UE Pharmacie - Microbiologie

Le monde Microbien : Partie 2 :

La vie des microbes
Professeur Emmanuel DROUET
Année universitaire 2011/2012
Université Joseph Fourier de Grenoble - Tous droits réservés.
 Chapitre 5 : La cellule microbienne

• Généralités
• Paroi bactérienne et membranes
• Cas particulier des archébactéries
• La cellule eucaryote
 Les structures bactériennes
• Membrane cytoplasmique • Barrière perméable, sélective, transport
des éléments nutritifs (perméase),
localisation de plusieurs processus
métaboliques
• Matériel génétique
• Un seul chromosome ADN formé de deux
brins d’ADN
• Ribosomes • Localisation cytoplasmique Synthèse
protéique
• Cytoplasme
• Localisation du matériel génétique,
réplication de l’ADN, ribosome synthèse
protéique
• Paroi cellulaire
• Protection de la membrane
cytoplasmique Propriétés antigéniques
• Capsule Propriétés structurales
• Résistance à la phagocytose
Chromosome Pilus ou Fimbrie • Mobilité
• Flagelles Corpuscule
basal
Capsule
• Adhésion aux muqueuses (cellules)
Paroi

• Pilis Membrane
• Transfert de matériel génétique
Inclusion

• Pilis sexuels Plasmide

Flagelle
Mésosome
 La paroi bactérienne
La coloration de Gram

Bactéries LPS
Gram-

Bactéries
Gram+

Riche en lipides
 Coloration de Gram
Les bactéries Gram-positif Les bactéries Gram-négatif
(ou Gram positives) (ou Gram négatives)

Bacillus subtilis Escherichia coli

Paroi des bactéries à Gram – versus
Gram +

• Paroi épaisse
• Composant majeur : peptidoglycane
ou muréine  plusieurs couches
 Paroi des bactéries à Gram – versus
Gram +

• Paroi fine : peptidoglycane beaucoup plus fin

• Structure particulière : la membrane externe (située à l’extérieur de la paroi)

Structure à deux feuillets

 Feuillet externe : LIPOPOLYSACCHARIDE ou LPS ou ENDOTOXINE
 Les pili

•Pilis communs = fimbriae (frange)

•courts
•Rôle dans l’adhésion = facteur de virulence
•Codés par le chromosome ou les plasmides

•Pilis sexuels
•Plus longs
•Rôle dans l’échange d’ADN (plasmide)
•Codés par des plasmides
Les flagelles
 Pouvoir pathogène des bactéries

Pouvoir toxinogène
Bactéries Gram-positif

Pouvoir de colonisation et
de multiplication (pili,
flagelles)

Résistance à la phagocytose
(capsule)
 La cellule eucaryote

Organismes eucaryotes unicellulaires:

PROTISTES
Etapes clés de leur origine :
- « L’incroyable symbiose » … : acquisition de certains organites par
endosymbiose
- Apparition d’une surface cellulaire flexible,
- Apparition d’une enveloppe cellulaire,
- Apparition de vésicules digestives,

- Symbiose = Vie en commun de deux organismes différents ou symbiontes

- Endosymbiose = Vie d’un organisme à l’intérieur d’une cellule dans une
association stable et souvent symbiotique
 Tous les PROTISTES sont des Eucaryotes
et ont évolué a partir des Procaryotes
Schéma de l’origine de la cellule Eucaryote: théorie « symbionte »

1. Une grosse cellule amiboïde

procaryote incapable de respirer,
phagocyte de petites cellules
procaryotes aérobies, capables de
transformer le glucose en CO2 +
H2O.
2. Les petites cellules continuent
de fonctionner à l’intérieur de leur
prédateur :  « symbiose
mutualiste ».
3. Celles-ci se spécialisent et avec 4. Nouvelle incorporation de cellules
le temps deviennent des procaryotes, capables de photosynthèse
mitochondries  « grand rendez- (proches des cyanobactéries actuelles)
vous de l’histoire »  chloroplastes des cellules végétales.
- Apparition d’une surface cellulaire flexible

- Perte de la paroi cellulaire

solide de la cel. procaryote
- Apparition d’une surface
cellulaire souple : membrane
plasmique
- Taille microscopique de la
cellule : les invaginations
accroissent la surface
cellulaire
 Permet les échanges de
matériaux avec
l’environnement
 Permet la nutrition par
endocytose (inclusion de
particules)
- Apparition de systèmes de régulation osmotique flexible
vacuole contractile.

