez une partie des genres, elles sont
séparées par des paillettes membraneuses ou dures, les fleures sont généralement
dissemblables dans un même capitule, celles du centre ayant à la fois étamines et pistil tandis
que celles de la périphérie sont ordinairement uniquement femelles. La corolle peut être en
forme de tube terminé par cinq dents représentant la partie libre des pétales, ou bien en forme
de languette constituée par l'ensemble des pétales rejetés d'un même côté, les fleures en
languette, dites ligules, occupent la périphérie du capitule (sauf dans la sous-famille des
liguliflores ou les fleures sont toutes en languette) (OZENDA, 1977).
4
Figure 01 : Vue générale des parties d’une plante des Astéracées

(http://cabanedetellus.free.fr/Flore_Familles_Tellus.html#Astéracées)
2. Genre Cotula
Ce genre compte quelques 80 espèces d'annuelles et de vivaces, dont quelques-uns
partiellement aquatique, sont répandues dans de nombreuses région tempérée de l'hémisphère
Sud de l'Afrique, Australie et à l'Amérique du Sud. Les petites feuilles tendres sont souvent
profondément découpées. Et les petites capitules ressembles à des boutons sans rayon. Bien
que les bractées forment parfois un cercle autour du disque jaune pur ou crème (GEOFF et al.,
2013).Ce genre est représenter par trois espèces dans l'Algérie Parmi lesquels Cotula cinerea
(OZENDA, 1977).
3. Etude de l’espèce Cotula cinerea

3.1. Noms vernaculaires de Cotula cinerea
Noms Arabes : selon (CHOUIKH et CHEFROUR, 2012) shiha, shihia, shih el ibel.
Guertoufa beida ou chuihiya (MAIZA et al., 1993). Elle aussi nomée Gartoufa
(BENSIZRARA et al., 2013; DJELLOULI et al., 2013; ABDENI et al., 2014).
3.2. Description de l’espèce

Feuilles petites, entières, tridentées au sommet, laineuses blanchâtres, épaisses, divisées dans
leur partie supérieure en 3 à 5 dents obtuses; tiges de 10 – 40 cm, couchées puis redressées;
capitules de 6 à 10 mm de diamètre, à involucre laineux à fleurs toutes tubuleuses, brunes en
5
boutons puis jaune d'or lorsqu'elles s'ouvrent. Très commun dans tout le Sahara, notamment
dans les sols un peu sablonneux. (OZENDA, 1977;QUEZEL et SANTA, 1962).
3.3. Position systématique

La détermination de la position taxonomique de l’espèce végétale Cotula cinerea Del. dans la
classification systématique botanique a été faite selon (QUEZEL et SANTA, 1963). Elle est la
suivante :
Embranchement : Phanérogames ou Spermaphytes
Sous embranchement : Angiospermes
Classe : Endicots
Sous classe : Astéridées
Ordre : Astérales
Famille : Astéracées ou Composées
Genre : Cotula
Espèce : Cotula cinerea Del., syn: Brocchia cinerea (Del.)
Figure 02 : Vue générale de l’espèce Cotula cinerea (www.treknature.com)
4. Répartition géographique :
L’espèce Cotula cinerea est très rencontrée dans tout region saharienne de l'Algérie, elle
pousse dans les ergs et les sols peu ensablés. Où elle est connue sous le nom de chouihia (ou
parfois chihia). Cotula cinerea est aussi connue dans les régions sahariennes d’Egypte et du
Maroc (BOUZIANE, 2002).
5. Composition chimique de la plante

On y trouve des flavonoïdes isolées chez Cotula cinerea sont : flavone O- et C-glycosides,
flavonols glycosides et quercetagétine 3, 6, 7-triméthyl éther, lactones sesquitérpèniques, les
glaucolides (METWALLY et al., 1986) et les coumarines sesquiterpéniques (GREGER et
HOFER, 1985).
6
6. Propriétés et usages thérapeutiques
Cette espèce est largement utilisée en médecine traditionnelle marocaine pour ses propriétés
biologiques comme les activités anti-inflammatoire, analgésique, antiseptique,
antibactérienne, antipyrétique et contre les larves, (MARKOUK et al., 1999; LARHSINI et
al., 2002). Dans le Sahara algérien plus précisément à Ouargla, cette plante est destinée contre
la colique, la diarrhée, la toux, le rhumatisme et la stérilité (HAMMICHE et MAIZA, 2006).
7
Généralité
En Europe, en Amérique du Nord et dans tous les pays développés en général, la

pathologie hépatique est d'origine virale (Hépatites), la toxicomanie, l'alcoolisme, l’abus
alimentaire, certains traitements médicamenteux (médicaments du système nerveux central,
antibiotiques, certains analgésiques, médicaments de la chimiothérapie (HIKINO et al., 1984).
mais aussi d'origine chimique par la pollution industrielle et agricole. Les solvants tels que le
tetrachlorure de carbone, le chloroforme, dichloropropane, dichloropropène, dibromoethane,
dichloroéthane, clorobenzène, tétrachlorobenzène…etc. les produits phytosanitaires ou
pesticides tels que les pyridines ou intermédiaire de synthèse de pesticides,
polychlorobiphényls (PCB), les organophosphorés, les triazines, les phénylurées. A titre
d’exemple, Les PCB sont pratiquement non biodégradables d’où un problème majeur
d’écotoxicité (bioaccumulation au long des chaînes alimentaires). Leur pyrolyse à des
températures élevées entrainent des anomalies biologiques hépatiques (augmentation
modérée des triglycérides, des Gamma Glutamyl Transférase  GT, des transaminases) avec
parfois hépatomégalie. Les organophosphorées quant à eux entrainent des intoxications
hépatorénales aigues s’accompagnant d’une acidose métabolique qui peut se compliquer
d’une cytolyse hépatique ou d’une tubulopathie rénale liée à la myoglobinurie. Cela nous
donne un aperçu sur le problème de santé publique que posent les pathologies hépatiques à
l'échelon mondial. (MORA V et al., 1992)
1. Effet toxique
Selon la fréquence et la durée de l’exposition ou l’administration du toxique, on peut
distinguer plusieurs formes de toxicité : la toxicité aiguë et la toxicité à terme : subaiguë et
chronique.
1.1. Toxicité aiguë

La toxicité aiguë englobe tous les phénomènes spécifiques et les signes adverses, qui se
manifestent juste après l’exposition de l’organisme à une prise unique ou plusieurs prises très
rapprochées d’un agent chimique. L’effet toxique aigu est généralement considéré comme un
effet qui se produit immédiatement ou dans les premiers jours après l’exposition (LEBLANC,
2010).
1.2. Toxicité à terme (subaiguë et chronique)

Certains effets néfastes peuvent prendre plusieurs semaines ou de nombreuses années avant d’être
diagnostiqués et éventuellement se révéler irréversibles (exemple : Neurotoxicité de l’hexane).
L’évaluation de la toxicité aiguë d’une substance ne permet pas de prédire ce type de toxicité. Des
8
études destinées à évaluer la toxicité subaiguë et chronique doivent donc être effectuées
(REICHL, 2004).
La toxicité subaiguë est due à l'exposition répétée à une dose du toxique, qui ne cause aucune
toxicité aiguë évidente, pendant une période assez prolongée mais à condition de ne pas
constituer une partie significative de la vie de l'espèce examinée. Dans les essais de la
toxicité. subaiguë, l’administration orale pendant 28 ou 90 jours chez le rat (ou bien la souris)
ou le chien, respectivement, serait typique (HODGSON et CUNNY, 2010).
2. Devenir d’un toxique dans l’organisme

Une substance qui pénètre dans l'organisme peut avoir des effets bénéfiques (médicaments)
ou néfastes (toxiques). Inversement, l'organisme peut agir sur cette substance : c'est le
métabolisme. La réponse de l'organisme à un toxique dépend de la quantité de la substance
présente dans un tissu ou un organe. Plusieurs facteurs interviennent dans les processus
d'action toxique (Figure 03), (BAYNES et HODGSON, 2010).
Figure 03: Cheminement d’un toxique dans l’organisme (LAPOINTE, 2004).
3. Manifestation toxique dans l’organisme

L’expression des effets toxiques ou la manifestation toxique peut être très différente dans
l’organisme vivant. Ces réponses toxiques ont été classées en catégorie comme suit
(TIMBRELL, 2000):
1) Action toxique directe : les lésions tissulaires,
2) Effets physiologiques et biochimiques,
3) Immunotoxicité,
4) Mutagénèse
5) Carcinogenèse.
9
Les toxiques ne produisent pas des effets avec la même intensité sur tous les organes. Celui-ci
dépond de nombreux facteurs, y compris l’importance de l’organe et la quantité des
substances toxiques et/ou des métabolites réactifs qu’il contient. Des organes tels que le rein
et le foie sont bien approvisionnés avec le sang et sont métaboliquement actifs, parce qu’ils
ont un rôle important dans la biotransformation et l’excrétion des toxiques. Ces organes sont
appelés organes cibles puisqu’ils sont plus vulnérables et plus exposés aux toxiques que les
organes ou les tissus mal irrigués ou métaboliquement moins actifs tels que la peau et l’os
(TIMBRELL, 2000 ; LAPOINTE, 2004).
3.1. Le foie
Le foie est un organe vital, tout comme le coeur et les poumons. Il est souvent l’organe cible
chez les animaux d’expérience (RHIOUANI et al., 2008), car il remplit de multiples fonctions
et son rôle est très important dans le maintien de l’équilibre général. Il participe à la digestion,
à l’emmagasinage des aliments ainsi qu’à la détoxication (en aidant l’organisme à se
débarrasser de ses poisons) et à l’élimination via les canalicules biliaires (GEROLANI, 2005).
3.1.1. Structure générale du parenchyme hépatique

De point de vue histologique, le foie est constitué de cellules hépatiques (hépatocytes)
organisées en travées autour des sinusoïdes (Figure 04). L'unité fonctionnelle du foie est le
lobule hépatique qui est entouré d'espaces portes, où sont groupées les branches de l'artère
hépatique, de la veine porte et des canaux biliaires (WALLACE et MEYER, 2010).
10
Figure 04 : Organisation structurale du lobule hépatique (WALLACE et MEYER., 2010).
3.1.2. Rôle du foie dans le métabolisme des toxiques

Le foie est un organe annexe du tube digestif, il remplit de nombreuses fonctions
indispensables à la vie. D'une part, il participe au processus de la digestion par la sécrétion
biliaire et d'autre part, il transforme l'apport discontinu des substances absorbées par le tube
digestif en un flux continu de substances nutritives qui assurent une fourniture suffisante de
principes nutritifs à l'organisme. Toutes les substances introduites dans l'organisme et
atteignant le torrent circulatoire, y transitent et y subissent des transformations plus ou moins
complexes de leurs structures avant d'être excrétées. Le foie se trouve de ce fait exposé à
diverses agressions qui ont parfois de graves répercussions sur tout l'organisme
(GUILLOUZO et al., 1989).
3.2 Le rein
De même que pour le foie, le rein est un organe important dans le cheminement des
substances toxiques. Sa fonction majeure consiste à filtrer le sang, en dégageant toute
substance nocive et en conservant les molécules essentielles (REICHL, 2004).
3.2.1. Unité structurale du rein ; le néphron

Microscopiquement (Figure 05), chaque rein est constitué d’un complexe des unités
fonctionnelles appelées néphrons (LACARELLE et VIALA, 2005). Ceux-ci sont composés
11
des glomérules (petits réseaux de vaisseaux sanguins) et des tubules (subdivisé en tubule
proximal, l’anse d’Henlé, le tubule distal) et finalement le tube collecteur.
Figure 05: Organisation structurale du néphron rénal (TARLOFF et WALLACE, 2010).
3.2.2. Rein et l’élimination des toxiques

La filtration glomérulaire et la réabsorption tubulaire (98% des électrolytes et d’eau et
virtuellement, 100% du glucose et d’acides aminés filtrés par les glomérules) sont les
principales étapes de la formation de l’urine. Cependant, le rein exerce plusieurs d’autres
fonctions vitales (régulation de la pression sanguine et du volume extracellulaire, le maintien
de la balance acido-basique et électrolytique) qui sont intimement liés à son rôle dans le
maintien de l’homéostasie intérieure, permettant de protéger les cellules vis-à-vis des
conséquences des variations environnementales de l’organisme (TARLOFF et WALLACE,
2010).
4. Stress oxydatif
Le stress oxydant est responsable des dommages cellulaires liés à plusieurs maladies tel que le
diabète, le cancer, les maladies cardiovasculaires, l’influenza, le syndrome de Down, les
12
hépatites, l’arthrite rhumatoïdes, les désordres du système nerveux, l’ulcère, la pneumonie
ainsi que le vieillissement. Il réfère à une rupture dans la balance oxydant/antioxydant
cellulaire durant laquelle, la génération des oxydants est parfaitement maitrisé par les
systèmes de défense antioxydants, d’ailleurs adaptatifs par rapport au niveau de radicaux
présents (PHAM-HUY et al., 2008; PANDEY et RIZVI, 2011). Cette rupture peut être due
soit à la surproduction des radicaux libres (oxydants) et/ou par un déficit en antioxydants
(ALEXANDROVA et BOCHEV, 2007).
4.1.Definition d’un radical libre

Un radical libre est un espece caracterise par une instabilite et/ou un pouvoir oxydant fort .il
se diferencie par la preseence d’un electron non apparie sur la couche electronique la plus
externe (BENHAMMOU, 2012).
4.2.Types des radicaux libres꞉

Les formes de l’oxygene provoque le stress oxydant sont ꞉ l’oxygene singuliet O2,le pyroxyde
d’hydrogene H2O2, les pyroxyde alkyless ROOH,le radical super oxyde O2,les radicaux
hydroxyles OH, pyroxyde ROO et alkyles RO. (MUANDA, 2010). Ils peuvent être dérivés de
l'oxygène (espèces réactives de l'oxygène ERO) ou d'autres atomes comme l'azote (espèces
réactives de l'azote ERA). La présence d'un électron célibataire confèrent aux radicaux libres
une grande réactivité (demi-vie courte) et ils peuvent être aussi bien des espèces oxydantes
que réductrices. (GUENZET, 2012)
13
Figure 06꞉ Principale source des ROS (MEZITI, 2009).

4.3. Les antioxydants
Pour échapper aux conséquences du stress oxydant, il est nécessaire de rétablir l’équilibre
oxydant/antioxydant afin de préserver les préfinances physiologiques de l’organisme. Le
maintien d’un niveau non cytotoxique des espèces oxygénées réactives est assure par des
systèmes d’anti oxydant.
4.3.1. Définition
Un antioxydant peut être défini comme toutes substances capable a concentration
relativement faible, d’entrer en compétition avec d’autre substrat oxydable et ainsi retarder ou
empêcher l’oxydation de ces substrats (MEZITI, 2009).
4.3.2. Classification des antioxydants
a) Les antioxydants primaires
La cellule est pourvue d’enzymes anti oxydant qui sont des systèmes de défense très efficaces
puisque les enzymes ont la propriété de pouvoir réaliser un travail de façon permanente cette
système comporte trois enzyme catalysent les réactions comme suivante (YEKHLEF, 2010).
14
b) Les antioxydants secondaires

Les compose de ce groupe sot catalogues comme préventifs .ils englobent une large gamme
de différentes substances chimiques qui inhibent l’oxydation des lipides par différents
mécanismes et ne transfèrent pas le radical libre sous sa forme radicalaire (OUATTARA,
1999).
Aussi cette groupe renferme des substances antis oxydantes d’origine endogène parmi les
quelles on peut citer le glutathion, l’acide urique, la bilirubine, la mélanine, la mélatonine,
l’acide lipoique.de tous ces composes endogène synthétises par la cellule, la plus important
est sas doute le glutathion (MEZITI, 2009)
 Vitamine E
Elle est désigne un groupe de nombreux composants présent dans la nature꞉les ᵅ, ᵝ, ᵞ, et ᵟ -
tocophérols et tocotrienols .elle intervient directement au niveau des membranes biologiques
ou elle piège les radicaux libres avant qu’ils n’atteignent leurs cibles. (KANNOUN, 2011).
Elle est trouvée dans les huiles végétales, dans les noix, les amandes, les graines, le lait, les
œufs et les légumes a feuilles verts (AUISSA, 2002)
Figure 07: Structure des tocopherols (ALLANE, 2009).

 Acide ascorbique (vitamine C)
Contient une forme enediol qui produit la forme dicétonique par transferts successifs de ses
deux atomes d’H.la forme enediol est régénérée par l’intervention d’enzyme super oxyde
dismutase en présence d’une catalase. (MUANDA, 2010). De plus, l’ascorbate est muni
d’une priorietes importante: la réparation de deux autre antioxydantes, le glutathion (GSH) et
l’tocophérol apartir de leur formes radicalaires (BEN BRINIS, 2012).
15
Figure 08: Structure de l’acide ascorbique (ZARROUR, 2012)
 Caroteinoides
Sont des pigement vegitaux lipophiles formant une de plus de 600 molecules notamment le
lycopene le ᵝ-carotène precurseurs de la vitamine A.le role biologique des caroteinoides est
,entre autre,complementaire de celui de la vitamine E (BOUGANDOURA, 2001).
Figure 09 : Structure de beta caroténe (BRICE, 2009)
 Polyphénols
plusieurs etudes epidemiologiques ont montre qu’il aun rapport inverse entre la prise
d’aliment riche en polyphenols et le risque des maladies neurodegeneratives .cette relation est
souvant attribuee aux activites antioxydantes :eliminer les effets des radicaux libres ainsi que
que de chelater les metaux de transition (BEN BRINIS, 2012).
Figure10: Deux exemples des polyphenoles (BRICE., 2009).
Les composés phynoliques des végétaux correspdent a un vaste enemble de molécules qui
ont toutes en commun un noyau bénzenique portant un ou plusieurs hydroxyles libre ou
engages dans une autre fonction sont des molécules issu des métabolites sécondaires
(TOMAS, 2011) cette famille de composé compte plus de 800 structures différants dont les
16
flavonoides et coumarines (BRICE, 2009). La plus important parmis les polyphénols sont les
flavonoïdes: Ces dernières années, une importance particulière a été attribuer en partie aux
propriétés antioxydantes des flavonoïdes qui ont la capacité de piéger directement les
radicaux libres il sont susceptibles de réagir la plupart des espèces réactives oxygénées
(YEKHLEF, 2010), de chélate les ions métalliques, d’inhiber quelque enzyme en particulier
les oxydases, d’activer les enzymes antioxydant et réduire les radicaux alpha tocophérol
(NAIT SAID, 2007).
17
PARTIE EXPERIMENTALE
MATERIEL
ET
METHODES
Cotula cinerea Matériels et méthodes
MATERIEL ET METHODES
1. Matériel Utilisé
1.1. Matériel végétal
Le matériel végétal utilisé dans cette étude expérimentale est une espèce végétale appartenant
à la famille des Acéracées Cotula cinerea, sa taxonomie et toutes les données la concernant
ont été détaillées précédemment.
L’organe végétal choisi pour la réalisation des expérimentations de cette étude est la feuille
puisque c’est à son niveau que se trouve la majorité des principales substances actives, en
d’autre terme, c’est le lieu de synthèse et de la mise en réserve temporaire des principaux
composés du métabolisme primaire et secondaire.
1.1.1. Site de prélèvement

La plante étudiée a été récolte en mars 2014 durant la période floraison. Les échantillons de
la plante ont été prélevés à partir d’un site de la région de Ben Guecha situé à 34°12'1" Nord
et 7°37'22" Est. Le site fait partie de la wilaya d’El Oued (Figure 11).
Figure11 : Localisation géographique de la zone d’étude (Ben Guecha, wilaya d’El

Oued).source:P.D.A.U.willaya d’El Oued 1997.
18
1.1.2. Séchage
Les plantes prélevées tôt le matin et au moment du débourrement sont placées dans des sacs
en tissus puis transportées immédiatement au laboratoire en vue du séchage et des analyses.
Les feuilles sont soumises à un rinçage à l’eau de robinet pour éliminer les impuretés puis
étendues en couches minces, à bonne aération pendant deux semaines.
Une fois séchées, les feuilles sont soumises à un broyage manuel afin d’obtenir une poudre
prête à l’emploi. La drogue obtenue est conservée dans des flacons en verre ambré en vue des
expérimentations.
1.2. Matériel animal

Afin d’éviter la variabilité intersexe, nous n’avons utilisé que des rats mâles de souche
WISTAR ALBINO (253.71 g ±22.23) fournies par les laboratoires de l’Institut Pasteur d’Alger.
Elles sont divisées en cinq lots et hébergées au niveau de l’animalerie dans des cages en
polypropylène (cinq rats par cage : n 5) munies d’un porte étiquette où sont mentionnés le
nom du lot, le traitement subi. Les rats sont soumises pendant 15 jours à une période
d’adaptation où elles ont un accès libre à l’eau et à l’aliment sous des conditions de lumière et
de température contrôlées (12 heures d’éclairage / Température de 24 °C).
1.3. Insecticide (Chlorpyriphos)

Chlorpyriphos (3,5,6-tricloropyridin-2-yl-oxy-phosphorane) est un insecticide composé d’une
seule matière active, la chlorpyriphos-éthyl qui appartient à la famille des organophosphorés.
La chlorpyriphos-éthyl, est l’une des molécules de pesticide la plus utilisé en agriculture pour
son large spectre d’activité. Les seuls usages rapportés pour le chlorpyriphos sont liés à son
action de pesticide soit pour un usage agricole (Cet usage regroupe l’usage agricole extérieur
(en plein champ) et intérieur (traitement des grains après récolte), soit pour un usage
domestique (par exemple contre les fourmis). Le produit provient des laboratoires Bayer Ses
caractéristiques et paramètres physico-chimiques sont présentés dans les tableaux 02.
Tableau 01 : Formule chimique et poids et synonyme de la chlorpyriphos-éthyl (Fiches

signalétiques AGRITOX ).
Poids
Formule brute Formule plane Synonymes
moléculaire (g)
Chlorpyrifos
Chlorpyriphos
C9H11Cl3NO3PS 350,59
ethyl
Trichlormethylfos
19
Tableau 02: Paramètres physico-chimiques de la chlorpyriphos-éthyl (Fiches signalétiques

AGRITOX).
Paramètre Valeur
Apparence Cristaux
Colleur Blanc
Point de Fusion 41.5-43.5°C.
Densité 1.38 +- 0.03 a200°C
Vapeur Pression 1.87 x 10-5 mmHg a250°C
Volatilité Non volatile
Absorption Spectrale 290 nm
Solubilité dans l'eau 2 mg/l à 250°C
2. Méthode suivies
2.1. Préparation de l’éxtrait brut méthanolique
20g de la plante est broyé et maceré dans 200 ml de méthanol avec l’agitation douce pendant
24heurs a température ambiante. L’éxtait methanolique est recuperé a l’aide de papier filtre.
Puis on élimine le méthanol par evaporisation sous pression réduite a sec dans un rotavapeur
(Buchi Rotavapeur R-210) (METKOWSKI et PIOTROWSKA, 2006), T=60°C permettant
ainsi d’obtenir un résidu caractérisé par une couleur vert foncée (noiretre), qui est ensuite
repris par 5 ml de méthanol. Le résidu obtenu est conservé en récipient ombre pour éviter
l’autooxydation par congélation.
2.2. Rendement de l’extrait brut méthanolique

L’extrait brut méthanolique isolé à été quantifié selon la formule :
R % = PEB/PMV × 100
R : Rendement
PEB : Poids de l’Extrait Brut (g)
PMV : Poids de Matière Végétale (g)
2.3. Dosage des composés phénoliques totaux

Les composés phénoliques totaux ont été estimés selon la méthode colorimétrique basée sur le
réactif de Folin Ciocalteu (Singleton et al., 1999). Le réactif est formé d’acide
20
phosphotungestique (H3PW12O40) et d’acide phosphomolybdique (H3PMO12O4) qui sont
réduits lors de l’oxydation des composés phénoliques en oxydes bleus de tungstène (W8O23)
et de molybdène (MO8O3).
Pour cela 100 µl de l’extrait brut méthanolique sont mélangés à 200 µl du réactif de Folin et
3,16 ml de H2O. Le mélange est incubé à température ambiante pendant 3 minutes. Ensuite
600 µl de la solution carbonate de sodium (Na2CO3) anhydre 20 % sont ajoutés au mélange.
Les composés phénoliques totaux sont déterminés à l’aide d’un spectrophotomètre à UV
(Ultra Violets) visible après 2 heures d’incubation à température ambiante par mesure de
l’absorbance à une longueur d’onde de 765 nm. On prépare dans les mêmes conditions un
témoin avec de l'eau distillée à la place de la solution de l’extrait brut. La quantification est
faite selon une gamme-étalon établie dans les mêmes conditions avec de l'acide gallique (0 à
100 µg/ml). Les résultats sont exprimés en équivalent d’acide gallique par ml d’extrait.
2.4. Evaluation de l’effet antitoxique

L’activité antitoxique est estimée par un certain nombre de paramètres biochimiques sériques,
le poids corporel des rats et celui de l’organe cible (foie).
2.4.1. Détermination de la DL50 de l’insecticide (Chlorpyriphos)

La DL50 (Dose Létale 50) ou la dose de substance provoquant 50% de mortalité dans la une
population d'organismes étudiée, pendant un temps donné. En ce qui concerne l’insecticide
(Chlorpyriphos), nous n’avons pas calculé la DL50 ; nous nous sommes référés aux données
bibliographiques (MCCOLLISTER, 1974). La dose administrée est de 9 mg/kg/j.
2.4.2. Préparation des solutions de l’insecticide (Chlorpyriphos)

La concentration de la solution testée de l’insecticide Chlorpyriphos (9 mg/kg/j) sont
préparées à partir de la solution mère dans l’eau physiologique stérile (NaCl 0.9%).
2.4.3. Préparation des solutions à base d’extrait brut méthanolique

Les concentrations de l’extrait brut méthanolique (100, 200 et 400 mg/kg/j) sont préparées
extemporanément. Les extraits sont dilués dans l’eau physiologique stérile (NaCl 0,9%) en
fonction de la concentration désirée. La concentration de l’extrait est calculée en fonction du
poids vif de l'animal.
2.5. Protocol experimental

Le principe consiste à provoquer chez les rats, une intoxication aigue et à évaluer l’effet
antitoxique de l’extrait brut méthanolique de cotula cinaria. Les rats sont divisés en cinq lots
de cinq individus (n=5) dans des cages pour une période de dix jours. Les traitements ont
21
commencé après 15 jours d’adaptation. Les 10 jours suivants, elles reçoivent régulièrement en
plus du composé toxique, la dose de l’éxtrait végétal 100 mg/kg/J, 200 mg/kg/J, 400 mg/kg/J,
jusqu’à leur sacrifice. Le poids corporel des rats traités est mesure tous les deux jours, durant
toute l’expérimentation. Les doses d’insecticide et les doses de l’extrait brut méthanolique
sont administrées par gavage. Les concentrations administrées pour chaque lot de rat sont
présentées dans le tableau 03.
Tableau 03: Concentrations des substances testées.
Substance utilisée
Insecticide Extrait brut Témoin
(Chlorpyriphos) méthanolique Eau physiologique
(mg/kg/j) (mg/kg/j) (ml/J)
Lots I (Témoin) - - 1
Lots II 9 - -
Lots III 9 100 -
Lots IV 9 200 -
Lots V 9 400 -
2.6. Prélèvement de sang

Les rats sont sacrifiés au bout du onzième jour, 24 heures après la dernière administration de
l'extrait brut méthanolique de la plante. Les animaux sont sacrifiés par décapitation. Le sang
est récueil1i dans des tubes héparines puis centrifugé à 3000 tr/min pendant 10 min, Le
sérum est récupéré puis conservé au froid (-20 °C) en vue des analyses biochimiques.
2.7. Dosage des paramètres biochimiques sériques

Les paramètres analysés sont : Glutamopyruvate Transférase (TGO), Glutamooxaloacétate
Transférase (TGP), Phosphatase Alcaline (PAL), Gamma Glutamyl Transférase (ɤ
GT),Glucose, Cholestérol, Triglycéride, Protéine totaux, Urée, Acide Urique, Créatinine,
Lipides Totaux, Bilirubines Direct, Bilirubines Indirect et Ionogramme: Ca, K, Mg, Na.
Les mesures sont effectuées à une longueur d'onde caractéristique pour chaque dosage. Le
dosage des paramètres analysés est accompli par des kits "spinreact" et "bio-système". Les
détails des méthodes analytiques utilisées pour les analyses biochimiques sériques sont
présentés dans l’annexe N° 01.
2.8. Prélèvement du foie

L’extraction du foie se fait par dissection de l’abdomen. Après prélèvement, le foie est bien
lavé par une solution physiologique, puis mesurée le poids relatifs de fois.
3. Etude statistique
22
Les résultats sont presents sous forme de moyenne ± écart type.
La comparaison des moyennes entre les rats témoins et les rats expérimentaux est réalisée
deux à deux par le test de Student pour les différents paramètres. Les différences sont
considérées significatives: avec P est égale 0, 05 et hautement significatives avec P < 0,01.
Tous les calculs sont réalisés par l'EXCEL (2007).
23
RESULTATS
Cotula cinerea Résultats
RESULTATS
1. Rendement de l’extrait brut méthanolique

Les valeurs obtenues de Rendement de l’extrait brut méthanolique sont représentées dans le
tableau suivant (Tableau 04):
Tableau 04: Pourcentage de l’extrait brut méthanolique des feuilles de Cotula cinerea.
Extrait brut
Poids de l’extrait (g) Pourcentage de l’extrait (%)
Drogue végétale
Drogue foliaire 20g 5.075%
La préparation de l’extrait brut méthanolique de la drogue a donné un rendement de l’ordre de

20g, ce qui correspond à un pourcentage de 5.075%. D’une manière générale, les teneurs en
extraits secs varient non seulement d’une plante à une autre de la même famille mais
également en fonction des paramètres de l’extraction solide-liquide des polyphénols, le
solvant d’extraction, la taille des particules et le coefficient de diffusion de solvant.
En plus de ces aspects quantitatives, quelque soit la méthode d’extraction appliquée, elle doit
tenir compte de la qualité d’extrait, autrement dit de la bioactivité de ces principes actifs.
Dans la présente étude, la méthode de macération permet d’accélérer le processus d’extraction
et de minimiser le temps de contact du solvant avec l’extrait tout en préservant la bioactivité
de ses constituants. De même, le déroulement de cette extraction à température ambiante ainsi
que l’épuisement du solvant à pression réduite permet d’obtenir le maximum des composés et
de prévenir leur dénaturation ou modification probable dues aux températures élevées
utilisées dans d’autres méthodes d’extraction.
2. Teneur des composés phénoliques totaux dans l’extrait brut méthanolique

La teneur en composés phénoliques obtenus à partir de l’extrait brut méthanolique à été
estimée grâce à une courbe d’étalonnage, réalisée avec un extrait de référence, l’acide gallique
à différentes concentrations.
Les résultats sont exprimés en mg équivalent en acide gallique par ml d’extrait (mg EAG/ml
d’extrait). La courbe d’étalonnage est établie avec un coefficient de corrélation R2 = 0,99
(figure 12).
24
1.4
Y = 15,827x-0,0635
1.2 R2 = 0,9922
1
Absorbance à 765 nm
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 20 40 60 80 100 120
Concentration (mg/l)
Figure 12: Courbe d’étalonnage de l’acide gallique.
Tableau 05: Résultats de la teneur en composés phénoliques totaux de l’extrait brut

méthanolique de Cotula cinerea
Teneur en composés phénoliques (mg EAG/ml d’extrait)

Extrait brut 0,03
Les résultats de dosage de phénols totaux révèlent que l’extrait brut méthanolique de l’espèce
Cotula cinerea contient une teneur de l’ordre de 0,03 mg équivalent de l’acide gallique par ml
d’extrait (mg EAG/ml d’extrait).
3. Evaluation de l'activité antitoxiques
3.1. Effet sur le poids

Le poids corporel et le poids du foie ainsi que le poids relatif du foie (poids de l’organe X
100/poids de l’animal) des rats traitées et ceux des témoins non traitées sont reportés dans le
tableau 06.
Tableau 06: Poids corporel, poids du foie et poids relatif du foie des différents lots des rats.
Lots Poids
Poids corporels (g) Poids du foie (g) Poids relatif du foie (%)
Lots I Témoin 268.68 24.87 9.04 0.58 3.37 0.00
Lots II 268.99NS 23.29 9.15NS 1.68 3.39NS 0.00
Lots III 259.39NS 23.80 8.036NS 1.15 3.11NS 0.00
Lots IV 283.75NS 25.65 9.492NS 1.00 3.34NS 0.00
Lots V 264.08NS 14.82 8.23* 0.74 3.22NS 0.00
Les valeurs représentent la moyenne  écart type (n=5).

P˃ 0,05:(NS) différence non significatives. P˃ 0,05:(NS) différence non significatives par rapport le lot II.
P = 0,05:(*) différence significatives. P = 0,05:(c) différence significatives par rapport le lot II.
P ≤0,01:(**) différence hautement significatives. P ≤0,01:(a) différence hautement significatives par rapport le lot II.
25
P ≤0,001: (***) différence très hautement significatives. P ≤0,001: (b) différence très hautement significatives par rapport le
lot II.
3.2. Effet sur les teneurs en enzymes sériques

L'activité antitoxiques a été évaluée à partir des concentrations sériques de la TGO, TGP,
PAL et -GT chez les lots intoxiquées par l’insecticide et traitées par l’extrait brut
méthanolique, les résultats sont représenter dans la figure 13:
concentration
UI/L **
350
300
GGT
250 a
LDH
b
200 PAL
150 ** TGO
a b b
100 *** a b TGP
*** c b
50 a b
NS NS a
c NS
0 Lot
1 2 3 4 5
Figure 13: Effet de l’extrait brut méthanolique sur les paramètres enzymatique chez les rats
soumises à l’effet de l’insecticide.

P˃ 0,05:(NS) différence non significative par rapport le lot 1. P˃ 0,05:(NS) différence non significatives par rapport le lot II.
P = 0,05:(*) différence significatives par rapport le lot 1. P = 0,05:(c) différence significatives par rapport le lot II.
P ≤0,01:(**) différence hautement significatives par rapport le lot 1. P ≤0,01:(a) différence hautement significatives par
rapport le lot II.
P ≤0,001: (***) différence très hautement significatives par rapport le lot 1. P ≤0,001: (b) différence très hautement
significatives par rapport le lot II.
3.3. Effet sur les paramètres de bilan hépatique

L’influence de l’administration de l’extrait brut de la plante Cotula cinerea sur les paramètres
de bilan hépatique dosés après le sacrifice des rats traités par l’insecticide est rapportée dans
le tableau 07.
Tableau 07 : Effet de l’extrait brut sur les paramètres de bilan hépatique chez les rats traités
par l’insecticide.
Lots
Paramètres Lots I
Lots II Lots III Lots IV Lots V
(Témoin)
BI mg/l 7.9 0.86 11.22** 1.01 10.24NS 0.55 8.26b 0.53 6.05c 1.13
BD mg/l 0.75 0.52 3.06*** 0.57 2.29NS 0.35 1.25a 0.58 0.51a 0.05
25
rapport le lot II.
L’insecticide Chlorpyriphos testés entraine une augmentation de la bilirubine directe (BD)

et indirecte (BI). Cependant, les résultats obtenus sont hétérogènes et variables selon les
concentrations de l’extrait testé. Le traitement à base d’extrait de la plante sous ses différentes
concentrations, provoque une diminution de façon significatif des taux de métabolite étudiée
et ce dans tous les cas.
3.4. Effet sur les paramètres de bilan rénal

Les résultats de l'activité antitoxique sur le bilant rénal de l’extrait brut de l’espèce végétale
cotula cinareia chez les rats traitées par le pesticide Chlorpyriphos sont présentées dans le
tableau 08.
Tableau 08: Effet de l’extrait brut sur les paramètres de bilan rénal chez les rats traités par
l’insecticide.
Lots
Paramètres Lots I
(Témoin)
Ac uriq mg/l 32.32 2.4 24.8*  2.64 23.38NS 4.5 19.76c 3.2 20.47c 1.68
Créat mg/l 7.10 1.85 5.75NS 0.51 6.57NS 1.45 7.22c 3.05 6.57NS 0.38
Urée g/l 0.41 0.07 0.40NS 0.02 0.40NS 0.02 0.35NS 0.03 0.30c 0.02
rapport le lot II.
Les dosages d’acide urique sérique montre qu’Il y a une différance entre les lots :
l'augmentation chez le lot témoin (32.32 mg/l), et la diminution remarquée chez les trois lots
qui se suite (24.8 mg/l, 23.38 mg/l, 19.76 mg/l, 20.47 mg/l) respectivement. On observe une
diminution de la créatinine de deuxième lot (5.75mg/l); les quatre lots qui reste sont presque
la même valeur elle variée entre 6 mg/l de 7 mg/l. Pour l’urée l’effet de pesticide et la plante
a concentration de 100mg/l n’est pas apparaitre. Mais pour 200 et 400g/l est baisse de 0,35 à
0,30 g/l.
25
3.5. Effet sur l’ionogramme
Figure 14: Variation des ions Ca, Mg, K, Na sous effet de pesticide et la plante chez les rats
de Wistar.
Le calcium, le potassium et le sodium : ces trois ions sont augmentés chez le deuxième lot par
apport au premier lot témoin; la diminution est important entre les lots deux et trois; la
variation est toujours significatif. (p≥0.05,) le Mg sérique est n’est pas modifiée de façon
touchable elle est varié entre 22 et 21 mg/l, a l’exception entre lot quatre et cinq il y a une
diminution significatif.
3.6. Effet sur les autres paramètres biochimiques
Les résultats des autre paramètres sériques : Cholestérol, Triglycérides, Les Lipides Totaux,
Protéines totaux, Glycémie sont présentées dans le tableau suivant:
26
Tableau 09: Effet de l’extrait brut sur les autres paramètres biochimiques lipidiques chez
les rats traités par l’insecticide.
Lots
Paramètres Lots I
(Témoin)
Chol g/l 0.55 3.4 0.62NS .06 0.5 NS 0.0 0.59NS 0.04 0.56NS 0.5
TG g/l 0.92 0.00 1.24NS 0.2 0.86NS 0.2 0.98c 0.16 0.65c 0.1
Lip T g/l 31.95 3.46 41.63NS 9.66 30.2NS 6.64 32.85NS 6.4 29.47c 3.35
PrT mg/l 66.8 2.38 71.66NS 2.96 66.88a 1.80 65.88c 1.25 61.75c 1.76
Gly g/l 0.99 0.10 0.91NS 0.19 0.87NS 0.09 0.78NS 0.10 0.90NS 0.06
rapport le lot II.
Les résultats obtenus montrent une augmentation des taux plasmatiques en cholestérol,
triglycérides, lipides totaux et les protéines totaux chez le groupe traité par le chlorpyrifos
comparant aux rats témoins. L’effet du toxique sur la concentration sérique de glucose se
manifeste par une leur diminution .d’autre part, l’extrait de cotula cinarea, en parallèle aux
les concentrations, va abaisse l’augmentation de façon observable (P≥0.O5).
27
DISCUSSION
Cotula cinerea Discussion
DISCUSSION
Les travaux antérieurs montrent que les solvants tell que : le méthanol, l’éthanol et l’eau ainsi
que leur mélange à différents ratios sont les solvants les plus utilisés pour une haute
récupération de composés phénoliques (SAHREEN et al., 2010; XIA et al., 2010; BOUZID et
al., 2011). Le méthanol est le solvant utilisé dans cette étude pour obtenir l’extrait brut à partir
des feuilles de l’espèce végétale Cotula cinerea.
D’une manière générale, les teneurs en extraits secs varient non seulement d’une plante à une
autre de la même famille mais également en fonction des conditions du développement et de
croissance, la maturité, le conditionnement, les conditions de stockage et par les méthodes
d’extraction (ZANG et HAMAURU, 2003) En plus de ces aspects quantitatives, quelque soit
la méthode d’extraction appliquée elle doit tenir compte de la qualité d’extrait, autrement dit
de la bio-activité de ces principes actifs. Dans la présente étude, la méthode de macération
sous agitation permet d’accélérer le processus d’extraction et de minimiser le temps de
contact du solvant avec l’extrait tout en préservant la bio-activité de ses constituants. De
même, le déroulement de cette extraction à température ambiante ainsi que l’épuisement du
solvant à pression réduite permet d’obtenir le maximum des composés et de prévenir leur
dénaturation ou modification probable dues aux températures élevées utilisées dans d’autres
méthodes d’extraction.
Parmi les paramètres étudiés, l’augmentation remarquable du poids relatif de foie nous
indique une hépatomégalie provoquée par le produit phytosanitaire l’insecticide à la
concentration de 9 mg/kg/j. Cette anomalie du foie est un phénomène signalé par de
nombreux auteurs à la suite de l’agression par des substances chimique (HUANG et al.,
2012).
Une baisse dans les teneurs en enzymes sériques TGP, TGO et PAL chez les rats en
présence de l’extrait végétal. Les enzymes sériques TGO, TGP, PAL, -GT sont des enzymes
synthétisés au niveau du cytoplasme de la cellule et déchargées dans la circulation en cas de
cellules endommagées (SINGH et al., 1998, OZTURK et al., 2009). Ces derniers sont
considérés comme de bons indicateurs de la cytolyse hépatique. Ainsi, des taux élevés des
enzymes du foie, notamment TGO et TGP, sont fréquemment attribués aux effets
métaboliques et/ou toxiques de différentes drogues comme les psychotropes (HIMMERICH
et al., 2005), l’alcool (LIAPPAS et al., 2006) et les agents polluants tels que les résidus de
l’industrie (MICHAILOVA et al., 1998). Dans notre cas, une variation dans les taux sériques
30
de TGP et TGO entre les lots des rats intoxiquées par l’insecticide et traitées par les trois
doses de l’extrait brut méthanolique de la plante (Taux relativement faibles) et ceux des rats
intoxiquées mais non traitées (Concentrations élevées). Nos résultats sont en accord avec les
investigations d'ELBERRY et al., 2010 sur des rats intoxiqués et non traités qui signalent une
augmentation de la concentration sérique de TGP. Cette augmentation est moins accrue chez
les sujets intoxiqués et traités.
L'évolution des concentrations sériques de -GT montre, elle aussi, une élévation plus
importante chez les animaux non traités que chez les animaux traités. Ce résultat traduit
également une certaine protection du foie par l’extrait de l’espèce Cotula cinerea, en
particulier des voies biliaires; en effet, selon KAMMERAAT cité par ROUSSEAU (1978),
l'augmentation de la concentration sérique de la -GT est un bon indicateur de l'atteinte des
cellules épithéliales des canaux biliaires.
Les concentrations sériques de la Bilirubine montre, D’une part, est l’un des biomarqueurs les
plus sensibles et directement impliqués dans l’ampleur des dommages et de la toxicité
hépatique, et d’autre part l’élévation de la Bilirubine plasmatique (Totale et Directe) indique
le dysfonctionnement dans le foie. Nos résultats montrent une augmentation en bilirubine
chez les rats administre le pesticide par apport les rats témoins. Ces observations sont en
accord avec d’autres études (YOUSEF et al., 2003; El-DEMERDASH et al., 2004; YOUSEF,
2004; BEN AMARA et al., 2011).
En ce qui concerne les autres métabolites biochimiques : Triglycéride, Cholestérol, marqueurs

rénaux (Créatinine, Urée, Acide urique) et glucose, ils semblent être affectés par les
inducteurs toxiques (insecticide). Une perturbation des taux de lipides et des marqueurs
rénaux. Plusieurs études expérimentales intéressées aux effets des pesticides sur le profil
lipidique. L’administration de pesticide, induit chez le rat une hépatotoxicité et une
modification de profil lipidique qui se manifeste par une augmentation du taux de Cholestérol
et des Triglycérides plasmatiques, et selon (BOUZIANE, 2002) l’altération du profil lipidique
peut être due à une modification sur l’activité des enzymes qui jouent un rôle dans le
métabolisme des lipides.
Le sodium est le cation majeur de liquide extracellulaire avec le potassium, joue un rôle
essentiel dans l’équilibre hydrique (JANSSEENS, 1999). L’augmentation de ces paramètres
(Sodium et Potassium) nous indique une insuffisance rénale ou une libération excessive à
31
partir des cellules en cas d’hémolyse massive. Ces mêmes hypothèses sont avancées dans les
travaux de BENZIDANE, 2012 pour le potassium.
32
CONCLUSION
ET PERSPECTIVES
Cotula cinareia conclusion et perspectives
CONCLUSION ET PERSPECTIVES
Les résultats obtenus mettent en exergue, l’effet prometteur de l’extrait brut des feuilles du
Cotula cinareia quant à leur pouvoir antitoxique contre l’intoxication aiguë provoquée par
l’insecticide Chlorpyriphos.
Le pouvoir de l’extrait brut contre le déséquilibre du statut redox cellulaire a été étendu à une
toxicité induite par un pesticide. Les résultats obtenus ont permis d’affirmer que l’extrait de la
plante étudiée présente des activités antitoxique assez intéressantes. Une diminution dans la
concentration des paramètres biochimiques et les paramètres enzymatiques notamment les
transaminases (TGO et TGP) est notée chez les rats traités par rapport à celles des témoins
non traitées. Ce potentiel efficace pourrait être lié aux polyphénols totaux de l'extrait brut
testé.
Nos perspectives pour l’avenir :
- L'effet antitoxique observé pourrait être amélioré par l’utilisation des concentrations plus
faibles que celles testées, mais aussi l’investigation de mélanges d’extrait à base de plusieurs
plantes.
- Approfondir les études concernant l’identification de ces principes actifs du point de vue
qualitatif et quantitatif.
- Déterminer les chémotypes exacts et complets par CG/SM, HPLC et RMN.

- Envisager des expériences in situ en testant ces principes sur des cas pathologiques.
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ALP
Phosphatase alcaline
p-Nitrophénilphosphate cinétique.
DGKC
Détermination quantitative de phosphatase alcaline (FAL) CALCULS
IVD A/min x 3300 = U/L de FAL
Unités: L’unité internationale (UI) correspond à la quantité d’enzymes qui converti 1
Conserver à 2-8ºC
mol de substrats par minute, sous des conditions standard. La concentration est
PRINCIPE DE LA METHODE exprimée en unités par litre (U/L).
La phosphatase alcaline (FAL) catalyse l’hydrolyse du p-nitrophénlyphosphate Facteurs de conversion de températures
(pNPP) à pH 10,4 libérant du p-nitrophénole et du phosphate en fonction de la Les résultats peuvent se transformer à d’autres températures, en multipliant par:
réaction suivante: Température de Facteur de conversion à
FAL mesure 25ºC 30ºC 37ºC
p-Nitrophénylphosphate + H2O  p-Nitrophénole + Phosphate 25ºC 1,00 1,22 1,64
La vitesse de formation du p-Nitrophénole, déterminée par photométrie, est 30ºC 0,82 1,00 1,33
proportionnelle à la concentration catalytique de phosphatase alcaline dans 37ºC 0,61 0,75 1,00
l’échantillon testé1, 2.
CONTROLE DE QUALITE
SIGNIFICATION CLINIQUE Il est conseillé d’analyser conjointement les échantillons de sérum dont les valeurs ont
Les phosphatases alcalines sont des enzymes qui se trouvent dans presque tous été contrôlées: SPINTROL H Normal et pathologique (Réf. 1002120 et 1002210).
les tissus de l’organisme, mais particulièrement concentrée dans les os, le foie, Si les valeurs se trouvent en dehors des valeurs tolérées, analyser l’instrument, les
le placenta, les intestins et les reins. réactifs et le calibreur.
L’augmentation, aussi bien que la réduction des niveaux dans le plasma ont une Chaque laboratoire doit disposer de son propre contrôle de qualité et déterminer les
signification clinique. mesures correctives à mettre en place dans le cas où les vérifications ne
Les causes les plus probables d’augmentation du niveau de FAL: correspondraient pas aux attentes.
Maladie osseuse de Paget, obstructions hépatiques, hépatite, hepatotoxicité
provoquée par des médicaments ou par de l’ostéomalacie. VALEURS DE REFERENCE1
Les causes les plus probables de réduction du niveau de FAL: 25ºC 30ºC 37ºC
Crétinisme et manque de vitamine C1, 5,6. Enfants (1-14 ans) < 400 U/L < 480 U/L < 645 U/L
Le diagnostic clinique doit être réalisé en prenant compte des données cliniques Adultes 60 -170 U/L 73 - 207 U/L 98 - 279 U/L
et de laboratoire. Les facteurs qui peuvent affecter les valeurs de référence sont: l’exercice, les périodes
de croissance chez l’enfant et la femme enceinte.
REACTIFS Ces valeurs sont données à titre d’information. Il est conseillé à chaque laboratoire de
R1 Diéthanolamine (DEA) pH 10,4 1 mmol/L définir ses propres valeurs de référence.
Tampon Chlorure de magnésium 0,5 mmol/L
R2 CARACTERISTIQUES DE LA METHODE
p-Nitrophénylphosphate (pNPP) 10 mmol/L Gamme de mesures: Depuis la limite de détection 0,000 U/L jusqu’à la limite de linéarité
Substrats
1200 U/L.
Si la concentration de l’échantillon est supérieure à la limite de linéarité, diluer 1/10 avec
PREPARATION du ClNa 9 g/L et multiplier le résultat final par 10.
Réactif de travail (RT): Précision:
Réf: 1001130
Dissoudre (  ) une tablette de substrats de R 2 dans une capsule de tampon
Intra-série (n= 20) Inter-série (n= 20)
R 1. Moyenne (U/L) 167 424 166 430
Réf: 1001131 SD 0,94 1,93 3,44 5,92
Dissoudre (  ) une tablette de substrats de R 2 dans 15 mL de tampon R 1.
CV (%) 0,56 0,46 2,07 1,38
Réf: 1001132
Dissoudre (  ) le contenu dune capsule de substrats de R 2 dans 50 mL de R Sensibilité analytique: 1 U/L = 0,0003 A/min
1. Exactitude: Les réactifs SPINREACT (y) ne montrent pas de différences systématiques
Refermer et mélanger doucement jusqu’à dissoudre le contenu. significatives lorsqu’on les compare à d’autres réactifs commerciaux (x).
Stabilité: 21 jours à 2-8ºC ou 5 jours à température ambiante (15-25ºC). Les résultats obtenus avec 50 échantillons ont été les suivants:
Coefficient de corrélation (r): 0,999.
CONSERVATION ET STABILITE Equation de la Coubre de régression: y=0,999x - 0,918.
Tous les composants du kit sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée Les caractéristiques de la méthode peuvent varier suivant l’analyseur employé.
sur l'étiquette, et si les flacons sont maintenus hermétiquement fermés à 2-8ºC,
à l’abri de la lumière et des sources de contamination. INTERFERENCES
Ne pas utiliser les tablettes si elles sont fragmentées. Le fluorure oxalate, le citrate et l’EDTA inhibent l’activité de la phosphatase alcaline; ils
Ne pas utiliser les réactifs en dehors de la date indiquée. doivent donc être utilisés comme des anticoagulants.
Indices de détérioration des réactifs:
L’hémolyse interfère dans le résultat, étant donné sa forte concentration en phosphatase
- Présence de particules et turbidité.
- Absorbation du blanc à 405 nm > 1,30. alcaline dans les hématies1, 2. Différentes drogues ont été décrites et ainsi que d’autres
substances qui interfèrent dans la détermination de la phosphatase alcaline3, 4.
MATERIEL SUPPLEMENTAIRE
- Cuvettes de 1,0 cm d’éclairage. REMARQUES
- Spectrophotomètre ou analyseur pour lectures à 405 nm. SPINREACT dispose de consignes détaillées pour l’application de ce réactif dans
- Bain thermostable à 25ºC, 30ºC où 37ºC (±0,1ºC) différents analyseurs.
- Equipement classique de laboratoire.
BIBLIOGRAPHIE
ECHANTILLONS 1. Wenger C. et al. Alkaline phosphatase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby
Sérum ou plasma heparinisé1. Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1094-1098.
Sérum ne contenant pas d’hémolyse, séparé des hématies le plus tôt possible. 2. Rosalki S et al. Clin Chem 1993; 39/4: 648-652.
Stabilité: 3 jours à 2-8ºC. 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
PROCEDURE 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
1. Conditions de test: 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Longueur d’ondes: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .405 nm
Cuvette:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm d’éclairage PRESENTATION
Température . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . 25ºC/30ºC/37ºC Ref: 1001130 R1: 20 x 3 mL , R2: 20  3 mL
2. Régler le spectrophotomètre sur zéro en fonction de l’eau distillée ou air Ref: 1001131 Cont. R1: 1 x 150 mL, R2: 10  15 mL
3. Pipetter dans une cuvette:
RT (mL) 1,2 Ref: 1001132 R1: 10 x 50 mL, R2: 10  50 mL
Echantillon (L) 20
4. Mélanger, laisser incuber 1 minute.
5. Lire l’absorbation (A) initiale de l’échantillon, mettre en route le
chronomètre et lire l’absorbation à chaque minute pendant 3 minutes.
6. Calculer la moyenne de l’augmentation d’absorbation par minute
(A/min).
BEIS07-F 17/02/15 SPINREACT,S.A./S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) ESPAGNE
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]
-GT
- GT
Substrat carboxylé. Cinétique
Détermination quantitative de gamma-glutamyl transférase 6. Calculer la moyenne de la différence d'absorbance par minute ( A/min).
( GT)
CALCULS
IVD
A conserver entre 2-8ºC A/min x 1190= U/L de -GT
PRINCIPE DE LA MÉTHODE Unités : L'unité internationale (UI) est la quantité d'enzyme qui convertit 1 molde
substrat par minute, en conditions standard. La concentration est exprimée en unités
La gamma-glutamyl transférase (-GT) catalyse le transfert d’un par litre (U/l).
groupe -glutamyl de la -glutamyl-p-nitroanilide au dipeptide accepteur
glycilglycine, d’après la réaction suivante : Facteurs de conversion de températures
  GT Les résultats peuvent être transformés à d'autres températures en multipliant par :
L--Glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide + Glycilglycine 
L--Glutamyl-glycilglycine+ Acide 5-aminé-2-nitrobenzoïque Température Facteur de conversion à
de mesure 25ºC 30ºC 37ºC
La vitesse de formation de l’acide 5-aminé-2-nitrobenzoïque déterminé 25ºC 1,00 1,37 1,79
par photométrie est proportionnelle à la concentration catalytique de - 30ºC 0,73 1,00 1,30
GT dans l’échantillon testé1,2. 37ºC 0,56 0,77 1,00
SIGNIFICATION CLINIQUE CONTRÔLE DE QUALITÉ