- Aide la cellule à
survivre dans des
environnement
aquatiques hypo-
osmotiques.
- Potentiel hydrique
inférieur à celui de
leur environnement
en eau douce :
prennent
constamment de
l’eau par osmose 
nécessité
d’éliminer l’eau en
excès.

Exemple de la Paramécie
- Apparition de vacuoles nutritives.

Ingestion de particules de nourriture solides : digestion a l’intérieur

de vacuoles alimentaires responsables la nutrition et de l’excrétion

Hétérotrophie par
ingestion

Exemple de la
Paramécie ingérant
des levures.
Au total :
 Cellule des Protistes : totipotente (multipotente)

Une cellule unique remplit à elle seule toutes les

fonctions vitales :
nutrition,
respiration,
excrétion,
locomotion,
régulation osmotique,
reproduction.
Très grande diversité : variété des plans d’organisation
 Classification en trois phylums, basée
fondamentalement sur leur locomotion (cils, flagelles,
pseudopodes).

Mode de vie très varié :

Organismes libres, symbiotes, parasites
 Intérêt de nombreux protistes en pathologie humaine et vétérinaire.
 Classification des protistes
Phylums SS Phylum, Exemples
Caractéristiques
Flagelles et/ou Sarcodina : Amibes
pseudopodes  pseudopodes
SARCO- Mastigophora : Giardia
MASTIGOPHORA
 flagelles Trypanosome

Cils, 2 noyaux Ciliés holotriches Paramécie

CILIOPHORA

Pas de locomotion Sporozoa Plasmodium

complexe apical reproduction
APICOMPLEXA sexuée
Exemple type de Protozoaire Sarcodina : Entamoeba histolytica , amibe
pathogène pour l’homme

Vacuoles pulsatiles

Vacuoles digestives

noyau

Cytoplasme : Membrane plasmique

cytosquelette

Taille : 30 – 40 M
Exemple de Protozoaire flagellé (tube digestif) Mastigophora Giardia intestinalis
, pathogène pour l’homme

Forme végétative

Forme végétative :
microscopie à balayage
Kyste : forme de résistance
Exemple de Protozoaire flagellé (sang) Mastigophora :
Trypanosoma brucei : « Maladie du Sommeil »

sang

Vecteur : Glossine ou Mouche Tsé-tsé

APICOMPLEXA, Sporozoa. Cycles asexué et sexué

Plasmodium falciparum: un
des agents du paludisme
humain.
- Transmis par piqûre d’un
moustique infecté (2-6).
- Homme : cycle hépatique (8-
Anophèle
9) puis sanguin : GR (10).
- 5 000 cas importés en
France /an
- La plus grande endémie
parasitaire au plan mondial :
2-3 millions de morts/an
(jeunes enfants)

Homme
 Champignons levuriformes

•Paroi cellulaire entourant la membrane plasmique et protégeant la

levure des agressions physico-chimiques du milieu extérieur.

• Membrane cytoplasmique composée principalement de

phospholipides double couche (partie hydrophile à l'extérieur et partie
lipophile à l'intérieur). Elle contient aussi de nombreux complexes
protéiques intrinsèques et extrinsèques dont les rôles sont variés, par
exemple des enzymes appelées protéases mènent les transports de
substances du milieu extérieur vers le milieu intracellulaire et/ou
inversement avec ou non transformation du substrat durant le
passage.

• Noyau contenant l'information génétique du génome

chromosomique de la levure.
• Mitochondries jouant un rôle important dans la respiration aérobie de
la levure et la production d‘ATP.

Candida albicans
 Matériel génétique des levures
• Chromosomes : les levures sont des organismes eucaryotes et possèdent un noyau avec des
chromosomes linéaires. Chez les saccharomyces, les chromosomes sont au nombre de 16
simples ou 16 paires selon la forme haploïde ou diploïde de la cellule. Il existe des gènes de
structure à information continue comme chez les bactéries et des gènes à information
discontinue (introns et exons) comme chez les organismes supérieurs. Par ailleurs, les gènes de
régulation sont spécifiques des levures.