La gamma-glutamyl transférase (-GT) est une enzyme qui est Il convient d'analyser des sérums de contrôle estimés en même temps que les
présente dans quasiment tous les tissus de l’organisme, elle apparaît échantillons: SPINTROL H normal et pathologique (réf. 1002120 et 1002210).
notamment dans le foie, le pancréas, les reins et la prostate. Si les valeurs obtenues se trouvent en dehors de la plage de tolérance, il faut
revoir les instruments, les réactifs et la technique.
La détermination des niveaux de gamma-glutamyl transférase (-GT)
Chaque laboratoire doit disposer de son propre système de contrôle de qualité et
est la méthode la plus utile pour diagnostiquer et traiter les maladies
établir des actions correctives si les contrôles ne sont pas conformes aux
hépatobiliaires telles que l’obstruction hépatique, la cirrhose ou les tolérances.
tumeurs hépatiques1,2,5,6
Le diagnostic clinique doit être réalisé en tenant compte de toutes les VALEURS DE RÉFÉRENCE1
données cliniques et de laboratoire. 25ºC 30ºC 37ºC
Femmes 4-18 U/L 5-25 U/L 7-32 U/L
RÉACTIFS
Hommes 6-28 U/L 8-38 U/L 11-50 U/L
R1 Ces valeurs sont approximatives. Il est recommandé que chaque laboratoire
TRIS pH 8,25 100 mmol/L
Tampon établisse ses propres valeurs de référence.
R2 Glycilglycine 100 mmol/L
Substrat L--glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide 3 mmol/L CARACTÉRISTIQUES DE LA MÉTHODE
Gamme de mesure: de la limite de la détection de 0,000 U/L à la limite de
PRÉPARATION linéarité de 375 U/L.
Réactif de travail (RT) : Si les résultats obtenus sont plus élevés que la limite de linéarité, il faut diluer 1/2
Réf: 1001185 avec ClNa 9 g/l et multiplier le résultat par 2.
Dissoudre (  ) un comprimé de R 2 Substrat dans un flacon de R 1 Précision:
Tampon. Intra-essai (n= 20) Inter-essai (n= 20)
Réf: 1001186
Moyenne (U/L) 40,0 199 41,6 200
Dissoudre (  ) un comprimé de R 2 Substrat dans 15 mL de R 1 Tampon.
SD 0,33 1,20 0,80 2,29
Réf: 1001187
CV (%) 0,83 0,61 1,91 1,15
Dissoudre (  ) le contenu d’un flacon de R 2 Substrat dans 50 mL de R 1.
Couvrir et mélanger délicatement jusqu’à dissoudre son contenu. Sensibilité analytique: 1 U/L = 0,0008 ΔA/min.
Stabilité : 21 jours à 2-8ºC ou 15 jours 15-25ºC (15-25ºC). Exactitude: les résultats obtenus en utilisant les réactifs SPINREACT n’ont pas
présenté de différences systématiques en comparaison avec d’autres réactifs
CONSERVATION ET STABILITÉ commerciaux (x).
Toutes les composantes du kit sont stables jusqu’à l’expiration de la date Les résultats obtenus sur 50 échantillons ont été les suivants :
mentionnée sur l’étiquette en cas de conservation hermétique sous 2-8ºC et Coefficient de régression (r) : 0,999.
de protection contre la lumière et les contaminations évitées lors de leur Équation de la droite de régression : y=1,2253x – 2,0435.
utilisation. Les caractéristiques de la méthode peuvent varier en fonction de l'analyseur
Ne pas utiliser les tablettes si elles semblent fragmentées. utilisé.
Ne pas utiliser les réactifs une fois passée la date indiquée.
Indicateurs de détérioration des réactifs : INTERFÉRENCES
- Présence de particules et turbidité. Ne pas utiliser de plasma. Les anticoagulants inhibent l’enzyme. L’hémolyse
- Absorbances du témoin à 405 nm > 1,20. élevée interfère dans l'essai1. Il a été rapporté que plusieurs drogues et autres
substances interfèrent dans la détermination de la -GT3,4.
ÉQUIPEMENTS SUPPLÉMENTAIRES
- Spectrophotomètre ou colorimètre mesurant 405 nm. NOTES
- Bain thermostatable à 25ºC, 30ºC ou 37º C ( 0,1ºC) SPINREACT dispose d'instructions détaillées pour l'application de ce
- Cuves appariées de 1.0 cm de raie spectrale. réactif dans différents analyseurs.
- Équipement d’usage général pour laboratoire.
BIBLIOGRAPHIE
ÉCHANTILLONS 1. Gendler S.-GT. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
Sérum1. La GT est stable pendant 3 jours à 2-8ºC, 8 heures à 15- Princeton 1984; 1120-1123.
25ºC et 1 mois à –20ºC. 2. Persijn J P et al. J Clin Chem Clin Biochem 1976; (14) 9: 421-427.
3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
PROCÉDURE 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
1. Conditions d’essai:
6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Longueur d’onde:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .405 nm
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm. de raie spectrale PRÉSENTATION
Température constante . . . . . . . . . . . . . . . . 25ºC / 30ºC / 37ºC Réf: 1001185 R1: 20 x 2 mL ,R2: 20  2 mL
2. Régler l’instrument à zéro dans l’eau distillée ou air. Cont.
3. Pipette dans une cuvette: Réf: 1001186 R1: 1 x 150 mL, R2: 10  15 mL
RT (mL) 1,0 Réf: 1001187 R1: 10 x 50 mL, R2: 10  50 mL
Échantillon (L) 100
4. Mélanger, patienter 1 minute.
5. Lire l'absorbance (A) initiale de l'échantillon, mettre en marche le
chronomètre et lire l'absorbance chaque minute pendant 3 minutes.
BEIS08-F 13/02/14 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
GOT –R&F GPT - R&F
GOT - GPT
Reitman-Frankel. Colorimetric
Quantitative determination of transaminases GOT and GPT 7. Mix. Let stand for 5 min. at room temperature.
IVD 8. Read the initial absorbance (A) against a water blank. The color is stable at
least 1 hour.
Store at 2-8ºC
CALCULATIONS
PRINCIPLE OF THE METHOD From absorbances, read units of GOT or GPT from the corresponding calibration
The glutamic transaminase enzymes, serum glutamic oxalacetic (GOT) curves.
and serum glutamic pyruvic (GPT), catalyse the transfers of the amino
group of glutamic acid to oxalacetic acid and pyruvic acid in reversible Calibration curve
reactions. The transaminase activity is proportional to the amount of
1. Set up six tubes and pipette (mL):
oxalate or pyruvate formed over a definite period of time and is measured
by a reaction with 2,4- Dinitrophenylhydrazine (DNPH) in alkaline sol.1,2. Tube 1 2 3 4 5 6
Water 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
GOT Substrate 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5
CLINICAL SIGNIFICANCE
Calibrator 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
Transaminases GOT and GPT are cellular enzymes, found in highest DNFH 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
concentration in heart muscle, the cells of the liver, the cells of the skeletal
muscle and in smaller amounts in other weaves. Although an elevated Mix. Allow to stand for 20 minutes at room temperature.
level of GOT and GPT in the serum is not specific of the hepatic disease,
is used mainly to diagnostic and to verify the course of this disease. NaOH 0.4 N 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
When GOT is used in conjunction with GPT aid in the diagnosis of infarcts Mix. Allow to stand for at least 5 minutes.
in the myocardium, since the value of the GPT stays within the normal
limits in the presence of elevated levels of GOT 1,2,5,6. 2. Read against a water blank at 505 nm.
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should 3. Plot a calibration curve of the absorbances found vs. The corresponding
integrate clinical and other laboratory data. units, on a graph paper, according to the following:
REAGENTS WU/mL 0 22 55 95 150 215

GOT
Ref: 1001165 GOT U/L 0 11 27 46 72 104
R1a DL-Aspartate WU/mL 0 25 50 83 126 --
100 mmol/L GPT
pH 7.4 U/L 0 12 24 40 62 --
Substrate GOT -Ketoglutarate 2 mmol/L
Units
Ref: 1001175 GPT - One Wróblewski unit (WU) of GOT or GPT is defined as the amount of enzyme
R1b DL-Alanine 200 mmol/L that will form 4.82 x 10-4 mole of Glutamate/min (25ºC).
pH 7.4
Substrate GPT -Ketoglutarate 2 mmol/L - To convert WU into international units (U/I), multiply results by 0.482.
R2 2,4-Dinitrophenylhydrazine QUALITY CONTROL
1 mmol/L Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
Developer (DNPH)
GOT / GPT –R&F CAL SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210).
Primary calibrator of pyruvic acid 1.2 mmol/L
If control values are found outside the defined range, check the instrument, reagents
and technique for problems.
Adicional reagent: Sodium hydroxide (NaOH) 0.4 N Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective actions
if controls do not meet the acceptable tolerances.
PREPARATION
All the reagents are ready to use. REFERENCE VALUES1
GOT: 8-40 UW / ml (3-18 U/L) GPT: 5-30 UW / ml (2-16 U/L)
STORAGE AND STABILITY These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its
All the components of the kit are stable until the expiration date on the own reference range.
label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and
contaminations prevented during their use. PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Do not use reagents over the expiration date. Measuring range: Up to linearity limit of GOT 180 WU (85 U/L) and GPT 126
Signs of reagent deterioration: WU (62 U/L).
- Presence of particles and turbidity. If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/10
with NaCl 9 g/L and multiply the result by 10.
ADDITIONAL EQUIPMENT Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 505 nm. systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
- Thermostatic bath at 37ºC ( 1ºC) The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
- Matched cuvettes 1.0 cm light path.
- General laboratory equipment. INTERFERENCES
SAMPLES Haemolysis interferes with the assay1,2. A list of drugs and other interfering
Serum 1,2: Stability 7 days at 2-8ºC. substances with GOT - GOT determination has been reported by Young et. al 3,4.
PROCEDURE NOTES
1. Assay conditions: SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 505 nm Instructions for many of them are available on request.
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . 1 cm light path
Constant temperature . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 15-25ºC BIBLIOGRAPHY
2. Adjust the instrument to zero with distilled. 1. Murray R. Aspartate aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
3. Pipette into a tubes: Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-116.
2. Reitman S, Frankel S.J. Clin Path 1957; 28-56.
GOT GPT 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
R 1 a Substrate GOT 0.5 mL -- 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
R 1 b Substrate GPT -- 0.5 mL 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
4. Mix, incubate for 5 min. at 37ºC, add.
Sample PACKAGING
100 L 100 L
Ref: 1001165 (GOT) R1a, R2:1 x 250 mL, CAL: 1 x 5 mL
5. Mix. Return to the bath for: 30 min. 30 min. Ref: 1001175 (GPT) Cont. R1b, R2: 1 x 250 mL, CAL: 1 x 5 mL
R 2 Developer 0.5 mL 0.5 mL
6. Mix. Allow to stand for 20 min at room temperature.
NaOH 0,4 N 5.0 mL 5.0 mL
BEIS13-I 23/06/11 SPINREACT,S.A./S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
GOT –R&F GPT - R&F
GOT - GPT
Reitman-Frankel. Colorimétrico
Determinación cuantitativa de transaminasas GOT y GPT 7. Mezclar y dejar reposar 5 min. a temperatura ambiente
IVD 8. Leer la absorbancia (A) frente a agua destilada. El color es estable como
mínimo 1 hora.
Conservar a 2-8ºC
CÁLCULOS
PRINCIPIO DEL MÉTODO Los valores de la actividad GOT y GPT se hallan interpolando la absorbancia
Las transaminasas catalizan la transferencia del grupo amino del hallada para el problema con la curva de calibración.
aspartato (GOT) o de la alanina (GPT) al -cetoglutarato. El cetoácido
Curva de calibración
formado, oxalacético o pirúvico respectivamente, en presencia de 2,4-
Dinitrofenilhidrazina (DNFH) da la hidrazona correspondiente con una 1. En tubos de ensayo Pipetear (mL):
coloración medible en medio alcalino1,2. Tubo 1 2 3 4 5 6
Agua 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
SIGNIFICADO CLÍNICO Substrato GOT 1,0 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5
Las transaminasas GOT y GPT son enzimas intracelulares que se Calibrador 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
encuentra en niveles altos en el músculo del corazón, las células del DNFH 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
hígado, las células del músculo esquelético y en menores cantidades en
otros tejidos. Mezclar bien y dejar 20 min. a temperatura ambiente.
Aunque un nivel elevado de GOT y la GPT en el suero no es específico de
NaOH 0,4 N 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0
enfermedad hepática se emplea principalmente para su diagnóstico y
seguimiento. El empleo de la GOT en conjunción con la GPT ayuda en el Mezclar bien y dejar 5 min. a temperatura ambiente.
diagnóstico de infartos de miocardio, ya que el valor de la GPT se
mantiene dentro de los límites normales y aumenta los niveles de 2. Leer la absorbancia (A) de todos los tubos, frente a agua destilada.
GOT1,2,5,6. 3. Representar gráficamente los resultados, colocando las absorbancias en
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos ordenadas y las unidades en abcisas, de acuerdo con la siguiente relación:
clínicos y de laboratorio. WU/mL 0 22 55 95 150 215
GOT
U/L 0 11 27 46 72 104
REACTIVOS
WU/mL 0 25 50 83 126 --
Ref: 1001165 GOT GPT
U/L 0 12 24 40 62 --
R1a DL-Aspartato 100 mmol/L
pH 7,4 Unidades
Substrato GOT -Cetoglutarato 2 mmol/L
- Una unidad Wróblewski (UW) de GOT o GPT se define como la cantidad de
Ref: 1001175 GPT enzima que forma 4,82 x 10-4 mol de Glutamato/min (25ºC).
R1b DL-Alanina 200 mmol/L - Para convertir las UW a U/I multiplicar por 0,482.
pH 7,4
Substrato GPT -Cetoglutarato 2 mmol/L
CONTROL DE CALIDAD
R2 2,4-Dinitrofenilhidrazina Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
1 mmol/L SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Revelador (DNFH)
GOT / GPT –R&F CAL Calibrador primario de ácido pirúvico 1,2 mmol/L Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.
Reactivo adicional: Hidróxido sódico (NaOH) 0,4 N Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
PREPARACIÓN
VALORES DE REFERENCIA1
Todos los reactivos están listo para su uso.
GOT: 8-40 UW / ml (3-18 U/L) GPT: 5-30 UW / ml (2-16 U/L)
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad establezca sus propios valores de referencia.
indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien
cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Rango de medida: Desde el límite de detección hasta el límite de linealidad
Indicadores de deterioro de los reactivos: 180 UW/ml para la GOT y 126 UW/ml para la GPT
- Presencia de partículas y turbidez. Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/10
con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10.
MATERIAL ADICIONAL Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 505 nm. significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
- Baño termostatable a 37ºC ( 1ºC) Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio. INTERFERENCIAS
La hemólisis interfiere con la determinación1,2. Se han descrito varias drogas y
MUESTRAS
otras substancias que interfieren en la determinación de GOT y GPT 3,4.
Suero1,2. Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC.
NOTAS
PROCEDIMIENTO
SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este
1. Condiciones del ensayo:
reactivo en distintos analizadores.
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .505 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz BIBLIOGRAFÍA
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .15-25ºC 1. Murray R. Aspartate aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-116.
3. Pipetear en un tubos de ensayo: 2. Reitman S, Frankel S.J. Clin Path 1957; 28-56.
GOT GPT 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
R1a Substrato GOT 0,5 mL -- 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
R1b Substrato GPT -- 0,5 mL 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
4. Incubar 5 min. a 37ºC, añadir PRESENTACIÓN
Muestra 100 L 100 L Ref: 1001165 (GOT) Cont.
R1a, R2:1 x 250 mL, CAL: 1 x 5 mL
Ref: 1001175 (GPT) R1b, R2: 1 x 250 mL, CAL: 1 x 5 mL
5. Mezclar e incubar a 37ºC, durante: 30 min. 30 min.
R2 Revelador 0,5 mL 0,5 mL
6. Mezclar y dejar 20 min. a temperatura ambiente y añadir:
NaOH 0,4 N 5,0 mL 5,0 mL
BEIS13-E 23/06/11 SPINREACT,S.A./S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
LDH -LQ
LDH-LQ
Pyruvate. Kinetic UV. DGKC. Liquid
Quantitative determination of lactate dehydrogenase CALCULATIONS

(LDH) 25º- 30ºC A/min x 4925 = U/L LDH
IVD
37ºC A/min x 9690 = U/L LDH
Store at 2-8ºC
Units: One international unit (IU) is the amount of enzyme that transforms 1 mol
PRINCIPLE OF THE METHOD of substrate per minute, in standard conditions. The concentration is expressed
Lactate dehydrogenase (LDH) catalyses the reduction of pyruvate by in units per litre of sample (U/L).
NADH, according the following reaction:
LDH Temperature conversion factors
Pyruvate + NADH + H+  L-lactate + NAD+ To correct results to other temperatures multiply by:
The rate of decrease in concentration of NADPH, measured
photometrically, is proportional to the catalytic concentration of LDH Assay Conversion factor to
present in the sample1. temperature 25ºC 30ºC 37ºC
25ºC 1,00 1,33 1,92
30ºC 0,75 1,00 1,43
Lactate dehydrogenase (LDH) is an enzyme with wide tissue distribution in 37ºC 0,52 0,70 1,00
the body.
The higher concentrations of LDH are found in liver, heart, kidney, skeletal
QUALITY CONTROL
muscle and erythrocytes.
Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
Increased levels of the enzyme are found in serum in liver disease,
SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210).
myocardial infarction, renal disease, muscular dystrophy and anemia1,4,5.
If control values are found outside the defined range, check the instrument,
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should
reagents and technique for problems.
integrate clinical and other laboratory data.
Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective
actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
REAGENTS
Reagent 1 Imidazol 65 mmol/L REFERENCE VALUES1
Buffer Pyruvate 0,6 mmol/L 25ºC 30ºC 37ºC
Reagent 2 120-240 U/L 160-320 U/L 230-460 U/L
NADH 0,18 mmol/L These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its
Substrate
own reference range.
PREPARATION
Working reagent (WR) : PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Measuring range: From detection limit of 3,42 U/L to linearity limit of 1600 U/L.
Mix: 4 vol. (R1) Buffer + 1 vol. (R2) Substrate If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/10 with
NaCl 9 g/L and multiply the result by 10.
Stability: 15 days at 2-8ºC or 5 days at 15-25ºC. Precision:
STORAGE AND STABILITY Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)

All the components of the kit are stable until the expiration date on the Mean (U/L) 400 785 392 773
label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and SD 3,15 10,97 6,23 9,93
contaminations prevented during their use. CV (%) 0,79 1,40 1,59 1,28
Do not use reagents over the expiration date.
Signs of reagent deterioration: Sensitivity: 1 U/L = 0,00009 A/min.
- Presence of particles and turbidity. Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
- Blank absorbance (A) at 340 nm <1,00. systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
The results obtained using 50 samples were the following:
ADDITIONAL EQUIPMENT Correlation coefficient (r): 0,98382.
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 340 nm. Regression equation: y= 0,8988x + 2,583.
- Thermostatic bath at 25ºC, 30ºC o 37ºC ( 0,1ºC) The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
- Matched cuvettes 1,0 cm light path.
- General laboratory equipment. INTERFERENCES
Haemolysis interferes with the assay.
SAMPLES Some anticoagulants such as oxalates interfere with the reaction1.
Serum1. Separated from cells as rapidly as possible. Do not use oxalates A list of drugs and other interfering substances with LDH determination has been
as anticoagulants since they inhibit the enzyme. reported by Young et. al2,3.
Do not use haemolysed samples. Stability: 2 days at 2-8ºC.
NOTES
PROCEDURE SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
1. Assay conditions:
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 340 nm BIBLIOGRAPHY
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm light path 1. Pesce A. Lactate dehydrogenase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby
Constant temperature: . . . . . . . . . . . . . . 25ºC /30ºC / 37ºC Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1124-117, 438.
2. Adjust the instrument to zero with distilled water or air. 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
3. Pipette into a cuvette: 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
25º - 30ºC 37ºC 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
WR (mL) 3,0 3,0
100 50 PACKAGING
Sample (L)
R 1: 1 x 60 mL
4. Mix, incubate for 1 minute. Ref: 41220
R 2: 1 x 15mL
5. Read initial absorbance (A) of the sample, start the stopwatch and R 1: 1 x 240 mL
read absorbances at 1 minute intervals thereafter for 3 minutes. Ref: 41222 Cont.
R 2: 1 x 60 mL
6. Calculate the difference between absorbances and the average R 1: 1 x 480 mL
absorbance differences per minute (A/min). Ref: 41223
R 2: 1 x 120 mL
BEIS43-I 07/01/15 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-171716 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
LDH -LQ
LDH-LQ
Piruvato. Cinética UV. DGKC. Líquido
Determinación cuantitativa de lactato deshidrogenasa CÁLCULOS

(LDH) 25º- 30ºC A/min x 4925 = U/L LDH
IVD
37ºC A/min x 9690 = U/L LDH
Conservar a 2-8ºC
Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que
PRINCIPIO DEL MÉTODO convierte 1 mol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La
La lactato deshidrogenasa (LDH) cataliza la reducción del piruvato concentración se expresa en unidades por litro (U/L).
por el NADH, según la siguiente reacción:
LDH Factores de conversión de temperaturas
Piruvato + NADH + H+  L-lactato + NAD+ Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando
La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el por:
medio determinado fotometricamente, es proporcional a la Temperatura Factor para convertir a
concentración catalítica de LDH en la muestra ensayada1. de medición 25ºC 30ºC 37ºC
SIGNIFICADO CLÍNICO 25ºC 1,00 1,33 1,92
La lactato deshidrogenasa (LDH) es una enzima, distribuida por todo 30ºC 0,75 1,00 1,43
el organismo humano. Las mayores concentraciones de LDH se 37ºC 0,52 0,70 1,00
encuentran en el hígado, corazón, riñón, músculo esquelético y CONTROL DE CALIDAD
eritrocitos. Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
El nivel de LDH en suero esta elevado en pacientes con SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
enfermedades del hígado, infartos de miocardio, alteraciones renales, Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
distrofias musculares y anemias1,4,5. revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
datos clínicos y de laboratorio. correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las
REACTIVOS tolerancias.
R1 Imidazol 65 mmol/L VALORES DE REFERENCIA1
Tampón Piruvato 25ºC 30ºC 37ºC
R2 120-240 U/L 160-320 U/L 230-460 U/L
NADH 0,18 mmol/L Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
Substrato
establezca sus propios valores de referencia.
PREPARACIÓN CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Reactivo de trabajo (RT) : Rango de medida: Desde el límite de detección 3,42 U/L hasta el límite de
Mezclar: 4 vol. (R1) Tampón + 1 vol. de (R2) Substrato . linealidad 1600 U/L.
Estabilidad: 15 días a 2-8ºC o 5 días a 15-25ºC. Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir
1/10 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Precisión:
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su Media (U/L) 400 785 392 773
contaminación. SD 3,15 10,97 6,23 9,93
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. CV (%) 0,79 1,40 1,59 1,28
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez. Sensibilidad analítica: 1 U/L = 0,00009 A/min.
- Absorbancia del Blanco a 340 nm < 1,00. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias
sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos
MATERIAL ADICIONAL comerciales (x).
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm. Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
- Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC ( 0,1ºC) Coeficiente de regresión (r): 0,98382.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. Ecuación de la recta de regresión: y= 0,8988x + 2,583.
- Equipamiento habitual de laboratorio. Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
MUESTRAS INTERFERENCIAS
Suero1. Separado lo antes posible de los hematies. No usar oxalatos La presencia de hemólisis interfiere con los resultados.
como anticoagulantes ya que interfieren en los resultados. Algunos anticoagulantes como los oxalatos interfieren en la reacción1.
No usar muestras hemolizadas. Estabilidad: 2 días a 2-8ºC. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la
determinación de la LDH2,3.
PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo: NOTAS
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 340 nm SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de
Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz este reactivo en distintos analizadores.
Temperatura constante: . . . . . . . . . . 25ºC / 30ºC / 37ºC
BIBLIOGRAFÍA
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire. 1. Pesce A. Lactate dehydrogenase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby
3. Pipetear en una cubeta: Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1124-117, 438.
25º - 30ºC 37ºC 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
RT (mL) 3,0 3,0 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Muestra (L) 100 50 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
4. Mezclar, incubar 1 minuto. PRESENTACIÓN

5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el
cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos. R 1: 1 x 60 mL
Ref: 41220
6. Calcular el promedio de la diferencia de absorbancia por minuto R 2: 1 x 15 mL
R 1: 1 x 240 mL
(A/min). Ref: 41222 Cont.
R 2: 1 x 60 mL
R 1: 1 x 480 mL
Ref: 41223
R 2: 1 x 120 mL
BEIS43-E 07/01/15 SPINREACT,S.A./S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
BILIRUBIN T&D- J
Bilirubin Total and Direct

Jendrassik – Grof. Colorimetric
Quantitative determination of bilirubin

IVD CALCULATIONS
With Calibrator:
Store at 2-8ºC ( A ) Sample ( A )Sample Blank x Conc. Calibrator = mg/dL bilirubin
( A ) Calibrator ( A ) Calibrator Blank
PRINCIPLE OF THE METHOD
Bilirubin is converted to colored azobilirubin by diazotized sulfanilic With Factor:
acid and measured photometrically. ((A) Sample - (A) Sample Blank) x Factor* = mg/dL bilirubin in the sample
Of the two fractions presents in serum, bilirubin-glucuromide and free
bilirubin loosely bound to albumin, only the former reacts directly in *Factor: Concentrat ion of Calibrator ; Theoretical factor = 17.5
aqueous solution (bilirubin direct), while free bilirubin requires ( A ) Calibrator ( A ) Calibrator Blank
solubilization with caffeine to react (bilirubin indirect). In the
determination of indirect bilirubin the direct is also determined, the Conversion factor: mg/dL x 17.1 = mol/L.
results correspond to total bilirubin.
The intensity of the color formed is proportional to the bilirubin QUALITY CONTROL
1,2,3
concentration in the sample . Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
CLINICAL SIGNIFICANCE If control values are found outside the defined range, check the instrument, reagents
and calibrator for problems.
Bilirubin is a breakdown product of hemoglobin. Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective actions
It is transported from the spleen to the liver and excreted into bile. if controls do not meet the acceptable tolerances.
Hyperbilirubinemia results from the increase of bilirubin
1
concentrations in plasma. Causes of hyperbilirubinemia: REFERENCE VALUES
Total bilirubin: Increased hemolysis, genetic errors, neonatal jaundice, Bilirubin Total Up to 1.10 mg/dL 18.81 mol/L
ineffective erythrpoiesis, and drugs. Bilirubin Direct Up to 0.25 mg/dL 4.27 mol/L
Direct bilirubin: Hepatic cholestasis, genetic errors, hepatocellular These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its
1,6,7
damage . own reference range.
integrate clinical and other laboratory data. PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Measuring range: From detection limit of 0,1 mg/L to linearity limit of 20 mg/dL.
If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2 with
REAGENTS
NaCl 9 g/L and multiply the result by 2.
Sulfanilic acid 30 mmol/L
R1 Precision:
Hydrochloric acid (HCl) 400 mmol/L
R2 Sodium nitrite Bilirubin D Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
50 mmol/L
Mean (mg/dL) 0,78 2,28 0,80 2,18
R3 Caffeine 100 mmol/L SD 0,01 0,01 0,01 0,03
Optional BILIRUBIN CAL Ref: 1002250 CV (%) 1,28 0,65 1,63 1,53
PREPARATION Bilirubin T Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)

All the reagents are ready to use. Mean (mg/dL) 1,16 4,21 1,15 4,27
SD 0,02 0,04 0,02 0,13
STORAGE AND STABILITY CV (%) 2,03 1,06 1,91 3,10
All the components of the kit are stable until the expiration date on the Sensitivity: (T) 1 mg/dL = 0,079 A. (D) 1 mg/dL = 0,087 A.
label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
contaminations prevented during their use. Do not use reagents over systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
the expiration date. The results obtained using 50 samples were the following:
Signs of reagent deterioration: DIRECT BILIRUBIN
- Presence of particles and turbidity. Correlation coefficient (r): 0.99.
- Color development in R 2. Regression equation: y= 0,9923x + 0,0048.
TOTAL BILIRUBIN
ADDITIONAL EQUIPMENT Correlation coefficient (r): 0.99.
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 540 nm. Regression equation: y= 0,9832x + 0,0224.
- Matched cuvettes 1.0 cm light path. The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
- General laboratory equipment.
INTERFERENCES
1,2,3
Hemolysis causes decreased bilirubin values .
SAMPLES
1 A list of drugs and other interfering substances with bilirubin has been reported by
Serum or plasma, free of hemolysis . 4,5
Young et. al .
Protect samples from direct light.
Stability: Bilirubin is stable at 2-8ºC for 4 days and 2 months at –20ºC. NOTES
1. For bilirubin determination in newborns, pipette 50 L of sample. Multiply the
PROCEDURE result by 4.
1. Assay conditions: 2. SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
Wavelength: . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . .. . . . . . . . 540 nm Instructions for many of them are available on request.
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm light path
Temperature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … . . . . . 15-25ºC BIBLIOGRAPHY
2. Adjust the instrument to zero with distilled water. 1. Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984;
1238-1241, 436 and 650.
3. Pipette into a cuvette: 2. Malloy H T et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter. J Biol Chem
B. Total B. Direct Blank 1937; 112 (2): 481-491.
3. Jendrassik L et al. Biochemische Zeitschrift Band 1938; 297:80-89.
R 1 ( L) 200 200 200 4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
R 2 (drop) 1 1 -- 5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001.
NaCl 9 g/L (mL) -- 2.0 2.0 7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
R 3 (mL) 2.0 -- --
Sample / Calibrator ( L) 200 200 200 PACKAGING
(Note 1) Ref: 1001041 R 1: 1 x 60 mL
Cont. R 2: 1 x 10 mL
4. Mix and incubate for exactly 5 minutes at 15-25ºC. R 3: 1 x 150 mL
5. Read the absorbance (A).
BSIS03-I 27/06/11 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
BILIRUBIN T&D- J
Bilirrubina Total y Directa

Jendrassik – Grof. Colorimétrico
Determinación cuantitativa de bilirrubina

IVD CÁLCULOS
Con Calibrador:
Conservar a 2-8ºC ( A ) Muestra ( A )Blanco Muestra x Conc. Calibrador = mg/dL de bilirrubina
( A ) Calibrador ( A )Blanco Calibrador
PRINCIPIO DEL MÉTODO Con Factor:
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido ((A) Muestra – (A) Blanco Muestra) x Factor* = mg/dL bilirrubina en la muestra
sulfanílico diazotado midiéndose fotométricamente. De las dos
fracciones presentes en suero, bilirrubin-glucurónido y bilirrubina libre Concentrac ión del Calibrador
*Factor: ; Factor teórico = 17,5
ligada a la albúmina, sólo la primera reacciona en medio acuoso ( A ) Calibrador ( A ) Blanco Calibrador
(bilirrubina directa) precisando la segunda la solubilización con
cafeína para que reaccione (bilirrubina indirecta). En la determinación Factor de conversión: mg/dL x 17,1 = mol/L.
de la bilirrubina indirecta se determina también la directa,
correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. CONTROL DE CALIDAD
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
1,2,3
bilirrubina presente en la muestra ensayada . SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el
SIGNIFICADO CLÍNICO instrumento, los reactivos y el calibrador.
La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis. correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en 1
plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia: VALORES DE REFERENCIA
Bilirrubina Total: Aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia Bilirrubina Total Hasta 1,1 mg/dL 18.81 mol/L
neonatal, alteraciones eritropoyéticas, presencia de drogas. Bilirrubina Directa Hasta 0,25 mg/dL 4.275 mol/L
Bilirrubina Directa: Colestasis hepática, alteraciones genéticas y Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
alteraciones hepáticas1,6,7. establezca sus propios valores de referencia.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clínicos y de laboratorio. CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Rango de medida: Desde el límite de detección de 0,1 mg/dL hasta el límite de
REACTIVOS linealidad de 20 mg/dL.
Ácido sulfanílico 30 mmol/L Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/2 con ClNa
R1 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Ácido clorhídrico 400 mmol/L
Precisión:
R2 Sodio nitrito 50 mmol/L Bilirrubina D Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
Media (mg/dL) 0,78 2,28 0,80 2,18
R3 Cafeína 100 mmol/L SD 0,01 0,01 0,01 0,03
BILIRUBIN CAL CV (%) 1,28 0,65 1,63 1,53
Opcional Ref:1002250
Bilirrubina T Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
PREPARACIÓN Media (mg/dL) 1,16 4,21 1,15 4,27
Todos los reactivos están listos para su uso. SD 0,02 0,04 0,02 0,13
CV (%) 2,03 1,06 1,91 3,10
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Sensibilidad analítica: (T) 1 mg/dL = 0,079 A. (D) 1 mg/dL = 0,087 A.
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita la significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
contaminación durante su uso. BILIRRUBINA DIRECTA
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Coeficiente de correlación (r): 0,99.
Indicadores de deterioro de los reactivos: Ecuación de la recta de regresión: y= 0,9923x + 0,0048.
- Presencia de partículas y turbidez. BILIRRUBINA TOTAL
- Desarrollo de color en el R 2. Coeficiente de correlación (r): 0,99.
Ecuación de la recta de regresión: y= 0,9832x + 0,0224.
MATERIAL ADICIONAL Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
- Espectrofotómetro o analizador con cubeta para lecturas a 540 nm.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. INTERFERENCIAS
1,3
- Equipamiento habitual de laboratorio. La presencia de hemólisis disminuye el valor de bilirrubina .
Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren con la determinación
4,5
MUESTRAS de la bilirrubina .
1
Suero o plasma libre de hemólisis . Proteger de la luz.
Estabilidad de la muestra: 4 días a 2-8ºC o 2 meses a –20ºC. NOTAS
1. Para la determinación de bilirrubina en neonatos, pipetear 50 L de muestra.
PROCEDIMIENTO Multiplicar el resultado obtenido por 4.
1. Condiciones del ensayo: 2. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 540 nm reactivo en distintos analizadores.
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz BIBLIOGRAFÍA
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15-25ºC 1. Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. 1984; 1238-1241, 436 and 650.
3. Pipetear en una cubeta: 2. Malloy H T et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter. J Biol
Chem 1937; 112 (2): 481-491.
B. Total B. Directa Blanco 3. Jendrassik L et al. Biochemische Zeitschrift Band 1938; 297:80-89.
R 1 ( L) 200 200 200 4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001.
R 2 (gotas) 1 1 -- 6. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed. AACC 1999.
ClNa 9 g/L (mL) -- 2,0 2,0 7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. AACC 1995.
R 3 (mL) 2,0 -- --
Muestra / Calibrador ( L)(Nota 1) 200 200 200 PRESENTACIÓN
Ref: 1001041 R 1: 1 x 60 mL
4. Mezclar e incubar exactamente 5 minutos a 15-25ºC. Cont. R 2: 1 x 10 mL
5. Leer la absorbancia (A). R 3: 1 x 150 mL
BSIS03-E 27/06/11 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
CALCIUM-oC v/v
Calcium
o-Crésolphtaléine v/v. Colorimétrique
Détermination quantitative de calcium Urine 24 h

IVD ( A) Échantillo n x 10 x vol. (dL) urine/24 h = mg/24 h de calcium dans
Conserver à 2-8ºC ( A) Calibrateur
PRINCIPE DE LA METHODE l’échantillon
La mesure du calcium est fondée sur la formation d’un complexe coloré Facteur de conversion : mg/dL x 0,25= mmol/L.
entre le calcium de l’échantillon et l’o-crésolphtaléine, en milieu alcalin : CONTROLE DE QUALITE
OH Il est conseillé d’analyser conjointement les échantillons de sérum dont les
Ca + o-Crésolphtaléine 
++
 Complexe coloré valeurs ont été contrôlées: SPINTROL H Normal et pathologique (Réf. 1002120
L’intensité de la couleur formée est directement proportionnelle à la et 1002210).
concentration de calcium présente dans l’échantillon testé1,2,3. Si les valeurs se trouvent en dehors des valeurs tolérées, analyser l’instrument,
SIGNIFICATION CLINIQUE les réactifs et le calibreur.
Le calcium est le minéral le plus abondant et le plus important du corps Chaque laboratoire doit disposer de son propre contrôle de qualité et déterminer
humain ; 99 % se trouve dans les os. les mesures correctives à mettre en place dans le cas où les vérifications ne
Une diminution des niveaux d’albumine cause une diminution du calcium correspondraient pas aux attentes.
dans le sérum. De faibles niveaux de calcium peuvent être attribués à de VALEURS DE REFERENCE1
l’hypoparathyroïdie, pseudo-hypoparathyroïdie, déficit en vitamine D, Sérum ou plasma :
malnutrition ou mauvaise absorption Adultes 8,5-10,5 mg /dL  2,1-2,6 mmol/L
La majorité des causes d’hypercalcémie sont dues à des maladies Enfants 10-12 mg/dL  2,5-3 mmol/L
oncologiques, intoxication par vitamine D, augmentation de la rétention Nouveau-nés 8-13 mg/dL  2-3,2 mmol/L
rénale, ostéoporose, sarcoïdose, thyroxicose et hyperparathyroïdie1,6,7. Urine :
Le diagnostic clinique doit être réalisé en tenant compte de toutes les Adultes 50-300 mg/24 h  1,25-7,5 mmol/24 h
données cliniques et de laboratoire. Enfants 80-160 mg/24 h  2-4 mmol/24 h
RÉACTIFS Ces valeurs sont données à titre d’information. Il est conseillé à chaque
R1 laboratoire de définir ses propres valeurs de référence.
Éthanolamine 500 mmol/L
Tampon CARACTERISTIQUES DE LA METHODE
R2 o-Crésolphtaléine 0,62 mmol/L Plage de mesure: Depuis la limite de détection de 0,071 mg/dL, jusqu’à la limite
Chromogène 8-Hydroxyquinoléine 69 mmol/L de linéarité de 35 mg/dL
CALCIUM CAL Étalon primaire aqueux de Calcium 10 mg/dL Si la concentration de l’échantillon est supérieure à la limite de linéarité, diluer
PRÉCAUTIONS 1/2 avec du ClNa 9 g/L et multiplier le résultat final par 2.
R2 : Corrosif (C) : R35 : Provoque de graves brûlures. Précision:
Intra-série (n= 20) Inter-série (n= 20)
PRÉPARATION Moyenne (mg/dL) 9,14 16,02 9,34 16,27
Tous les réactifs sont prêts à l’emploi. SD 0,07 0,11 0,20 0,37
CONSERVATION ET STABILITE CV (%) 0,74 0,68 2,16 2,27
Tous les composants du kit sont stables jusqu’à la date de péremption Sensibilité analytique: 1 mg/dL = 0,044 A.
indiquée sur l’étiquette, et si les flacons sont maintenus hermétiquement Exactitude: Les réactifs SPINREACT (y) ne montrent pas de différences
fermés à 2-8ºC, à l’abri de la lumière et des sources de contamination. systématiques significatives lorsqu’on les compare à d’autres réactifs
Ne pas utiliser les réactifs en dehors de la date indiquée. commerciaux (x).
Indices de détérioration des réactifs: Les résultats obtenus avec 50 échantillons ont été les suivants:
- Présence de particules et turbidité. Coefficient de corrélation (r): 0,981.
- Absorbation (A) du blanc à 570 nm  0,2. Equation de la Coubre de régression: y=0,8234x + 1,5484.
Les caractéristiques de la méthode peuvent varier suivant l’analyseur employé
MATERIEL SUPPLEMENTAIRE
- Spectrophotomètre ou analyseur pour les lectures à 570 nm. INTERFÉRENCES
- Cuvettes de 1,0 cm d’éclairage. Les triglycérides <1,25 g/L, n’interfèrent pas1. Il a été rapporté que certaines
- Equipement classique de laboratoire (Remarque 1,2) drogues et autres substances interfèrent avec la détermination du calcium4,5.
ÉCHANTILLONS REMARQUES
- Sérum ou plasma1 : Séparé le plus tôt possible des hématies. Ne pas 1. CALCIUM CAL : En raison de la nature du produit, il est conseillé de le
utiliser de l’oxalate ou EDTA comme anticoagulants vu qu’ils interfèrent traiter avec beaucoup de soin vu qu’il peut facilement contaminer.
avec la détermination du calcium. 2. Il est recommandé d’utiliser du matériel en plastique à usage unique. Si l’on
- Urine1 : Effectuer le prélèvement d’urine de 24 heures dans des utilise du matériel en verre, il faudra le laver avec de l’acide nitrique dilué
récipients sans calcium. Avant le prélèvement, mettre 10 mL d’acide dans de l’eau (1/1), rincer plusieurs fois à l’eau distillée et sécher avant
nitrique à 50 % (v/v) dans le conteneur. Consigner le volume. emploi.
Diluer l’urine 1/2 dans de l’eau distillée pour l’analyser. Mélanger. 3. La majorité des détergents destinés à un usage en laboratoire contiennent
Multiplier le résultat obtenu par 2 (facteur de dilution). des agents chélateurs. Des traces de ces derniers, consécutifs à un
Stabilité de l’échantillon : Le calcium est stable 10 jours à 2-8ºC.
mauvais rinçage du matériel, invalident la détermination.
PROCEDURE 4. La calibration avec l’Étalon aqueux peut donner lieu à des erreurs
1. Conditions de test: systématiques dans les méthodes automatiques. Dans ce cas, il est
Longueur d’ondes: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 570 nm (550-590) recommandé d’utiliser des calibrateurs sériques.
Cuvette:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . 1 cm d’éclairage 5. Utiliser des embouts de pipette jetables propres pour la dispensation.
Température . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . 37ºC / 15-25ºC
6. SPINREACT dispose de consignes détaillées pour l’application de ce
2. Régler le spectrophotomètre sur zéro en fonction de l’eau distillée.
3. Pipeter dans une cuvette: réactif dans différents analyseurs.
Blanc Étalon Échantillon BIBLIOGRAPHIE
R 1 (mL) 1,0 1,0 1,0 1. Farell E C. Calcium. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
Princeton 1984; 1051-1255 and 418.
R 2 (mL) 1,0 1,0 1,0 2. Kessler G. et al. Clin Chem 1964; 10 (8); 686-706.
Étalon(Note 3, 4) (L) -- 20 -- 3. Connerty H. V. et al. Am J Clin Path 1996; 45 (3); 200-296.
Échantillon (L) -- -- 20 5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001.
4. Mélanger et incuber pendant 5 minutes à 37ºC / 15-25ºC 6. Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed. AACC 1999.
5. Lire l’absorbation (A) du calibrateur contre le Blanc du réactif. La 7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. AACC 1995.
couleur est stable au moins 40 minutes.
PRÉSENTATION
CALCULS
Sérum ou plasma Réf:1001061 R1:1 x 150 mL, R2: 1 x 150 mL, CAL: 1 x 5 mL
Cont.
( A) Échantillo n x 10 (Conc. Calibrateur) = mg/dL de calcium dans Réf:1001062 R1:1 x 50 mL, R2: 1 x 50 mL, CAL: 1 x 5 mL
( A) Calibrateur
l’échantillon
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Tél. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail : [email protected]
HDLc -P
HDL Cholestérol P
Réactif précipitant
Réactif précipitant de HDL cholestérol CONTROLE DE QUALITE

IVD Procéder selon ce qui est indiqué dans les instructions de travail du réactif
de Cholestérol.
Conserver à 2-8ºC
VALEURS DE REFERENCE3
PRINCIPE DE LA METHODE HDL-cholestérol :
Les lipoprotéines de très faible densité (VLDL) et faible densité (LDL) Hommes Femmes
du sérum ou plasma se précipitent avec le phosphotungstate en Risque inférieur > 55 mg/dL > 65 mg/dL
présence d’ions magnésium. Après leur centrifugation, le surnageant Risque normal 35-55 mg/dL 45-65 mg/dL
contient les lipoprotéines de haute densité (HDL). La fraction de Risque élevé < 35 mg/dL < 45 mg/dL
cholestérol HDL est déterminée employant le réactif de l’enzyme
cholestérol total1,2. LDL-cholestérol :
Valeurs suspectes à partir de : 150 mg/dL
SIGNIFICATION CLINIQUE Valeurs élevées à partir de : 190 mg/dL
Le cholestérol transporté par les lipoprotéines à haute densité (HDL) Ces valeurs sont données à titre d’information. Il est conseillé à chaque
est souvent appelé « bon cholestérol », vu que des niveaux élevés laboratoire de définir ses propres valeurs de référence.
sont liés à un moindre risque cardiovasculaire.
Un niveau bas de cholestérol HDL est considéré comme l’un des CARACTERISTIQUES DE LA METHODE
principaux facteurs de risque cardiovasculaire1,6,7. Plage de mesure: Depuis la limite de détection de 1,57 mg/dL, jusqu’à la
Le diagnostic clinique doit être réalisé en tenant compte de toutes les limite de linéarité de 275 ,mg/dL.
données cliniques et de laboratoire. Si la concentration de l’échantillon est supérieure à la limite de linéarité,
diluer 1/2 avec du ClNa 9 g/L et multiplier le résultat final par 2.
RÉACTIFS Précision:
R Acide de phosphotungstate 14 mmol/L Intra-série (n=20) Inter-série (n=20)
Réactif précipitant Chlorure de magnésium 2 mmol/L Moyenne (mg/dL) 75,8 33,9 95,2 182
Réf. 1001092 SD 0,89 0,85 2,59 3,04
Optionnel Cholestérol
Réf. 1001093 CV (%) 1,18 2,51 2,72 1,68
Sensibilité analytique: 1 mg/dL = 0,0015 A.
PRÉCAUTIONS Exactitude: Les réactifs SPINREACT (y) ne montrent pas de différences
R2 : Corrosif (C) : R35 : Provoque de graves brûlures. systématiques significatives lorsqu’on les compare à d’autres réactifs
commerciaux (x).
PRÉPARATION Les résultats obtenus avec 50 échantillons ont été les suivants:
Tous les réactifs sont prêts à l’emploi Coefficient de corrélation (r): 0,99
Equation de la Coubre de régression: y=0,9944 x -1,2346
CONSERVATION ET STABILITE Les caractéristiques de la méthode peuvent varier suivant l’analyseur
Tous les composants du kit sont stables jusqu’à la date de employé.
péremption indiquée sur l’étiquette, et si les flacons sont maintenus
hermétiquement fermés à 2-8ºC, à l’abri de la lumière et des sources INTERFÉRENCES
de contamination. Il n’a pas été observé d’interférences avec des triglycérides jusqu’à 4 g/L1.
Ne pas utiliser les réactifs en dehors de la date indiquée. Il a été rapporté que plusieurs drogues et autres substances interfèrent
Indices de détérioration des réactifs: avec la détermination du Cholestérol HDL4,5.
- Présence de particules et turbidité.
REMARQUES
MATERIEL SUPPLEMENTAIRE 1. La procédure de précipitation peut également se réaliser en utilisant la
- Spectrophotomètre ou analyseur pour les lectures à 505 nm. (500- moitié du volume du réactif et échantillon.
550) 2. La calibration avec l’Étalon aqueux peut donner lieu à des erreurs
- Cuvettes de 1,0 cm d’éclairage. systématiques dans les méthodes automatiques. Dans ce cas, il est
- Equipement classique de laboratoire recommandé d’utiliser des calibrateurs sériques.
3. Le calibrateur ne doit pas se précipiter. Il faut uniquement l’utiliser
ÉCHANTILLONS dans la partie de l’essai visant à la détermination de HDL cholestérol.
Sérum ou plasma1. 4. SPINREACT dispose de consignes détaillées pour l’application de
Ne pas utiliser d’échantillons hémolysés. Séparer le sérum des ce réactif dans différents analyseurs.
hématies le plus tôt possible.
Stabilité de l’échantillon : 7 jours à 2-8ºC. BIBLIOGRAPHIE
1. Naito H K. High-density lipoprotein (HDL) cholesterol. Kaplan A et al. Clin
PROCEDURE Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1207-1213
and 437.
Précipitation Remarque 1 2. Grove T H. Effect of reagent pH on Determination of HDL Cholesterol by
1. Doser dans des tubes à centrifuger : precipitation with Sodium Phosphotungstate-magnesium Clin Chem 1979;
R ( L) 100 25:560,.
Échantillon (mL) 1,0 3. US National Cholesterol Education Program of the National Institutesof
2. Mélanger et laisser reposer 10 minutes à température ambiante. Health.
3. Centrifuger 20 min à 4 000 r.p.m. ou 2 min à 12 000 r.p.m. 4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
4. Recueillir le surnageant et transformer selon s’indique sur la 1995.
détermination de cholestérol total. 5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001.
6. Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed. AACC 1999.
7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. AACC 1995.
CALCULS
Procéder selon les instructions détaillées dans les instructions de
PRÉSENTATION
travail de Cholestérol total.
Réf: 1001095 Cont. R : 4 x 5 mL
LDL-cholestérol calculé (Friedewald)
LDLc = Cholestérol total – HDLc - (TG/5)
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UREA -B
Urée-B
Berthelot. Enzymatique colorimétrique
Détermination quantitative d’urée 5. Pipeter:

Blanc Étalon Echantillon
IVD
Conserver à 2-8ºC R 2 (mL) 1,0 1,0 1,0
6. Mélanger et incuber 5 min. à 37ºC ou 10 min. À température ambiante.
PRINCIPE DE LA METHODE
7. Lire l’absorbation (A) du patron et l’échantillon, en comparaison avec le blanc
L’uréase catalyse l’hémolyse de l’urée, présente dans l’échantillon, en
du réactif. La couleur reste stable pendant au moins 30 minutes à 15-25ºC.
ammoniac (NH3) et en anhydride carbonique (CO2).
Les ions ammonie réagis avec salicylate et hypoclorithe (ClONa), en présence CALCULS
du catalyseur nitroprisuate, pour former un indophénol vert ::
( A) Échantillon ( A )Blanc
Uréase + x 50 (Étalon conc.) = mg/dL d’urée dans l’échantillon testé
Urée (NH4 )2 + CO2 (A ) Étalon ( A) Blanc
+ Nitroprusiate
NH4 + Salicylate + ClONa Indophénol 1
10 mg/L d’urée BUN divisé par 0,466 = 21 mg/L d’urée = 0,36 mmol/L d’urée .
L’intensité de couleur formé est proportionnel à la concentration d’urée en le
+
test a diminution de la concentration de NAD dans la méthode est Facteur de conversion: mg/dL x 0,1665 = mmol/L.
proportionnelle à la concentration d’urée dans l’échantillon testé.
CONTROLE DE QUALITE
SIGNIFICATION CLINIQUE Il est conseillé d’analyser conjointement les échantillons de sérum dont les valeurs ont
L’urée est le résultat final du métabolisme des protéines; elle se forme dans le été contrôlées: SPINTROL H Normal et pathologique (Réf. 1002120 et 1002210).
foie à partir de sa destruction. Si les valeurs se trouvent en dehors des valeurs tolérées, analyser l’instrument, les
Il peut apparaître un taux d’urée élevé dans le sang (urémie) dans le cadre de réactifs et le calibreur.
régimes excessives en protéines, de maladies d’insuffisances cardiaques, Chaque laboratoire doit disposer de son propre contrôle de qualité et déterminer les
d’hémorragies, d’hypovolémie et d’ obstructions rénales 1,4,5. mesures correctives à mettre en place dans le cas où les vérifications ne
La diagnostique clinique doit tenir compte des données cliniques et des correspondraient pas aux attentes.
données de laboratoire.
VALEURS DE REFERENCE
REACTIFS Sérum: de 15 a 45 mg/dL (2,49-7,49 mmol/L)
Tampon phosphates pH 6,7 50 mmol/L Urine: de 20 a 35 gr/24 heures
R1 EDTA 2 mmol/L Ces valeurs sont données à titre d’information. Il est conseillé à chaque laboratoire de
Tampon Salicylate de sodium 400 mmol/L
définir ses propres valeurs de référence.
Nitroprusiate de sodium 10 mmol/L
R2 Hypochlorite de sodium (ClONa) 140 mmol/L CARACTERISTIQUES DE LA METHODE
ClONa Hydroxyde de sodium 150 mmol/L
Gamme de mesures: Depuis la limite de détection de 0,3 mg/dL jusqu’à la limite de
R3
Uréase 30000 U/L linéarité de 200 mg/dL.
Enzymes
Si la concentration de l’échantillon est supérieure à la limite de linéarité, diluer 1/2
UREA CAL Patron primaire de détection d’urée 50 mg/dL
avec du ClNa 9 g/L et multiplier le résultat final par 2.
PRECAUTIONS Précision:
R2: Corrosif (C): R35: provoque des brûlures graves. Intra-série (n=20) Inter-série (n=20)
S26 En cas de contact avec les yeux, laver à grande eau claire immédiatement Moyenne (mg/dL) 40,0 139 40,0 142
et se rendre chez un médecin. S37/39 Utiliser des gants adaptés et des SD 1,27 3,50 1,86 3,75
protections pour les yeux/les mains. CV (%) 3,17 2,50 4,64 2,63
S45 En cas d’accident ou de malaise se rendre au plus chez le médecin (si Sensibilité analytique: 1 mg/dL = 0,00505 A.
possible, lui montrer l’étiquette). Exactitude: Les réactifs SPINREACT (y) ne montrent pas de différences
systématiques significatives lorsqu’on les compare à d’autres réactifs commerciaux (x).
PREPARATION
Les résultats obtenus avec 50 échantillons ont été les suivants:
- Réactif de travail (RT): Dissoudre ( ) une tablette de R3 dans le flacon de
Coefficient de corrélation (r): 0,9941.
R1. Refermer et mélanger doucement jusqu’à dissolution complète du Equation de la Coubre de régression: y=0,9972x + 0,011.
contenu. Les caractéristiques de la méthode peuvent varier suivant l’analyseur employé.
Stabilité: 4 semaines à 2-8ºC ou 7 jours à température ambiante (15-25ºC).
- Le R2 ClONa prêt à l’emploi. INTERFERENCES
Comme anticoagulants, il est conseillé d’utiliser de l’héparine. Ne jamais utiliser de
CONSERVATION ET STABILITE sels d’ammonium ou de fluorure1.
Tous les composants du kit sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée Différentes drogues ont été décrites ainsi que d’autres substances pouvant interférer
sur l’étiquette de la capsule, et si les capsules sont maintenus hermétiquement dans la détermination de l’urée4,5
fermés à 2-8ºC, à l’abri de la lumière et des sources de contamination. Ne pas
utiliser les réactifs en dehors de la date indiquée. REMARQUES
Indices de détérioration des réactifs: 1. UREA CAL: Etant donné la nature du produit, manipuler avec précaution. Peut
- Présence de particules et turbidité. être contaminé très facilement.
- Absorbation (A) du blanc à 580 nm 0,32. 2. Le matériel utilisé et l’eau distillée ne doivent ni contenir d’ammonium, ni de
sels1.
MATERIEL SUPPLEMENTAIRE 3. Le calibrage au moyen du patron de détection peut donner lieu à des erreurs
- Spectrophotomètre ou analyseur pour lectures à 580 nm. systématiques lors de méthodes automatiques. Dans de tels cas, il est conseillé
- Cuvettes de 1,0 cm d’éclairage. d’utiliser des calibrages sériques
- Equipement classique de laboratoire (Remarque2). 4. Utiliser des embouts de pipettes jetables propres pour diffuser le produit.
5. SPINREACT dispose de consignes détaillées pour l’application de ce
ECHANTILLONS réactif dans différents analyseurs.
- Sérum ou plasma héparinisé1: Ne pas utiliser de sels d’ammonium ni de
fluorure comme anticoagulants. BIBLIOGRAPHIE
- Urine1: Diluer l’échantillon à 1/50 dans de l’au distillée; mélanger. Multiplier le 1. Kaplan A. Urea. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton
résultat obtenu par 50 (facteur de dilution). Eviter le développement de 1984; 1257-1260 and 437 and 418.
bactéries, en réglant le pH < 4. 2. Tabacco A et al. Cin Chem 1979; 25: 336-337.
L’urée est stable 5 jours à 2-8ºC. 3. Fawcett J K et al. J Clin Path 1960; 13: 156-169.
1. Conditions de test: 7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Longueur d’ondes: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 580 nm
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm d’éclairage
PRESENTATION
Température: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37/15-25ºC
2. Régler le spectrophotomètre sur zéro en fonction de l’eau distillée Ref: 1001331 R1: 2 x 150 mL,R2: 2 x 150 mL, R3: 2 150 mL,
Cont.
3. Pipetter dans une cuvette: CAL: 1 x 5 mL
Blanc Étalon Echantillon Ref: 1001329 R1: 5 x 50 mL,R2: 5 x 50 mL, R3: 5 50 mL,
RT (mL) 1,0 1,0 1,0 CAL: 1 x 5 mL
Étalon(Remarque 1,3,4) ( L) -- 10 --
Echantillon ( L) -- -- 10
4. Mélanger et incuber 5 min à 37ºC ou 10 min à température ambiante.
BSIS33-F 20/02/15 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) ESPAGNE
BILIRUBIN T&D
Bilirubin Total and Direct

DMSO. Colorimetric
Quantitative determination of bilirubin

IVD CALCULATIONS
With Calibrator:
Store at 2-8ºC
( A ) Sample ( A )Sample Blank x Conc. Calibrator = mg/dL bilirubin
PRINCIPLE OF THE METHOD ( A ) Calibrator ( A ) Calibrator Blank
Bilirubin is converted to colored azobilirubin by diazotized sulfanilic acid and
measured photometrically. Of the two fractions presents in serum, bilirubin- With Factor:
glucuromide and free bilirubin loosely bound to albumin, only the former reacts ((A) Sample - (A) Sample Blank) x Factor* = mg/dL bilirubin in the sample
directly in aqueous solution (bilirubin direct), while free bilirubin requires
solubilization with dimethylsulfoxide (DMSO) to react (bilirubin indirect). In the Concentrat ion of Calibrator
*Factor:
determination of indirect bilirubin the direct is also determined, the results ( A ) Calibrator ( A ) Calibrator Blank
correspond to total bilirubin.
The intensity of the color formed is proportional to the bilirrubin concentration in
the sample .
1,2 Theoretical factor: Bilirubin (T) = 19,1 ; Bilirubin (D) = 14
Conversion factor: mg/dL x 17.1 = mol/L.