• Plasmides : à côté des chromosomes, il existe dans le noyau des petites molécules d‘ADN
circulaire d'environ 6 000 paires de bases, les plasmides, présents entre 50 et 100 exemplaires
par cellule. Ces plasmides sont autoréplicables et autotransférables sans affecter la viabilité de la
cellule. Ils portent l'information génétique de quelques caractères non essentiels à la viabilité de la
levure. Ils ont un rôle considérable dans toutes les opérations de génie génétique.
• ADN mitochondrial : chaque mitochondrie renferme plusieurs molécules circulaires d'ADN qui
portent l'information de certaines enzymes de la chaîne respiratoire.
 Reproduction sexuée

• Les ascomycètes (Saccharomyces

cerevisiae, Candida albicans) qui se
reproduisent par un processus sexué dans
un asque résultant de la transformation
d'une cellule après méiose.
• Les basidiomycètes (Cryptococcus) qui
réalisent une reproduction sexuée avec
formation de basidiospores sur une baside.
 Chapitre 6 : Le mode de vie des
bactéries
• Notion de croissance bactérienne
– Les paramètres de la croissance
– Exigence des bactéries
• Sexualité des bactéries
Croissance et division cellulaire
 Croissance et reproduction

1. La croissance bactérienne consiste en une

augmentation de la masse et de ses parties
constituantes
2. Masse = « croissance »
3. Parties constituantes = « reproduction »
 Nutrition et croissance bactérienne

Enzymes Enzymes
extracellulaires endocellulaires
Macromolécules
Molécules Besoins
plus simples nutritionnels
Dégradation
transformation Molécules
plus simples
 Conditions de croissance

• Energie
– Lumineuse (espèces photosynthétiques)
– Chimique (espèces chimiotrophes)

• Eau
• Conditions physicochimiques
– Température
– pH
– Oxygène
Exigences nutritives

•Sources de carbone
Autotrophe : CO2 (dvpt en milieu minéral)
Hétérotrophe : composé organique

• Prototrophe : peut synthétiser tous ces

constituant sur un milieu minimum ex : E. Coli
• Auxotrophe vis-à-vis d’une substance : a besoin
d’un nutriment donné pour sa croissance
 Milieux de culture
1) Culture en milieu liquide 2) Culture en milieu solide (agarose)

•Utilisée pour des culture monomicrobiennes

•Les bactéries peuvent se déplacer librement
par diffusion • Les bactéries donnent naissance à une
ou par locomotion population de bactéries formant une colonie,
chaque colonie est un clone
•Formation d’un trouble
Etude dynamique de la croissance
 Croissance de bactéries exigeantes
Aspect des colonies

Milieu
enrichi
au sang

colonies hémolytiques

Culture sur
gélose
chocolat

Haemophilus influenzae
Croissance de bactéries exigeantes
Streptocoques béta-hémolytiques
Streptocoques alpha-hémolytiques

Streptococcus pneumoniae
(souche mucoïde)

Streptococcus pneumoniae
 Transfert de matériel génétique

• Mécanismes conduisant au transfert d’une

information génétique dans une bactérie
sous la forme d’un fragment d’ADN d’une
autre origine:
– Transformation
– Conjugaison
– Transduction
 Transfert de matériel génétique
Transformation
Naturelle Induite
(état de compétence) (traitement chimique)

Bacillus subtilis Escherichia coli

Haemophilus influenzae
Streptococcus pneumoniae
Neisseria

Transfert d’ADN libre (bicaténaire, 5.106 daltons), en solution, entre 2 bactéries

Transfert naturel (actif et spécifique) ou artificiel (transfert passif et non spécifique)
 Transfert de matériel génétique
Conjugaison

Transfert de matériel génétique (total ou partiel)

“à sens unique” entre une bactérie “mâle” (F+) et
Une bactérie “femelle” (F-)

Présence du plasmide F: synthèse de pili sexuels

 Transfert de matériel génétique
Transduction
Transfert de gènes bactériens d’une bactérie donatrice vers une bactérie réceptrice
Par l’intermédiaire d’un bactériophage ou”phage transducteur”)