Bilirubin is a breakdown product of hemoglobin. QUALITY CONTROL
It is transported from the spleen to the liver and excreted into bile. Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
Hyperbilirubinemia results from the increase of bilirubin concentrations in
plasma. Causes of hyperbilirubinemia: If control values are found outside the defined range, check the instrument, reagents
Total bilirubin (T): Increase hemolysis, genetic errors, neonatal jaundice,
and calibrator for problems.
ineffective erythrpoiesis, and drugs. Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective actions
Direct bilirubin (D): Hepatic cholestasis, genetic errors, hepatocellular
1,5,6 if controls do not meet the acceptable tolerances.
damage .
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should integrate REFERENCE VALUES
1
clinical and other laboratory data. Bilirubin Total Up to 1.10 mg/dL 18.81 mol/L
Bilirubin Direct Up to 0.25 mg/dL 4.27 mol/L
REAGENTS These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its own
Sulfanilic acid 30 mmol/L reference range.
R 1 (D)
Hydrochloric acid (HCl) 150 mmol/L
Sulfanilic acid 30 mmol/L PERFORMANCE CHARACTERISTICS
R 2 (T) Hydrochloric acid (HCl) 50 mmol/L Measuring range: From detection limit of (T) 0,099 mg/dL (D) 0.04 mg/dL to linearity
Dimethylsulfoxide (DMSO) 7 mol/L limit of 18 mg/dL.
R3 Sodium nitrite If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2 with NaCl
29 mmol/L
9 g/L and multiply the result by 2.
Optional Precision:
BILIRRUBIN CAL Ref: 1002250 Bilirubin T Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
Mean (mg/dL) 1.12 5.36 1.01 5.28
PRECAUTIONS SD 0.02 0.12 0.03 0.12
R1/R2/RT: Corrosive (C):R35:Causes severe burns. CV (%) 2.33 2.27 2.70 2.32
S26: In case of contact with eyes, rinse immediately with plenty of water and
seek medical advice. Bilirubin D Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
PREPARATION Mean (mg/dL) 0.64 2.28 0.68 2.53
All the reagents are ready to use. SD 0.01 0.02 0.02 0.05
CV (%) 1.91 1.10 2.51 1.95
STORAGE AND STABILITY
All the components of the kit are stable until the expiration date on the label Sensitivity: 1 mg/dL = 1 mg/dL = 0.015 A (T).
when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and contaminations 1 mg/dL = 0.073 A (D).
prevented during their use. Do not use reagents over the expiration date. Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents did not show systematic
Signs of reagent deterioration: differences when compared with other commercial reagents.
- Presence of particles and turbidity. The results obtained using 50 samples for Bilirubin D were the following:
- Color development in R 2. Correlation coefficient (r): 0.99
Regression equation: y=0.9933x + 0.0039
ADDITIONAL EQUIPMENT The results obtained using 50 samples for Bilirubin T were the following:
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 555 nm. Correlation coefficient (r): 0.996
- Matched cuvettes 1.0 cm light path. Regression equation: y=0.0884x + 0.0208
- General laboratory equipment. The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
SAMPLES INTERFERENCES
1,2
Serum or plasma, free of haemolysis (separated from red blood cells as soon as Hemolysis causes decreased bilirubin values .
possible). Protect samples from direct light. A list of drugs and other interfering substances with bilirubin determination has been
3,4
Sample Stability (without red blood cells): 2-8ºC for 4 days and 2 months at – reported by Young et. al .
20ºC.
NOTES
PROCEDURE 1. For bilirubin determination in newborns, pipette 50 L of sample. Multiply the
1. Assay conditions: result by 2.
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . … . . . . 555 nm (530-580) 2. SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . ... . . … … . . .1 cm light path Instructions for many of them are available on request.
Temperature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15-25ºC
2. Adjust the instrument to zero with distilled water. BIBLIOGRAPHY
1. Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
3. Pipette into a cuvette:
Princeton 1984; 1238-1241. 436 and 650.
Blank Total B. Blank Direct B. 2. Malloy H T. et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter.
R 1 (D) (mL) -- -- 1.5 1.5 J. Biol Chem 1937; 112, 2; 481-491.
R 2 (T) (mL) 1.5 1.5 -- --
R3 ( L) -- 50 -- 50 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
(Note 1)
Sample / Calibrator 100 100 100 100 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
( L)
PACKAGING
4. Mix and incubate exactly for 5 minutes at 15-25ºC. Ref: 1001044 R 1 (D): 1 x 150 mL
5. Read the absorbance (A). Cont. R 2 (T): 1 x 150 mL
R 3: 1 x 10 mL
BILIRUBIN T&D
Bilirrubina Total y Directa

DMSO. Colorimétrico
Determinación cuantitativa de bilirrubina CÁLCULOS

IVD Con Calibrador:
( A ) Muestra ( A )Blanco Muestra x Conc. Calibrador = mg/dL de bilirrubina
Conservar a 2-8ºC ( A ) Calibrador ( A )Blanco Calibrador
PRINCIPIO DEL MÉTODO Con Factor:

La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico ((A) Muestra – (A) Blanco Muestra) x Factor* = mg/dL bilirrubina en la muestra
diazotado midiéndose fotométricamente. De las dos fracciones presentes en
suero, bilirrubin-glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmina, sólo la
*Factor: Concentrac ión del Calibrador
primera reacciona en medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda
la solubilización con dimetilsulfóxido (DMSO) para que reaccione (bilirrubina ( A ) Calibrador ( A ) Blanco Calibrador
indirecta). En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también
la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. La intensidad del Factor teórico: Bilirrubina (T) = 19,1 ; Bilirrubina (D) = 14
color formado es proporcional a la concentración de bilirrubina presente en la
1,2
muestra ensayada . Factor de conversión: mg/dL x 17,1 = mol/L.
SIGNIFICADO CLÍNICO CONTROL DE CALIDAD

La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina. Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis. SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el
plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia: instrumento, los reactivos y el calibrador.
Bilirrubina Total (T): Aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
neonatal, alteraciones eritropoyéticas, presencia de drogas. correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
Bilirrubina Directa (D): Colestasis hepática, alteraciones genéticas y
1,5,6 1
alteraciones hepáticas . VALORES DE REFERENCIA
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos Bilirrubina Total Hasta 1,10 mg/dL 18,81 mol/L
clínicos y de laboratorio. Bilirrubina Directa Hasta 0,25 mg/dL 4,27 mol/L
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
REACTIVOS propios valores de referencia.
Ácido sulfanílico 30 mmol/L
R 1 (D)
Ácido clorhídrico (HCl) 150 mmol/L CARACTERISTÍCAS DEL MÉTODO
Ácido sulfanílico 30 mmol/L Rango de medida: Desde el límite de detección de (T) 0,099 mg/dL (D) 0.04 mg/dL
R 2 (T) Ácido clorhídrico (HCl) 50 mmol/L hasta el límite de linealidad de 18 mg/dL.
Dimetilsulfóxido (DMSO) 7 mol/L Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/2 con ClNa
R3 Sodio nitrito 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
29 mmol/L Precisión:
Opcional Bilirrubina T Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
BILIRRUBIN CAL Ref: 1002250 Media (mg/dL) 1,12 5,36 1,01 5,28
SD 0,02 0,12 0,03 0,12
PRECAUCIONES CV (%) 2,33 2,27 2,70 2,32
R1/R2/RT: Corrosivo (C): R35: Provoca quemaduras graves.
S26: En caso de contacto con los ojos, lávense inmediata y abundantemente Bilirrubina D Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
con agua y acudir a un médico. Media (mg/dL) 0,64 2,28 0,68 2,53
SD 0,01 0,02 0,02 0,05
PREPARACIÓN CV (%) 1,91 1,10 2,51 1,95
Todos los reactivos están listos para su uso.
Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,015 A (T).
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD 1 mg/dL = 0,073 A (D).
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad Exactitud: Los reactivos SPINREACT no muestran diferencias sistemáticas significativas
indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a cuando se comparan con otros reactivos comerciales.
2-8ºC, protegidos de la luz y se evita la contaminación durante su uso. No usar Los resultados obtenidos con 50 muestras para Bilirrubina D fueron los siguientes:
reactivos fuera de la fecha indicada. Coeficiente de correlación (r): 0.99
Indicadores de deterioro de los reactivos: Ecuación de la recta de regresión: y=0.9933x + 0.0039
- Presencia de partículas y turbidez. Los resultados obtenidos con 50 muestras para Bilirrubina T fueron los siguientes:
- Desarrollo de color en el R 2. Coeficiente de correlación (r): 0.996
Ecuación de la recta de regresión: y=0.0884x + 0.0208
MATERIAL ADICIONAL Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 555 nm.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. INTERFERENCIAS
1,2
- Equipamiento habitual de laboratorio. La presencia de hemólisis disminuye el valor de bilirrubina .
Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren con la determinación
MUESTRAS 3,4
de bilirrubina .
Suero o plasma libre de hemólisis (separado lo antes posible de los hematíes).
Proteger de la luz. NOTAS
Estabilidad de la muestra separada ya de los hematíes: 4 días a 2-8ºC o 2
1. Para la determinación de bilirrubina en neonatos, pipetear 50 L de muestra.
meses a –20ºC.
Multiplicar el resultado obtenido por 2.
PROCEDIMIENTO 2. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este
1. Condiciones del ensayo: reactivo en distintos analizadores.
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 555 nm (530-580)
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz BIBLIOGRAFÍA
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15-25ºC 1. Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. Princeton 1984; 1238-1241. 436 and 650.
3. Pipetear en una cubeta: 2. Malloy H T. et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter.
J. Biol Chem 1937; 112, 2; 481-491.
Blanco B. Total Blanco B. Directa 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
R 1 (D) (mL) -- -- 1,5 1,5 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
R 2 (T) (mL) 1,5 1,5 -- --
R3 ( L) -- 50 -- 50
(Nota 1)
Muestra /Calibrador ( L) 100 100 100 100 PRESENTACIÓN
4. Mezclar e incubar exactamente 5 minutos a 15-25ºC.
Ref: 1001044 R 1 (D): 1 x 150 mL
5. Leer la absorbancia (A). Cont. R 2 (T): 1 x 150 mL
R 3: 1 x 10 mL
MAGNESIUM
Magnesium Xylidyl
Xylidyl Blue. Colorimetric
Quantitative determination of magnesium Blank Standard Sample

IVD R (mL) 1,0 1,0 1,0
Standard(Note 1,3,4) (L) -- 10 --
Store at 2-8ºC Sample (L) -- -- 10
4. Mix and incubate for 5 min at room temperature or 3 min a 37ºC.
5. Read the absorbance (A) of the samples and calibrator, against the
Magnesium forms a coloured complex when reacts with Magon
Blank. The colour is stable for at least 30 minutes.
sulfonate in alkaline solution.
The intensity of the color formed is proportional to the magnesium CALCULATIONS
concentration in the sample1. (A) Sample  (A)Blank
x 2 (Standard conc.) = mg/dL magnesium de in the sample
(A) S tan dard  (A)Blank
Magnesium is the second more abundant intracellular cation of the Conversion factors:
human body after potassium, being essential in great number of mg/dL x 0,412 = mmol/L
enzymatic and metabolic processes. 0,5 mmol/L = 1,0 mEq/L = 1,22 mg/dL = 12,2 mg/L1.
Is a cofactor of all the enzymatic reactions that involve the ATP and QUALITY CONTROL
comprises of the membrane that maintains the electrical excitability of Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
the muscular and nervous cells. SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210).
A low magnesium level is found in malabsortion syndrome, diuretic or If control values are found outside the defined range, check the instrument,
aminoglucoside therapy; hyperparathyroidism or diabetic acidosis. reagents and calibrator for problems.
Elevated concentration of magnesium is found in uremia, chronic Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective
renal failure, glomerulonephritis, Addisons’s disease or intensive anti actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
acid therapy1,4,5.
REFERENCE VALUES1
Serum or plasma:
integrate clinical and other laboratory data.
1,6 – 2,5 mg/dL  0,66 – 1,03 mmol/L
Urine:
REAGENTS
24 – 244 mg/24 h  2 – 21 mEq/L/24 h
Xylidyl Blue 0,1 mmol/L
R These values are for orientation purpose; each laboratory should establish
Thioglycolic acid 0,7 mmol/L
its own reference range.
DMSO 3000 mmol/L
MAGNESIUM CAL Magnesium aqueous primary standard 2 mg/dL PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Measuring range: From detection limit of 0,0052 mg/dL to linearity limit of 6
PRECAUTIONS mg/dL. If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample
Corrosive (C): R35: Causes severe burns. 1/2 with NaCl 9 g/L and multiply the result by 2.
Precision:
S26: In case of contact with eyes, rinse immediately with plenty of
water and seek medical advice. Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
Mean (mg/dL) 1,99 3,55 1,98 3,41
PREPARATION SD 0,03 0,04 0,09 0,15
The reagent and standard are ready to use. CV (%) 1,68 1,14 4,55 4,42
Sensitivity: 1 mg/dL = 0,5536 (A).
STORAGE AND STABILITY Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
All the components of the kit are stable until the expiration date on the systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
The results obtained were the following:
label when stored tightly closed at 2-8ºC protected from light and
Correlation coefficient (r): 0,92276
contaminations prevented during their use.
Regression equation: y=1,027x + 0,102
Do not use reagents over the expiration date. The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
Signs of reagent deterioration:
 Presence of particles, color change and turbidity. INTERFERENCES
 Blank absorbance (A) at 546  1,8. Hemolysis and anticoagulants other than heparin1.
A list of drugs and other interfering substances with magnesium
ADDITIONAL EQUIPMENT determination has been reported by Young et. al2.
 Spectrophotometer or colorimeter measuring at 546 nm. NOTES
 Matched cuvettes 1,0 cm light path. 1. MAGNESIUM CAL: Proceed carefully with this product because due its
 General laboratory equipment (Note 2). nature it can get contaminated easily.
2. It is recommended use disposable material to avoid magnesium
SAMPLES contamination. If glassware is used the material should be scrupulously
 Serum, heparinised plasma1: clean with H2SO4 - K2Cr2O7 and then thoroughly rinsed with distilled water
Free of hemolysis and separated from cells as rapidly as possible. and dried before use.
Do not use oxalates or EDTA as anticoagulant. 3. Calibration with the aqueous standard may cause a systematic error in
Stability: 7 days at 2-8ºC. automatic procedures. It is recommended to use a serum Calibrator.
4. Use clean disposable pipette tips for its dispensation.
 Urine1:
5. SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
Should be acidified to pH 1 with HCl.
If urine is cloudy; warm the specimen to 60ºC for 10 min. to BIBLIOGRAPHY
dissolve precipitates. 1. Farrell E C. Magnesium. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St
Dilute the sample 1/10 with distilled water and multiply the result by Louis. Toronto. Princeton 1984; 1065-1069.
10. Stability: 3 days at 2-8ºC 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 546 nm PACKAGING
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . 1 cm light path Ref: 1001285 R: 2 x 150 mL, CAL: 1 x 5 mL
Temperature: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC Ref: 1001286 Cont. R: 2 x 50 mL, CAL: 1 x 2 mL
2. Adjust the instrument to zero with distilled water.
MAGNESIUM
Magnesio Xilidil
Azul de Xilidil. Colorimétrico
Determinación cuantitativa de magnesio 4. Mezclar e incubar 5 min a temperatura ambiente o 3 minutos a 37ºC.
IVD 5. Leer la absorbancia (A) del calibrador y la muestra, frente al Blanco
Conservar a 2-8ºC de reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.
PRINCIPIO DEL MÉTODO CÁLCULOS

El magnesio forma un complejo coloreado al reaccionar con Magon (A) Muestra  (A)Blanco x 2 (Conc. Patrón) = mg/dL de magnesio en la muestra
sulfonado en solución alcalina. (A) Patrón  (A)Blanco
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de
magnesio en la muestra ensayada1. Factores de conversión:
mg/dL x 0,412= mmol/L
SIGNIFICADO CLÍNICO 0,5 mmol/L = 1.0 mEq/L = 1,22 mg/dL = 12,2 mg/L1.
El magnesio, es el segundo catión intracelular más abundante en el
organismo humano después del potasio, siendo esencial en gran CONTROL DE CALIDAD
número de procesos enzimáticos y metabólicos. Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
Es un cofactor en todas las reacciones enzimáticas que involucran al SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
ATP y forma parte de la membrana que mantiene la excitabilidad Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar
eléctrica de las células musculares y nerviosas. el instrumento, los reactivos y el calibrador.
Principales causas de déficit de magnesio son mala absorción Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
intestinal, administración de diuréticos o aminoglucósidos, correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las
hiperparatiroidismo o acidosis diabética. tolerancias.
Niveles altos de magnesio se hallan en la uremia, fallo renal,
glomerulonefritis, enfermedad de Addison o terapia intensiva con
Suero o plasma:
antiácidos1,4,5.
1,6 – 2,5 mg/dL  0,66 – 1,03 mmol/L
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los
Orina:
datos clínicos y de laboratorio.
24-244 mg/24 horas  2-21 mEq/L/24 horas
REACTIVOS
Azul de Xilidil 0,1 mmol/L Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
R establezca sus propios valores de referencia.
Ácido Tioglicólico 0,7 mmol/L
DMSO 3000 mmol/L
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
MAGNESIUM CAL Patrón primario acuoso de Magnesio 2 mg/dL
Rango de medida: Desde el limite de detección de 0,0052 mg/dL hasta el
PRECAUCIONES limite de linealidad de 6 mg/dL.
Corrosivo (C): R35: Provoca quemaduras graves. Si la concentración de la muestra es superior al limite de linealidad, diluir
S26: En caso de contacto con los ojos, lávense inmediata y 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
abundantemente con agua y acudir a un médico. Precisión:
Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
PREPARACIÓN Media (mg/dL) 1,99 3,55 1,98 3,41
El reactivo y el patrón están listos para su uso. SD 0,03 0,04 0,09 0,15
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD CV (%) 1,68 1,14 4,55 4,42
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,5536 (A).
caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los Exactitud: Los reactivos de SPINREACT (y) no muestran diferencias
viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos
contaminación. comerciales (x).
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Los resultados obtenidos fueron los siguientes:
Indicadores de deterioro de los reactivos: Coeficiente de correlación (r): 0,92276
 Presencia de partículas, cambio de color y turbidez. Ecuación de la recta de regresión: y=1,027x + 0,102
 Absorbancia (A) del Blanco a 546 nm  1,8. Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
MATERIAL ADICIONAL INTERFERENCIAS

 Espectrofotómetro ó analizador para lecturas a 546 nm. Hemólisis. Los anticoagulantes a excepción de la heparina1.
 Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la
 Equipamiento habitual de laboratorio(Nota 2). determinación del magnesio2,3.
NOTAS
MUESTRAS 1. MAGNESIUM CAL: Debido a la naturaleza del producto, es aconsejable
 Suero o plasma heparinizado1: tratarlo con sumo cuidado ya que se puede contaminar con facilidad.
Libre de hemólisis. Separado lo antes posible de los hematíes. 2. Se recomienda utilizar material de plástico de un solo uso para evitar
No usar oxalato o EDTA como anticoagulante. contaminaciones de magnesio. En caso de utilizar material de vidrio deberá
Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC. lavarse con una solución de H2SO4 - K2Cr2O7, enjuagar varias veces con
 Orina1: agua destilada y secar antes de su uso.
Ajustar a pH 1 con ClH. Si la muestra es turbia, calentarla a 60ºC 3. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores sistemáticos
10 min. para disolver los precipitados. en métodos automáticos. Se recomienda utilizar calibradores séricos.
Diluir la muestra 1/10 con agua destilada y mezclar. Multiplicar el 4. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
resultado por 10 (factor de dilución). 5. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de
Estabilidad de la muestra: 3 días a 2-8ºC. este reactivo en distintos analizadores.
PROCEDIMIENTO BIBLIOGRAFÍA
1. Farrell E C. Magnesium. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
1. Condiciones del ensayo: Toronto. Princeton 1984; 1065-1069.
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 546 nm 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta: PRESENTACIÓN
Blanco Patrón Muestra Ref: 1001285 R: 2 x 150 mL, CAL: 1 x 5 mL
R (mL) 1,0 1,0 1,0 Ref: 1001286 Cont. R: 2 x 50 mL, CAL: 1 x 2 mL
Patrón (Nota1,3,4) (L) -- 10 --
Muestra (L) -- -- 10
POTASSIUM-d
POTASSIUM
UV Test
Quantitative determination of Potassium Standard 20 μL ----
IVD Sample ---- 20 μL
Store at 2-8ºC 4. Mix and read the absorbance after 120 s (A1) and 240 s (A2).
5. Calculate: A= A2 – A1.
INTENDED USE
For the quantitative in vitro determination of Potassium in serum CALCULATIONS
and plasma.
( A ) Sample
x Calibrator conc = mmol/L potassium in the sample
PRINCIPLE OF THE METHOD(1) ( A ) Calibrator
Potassium is determined enzymatically via Potassium-dependant
pyruvate kinase activity using phosphoenolpyruvate as substrate.
The pyruvate formed reacts with NADH in the presence of LDH to QUALITY CONTROL
form Lactate and NAD. The corresponding decrease in Control Sera are recommended to monitor the performance of assay
absorbance at 340 nm is proportional to the potassium procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and
concentration. 1002210).
If control values are found outside the defined range, check the instrument,
K+
PEP + ADP Pyruvate + ATP reagent and calibration for problems.
PK Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and
corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
LDH
Pyruvate + NADH + H + Lactate + NAD +
REFERENCE VALUES(2)
CLINICAL SIGNIFICANCE 3.5 – 5.1 mmol/l (13.7 – 19.9 mg/dl)
Potassium measurements are used to monitor electrolyte balance
in the diagnosis and treatment of disease conditions These values are for orientation purpose; each laboratory should
characterised by low or high blood potassium levels. establish its own reference range.
REAGENTS PERFORMANCE CHARACTERISTICS

Tris buffer, pH 8.2 250 mmol/l Linearity: The method is linear to potassium concentrations of 11.2
Cryptand 12 mmol/l mmol/L
PEP 3.3 mmol/l Sensitivity: The minimum detectable concentration of potassium with
R1 an acceptable level of precision was determined as 2.46 mmol/l.
ADP 3.15 mmol/l
Buffer / I-oxoglutarate Precision:
1.2 mmol/l
Enzyme- NADH Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
0.35 mmol/l
Substrate GLDH Mean (mmol/L) 3.37 4.37 6.40 3.17 4.05 6.04
11 mmol/l
PK 1.2 mmol/l SD 0.09 0.14 0.12 0.09 0.07 0.09
CV (%) 2.67 3.23 1.95 2.95 1.67 1.53
R2 Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not
65 U/ml show systematic differences when compared with other commercial
Enzyme/ LDH
Diluent reagent (x).
The results obtained using 77 samples spanning the range 2.51 to 9.99
were the following:
PREPARATION Correlation coefficient (r): 0.99.
R1. Buffer/Enzyme-Substrate Regression equation: y= 0.99x – 0.07
Dissolve the contents of 1 vial of Enzyme-Substrate R1b in a The results of the performance characteristics depend on the analyzer
portion of Buffer R1a; then transfer the entire contents to Buffer used.
R1a, rinsing vial R1b several times.
INTERFERENCES
R2. Enzyme /Diluent
The following analytes were tested up to the following levels and were
Dissolve 1 vial Enzyme R2b in a portion of Diluent R2a; then
found not to interfere:
transfer the entire contents to Diluent R2a, rinsing vial R2b
several times. Intralipid® 750 mg/dl
STORAGE AND STABILITY Bilirubin 25 mg/dl
Triglyceride 1000 mg/dl
R1 is stable for 7 days at 2-8 C.
Haemoglobin 250 mg/dl
R2 is stable for 2 weeks at 2-8 C.
Do not use reagents over the expiration date. NOTES
1. In order to avoid contamination it is recommended to use
ADDITIONAL EQUIPMENT disposable material.
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 340 nm. 2. SPINREACT has instruction sheets for several automatic
- Matched cuvettes 1.0 cm light path. analyzers. Instructions for many of them are available on
- General laboratory equipment (Note 1). request.
SAMPLES BIBLIOGRAPHY
Serum, plasma treated with lithium heparinate. 1. Berry, M. N. et al., (1989) Clin. Chem. 35,817.
2. Tietz, N. W. (1986) Textbook of Clinical Chemistry,
PROCEDURE p. 1841. W.B. Saunders Company, Philadelphia.
PACKAGING
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 340nm
Ref: 1001395 R1a, R1b (Lyo.): 3 x 20 mL,
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 1 cm light path Cont.
Constant temperature . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC R2a, R2b (Lyo.): 3 x 9 mL
2. Adjust the instrument to zero with distilled water.
Standard Sample
R1 720 μL 720 μL
R2 290 μL 290 μL
POTASSIUM-d
POTASIO
UV Test
Determinación cuantitativa de Potasio Estándar Muestra
IVD R1 720 μL 720 μL
Conservar a 2-8ºC R2 290 μL 290 μL
Estándar 20 μL ----
USO PREVISTO
Muestra ---- 20 μL
Para determinación cuantitativa in vitro de Potasio en suero y
4. Mezclar y leer la absorbancia después de 120 s (A1) y 240 s (A2).
plasma.
5. Calcular: A= A2 – A1.
PRINCIPIO DEL METODO(1) CALCULOS
El Potasio se determina enzimáticamente a través de la actividad
de ADP, usando como sustrato fosfoenolpiruvato. El piruvato ( A) Muestra x Conc Calibrador = mmol/L potasio en la muestra
formado reacciona con el NADH en presencia de LDH para
( A) Calibrador
formar Lactato y NAD. El correspondiente descenso de
absorbancia a 340 nm es porporcional a la concentración de
potasio. CONTROL DE CALIDAD
K+ Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control
PEP + ADP Pyruvate + ATP valorados:
PK
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 and 1002210). Si los
LDH valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
Pyruvate + NADH + H + Lactate + NAD + revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y
SIGNIFICADO CLINICO
establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan
Este test se utiliza para controlar el equilibrio electrolítico en el
con las tolerancias.
diagnóstico y tratamiento de enfermedades caracterizadas por
niveles altos o bajos de potasio en sangre.
VALORES DE REFERENCIA(2)
3.5 – 5.1 mmol/l (13.7 – 19.9 mg/dl)
REACTIVOS
Tampón Tris, pH 8.2 250 mmol/l Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
Cryptand 12 mmol/l establezca sus propios valores de referencia.
PEP 3.3 mmol/l
R1 CARACTERISTICAS DEL METODO
ADP 3.15 mmol/l
Tampón / I-oxoglutarato Linealidad: El método es lineal hasta concentraciones de potasio de
1.2 mmol/l
Enzima- NADH 11.2 mmol/L.
0.35 mmol/l
Sustrato GLDH Sensibilidad: La mínima concentración de potasio detectable con un
11 mmol/l nivel de precisión aceptable se determinó a 2.46 mmol/l.
PK 1.2 mmol/l Precisión:
Intraserie (n=20) Interserie(n=20)
R2 Media (mmol/L) 3.37 4.37 6.40 3.17 4.05 6.04
65 U/ml
Enzima/ LDH SD 0.09 0.14 0.12 0.09 0.07 0.09
Diluyente CV (%) 2.67 3.23 1.95 2.95 1.67 1.53
Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias
PREPARACION sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos
R1. Tampón / Enzima-Sustrato comerciales (x).
Disolver el contenido de 1 vial de R1b (enzima-sustrato) con una Los resultados obtenidos con 77 muestras entre 2.51 y 9.99 fueron los
siguientes:
porción de tampón R1a; transferir entonces el contenido total al
Coeficiente de regresión (r): 0.99..
tampón R1a, lavando el vial R1b varias veces.
R2. Enzima/ Diluyente Ecuación de la recta de regresión: y= 0.99x – 0.07
Disolver el contenido de 1 vial de R2b con una porción de Las características del método pueden variar según el analizador
utilizado.
diluyente R2a; transferir entonces el contenido total al diluyente
R2a, lavando el vial R2b varias veces. INTERFERENCIAS
CONSERVACION Y ESTABILIDAD Se encontró que las siguientes sustancias a los siguientes niveles no
interfieren:
R1 es estable 7 días a 2-8ºC.
R2 es estable 2 semanas a 2-8ºC. Intralipid® 750 mg/dl
No usar los reactivos una vez pasada la fecha de Bilirrubina 25 mg/dl
caducidad. Triglicéridos 1000 mg/dl
Hemoglobina 250 mg/dl
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm. NOTAS
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. 1. A fin de evitar contaminaciones se recomienda utilizar material de
- Equipamiento habitual de laboratorio (Nota 1). plástico de un solo uso.
2. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la
MUESTRAS
aplicación de este reactivo en distintos analizadores.
Suero, plasma tratado con heparinato de litio.
BIBLIOGRAFIA
PROCEDIMIENTO 1. Berry, M. N. et al., (1989) Clin. Chem. 35,817.
1. Condiciones del ensayo: 2. Tietz, N. W. (1986) Textbook of Clinical Chemistry,
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 340 nm p. 1841. W.B. Saunders Company, Philadelphia.
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .1 cm paso de luz PRESENTACION
Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37ºC / 15-25ºC
Ref: 1001395 R1a, R1b (Lio.): 3 x 20 mL,
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. Cont.
R2a, R2b (Lio.): 3 x 9 mL
3. Pipetear en la cubeta:
CALCIUM-oC
Calcio
o-Cresolftaleína. Colorimétrico
Determinación cuantitativa de calcio CÁLCULOS

IVD Suero o plasma
( A ) Muestra
Conservar a 2-8ºC x 10 (Conc. Patrón) = mg/dL de calcio en la muestra
( A ) Patrón
PRINCIPIO DEL MÉTODO
La medición del calcio se basa en la formación de un complejo coloreado entre Orina 24 h
el calcio de la muestra y la o-cresolftaleína, en medio alcalino: ( A ) Muestra
x 10 x vol. (dL) orina/24h = mg/24 h de calcio en la muestra
OH + ( A ) Patrón
Ca + o-Cresolftaleína ⎯⎯ ⎯
++
⎯→ Complejo coloreado
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de calcio
1,2,3
presente en la muestra ensayada . Factor de conversión: mg/dL x 0,25= mmol/L.
SIGNIFICADO CLÍNICO CONTROL DE CALIDAD

El calcio es el mineral más abundante e importante del cuerpo humano, el 99 % Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
se halla en los huesos. SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Una disminución de los niveles de albúmina causa una disminución del calcio Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el
en suero. Niveles bajos de calcio pueden atribuirse a hipoparatiroidismo, instrumento, los reactivos y el calibrador.
pseudohipoparatiroidismo, déficit de vitamina D, malnutrición o mala absorción Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
La mayoría de las causas de hipercalcemia son debidas a enfermedades correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
oncológicas, intoxicación por vitamina D, aumento de la retención renal, 1
osteoporosis, sarcosidosis, tirotoxicosis e hiperparatiroidismo1,6,7. VALORES DE REFERENCIA
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos Suero o plasma:
clínicos y de laboratorio. Adultos 8,5-10,5 mg /dL ≅ 2,1-2,6 mmol/L
Niños 10-12 mg/dL ≅ 2,5-3 mmol/L
REACTIVOS Recién nacidos 8-13 mg/dL ≅ 2-3,2 mmol/L
R1 Orina:
Etanolamina 500 mmol/L
Tampón Adultos 50-300 mg/24 h ≅ 1,25-7,5 mmol/24 h
R2 o-Cresolftaleína 0,62 mmol/L Niños 80-160 mg/24 h ≅ 2-4 mmol/24 h
Cromógeno 8-Hidroxiquinoleína 69 mmol/L Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
CALCIUM CAL Patrón primario acuoso de Calcio 10 mg/dL propios valores de referencia.
PREPARACIÓN CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Los reactivos y el patrón están listos para su uso. Rango de medida: Desde el límite de detección de 0,17 mg/dL hasta el límite
Si se desea preparar monoreactivo, mezclar según la proporción: 50 vol. de R1 de linealidad de 15 mg/dL.
y 1 vol. de R2. Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/2 con
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad Precisión:
indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC,
protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la
Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
fecha indicada. Media (mg/dL) 8,62 14,9 8,02 14,9
La estabilidad del monoreactivo es de 5 días a 2-8ºC. SD 0,06 0,12 0,14 0,28
CALCIUM CAL CV (%) 0,68 0,81 1,76 1,89
Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-
8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,043 A.
Indicadores de deterioro de los reactivos: Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
- Presencia de partículas y turbidez. significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
- Absorbancia (A) del Blanco a 570 nm ≥ 0,2. Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
Coeficiente de correlación (r): 0,99.
MATERIAL ADICIONAL Ecuación de la recta de regresión: y= 0,97x + 0,26
- Espectrofotómetro o analizador con cubeta para lecturas a 570 nm. Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
- Equipamiento habitual de laboratorio(Nota 1,2). INTERFERENCIAS
Triglicéridos <1,25 g/L, no interfieren1. Se han descrito varias drogas y otras
MUESTRAS substancias que interfieren en la determinación del calcio4,5.
1
- Suero o plasma : Separado lo antes posible de los hematíes. No usar oxalato
o EDTA como anticoagulantes ya que interfieren en la determinación del NOTAS
calcio. 1. Se recomienda utilizar material de plástico de un solo uso. Si se usa material de
- Orina1: Efectuar la recogida de orina de 24 horas en recipientes libres de
calcio. Antes de la recogida adicionar al contenedor 10 mL de ácido nítrico al vidrio deberá lavarse con ácido nítrico diluido con agua (1/1), enjuagar varias
50% (v/v). Anotar el volumen. veces con agua destilada y secar antes de su uso.
Diluir la orina 1/2 en agua destilada para su análisis. Mezclar. Multiplicar el 2. La mayoría de detergentes destinados a uso del laboratorio contienen agentes
resultado obtenido por 2 (factor de dilución). quelantes. Trazas de los mismos, como consecuencia de un mal aclarado del
Estabilidad de la muestra: El calcio es estable 10 días a 2-8ºC. material, invalida la determinación.
PROCEDIMIENTO 3. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores sistemáticos en
1. Condiciones del ensayo: métodos automáticos. En este caso, se recomienda utilizar calibradores séricos.
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 570 nm (550-590) 4. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
Cubeta:. . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz 5. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..37ºC / 15-25ºC
reactivo en distintos analizadores.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta: BIBLIOGRAFÍA
Blanco Patrón Muestra 1. Farell E C. Calcium. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Toronto. Princeton 1984; 1051-1255 and 418.
R 1 (mL) 2,0 2,0 2,0
2. Kessler G. et al. Clin Chem 1964; 10 (8); 686-706.
R 2 (gotas) 1 1 1 3. Connerty H. V. et al. Am J Clin Path 1996; 45 (3); 200-296.
Patrón (Nota 3,4) -- 20 -- 4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Muestra (µL) -- -- 20 5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001.
6. Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed. AACC 1999.
4. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC / 15-25ºC. 7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. AACC 1995.
5. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al Blanco de
reactivo. El color es estable como mínimo 40 minutos. PRESENTACIÓN
Ref:1001060 Cont. 2 x 150 mL
IMPORTADORES EXCLUSIVOS : LAB CENTER DE MEXICO S.A. DE C.V.

Colina de las Termas #35 Fracc. Boulevares Naucalpan Edo. de México C.P. 53140
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CHOLESTEROL -LQ
Cholesterol
CHOD-POD. Liquid
Quantitative determination of cholesterol 5. Read the absorbance (A) of the samples and calibrator, against the
IVD Blank. The colour is stable for at least 60 minutes.
Store at 2-8ºC CALCULATIONS

( A ) Sample
PRINCIPLE OF THE METHOD x 200 (Standard conc.) = mg/dL cholesterol in the sample
( A ) S tan dard
The cholesterol present in the sample originates a coloured
complex, according to the following reactions: Conversion factor: mg/dL x 0.0258= mmol/L.
CHE
Cholesterol esters + H2 O Cholesterol + fatty acids
QUALITY CONTROL
CHOD
Cholesterol + O2 4-Cholestenona + H2O2 Control sera are recommended to monitor the performance of assay
POD procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and
2 H2O2 + Phenol + 4-AP Quinonimine + 4H2O 1002210).
The intensity of the color formed is proportional to the cholesterol If control values are found outside the defined range, check the
concentration in the sample1,2. instrument, reagent and calibration for problems.
Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and
CLINICAL SIGNIFICANCE corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
Cholesterol is a fat-like substance called a lipid that is found in all
body cells. The liver makes all of the cholesterol the body needs REFERENCE VALUES
to form cell membranes and to make certain hormones. Risk evaluation5,6:
The determination of serum cholesterol is one of the important Less than 200 mg/dL Normal
tools in the diagnosis an classification of lipemia. 200-239 mg/dL Borderline
High blood cholesterol is one of the major risk factors for heart 240 mg/dL and above High
disease5,6. These values are for orientation purpose; each laboratory should
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it establish its own reference range.
should integrate clinical and other laboratory data.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
REAGENTS
Measuring range: From detection limit 0.46 to linearity limit 600 mg/dL.
PIPES pH 6.9 90 mmol/L
If the concentration is greater than linearity limit dilute 1/2 the sample
Phenol 26 mmol/L
with ClNa 9 g/L and multiply the result by 2.
Cholesterol esterase (CHE) 1000 U/L
R Precision:
Cholesterol oxidase (CHOD) 300 U/L
Peroxidase (POD) 650 U/L Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
4 – Aminophenazone (4-AP) 0.4 mmol/L Mean (mg/dL) 93.95 200 92.2 195
Cholesterol aqueous primary standard SD 0.76 1.22 1.88 5.97
CHOLESTEROL CAL
200 mg/dL CV (%) 0.80 0.61 2.04 3.05
PREPARATION Sensitivity: 1 mg/dL = 0.0017 (A).
All the reagents are ready to use. Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents did not show
systematic differences when compared with other commercial reagent.
STORAGE AND STABILITY The results of the performance characteristics depend on the analyzer
All the components of the kit are stable until the expiration date on used.
the label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light
and contaminations prevented during their use. INTERFERENCES
Do not use reagents over the expiration date. No interferences were observed to hemoglobin up to 5 g/L and bilirubin
Signs of reagent deterioration: up to 10 mg/dL1,2.
- Presence of particles and turbidity. A list of drugs and other interfering substances with cholesterol
- Blank absorbance (A) at 505 nm 0.26. determination has been reported by Young et. al3,4.
ADDITIONAL EQUIPMENT NOTES
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 505 nm. 1. CHOLESTEROL CAL: Proceed carefully with this product because due
- Matched cuvettes 1.0 cm light path. its nature it can get contamined easily.
- General laboratory equipment. 2. LCF (Lipid Clearing Factor) is integrated in the reagent.
3. Calibration with the aqueous standard may cause a systematic error in
SAMPLES automatic procedures. In these cases, it is recommended to use a
Serum or plasma1,2: Stability of the sample 7 days at 2-8ºC or serum Calibrator.
freezing at –20ºC will keep samples stable for 3 months. 4. Use clean disposable pipette tips for its dispensation.
5. SPINREACT has instruction sheets for several automatic
PROCEDURE analyzers. Instructions for many of them are available on request.
BIBLIOGRAPHY
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . .. . . 505 nm (500-550) 1. Naito H.K. Cholesterol. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 1 cm light path Toronto. Princeton 1984; 1194-11206 and 437.
Temperature . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .37ºC /15-25ºC 2. Meiattini F. et al. The 4-hydroxybenzoate/4-aminophenazone Chromogenic System.
2. Adjust the instrument to zero with distilled water. Clin Chem 1978; 24 (12): 2161-2165.
3. Pipette into a cuvette: 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Blank Standard Sample 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
R (mL) 1.0 1.0 1.0
(Note 1-2) PACKAGING
Standard ( L) -- 10 --
Ref: 41020 R:2 x 50 mL, CAL: 1 x 2 mL
Sample ( L) -- -- 10 Cont.
Ref: 41022 . R: 2 x 100 mL, CAL: 1 x 2 mL
Ref. 41021 R: 2 x 250 mL, CAL: 1 x 5 mL
4. Mix and incubate for 5 min at 37ºC or 10 min at 15-25ºC.
Ref. 41019 R:1 x 1000 mL, CAL: 1 x 5 mL
BSIS48-I 23/06/11 SPINREACT,S.A./S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
CHOLESTEROL -LQ
Colesterol
CHOD-POD. Líquido
Determinación cuantitativa de colesterol

CÁLCULOS
IVD
( A ) Muestra
Conservar a 2-8ºC x 200 (Conc. Patrón) = mg/dL de colesterol en la muestra
( A ) Patrón
PRINCIPIO DEL MÉTODO Factor de conversión: mg/dL x 0,0258= mmol/L.
El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado
según la reacción siguiente: CONTROL DE CALIDAD
CHE Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control
Ésteres colesterol + H2O Colesterol + Ácidos grasos
valorados:
CHOD
Colesterol + O2 4-Colestenona + H2O2 SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
POD Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se
2 H2O2 +Fenol + 4-Aminofenazona Quinonimina + 4H2O
debe revisar los instrumentos, los reactivos y la calibración.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y
1,2
colesterol presente en la muestra ensayada . establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan
con las tolerancias.
SIGNIFICADO CLÍNICO
El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las células del
VALORES DE REFERENCIA
organismo. El hígado produce naturalmente todo el colesterol que
necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas Evaluación del riesgo5,6:
hormonas. La determinación del colesterol es una de las Menos de 200 mg/dL Normal
herramientas más importantes para el diagnóstico y clasificación de 200-239 mg/dL Moderado
las lipemias. El aumento del nivel de colesterol es uno de los 240 o más Alto
5,6
principales factores de riesgo cardiovascular . Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los establezca sus propios valores de referencia.
datos clínicos y de laboratorio.
CARÁCTERÍSTICAS DEL MÉTODO
REACTIVOS Rango de medida: Desde el límite de detección 0,46 mg/dL hasta el
PIPES pH 6.9 90 mmol/L límite de linealidad 600 mg/dL.
Fenol 26 mmol/L Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad,
Colesterol esterasa (CHE) 1000 U/L diluir 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
R
Colesterol oxidasa (CHOD) 300 U/L Precisión:
Peroxidasa (POD) 650 U/L Intraserie (n=20) Ínterserie (n=20)
4 - Aminofenazona (4-AF) 0,4 mmol/L
Media (mg/dL) 93,95 200 92,2 195
Patrón primario acuoso de Colesterol
CHOLESTEROL CAL SD (mg/dL) 0,76 1,22 1,88 5,97
200 mg/dL
CV (%) 0,80 0,61 2,04 3,05
PREPARACIÓN Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,0017 (A).
Todos los reactivos están listos para su uso. Exactitud: Los reactivos SPINREACT no muestran diferencias
sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD comerciales.
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de Las características del método pueden variar según el analizador
caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen utilizado.
los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su
contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. INTERFERENCIAS
Indicadores de deterioro de los reactivos: No se han observado interferencias de hemoglobina hasta 5 g/L y
- Presencia de partículas y turbidez. bilirrubina hasta 10 mg/dL1,2. Se han descrito varias drogas y otras
- Absorbancias (A) del Blanco a 505 nm 0,26. substancias que interfieren en la determinación del Colesterol3,4.
MATERIAL ADICIONAL NOTAS

1. CHOLESTEROL CAL: Debido a la naturaleza del producto, es
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 505 nm.
aconsejable tratarlo con sumo cuidado ya que se puede contaminar con
facilidad.
- Equipamiento habitual de laboratorio. 2. LCF(Lipid Clearing Factor) está integrado en el reactivo.
3. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores
MUESTRAS sistemáticos en métodos automáticos. En este caso, se recomienda
Suero o plasma1,2. Estabilidad de la muestra 7 días a 2-8ºC y 3 utilizar calibradores séricos.
meses si se mantiene la muestra congelada (-20ºC). 4. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
5. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación
PROCEDIMIENTO de este reactivo en distintos analizadores.
1. Condiciones del ensayo:
BIBLIOGRAFÍA
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 505 nm (500-550). 1. Naito H.K. Cholesterol. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz Toronto. Princeton 1984; 1194-11206 and 437.
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37ºC /15-25ºC 2. Meiattini F. et al. The 4-hydroxybenzoate/4-aminophenazone Chromogenic
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. System. Clin Chem 1978; 24 (12): 2161-2165.
3. Pipetear en una cubeta: 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Blanco Patrón Muestra 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
R (mL) 1,0 1,0 1,0 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
(Nota1-2)
Patrón ( L) -- 10 --
PRESENTACIÓN
Muestra ( L) -- -- 10
Ref: 41020 R:2 x 50 mL, CAL: 1 x 2 mL
4. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC ó 10 min a 15-25ºC. Cont.
Ref: 41022 . R: 2 x 100 mL, CAL: 1 x 2 mL
5. Leer la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente al
Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 60 Ref. 41021 R: 2 x 250 mL, CAL: 1 x 5 mL
minutos. Ref. 41019 R:1 x 1000 mL, CAL: 1 x 5 mL
BSIS48-E 23/06/11 SPINREACT, S.A/S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-171716 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
TRIGLYCERIDES -LQ
Triglycerides
GPO-POD. Liquid
Quantitative determination of triglycerides SPIN640 APPLICATION

IVD
TEST INFORMATION REAGENT VOLUME
Store at 2-8ºC Nº ** Vol. R1 300
Test TRIG Vol. R2
PRINCIPLE OF THE METHOD Full Name Triglycerides Vol. R3
Sample triglycerides incubated with lipoproteinlipase (LPL), Standard nº 1 Vol. R4
liberate glycerol and free fatty acids. Glycerol is converted to SAMPLE VOLUME RESULT SETUP
glycerol-3-phosphate (G3P) and adenosine-5-diphosphate (ADP) Vol. Sample Stand. 3 Decimal 1 Slope 1
by glycerol kinase and ATP. Glycerol-3-phosphate (G3P) is then Vol. Sample Increas. Unit mg/dL Inter. 0
converted by glycerol phosphate dehydrogenase (GPO) to Vol. Sample Dec
dihydroxyacetone phosphate (DAP) and hydrogen peroxide
REACTION PARAMETERS
(H2O2).
Reac. Type End Point Direction Increase
In the last reaction, hydrogen peroxide (H2O2) reacts with 4-
Pri. Wave. 505 Reagent Blank 10-11
aminophenazone (4-AP) and p-chlorophenol in presence of
Sec. Wave. React. Time 46-47
peroxidase (POD) to give a red colored dye:
LPL JUDGEMENT CRITERIA
Triglycerides + H2O Glycerol + free fatty acids Absorbance -30000/30000 Lin. Range 1-1000
Glycerol kinase Incre.Test Lin. Limit
Glycerol + ATP G3P+ ADP
Decre.Test Subs. Limit
GPO
G3P + O2 DAP + H2O2
POD Prozone (Rate-Antigen) Q1
H2O2 + 4-AP + p-Chlorophenol Quinone + H2O PC Q2
ABS Q3
The intensity of the color formed is proportional to the triglycerides Q4
concentration in the sample1,2,3.
The Calibration is stable until 31 days. After this period the Calibration
CLINICAL SIGNIFICANCE must be performed again in order to obtain good results.
Triglycerides are fats that provide energy for the cell.
Like cholesterol, they are delivered to the body’s cells by QUALITY CONTROL
lipoproteins in the blood. A diet with a lot of saturated fats or Control sera and calibrators are recommended to monitor the
carbohydrates will raise the triglyceride levels. The increases in performance of assay procedures: SPINTROL H Calibrator, SPINTROL
H Normal and Pathologic (Ref. 1002011, 1002120 and 1002210).
serum triglycerides are relatively non-specific. For example liver
dysfunction resulting from hepatitis, extra hepatic biliary If control values are found outside the defined range, check the
obstruction or cirrhosis, diabetes mellitus is associated with the instrument, reagents and technique for problems.
increase3,6,7. Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
SAMPLES
REAGENTS Serum or plasma1.
Stability of the sample: Triglycerides are stable for 5 days at 2-8ºC .
GOOD pH 6.3 50 mmol/L
p-Chlorophenol 2 mmol/L
REFERENCE VALUES
Lipoprotein lipase (LPL) 150000 U/L
Men 40 – 160 mg/dL
Glycerol kinase (GK) 500 U/L
R Women 35 – 135 mg/dL
Glycerol-3-oxidasa (GPO) 3500 U/L
These values are for orientation purpose; each laboratory should
Peroxidase (POD) 440 U/L
establish its own reference range.
4 – Aminophenazone (4-AP) 0.1 mmol/L
ATP 0.1 mmol/L
NOTES
1. LCF (Lipid Clearing Factor) is integrated in the reagent.
PREPARATION
2. Calibration with the aqueous Standard may cause a systematic
The reagent is ready to use.
error in automatic procedures. In these cases, it is recommended
to use a serum Calibrator.
All the components of the kit are stable until the expiration date on
the label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light
BIBLIOGRAPHY
and contaminations prevented during their use. 1. Buccolo G et al. Quantitative determination of serum triglycerides by use of
Do not use reagents over the expiration date. enzimes. Clin Chem 1973; 19 (5): 476-482.
2. Fossati P et al. Clin. Chem 1982; 28(10): 2077-2080.
Signs of reagent deterioration: 3. Kaplan A et al. Tryglycerides. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
- Presence of particles and turbidity. Toronto. Princeton 1984; 437 and Lipids 1194-1206.
- Blank absorbance (A) at 505 nm > 0.40. 4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
1995.
ADDITIONAL EQUIPMENT
- SPIN640 Autoanalyzer. 7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
- General laboratory equipment.
PACKAGING
BARCODED REAGENTS LOAD MUST BE PRECEDED OF A
SPINREACT “DATABASE” COPY INTO THE ANALYZER Ref: MD41031 Cont. R: 6 x 40 mL
SOFTWARE. IT IS AVAILABLE UNDER REQUEST TO
SPINREACT.
MDBSIS49-I 03/02/12 SPINREACT,S.A./S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
TRIGLYCERIDES -LQ
Triglicéridos
GPO-POD. Líquido
Determinación cuantitativa de triglicéridos APLICACIÓN AL SPIN640
IVD TEST INFORMATION REAGENT VOLUME
Nº ** Vol. R1 300
Conservar a 2-8ºC
Test TRIG Vol. R2
Full Name Triglycerides Vol. R3
PRINCIPIO DEL MÉTODO
Standard nº 1 Vol. R4
Los triglicéridos incubados con lipoproteinlipasa (LPL) liberan
glicerol y ácidos grasos libres. El glicerol es fosforilado por SAMPLE VOLUME RESULT SETUP
glicerolfosfato deshidrogenasa (GPO) y ATP en presencia de Vol. Sample Stand. 3 Decimal 1 Slope 1
glicerol quinasa (GK) para producir glicerol-3-fosfato (G3P) y Vol. Sample Increas. Unit mg/dL Inter. 0
adenosina-5-difosfato (ADP). El G3P es entonces convertido a Vol. Sample Dec
dihidroxiacetona fosfato (DAP) y peróxido de hidrogeno (H2O2) REACTION PARAMETERS
por GPO. Reac. Type End Point Direction Increase
Al final, el peróxido de hidrogeno (H2O2) reacciona con 4- Pri. Wave. 505 Reagent Blank 10-11
aminofenazona (4-AF) y p-clorofenol, reacción catalizada por la Sec. Wave. React. Time 46-47
peroxidasa (POD) dando una coloración roja:
LPL JUDGEMENT CRITERIA
Triglicéridos + H2O Glicerol + Ácidos grasos libres Absorbance -30000/30000 Lin. Range 1-1000
Glicerol quinasa Incre.Test Lin. Limit
Glicerol + ATP G3P+ ADP
GPO Decre.Test Subs. Limit
G3P + O2 DAP + H2O2
POD Prozone (Rate-Antigen) Q1
H2O2 + 4-AF + p-Clorofenol Quinona + H2O
PC Q2
La intensidad del color formado es proporcional a la ABS Q3
concentración de triglicéridos presentes en la muestra Q4
ensayada1,2,3. La Calibración es estable hasta 31 días. Pasado este período es
necesario solicitar de nuevo la Calibración para la obtención de buenos
SIGNIFICADO CLÍNICO resultados.
Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula.
Al igual que el colesterol, son transportados a las células del CONTROL DE CALIDAD
organismo por las lipoproteínas en la sangre. Es conveniente calibrar y analizar junto con las muestras sueros
Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar control y calibradores valorados: SPINTROL H Calibrador, SPINTROL
los niveles de triglicéridos. H Normal y Patológico (Ref. 1002011, 1002120 y 1002210).
Su aumento es relativamente inespecífico. Diversas dolencias, Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia,
como ciertas disfunciones hepáticas (cirrosis, hepatitis, revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador.
obstrucción biliar) o diabetes mellitus, pueden estar asociadas Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y
con su elevación3,6,7,. establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos con las tolerancias.
los datos clínicos y de laboratorio.
MUESTRAS
REACTIVOS Suero y plasma1.
GOOD pH 6.3 50 mmol/L Estabilidad de la muestra: 5 días a 2-8ºC.
p-Clorofenol 2 mmol/L
Lipoprotein lipasa (LPL) 150000U/L VALORES DE REFERENCIA
Glicerol quinasa (GK) 500 U/L Hombres: 40 – 160 mg/dL
R
Glicerol-3-oxidasa (GPO) 3500 U/L Mujeres: 35 – 135 mg/dL
Peroxidasa (POD) 440 U/L Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
4 - Aminofenazona (4-AF) 0,1 mmol/L establezca sus propios valores de referencia.
ATP 0,1 mmol/L
NOTAS
PREPARACIÓN 1. LCF(Lipid Clearing Factor) está integrado en el reactivo.
El reactivo está listo para su uso. 2. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores
sistemáticos en métodos automáticos. En este caso, se
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD recomienda utilizar calibradores séricos.
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de 3. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen
los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su BIBLIOGRAFÍA
contaminación. 1. Buccolo G et al. Quantitative determination of serum triglycerides by use of
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. enzimes. Clin Chem 1973; 19 (5): 476-482.
2. Fossati P et al. Clin. Chem 1982; 28(10): 2077-2080.
Deterioro de los reactivos 3. Kaplan A et al. Tryglycerides. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
- Presencia de partículas y turbidez. Toronto. Princeton 1984; 437 and Lipids 1194-1206.
4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
- Absorbancia del blanco (A) a 505 nm > 0.40.
1995.
MATERIAL ADICIONAL 6. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
- Autoanalizador SPIN640 7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
PRESENTACIÓN
PARA LA CARGA DE REACTIVOS MEDIANTE EL CÓDIGO DE
Ref: MD41031 Cont. R: 6 x 40 mL
BARRAS SE DEBE PRECARGAR LA “BASE DE DATOS”
DISPONIBLE BAJO SOLICITUD A SPINREACT.
MDBSIS49-E 03/02/12 SPINREACT,S.A./S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
BILIRUBIN T- DMSO
Bilirubin Total
DMSO. Colorimetric
Quantitative determination of bilirubin MINDRAY BS-120 / BS-200E APPLICATION