Transduction généralisée ou non spécifique Transduction spécialisée ou spécifique

(n’importe quelle région d’un chromosome

bactérien
Chapitre 7 : Génétique microbienne et
génomique
• Bactéries
– Le génome est constitué d’ADN:
chromosomique et extra-chromosomique
(plasmidique)

• Virus
– Le génome peut être soit de l’ADN soit de
l’ARN
 Membrane
Plasmique

Cytoplasme

Paroi
peptidoglycane

Membrane
externe

Chromosome Plasmide

Chromosome (1 chromosome/bactérie)
Plasmide (100 à 1000 copies/bactéries)
(applications en clonage moléculaire)
 Echanges génétiques et apparition de
la résistance aux antibiotiques
• Ce mécanisme peut être
transmis à d'autres
bactéries vivant dans le
voisinage d'une bactérie
résistante
Gène de résistance: transposons
Les transposons sont des
éléments génétiques
mobiles (cf séquences
d’insertion) codant pour des
fonctions qui vont conférer à
la bactérie qui les porte, un
phénotype particulier (ex
une résistance à un
antibiotique)

Ce mécanisme est
héréditaire : une bactérie le
transmet à sa descendance.

C'est ainsi que des bactéries

qui vivent sur notre corps
(commensales) deviennent
elles aussi résistantes.
Les génomes viraux
• Le génome des virus est constitué d’un seul type
d’acide nucléique : de l’ADN ou de l’ARN, soit sous
forme monocaténaire ou bicaténaire, soit linéaire ou
circulaire, soit en une seule molécule ou en plusieurs
segments.

• Le génome viral est haploïde c’est à dire qu’il n’existe

qu’une seule copie de chaque gène à l’exception du
génome des rétrovirus qui contient deux molécules
identiques d’ARN (génome diploïde).

• Selon la taille du génome le nombre de gènes peut

aller de 4 à plus de 200 gènes codant pour autant de
protéines. Celles-ci sont des protéines structurales
constitutives du virus et des protéines non
structurales qui interviendront lors du cycle de
multiplication intracellulaire du virus mais ne sont
pas incorporées dans le virion.
 Virus à ADN – Virus à ARN
• Virus ADN : génome généralement • Les virus ARN: génome généralement
bicaténaire (sf les Parvoviridae). La taille monocaténaire (sf les Reoviridae). La taille
du génome s’échelonne entre 3,2 kpb pour du génome varie de 1,7 kb (3,5 kb pour la
le virus de l’hépatite B (VHB) à 375 kpb coliphage) à 27 kb pour les Réoviridae.
pour les Poxvirus des insectes.
• L’ARN est habituellement linéaire. Certains
• Il est généralement linéaire mais il y a des virus ont un génome segmenté comme les
exceptions: par exemple celui du VHB, est Orthomyxoviridae (virus de la grippe) à 7 ou
circulaire et partiellement bicaténaire . 8 fragments ou les Bunyaviridae à 3
segments. Cette structure fragmentée de
• La constitution des génomes de grande l’ARN favorise les recombinaisons et
taille est complexe: certains contiennent réassortiments génétiques entre des
des séquences répétitives, internes ou aux souches différentes: conséquences sur
extrémités du génome, des régions l’épidémiologie d’une infection par exemple
codantes appelées cadres de lecture celle de la grippe.
ouverts (ORF soit “Open Reading Frame”)
et des régions non codantes qui • Sur le plan structural, les génomes linéaires
interviendront dans le déroulement du et monocaténaires diffèrent entre eux par
cycle de réplication. leurs extrémités 5’ et 3’. L’extrémité 5’ peut
• Enfin certains génomes sous la forme être soit libre soit coiffée ou liée à une
circulaire ont la capacité de s’intégrer dans protéine. L’extrémité 3’ peut être soit libre
le génome de la cellule hôte ( VHB, virus soit polyadénylée. Comme dans les virus à
Epstein-Barr). ADN, certains contiennent des séquences
répétitives, des régions codantes et non
codantes.
 Polarité des génomes virus à ARN
• L’ARN viral simple brin se présente sous forme soit d’ARN de
polarité positive (ARN+) soit d’ARN de polarité négative (ARN-).
• L’ARN+ a le même sens qu’un ARNm, il se comporte comme
un messager et peut être traduit directement en protéines
virales par la cellule. Dans ce cas le génome viral est
directement infectieux.
• L’ARN-, de polarité anti-messager doit être transcrit au
préalable en ARNm par une ARN polymérase associée au
virion. Dans ce cas le génome n’est pas directement infectieux.
 ARN viral + ARN viral -