IVD
PARAMETERS
Store at 2-8ºC Test BIL / BIL R1 250 / 250
Nº ** R2 *
Full Name BIL / BIL Sample volume 25 / 25
Bilirubin is converted to colored azobilirubin by diazotized
sulfanilic acid and measured photometrically. Of the two fractions Standard Nº R1 Blank
presents in serum, bilirubin-glucuromide and free bilirubin loosely Reac. Type Endpoint / Endpoint Mixed Rgt Blank
bound to albumin, only the former reacts directly in aqueous
Pri. Wavelength 546 / 546 Linearity Range 0.1 mg/dL 15.0 mg/dL
solution (bilirubin direct), while free bilirubin requires solubilization
with dimethylsulphoxide (DMSO) to react (bilirubin indirect). In the Sec. Wavelength Linearity Limit *
determination of indirect bilirubin the direct is also determined, the Direction Increase / Increase Substrate Limit *
results correspond to total bilirubin. Reac. Time 1_33 / -1_45 Factor *
The intensity of the color formed is proportional to the bilirrubin
concentration in the sample1,2,3. Incuba. Time Prozone check *
Units mg/dL / mg/dL q1 q2
CLINICAL SIGNIFICANCE Precision 0.01 / 0.01 q3 q4
Bilirubin is a breakdown product of hemoglobin.
PC Abs
It is transported from the spleen to the liver and excreted into
bile. CALIBRATION (Cal + Rgt Blk)
Hyperbilirubinemia results from the increase of bilirubin Rule One-point Linear / Two-point Linear
concentrations in plasma.
Sensitivity 1/1
Causes of hyperbilirubinemia:
Total bilirubin: Increase hemolysis, genetic errors, neonatal Replicates 2/2
jaundice, ineffective erythrpoiesis, and drugs. Interval (days) 0/0
Direct bilirubin: Hepatic cholestasis, genetic errors, hepatocellular
Difference Limit
damage1,6,7.
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it SD
should integrate clinical and other laboratory data. Blank Response
Error Limit
REAGENTS
Correlation Coefficient
Sulfanilic acid 30 mmol/L
R1 Hydrochloric acid (HCl) 50 mmol/L Blank parameter must be performed in order to get good results in
Dimethylsulphoxide (DMSO) 7 mol/L CALIB screen from main menu. The blank calibration is stable until 7
days. After this period the blank parameter must be performed again in
R2 Sodium nitrite 29 mmol/L order to validate the calibration.
PRECAUTIONS QUALITY CONTROL

R1/RW: Corrosive (C):R35:Causes severe burns. Control sera are recommended to monitor the performance of assay
S26: In case of contact with eyes, rinse immediately with plenty of procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and
water and seek medical advice. 1002210).
If control values are found outside the defined range, check the
PREPARATION instrument, reagents and calibrator for problems.
Prepare the monoreagent mixing 30 volums of R1 with 1 volum of Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and
R2.. Mix gently to dissolve the contents and stabilize the working corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
reagent at room temperature for 30 minutes.. The working
reagent is stable 24 hours at room temperature and 1 week at 2- REFERENCE VALUES1
8ºC. Bilirubin Total Up to 1.10 mg/dL  Up to 18.81 mol/L
STORAGE AND STABILITY establish its own reference range.
the label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light BIBLIOGRAPHY
and contaminations prevented during their use. Do not use 1. Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
reagents over the expiration date. Princeton 1984; 1238-1241. 436 and 650.
Signs of reagent deterioration: 2. Malloy H T. et al. The determination of bilirubin with the photoelectric
- Presence of particles and turbidity. colorimeter. J. Biol Chem 1937; 112, 2; 481-491.
- Color development in R 2. 3. Martinek R. Improved micro-method for determination of serum bilirubin.
Clin Chim 1966: Acta 13: 61-170.
ADDITIONAL EQUIPMENT 1995.
- MINDRAY BS-120 / BS-200E Autoanalyser. 5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
- General laboratory equipment. 6. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
SAMPLES
Serum or plasma, free of hemolysis1. Protect samples from direct PACKAGING
light. Ref: MI1001042 R 1: 5 x 30 mL
Cont.
Stability: Bilirubin is stable at 2-8ºC for 4 days and 2 months at –
R 2: 1 x 10 mL
20ºC.
MIBSIS04-I 17/01/13 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
BILIRUBIN T- DMSO
Bilirrubina Total
DMSO. Colorimétrico
Determinación cuantitativa de bilirrubina APLICACIÓN AL MINDRAY BS-120 / BS-200E

IVD
PARAMETROS
Conservar a 2-8ºC Nombre Abrev BIL / BIL R1 250 / 250
Numero ** R2 *
PRINCIPIO DEL METODO
Nombre BIL / BIL Volumen muestra 25 / 25
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido
sulfanílico diazotado midiéndose fotometricamente. De las dos Num standard Blanco R1
fracciones presentes en suero, bilirrubin-glucurónido y bilirrubina Modo P. Final / P. Final Blanco mezcla reactivo
libre ligada a la albúmina, solo la primera reacciona en medio
Long onda primaria 546 / 546 Rango linealidad 0.1 mg/dL 15.0 mg/dL
acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda la
solubilización con dimetilsulfóxido (DMSO) para que reaccione Long onda secundaria Límite linealidad *
(bilirrubina indirecta). En la determinación de la bilirrubina Dirección Aumen / Aumen Límite Substrato *
indirecta se determina también la directa, correspondiendo el Tiempo reacción 1_33 / -1_45 Factor *
resultado a la bilirrubina total.
La intensidad del color formado es proporcional a la Tiempo Incubación Efecto Prozona *
concentración de bilirrubina presente en la muestra ensayada1,2,3. Unidades mg/dL / mg/dL q1 q2
Precision 0.01 / 0.01 q3 q4
SIGNIFICADO CLINICO
PC Abs
La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina.
Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis. CALIBRACIÓN (Cal + Bl reactivo)
La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la Tipo curva Lineal un punto / Lineal dos puntos
bilirrubina en plasma. Causas más probables de la
Sensibilidad 1/1
hiperbilirrubinemia:
Bilirrubina Total: Aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, Replicados 2 /2
anemia neonatal, alteraciones eritropoyeticas, presencia de Intervalos (días) 0/0
drogas.
Límite aceptación
Bilirrubina Directa: Colestasis hepática, alteraciones genéticas y
alteraciones hepáticas1,6,7. Desviación Estandard
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos Respuesta del Blanco
los datos clínicos y de laboratorio. Error Límite
REACTIVOS Coeficiente correlación

Ácido sulfanílico 30 mmol/L Es necesario solicitar el blanco en este parámetro para obtener
R1 Ácido clorhídrico (ClH) 50 mmol/L resultados correctos en la pantalla principal de CALIB. La Calibración
Dimetilsulfóxido (DMSO) 7 mol/L junto al blanco de reactivo es estable hasta 7 días. Pasado este
período es necesario solicitar de nuevo el blanco de reactivo para
R2 Sodio nitrito 29 mmol/L hacer validar la calibración.
CONTROL DE CALIDAD
PRECAUCIONES Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control
R1/RT: Corrosivo (C): R35: Provoca quemaduras graves. valorados: SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y
S26: En caso de contacto con los ojos, lávense inmediata y 1002210).
abundantemente con agua y acudir a un médico. Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia,
revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador.
PREPARACION Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y
Mezclar 30 volúmenes de R1 con 1 volúmen de R2. Homogeneizar establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan
suavemente y dejar reposar 30 minutos a temperatura ambiente con las tolerancias.
antes de su uso.. La estabilidad del reactivo de trabajo (RT) es de 24
horas a temperatura ambiente o 1 semana a 2-8 ºC. VALORES DE REFERENCIA1
Bilirrubina Total Hasta 1,10 mg/dL  Hasta 18,81 mol/L
CONSERVACION Y ESTABILIDAD Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de establezca sus propios valores de referencia.
caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los
viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita la BIBLIOGRAFIA
contaminación durante su uso. No usar reactivos fuera de la 1. Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
fecha indicada. Princeton 1984; 1238-1241. 436 and 650.
Indicadores de deterioro de los reactivos: 2. Malloy H T. et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter.
J. Biol Chem 1937; 112, 2; 481-491.
- Presencia de partículas y turbidez.
3. Martinek R. Improved micro-method for determination of serum bilirubin. Clin
- Desarrollo de color en el R 2. Chim 1966: Acta 13: 61-170.
MATERIAL ADICIONAL 5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
 Autoanalizador MINDRAY BS-120 / BS-200E.
 Equipamiento habitual de laboratorio
PRESENTACION
MUESTRAS Ref: MI1001042 R 1: 5 x 30 mL
Suero o plasma libre de hemólisis 1. Proteger de la luz. Cont.
R 2: 1 x 10 mL
Estabilidad de la muestra: 4 días a 2-8ºC o 2 meses a –20ºC.
MIBSIS04-E 17/01/13 SPINREACT,S.A./S.AU. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
TOTAL PROTEIN
Total protein
Biuret. Colorimetric
Quantitative determination of total protein MINDRAY BS-120 / BS-200E APPLICATION

IVD
PARAMETERS
Store at 2-8ºC
Test PT / PT R1 280 / 280
Nº ** R2 *
Proteins give an intensive violet-blue complex with copper
salts in an alkaline medium. Iodide is included as an Full Name PT / PT Sample volume 7/7
antioxidant. Standard Nº R1 Blank
The intensity of the color formed is proportional to the total Reac. Type Endpoint / Endpoint Mixed Rgt Blank
1,4
protein concentration in the sample .
Pri. Wavelength 546 / 546 Linearity Range 1.00 g/dL 15.00 g/dL
CLINICAL SIGNIFICANCE Sec. Wavelength Linearity Limit *
The proteins are macromolecular organic compounds, widely Direction Increase / Increase Substrate Limit *
distributed in the organism. They act like structural and
Reac. Time 1_33 / 0_33 Factor *
transport elements. The proteins of the serum are divide in
two fractions, albumin and globulins Incuba. Time Prozone check *
The determination of total proteins is useful in the detection of: Units g/dL / g/dL q1 q2
- High protein levels caused by hemoconcentration like in the Precision 0.01 / 0.01 q3 q4
dehydrations or increase in the concentration of specific
PC Abs
proteins.
- Low protein level caused by hemodilution by an impared CALIBRATION
synthesis or loss (as by hemorrhage) or excessive protein Rule One-point Linear / Two-point Linear
4,5
catabolism . Sensitivity 1/1
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it
Replicates 2/2
Interval (days) 0/0
REAGENTS
Difference Limit
Sodium potassium tartrate 15 mmol/L SD
R Sodium iodide 100 mmol/L Blank Response
Biuret Potassium iodide 5 mmol/L Error Limit
Copper (II) sulphate 19 mmol/L Correlation Coefficient
Blank parameter must be performed in order to get good results in
PRECAUTIONS
CALIB screen from main menu. The blank calibration is stable until 35
Corrosive (C):R35:Causes severe burns. days. After this period the blank parameter must be performed again in
Copper (II) sulphate: Environmentally dangerous (N): R50/53: order to validate the calibration.
Harmful to aquatic organisms, may cause long-term adverse
effects in the aquatic environment. QUALITY CONTROL
S22: Do not breathe dust. S60: This material and its container Control sera and calibrators are recommended to monitor the
must be disposed of as hazardous waste. S61: Avoid release performance of assay procedures: SPINTROL H Calibrator, SPINTROL
to the environment. Refer to special instructions/safety data H Normal and Pathologic (Ref. 1002011, 1002120 and 1002210).
sheets. If control values are found outside the defined range, check the
instrument, reagents and technique for problems.
PREPARATION Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and
The reagent is ready to use. corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
STORAGE AND STABILITY NOTES

All the components of the kit are stable until the expiration 1. Calibration with the aqueous standard may cause a systematic
date on the label when stored tightly closed at 2-8ºC protected error in automatic procedures. In these cases, it is recommended
from light and contaminations prevented during their use. to use a serum Calibrator.
Do not use reagents over the expiration date. 2. Use clean disposable pipette tips for its dispensation.
Signs of reagent deterioration:
BIBLIOGRAPHY
- Presence of particles and turbidity. 1. Koller A. Total serum protein. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
- Blank absorbance (A) at 546 nm  0.22. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1316-1324 and 418.
ADDITIONAL EQUIPMENT 1995.
- MINDRAY BS-120 / BS-200E Autoanalyzer. 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC
- General laboratory equipment. 2001.
SAMPLES 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
1
Serum or heparinized plasma :
PACKAGING
Stability of the sample: 1 month at refrigerator (2-8ºC).
Ref:MI1001291 Cont. R: 6 x 30 mL
REFERENCE VALUES1
Adults: 6.6 – 8.3 g/dL
Newborn: 5.2 – 9.1 g/dL
establish its own reference range.
MIBSIS30-I 18/01/13 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
TOTAL PROTEIN
Proteínas Totales
Biuret. Colorimétrico
Determinación cuantitativa de proteínas totales APLICACIÓN AL MINDRAY BS-120 / BS-200E

IVD PARAMETROS
Conservar a 2-8ºC
Nombre Abrev PT / PT R1 280 / 280
PRINCIPIO DEL MÉTODO Numero ** R2 *
En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta
Nombre PT / PT Volumen muestra 7/7
azulado en presencia de sales de cobre; contiene yoduro
como antioxidante. Num standard Blanco R1
La intensidad del color formado es proporcional a la Modo P. Final / P. Final Blanco mezcla reactivo
1,4
concentración de proteína total en la muestra ensayada . Long onda primaria 546 / 546 Rango linealidad 1.00 g/dL 15.00 g/dL
SIGNIFICADO CLÍNICO Long onda secundaria Límite linealidad *

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, Dirección Aumen / Aumen Límite Substrato *
ampliamente distribuidos en el organismo. Actúan como Tiempo reacción 1_33/ 0_33 Factor *
elementos estructurales y de transporte. Se dividen en dos
Tiempo Incubación Efecto Prozona *
fracciones, albúmina y globulinas.
Su determinación es útil en la detección de: Unidades g/dL / g/dL q1 q2
- Hiperproteinemia producida por hemoconcentración, Precision 0.01 / 0.01 q3 q4
deshidra- tación o aumento en la concentración de PC Abs
proteínas especificas. CALIBRACIÓN
-Hipoproteinemia por hemodilución debida a un defecto en
Tipo curva Lineal un punto / Lineal dos puntos
la síntesis proteica, perdidas excesivas (hemorragias) o
4,5
catabolismo proteico excesivo . Sensibilidad 1/1
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta Replicados 2/2
todos los datos clínicos y de laboratorio. Intervalos (días) 0/0
REACTIVOS Límite aceptación
Potasio sodio tartrato 15 mmol/L Desviación Estandard
R Yoduro sódico 100 mmol/L Respuesta del Blanco
Biuret Yoduro de potasio 5 mmol/L
Error Límite
Sulfato de cobre (II) 19 mmol/L
Coeficiente correlación
PRECAUCION Es necesario solicitar el blanco en este parámetro para obtener
Corrosivo (C): R35: Provoca quemaduras graves. resultados correctos en la pantalla principal de CALIB. La Calibración
Sulfato de cobre (II): Peligroso para el medio ambiente (N): junto al blanco de reactivo es estable hasta 35 días. Pasado este
R50/53: Nocivo para los organismos acuáticos, puede período es necesario solicitar de nuevo el blanco de reactivo para
provocar a largo plazo efectos negativos en el medio hacer validar la calibración.
ambiente acuático.
S22:No respirar el polvo. S60: Elimínense el producto y su CONTROL DE CALIDAD
recipiente como residuos peligrosos. S61: Evítese su Es conveniente calibrar y analizar junto con las muestras sueros
liberación el medio ambiente. Recábense instrucciones control y calibradores valorados: SPINTROL H Calibrador,
específicas/las fichas de datos de seguridad. SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002011, 1002120 y
1002210).
PREPARACION Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia,
El reactivo está listo para su uso. revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y
establecer correcciones en el caso de que los controles no
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de
cumplan con las tolerancias.
frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita NOTAS
su contaminación. 1. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. sistemáticos en métodos automáticos. En este caso, se
Indicadores de deterioro de los reactivos: recomienda utilizar calibradores séricos.
- Presencia de partículas y turbidez. 2. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su
- Absorbancia (A) del Blanco a 546 nm  0,22. dispensación.
MATERIAL ADICIONAL BIBLIOGRAFÍA
- Autoanalizador MINDRAY BS-120 / BS-200E. 1. Koller A. Total serum protein. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby
- Equipamiento habitual de laboratorio. Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1316-1324 and 418.
MUESTRAS 1995.
1 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Suero o plasma heparinizado .
Estabilidad de la muestra: 1 mes en nevera a (2-8ºC). 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
1
VALORES DE REFERENCIA PRESENTACIÓN
Adultos: 6,6 – 8,3 g/dL
Recién nacidos: 5,2 – 9,1 g/dL Ref:MI1001291 Cont. R: 6 x 30 mL
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada
laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
MIBSIS30-E 18/01/13 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
URIC ACID -LQ
Uric acid
Uricase -POD. Liquid
Quantitative determination of uric acid MINDRAY BS-120 / BS-200E APPLICATION
IVD PARAMETERS
Store at 2-8ºC
Test URIC / URIC R1 180 / 180
PRINCIPLE OF THE METHOD Nº ** R2 180 / 180
Uric acid is oxidized by uricase to allantoine and hydrogen Full Name URIC / URIC Sample volume 9/9
peroxide (2H2O2), which under the influence of POD, 4–
Standard Nº R1 Blank
aminophenazone (4-AP) and 2-4 Dichlorophenol sulfonate
(DCPS) forms a red quinoneimine compound: Reac. Type Endpoint / Endpoint Mixed Rgt Blank
Uricase Pri. Wavelength 510 / 505 Linearity Range 0.03 mg/dL 25.00 mg/dL
Uric acid + 2H2O + O2 
 Allantoine + CO2 + 2H2O2
POD Sec. Wavelength Linearity Limit *
2H2O2 + 4-AP + DCPS  
 Quinoneimine+ 4H2O
Direction Increase / Increase Substrate Limit *
The intensity of the red color formed is proportional to the uric
acid concentration in the sample1,2. Reac. Time 1_17 / 0_17 Factor *
Incuba. Time Prozone check *
CLINICAL SIGNIFICANCE Units mg/dL / mg/dL q1 q2
Uric acid and its salts are end products of the purine metabolism.
Precision 0.01/ 0.01 q3 q4
With progressive renal insufficiency, there is retention in blood of
urea, creatinine and uric acid. PC Abs
Elevate uric acid level may be indicative of renal insufficiency and CALIBRATION (Cal + Rgt Blk)
is commonly associated with gout1,5,6.
Rule One-point Linear / Two-point Linear
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it
should integrate clinical and other laboratory data. Sensitivity 1/1
Replicates 2/2
REAGENTS
Interval (days) 0/0
R1 Phosphate pH 7.4 50 mmol/L
Difference Limit
Buffer 2-4 Dichlorophenol sulfonate (DCPS) 4 mmol/L
SD
Uricase 60 U/L
R2 Peroxidase (POD) 660 U/L Blank Response
Enzymes Ascorbate oxidase 200 U/L Error Limit
4 – Aminophenazone (4-AP) 1 mmol/L Correlation Coefficient
PREPARATION Blank parameter must be performed in order to get good results in

All the reagents are ready to use. CALIB screen from main menu. The blank calibration is stable until 35
STORAGE AND STABILITY order to validate the calibration.
the label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light QUALITY CONTROL
and contaminations prevented during their use. Control sera and calibrators are recommended to monitor the
Do not use reagents over the expiration date. performance of assay procedures: SPINTROL H Calibrator, SPINTROL
H Normal and Pathologic (Ref. 1002011, 1002120 and 1002210).
Signs of reagent deterioration: If control values are found outside the defined range, check the
- Presence of particles and turbidity. instrument, reagents and technique for problems.
- Blank absorbance (A) at 520 nm  0.16. Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and
corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
- MINDRAY BS-120 / BS-200E Autoanalyzer. NOTES
- General laboratory equipment. 1. Calibration with the aqueous standard may cause a systematic
error in automatic procedures. In these cases, it is recommended
SAMPLES to use a serum Calibrator.
- Serum or plasma1: Stability 3-5 days at 2-8ºC or 6 months at 2. Use clean disposable pipette tips for its dispensation.
– 20ºC.
- Urine (24 h)1: Stability 4 days at 15-25ºC, pH >8. Dilute sample BIBLIOGRAPHY
1/50 in distilled water. Mix. Multiply results by 50 (dilution factor); 1. Schultz A. Uric acid. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St
Louis. Toronto. Princeton 1984; 1261-1266 and 418.
If urine is cloudy; warm the specimen to 60ºC for 10 min to
2. Fossati P et al. Clin Chem 1980;26:227-231.
dissolve precipitated urates and uric acid. Do not refrigerate. 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
1995.
REFERENCE VALUES1 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC
Serum or plasma: 2001.
Women 2.5 - 6.8 mg/dL  149 – 405 mol/L 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Men 3.6 - 7.7 mg/dL  214 – 458 mol/L 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995
Urine: 250 - 750 mg/24 h  1.49 - 4.5 mmol/24 h
These values are for orientation purpose; each laboratory should PACKAGING
establish its own reference range. Ref. MI41001 R1: 3 x 30 mL.
Cont.
. R2: 3 x 30 mL.
MIBSIS45-I 18/01/13 SPINREACT,S.A./S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
URIC ACID -LQ
Acido úrico
Uricasa -POD. Líquido
Determinación cuantitativa de ácido úrico APLICACIÓN AL MINDRAY BS-120 / BS-200E
IVD
PARAMETROS
Conservar a 2-8ºC
Nombre Abrev URIC / URIC R1 180 / 180
PRINCIPIO DEL MÉTODO Numero ** R2 180 / 180
El ácido úrico es oxidado por la uricasa a alantoína y peróxido de
Nombre URIC / URIC Volumen muestra 9/9
hidrógeno (2H2O2) que en presencia de peroxidasa (POD), 4-
aminofenazona (4-AF) y 2-4 Diclorofenol Sulfonato (DCPS) Num standard Blanco R1
forma un compuesto rosáceo: Modo P. Final / P. Final Blanco mezcla reactivo
Uricasa
Ácido úrico + 2H2O + O2 
 Alantoína + CO2 + 2H2O2 Long onda primaria 510 / 505 Rango linealidad 0.03 mg/dL 25.00 mg/dL
POD Long onda secundaria Límite linealidad *
2H2O2 + 4-AF + DCPS   Quinonaimina + 4H2O
La intensidad de quinonaimina roja formada es proporcional a la Dirección Aumen / Aumen Límite Substrato *
concentración de ácido úrico presente en la muestra ensayada 1,2. Tiempo reacción 1_17 / 0_17 Factor *
Tiempo Incubación Efecto Prozona *
Unidades mg/dL / mg/dL q1 q2
El ácido úrico y sus sales son el producto final del metabolismo
de las purinas. En una insuficiencia renal progresiva hay una Precision 0.01 / 0.01 q3 q4
retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico. PC Abs
Niveles altos de ácido úrico son indicativos de patología renal y
CALIBRACIÓN (Cal + Bl reactivo)
generalmente se asocia con la gota1,5,6.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos Tipo curva Lineal un punto / Lineal dos puntos
los datos clínicos y de laboratorio. Sensibilidad 1/1
Replicados 2/2
REACTIVOS
Intervalos (días) 0/0
R1 Fosfatos pH 7,4 50 mmol/L
Tampón 2-4 Diclorofenol Sulfonato (DCPS) 4 mmol/L Límite aceptación
Uricasa 60 U/L Desviación Estandard
R2 Peroxidasa (POD) 660 U/L Respuesta del Blanco
Enzimas Ascorbato oxidasa 200 U/L Error Límite
4 - Aminofenazona (4-AF) 1 mmol/L
Coeficiente correlación
PREPARACIÓN Es necesario solicitar el blanco en este parámetro para obtener

Todos los reactivos están listos para su uso. resultados correctos en la pantalla principal de CALIB. La Calibración
junto al blanco de reactivo es estable hasta 35 días. Pasado este
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD período es necesario solicitar de nuevo el blanco de reactivo para
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de hacer validar la calibración.
frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita CONTROL DE CALIDAD
su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha Es conveniente calibrar y analizar junto con las muestras sueros
indicada. control y calibradores valorados: SPINTROL H Calibrador,
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002011, 1002120 y
Indicadores de deterioro de los reactivos: 1002210).
- Presencia de partículas y turbidez. Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia,
- Absorbancia (A) del Blanco a 520 nm  0,16. revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y
MATERIAL ADICIONAL establecer correcciones en el caso de que los controles no
- Autoanalizador MINDRAY BS-120 / BS-200E. cumplan con las tolerancias.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
NOTAS
MUESTRAS 1. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores
1 sistemáticos en métodos automáticos. En este caso, se
- Suero o plasma : Estabilidad 3-5 días a 2-8ºC y 6 meses a
–20ºC. recomienda utilizar calibradores séricos.
1 2. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su
- Orina (24 h) : Estabilidad 3 días a temperatura ambiente a
pH > 8. Diluir la muestra al 1/50 en agua destilada. dispensación.
Mezclar. Multiplicar el resultado obtenido por 50 (factor de BIBLIOGRAFÍA
dilución); Si la muestra es turbia, calentarla a 60ºC 10 min. 1. Schultz A. Uric acid. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St
para disolver los precipitados de urato y ácido úrico. No Louis. Toronto. Princeton 1984; 1261-1266 and 418.
refrigerar. 2. Fossati P et al. Clin Chem 1980;26:227-231.
1995.
VALORES DE REFERENCIA1 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Suero o plasma: 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Mujeres 2,5 - 6,8 mg/dL  149 – 405 mol/L 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Hombre 3,6 - 7,7 mg/dL  214 – 458 mol/L
PRESENTACIÓN
s
Orina: 250 - 750 mg/24 h  1,49 - 4,5 mmol/24 h Ref. MI41001 R1: 3 x 30 mL.
Cont.
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada . R2: 3 x 30 mL.
MIBSIS45-E 18/01/13 SPINREACT,S.A./S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
GLUCOSE -LQ
Glucose
GOD-POD. Liquid
MINDRAY BS-120 / BS-200E APPLICATION
Quantitative determination of glucose
IVD PARAMETERS
Store at 2-8ºC Test GLU / GLU R1 300 / 300