+ transcriptase

Traduction Réplication Réplication

ARN + ( = messager)
Polyprotéine ARN -

Clivage Réplication Traduction Réplication

(Protéases) (ARNpolARNdep) (ARNpolARNdep)

Protéines ARN -
Protéines ARN +
virales
virales
( dont transcriptase)

Nucléocapside Nucléocapside
DEUX STRATEGIES POUR LA REPLICATION DES VIRUS A ARN
( ARN + = poliovirus; ARN - = influenzavirus )
 Variabilité génétique des virus

• Nature et génération des virus mutants

– Fidélité des enzymes de réplication virale
– Processivité des enzymes de réplication virale
• Sélection et capacité réplicative des virus
mutants
 Exemple de virus hautement variable :
Le VIH
• Le virus du SIDA présente une incroyable variabilité
génétique. Cet art de se transformer « à volonté » lui
permet de se maintenir et d’échapper à nos défenses
immunitaires
• Il existe deux types principaux : le VIH1 et le VIH2
– VIH-1 PANDEMIQUE (Groupe M (« majority ») Groupe N
(« non M /non O », Cameroun) Groupe O (« outlier »,
Cameroun, Gabon, Guinée Eq.
– VIH-2: NON PANDEMIQUE
 Groupe Majeur M

A B C D E F G H I J

• Dix sous-types génétiquement proches, mais distincts

• Ces sous-groupes se sont créés avec la progression de l’épidémie à travers le
monde. Leur distribution varie en fonction des régions
 Groupe Majeur M

A B C D E F G H I J

Europe et Amérique du Nord

 Groupe Majeur M

A B C D E F G H I J

Europe et Amérique du Nord Afrique

La variabilité du VIH ne s’arrête pas là

• Alors que le virus se réplique chez le

malade, des erreurs de copie ont lieu (une
mutation par copie)
• Ces erreurs conduisent à la genèse de
variants d’autant plus nombreux que la
réplication virale est intense (environ
mille milliards de virus infectent une
seule personne)
 Groupe Majeur M

A B C D E F G H I J

Europe et Amérique du Nord

B1 B6 Bn
B2 B7 B
B3 B8 B
B4 B9 B
B5 B10 B
 Notion de quasi-espèces

• Ces milliards de virus ont tous un « petit

quelque chose » de différent du à une
erreur de copie
• Il s’en trouvera un pour résister aux
attaques du système immunitaire et/ou
au traitement
 Groupe Majeur M

A B C D E F G H I J

Europe et Amérique du Nord

B1 B6 Bn
B2 B7 B
B3 B8 B
B4 B9 B
B5 B10 B
Echappement vis-à-vis des anticorps neutralisants: Le virus échappe à la
réponse humorale en générant de nouveaux variants non reconnus par les
anticorps initiaux

Source de copies futures (échappement viral)

 Divergence des souches de VIH

Grippe saisonnière 1996 Divergence du VIH chez un seul sujet infecté 6 ans PI

Ensemble de sujets infectés VIH

(Congo 1997)

Cohorte de sujets infectés VIH

1991
 Les Variations Antigéniques des Virus
Influenza Humains
Cassures Glissements
Types Type A Types A et B
Mécanismes Réassortiment de gènes  Mutations ponctuelles
(virus animaux) Dérives antigéniques 
Changements majeurs des  progressives
gènes de NA et HA
Modifications antigéniques Majeures Mineures
Conséquences
Taxonomiques Apparition de nouveaux  Apparition de nouveaux 
sous‐types A variants
Immunitaires Pas ou peu d’immunité  Immunité croisée entre 
croisée entre deux sous‐ deux variants consécutifs
types A
Épidémiologiques Pandémies Épidémies annuelles
Épidémiologie de la Grippe
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