Nº ** R2 *
PRINCIPLE OF THE METHOD Full Name GLU / GLU Sample volume 3/3
Glucose oxidase (GOD) catalyses the oxidation of glucose to
Standard Nº R1 Blank
gluconic acid. The formed hydrogen peroxide (H 2O2), is
detected by a chromogenic oxygen acceptor, phenol, 4 – Reac. Type Endpoint / Endpoint Mixed Rgt Blank
aminophenazone (4-AP) in the presence of peroxidase Pri. Wavelength 510 / 505 Linearity Range 0 mg/dL 500 mg/dL
(POD): Sec. Wavelength Linearity Limit *
GOD
-D-Glucose + O2 + H2O 
 Gluconic acid + H2O2 Direction Increase / Increase Substrate Limit *
POD
H2O2 + Phenol + 4-AP 
 Quinone + H2O Reac. Time 1_33 / 0_33 Factor *
The intensity of the color formed is proportional to the glucose Units mg/dL / mg/dL q1 q2
1,2
concentration in the sample .
Precision Interger / Interger q3 q4
CLINICAL SIGNIFICANCE PC Abs

Glucose is a major source of energy for most cells of the CALIBRATION (Cal + Rgt Blk)
body; insulin facilitates glucose entry into the cells. Rule One-point Linear / Two-point Linear
Diabetes is a disease manifested by hyperglycemia; patients
1,5,6 Sensitivity 1/1
with diabetes demonstrate an inability to produce insulin .
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it Replicates 2/2
should integrate clinical and other laboratory data. Interval (days) 0/0
Difference Limit
REAGENTS
SD
TRIS pH 7.4 92 mmol/L
Blank Response
Phenol 0.3 mmol/L
Error Limit
R Glucose oxidase (GOD) 15000 U/L
Peroxidase (POD) 1000 U/L Correlation Coefficient
4 – Aminophenazone (4-AP) 2.6 mmol/L Blank parameter must be performed in order to get good results in
PREPARATION
order to validate the calibration.
QUALITY CONTROL
Control sera and calibrators are recommended to monitor the
All the components of the kit are stable until the expiration
performance of assay procedures: SPINTROL H Calibrator,
date on the label when stored tightly closed at 2-8ºC,
SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002011, 1002120 and
protected from light and contaminations prevented during their
1002210).
use.
instrument, reagents and technique for problems.
Each laboratory should establish its own Quality Control scheme
SIGNS OF REAGENT DETERIORATION:
and corrective actions if controls do not meet the acceptable
- Presence of particles and turbidity.
tolerances.
- Blank absorbance (A) at 505 nm  0.32.
NOTES
1. Calibration with the aqueous standard may cause a systematic
- MINDRAY BS-120 / BS-200E Autoanalyzer. error in automatic procedures. In these cases, it is
- General laboratory equipment. recommended to use a serum Calibrator.
SAMPLES
1
Serum or plasma, free of hemolysis : BIBLIOGRAPHY
Serum should be removed from the clot as quickly as 1. Kaplan L.A. Glucose. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co.
possible. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1032-1036.
Stability of the sample: Glucose in serum or plasma is stable 2. Trinder P. Ann Clin Biochem 1969; 6 24-33.
at 2-8º for 3 days. 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
1995.
1 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC
REFERENCE VALUES
Serum or plasma: 2001.
60 – 110 mg/dL  3.33 – 6.10 mmol/L
These values are for orientation purpose; each laboratory
should establish its own reference range. PACKAGING
Ref: MI41011 R: 6 x 30 mL
Cont.
.
MIBSIS46-I 18/01/13 SPINREACT,S.A/S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
GLUCOSE -LQ
Glucosa
GOD-POD. Líquido
Determinación cuantitativa de glucosa APLICACIÓN AL MINDRAY BS-120 / BS-200E

IVD PARAMETROS
Conservar a 2-8ºC
Nombre Abrev GLU / GLU R1 300 / 300
La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a Nombre GLU / GLU Volumen muestra 3/3
ácido glucónico. El peróxido de hidrógeno (H 2O2) producido Num standard Blanco R1
se detecta mediante un aceptor cromogénico de oxigeno,
Modo P. Final / P. Final Blanco mezcla reactivo
fenol, 4–aminofenazona (4-AF), en presencia de la
peroxidasa (POD): Long onda primaria 510 / 505 Rango linealidad 0 mg/dL 500 mg/dL
GOD
-D-Glucosa + O2 + H2O 
 Ácido glucónico + H2O2 Long onda secundaria Límite linealidad *
POD Dirección Aumen / Aumen Límite Substrato *
H2O2 + Fenol + 4-AF 
 Quinona + H2O
La intensidad del color formado es proporcional a la Tiempo reacción 1_33/ 0_33 Factor *
concentración de glucosa presente en la muestra Tiempo Incubación Efecto Prozona *
1,2
ensayada . Unidades mg/dL / mg/dL q1 q2
Precision Entero / Entero q3 q4
PC Abs
La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del
organismo; la insulina facilita la entrada de glucosa en las CALIBRACIÓN (Cal + Bl reactivo)
células. Tipo curva Lineal un punto / Lineal dos puntos
La diabetes mellitus es una enfermedad que se manifiesta por Sensibilidad 1/1
1,5,6
una hiperglucémia, causada por un déficit de insulina .
Replicados 2 /2
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta
todos los datos clínicos y de laboratorio. Intervalos (días) 0/0
Límite aceptación
REACTIVOS Desviación Estandard
TRIS pH 7,4 92 mmol/L Respuesta del Blanco
Fenol 0,3 mmol/L
Error Límite
R Glucosa oxidasa (GOD) 15000 U/L
Peroxidasa (POD) 1000 U/L Coeficiente correlación
4 - Aminofenazona (4-AF) 2,6 mmol/L Es necesario solicitar el blanco en este parámetro para obtener
resultados correctos en la pantalla principal de CALIB. La Calibración
PREPARACIÓN junto al blanco de reactivo es estable hasta 35 días. Pasado este
período es necesario solicitar de nuevo el blanco de reactivo para
El reactivo está listo para su uso.
hacer validar la calibración.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD CONTROL DE CALIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de Es conveniente calibrar y analizar junto con las muestras sueros
caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se control y calibradores valorados: SPINTROL H Calibrador,
mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002011, 1002120 y
luz y se evita la contaminación durante su uso. 1002210).
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia,
Indicadores de deterioro de los reactivos: Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y
- Presencia de partículas y turbidez. establecer correcciones en el caso de que los controles no
- Absorbancias (A) del Blanco a 505 nm  0,32. cumplan con las tolerancias.
MATERIAL ADICIONAL NOTAS

- Autoanalizador MINDRAY BS-120 / BS-200E. 1. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores
- Equipamiento habitual de laboratorio. sistemáticos en métodos automáticos. En este caso, se
recomienda utilizar calibradores séricos.
MUESTRAS 2. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su
1
Suero o plasma, libre de hemólisis . dispensación.
El suero debe separarse lo antes posible del coágulo.
Estabilidad de la muestra: La glucosa en suero o plasma es BIBLIOGRAFÍA
estable 3 días a 2-8ºC. 1. Kaplan L.A. Glucose. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St
Louis. Toronto. Princeton 1984; 1032-1036.
1 2. Trinder P. Ann Clin Biochem 1969; 6: 24-33.
VALORES DE REFERENCIA 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
Suero o plasma: 1995.
60 – 110 mg/dL  3,33 – 6,10 mmol/L 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
PRESENTACIÓN
R: 6 x 30 mL
Ref: MI41011 Cont.
.
CHOLESTEROL -LQ
Cholesterol
CHOD-POD. Liquid
Quantitative determination of cholesterol MINDRAY BS-120 / BS-200E APPLICATION

IVD
Store at 2-8ºC PARAMETERS
Test CHOL / CHOL R1 300 /300
PRINCIPLE OF THE METHOD Nº ** R2 *
The cholesterol present in the sample originates a coloured Full Name CHOL / CHOL Sample volume 3/3
complex, according to the following reactions:
CHE Standard Nº R1 Blank
Cholesterol esters + H2O  Cholesterol + fatty acids
Reac. Type Endpoint / Endpoint Mixed Rgt Blank
CHOD
Cholesterol + O2  4-Cholestenona + H2O2 Pri. Wavelength 510 / 505 Linearity Range 0 mg/dL 600 mg/dL
POD
2 H2O2+ Phenol + 4-AP   Quinonimine + 4H2O Sec. Wavelength Linearity Limit *
The intensity of the color formed is proportional to the Direction Increase / Increase Substrate Limit *
1,2
cholesterol concentration in the sample . Reac. Time 1_17 / 0_17 Factor *
Units mg/dL / mg/dL q1 q2
Cholesterol is a fat-like substance called a lipid that is found in
all body cells. The liver makes all of the cholesterol the body Precision Interger / Interger q3 q4
needs to form cell membranes and to make certain hormones. PC Abs
The determination of serum cholesterol is one of the important CALIBRATION (Cal + Rgt Blk)
tools in the diagnosis an classification of lipemia.
Rule One-point Linear / Two-point Linear
High blood cholesterol is one of the major risk factors for heart
5,6 Sensitivity 1/1
disease .
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it Replicates 2/2
should integrate clinical and other laboratory data. Interval (days) 0/0
Difference Limit
REAGENTS
SD
PIPES pH 6.9 90 mmol/L
Phenol 26 mmol/L Blank Response
Cholesterol esterase (CHE) 1000 U/L Error Limit
R
Cholesterol oxidase (CHOD) 300 U/L Correlation Coefficient
Peroxidase (POD) 650 U/L
Blank parameter must be performed in order to get good results in
4 – Aminophenazone (4-AP) 0.4 mmol/L
PREPARATION order to validate the calibration.
QUALITY CONTROL
STORAGE AND STABILITY Control sera and calibrators are recommended to monitor the
All the components of the kit are stable until the expiration performance of assay procedures: SPINTROL H Calibrator,
date on the label when stored tightly closed at 2-8ºC, SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002011, 1002120 and
protected from light and contaminations prevented during their 1002210).
use. If control values are found outside the defined range, check the
Do not use reagents over the expiration date. instrument, reagents and technique for problems.
Signs of reagent deterioration: Each laboratory should establish its own Quality Control scheme
- Presence of particles and turbidity. and corrective actions if controls do not meet the acceptable
- Blank absorbance (A) at 505 nm  0.26. tolerances.
ADDITIONAL EQUIPMENT NOTES
- MINDRAY BS-120 / BS-200E Autoanalyzer. 1. LCF (Lipid Clearing Factor) is integrated in the reagent.
- General laboratory equipment. 2. Calibration with the aqueous standard may cause a systematic
error in automatic procedures. In these cases, it is
SAMPLES recommended to use a serum Calibrator.
1,2
Serum or plasma : Stability of the sample 7 days at 2-8ºC or 3. Use clean disposable pipette tips for its dispensation.
freezing at –20ºC will keep samples stable for 3 months.
BIBLIOGRAPHY
REFERENCE VALUES 1. Naito H.K. Cholesterol. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St
5,6
Risk evaluation : Louis. Toronto. Princeton 1984; 1194-11206 and 437.
Less than 200 mg/dL Normal 2. Meiattini F. et al. The 4-hydroxybenzoate/4-aminophenazone Chromogenic
200-239 mg/dL Borderline System. Clin Chem 1978; 24 (12): 2161-2165.
240 mg/dL and above High 1995.
These values are for orientation purpose; each laboratory 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
should establish its own reference range. 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
PACKAGING
Ref: MI41021
Cont. R: 6 x 30 mL
.
MIBSIS48-I 18/01/13 SPINREACT,S.A./S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
CHOLESTEROL -LQ
Colesterol
CHOD-POD. Líquido
Determinación cuantitativa de colesterol APLICACIÓN AL MINDRAY BS-120 / BS-200E

IVD PARAMETROS
Conservar a 2-8ºC
Nombre Abrev COL / COL R1 300 / 300

El colesterol presente en la muestra origina un compuesto Nombre COL / COL Volumen muestra 3/3
coloreado según la reacción siguiente: Num standard Blanco R1
CHE
Ésteres colesterol + H2O  Colesterol + Ácidos grasos Modo P. Final / P. Final Blanco mezcla reactivo
CHOD
Colesterol + O2  4-Colestenona + H2O2 Long onda primaria 510 / 505 Rango linealidad 0 mg/dL 600 mg/dL
POD Long onda secundaria Límite linealidad *
2 H2O2 +Fenol + 4-AP   Quinonimina + 4H2O
Dirección Aumen / Aumen Límite Substrato *
La intensidad del color formado es proporcional a la
concentración de colesterol presente en la muestra Tiempo reacción 1_17 / 0_17 Factor *
1,2
ensayada . Tiempo Incubación Efecto Prozona *
Unidades mg/dL / mg/dL q1 q2
Precision Entero / Entero q3 q4
El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las
células del organismo. El hígado produce naturalmente todo PC Abs
el colesterol que necesita para formar las membranas CALIBRACIÓN (Cal + Bl reactivo)
celulares y producir ciertas hormonas. La determinación del Tipo curva Lineal un punto / Lineal dos puntos
colesterol es una de las herramientas más importantes para el Sensibilidad 1/1
diagnóstico y clasificación de las lipemias. El aumento del
Replicados 2/2
nivel de colesterol es uno de los principales factores de riesgo
5,6
cardiovascular . Intervalos (días) 0/0
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta Límite aceptación
todos los datos clínicos y de laboratorio. Desviación Estandard
Respuesta del Blanco
REACTIVOS
PIPES pH 6.9 90 mmol/L Error Límite
Fenol 26 mmol/L Coeficiente correlación
Colesterol esterasa (CHE) 1000 U/L Es necesario solicitar el blanco en este parámetro para obtener
R
Colesterol oxidasa (CHOD) 300 U/L resultados correctos en la pantalla principal de calib. La calibración
Peroxidasa (POD) 650 U/L junto al blanco de reactivo es estable hasta 35 días. Pasado este
4 - Aminofenazona (4-AF) 0,4 mmol/L período es necesario solicitar de nuevo el blanco de reactivo para
hacer validar la calibración.
PREPARACIÓN
CONTROL DE CALIDAD
El reactivo está listo para su uso.
Es conveniente calibrar y analizar junto con las muestras sueros
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD control y calibradores valorados: SPINTROL H Calibrador,
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002011, 1002120 y
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de
1002210).
caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se
mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia,
luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador.
fecha indicada. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y
Indicadores de deterioro de los reactivos: establecer correcciones en el caso de que los controles no
- Presencia de partículas y turbidez. cumplan con las tolerancias.
- Absorbancias (A) del Blanco a 505 nm  0,26. NOTAS
1. LCF (Lipid Clearing Factor) está integrado en el reactivo.
MATERIAL ADICIONAL 2. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores
- Autoanalizador MINDRAY BS-120 / BS-200E. sistemáticos en métodos automáticos. En este caso, se
- Equipamiento habitual de laboratorio. recomienda utilizar calibradores séricos.
3. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su
MUESTRAS dispensación.
1,2
Suero o plasma . Estabilidad de la muestra 7 días a 2-8ºC y
3 meses si se mantiene la muestra congelada (-20ºC). BIBLIOGRAFÍA
1. Naito H.K. Cholesterol. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St
Louis. Toronto. Princeton 1984; 1194-11206 and 437.
VALORES DE REFERENCIA 2. Meiattini F. et al. The 4-hydroxybenzoate/4-aminophenazone Chromogenic
5,6
Evaluación del riesgo : System. Clin Chem 1978; 24 (12): 2161-2165.
Menos de 200 mg/dL Normal 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
200-239 mg/dL Moderado 1995.
240 o más Alto 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
PRESENTACIÓN
Ref: MI41021
Cont. R: 6 x 30 mL
.
MAGNESIUM
Magnesium
Xylidyl Blue. Colorimetric
Quantitative determination of magnesium

IVD APPLICATIÓN SPINLAB 180
Name MAGNESIUM Ref. male low 1.6
Store at 2-8ºC Abbr. Name MG Ref. male high 2.5
Mode Endpoint Ref. female low 1.6
Wavelength 546 nm Ref. female high 2.5
PRINCIPLE OF THE METHOD Units mg/dL Ref. Ped. Low 0.0
Magnesium forms a coloured complex when reacts with Decimals 2 Ref. Ped. High 5.0
Low Conc. 0.3 Control 1 *
Magon sulfonate in alkaline solution. High Conc. 5.0 Control 2 *
The intensity of the color formed is proportional to the Calibrator name CAL Control 3 *
1 Cut-off No Correlat. factor 1.000
magnesium concentration in the sample . Correlat. offset 0.000
CLINICAL SIGNIFICANCE DUAL MODE

Magnesium is the second more abundant intracellular cation Sample blank No
R1 bottle (mL) 25 mL
of the human body after potassium, being essential in great normal volume 300 L
number of enzymatic and metabolic processes. rerun volume 300 L
Is a cofactor of all the enzymatic reactions that involve the Sample
normal volume 3.0 L 5.0 L Vol.
ATP and comprises of the membrane that maintains the rerun volume 2.0 L Vol. repet.
electrical excitability of the muscular and nervous cells. R2 bottle (mL) 5 mL
normal volume 0 L
A low magnesium level is found in malabsortion syndrome, rerun volume 0 L Retr., tiemp
diuretic or aminoglucoside therapy; hyperparathyroidism or Predilución No
Incubation time 4.5 min.
diabetic acidosis.
Elevated concentration of magnesium is found in uremia, Factor Vol. repet.
chronic renal failure, glomerulonephritis, Addisons’s disease Reagent blank Yes
or intensive anti acid therapy1,4,5. Low Absorbance -0.100 Abs
High Absorbance 3.000 Abs
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it R. Abs. L. Limit -0.100 Abs
should integrate clinical and other laboratory data. R. Abs. H. Limit 3.000 Abs
REAGENTS
Xylidyl Blue 0.1 mmol/L QUALITY CONTROL
R Control sera are recommended to monitor the performance of
Thioglycolic acid 0.7 mmol/L
DMSO 3000 mmol/L assay procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref.
OPTIONAL SPINTROL H CAL 1002120 and 1002210).
PRECAUTIONS instrument, reagents and calibrator for problems.
Corrosive (C): R35: Causes severe burns. Each laboratory should establish its own Quality Control scheme
S26: In case of contact with eyes, rinse immediately with and corrective actions if controls do not meet the acceptable
plenty of water and seek medical advice. tolerances.
PREPARATION REFERENCE VALUES1

The reagent is ready to use. Serum or plasma:
1.6 – 2.5 mg/dL 0.66 – 0.03 mmol/L
STORAGE AND STABILITY Urine:
All the components of the kit are stable until the expiration 24 – 244 mg/24 h 2 – 21 mEq/L/24 h
date on the label when stored tightly closed at 2-8ºC protected These values are for orientation purpose; each laboratory should
from light and contaminations prevented during their use. establish its own reference range.
Signs of reagent deterioration: NOTES
Presence of particles, color change and turbidity. 1. It is recommended use disposable material to avoid magnesium
contamination. If glassware is used the material should be
Blank absorbance (A) at 546 1.8.
scrupulously clean with H2SO4 - K2Cr2O7 and then thoroughly
ADDITIONAL EQUIPMENT rinsed with distilled water and dried before use.
Spectrophotometer or colorimeter measuring at 546 nm.
3. Spinreact has instruction sheets for several automatic
Matched cuvettes 1.0 cm light path. analyzers. Instructions for many of them are available on
General laboratory equipment (Note 2). request.
SAMPLES BIBLIOGRAPHY
1
Serum, heparinized plasma : 1. Farrell E C. Magnesium. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Free of hemolysis and separated from cells as rapidly as Toronto. Princeton 1984; 1065-1069.
possible. 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Do not use oxalates or EDTA as anticoagulant. 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Stability: 7 days at 2-8ºC. 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Urine1:
Should be acidified to pH 1 with HCl. PACKAGING
If urine is cloudy; warm the specimen to 60ºC for 10 min. to
Ref: SP1001285 Cont. R: 10 x 25 mL
dissolve precipitates.
Dilute the sample 1/10 with distilled water and multiply the
result by 10. Stability: 3 days at 2-8ºC
SPBSIS79-I 14/10/11 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
MAGNESIUM
Magnesio
Azul de Xilydil. Colorimétrico
Determinación cuantitativa de magnesio

IVD APLICACIÓN AL SPINLAB 180
Conservar a 2-8ºC
Nombre Magnesio Ref. Hombre Inf. 1.6
Nombre abreviado MG Ref. Hombre Sup. 2.5
PRINCIPIO DEL METODO Modo Endpoint Ref. Mujer Inf. 1.6
El magnesio forma un complejo coloreado al reaccionar con Long. ondas
Unidades
546 nm
mg/dL
Ref. Mujer Sup.
Ref. Ped. Inf.
2.5
0.0
Magon sulfonado en solución alcalina. Decimales 2 Ref. Ped. Sup. 5.0
La intensidad del color formado es proporcional a la Conc. Inferior 0.3 mg/dL Valor pánico bajo *
1 Conc. Superior 5.0 mg/dL Valor pánico alto *
concentración de magnesio en la muestra ensayada . Calibrador CAL Control 1 *
Chequeo prozona No Control 2 *
Control 3 *
SIGNIFICADO CLINICO Factor correl. 1.000
El magnesio, es el segundo catión intracelular más abundante Offset de correl. 0.000
MODO DUAL
en el organismo humano después del potasio, siendo esencial Blanco muestra No
en gran número de procesos enzimáticos y metabólicos. Frasco R1 (mL) 25 mL
Vol. normal 300 L
Es un cofactor en todas las reacciones enzimáticas que Vol. repet. 300 L
involucran al ATP y forma parte de la membrana que Muestra
Vol. normal 3.0 L
mantiene la excitabilidad eléctrica de las células musculares y Vol. repet. 2.0 L
nerviosas. Frasco R2 (mL) 5 mL
Vol. normal 0 L
Principales causas de déficit de magnesio son mala absorción Vol. repet. 0 L
intestinal, administración de diuréticos o aminoglucósidos, Predilución No
Incubación 4.5 min.
hiperparatiroidismo o acidosis diabética.
Factor
Niveles altos de magnesio se hallan en la uremia, fallo renal,
Blanco reactivo Si (0.000)
glomerulonefritis, enfermedad de Addison o terapia intensiva Absorbancia inf. -0.100 Abs
con antiácidos1,4,5. Absorbancia sup. 3.000 Abs
Lim.Inf. Abs. React. -0.100 Abs
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta Lim.Sup. Abs. React. 3.000 Abs
todos los datos clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS CONTROL DE CALIDAD

Azul de Xilydil 0.1 mmol/L Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control
R valorados:
Acido Tioglicólico 0,7 mmol/L
DMSO 3000 mmol/L SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
OPCIONAL SPINTROL H CAL Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia,
PRECAUCIONES Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y
Corrosivo (C): R35: Provoca quemaduras graves. establecer correcciones en el caso de que los controles no
S26: En caso de contacto con los ojos, lávense inmediata y cumplan con las tolerancias.
abundantemente con agua y acudir a un médico.
PREPARACION Suero o plasma:
El reactivo está listo para su uso. 1,6 – 2,5 mg/dL 0,66 – 1,03 mmol/L
Orina:
CONSERVACION Y ESTABILIDAD 24-244 mg/24 horas 2-21 mEq/L/24 horas
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada
caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la
luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la NOTAS
fecha indicada. 1. Se recomienda utilizar material de plástico de un solo uso para
Indicadores de deterioro de los reactivos: evitar contaminaciones de magnesio. En caso de utilizar
Presencia de partículas, cambio de color y turbidez. material de vidrio deberá lavarse con una solución de H2SO4 -
Absorbancia (A) del Blanco a 546 1,8. K2Cr2O7, enjuagar varias veces con agua destilada y secar
antes de su uso.
MATERIAL ADICIONAL 2. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su
Espectrofotómetro ó analizador para lecturas a 546 nm. dispensación.
Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. 3. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la
Equipamiento habitual de laboratorio
(Nota 2)
. aplicación de este reactivo en distintos analizadores.
MUESTRAS BIBLIOGRAFIA
1 1. Farrell E C. Magnesium. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Suero o plasma heparinizado : Toronto. Princeton 1984; 1065-1069.
Libre de hemólisis. Separado lo antes posible de los 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
hematies. 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
No usar oxalato o EDTA como anticoagulante. 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC.
Orina1: PRESENTACION
Ajustar a pH 1 con ClH. Si la muestra es turbia, calentarla
a 60ºC 10 min. para disolver los precipitados. Ref: SP1001285 Cont. R:10 x 25 mL
Diluir la muestra 1/10 con agua destilada. Mezclar.
Multiplicar el resultado por 10 (factor de dilución).
Estabilidad de la muestra: 3 días a 2-8ºC.
SPBSIS79-E 14/10/11 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN

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N° d’ordre :

REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE

MEMOIRE DE FIN D’ETUDE

Membres du jury : soutenu le 01/06/2015

Président Mr. DEROUICHE Samir M.A.A Université d'El Oued

Année Universitaire 2014/2015

notre sincères remerciements vont à nos encadreur : Monsieur

Une diminution dans la concentration des paramètres lipidiques (Cholestérol, Triglycérides

Mots clés : Activité antitoxique, Polyphénols, Cotula cinaria, Stress Oxydatif,

‫‪Cotula‬‬ ‫الكلمات المفتاحية‪ :‬الفعالية ضد السميّة‪ ,‬متعدد الفينوالت‪ ,‬اإلجهاد التأكسدي‪,‬‬

The epidemiological inquiries evoked the implication of pesticides in several pathologies at

Keywords: activity antitoxin, Polyphenols, Cotula cinaria, Oxidative Stress, Chlorpyrifos.

Numéro Titre Page

Figure 01 Vue générale des parties d’une plante des Astéracées 05

Figure 02 vue générale de l’espèce Cotula cinerea 06

Figure 03 Cheminement d’un toxique dans l’organisme 09

Figure 04 Organisation structurale du lobule hépatique 11

Figure 05 Organisation structurale du néphron rénal 12

Figure 06 principale source des ROS 14

Figure 07 Structure des tocopherols 15

Figure 08 Structure de l’acide ascorbique 16

Figure 09 Structure de beta caroténe 16

Figure 10 les polyphenoles 16

Localisation géographique de la zone d’étude (Ben Guecha,

Figure 12 Courbe d’étalonnage de l’acide gallique. 25

Effet de l’extrait brut méthanolique sur les paramètres

Tableau Titre Page

Ac uriq: Acide Urique

L'action de la phytothérapie sur l'organisme dépend de la composition des plantes. Depuis le

La phytothérapie continuera-t-elle à être appréciée à sa juste valeur, c'est comme un large

L’étude de l’espèce végétale Cotula cinerea nécessite en premier lieu la détermination

1. Famille Astéracées (Composées)

Figure 01 : Vue générale des parties d’une plante des Astéracées

3. Etude de l’espèce Cotula cinerea

3.2. Description de l’espèce

3.3. Position systématique

Figure 02 : Vue générale de l’espèce Cotula cinerea (www.treknature.com)

5. Composition chimique de la plante

En Europe, en Amérique du Nord et dans tous les pays développés en général, la

1.1. Toxicité aiguë

1.2. Toxicité à terme (subaiguë et chronique)

2. Devenir d’un toxique dans l’organisme

Figure 03: Cheminement d’un toxique dans l’organisme (LAPOINTE, 2004).

3. Manifestation toxique dans l’organisme

3.1.1. Structure générale du parenchyme hépatique

Figure 04 : Organisation structurale du lobule hépatique (WALLACE et MEYER., 2010).

3.1.2. Rôle du foie dans le métabolisme des toxiques

3.2.1. Unité structurale du rein ; le néphron

Figure 05: Organisation structurale du néphron rénal (TARLOFF et WALLACE, 2010).

3.2.2. Rein et l’élimination des toxiques

4.1.Definition d’un radical libre

4.2.Types des radicaux libres꞉

Figure 06꞉ Principale source des ROS (MEZITI, 2009).

4.3.2. Classification des antioxydants

a) Les antioxydants primaires

b) Les antioxydants secondaires

Figure 07: Structure des tocopherols (ALLANE, 2009).

Figure 08: Structure de l’acide ascorbique (ZARROUR, 2012)

Figure 09 : Structure de beta caroténe (BRICE, 2009)